Verfahren zur Darstellung des kristallisierten Farbstoffes aus dem
gelben Oxydationsferment In dem Patent 632 366 ist die Darstellung eines gelben
Oxydationsferments aus tierischen oder pflanzlichen Zellen beschrieben.Process for the preparation of the crystallized dye from the
yellow oxidizing ferment In the patent 632 366 is the representation of a yellow
Oxidation ferment from animal or plant cells described.
Es wurde festgestellt, daß, dieses Ferment aus einem kristallisierten
Farbstoff besteht, der an eine Eiweißkomponente gebunden ist, und daß man den Farbstoff
von der Eiweißkomponente trennen und in kristallisierter Form isolieren kann. Hierzu
verfährt man am zweckmäßigsten ih der Weise, daß man das Eiweiß denaturiert und
diese Denaturierung mit solchen Lösungsmitteln vornimmt" in denen der Farbstoff
in Lösung bleibt. Solche eiweißdenaturierenden Lösungsmittel sind z. B. Methyl-,
Äthyl- und andere Alkohole, Aceton und andere Lösungsmittel, die für sich oder vorzugsweise
in Mischung mit Wasser zur Anwendung gelangen. Man erhält dann eine eiweißfreie
grün fluoreszierende Lösung des Farbstoffes, die katalytisch unwirksam ist, im Sichtbaren
aber ein. Absorptionsspektrum aufweist, das dem der ursprünglichen Fermentlösung
sehr ähnlich ist. Gegen das Absorptionsspektrum- des Fermentes sind seine Banden
um 15 bis 2o &, nach Blau verschoben. Aus dieser eiweiß freien Lösung des Farbstoffes
kann der Farbstoff selbst in kristallisierter Form erhalten werden, wenn man die
Lösung alkalisch macht, z. B. mit verdünnter Natronlauge, und sodann belichtet.
Hierbei wird der Farbstoff umgelagert und kann nunmehr nach dem Ansäuern durch Ausschütteln
mit Chloroform oder anderen mit Wasser nicht -oder nicht vollständig mischbaren
Lösungsmitteln von der wäßrigen Lösung abgetrennt werden, während der nichthelichtete
Farbstoff der angesäuerten Lösung durch Lösungsmittel nicht entzogen werden kann.
Aus Wasser erhält man ihn in schön gelb gefärbten.Nadeln. Beispiel i Trennung des
Farbstoffes von seiner Eiweißkomponente Das Ferment wird bei 38° mit seiner Mischung
von i Vol. Wasser und 3 Vol. Methylalkohol geschüttelt. Dadurch wird das Eiweiß
denaturiert, während der Farbstoff in Lösung geht. Nach der Entfernung des ungelösten
Eiweißes (z. B. durch Zentrifugieren) wird die eiweißfreie Lösung des Farbstoffes,
die grün fluoresziert, im Vakuum eingiedampft, wobei ein gelbes Pulver erhalten
wird, das den Farbstoff des Oxydationsferments darstellt. Beispiel 2 Überführung
des Farbstoffes des gelben Oxydationsferments in seine kristallisierte Modifikation
Der eiweißfreie Farbstoff (erhalten nach Beispiel i) wird in n/2 Natronlauge gelöst
und mit einer Metallfadenlampe belichtet: Dabei wird er umgelagert und geht beim
Ansäuern in ein Produkt über, das man 'durch Extraktion mit Chloroform von der wäßrigen
Lösung abtrennt. Die Chloroformlösung wird dann vorsichtig konzentriert, wobei sich
der umgelagerte Farbstoff abscheidet. Er wird durch Umkristallisation aus Wasser
in
schön gelb gefärbten Nadeln erhalten. Das Produkt kann im Hochvakuum
uniersetzt sublimiert werden. Der Farbstoff schmilzt unter Zerstetzung bei 32o°.
`.It was found that this ferment crystallized from a
There is dye, which is bound to a protein component, and that one is the dye
can separate from the protein component and isolate in crystallized form. For this
the best way to proceed is to denature the protein and
this denaturation with such solvents makes "in which the dye
remains in solution. Such protein denaturing solvents are z. B. methyl,
Ethyl and other alcohols, acetone and other solvents, by themselves or by preference
be used in a mixture with water. A protein-free one is then obtained
green fluorescent solution of the dye, which is catalytically ineffective, in the visible
but one. Has absorption spectrum that of the original fermentation solution
is very similar. Its bands are against the absorption spectrum of the ferment
by 15 to 2o &, shifted to blue. From this protein-free solution of the dye
the dye itself can be obtained in crystallized form by using the
Makes solution alkaline, e.g. B. with dilute sodium hydroxide solution, and then exposed.
The dye is rearranged and can now be shaken out after acidification
immiscible or not completely miscible with chloroform or others
Solvents are separated from the aqueous solution, while the non-helical
Solvent cannot remove dye from the acidified solution.
It is obtained from water in beautifully yellow-colored needles. Example i separation of the
Dye from its protein component The ferment is at 38 ° with its mixture
Shaken by 1 volume of water and 3 volumes of methyl alcohol. This will make the protein
denatures while the dye goes into solution. After removing the unsolved
Protein (e.g. by centrifugation) is the protein-free solution of the dye,
which fluoresces green, evaporated in vacuo to give a yellow powder
which is the dye of the oxidizing ferment. Example 2 overpass
of the dye of the yellow oxidizing ferment into its crystallized modification
The protein-free dye (obtained according to Example i) is dissolved in n / 2 sodium hydroxide solution
and exposed with a metal filament lamp: it is repositioned and goes with
Acidification into a product that can be 'extracted with chloroform from the aqueous
Separates solution. The chloroform solution is then carefully concentrated, whereby
the rearranged dye separates. It is made by recrystallization from water
in
beautiful yellow colored needles preserved. The product can be used in a high vacuum
can be sublimated uniquely. The dye melts with decomposition at 32o °.
`.
Der Farbstoff des gelben Oxydatiori'4ä$ ferments soll in der Therapie
und als.coe@-` i sorischer Nährstoff Verwendung finden.The dye of the yellow oxidative fermentation should be used in therapy
and as a.coe @ -` i soric nutrient use.