-
GEBIET DER ERFINDUNG
-
Diese
Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von Glycinbetain zur Vermeidung
bzw. Beseitigung physiopathologischer vaskulärer Angriffe. Die Erfindung
bezieht sich auf die kurative und präventive Aktivität von Glycinbetain
in der Pathogense thromboembolischer und hämostatischer Krankheiten von
arteriellem oder venösem
Ursprung.
-
Glycinbetain
zeigt präventive
Aktivität,
während
es die Bildung von Thromben verhindert, und zeigt eine kurative
Aktivität,
die die Proliferation von Thromben verhindert, während es diese zerstört. Die
Bedeutung der vorliegenden Erfindung basiert auf der Tatsache, dass
die Verwendung von Glycinbetain im Gegensatz zu den Molekülen und
Behandlungen, die gegenwärtig
verwendet werden, zu keinerlei Risiko von Hämorrhagie oder Allergie führt.
-
STAND DER TECHNIK
-
Vaskuläre Thrombosen
sind eine Reaktion des Organismus, der mit einem Angriff auf eine
Gefäßwand und
auf den Inhalt der Zellen und des Plasmas davon konfrontiert ist.
Eine Thrombose ist eine lokale Aktivierung der Koagulation mit der
Bildung eines Thrombus.
-
Das
Interesse, dem diese Symptomatik in den letzten Jahren ausgesetzt
war, hat die Identifizierung mehrerer ursächlicher Faktoren ermöglicht:
- – das
Gefäß, die Gefäßwand und
die Endothelzellen
- – die
Rolle von Elementen, die im Blut auftreten,
- – die
Koagulations- und Fibrinolysesysteme und deren Inhibitoren.
-
Mehrere
Arten von Thrombosen existieren, die in Arterien, in Venen, im Mikrokreislauf
der Organe, in den Hohlräumen
des Herzens und an künstlichen
Oberflächen
in Kontakt mit Blut auftreten. Vaskuläre Thrombosen sind eine Reaktion
auf den Angriff auf die Gefäßwand und
auf deren Inhalte von Zellen und Plasma. Eine Thrombose ist eine
organisierte Masse von Blutelementen (Plättchen, rote Blutkörperchen
und weiße Blutkörperchen)
von Fibrin und von anderen Plasmaproteinen, die an der Oberfläche abgelagert
werden oder den freien Durchgang des vaskulären Systems behindern.
-
Die
Mechanismen der Thrombose ähneln
denjenigen der Hämostase,
sind aufgrund ihrer abnormalen intravaskulären Position jedoch pathologisch.
-
Thrombosen
und Embolien sind die Hauptgründe
für klinische
Komplikationen, die mit kardiovaskulären Krankheiten und Atherosklerose
in Verbindung stehen.
-
Nach
Virchow bestimmen mindestens drei Arten von thrombogenetischen ("thrombogenetic") Faktoren die Position,
das Ausmaß und
die Rückentwicklung
einer Thrombose:
- – hämodynamische und rheologische
Faktoren;
- – Endothelläsion;
- – Aktivierung
der Bestandteile des Bluts, insbesondere der Blutplättchen und
der Koagulation, die in der Bildung von Thrombin resultiert.
-
Thromboembolische
Krankheit von arteriellem oder venösem Ursprung bleibt eine der
Haupttodesursachen in Industrieländern.
-
Eine
arterielle Thrombose tritt häufig
aufgrund eines Bruchs des atherosklerotischen Plaques auf, während eine
venöse
Thrombose von einem Mangel an einem Koagulationsinhibitor (AT III)
oder aus einem Mangel an einem Fibrinolyseaktivator (S-Protein und/oder
C-Protein) oder häufiger
von einer Stasis herrührt. Beide
rühren
tatsächlich
von einer Wechselwirkung zwischen Blut und der Gefäßwand, von
der Bildung einer venösen
Thrombose und/oder von einer hämostatischen
Anomalie her. Eine arterielle Thrombose ist häufig sekundär zu einer parietalen Anomalie
und umfasst hauptsächlich
Blutplättchen.
Sie trägt
zu einer großen
Vielfalt an klinischen Bildern in Abhängigkeit von den arteriellen
Schichten bei, die an der Unterbrechung der Vaskularisierung beteiligt
sind. Eine Thrombose ist hauptsächlich
dazu imstande, die Herzarterien (Koronararterien) und die Arterien
der unteren Organe, der zerebralen Organe oder der Verdauungsorgane
zu beeinträchtigen.
Damit begünstigt
eine arterielle Erkrankung die Bildung des Thrombus selbst, der
für die
Mehrheit der terminalen Gefäßokklusionen
verantwortlich ist. Darüber
hinaus ist die Beteiligung an hämostatischen
Störungen und
bei dem Thrombus, der an anderen Gefäßläsionen gebildet worden ist,
ersichtlich: die Verschlimmerung der Läsionen der Gefäßwand, Ischämie und
Probleme im Mikrokreislauf.
-
Drei
therapeutische Strategien können
für die
Prävention
von Zwischenfällen,
die mit Thrombosen in Verbindung stehen, unterschieden werden:
Antikoagulantien.
Diese bilden das Hauptelement bei der Behandlung eines Patienten,
der eine thromboembolische Störung
zeigt. Heparin und seine Derivate werden gegenwärtig verwendet. Jedoch kann
die Verwendung von Heparinen zwei Hauptkomplikationen zur Folge
haben, nämlich
Hämorrhagie
oder Thrombopenie.
K-Antivitamine (KAV). Diese werden zur Langzeitbehandlung
verschrieben. Sie können
nicht in einem Notfall verwendet werden und können nicht gleichzeitig mit
anderen Antiaggregantien verschrieben werden, weil sie den hämorrhagischen
Effekt davon verstärken.
Plättchen-Antiaggregantien.
Sie werden verschrieben, um eine arterielle Thrombose zu verhindern,
die mit Atherosklerose in Verbindung steht. Die Hauptinhibitoren
der Plättchenfunktion,
die gegenwärtig
verschieden werden, sind: Aspirin, Ticlopidin, Dipyridamol und bestimmte
nicht-steroide entzündungshemmende
Mittel, wie Flurbiprofen und Prostacyclin. Diese Behandlungen sind
wirklich effektiv, weisen jedoch unerwünschte Nebenwirkungen bei Patienten
auf, die zu Allergien oder Hämorrhagie
neigen.
-
Trotz
ihrer Wirksamkeit erfordern all diese Behandlungen spezielle Vorsichtsmaßnahmen
bei ihrer Verwendung, wie z. B. die Verabreichung von Antidoten, Überdosis-Probleme
und ungewollte Nebenwirkungen. Diese Behandlungen machen eine Überwachung
der Patienten insbesondere aufgrund von Problemen in Bezug auf Hämorrhagie,
die während
oder nach der medikamentösen
Behandlung auftreten können,
sowie einer möglichen
Inkompatibilität
mit anderen Arzneimitteln erforderlich. Es war daher von Interesse,
ein Molekül
mit einem hohen antithrombotischen Potential ohne unerwünschte Wirkungen
zu identifizieren. Höchst überraschend
ist Glycinbetain als ein hohes therapeutisches Potential zur Behandlung
von Thrombosen aufweisend identifiziert worden.
-
Glycinbetain
oder Betain der Formel (CH3)3N±-(CH2)-COO– ist ein Molekül, das für seine
osmoprotektiven Eigenschaften und für seine kosmetischen und pharmazeutischen
Verwendungen bekannt ist. Verschiedenartige pharmazeutische Verwendungen
von Betain sind bekannt, insbesondere die Verwendung von Betain zur
Behandlung von Homocystinurie, die kardiovaskuläre Probleme verursacht (L. & B. Wilken, J.
Inher. Metab. Dis. 1997). Daher zeigen Patienten, die unter Homocystinurie
leiden, die eine genetische Anomalie darstellt, vorzeitige atherosklerotische
und thromboembolische Störungen
(S. H. Mudd et al., The metabolism and molecular bases of inherited
disease, 1995) und kardiovaskuläre
Erkrankungen (McCully, Atherosclerosis Rev. 11, 1983). Homocystinurie
ist eine erbliche Defizienz, deren homozygote Form selten ist. Man
schätzt,
dass die Prävalenz
dieser homozygoten Form 1 von 200 in der allgemeinen Bevölkerung
entspricht.
-
Homocystinurie
tritt aufgrund erhöhter
Spiegel an Homocystein im Plasma des betroffenen Patienten auf.
Die Verabreichung von Betain ermöglicht
die Reduzierung der Konzentration von Homocystein im Blut.
-
Die
Veröffentlichung
WO 95/ 157 50 schlägt die Verwendung
von Ingredienzien vor, die Betain umfassen, um vaskuläre Störungen bei
Homocystinurie-Patienten zu verhindern.
-
Die
Veröffentlichung
WO 98/19690 bezieht sich
auch auf Patienten, die unter einem erhöhten Spiegel an Homocystein
in ihrem Blut leiden. Die Verwendung von Betain unter anderen Ingredienzien
ist dazu gedacht, den Spiegel von Homocystein im Blut zu verringern,
wobei festgestellt worden ist, dass Homocystein ein positiver Risikofaktor
beim Auftreten von kardiovaskulären
Erkrankungen sowie bei Alzheimerscher-Krankheit ist.
-
Die
Veröffentlichung
EP 0 347 864 beschreibt
die Verwendung von Betain zusammen mit anderen Ingredienzien, um
die Zunahme von Sulfhydrylgruppen, die aufgrund von Cystein und
Homocystein auftreten, im humanen Plasma zu bekämpfen und auf diese Weise die
Bildung von atherosklerotischen Plaques zu inhibieren.
-
Dieser
anti-atherosklerotische Effekt ist bekannt und umfangreich dokumentiert.
Diese Veröffentlichungen
beziehen sich auf den Effekt von Betain auf den Metabolismus von
Lipiden (Zapadnyuk et al., Biol. Med. 1987) und auf den von Cholesterin
(Panteleimonova et al., Farmakol. Toksikol, Moskau 1983).
-
Die
Veröffentlichung
WO 97 38685 beschreibt die
Verwendung von Betain und Taurin zur Behandlung von Komplikationen,
die von Ischämie
in einigen Organen herrühren.
Ischämie
ist ein lokales Anhalten des Blutflusses und stellt nur eines der
Krankheitsbilder aufgrund einer Thrombose dar.
-
Die
Veröffentlichung
EP 0 781 554 umfasst Beispiele,
die Experimente an enucleierten Herzen beschreiben, d. h. an Herzen,
die aus dem vaskulären
System extrahiert und isoliert worden sind. Die Verwendung von Betain
wegen seiner bekannten osmoprotektiven und Radikalhemmenden Eigenschaften
ermöglicht es
den Erfindern, eine Schutzwirkung davon auf den Herzmuskel zu beanspruchen.
-
Andere
Formen von Betain sind vorgeschlagen worden (
WO 97/06975 ), haben die Wirksamkeit
und Leistung von Glycinbetain bislang jedoch nicht erreicht.
-
Keine
dieser Veröffentlichungen
offenbart die Wirksamkeit von Glycinbetain in Bezug auf venöse und/oder
arterielle Thrombose sowie dessen Wirksamkeit als Antiaggregans
und Antikoagulans.
-
Die
WO 0051596 des Anmelders,
auf deren Umfang hierin expressis verbis Bezug genommen wird, offenbart
die Verwendung von Betain zur Behandlung von Thrombose, die nicht
durch Homocystinurie induziert worden ist. In den Beispielen offenbart
diese Anmeldung die Kombination von Glycinbetain mit einem Kontrastmittel.
-
Dieses
Dokument offenbart nicht die pharmazeutische Kombination eines therapeutischen
Mittels (eines Mittels zur Behandlung einer Beschwerde oder zur
Prävention
einer Beschwerde für
einen Patienten, insbesondere eines Säugetiers) mit Glycinbetain
und auch nicht die Vorteile einer derartigen Kombination. Mögliche Vorteile
einer derartigen Kombination liegen in der Reduktion der hämorrhagischen
Nebenwirkungen und/oder der Verstärkung der therapeutischen Wirkung
dieses aktiven Mittels. Es ist anzumerken, dass es aufgrund der
Verringerung der hämorrhagischen
Nebenwirkung möglich
ist, das Krankheitsbild effizienter zu behandeln, weil die Dosierung
des therapeutischen Mittels erhöht
werden kann, wenn dies erforderlich ist. Darüber hinaus wurde für Arzneimittel,
wie z. B. antithrombotische Arzneimittel, beobachtet, dass der antithrombotische
Effekt des Arzneimittels sogar verstärkt wurde.
-
Die
japanische Anmeldung
JP2000143518 beschreibt
ein Hautpräparat
zur externen Verwendung, das dazu imstande ist, nicht nur eine raue
Haut, sondern auch Symptome rauer Haut, die mit atopischer Dermatose,
Erkrankungen trockener Haut, die durch Hausfrauenekzem oder dergleichen
dargestellt werden, sowie inflammatorischen Hautkrankheiten in Verbindung
stehen, zu verbessern und zur Behandlung oder Prävention dieser Symptome rauer
Haut wirksam ist. Diese Zubereitung zur externen Verwendung für die Haut enthält ein Heparin
und ein Betain und des Weiteren ein antinflammatorisches Mittel.
Die
JP2000143518 offenbart
weder etwas in Bezug auf ein Betain-Antidot und Eigenschaften gegen
Blutung, noch in Bezug auf seine Fähigkeit, Heparin-hämorrhagische
Nebenwirkungen erheblich oder vollständig zu verhindern. In dieser
Anmeldung findet sich keinerlei Erwähnung von oralen, parenteralen
oder rektalen Dosierungsformen, die ein Betain und Heparin enthalten.
-
Die
BE-A-1012546 und
die
WO 0051596 des Anmelders
beschreiben die antithrombotische Aktivität, die Aktivität als Antiaggregans
und die Aktivität
als Antikoagulans von Glycinbetain. Diese Anmeldungen beschreiben
auch die Verwendung von Glycinbetain zur Prävention thrombotischer Risiken,
die von der Verwendung von Kontrastmitteln herrühren. Kontrastmittel sind keine
therapeutisch antithrombotischen Wirkstoffe.
-
Die
WO 97 06795 beschreibt orale
oder transdermale Zusammensetzungen zur Behandlung von Störungen des
Blutflusses, die Butyrobetain enthalten. Butyrobetain unterscheidet
sich strukturell und physikalisch von Glycinbetain.
-
Vinson
et al. beschreiben in Drugs Topics, Band 141, Seiten 7272–41, 17.
März 1997,
in „New
Drugs Approval of 1996 – Part
3", dass Cystadane
eine kommerzielle pharmazeutische Zubereitung, die Betain als aktiven
Bestandteil enthält,
zur Behandlung von Homocystinurie ist. Die empfohlene Dosierung
beträgt
6 g täglich,
unterteilt in zwei Dosen, d. h. eine alle 12 Stunden (720 min).
Pharmakokinetische Studien von Betain von Angela Matthews et al.
in Br. J. Clin. Pharmacol. 54, 140–146 in: „An indirect response model
of homocysteine suppression by betaine: Optimizing the dosage regimen
of betaine in homocystinuria" zeigen,
dass Betain nach oraler Verabreichung im Körper sofort freigesetzt wird.
Die Plasmakonzentration an Betain erreicht einen Spitzenwert und
es wird in einer nicht-kontrollierten Art und Weise im Körper schnell
aufgelöst,
so dass die maximale Plasmakonzentratin Cmax (100%
Betain freigesetzt) in 0,9 Stunden erzielt wird. D. h. ein Tmax, von 0,9 Stunden. Somit beschreiben Vinson
und Kollegen kein zeitlich kontrolliertes Präparat oder kein Präparat zur langsamen
Freisetzung auf Basis von Betain.
-
Die
Datenbank Pharmpat, Chemical Abstract Service, Colombus, Ohio, US;
1995: „Naproxenbetainate" beschreibt eine
lizensierte orale Zusammensetzung, die Naproxen, ein bekanntes NSAID-Mittel
mit hämorrhagischen
Nebenwirkungen und Betain enthält.
Diese Zusammensetzung soll geringere gastrointestinale Nebenwirkungen
als Naproxen allein aufweisen. Weder Naproxen noch Naproxen/Betain-Kombinationen
werden als antithrombotische Arzneimittel verschrieben, noch sind
sie als solche erkannt. In dieser Kombination wird Betain als ein
Puffer verwendet, um die Exposition der gastrointestinalen Mucosa
gegenüber
Naproxen zu verkürzen
oder zu verringern.
-
Somit
bezieht sich die vorliegende Erfindung auf:
- – Eine pharmazeutische
Kombination, die eine therapeutisch wirksame Menge eines therapeutisch
antithrombotischen Wirkstoffs mit mindestens einer hämorrhagischen
Nebenwirkung und eine therapeutische wirksame Menge einer Verbindung
der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO– wobei
n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, vorzugsweise Glycinbetain oder
eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und von Gemischen
davon umfasst, zur Prävention
oder zur Reduktion dieser hämorrhagischen
Nebenwirkung und/oder zur Verstärkung
der therapeutischen Wirkung des Wirkstoffs;
- – ein
Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Kombination der
vorliegenden Erfindung;
- – ein
pharmazeutisches Systems zur kontrollierten Freisetzung, das zur
Abgabe eines Beteins oder einer wirksamen Menge einer Verbindung
der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin
n für eine
ganze Zahl von 1 bis 5 steht, vorzugsweise Glycinbetain oder eines
pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon sowie von Gemischen davon
an den Blutfluss eines Säugetiers
in einer kontrollierten Art und Weise geeignet ist; und
- – ein
orales pharmazeutisches Systems zur kontrollierten Freisetzung zur
Freisetzung einer wirksamen therapeutischen Menge mindestens einer
Verbindung, die ausgewählt
ist aus der Gruppe, bestehend aus Betainen, oder eine effektive
Menge einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze Zahl
von 1 bis 5 steht, pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon und Gemischen
davon, zur Behandlung oder Prävention
von Blutflussstörungen.
-
KURZE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
-
Glycinbetain
sowie Betainverbindungen der allgemeinen Formel (CH3)3N+-(CH2)n-COO–, worin n von 1 bis
5 variiert (und vorzugsweise gleich 1 ist), im Zusammenhang der
vorliegenden Erfindung können
für verschiedene
klinische Anwendungen verwendet werden, wie z. B.:
- – Koronarthrombosen
und venöse
Thrombosen;
- – Thrombosen
und eine Reokklusion des Gefäßsystems
infolge einer Thrombolyse oder einer Angioplastie;
- – Infarkt,
Angina pectoris, Aneurysma, Lungenembolie, Phlebitis;
- – Hirnembolie;
- – post-traumatischer
Schock, sei er operativen Ursprungs oder nicht;
- – Prävention
von Störungen
der Mikrozirkulation in den folgenden Fällen: Hämophilie, Chemotherapie, Alterung,
orale Verhütung
unter Verwendung von Östrogenen,
Fettleibigkeit, Tabakabhängigkeit,
Prothese, Diabetes.
-
Aggregation
der Blutplättchen
ist ein essentielles Ereignis in der Bildung eines Blutgerinnsels
und Thrombus. Unter normalen Bedingungen verhindern Blutgerinnsel
Blutverluste infolge einer Gefäßverletzung, indem
sie die Öffnung
schließen.
Jedoch kann unter einigen pathologischen Umständen die Bildung eines Blutgerinnsels
die Blutzirkulation mit der Konsequenz einer Zellnekrose teilweise
oder vollständig
verringern.
-
Beispielsweise
ist die Aggregation der Blutplättchen
und somit die Thrombose auf dem Level der Atherosklerose-Plaques
ein wichtiger Faktor für
die Entstehung von Krankheitszuständen wie z. B. Angina pectoris, myokardialem
Infarkt, Gefäßokklusion
infolge einer Thrombolyse oder einer Angioplastie. Patienten, die
unter einem Herzinfarkt leiden, werden mit thrombolytischen Mitteln,
wie Plasminaktivatoren und den Streptokinasen, behandelt, die das
Fibrin aus den Gerinnseln lösen.
Eine Hauptkomplikation dieser Therapie besteht in der Re-Okldusion
der Gefäße aufgrund
der Aggregation der Blutplättchen,
was zu irreversiblen Schäden
am Herz, am Gehirn oder anderen Organen führen kann.
-
Eine
Thrombose beginnt mit der Adhäsion
von Blutplättchen
an den Stellen der Gefäßverletzung.
Die Adhäsion
von Blutplättchen
wird durch den Rezeptor initiiert, der sich an der Oberfläche der
Blutplättchen
befindet, die an Proteine der extracellulären Zellmatrix des freige legten
Endothels binden, wie z. B. Fibrinogen, Fibronectin, Von-Willebrand-Faktor
sowie andere adhäsive
Proteine, wie Vibronectin, Collagen und Laminin. Dafür ist die
Aktivierung von Blutplättchen
eine Reaktion auf Agonisten wie Epinephrin, ADP, Collagen, Arachidonsäure oder
Thrombin. Diese Aktivierung führt
zur Aktivierung des Glycoprotein Ib-Rezeptors (GP Ib) und/oder des
Glycoproteins IIb IIIa-Rezeptors (GP IIb IIIa) an der Oberfläche der
Blutplättchen.
Dieser Rezeptor/diese Rezeptoren (GP Ib und/oder GP IIb IIIa) ist/sind
dann für
seine/ihre Bindung an Fibrinogen und die Aggregation der Blutplättchen zugänglich.
Die Aggregation des Rezeptor (GP IIb IIIa) an andere adhäsive Proteine
wie den von-Willebrand-Faktor führt
auch zu einer Anheftung der Plättchen
untereinander und zu ihrer Aggregation. Die Adhäsion von Molekülen wie
Fibrinogen oder dem Von-Willebrand-Faktor an den Rezeptor (GP IIb
IIIa), was zur Aggregation der Blutplättchen fährt, ist ein wesentlicher Schritt
in der Bildung des Thrombus. Der Rezeptor (GP IIb IIIa) ist somit
ein bevorzugtes Ziel für
die neue Therapie, die Thrombose und thromboembolische Pathologien
behandelt. Darüber
hinaus verhindert die Verwendung von Antagonisten des Glycoprotein
IIb IIIa-Rezeptors die Aggregation der Blutplättchen, während sie die anderen Hämostasemechanismen
berücksichtigt,
und ist in den neuen Therapien, die mit Thrombose verbunden sind,
hochgradig wünschenswert.
Mehrere Moleküle
mit dieser Antagonisteneigenschaft werden mit Verwendungseinschränkungen aufgrund
von Immunoreaktivitätsproblemen,
Toxizität,
Allergie- oder Hypersensibilisierungsreaktionen bei einigen Patienten
vertrieben. Ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung besteht darin,
ein Molekül,
insbesondere ein gut bekanntes und verwendetes Molekül pflanzlichen
Ursprungs, vorzuschlagen, das diese Antagonistenaktivität für den Glycoprotein
IIb IIIa-Rezeptor besitzt, während
es keine toxischen Eigenschaften aufweist.
-
Es
ist auch bekannt, dass die Aktivierung des Vitronectinrezeptors
die Zellmigration verbessert und Regulierungssignale der Zellproliferation
und Zelldifferenzierung liefert und die Effekte von Insulin aktiviert
(Ruoslahti, Kidney Int., 1997, 51, 1413–1417). Die Regulierung des
Vitronectinrezeptors steht in Verbindung zu pathologischen Zuständen, wie
z. B. vaskulärer
Restinose (Clemetson und Clemetson, Cell. Mol. Life Sci., 1998,
54, 502–513), übermäßiger Knochenresorption
(Rodan und Rodan, J. Endocrinol., 1997, 154 Ergänz., S47–56) und dem Angiogeneseprozess
bei malignen Melanomen (Cheresh, Cancer Metastasis Rev., 1991, 10,
3–10).
-
Überraschender
Weise ist nun herausgefunden worden, dass Betaine der Formel (CH3)3N+-(CH2)n-COO–,
worin n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, und deren pharmazeutisch
annehmbare Salze eine antagonistische Aktivität gegenüber einem oder mehreren Glycoproteinrezeptor(en)
aufweisen, z. B. dem Glycoprotein Ib-Rezeptor und dem Glycoprotein
IIb IIIa-Rezeptor,
indem sie die Aggregation der Blutplättchen, die durch verschiedenartige
Agonisten induziert wird, inhibieren. Diese antagonistische Aktivität ist nicht
auf die Glycoproteinstelle IIb IIIa beschränkt, sondern auf alle Glycoproteinstellen,
die an der Zelladhäsion
verschiedenartigen Ursprungs beteiligt sind, dazwischen.
-
Blutplättchen werden
durch mehrere Agonisten aktiviert, wodurch ihre Formen sowie ihre
Sekretionen ihrer Granula modifiziert werden können und wodurch ihre Aggregation
induziert werden kann und die Bildung von Gerinnseln und Thromben
erzeugt werden kann.
-
Mehrere
endogene Agonisten wie ADP (Adenosin-5-diphosphat), Serotonin, Arachidonsäure, Epinephrin,
Adrenalin, Thrombin, Collagen, Ristocetin sind bekannt.
-
Vor
kurzem ist ein Mechanismus der Wirkung dieser Agonisten identifiziert
worden, nämlich
die Aktivierung der Glycoproteinstelle GP IIb IIIa, was die Adhäsion des
zirkulierenden Fibrinogens verursacht (Thromb. Res. 1993, 72, 231–245) und
daher die Konsolidierung von Blutplättchen-Gruppen und die Bildung eines
Gerinnsels bewirkt (Drug of the future, 1994, 19 (2), 135–159).
-
Die
tatsächlich
verwendeten Inhibitoren der Aggregation der Blutplättchen wirken
nur an einem einzigen Agonisten. Beispielsweise ist Aspirin gegenüber der
Arachidonsäure
aktiv, Ticlopidin ist gegenüber
ADP aktiv und Hirudin ist gegenüber
Thrombin aktiv. Die Betaine der allgemeinen Formel der Erfindung,
die hierin voranstehend offenbart sind, sind gegenüber verschiedenartigen
Agonisten sowie an Fibrinogen, Fibronectin, Von-Willebrand-Faktor
und anderen adhäsiven
Proteinen, wie Vitronectin, Collagen, Laminin, wirksam. Dies ist
eine Hauptverbesserung in Bezug auf ihre Wirksamkeit, während der
Hämostasemechanismus
aufrechterhalten bleibt, um hämorrhagische
Vorfälle
oder Vorfälle
von Blutungen zu vermeiden. Aufgrund ihrer Aktivität durch
orale Verabreichung sind diese Verbindungen ausgezeichnete Kandidaten
für Krankheitsbilder
mit einer Adhäsion
von Zellen zwischen diesen.
-
Angesichts
seiner geringen Toxizität
und seiner Wirksamkeit sind die besten Ergebnisse mit Glycinbetain
(Verbindung der allgemeinen Formel mit n = 1) erhalten worden. Keine
der Veröffentlichungen,
auf die in der vorliegenden Beschreibung Bezug genommen wird, lehrt
die antagonistische Aktivität
des Betains gegenüber
dem Glycoprotein IIb IIIa-Rezeptor sowie seine Aktivität in Bezug
auf die adhäsiven
Proteine. Diese antagonistische Aktivität ist nicht nur auf die Stelle
des Glycoproteins IIb IIIa beschränkt, sondern wirkt auch auf alle
anderen Glycoproteinstellen in der Adhäsion von Zellen verschiedenen
Ursprungs dazwischen.
-
In
der vorliegenden Beschreibung sind pharmazeutisch annehmbare Salze
Salze von Betain, die verabreicht werden können, wie z. B. Salze von Betain
mit Chlorwasserstoff, Schwefelsäure,
Sulfonsäure,
organischen Säuren,
wie Essigsäure,
Citronensäure,
Weinsäure,
Ameisensäure
usw., sowie dem Monohydratrest.
-
Betaine,
vorzugsweise Glycinbetain, werden vorzugsweise oral, parenteral,
subkutan, als Suppositorien, Tabletten, Kapseln, als Sirup usw.
verabreicht.
-
Verabreichte
Dosen können
von 0,001 g bis 10 g pro kg Körpergewicht,
beispielsweise von 0,005 bis 5 g und insbesondere von 0,01 g bis
3 g pro kg Körpergewicht
variieren.
-
Beispiele
für Verabreichungsformen
sind Tabletten, Kapseln, Pflaster, injizierbare Formen, freisetzende
Formen, eine sublinguale Verabreichungsform, ein Pulver (z. B. für die Inhalationstherapie,
zur bukkalen Inhalation), ein Sirup, eine Lösung (Zerstäubung, z. B. zur Inhalati onstherapie,
zur bukkalen Inhalation). Als bevorzugte Verabreichungsformen sind
subkutane injizierbare Dosierungsformen, Patches (die auf die Haut aufgebracht
werden sollen) sowie eine im Darm lösliche orale Dosierungsform,
z. B. gastrounlösliche
Tabletten oder Kapseln usw. die mit einem im Darm löslichen Überzug oder
einer Matrix oder einem System versehen sind.
-
Da
der pH-Wert einer wässrigen
Glycinbetainlösung
zwischen etwa 6 und etwa 7 liegt, kann eine injizierbare Lösung (vorzugsweise
für eine
subkutane Injektion) hergestellt werden, indem das feste Glycinbetain mit
Wasser (sterilisiert und möglicherweise
entionisiert) vermischt wird. Das Glycinbetain kann in der Form
eines Pulvers (sprühgetrocknetes
Pulver), das in eine Phiole eingegeben worden ist, vorliegen, Wasser
wird dann zu der Phiole für
die Herstellung der zu injizierenden Lösung gegeben. Wenn es notwendig
ist, kann etwas Säure
(z. B. Chlorwasserstoffsäure)
zu der Lösung
oder zu dem mit dem Pulver zu vermischenden Wasser gegeben werden.
-
Die
injizierbare Dosierungsform kann eine unter Druck gesetzte Dosierungsform,
z. B. eine mit Luft unter Druck gesetzte Dosierungsform, sein. Subkutane
injizierbare Formen von Glycinbetain, wie z. B. intravenöse injizierbare
Formen, sind bevorzugt. Injizierbare Formen von Glycinbetain sind
z. B. eine wässrige
Lösung, die
0,1 bis 50 Gew.-% Glycinbetain, vorteilhafter Weise 0,5 bis 30 Gew.-%
und vorzugsweise 10 bis 20 Gew.-% enthält. Die injizierbare Form weist
einen pH-Wert auf, der z. B. zwischen 5 und 8,5, vorteilhafter Weise
von 6 bis 7,5 und vorzugsweise 6 bis 6,5 beträgt. Wenn die injizierbare Form
durch Vermischen von Glycinbetain (als eine feste Form oder als
eine pulverförmige
Form) hergestellt wird, beträgt
der pH-Wert der Lösung
etwa 6 bis 6,5.
-
Wenn
das Glycinbetain durch Injektion verabreicht wird, kann das Glycinbetain
in einer Lösung
in einem flexiblen Beutel (Baxter), z. B. ein flexibler Beutel (Baxter),
zur intravenösen
Verabreichung einer Kochsalzlösung
oder einer physiologischen Lösung
oder eines Bluttransfusions-Baxter(-Beutels) vorhanden sein.
-
Die
Erfindung bezieht sich somit auch auf einen Beutel (flexibler Beutel
oder Baxter(-Beutel))
zur subkutanen Verabreichung (vorzugsweise zur intravenösen Verabreichung),
der eine Lösung
enthält,
die zur subkutanen Verabreichung geeignet ist. Als spezielleres
Beispiel enthält
der Beutel oder Baxter(-Beutel) Blut oder ein Blutderivat oder einen
Blutteil und Glycinbetain zur subkutanen Verabreichung.
-
Ein
anderer Gegenstand der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung
(z. B. eine Tablette), die Insulin und Betain enthält, eine
pharmazeutische Zusammensetzung (z. B. eine Tablette), die ein Antibiotikum
und Betain enthält,
eine pharmazeutische Zusammensetzung (z. B. eine Tablette), die
ein Antikrebsmittel und Betain enthält, eine pharmazeutische Zusammensetzung
(z. B. eine Tablette), die Aspirin und Betain enthält usw.
-
Ein
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit eine pharmazeutische
Kombination, wie sie in Anspruch 1 beansprucht ist, umfassend eine
wirksame Menge eines therapeutischen antithrombotischen Wirkstoffs,
der mindestens eine hämorrhagische
Nebenwirkung verur sacht, und eine wirksame Menge einer Verbindung
der Formel (CH3)3N+-CH2)n-COO–,
worin n für
eine ganze Zahl von 1 bis 5 steht und vorzugsweise gleich 1 ist,
um diese Nebenwirkung zu mindestens 50%, vorteilhafterweise zu mindestens
75%, vorzugsweise zu mindestens 90% und am stärksten bevorzugt im Wesentlichen
vollständig
zu verhindern und/oder die Ernsthaftigkeit dieser Nebenwirkung vorteilhafterweise
um einen Faktor von mindestens 50%, vorzugsweise von mindestens
75%, am stärksten
bevorzugt von mindestens 90% und insbesondere im Wesentlichen vollständig zu
verringern.
-
Betain
wird vorzugsweise als anti-hämorrhagisches
Mittel in dieser Kombination verwendet.
-
Betain
wird vorzugsweise als ein Antidot zu einem hämorrhagischen Mittel in der
Kombination verwendet.
-
Die
pharmazeutische Kombination kann in der Form eines Kits sein, um
die Kombination zur Verabreichung oder während der Verabreichung herzustellen.
-
Eine
Nebenwirkung ist als Vorfall definiert, der bei mehr als 2% der
Patienten beobachtet wird, die sich in Behandlung mit dem Wirkstoff
befinden. Durch Kombinieren des Wirkstoffs mit Betain ist es möglich, diese Vorfälle, beispielsweise
auf weniger als 2%, sowie die Wichtigkeit oder Schwere dieser Vorfälle drastisch
zu verringern.
-
Der
Wirkstoff mit möglicher
Nebenwirkung ist aus der Gruppe ausgewählt, die aus antinflammatorischen
Mitteln, Antiaggregantien, Antikoagulantien, antithrombotischen
Mitteln, thrombolytischen Mitteln, Tpa-Mitteln, Anti-Cholesterin-Mitteln,
Anti-Vitamin K und Gemischen davon besteht. Spezielle Beispiel derartiger
Mittel sind Glycoaminoglycane, Heparine (wie unfraktioniertes Heparin,
Standard-Heparin, niedermolekulare Heparine, Heparinoid und Gemische
davon), Heparin-artige Moleküle
(wie z. B. Heparinoid, Danaparoid, Orgaran, Fragmin, Dalteparin,
Enoxaparin, Lovenox, Ardeparin, Normiflo und Gemische davon), Thrombininhibitoren
(wie Argatroban, Novastan und Gemische davon), Aspirin, Antiaggregantien,
Antikoagulantien, Antiplättchenmittel
("anti platelet
agents") (wie z.
B. Dextrane, Dipyridamol, Sulfinpyrazon, Ticlodipin, Abciximab ("abcximab"), Tirofiban, Gemische
davon), antithrombotische Mittel, thrombolytische Mittel (wie humanes
rekombinantes aktiviertes Protein, Gewebeplasminogenaktivator, Urokinase,
Streptokinase, Anistreplase/APSAC sowie Gemische davon), Anti-Cholesterin-Mittel,
Anti-Vitamin K, Tpa-Mittel (Gewebeplasminogenaktivator), Glycoaminoglycane,
heparinoide Mittel, Hirudine, Warfarine, Coumadin, Coumarin, Mittel
der Statin-Familie, Ticlopidin, Statin-Mittel, Cerivastatin, Simvastatin
und Lovastatin.
-
Die
Erfindung bezieht sich auch auf die Verwendung einer Verbindung
der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–,
worin n für
eine ganze Zahl von 1 bis 5 steht, vorzugsweise von Glycinbetain,
oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon sowie von Gemischen
davon als aktives Antidot-Mittel bzw. Antidot-Wirkstoff zur Herstellung
einer Antidot-Zusammensetzung, z. B. zur Bekämpfung von hämorrhagischen Problemen,
wie z. B. hämorrhagischen
Problemen, die durch ein oder mehr Mittel verursacht worden sind,
die ausgewählt
sind aus der Gruppe, bestehend aus:
Kontrastmitteln, antinflammatorischen
Mitteln, Antiaggregantien, Antikoagulantien, antithrombotischen
Mitteln, thrombolytischen Mitteln, Tpa-Mitteln, Anti-Cholesterin-Mitteln,
Anti-Vitamin K und Gemischen davon. Spezielle Beispiele derartiger
Mittel sind Glycoaminoglycane, Heparine (wie unfraktioniertes Heparin,
Standard-Heparin, niedermolekulares Heparin, Heparinoid und Gemische
davon), Heparin-artige Moleküle
(wie Heparinoid, Danaparoid, Orgaran, Fragmin, Dalteparin, Enoxaparin,
Lovenox, Ardeparin, Normiflo und Gemische davon), ein Thrombininhibitor
(wie Argatroban, Novastan und Gemische davon), Aspirin, antiinflammatorische
Mittel (wie nicht-steroide antinflammatorische Mittel), Antiaggregantien,
Antikoagulantien, Antiplättchen-Mittel
(wie Dextrane, Dipyridamol, Sulfinpyrazon, Ticlodipin, Abciximab,
Tirofiban, Gemische davon), antithrombotische Mittel, thrombolytische
Mittel (wie humanes rekombinantes aktiviertes Protein, Gewebeplasminogenaktivator, Urokinase,
Streptokinase, Anistreplase/APSAC und Gemische davon), Anti-Cholesterin-Mittel,
Anti-Vitamin K, Tpa-Mittel (Gewebeplasminogenaktivator), Glycoaminoglycane,
heparinoide Mittel, Hirudine, Anti-Vitamin K, Warfarine, Coumadin,
Coumarin, Mittel der Statin-Familie, Ticlopidin, Statin-Mittel, Cerivastatin,
Simvastatin, Lovastatin, Mittel der Statin-Familie, Cerivastatin
(Baycol), Simvastatin, Lovastatin usw.
-
Antithrombotische
und/oder nicht-hämorrhagische
Formulierungen im Umfang der vorliegenden Erfindung können eine
Kombination einer therapeutisch wirksamen Menge von einer Verbindung/Verbindungen
der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–,
worin n für
eine ganze Zahl von 1 bis 5 steht, von pharmazeutisch annehmbaren Salzen
davon und Gemischen davon und einer therapeutisch wirksamen Menge
von einer oder mehr Verbindung(en), pharmazeutisch annehmbaren Salzen
davon, Estern davon, Precursorn davon und Gemischen davon sein,
die ausgewählt
sind aus der Gruppe, bestehend aus:
Antiaggregantien, wie
Abciximab,
basischem Aluminiumacetylsalicylat, Acetylsalicylat/Natriumcarbonat
("acetylsalicylate
carbonate sodium"),
Lysinacetylsalicylat, Acetylsalicylsäure, Aloxiprin, Anagrelid ("anagreli)-Hydrochlorid,
Bencyclanfumarat, Carbasalat-Calcium, Clopidogrelsulfat, Epoprostenol-Natrium, "Epifibati", Hydroxychloroquinsulfat,
Iloprost, Nicergolin, Nifedipin, Pyricarbat, Sulfinpyrazon, Ticlopidin-Hydrochlorid,
Tirofiban-Hydrochlorid, Verapamil-Hydrochlorid und Verbindungen,
die zu einer der voran stehenden Antiaggregans-Verbindungen strukturell ähnlich sind,
und/oder
Antikoagulantien, wie
Acenocoumarol, Anisindion, Ethylbiscoumacetat,
Bromindion, Coumetarol, Dalteparin-Natrium, Sirudin, Dextransulfat
("xtran sulfate"), Enoxaparin-Natrium,
Fluindion, Heparinat-Magnesium, Heparin-Calcium, Heparin-Natrium,
Lepirudin, Nadroparin-Calcium, Oxazidion, Pentosan-Schwefelsäure-Polyester
bzw. Pentosanpolysulfat (pentosan polyester sulfuric"), Phenindion, Phenprocoumon,
Reviparin-Natrium, Tinzaparin-Natrium, Tioclomarol, Warfarin-Natrium sowie Verbindungen,
die zu einer der voran stehenden Antikoagulans-Verbindungen strukturell ähnlich sind,
und/oder
Fibrinolytika, wie
Altepase, Anistreplase, Atorvastatin-Calcium,
Bromelainen, Ciprofibrat, Defibrotid, Fluvastatin-Natrium, Glicazid,
Lovastatin, Lys-Plasminogen, Phenformin, Pravastatin-Natrium, Reteplase,
Simvastatin, Streptokinase, Urokinase und Verbindungen, die zu einer
der voran stehenden Fibrinolytika-Verbindungen strukturell ähnlich sind.
-
Diese
antithrombotischen und/oder nicht-hämorrhagischen Formulierungen
können
Zubereitungen zur oralen, rektalen, parenteralen, transdermalen,
extrakorporalen, intrakorporalen Verabreichung sein. Beispielsweise
liegt das Gewichtsverhältnis
zwischen [Verbindung(en) der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO-, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, pharmazeutische annehmbare Salze davon,
Ester davon, Precursor davon und Gemische davon]/[Antiaggregantien
und/oder Antikoagulantien und/oder Fibrinolytika und/oder Gemische
davon] zwischen 50/1 und 1/50, vorteilhafterweise zwischen 25/1
und 1/2, vorzugsweise zwischen 10/1 und 1/1.
-
In
einer Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung kann das Betain aufgrund seiner antithrombotischen
Eigenschaften dazu verwendet werden, den antithrombotischen Effekt
der voran stehend aufgeführten Antiaggregantien
und/oder Antikoagulantien und/oder Fibrinolytika zu verbessern.
-
Die
kombinierte pharmazeutische Form eines Antidots kann eine Kombination
von Antikoagulans-Antagonisten (wie z. B. Protamin, Vitamin K1,
Gemische davon) und/oder Antagonisten zu thrombolytischen Mitteln
(z. B. Aminocapronsäure,
Tranexaminsäure
und Gemische davon) und einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon,
Ester davon, Precursorn davon und Gemischen davon sein.
-
Diese
kombinierten Formen von Antidot können Zubereitungen zur oralen,
rektalen, parenteralen, transdermalen, extrakorporalen und intrakorporalen
Verabreichung sein.
-
Die
antithrombotischen und/oder nicht-hämorrhagischen Formulierungen,
wie sie voran stehend beschrieben worden sind, können mit der kombinierten pharmazeutischen
Form des Antidots, wie sie voran stehend beschrieben worden ist,
kombiniert werden.
-
In
einer Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung können
eine Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, pharmazeutisch annehmbare Salze davon und
Gemische davon aufgrund ihrer anti-hämorrhagischen Eigenschaften
zur Behandlung von Hämophilie
verwendet werden.
-
In
einer Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung kann eine Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–,
worin n für
eine ganze Zahl von 1 bis 5 steht, aufgrund ihrer anti- hämorrhagischen Eigenschaften
in Kombination verwendet werden, um die Wirksamkeit der Anti-Hämophilie-Arzneimittel
zu verbessern.
-
Die
kombinierte pharmazeutische Form kann in einer Form vorliegen, in
der der Wirkstoff und das Betain gleichzeitig oder aufeinander folgend
unter Verwendung desselben Verabreichungswegs oder verschiedener
Verabreichungswege verabreicht werden. Als spezielle Beispiele wird
bei Verwendung verschiedener Verabreichungswege das Betain in der
Form eines Pflasters oder durch subkutane Injektion verabreicht,
während der
andere Wirkstoff oral oder durch Injektion (subkutan, venös) verabreicht
wird. Wenn die kombinierte pharmazeutische Form unter Verwendung
desselben Verabreichungswegs verabreicht wird, ist die Dosierungsform vorteilhafterweise
eine injizierbare Form (z. B. eine venös injizierbare Form), sie ist
jedoch vorzugsweise eine orale Dosierungsform und am stärksten bevorzugt
eine feste oder halbfeste Dosierungsform. Wenn eine Dosierungsform
verwendet wird, liegt der Wirkstoff vorzugsweise in der Form von
Pellets oder Mikropellets oder von Partikeln vor, die mit einer
Betain-enthaltenden
Schicht überzogen
sind. Die überzogenen
Partikel oder Pellets können
des Weiteren mit einem im Darm löslichen Überzug beschichtet
sein, der im Magen unlöslich ist,
oder in eine Matrix oder Kapsel eingegeben sein, die im Darm löslich und
im Magen unlöslich
ist. Vorzugsweise ist zumindest das Glycinbetain in einer Form,
die zur subkutanen Injektion (vorzugsweise zur intravenösen Injektion)
geeignet ist, oder in einer Form, die zur Herstellung einer zur
subkutanen Injektion (vorzugsweise zur intravenösen Injektion) geeigneten Form
angepasst ist.
-
Die
Erfindung bezieht sich des Weiteren auf ein Verfahren zur Herstellung
einer Zusammensetzung der Erfindung zur Behandlung eines Patienten,
der einer derartigen Behandlung bedarf, zur Reduzierung oder Prävention
der verursachten hämorrhagischen
Nebenwirkung, indem dem Patienten eine therapeutisch wirksame Menge
eines therapeutisch aktiven Mittels mit mindestens einer hämorrhagischen
Nebenwirkung verabreicht wird, und eine therapeutisch wirksame Menge
einer Verbindung der Formel (CH3)3N+-(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht und vorzugsweise gleich 1 ist, verwendet
wird, zur Verhinderung dieser Beschwerden zu mindestens 50%, vorteilhafterweise
zu mindestens 75%, vorzugsweise zu mindestens 90% und am stärksten bevorzugt
im Wesentlichen vollständig
und/oder zur Reduktion der Ernsthaftigkeit dieser Nebenwirkung vorteilhafterweise
um einen Faktor von mindestens 50%, vorzugsweise von mindestens
75%, am stärksten
bevorzugt von mindestens 90% und insbesondere im Wesentlichen vollständig. Glycinbetain
wird vorzugsweise subkutan injiziert (am stärksten bevorzugt ist eine intravenöse Injektion).
-
Die
vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Präparat, System oder eine Vorrichtung
zur kontrollierten Freisetzung von Betain und auf Verfahren zu deren
Herstellung und deren medizinische Verwendung. Insbesondere bezieht
sich die Erfindung auf ein Präparat
zur kontrollierten Freisetzung, das Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
oder ein pharmazeutisches Salz davon umfasst.
-
Betain
ist eine Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht. Herkömmliche
Zubereitungen in der Form eines Sirups oder eines Pulvers sind seit
vielen Jahren zur Verwendung in der Behandlung von Homocystinurie
kommerziell erhältlich.
Derartige Präparate
bieten jedoch keine kontrollierte Freisetzung der Betain. Darüber hinaus
sind trotz ihrer lang andauernden Verwendung Präparate mit kontrollierter Freisetzung
zur oralen, rektalen, parenteralen, transdermalen, extrakorporalen
oder intrakorporalen Verabreichung, die ein Betain, als aktiven
Bestandteil enthalten, in der Literatur vorher weder beschrieben
noch vorgeschlagen worden.
-
Eine
Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht in der Bereitstellung
einer oralen, rektalen, parenteralen, transdermalen, extrakorporalen
oder intrakorporalen Betain-Zubereitung, vorzugsweise Glycinbetain-Zubereitung,
zur kontrollierten Freisetzung, die für eine zumindestens zwölfstündige (z.
B. bis zu vierundzwanzigstündige
oder sogar längere,
z. B. für
eine Woche, zwei Wochen, einen Monat, drei Monate) Verabreichung
zur Behandlung eines Säugetiers
geeignet ist.
-
Die
vorliegende Erfindung bietet daher ein Präparat und/oder eine Vorrichtung
zur kontrollierten Freisetzung, die Betain, vorzugsweise Glycinbetain
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon oder einen pharmazeutisch
annehmbaren Ester davon umfasst, zur Verabreichung an den Körper (oral,
rektal, parenteral, transdermal, extracorporal, intracorporal usw.).
-
Geeignete
pharmazeutisch annehmbare Salze von Betain, vorzugsweise von Glycinbetain,
zur Verwendung gemäß der vorliegenden
Erfindung sind diejenigen, die im Stand der Technik herkömmlicherweise bekannt
sind, wie z. B. pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze. Das wasserfreie
Salz ist in besonderem Maße
bevorzugt.
-
Die
Erfindung bezieht sich auf ein pharmazeutisches System zur kontrollierten
Freisetzung, das zur Abgabe eines Betains oder einer wirksamen Menge
einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, vorzugsweise von Glycinbetain oder eines
pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und von Gemischen davon
in den Blutstrom eines Säugetiers
in einer kontrollierten Art und Weise geeignet ist, und/oder
auf
ein pharmazeutisches Systems zur kontrollierten Freisetzung, das
zur Abgabe mindestens einer Verbindung, die ausgewählt ist
aus der Gruppe, bestehend aus Betainen oder einer wirksamen Menge
einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, pharmazeutisch annehmbarer Salze davon und
von Gemischen davon, als aktiven Bestandteil in den Blutstrom eines
Säugetiers
in einer kontrollierten Art und Weise geeignet ist.
-
Das
System der Erfindung ist ein orales Präparat oder eine orale Vorrichtung
zur kontrollierten Freisetzung und/oder ein transdermales Präparat zur
kontrollierten Freisetzung und/oder eine transdermale Vorrichtung
zur kontrollierten Freisetzung und/oder ein parenterales Präparat und/oder
eine extracorporale Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung und/oder
eine intracorporale Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung oder
ein intracorporales Präparat
zur kontrol lierten Freisetzung und/oder ein rektales Präparat zur
kontrollierten Freisetzung und/oder eine rektale Vorrichtung zur
kontrollierten Freisetzung und/oder ein mucosales Präparat oder
eine mucosale Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung und/oder
ein pulmonales Präparat
oder eine pulmonale Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung und/oder
ein okulares Präparat
oder eine okulare Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung.
-
Gemäß einer
Ausführungsform
umfasst das System mindestens zwei Systeme, die ausgewählt sind aus
der Gruppe, bestehend aus: oralen Präparaten zur kontrollierten
Freisetzung, einer oralen Vorrichtung zur kontrollierten Freisetzung,
transdermalen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung, transdermalen Vorrichtungen zur
kontrollierten Freisetzung, parenteralen Präparaten zur kontrollierten
Freisetzung, parenteralen Vorrichtungen zur kontrollierten Freisetzung,
extracorporalen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung, extracorporalen Vorrichtungen zur
kontrollierten Freisetzung, intracorporalen Präparaten zur kontrollierten
Freisetzung, intracorporalen Vorrichtungen zur kontrollierten Freisetzung,
rektalen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung, rektalen Vorrichtungen zur kontrollierten
Freisetzung, mucosalen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung, mucosalen Vorrichtungen zur kontrollierten
Freisetzung, pulmonalen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung, pulmonalen Vorrichtungen zur kontrollierten
Freisetzung, okularen Präparaten
zur kontrollierten Freisetzung sowie okularen Vorrichtungen zur
kontrollierten Freisetzung.
-
In
dem System der vorliegenden Erfindung ist der aktive Bestandteil
vorzugsweise Glycinbetain.
-
Die
Erfindung bezieht sich auch auf ein pharmazeutisches System zur
kontrollierten Freisetzung zur Freisetzung einer therapeutisch wirksamen
Menge mindestens einer Verbindung, die ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend
aus Betainen, oder einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–,
worin n für
eine ganze Zahl von 1 bis 5 steht, von pharmazeutisch annehmbaren
Salzen davon und Gemischen davon, zur Behandlung oder Prävention
von Blutflussstörungen
und/oder zur Behandlung oder Prävention
einer Thrombose und/oder thromboembolischer Erkrankungen.
-
Ein
erfindungsgemäßes System
zur kontrollierten Freisetzung kontrolliert die Freisetzung von
Glycinbetain oder einer wirksamen Menge der Verbindung oder von
pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon und/oder von Gemischen davon,
vorteilhafterweise mindestens 120 Minuten lang, vorteilhafterweise
mindestens 180 Minuten lang und vorzugsweise mindestens 240 Minuten
lang.
-
Am
stärksten
bevorzugt kontrolliert das System die Freisetzung mindestens eines
Glycinbetains oder einer wirksamen Menge eines Glycinbetains, von
pharmazeutisch annehmbaren Salzen davon und von Gemischen davon,
mindestens 180 Minuten lang, vorteilhafterweise mindestens 240 Minuten
lang, vorzugsweise mindestens 360 Minuten lang und am stärksten bevorzugt
mindestens 1440 Minuten lang (z. B. 1 Woche lang, 2 Wochen lang,
einen Monat lang).
-
Gemäß einer
möglichen
Ausführungsform
umfasst das System und/oder die Vorrichtung der vorliegenden Erfindung
eine oder mehrere elektronische Vorrichtung(en) oder Chips, die
ein oder mehr Freisetzungssysteme oder Vorrichtungen, wie eine Mikropumpe/Mikropumpen,
eine Spritze, einen Ballon usw., kontrollieren.
-
Die
vorliegende Erfindung bezieht sich des Weiteren auf:
- – ein
Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung
zur Behandlung oder Prävention
von Beschwerden, die durch Verabreichen einer wirksamen Menge eines
therapeutisch aktiven Mittels mit mindestens einer hämorrhagischen
Nebenwirkung an einen Patienten verursacht worden sind, wobei eine
wirksame Menge einer Verbindung der Formel (CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes
davon oder von Gemischen davon als therapeutisch aktives Mittel
zur Prävention
oder Verringerung der Nebenwirkung und/oder zur Verstärkung der therapeutischen
Wirkung des therapeutisch aktiven Mittels verwendet wird, und
- – ein
Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung
zur Behandlung oder zur Prävention
von Thrombosebeschwerden bei einem Patienten durch Verabreichung
einer therapeutisch wirksamen Menge eines antithrombotischen aktiven
Mittels mit mindestens einer hämorrhagischen
Nebenwirkung an den Patienten, wobei eine therapeutisch wirksame
Menge an Glycinbetain als aktives Mittel zur Prävention oder Verringerung der
hämorrhagischen
Nebenwirkung verwendet wird.
-
Ein
Beispiel eines oralen Präparats
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der vorliegenden Erfindung ist
eines, das eine langsame Freisetzung eines Wirkstoffs über einen
ausgedehnten Zeitraum erzielt, wodurch die Wirkungsdauer des Wirkstoffs über die
mittels herkömmlicher
Abgabe erzielte hinaus ausgedehnt wird. Vorzugsweise hält ein derartiges
Präparat
eine Wirkstoffkonzentration im Blut innerhalb des therapeutischen Bereichs über 12 Stunden
oder länger,
am stärksten
bevorzugt über
24 Stunden oder länger
aufrecht.
-
Der
benannte Erfinder hat herausgefunden, dass, um eine kontrollierte
Freisetzung eines Betains, vorzugsweise von Glycinbetain, über einen
Zeitraum von mindestens 12 Stunden nach der oralen Verabreichung zu
ermöglichen,
die in vitro-Freisetzungsrate vorzugsweise der folgenden prozentualen
Rate an freigesetztem Betain, vorzugsweise an freigesetztem Glycinbetain,
entspricht: TABELLE 1
ZEIT
(h) | %
FREIGESETZT |
1 | 0–50 |
2 | 0–75 |
4 | 3–95 |
8 | 10–100 |
12 | 20–100 |
16 | 30–100 |
24 | 50–100 |
36 | > 80 |
-
Ein
anderes bevorzugtes Präparat,
das insbesondere für
eine zweimal tägliche
Dosierung geeignet ist, weist eine in vitro-Freisetzungsrate auf,
die der folgenden prozentualen Rate an freigesetztem Betain, vorzugsweise
an freigesetztem Glycinbetain, entspricht: TABELLE 2
ZEIT
(h) | %
FREIGESETZT |
1 | 20–50 |
2 | 40–75 |
4 | 60–95 |
8 | 80–100 |
12 | 90–100 |
-
Noch
ein anderes bevorzugtes Präparat,
das für
eine einmal tägliche
Dosierung besonders geeignet ist, weist eine in vitro-Freisetzungsrate
auf, die der folgenden prozentualen Rate an freigesetztem Betain,
vorzugsweise an freigesetztem Glycinbetain, entspricht: TABELLE 3
ZEIT
(h) | %
FREIGESETZT |
1 | 0–50 |
2 | 0–75 |
4 | 10–95 |
8 | 35–100 |
12 | 55–100 |
16 | 70–100 |
24 | > 90 |
-
Ein
weiter bevorzugtes Präparat
gemäß der vorliegenden
Erfindung, das ebenso für
eine einmal täglige
Dosierung in besonderem Maße
geeignet ist, weist eine in vitro-Freisetzungsrate auf, die der
folgenden prozentualen Rate an freigesetztem Betain, vorzugsweise
an freigesetztem Glycinbetain, entspricht. TABELLE 4
ZEIT
(h) | %
FREIGESETZT |
1 | 0–30 |
2 | 0–40 |
4 | 3–55 |
8 | 10–65 |
12 | 20–75 |
16 | 30–88 |
24 | 50–100 |
36 | > 80 |
-
Stärker bevorzugt
weist ein Präparat
für eine
einmal tägliche
Dosierung im Wesentlichen die folgenden in vitro-Freisetzungsrate
auf:
ZEIT
(h) | %
Freigesetztes Betain, vorzugsweise freigesetztes Glycinbetain |
1 | 15–25 |
2 | 25–35 |
4 | 30–45 |
8 | 40–60 |
12 | 55–70 |
16 | 60–75 |
-
Eine
andere bevorzugte Auflösungsrate
in vitro nach Freisetzung des Präparats
zur kontrollierten Freisetzung zur zweimal täglichen Verabreichung gemäß der vorliegenden
Erfindung beträgt
zwischen 5 und 50% (auf das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise
Glycinbetain, freigesetzt nach 1 Stunde, zwischen 10 und 75% (auf
das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise Glycinbetain, freigesetzt
nach 2 Stunden, zwischen 20 und 95% (auf das Gewicht bezogen) Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, freigesetzt nach 4 Stunden, zwischen 40
und 100% (auf das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
freigesetzt nach 8 Stunden, mehr als 50% (auf das Gewicht bezogen)
Betain, vorzugsweise Glycinbetain, freigesetzt nach 12 Stunden, mehr
als 70% (auf das Gewicht bezogen), freigesetzt nach 18 Stunden,
und mehr als 80% (auf das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise
Glycinbetain, freigesetzt nach 24 Stunden.
-
Darüber hinaus
ist es im Falle eines Präparats
zur kontrollierten Freisetzung für
eine zweimal tägliche Verabreichung
bevorzugt, dass 8 Stunden nach der oralen Verabreichung zwischen
70 und 95% (auf das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
in vivo absorbiert sind, zwischen 77 und 97% (auf das Gewicht bezogen)
Betain, vorzugsweise Glycinbetain, nach 10 Stunden absorbiert sind,
und zwischen 80 und 100% (auf das Gewicht bezogen) Betain, vorzugsweise
Glycinbetain, nach 12 Stunden absorbiert sind.
-
Eine
Formulierung gemäß der vorliegenden
Erfindung, die für
eine zweimal tägliche
Dosierung geeignet ist, kann eine tmax von
1,5 bis 8 Stunden, vorzugsweise 2 bis 7 Stunden, und einen W.sub.50-Wert
im Bereich von 7 bis 16 Stunden aufweisen.
-
Eine
Formulierung gemäß der vorliegenden
Erfindung, die für
eine einmal tägliche
Dosierung geeignet ist, kann eine tmax im
Bereich von 3 bis 6 Stunden, vorzugsweise 4 bis 5 Stunden, und einen
W.sub.50-Wert im Bereich von 10 bis 36 Stunden aufweisen.
-
Der
W.sub.50-Parameter definiert die Breite des Plasmaprofils bei 50%
Cmax, d. h., die Dauer, über die die Plasmakonzentrationen
gleich 50% der Spitzenkonzentration oder größer sind. Der Parameter wird
durch lineare Interpolation der beobachteten Daten bestimmt und
steht für
den zeitlichen Unterschied zwischen dem ersten (oder einzigen) Schnittpunkt
bei positiver Steigung und dem letzten (oder einzigen) Schnittpunkt
bei negativer Steigung im Plasmaprofil.
-
Die
hierin erwähnten
in vitro-Freisetzungsraten können,
sofern nichts anderes explizit angemerkt ist, die durch Messung
unter Verwendung der Ph. Eur. Paddle Method bei 100 UpM in 900 ml
0,1 N Salzsäure
bei 37°C
und unter Verwendung einer beliebigen geeigneten Methode zur Detektion
des Betains oder Glycinbetains (wie HPLC, UV-Detektion usw.) bestimmten
sein.
-
Die
in vivo-Absorptionsrate wird durch Messung der Plasmakonzentration
mit der Zeit unter Verwendung der Dekonvolutionstechnik bestimmt.
Ein Betainpräparat
mit herkömmlicher
Freisetzung, vorzugsweise ein Glycinbetain-Tropfenpräparat, wurde
als die Gewichtsfunktion verwendet und die Halbwertszeit für die Ausscheidung
von Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wurde als 7,8 Stunden angenommen.
-
Das
Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der vorliegenden Erfindung
enthält
vorzugsweise eine wirksame Menge eines Betains, vorzugsweise Glycinbetain,
oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder Esters davon,
eines Prekursors davon, eines Prekursors davon, üblicherweise im Bereich von
50 bis 8000 mg, insbesondere 100, 200, 300, 400 bis 600, 800 bis
1000, 1500 bis 5000 mg, (berechnet als Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
wasserfrei) pro Dosierungseinheit.
-
Das
Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der Erfindung kann beispielsweise
als Granulate, Sphäroide,
Pellets, multipartikuläre
Teilchen („multiparticulates"), Kapseln, Tabletten,
Briefchen, Suspensionen zur kontrollierten Freisetzung oder in einer
beliebigen anderen geeigneten Dosierungsform, die derartige Granulate,
Sphäroide,
Pellets oder multipartikuläre
Teilchen beinhaltet, präsentiert
werden.
-
Der
aktive Bestandteil in dem Präparat
gemäß der Erfindung
kann geeigneterweise in eine Matrix eingearbeitet sein. Diese kann
eine beliebige Matrix sein, die eine kontrollierte Freisetzung eines
Betains, vorzugsweise von Glycinbetain, über einen Zeitraum von mindestens
12 Stunden bietet und vorzugsweise in vitro-Auflösungsraten und in vivo-Absorptionsraten
eines Betains, vorzugsweise von Glycinbetain, innerhalb der voranstehend
spezifizierten Bereiche bietet. Vorzugsweise ist die Matrix eine
Matrix zur kontrollierten Freisetzung. Alternativ dazu können Matrices
mit normaler Freisetzung verwendet werden, die einen Überzug aufweisen,
der für
eine kontrollierte Freisetzung des aktiven Bestandteils sorgt.
-
Geeignete
Materialien zum Einschluss in eine Matrix zur kontrollierten Freisetzung
beinhalten
- (a) Hydrophile oder hydrophobe Polymere,
wie z. B. Gummis, Celluloseether, Acrylharze und von Proteinen abgeleitete
Materialien. Von diesen Materialien sind die Celluloseether, insbesondere
Alkylcellulosen, bevorzugt. Das Präparat kann üblicherweise zwischen 1% und
80% (auf das Gewicht bezogen) eines oder mehrerer hydrophiler oder
hydrophober Polymere enthalten.
- (b) Verdauliche, langkettige (C8-C50, insbesondere C12-C40), substituierte oder unsubstituierte Kohlenwasserstoffe,
wie z. B. Fettsäuren,
Fettalkohole, Glycerylester von Fettsäuren, Mineral- und Pflanzenöle und Wachse.
Kohlenwasserstoffe mit einem Schmelzpunkt zwischen 25°C und 90°C sind bevorzugt.
Von diesen langkettigen Kohlenwasserstoffmaterialien sind (aliphatische)
Fettalkohole bevorzugt. Das Präparat kann üblicherweise
bis zu 60% (auf das Gewicht bezogen) mindestens eines verdaulichen,
langkettigen Kohlenwasserstoffs enthalten.
- (c) Polyalkylenglykole. Das Präparat kann geeigneter Weise
bis zu 60% (auf das Gewicht bezogen) von einem oder mehreren Polyalkylenglykolen
enthalten.
-
Eine
besonders geeignete Matrix zur kontrollierten Freisetzung umfasst
eine oder mehrere Alkylcellulosen und einen oder mehrere aliphatische
C12-C36-Alkohole.
Die Alkylcellulose ist vorzugsweise eine C1-C6-Alkylcellulose, insbesondere Ethylcellulose.
Das Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der Erfindung enthält vorzugsweise
1 bis 20% (auf das Gewicht bezogen), insbesondere 2 bis 15% (auf
das Gewicht bezogen), einer oder mehrerer Alkylcellulosen.
-
Der
aliphatische Alkohol kann zweckmäßigerweise
Laurylalkohol, Myristylalkohol oder Stearylalkohol sein, ist jedoch
vorzugsweise Cetylalkohol oder stärker bevorzugt Cetostearylalkohol.
Das Präparat
zur kontrollierten Freisetzung enthält geeigneterweise 5 bis 30%
(auf das Gewicht bezogen) des aliphatischen Alkohols, insbesondere
10 bis 25% (auf das Gewicht bezogen) des aliphatischen Alkohols.
-
Gegebenenfalls
kann die Matrix zur kontrollierten Freisetzung auch andere pharmazeutisch
annehmbare Bestandteile enthalten, die auf dem pharmazeutischen
Gebiet üblich
sind, wie z. B. Verdünnungsmittel, Schmiermittel,
Bindemittel, Granulierhilfsstoffe, Farbmittel, Geschmacksmittel,
Tenside, Mittel zur pH-Einstellung, Antihaftmittel und Gleitmittel,
z. B. Dibutylsebacat, Ammoniumhydroxid, Ölsäure und kolloidales Siliciumdioxid.
-
Das
Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der Erfindung kann zweckmäßigerweise
unter Verwendung eines beliebigen Filmbeschichtungsmaterials filmbeschichtet
sein, das auf dem pharmazeutischen Gebiet üblich ist. Vorzugsweise wird
eine wässrige
Filmbeschichtung verwendet.
-
Alternativ
dazu kann das Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der vorliegenden Erfindung eine
Matrix zur normalen Freisetzung umfassen, die einen Überzug zur
kontrollierten Freisetzung besitzt. Vorzugsweise umfasst das Präparat filmbeschichtete
Sphäroide,
die den aktiven Bestandteil und ein Sphäronisierungsmittel enthalten.
-
Das
Sphäronisierungsmittel
kann ein beliebiges geeignetes pharmazeutisch annehmbares Material sein,
das zusammen mit dem aktiven Bestandteil unter Bildung von Sphäroiden sphäronisiert
werden kann. Ein bevorzugtes Sphäronisierungsmittel
ist mikrokristalline Cellulose. In geeigneter Weise kann die verwendete
mikrokristalline Cellulose beispielsweise Avicel PH 101 oder Avicel
PH 102 (Warenzeichen, FMC Corporation) sein.
-
Gegebenenfalls
können
die Sphäroide
andere pharmazeutisch annehmbare Bestandteile enthalten, die auf
dem pharmazeutischen Gebiet üblich
sind, wie z. B. Bindemittel, Füllstoffe
(„bulking
agents") und Farbmittel.
Geeignete Bindemittel beinhalten wasserlösliche Polymere, wasserlösliche Hydroxyalkylcellulosen,
wie Hydroxypropylcellulose, oder wasserunlösliche Polymere (die auch Eigenschaften
zur kontrollierten Freisetzung beitragen können), wie z. B. Acrylpolymere
oder Copolymere, z. B. Ethylcellulose. Geeignete Füllstoffe beinhalten
Lactose.
-
Die
Sphäroide
sind mit einem Material überzogen
bzw. beschichtet, das eine Freisetzung des aktiven Bestandteils
mit einer kontrollierten Rate in einem wässrigen Medium ermöglicht.
Geeignete Beschichtungsmaterialien zur kontrollierten Freisetzung
beinhalten in Wasser unlösliche
Wachse und Polymere, wie Polymethacrylate (z. B. Eudragit-Polymere,
Warenzeichen) oder in Wasser unlösliche
Cellulosen, insbesondere Ethylcellulose. Gegebenenfalls können in
Wasser lösliche
Polymere, wie Polyvinylpyrrolidon, oder in Wasser lösliche Cellulosen,
wie Hydroxypropylmethylcellulose oder Hydroxypropylcellulose, enthalten
sein. Gegebenenfalls können
andere wasserlösliche
Mittel, wie Polysorbat 80, zugesetzt werden.
-
Alternativ
dazu kann der Wirkstoff auf inerte Zuckerperlen aufgeschichtet sein
und die mit Wirkstoff beladenen Perlen können mit einem Material beschichtet
sein, das eine Kontrolle der Freisetzung des aktiven Bestandteils
in das wässrige
Medium ermöglicht.
-
Unter
einem weiteren Gesichtspunkt stellt die vorliegende Erfindung ein
Verfahren zur Herstellung eines Präparats zur kontrollierten Freisetzung
gemäß der vorliegenden
Erfindung zur Verfügung,
das das Einarbeiten eines Betains, vorzugsweise von Glycinbetain,
oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon in eine Matrix
zur kontrollierten Freisetzung umfasst:
- (a)
Granulieren eines Gemisches, das ein Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon sowie eine oder mehrere
Alkylcellulose(n) umfasst,
- (b) Vermischen des Alkylcellulose enthaltenden Granulats mit
einem oder mehreren aliphatischen C12-C36-Alkohol(en); und gegebenenfalls
- (c) Formen und Verpressen des Granulats sowie Filmbeschichten,
wenn dies gewünscht
ist; oder
- (d) Granulieren eines Gemisches, das ein Betain, vorzugsweise
Glycinbetain, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, Lactose
und eine oder mehrere Alkylcellulose(n) umfasst, mit einem oder
mehreren aliphatischen C12-C36-Alkohol(en);
und gegebenenfalls
- (e) Formen und Verpressen des Granulats sowie Filmbeschichten,
wenn dies gewünscht
ist.
-
Das
Präparat
zur kontrollierten Freisetzung gemäß der Erfindung kann auch in
der Form von filmbeschichteten Sphäroiden hergestellt werden durch
Granulieren
des Gemisches, das Betain, vorzugsweise Glycinbetain, oder ein pharmazeutisch
annehmbares Salz davon und ein Sphäronisierungsmittel umfasst;
Extrudieren
des granulierten Gemisches unter Erhalt eines Extrudats;
Sphäronisieren
des Extrudats, bis Sphäroide
gebildet werden; und
Beschichten der Sphäroide mit einer Filmbeschichtung.
-
Eine
bevorzugte Form einer Einheitsdosierungsform gemäß der vorliegenden Erfindung
umfasst eine Kapsel, die mit Partikeln zur kontrollierten Freisetzung
gefüllt
ist, die wenigstens den aktiven Bestandteil, einen hydrophoben schmelzbaren
Träger
oder ein hydrophobes schmelzbares Verdünnungsmittel und gegebenenfalls
ein hydrophiles Freisetzungsmodifiziermittel umfassen. Insbesondere
sind die Partikel zur kontrollierten Freisetzung vorzugsweise durch
ein Verfahren hergestellt, das das Bilden eines Gemisches aus trockenem
aktivem Bestandteil und schmelzbaren Freisetzungskontrollmaterialien
und nachfolgendes mechanisches Verarbeiten des Gemisches in einem
Hochgeschwindigkeitsmischer mit einer Energiezufuhr, die dazu ausreichend ist,
das schmelzbare Material zu schmelzen oder zu erweichen, wodurch
es Partikel mit dem aktiven Bestandteil bildet, umfasst. Nach dem
Abkühlen
werden die resultierenden Partikel in geeigneter Weise gesiebt,
um Partikel mit einem Größenbereich
von 0,1 bis 3,0 mm, vorzugsweise 0,25 bis 2,0 mm, zu ergeben. Ein
Beispiel gemäß der vorliegenden
Erfindung ist nachstehend beschrieben, das für die kommerzielle Herstellung
von Dosierungseinheiten geeignet ist.
-
Wenn
eine derartige Verarbeitungstechnik verwendet wird, ist herausgefunden
worden, dass, um die gewünschten
Freisetzungscharakteristika (sowohl in vivo als auch in vitro wie
voran stehend diskutiert) am leichtesten zu erzielen, die verarbeitende
Zusammensetzung zwei wesentliche Bestandteile umfassen sollte, nämlich:
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain oder ein Salz davon; und
hydrophoben
schmelzbaren Träger
oder hydrophobes schmelzbares Verdünnungsmittel; gegebenenfalls
zusammen mit
einer Freisetzungskontrollkomponente, die ein
wasserlösliches
schmelzbares Material oder ein partikelförmiges lösliches oder unlösliches
organisches oder anorganisches Material umfasst.
-
Der
benannte Erfinder hat herausgefunden, dass die Gesamtmenge an Betain,
vorzugsweise an Glycinbetain, oder an einem pharmazeutisch annehmbaren
Salz davon in der Zusammensetzung innerhalb weiter Grenzen, beispielsweise
von 10 bis 90 Gew.-% davon, variiert werden kann.
-
Die
hydrophobe schmelzbare Komponente (b) sollte ein hydrophobes Material,
wie z. B. ein natürliches
oder synthetisches Wachs oder Öl,
z. B. hydriertes Pflanzenöl,
hydriertes Rizinusöl,
mikrokristallines Wachs, Bienenwachs, Carnaubawachs oder Glycerylmonostearat,
sein und besitzt geeigneter Weise einen Schmelzpunkt von 35°C bis 140°C, vorzugsweise
von 45°C
bis 110°C.
-
Die
Freisetzungs-modifizierende Komponente (c), wenn sie ein wasserlösliches
schmelzbares Material ist, ist geeigneterweise ein Polyethylenglykol
und, wenn sie ein partikelförmiges
Material ist, ist sie geeigneterweise ein pharmazeutisch annehmbares
Material, wie z. B. Dicalciumphosphat oder Lactose.
-
Ein
anderes bevorzugtes Verfahren zur Herstellung einer Formulierung
gemäß der vorliegenden
Erfindung umfasst
- (a) das mechanische Verarbeiten
eines Gemisches aus Betain, vorzugsweise Glycinbetain, oder einem pharmazeutisch
annehmbaren Salz in Partikelform und einem partikelförmigen,
hydrophoben schmelzbaren Träger
oder einem partikelförmigen
hydrophoben schmelzbaren Verdünnungsmittel
mit einem Schmelzpunkt von 35°C
bis 140°C
und gegebenenfalls einer Freisetzungskontrollkomponente, die ein
wasserlösliches
schmelzbares Material oder ein partikelförmiges lösliches oder unlösliches
organisches oder anorganisches Material umfasst, in einem Hochgeschwindigkeitsmischer
bei einer Geschwindigkeit und einer Energiezufuhr, die es ermöglichen,
dass der Träger
oder das Verdünnungsmittel
schmilzt oder erweicht, wodurch er/es Agglomerate bildet,
- (b) Zerkleinern der größeren Agglomerate,
um Keime zur kontrollierten Freisetzung zu ergeben; und
- (c) Fortsetzen des mechanischen Verarbeitens gegebenenfalls
unter weiterer Zugabe eines geringen Prozentsatzes des Trägers oder
Verdünnungsmittels;
und gegebenenfalls Wiederholen der Stufen (c) und möglicherweise
(b) einmal oder mehrfach.
-
Dieses
Verfahren ist dazu in der Lage, eine hohe Ausbeute (über 80%)
an Partikeln in einem gewünschten
Größenbereich
mit einer gewünschten
Einheitlichkeit der Freisetzungsrate von Betain, vorzugsweise an
Glycinbetain, oder einem Salz davon zu ergeben.
-
Die
resultierenden Partikel können
gesiebt werden, um jegliches Material mit zu hoher oder zu niedriger
Größe zu entfernen,
und dann zu den gewünschten
Dosierungseinheiten beispielsweise durch Einkapselung in Hartgelatinekapseln,
die die erforderliche Dosis der aktiven Substanz enthalten, oder
durch Verpressen zu Tabletten geformt werden.
-
In
diesem Verfahren gemäß der Erfindung
wird vorzugsweise das gesamte Betain, vorzugsweise Glycinbetain,
oder ein Salz davon in Stufe (a) zusammen mit einem Hauptteil des
verwendeten hydrophoben schmelzbaren Freisetzungskontrollmaterials
zugesetzt. Vorzugsweise liegt die Menge des in Stufe (a) zugegebenen
schmelzbaren Freisetzungskontrollmaterials zwischen 10% und 90%
G/G der Gesamtmenge der zugesetzten Bestandteile in dem gesamten
Herstellungsarbeitsgang, stärker
bevorzugt zwischen 20% und 70% G/G.
-
Stufe
(a) des Verfahrens kann in herkömmlichen
Hochgeschwindigkeitsmischern und mit einer Standardinnenseite aus
Edelstahl, z. B. einem Collette Vactron 75 oder einem äquivalenten
Mischer, durchgeführt werden.
Das Gemisch wird verarbeitet, bis eine Betttemperatur von etwa 40°C oder darüber erzielt
ist und das resultierende Gemisch eine zusammenhängende körnchenförmige Textur mit Partikelgrößen im Bereich
von etwa 1 bis 3 mm bis zu einem feinen Pulver im Falle eines nicht-aggregierten
Originalmaterials annimmt. Im Falle der nachstehend beschriebenen
Ausführungsformen
besitzt ein derartiges Material das Erscheinungsbild von Agglomeraten,
die nach dem Abkühlen
auf unter 40°C
eine Strukturintegrität
und Beständigkeit
gegenüber einem
Zerdrücken
zwischen den Fingern aufweisen. In dieser Stufe sind die Agglomerate
von unregelmäßiger Größe, Form
und unregelmäßigem Erscheinungsbild.
-
Man
lässt die
Agglomerate vorzugsweise abkühlen.
Die Temperatur, auf die sie abgekühlt werden, ist keinen kritischen
Beschränkungen
unterworfen und eine Temperatur im Bereich von Raumtemperatur bis
37°C kann
in geeigneter Weise verwendet werden.
-
Die
Agglomerate werden durch ein beliebiges geeignetes Mittel zerkleinert,
das Agglomerate mit zu hoher Größe zerkleinert
und ein Gemisch aus einem Pulver und kleinen Partikeln mit einem
Durchmesser von vorzugsweise unter 2 mm erzeugt. Es ist gegenwärtig bevorzugt,
das Klassieren unter Verwendung eines Jackson Crockatt-Granulators
unter Verwendung eines Siebs mit geeigneter Größe bzw. Maschenweite oder eine
Comil mit einem Sieb geeigneter Größe bzw. Maschenweite durchzuführen. Man
fand heraus, dass, wenn ein Sieb mit zu geringer Größe bzw.
Maschenweite in der voranstehend genannten Apparatur verwendet wird, die
Agglomerate, die unter der Wirkung der Schlagvorrichtung oder des
Rührwerkzeugs
schmelzen, das Sieb verstopfen und einen weiteren Durchsatz des
Gemisches verhindern, wodurch die Ausbeute verringert wird. Eine
Siebgröße bzw.
Maschenweite von 12 ist als angemessen befunden worden.
-
Das
klassierte Material wird in dem Hochgeschwindigkeitsmischer zurückgegeben
und die Verarbeitung wird fortgesetzt. Man glaubt, dass dies zu
einem Verkleben der feineren Partikel zu Partikeln eines einheitlichen
Größenbereichs
führt.
-
In
einer bevorzugten Ausführungsform
des Verfahrens der vorliegenden Erfindung wird das Verarbeiten der
klassierten Materialien fortgesetzt, bis die verwendeten hydrophoben
schmelzbaren Materialien beginnen zu erweichen/schmelzen, und gegebenenfalls
wird dann zusätzliches
hydrophobes schmelzbares Material zugegeben. Das Mischen wird fortgesetzt,
bis das Gemisch zu Partikeln des gewünschten vorbestimmten Größenbereichs
transformiert worden ist.
-
Um
eine einheitliche Energiezufuhr zu den Bestandteilen in dem Hochgeschwindigkeitsmischer
zu gewährleisten,
ist es bevorzugt, zumindest einen Teil der Energie mittels Mikrowellenenergie
zuzuführen.
-
Energie
kann auch durch andere Mittel, wie z. B. durch einen Heizmantel
oder über
das Rührwerkzeug des
Mischers oder Schneidmesser („chopper
blades") zugeführt werden.
-
Nach
der Bildung der Partikel werden sie abgekühlt oder man lässt sie
abkühlen
und können
dann gesiebt werden, um zu großes
oder zu kleines Material zu entfernen. Die resultierenden Partikel
können
zur Herstellung von Dosierungseinheiten gemäß der Erfindung in der Form
von beispielsweise Tabletten oder Kapseln auf per se bekannte Arten
verwendet werden.
-
Der
benannte Erfinder hat ebenso herausgefunden, dass Betain, vorzugsweise
Glycinbetain, oder ein Salz davon enthaltende Partikel, die durch
eine Schmelzverarbeitung, wie sie in der Anmeldung
PCT/SE93/00225 beschrieben ist, und
das in unserer früheren
unveröffentlichten
UK-Anmeldung Nr. 9324045.5 ,
eingereicht am 23. November 1993, beschriebene und beanspruchte
Verfahren sowie das hierin beschriebene Verfahren hergestellt worden
sind, zur Verarbeitung in die Form von Tabletten besonders nützlich sind.
-
Der
benannte Erfinder fand heraus, dass durch geeignete Auswahl der
zur Bildung der Partikel sowie bei der Tablettenherstellung verwendeten
Materialien und der Anteilsmengen, in denen sie verwendet werden, ein
erhebliches Maß an
Kontrolle der letztlichen Auflösungs-
und Freisetzungsraten des Betains, vorzugsweise von Glycinbetain,
oder einem Salz davon aus den verpressten Tabletten ermöglicht wird.
-
Üblicherweise
werden zur Bildung einer Tablette gemäß der vorliegenden Erfindung
Partikel, die hergestellt worden sind, wie es voranstehend beschrieben
ist, mit Tablettierungsexzipientien vermischt, beispielsweise mit
einem oder mehreren oder den Standardexzipientien, wie Verdünnungsmitteln,
Schmiermitteln, Bindemitteln, Fließhilfsstoffen, Aufschlussmitteln
bzw. Sprengmitteln, Tensiden oder wasserlöslichen polymeren Materialien.
-
Geeignete
Verdünnungsmittel
sind beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose und Dicalciumphosphat.
Geeignete Schmiermittel sind beispielsweise Magnesiumstearat und
Natriumstearylfumarat. Geeignete Bindemittel sind beispielsweise
Hydroxypropylmethylcellulose, Polyvidon und Methylcellulose.
-
Geeignete
Aufschlussmittel bzw. Sprengmittel sind Stärke, Natriumstärkeglycolat,
Crospovidon und Croscarmellose-Natrium. Geeignete Tenside sind Poloxamer
188.RTM, Polysorbat 80 und Natriumlaurylsulfat. Geeignete Fließhilfsstoffe
sind Talk und kolloidales wasser freies Siliciumdioxid. Geeignete
wasserlösliche
Polymere sind PEG mit Molekulargewichten im Bereich von 1000 bis
6000.
-
Zur
Herstellung von Tabletten gemäß der vorliegenden
Erfindung werden erfindungsgemäß hergestellte
Partikel mit dem gewünschten
Exzipiens/den gewünschten
Exzipientien, wenn vorhanden, unter Verwendung herkömmlicher
Vorgehensweisen, beispielsweise unter Verwendung eines Y-Mischers
(„Y-Cone
blender") oder eines
Behältermischers
(„bin-blender"), vermischt werden
und das resultierende Gemisch kann gemäß einer herkömmlichen
Tablettierungsvorgehensweise unter Verwendung einer Tablettierungsform
von geeigneter Größe verpresst
werden. Tabletten können
unter Verwendung herkömmlicher
Tablettierungsmaschinen hergestellt werden und die in den nachstehend
beschriebenen Ausführungsformen
wurden an einer Standardeinstempelvorrichtung F3 Manesty oder einer
Rotationstablettenmaschine Kilian RLE15 hergestellt.
-
Allgemein
gesprochen finde ich, dass sogar bei einem hochgradig wasserlöslichen
aktiven Mittel wie Betain, vorzugsweise Glycinbetain, oder einem
Salz davon durch Verpressen gemäß Standardmethoden
gebildete Tabletten sehr geringe Freisetzungsraten des aktiven Bestandteils,
z. B. einer Freisetzung über
einen Zeitraum von mehr als 24 Stunden, beispielsweise mehr als
36 Stunden, entsprechend ergeben. Der benannte Erfinder hat herausgefunden,
dass das Freisetzungsprofil auf mehrere Arten eingestellt werden
kann. Beispielsweise wird eine höhere
Beladung des Wirkstoffs mit erhöhten
Freisetzungsraten verbunden sein; ebenso wird die Verwendung höherer Anteilsmengen
des wasserlöslichen
schmelzbaren Materials in den Partikeln oder eines Tensids in der
Tablettierungsformulierung auch mit einer höheren Freisetzungsrate des
aktiven Bestandteils verbunden sein. Durch Kontrolle der relativen
Mengen dieser Bestandteile ist es möglich, das Freisetzungsprofil
des Betains, vorzugsweise von Glycinbetain, oder einem Salz davon
einzustellen.
-
Die
folgenden Beispiele veranschaulichen verschiedene Gesichtspunkte
der vorliegenden Erfindung. Sie sollen nicht so ausgelegt werden,
dass sie die Ansprüche
in irgendeiner Art und Weise einschränken.
-
VORRICHTUNG UND VERFAHREN
-
MATERIAL
-
- Waserfreies Betain, BETAFIN® (Finnsugar
Bioproducts, CULTOR, Helsinki)
- Wistar-Ratten, männlich,
Gewicht zwischen 250 und 300 Gramm
- Natriumthiopental
- Aggregometer, CHRONOLOG COULTRONIC S. A., Frankreich
- ADP & Collagen,
Laboratoires Stago, Frankreich
-
METHODEN
-
Die
Aggregation wird in Übereinstimmung
mit den Methoden Cardinal & Flower,
Pharmacol. Method. 1980 und American Journal of Clinical Pathology,
1989, 92: 676–679,
Sureney, JD., Whole Blood aggregometry, durchgeführt.
-
Nach
einer 8-tägigen
Halteperiode werden die Ratten 12 Stunden lang einem Fasten unterzogen.
Eine Stunde vor der Blutprobenentnahme wird Betain subkutan injiziert.
Die Ratten werden dann mit Natriumthiopental anästhesiert, das in einer Dosis
von 200 mg/kg verabreicht wird, und die Blutproben werden durch
intrakardiale Punktur auf einer Trinatriumcitrat-Lösung (1
Volumen Lösung
mit 3,8% Citrat für
9 Volumina Blut) entnommen.
-
Aktivierte Koagulationszeit (Kaolin)
-
Dieser
Test untersucht den intrinsischen Koagulationspfad. Eine Stunde
nach der subkutanen Verabreichung des Betains werden 0,8 ml Vollblut,
auf intrakardialem Weg (erhalten), in einen Behälter HR, HemoTec., injiziert.
Dieses Röhrchen
enthält
den Kaolinaktivator (Methode HemoTec., automatisierter Koagulationstimer,
hergestellt von MEDTRONIC HEMOTEC Inc., Englewood, CO, USA).
-
Induzierte Hämorrhagiezeit
IHT
-
- (E. Dejana. Bleeding time in rats. Thrombosis. Rech. 1982)
-
Blutproben
werden vor dem Test hergestellt. Der Schwanz einer anästhesierten
Ratte wird 5 Minuten lang in einem Wasserbad bei 37°C eingetaucht,
um eine Dilatation der peripheren Gefäße auszulösen, die unter Entfernung und
am Ende geschnitten werden, wobei der Zeitmesser gestartet wird.
Die IHT ist definiert als die Zeitdauer zwischen dem Schneiden des
Schwanzendes und dem Ende der Blutung oder des Blutens. Das Ende
der Blutung ist als die Zeit definiert, in der der letzte Tropfen
Blut aus dem Schwanz entfernt ist und kein anderer Tropfen während 180
Sekunden gesehen wird. Die Substanzen wurden 60 Minuten vor dem
Schneiden des Schwanzes subkutan verabreicht.
-
A/Prinzip einer Laser-induzierten Thrombose
-
- (Seiffge D. et al., 1989; Weichter W. et al., 1983)
-
In
diesem Modell wird eine Verletzung der Gefäßwand durch einen Laserstrahl
induziert. Dieser Strahl verursacht eine begrenzte Läsion des
vaskulären
Endothels (nur 1 bis 2 Zellen werden zerstört). Dieses Freilegen des Subendothels,
das eine thrombogene Fläche
darstellt, führt
zum Anhaften von Blutplättchen über Glycoprotein
II. Diesem Anhaften der Blutplättchen
folgt die Aktivierung davon. Sie bilden Pseudopodia und scheiden
den Inhalt ihrer Granula aus. Diese Aktivierung führt zum
Auftreten der Glycoproteine IIb-IIIa, die zur Aggregation der Plättchen zwischen
diesen notwendig sind. Diese Läsion
wird in der mesenteralen Mikrozirkulation der Ratten induziert.
Ihm folgt unmittelbar die Bildung eines Thrombus (innerhalb weniger
Sekunden). Dieser Thrombus, der sich schnell unter dem Einfluss
des Blutflusses vergrößert, embolisiert,
bevor er sich wieder bilden kann.
-
Durch
diese Maßnahmen
wurde die Beurteilung des Effekts von Glycinbetain pharmakologisch
in Verbindung mit der Studie zweier aktiver Moleküle, die
als eine Referenz verwendet wurden, nämlich Acetylsalicylsäure und
Heparin (mit niedrigem Molekulargewicht), durchgeführt. Die
Beurteilung beinhaltete auch die Aktivität von Glycinbetain im Verhältnis zu
den prothrombotischen Effekten, die durch Gegenprodukte induziert worden
sind.
-
B/Stase-induzierte Thrombose
-
Eine
Laparotomie wurde durchgeführt,
um die untere Vena cava zu öffnen,
auf der bei T0 eine Ligatur gelegt wurde.
Dann wurde Glycinbetain bei T0 + 2 Stunden
subkutan injiziert und das Gerinnsel und Blutproben wurden bei T0 + 6 Stunden entnommen.
-
C/Experimentelle Vorgehensweise
-
Männliche
Wistar-Ratten wurden für
diese Tests verwendet und sie wogen zwischen 200 und 250 Gramm.
Nach einer 8-tägigen
Stabilisierungsperiode wurden die Ratten 12 Stunden lang einem Fasten
unterzogen. Dann wurden sie anästhesiert,
Glycinbetain wurde subkutan verabreicht und das Mesenterium (Laser) oder
die Vena cava (Stasis) wurden am Ende der Experimente geöffnet.
-
BEISPIELE:
-
Beispiel 1: Beurteilung der Anzahl der
Emboli und der Dauer der Embolus-Bildung nach der vaskulären Änderung
aufgrund von Laserbeschuss.
| Anzahl
der Emboli oder Embolien | Dauer
der Embolus-Bildung (Minuten) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 5,33 ± 0,58 | 2 ± 0 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 2 ± 0 | 1 ± 0 |
Acetylsalicylsäure
100
mg/kg | 1 ± 1 | 0,33 ± 0,58 |
Heparin
2 mg/kg | 2,67 ± 0,52 | 1 ± 0 |
-
Glycinbetain
reduzierte die Anzahl der Emboli und die Dauer der Embolus-Bildung
nach einer vaskulären Änderung
aufgrund von Laserbeschuss erheblich. Die Ergebnisse zeigen seine
starke antithrombotische Aktivität. Beispiel 2: Beurteilung der verursachten
Blutungszeit (E. Dejana. Bleeding time in rats. Thrombosis
Rech. 1982)
| Blutungszeit
(Sekunden) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 101,52 ± 5,7 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 95 ± 5 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 276,67 ± 20,82 |
Heparin
2 mg/kg | 313,33 ± 20 |
-
Diese
Ergebnisse zeigen, dass Glycinbetain die Blutungszeit, die verursacht
wird, innerhalb der Werte der Negativkontrolle aufrechterhält. Zusätzlich zu
einer antithrombotischen Aktivität
führt Glycinbetain
zu keinerlei Risiko in Bezug auf Hämorrhagie im Vergleich mit
den Positivkontrollen. Beispiel 3: Beurteilung der Plättchenaggregation
nach vaskulärer Änderung
aufgrund von Laserbeschuss (Cardinal & Flower. Pharmacol. Method. 1980)
| Amplitude
(Ohm) | Geschwindigkeit
(Ohm/min) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 13 ± 1 | 9 ± 1 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 0,66 ± 1,15 | 1,66 ± 1,15 |
Acetylsalicylsäure
100
mg/kg | 2,33 ± 2,08 | 2 ± 1 |
Heparin
2 mg/kg | 4,33 ± 0,57 | 2,66 ± 0,50 |
-
Diese
Ergebnisse zeigen den Anti-Aggregationseffekt von Glycinbetain. Beispiel 4: Beurteilung des Effekts auf
Blutzellen a/ Zählung
der Plättchen
| Anzahl
an Plättchen
(109) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 788 ± 30,14 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 804,67 ± 20,03 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 855,33 ± 63,17 |
Heparin
2 mg/kg | 777,33 ± 6,43 |
b/ Zählung
der weißen
Blutkörperchen
| Anzahl
der weißen
Blutkörperchen
(109) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 5,03 ± 1 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 4,43 ± 0,32 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 4,33 ± 1,00 |
Heparin
2 mg/kg | 5,80 ± 0,10 |
c/ Zählung
der roten Blutkörperchen
| Anzahl
der roten Blutkörperchen
(1012) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 6,56 ± 0,15 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 6,19 ± 0,25 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 6,15 ± 0,31 |
Heparin
2 mg/kg | 6,20 ± 0,20 |
-
Die
Zählungen
der Elemente, die im Blut auftreten, blieben innerhalb der Werte
der Negativkontrolle und zeigten die Unbedenklichkeit von Glycinbetain. Beispiel 5: Biologische Balance a/ Quick-Zeit
| QT
(Sekunden) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 17 ± 1 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 16,9 ± 1,05 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 18,33 ± 2,08 |
Heparin
2 mg/kg | 29,50 ± 0,52 |
b/ Aktivierte Gerinnungszeit bzw. aktivierte
Kephalin(gerinnungs)zeit ("activated
cephaline time")
(ACT)
| ACT
(Sekunden) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 20,5 ± 0,5 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 39,9 ± 1,05 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 27,26 ± 1,1 |
Heparin
2 mg/kg | 39,46 ± 1,36 |
c/ Fibrinogen-Analyse
| Fibrinogen
(g/l) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 2,45 ± 0,19 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 1,7 ± 0,1 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 2,19 ± 0,33 |
Heparin
2 mg/kg | 2,13 ± 0,25 |
d/ Alpha,2-Antiplasmin-Analyse (α2AP)
| α2AP (%) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 30,16 ± 0,85 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 29,7 ± 0,68 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 29,36 ± 0,92 |
Heparin
2 mg/kg | 29,4 ± 1,01 |
e /Antithrombin III-Analyse (AT III)
| AT
III (%) |
Negativkontrolle
NaCl
0,9% | 86 ± 3 |
Glycinbetain
5 mg/kg | 89,5 ± 1,37 |
Acetylsalicylsäure 100
mg/kg | 85,33 ± 3,51 |
Heparin
2 mg/kg | 77,66 ± 1,52 |
Beispiel
6: Beurteilung der Aktivität
von Glycinbetain als eine Funktion der Zeit Experimentelle Gruppen:
Das Produkt wurde mit 5 mg/kg getestet.
Laser-induzierte
Thrombose | |
Kontrolle | NaCl
0,9% |
Gruppe
I | Das
Produkt wurde 1 Stunde vor dem Experiment injiziert |
Gruppe
II | Das
Produkt wurde 2 Stunden vor dem Experiment injiziert |
Gruppe
III | Das
Produkt wurde 3 Stunden vor dem Experiment injiziert |
Gruppe
IV | Das
Produkt wurde 4 Stunden vor dem Experiment injiziert |
a) Effekt des getesteten Produkts (5 mg/ml/kg)
auf die verursachte Blutungszeit ("bleeding time caused").
Gruppe | B.
T. C. (Sekunden) |
NaCl
0,9% | 110 ± 21,2 |
I | 105 ± 26,2 |
II | 145 ± 15,52 |
III | 115,5 ± 14,2 |
IV | 120 ± 10,13 |
b) Effekt des getesteten Produkts (5 mg/ml/kg)
auf durch Laserstrahl induzierte arterielle Thrombose
Gruppe | Anzahl
an Beschüssen | Anzahl
an Emboli | Dauer
der Embolie-Bildung
(Minuten) |
NaCl
0,9% | 2,5 ± 0,84 | 5,7 ± 1,5 | 2,1 ± 0,69 |
I | 3,49 ± 1,07 | 1,8 ± 1,44 | 0,51 ± 0,5 |
II | 3,0 ± 1,5 | 1,4 ± 1,18 | 0,3 ± 0,23 |
III | 2,50 ± 1,25 | 1,99 ± 0,4 | 1,00 ± 0,5 |
IV | 2,7 ± 1,0 | 2,2 ± 0,69 | 1,5 ± 0,6 |
c) Effekt des getesteten Produkts (5 mg/kg)
auf eine ex vivo-induzierte Plättchen-Aggregation
Gruppe | Amplitude
(Ohm) | Geschwindigkeit
(Ohm/Minute) |
NaCl
0,9% | 24,23 ± 0,5 | 14,4 ± 2,3 |
I | 11,33 ± 3,08 | 8,2± 0,2 |
II | 13,2 ± 3,5 | 9,3 ± 1,8 |
III | 12,7 ± 4,1 | 8,7 ± 1,3 |
IV | 13 ± 2,8 | 8,7 ± 1,15 |
d) Beurteilung des Effekts von Glycinbetain
auf Koagulationsfaktoren nach wiederholter Verabreichung bei 5-tägiger Behandlung
| ACT
(Sekunden) | Quick-Zeit
(Sekunden) | Fibrinogen
g/l |
Unbehandelte
Kontrolle | 21,25 ± 2,3 | 16,1 ± 1,0 | 3,03 ± 0,45 |
Glycinbetain
(5
mg/kg/Tag) | 39,3 ± 2,3 | 19,8 ± 1,2 | 2,2 ± 0,1 |
Beispiel 7: Beurteilung des Effekts von
Glycinbetain auf durch Stasis induzierte venöse Thrombose a) Effekt von Glycinbetain auf das Gerinnselgewicht
| Gerinnselgewicht
(mg) |
Unbehandelte
Kontrolle | 4,033 ± 2 |
Glycinbetain
(1
mg/kg) | 3,1 ± 0,4 |
Glycinbetain
(2,5
mg/kg) | 1,63 ± 0,76 |
Glycinbetain
(5
mg/kg) | 0,76 ± 0,4 |
b) Beurteilung des Effekts von Glycinbetain
auf die Plasmninogen-Bildung
| Plasminogen-Bildung
% |
NaCl
0,9% | 2,7 ± 0,33 |
Glycinbetain
(5
mg/kg) | 1,66 ± 0,58 |
Glycinbetain
(2,5
mg/kg) | 2 ± 0,15 |
Glycinbetain
(1
mg/kg) | 2,44 ± 0,58 |
c) Beurteilung des Effekts von Glycinbetain
auf die Koagulation
| ACT
(Sekunden) | Quick-Zeit
(Sekunden) | Fibrinogen
g/l |
Unbehandelte
Kontrolle | 30,2 ± 2,7 | 16,1 ± 1,0 | 3,03 ± 0,45 |
Glycinbetain
(1
mg/kg) | 29,1 ± 2,3 | 16,2 ± 1,2 | 2,63 ± 0,3 |
Glycinbetain
(2,5
mg/kg) | 31,2 ± 2,6 | 16,6 ± 0,7 | 2,2 ± 0,17 |
Glycinbetain
(5
mg/kg) | 33,5 ± 1,9 | 15,6 ± 0,4 | 2,32 ± 0,33 |
d) Beurteilung des Effekts von Glycinbetain
auf Koagulationsfaktoren
| Anti
Xa
Einheiten/ml | Anti
IIa
Einheiten/ml |
Glycinbetain
(5
mg/kg) | 0,35 ± 0,15 | - |
Glycinbetain
(2,5
mg/kg) | 0,14 ± 0,10 | - |
Glycinbetain
(1
mg/kg) | 0,08 ± 0,1 | - |
-
Behandeln
mit Glycinbetain verhindert die thromboembolischen Komplikationen,
die durch Laserbeschuss initiiert werden. Tatsächlich vermindert eine Behandlung
mit Glycinbetain vor einem Laserbeschuss das vaskuläre Anhaften
von Plättchen
und deren Aggregation.
-
Ein
Behandeln mit Glycinbetain verhindert thromboembolische Komplikationen.
Tatsächlich
zeigte ein Behandeln mit Glycinbetain vor der Induktion einer Thrombose
ein hohes antithrombotisches Potential in Bezug auf alle Parameter,
die in dem Prozess der Thrombus-Bildung
ins Spiel kommen. Darüber
hinaus zeigen die Ergebnisse der biologischen Parameter die vollständige Unbedenklichkeit
von Glycinbetain, das im Gegensatz zu den verwendeten Referenzprodukten
(Aspirin und Heparin) keinen Blutungseffekt oder keine unerwünschte Nebenwirkung
induziert. Diese Merkmale bedeuten, dass Glycinbetain zusätzlich zu
seiner gezeigten Wirksamkeit an Menschen mit einem Risiko in Bezug
auf Hämorrhagie
sowie an Menschen, die zu einem Risiko einer Empfindlichkeit oder
Allergie neigen würden,
wenn ihnen herkömmliche
antithrombotische Behandlungen gegeben werden (Bluter, Allergiker),
verabreicht werden kann. Glycinbetain verursacht keine Thrombopenie
oder hämorrhagische
Störungen
(Beispiele 2 & 4).
Die experimentellen Ergebnisse des Beispiels 5c zeigen, dass es
einen Verbrauch von Fibrinogen gibt.
-
Es
sollte beachtet werden, dass Glycinbetain unter denselben experimentellen
Bedingungen für
die Bluterhaltung bzw. -konservierung eine hohe Fähigkeit
als Antikoagulans im Vergleich zu Heparin- oder EDTA-enthaltenden
Röhrchen
zu besitzen schien. Die effektive Dosis an Glycinbetain schien zwischen
3 und 5 mg pro Hämolyseröhrchen zu
liegen. Dieses experimentelle Ergebnis zeigt das hohe Potential
von Glycinbetain als Antikoagulans. Somit kann beansprucht werden,
dass Glycinbetain als ein Antikoagulans sowohl für die Behandlung des menschlichen
Körpers
in vivo als auch für
Konservierung von Blut ex vivo verwendet werden kann.
-
Glycinbetain
besitzt dieselben oder sogar bessere therapeutische Merkmale als
die der untersuchten Antikoagulantien und Antiaggregantien (Acetylsalicylsäure und
Heparin), während
es keine unerwünschten
Effekte zeigt.
-
Die überlegene
Leistung in Bezug auf therapeutische Aktivität von Glycinbetain in Bezug
auf diese beiden Moleküle
(Acetylsalicylsäure
und Heparin) ist ein Anreiz für
die Formulierung eines Arzneimittels, das Glycinbetain als einen
therapeutisch aktiven Bestandteil enthält, wobei das Arzneimittel
zur Behandlung von Thrombosen und thromboembolischer Erkrankungen
gedacht ist.
-
Gemäß der voranstehend
präsentierten
Ergebnisse weist dieses Arzneimittel auch Indikationen als Antikoagulans,
Antiaggregans und Fibrinolytikum auf. Die demonstrierte Unbedenklichkeit
dieses Moleküls
ermöglicht
das In-Betracht-Ziehen von Langzeitbehandlungen, für die kein
biologisches Überwachen
notwendig ist.
-
Das
Interesse an der Verwendung von Glycinbetain basiert auf der Tatsache,
dass es in mehreren Stufen der Hämostase
wirkt, d. h. es wirkt auf die Plättchen-Aggregation,
Koagulation und Fibrinolyse. Diese Aktivität ist dauerhaft und verhindert
eine wiederholte Verabreichung, was eine erhebliche Verbesserung
in Bezug auf derzeitige Behandlungen darstellt. Die Verabreichung
von Betain induziert kein hämorrhagisches
Risiko oder andere Nebenwirkungen (z. B. Heparin-induzierte Thrombopenie),
was einen Hauptvorteil bei einer antithrombotischen Therapie darstellt. Beispiel 8: Aggregation mit ADP End-ADP-Konzentration 5 μM
| Amplitude
(Ohm) | Geschwindigkeit
(Ohm/Minute) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 16,4
+/– 1,67 | 13,8
+/– 1,3 |
Glycinbetain
2,5
mg/kg | 13
+/– 0,82 | 5,75
+/– 0,96 |
Glycinbetain
5
mg/kg | 7,25
+/– 0,96 | 4,75
+/– 0,5 |
Glycinbetain
10
mg/kg | 0
+/– 0 | 0
+/– 0 |
-
Der
Dosiseffekt des Betains zeigt seine Wirkung an der Glycoprotein
IIb IIIa-Stelle, wobei das Betain in einer dosisabhängigen Art
und Weise zu dem Agonisten (ADP) kompetitiv ist. Beispiel 9: Mit Collagen induzierte Aggregation Collagen-Konzentration 10 μg/ml
| Amplitude
(Ohm) | Geschwindigkeit
(Ohm/Minute) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 16,75
+/– 0,96 | 9,75
+/– 0,98 |
Glycinbetain
2,5
mg/kg | 13,75
+/– 0,96 | 9,25
+/– 2,63 |
Glycinbetain
5
mg/kg | 5,5
+/– 1,29 | 4,5
+/– 1 |
Glycinbetain
10
mg/kg | 1,5
+/– 1,29 | 2
+/– 0,82 |
-
Der
Dosiseffekt des Betains zeigt seine Wirkung an der Glycoprotein
IIb IIIa-Stelle, wobei das Betain in einer dosisabhängigen Art
und Weise zu dem Agonisten (Collagen) kompetitiv ist. Beispiel 10: Aktivierte Koagulationszeit
(subkutane Verabreichung von Betain in verschiedenen Dosierungen)
| Aktivierte
Koagulations-Zeit
(Sekunden) | Provozierte
Hämorrhagie-Zeit (Sekunden) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 48 | 107 |
Glycinbetain
10
mg/kg | 128 | 105 |
Glycinbetain
30
mg/kg | 179 | 112 |
Glycinbetain
50
mg/kg | 215 | 115 |
-
Die
aktivierte Koagulations-Zeit ist bei einer Konzentration von 50
mg/kg viermal höher,
während
kein Effekt auf die PHT gezeigt wird. Beispiel 11: Aktivierte Koagulations-Zeit
nach subkutaner Verabreichung von Betain bei 10 mg/kg nach 24 Stunden
| Provozierte
Hämorrhagie
Sekunden | Aktivierte
Koagulations-Zeit
(Sekunden) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 105
+/– 5 | 48,4
+/– 8,9 |
Betain
10
mg/kg | 114
+/– 12,76 | 71+/– 3,51 |
Beispiel 12: Parameter für die Laser-induzierte
Thrombose 24 Stunden nach subkutaner Verabreichung von Betain mit
10 mg/kg
| Anzahl
der Laserbeschüsse | Anzahl
der Emboli | Embolus-Bildungszeit (Minuten) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 2,33
+/– 0,57 | 5,33
+/– 0,57 | 2
+/– 0 |
Betain
10 mg/kg | 3,33
+/– 0,57 | 1
+/– 0 | 0
+/– 0 |
Beispiel 13: Aktivierte Koagulations-Zeit
nach subkutaner Verabreichung von Betain mit 20 mg/kg nach 24 Stunden
| Provozierte
Hämorrhagie
Sekunden | Aktivierte
Koagulations-Zeit
(Sekunden) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 105
+/– 5 | 48,4
+/– 8,9 |
Betain
20 mg/kg | 110
+/– 13,22 | 154,86
+/– 11,01 |
Beispiel 14: Parameter für die Laser-induzierte
Thrombose 24 Stunden nach subkutaner Verabreichung von Betain mit
20 mg/kg
| Anzahl
der Laserbeschüsse | Anzahl
der Emboli | Embolus-Bildungszeit (Minuten) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 2,33
+/– 0,57 | 5,33
+/– 0,57 | 2
+/– 0 |
Betain
10 mg/kg | 3,33
+/– 0,57 | 0,66
+/– 0,57 | 0
+/– 0 |
Beispiel 15: Kinetik der aktivierten Koagulations-Zeit
nach oraler Verabreichung von Betain mit 50 mg/kg
| Induzierte
Hämorrhagie
Sekunden | Aktivierte
Koagulations-Zeit
(Sekunden) |
Kontrolle
NaCl 0,9% | 105 +/– 5 | 48,4
+/– 8,9 |
|
Betain
50
mg/kg – 1
Stunde | 120
+/– 5 | 96
+/– 11,27 |
Betain
50
mg/kg – 6
Stunden | 111
+/– 3,6 | 124,66
+/– 9,29 |
Betain
50
mg/kg – 24
Stunden | 113,33
+/– 18,92 | 64,66
+/– 7,37 |
Betain
50
mg/kg – 48
Stunden | 109
+/– 8,54 | 55,66
+/– 7,02 |
Beispiel 16: Kinetik der Parameter der
Laser-induzierten Thrombose und Effekt bei verschiedenen Zeitpunkten für die orale
Verabreichung von Betain mit 50 mg/kg
| Anzahl
der Laserbeschüsse | Anzahl
der Emboli | Embolus-Bildungszeit (Minuten) |
Kontrolle
NaCl
0,9% | 2,33
+/– 0,57 | 5,33
+/– 0,57 | 2
+/– 0 |
Betain
50 mg/kg
1 Stunde | 4+/– 0 | 0
+/– 0 | 0
+/– 0 |
Betain
50 mg/kg
6 Stunden | 3,66
+/– 0,57 | 2,33
+/– 0,57 | 1
+/– 0 |
Betain
50 mg/kg
24 Stunden | 2,33
+/– 0,57 | 2,33
+/– 0,57 | 1
+/– 0 |
Betain
50 mg/kg
48 Stunden | 2,33
+/– 0,57 | 4,33
+/– 0,57 | 2
+/– 0 |
-
Der
Dosiseffekt wird bei allen untersuchten Parametern bestätigt. Die
antagonistische Aktivität
an der Glycoprotein IIb IIIa-Stelle für die erfindungsgemäßen Verbindungen
trifft auch auf andere Agonisten zu, wie z. B. Serotonin, Arachidonsäure, Epinephrin,
Adrenalin, Ristocetin und Thrombin.
-
Beispiel 17: In vivo-Test am Menschen
-
Zwei
Freiwillige (mit einem Gewicht von etwa 70–75 kg), die als schwere Raucher
angesehen worden sind (sie rauchen mehr als 10 Zigaretten/Tag) haben
Kapseln (im Magen löslich),
die 5 g wasserfreies Glycinbetain/Tag enthalten, während 7
Tagen oral eingenommen.
-
Vor
der Verabreichung des Betains wurden durch ADP, durch Collagen,
durch Epinephrin, durch Adrenalin, durch Thrombin, durch Ristocetin
und durch Arachidonsäure
induzierte Aggregationen bestimmt. Nach einwöchiger Behandlung wurden dieselben
Plättchen-Aggregationen gemessen.
Aus diesen Tests erscheint es, dass alle induzierten Plättchen-Aggregationen für alle diese
endogenen Agonisten um mindestens 30% reduziert wurden.
-
Bessere
Ergebnisse werden erwartet, wenn eine orale Dosierungsform mit kontrollierter
Freisetzung, beispielsweise einer im Magen unlöslichen Form, jedoch einer
im Darm löslichen
Form, verwendet wird.
-
Beispiel 18: Anti-hämorrhagische Aktivität
-
Ratten
sind in diesem Test verwendet worden. Einige Ratten erhielten ein
aktives Mittel mit hämorrhagischer
Nebenwirkung, während
andere Ratten das aktive Mittel zusammen mit einer Dosis an Betain
erhielten.
-
Die
folgenden Produkte wurden den Ratten verabreicht, um zu bestimmen,
ob Glycinbetain einen anti-hämorrhagischen
Effekt besitzt:
100 mg Aspirin pro kg Körpergewicht
100 mg Aspirin
+ 50 mg Glycinbetain pro kg Körpergewicht
2
mg Heparin
2 mg Heparin + 50 mg Glycinbetain
2 mg Heparin
+ 10 mg Glycinbetain
2 mg Heparin +2 mg Glycinbetain
-
Wenn
eine Hämorrhagie
induziert wurde, wurde beobachtet, dass die Blutungszeit reduziert
wurde, wenn Glycinbetain verabreicht wurde. Das bedeutet daher,
dass Glycinbetain anti-hämorrhagische
Eigenschaften aufweist.
-
Beispiel 19
-
Tabletten
mit der folgenden Formulierung wurden hergestellt:
mg/Tablette |
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei 100 |
Lactose
Ph. Eur. 68,0 |
Ethylcellulose
(Surelease. RTM. 25% Feststoffe) 15 |
Gereinigtes
Wasser Ph. Eur. 13,3* |
Cetostearylalkohol
Ph. Eur. 42,00 |
(Dehydag-Wachs
0) |
Magnesiumstearat
Ph. Eur. 2,00 |
Gereinigter
Talk Ph. Eur. 3,00 |
230,00 |
- * Entfernt während der Verarbeitung
-
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei (100 mg), und Lactose (68
mg) wurden granuliert, in einen Wirbelschichtgranulator transferiert
und mit Ethylcellulose (15 mg) und Wasser besprüht. Das Granulat wurde dann
bei 60°C
getrocknet und durch ein 1 mm-Sieb passiert.
-
Zu
dem erwärmten
Betain-enthaltenden, vorzugsweise Glycinbetain-enthaltenden, Granulat
wurde geschmolzener Cetostearylalkohol (42 mg) gegeben und das Ganze
wurde innig vermischt. Man ließ das
Granulat abkühlen
und siebte es durch ein 1,6 mm-Sieb. Gereinigter Talk und Magnesiumstearat
wurden zugesetzt und mit dem Granulat vermischt. Das Granulat wurde
dann zu Tabletten verpresst.
-
Die
Tabletten wurden mit einer Filmbeschichtung überzogen, deren Formulierung
im Folgenden angegeben ist.
mg/Tablette |
Hydroxypropylmethylcellulose
0,770 |
Ph.
Eur. 15 cps (Methocel E15) |
Hydroxypropylmethylcellulose
3,87 |
(Ph.
Eur. 5 cps (Methocel E5) |
Opaspray
M-1-7111B (33% Feststoffe) 2,57 |
Polyethylenglykol
400 USNF 0,520 |
Gereinigter
Talk Ph. Eur. 0,270 |
Gereinigtes
Wasser Ph. Eur. 55,52* |
- * Während
der Verarbeitung entfernt
-
Beispiel 20
-
Tabletten
mit der folgenden Formulierung wurden hergestellt:
mg/Tablette |
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei 100,0 |
Lactose
Ph. Eur. 58,0 |
Ethylcellulose
USNF 15,0 |
(Ethocel
45 CP) |
Cetostearylalkohol
Ph. Eur. 52,0 |
(Dehydag-Wachs
O) |
Magnesiumstearat
Ph. Eur. 2,00 |
Gereinigter
Talk Ph. Eur. 3,00 |
-
Ein
Gemisch aus Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei (100 mg),
Lactose (58 mg) und Ethylcellulose (15 mg) wurde granuliert, während geschmolzener
Cetostearylalkohol (52 mg) zugesetzt wurde, und das Ganze wurde
innig vermischt. Das Granulat ließ man abkühlen und siebte es durch ein
1,6 mm-Sieb. Gereinigter Talk und Magnesiumstearat wurden zugesetzt
und mit dem Granulat vermischt. Das Granulat wurde dann zu Tabletten
verpresst, die mit einem Filmüberzug
beschichtet wurden, der die in Beispiel 24 angegebene Formulierung
besaß.
-
Beispiel 21
-
Filmbeschichtete
Tabletten wurden der in Beispiel 25 beschriebenen Vorgehensweise
folgend hergestellt, wobei die Tabletten die folgende Formulierung
aufwiesen:
mg/Tablette |
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei 100,00 |
Lactose
Ph. Eur. 70,50 |
Hydroxyethylcellulose
Ph. Eur. 12,50 |
Cetostearylalkohol
Ph. Eur. 42,00 |
Magnesiumstearat
Ph. Eur. 2,00 |
Gereinigter
Talk Ph. Eur. 3,00 |
-
In vitro-Auflösungsstudien
-
In
vitro-Auflösungsstudien
wurden an Tabletten durchgeführt,
die hergestellt wurden, wie es voranstehend beschrieben ist. Die
Ergebnisse sind in Tabelle I angegeben. TABELLE I
Gew: % FREIGESETZTES
BETAIN, VORZUGSWEISE FREIGESETZTES GLYCIN-BETAIN |
Zeit
(h) | Beispiel
19 | Beispiel
20 | Beispiel
21 |
1 | 39 | 35 | 43 |
2 | 52 | 47 | 60 |
4 | 67 | 62 | 84 |
8 | 82 | 78 | 97 |
12 | 90 | 86 | - |
- * Gemessen am Kern der Tablette
-
Beispiele 22 und 23
-
Partikel
mit den in nachstehender Tabelle II angegebenen Formulierungen wurden
durch die folgenden Stufen hergestellt:
- i.
Eingeben der Bestandteile (a) und (c) (Gesamtgewicht der Charge
0,7 kg) in den Behälter
eines Collette-Gral-Mischers (oder eines äquivalenten Mischers) mit einem
Fassungsvermögen
von 10 Litern, der mit einer Mischvorrichtung mit variabler Geschwindigkeit
und Granuliermessern ausgestattet ist;
- ii. Vermischen der Bestandteile bei etwa 150 bis 1000 UpM unter
Erwärmen,
bis der Inhalt des Behälters agglomeriert
ist;
- iii. Klassieren des agglomerierten Materials durch Passieren
durch einen Comil und/oder Jackson Crockatt, um Keime zur kontrollierten
Freisetzung zu erhalten.
- iv. Erwärmen
und Vermischen des klassierten Materials in dem Behälter eines
10 Liter Collette-Grals, bis einheitliches multipartikuläres Material
mit dem gewünschten
vorbestimmten Größenbereich
in einer Ausbeute von über
80% gebildet wird. Dies dauert ungefähr 5 Minuten.
- v. Entnehmen des multipartikulären Materials aus dem Mischer
und Sieben des Materials, um das multipartikuläre Material, gesammelt mit
0,5 mm bis 2 mm Sieböffnungen,
herauszutrennen.
-
TABELLE II
Beispiel | 22 | 23 |
(a)
Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei (Gew.-%) | 50 | 75 |
(b)
Hydriertes Pflanzenöl
(Gew.-%) | 50 | 25 |
-
Beispiel 24
-
Proben
der Partikel aus Beispiel 22 wurden mit Magnesiumstearat und gereinigtem
Talk unter Verwendung eines Y-Mischers oder eines Behältermischers
vermischt. Das erhaltene Gemisch wurde dann verpresst, wobei ein
Werkzeug mit entweder (1) 14 mal 6 mm, (2) 16 mal 7 mm oder (3)
18,6 mal 7,5 mm Kapselform an einer F3-Manesty-Tablettiermaschine
mit einem Stempel verwendet wurde, um Tabletten zu ergeben, um 200, 300
und 400 mg Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei, abzugeben.
Die Bestandteile pro Dosierungseinheit waren die Folgenden: TABELLE III
TABLETTE
MG/TABLETTE BESTANDTEIL | 24
(1) | 24
(2) | 24
(3) |
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei | 200 | 300 | 400 |
Hydriertes
Pflanzenöl | 200 | 300 | 400 |
Zwischensumme | 400 | 600 | 800 |
Gereinigter
Talk | 12,63 | 18,95 | 25,26 |
Magnesiumstearat | 8,42 | 12,63 | 16,84 |
-
Die
Tabletten wurden durch die Auflösung
unter Verwendung der Ph. Eur. Paddle-Methode 100 UpM, 0,1 N HCl beurteilt.
-
Zur
Beurteilung der nicht-verpressten Partikel wurde das Ph. Eur. Paddle
durch einen modifizierten Ph. Eur. Basket bzw. Korb ersetzt.
-
Die
Ergebnisse sind in nachstehender Tabelle IV gezeigt: TABELLE IV
STUNDEN
NACH BEGINN DES TESTS | |
| % FREIGESETZTES
BETAIN, VORZUGSWEISE GLYCINBETAIN, wasserfrei |
Partikel | Tablette
24 (1) | Tablette
24 (2) | Tablette
24 (3) |
1 | 54 | 16 | 15 | 15 |
2 | 68 | 23 | 20 | 21 |
3 | 76 | 28 | 25 | 25 |
4 | 82 | 32 | 28 | 28 |
6 | 89 | 40 | 35 | 35 |
8 | 93 | 46 | 41 | 40 |
10 | 96 | 50 | 45 | 45 |
12 | 98 | 55 | 49 | 49 |
16 | 100 | 63 | 57 | 56 |
20 | NR | 70 | 63 | NR |
-
Diese
Ergebnisse bestätigen
die Wirksamkeit des Tablettierens zur Verringerung der Freisetzungsrate.
-
BEISPIEL 25
-
Proben
der Partikel aus Beispiel 23 wurden dann unter Verwendung einer
zu Beispiel 21 ähnlichen Vorgehensweise
tablettiert und die Bestandteile pro Einheitsdosierung waren wie
folgt: TABELLE V
TABLETTE
MG/TABLETTE BESTANDTEIL | 25
(4) | 25
(5) | 25
(6) |
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei | 200 | 300 | 400 |
Hydriertes
Pflanzenöl | 66,7 | 100 | 133 |
Zwischensumme | 266,7 | 400 | 533 |
Gereinigter
Talk | 7,63 | 11,44 | 15,25 |
Magnesiumstearat | 5,16 | 7,63 | 10,17 |
-
Die
Tabletten und Proben nichtverpresster multipartikulärer Materialien
(jede Probe enthielt 400 mg Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei)
wurden durch die ebenfalls voranstehend beschriebene Auflösungsmethode
beurteilt. Die Ergebnisse sind in nachstehender Tabelle VI gezeigt. TABELLE VI
STUNDEN NACH BEGINN DES TESTS | Partikel | Tablette
25 (4) | Tablette
25 (5) | Tablette
25 (6) |
% FREIGESETZTES
BETAIN, VORZUGSWEISE GLYCINBETAIN, WASSERFREI |
1 | 77 | 43 | 40 | 42 |
2 | 92 | 64 | 55 | 56 |
3 | 98 | 75 | 65 | 66 |
4 | 100 | 83 | 72 | 73 |
6 | 102 | 94 | 83 | 84 |
8 | 102 | 100 | 91 | 91 |
10 | 102 | NR | 96 | 97 |
-
Diese
Ergebnisse zeigen, dass durch Erhöhen der Beladung mit hochgradig
wasserlöslichem
Betain, vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei (75% G/G in diesem
Beispiel im Vergleich zu 50% G/G in Beispiel 24) eine signifikant
höhere
Freisetzungsrate des aktiven Bestandteils erzielt werden kann.
-
BEISPIEL 26
-
Beispiel
22 wurde wiederholt, jedoch mit der folgenden Formulierung:
Betain,
vorzugsweise Glycinbetain, wasserfrei | 200
mg/Tablette |
Hydriertes
Pflanzenöl | 163,0
mg/Tablette |
-
Die
resultierenden multipartikulären
Materialien wurden wie in Beispiel 24 beschrieben mit Folgendem vermischt:
Gereinigter
Talk | 11,5
mg/Tablette |
Magnesiumstearat | 7,66
mg/Tablette |
-
Das
Gemisch wurde dann wie in Beispiel 24 beschrieben, jedoch unter
Verwendung von Eben/Eben-Stempeln mit 15 mm mal 6,5 mm normaler
konkaver Kapselform ("normal
concave capsule shaped p1ain/plain punches") verpresst.
-
Die
resultierenden Tabletten wurden dann durch die voranstehend beschriebene
Auflösungsmethode beurteilt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle V gezeigt.
STUNDEN
NACH BEGINN DES TESTS | %
FREIGESETZTES BETAIN, VORZUGSWEISE GLYCIN-BETAIN, wasserfrei |
1 | 20 |
2 | 27 |
3 | 32 |
4 | 37 |
6 | 44 |
8 | 50 |
10 | 55 |
12 | 60 |
16 | 67 |
20 | 73 |
24 | 77 |
-
Die
voranstehend angegebenen Beispiele sollen nicht ausschließlich sein.
Viele andere Variationen der vorliegenden Erfindung wären für den Fachmann
offensichtlich und sollen innerhalb des Umfangs der beigefügten Ansprüche liegen.
-
Der
Fachmann kann die Freisetzungsrate eines Pflasters so einstellen,
dass eine angepasste Betain-Konzentration im Blut über einen
Zeitraum von beispielsweise 6 Stunden, 12 Stunden, 24 Stunden usw.
auftritt.
-
Die
Pflasterstruktur kann so sein, wie sie in der
US 4,911,916 , der
US 4,917,676 , der
US 5,536,503 und der
US 5,486,362 offenbart ist. In diesen
Pflasterstrukturen wurde ein Betain der Formel (CH
3)
3N
+(CH
2)
nCOO
–, worin n für eine ganze
Zahl von 1 bis 5 steht, vorzugsweise Glycinbetain, oder ein pharmazeutisch
annehmbares Salz davon, ein Ester davon, ein Precursor davon und
Gemische davon als aktives Mittel anstelle des vorgeschlagenen aktiven
Mittels verwendet. Auf die Zeichnungen dieser Patentschrift (insbesondere
auf die
2 und
3 der
US 5,536,503 ) wird in Bezug
auf die Lehre der möglichen
Form und Struktur des Pflasters expressis verbis Bezug genommen.
-
Transdermale
Pflaster weisen eine Vielzahl von Vorteilen auf, was das Vermeiden
der verzögerten Wirkung
im Gastrointestinaltrakt, die leicht eingestellt werden kann, die
Selbst-Verabreichung
und die Fähigkeit
zum sofortigen Beenden der Dosierung beinhaltet. Der Begriff „transdermales
Pflaster" soll Pflaster
beinhalten, die dazu in der Lage sind, auf der Haut eines Individuums
befestigt zu werden und einen Teil oder eine Komponente aufweisen,
die dazu in der Lage ist, ein aktives Mittel (ein Betain der Formel
(CH3)3N+(CH2)nCOO–, worin
n für eine
ganze Zahl von 1 bis 5 steht, vorzugsweise Glycinbetain, oder ein
pharmazeutisch annehmbares Salz davon, ein Ester davon, ein Precursor
davon, Gemische davon) in einer kontrollierten verzögerten Freisetzungsart
abzugeben. Beispiele für
Arten von Pflaster, die in dieser Erfindung nützlich sind, beinhalten solche
mit einer Diffusionsschichtmatrix und/oder Pflaster vom Multikompartment-Typ.
Diese werden nachstehend für
Glycinbetain als aktives Mittel beschrieben. Es gibt viele transdermale
Pflaster, die dem Fachmann auf dem Gebiet bekannt sind und im Stand
der Technik gut beschrieben sind. Ein derartiges nützliches
Pflaster beinhaltet eine Diffusionsmatrixschicht, die einen netzartigen
makroporösen
Polymerschaum als Gerüst
zum Halten eines viskoelastischen Glycinbetainpolymer-Gemisches
verwendet. Das Pflaster ist beispielsweise ein mehrschichtiges (4
oder höher
schichtiges) laminiertes Verbundmaterial, das zum Anhaften an der
Haut angepasst ist. Die äußerste Schicht,
Stützschicht,
fungiert als das primäre
Strukturelement der Vorrichtung sowie als eine Schutzabdeckung,
um zu verhindern, dass das Glycinbetain aus der Vorrichtung über die äußerste Fläche austritt.
Die Stützschicht
ist vorzugsweise aus einer Lage oder einem Film eines nachgiebigen
Elastomers mit einer Dicke von etwa 10 bis etwa 75 μm hergestellt.
Beispiele derartiger Elastomere beinhalten Polyether-Blockamid-Copolymere,
Polyethylen-Methacrylat-Blockcopolymere, Polyurethane, Silikonelastomere und
dergleichen.
-
Die
Glycinbetain-enthaltende Matrixschicht fungiert als ein Reservoir
für Glycinbetain
(möglicherweise für einen
Verstärker)
und gegebenenfalls einen druckempfindlichen Klebstoff. Das Gerüst der Matrix
ist ein netzartiger makroporöser
Polymerschaum. Vorzugsweise ist das Netzwerk im Wesentlichen vollständig offenporig
(90% oder mehr). Der Porenwert des netzarti gen Schaums wird normalerweise
im Bereich von etwa 10 bis 40 Poren pro linearem Zentimeter liegen
und die Dichte (ungefüllt)
wird typischerweise im Bereich von etwa 0,01 bis 0,5 g/cm3 liegen. Geeignete Polymere, aus denen derartige
Schaumgerüste
hergestellt werden können,
beinhalten Polyurethane und Polyethylene.
-
Eine
druckempfindliche Klebstoffschicht bedeckt die freigelegte Fläche der
Matrixschicht und ein Freisetzungsliner bedeckt die druckempfindliche
Klebstoffschicht. Die druckempfindliche Klebstoffschicht ist eine Klebstoffzusammensetzung
mit medizinischer Reinheit und einer Dicke von normalerweise zwischen
etwa 25 und 100 μm.
Ein Beispiel eines derartigen Klebstoffs ist Polydimethylsiloxan
(Dow Coming 355-Klebstoff mit medizinischer Reinheit).
-
Die
Poren des Schaums sind vollständig
oder teilweise mit einem viskoelastischen hydrophoben Betain-permeablen
Polymer (und einem Verstärker,
wenn vorhanden) gefüllt.
Das Polymer fungiert als ein Träger für das Glycinbetain,
während
der Verstärker
die Löslichkeit
des Glycinbetains in dem Polymer und/oder die Absorption des Wirkstoffs
in der Haut kontrolliert. Das hydrophobe Polymer macht die Vorrichtung
wasserbeständig
und verhindert, dass flüssiges
Wasser durch die Vorrichtung absorbiert wird, wodurch seine Funktionalität und Tragbarkeit
erhöht
wird. Beispiele derartiger Polymere sind Polysiloxane (Silikonpolymere),
hydrophobe Polyacrylate, Polyurethane, Weichmacher-haltige Ethylen-Vinylacetat-Copolymere
und dergleichen. Ein Beispiel eines nützlichen Verstärkers ist
Azone. TM. Ein anderes Beispiel eines nützlichen Hautpermeationsverstärkers ist
Transcutol. Das Gemisch, das das Glycinbetain enthält, beinhaltet
gegebenenfalls ein Mittel gegen Juckreiz.
-
Vorrichtungen
der voranstehend erläuterten
Natur sind allgemein in der
U.S.
Patentschrift mit der Nr. 4,911,916 mit dem Titel „Diffusion
Matrix for Transdermal Drug Administration and Transdermal Drug
Delivery Devices Including Same",
erteilt am 27. März
1990, beschrieben. Derartige Pflaster können so konfiguriert sein,
dass sie ausreichend Glycinbetain enthalten, um etwa fünf Milligramm
bis 5 Gramm Glycinbetain, beispielsweise 100 bis 500 Milligramm
pro Tag, freizusetzen. Vorzugsweise sind derartige Pflaster so konfiguriert, dass
sie ausreichend Betain enthalten, um etwa fünf bis etwa 500 Milligramm
pro Tag über
sieben Tage hinweg freizusetzen, so dass ein einziges Pflaster für eine Woche
getragen werden kann.
-
Der
optimale Dosisbereich, d. h. der Bereich, der Dosen, mit denen der
Wirkstoff einen maximalen therapeutischen Effekt zeigt (und minimale
nachteilige Nebenwirkungen für
den anderen Wirkstoff oder das andere therapeutische Mittel der
Kombination zeigt, wenn das Pflaster in einer derartigen Kombination
verwendet wird), kann empirisch bestimmt werden. Das Pflaster oder
andere Abgabesystem ist so konfiguriert und formuliert, dass es
ausreichend Glycinbetain enthält,
um eine Dosis innerhalb des optimalen Dosisbereichs über den gewünschten
Zeitraum hinweg freizusetzen.
-
Ein
anderes nützliches
Pflaster ist ein 4-schichtiges Verbundmaterial, das mindestens zwei
getrennte Kompartments definiert. Ein Kompartment enthält Glycinbetain
und das andere Kompartment enthält
eine Abgabesubstanz, die, wenn sie mit Glycinbetain vermischt wird,
die Abgabe des Glycinbetains transdermal ermöglicht. Das Pflaster weist
eine Stützschicht
auf, die an eine die Rate kontrollierende Membran in einer derartigen
Art und Weise angeschlossen ist, dass zwei Kammern, nämlich eine
Betain-enthaltende Kammer und eine die Abgabesubstanz enthaltende
Kammer, erzeugt werden. Eine Klebstoffschicht bedeckt die die Rate kontrollierende
Membran und eine Freisetzungslage bedeckt die Klebstoffschicht.
-
Zur
Bildung der Vorrichtung wird ein silanisierter Polyester (oder ein
anderes geeignetes mit einem Freisetzungsmittel behandeltes Material)
mit einer Dicke von ungefähr
75 μm als
eine Freisetzungs-Lage 34 verwendet. Die Klebstoffschicht 32 wird
auf die Freisetzungs-Lage aufgegossen und kann beispielsweise Polyisobutylen
sein. Die Klebstoffschicht wird dann auf die die Rate kontrollierende
Membran 26 laminiert, die etwa 100 μm dick sein kann. Ethylen-Vinylacetat kann
für die
Kontrollmembran eingesetzt werden.
-
Als
Nächstes
werden die Materialien, die die Inhaltsstoffe der Betain-enthaltenden
Kammer und der die Abgabesubstanz enthaltenden Kammer werden, in
getrennte Flächen
auf der die Rate kontrollierenden Membran aufgegeben. Das Material
für die
Betain-enthaltende Kammer kann eine Betain-freie Base sein und das
Material für
die die Abgabesubstanz enthaltende Kammer kann eine alkoholische
oder wässrige-alkoholische
Lösung
oder Wasser sein.
-
Letztlich
wird eine geeignete Stützung
mit einer wärmeverschließbaren Beschichtung
auf einer Oberfläche über die
beiden Flächen
platziert, aus denen die beiden Kammern werden sollen, und um die
Vorrichtung herum und zwischen den beiden Flächen wärmeverschlossen, um die beiden
Kammern zu bilden. Der Wärmeverschluss
zwischen den beiden Kammern sollte weniger sicher als der Wärmeverschluss
um den Umfang herum sein, so dass der Verschloss zwischen den Kammern
unter einem durch den Verwender aufgewandten Druck selektiv bricht.
Auf diese Weise kann ein Druck auf eine der Kammern aufgebracht
werden, um den Verschluss zwischen den Kammern zu brechen, um dadurch
die Lösung
und das Betain zu mischen und das Glycinbetain (wasserfrei) zu lösen. Das
Betain liegt dann in einer Form vor, die dazu in der Lage ist, durch die
die Rate kontrollierende Membran zur Abgabe auf die Haut des Verwenders
zu treten. Wie in Bezug auf das in der ersten Ausführungsform
offenbarte Pflaster können
die Kammern Verstärker
oder ein Verzögerungsmittel
enthalten, um die Aufnahme des Betains über die Haut zu beeinträchtigen.
-
Bevorzugte
Formen des voranstehenden Pflaster sind in weiteren Details in der
U.S. Patentschrift Nr. 4,917,676 ,
erteilt am 17. April 1990, mit dem Titel „User-Activated Transdermal
Therapeutic System" gezeigt. Derartige
Pflaster sollten ausreichend Lobelin enthalten, um etwa fünf bis etwa
500 Milligramm Glycinbetain pro Tag (2 bis 10 mg/kg) freizusetzen,
und derartige Pflaster sind dazu geeignet, individuelle, tägliche Pflaster zu
liefern.
-
BEISPIEL 27
-
In
diesem Beispiel sind parenterale (insbesondere subkutane) Lösungen,
die Heparin und Glycinbetain enthalten, hergestellt worden.
-
Beispielsweise
wurden die Lösungen
von Heparinnatrium, vertrieben von CHOAY® (25000
IU/ml, wässrige
Lösung),
vertrieben von LEO® und vertrieben von ROCHE®,
mit Glycinbetain als ein Pulver oder als eine wässrige Lösung vermischt, um injizierbare
Lösungen
herzustellen, die 25000 IU, 5000 IU und 2500 IU Heparin (was 5 ml
injizierbaren Lösungen,
die 5 mg/ml Heparin und 100 mg/ml Glycinbetain enthalten, injizierbaren
Lösungen,
die 1 mg/ml Heparin und 20 mg/ml Glycinbetain enthalten, und inizierbaren
Lösungen,
die 0,5 mg/ml Heparin und 10 mg/ml Glycinbetain enthalten, entspricht),
enthalten.
-
BEISPIEL 28
-
In
diesem Beispiel sind orale Formulierungen, die Aspirin (Acetylsalicylsäure) und
Glycinbetain enthalten, hergestellt worden.
- A)
Acetylsalicylsäure
500 mg + 500 mg Betain + Exzipiens
- B) Acetylsalicylsäure
300 mg + 200 mg Betain + Exzipiens
- C) Acetylsalicylsäure
300 mg + 400 mg Betain + Exzipiens
-
A,
B und C wurden möglicherweise
mit einer im Darm löslichen
Schicht oder einer Schicht zur kontrollierten Freisetzung beschichtet,
z. B. eine Tablette oder ein Pellet. Oder A, B und C wurden möglicherweise
in eine Kapsel mit einer im Darm löslichen Schicht oder einer
Schicht zur kontrollierten Freisetzung eingebracht.
- D) ein Sirup, der Acetylsalicylsäure + Betain enthält.
-
BEISPIEL 29
-
Induzierte Hämorrhagie-Zeit IHT ("induced haemorraghic
time")
-
- (E. Dejana. Bleeding time in rats. Thrombosis Rech., 1982)
-
Männliche
Wistar-Ratten wurden für
diese Tests verwendet. Sie wogen zwischen 240 und 260 Gramm. Der
Effekt verschiedener Lösungen
(NaCl 0,9%, wasserfreies Betain 10 mg/kg, Heparinnatrium CHOAY® 5 mg/kg,
Kombination wasserfreies Betain 10 mg/kg + Heparin CHOAY® 5
mg/kg) auf die (IHT) oder induzierte Hämorrohagie-Zeit wurde getestet.
-
Der
Schwanz der anästhesierten
Ratte wird 5 Minuten lang in ein Wasserbad bei 37°C eingetaucht, um
eine Dilatation der peripheren Gefäße zu bewirken, die unter Entfernung
(6 bis 10 mm vom Ende des Schwanzes entfernt) geschnitten werden,
wobei der Zeitmesser gestartet wird. Die IHT ist definiert als die
Zeitdauer zwischen dem Schneiden des Schwanzendes und dem Ende der
Hämorrhagie
oder der Blutung. Das Ende der Hämorrhagie
ist definiert als der Zeitpunkt, an dem der letzte Tropfen But aus
dem Schwanz entfernt ist, und an dem kein anderer Tropfen im Verlauf
von 80 Sekunden gesehen wird. Die Substanzen wurden 60 Minuten vor
dem Schneiden des Schwanzes subkutan verabreicht. In dem Kombinationstest
wurden Betain (10 mg/kg) und Heparin (5 mg/kg) gleichzeitig verabreicht.
-
Die
Ergebnisse des Tests sind in Sekunden in der folgenden Tabelle angegeben.
| Referenz
NaCl 0,9% | Betain
10 mg/kg | Heparin
5 mg/kg | Kombination
Betain 10 mg + Heparin 5 mg |
Ratte
Nr. 1 | 110 | 162 | 767 | 218 |
Ratte
Nr. 2 | 110 | 173 | 680 | 176 |
Ratte
Nr. 3 | 156 | 194 | 734 | ** |
Ratte
Nr. 4 | 140 | 203 | 702 | 231 |
Ratte
Nr. 5 | 165 | 159 | ** | 229 |
Ratte
Nr. 6 | 180 | 142 | 663 | 155 |
Ratte
Nr. 7 | 106 | 123 | 735 | 278 |
Ratte
Nr. 8 | 156 | 197 | 567 | 192 |
Ratte
Nr. 9 | 97 | 166 | ** | 202 |
Ratte
Nr. 10 | * | 180 | 679 | 257 |
| n
= 9 | n
= 10 | n
= 8 | n
= 9 |
Mittelwert | 135,6 | 169,9 | 690,9 | 215,3 |
Standardabweichung | 30,3 | 25,2 | 61,1 | 38,7 |
- * Ratte nach der Anästhesie
tot
- ** nicht gemessen (keine Hämorrhagie
3 Minuten nach Abschneiden des Schwanzendes)
-
Dieser
Test zeigt klar, dass die kombinierte Verwendung von Heparin mit
Betain die hämorrhagische Nebenwirkung
aufgrund von Heparin drastisch verhindert und reduziert. Die gleichzeitige
Verabreichung von Betain mit Heparin reduzierte in einer statistisch
signifikanten Art und Weise das Volumen des Blutverlusts im Vergleich
zu der Gruppe, an die Heparin allein verabreicht wurde. Eine Reduktion
um mehr als das 3fache des Blutverlusts in der Kombinationsgruppe
im Vergleich zu der Gruppe, an die Heparin allein verabreicht wurde, wurde
bemerkt.