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Technisches
Gebiet
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Die
vorliegende Erfindung betrifft Cryptatverbindungen, die als Komplexbildner
nützlich
sind. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung funktionalisierte
Derivate bestimmter Cryptatverbindungen. Diese funktionalisierten
Derivate sind für
die Verwendung bei der radioaktiven Markierung und ähnliche
Anwendungen geeignet. Die vorliegende Erfindung betrifft auch die
Verwendung funktionalisierter Derivate von Cryptatverbindungen in
einem Verfahren zur Diagnose oder Therapie einer Erkrankung.
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Hintergrund
der Erfindung
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Radioaktiv
markierte Verbindungen sind nützlich
als Radiopharmazeutika, bildgebende Mittel oder dergleichen, welche
besonders nützlich
sind für
die Diagnose und Therapie von Erkrankungen wie Krebs, ohne auf diese
beschränkt
zu sein.
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Jackson
et al. (Nucl. Med. Biol., Bd. 18, Nr. 8, Seiten 855-858, 1991) offenbart
einen Chrom-Käfigkomplex
des Liganden (NH2)2Sar
als ein potenzielles MRI-Kontrastmittel
für diagnostische
Anwendungen. Der 57Co-Komplex von (NH2)2Sar ist ebenfalls offenbart. Die WO 90/12050
offenbart macrocyclische Liganden, wie DOTA, konjugiert an Zielmoleküle, und
Metallkomplexe davon für
die Verwendung in der diagnostischen Bildgebung und Radiotherapie.
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Bekannte
radioaktiv markierte Verbindungen sind mit dem Nachteil behaftet,
dass bei der Verwendung das radioaktiv markierte Nuklid sich von
der Trägerverbindung
loslösen
kann, was zu Problemen und möglichen
Komplikationen in diagnostischen und therapeutischen Anwendungen
führt.
Weiterhin tendieren die bekannten Radiopharmazeutika dazu, in ihrer
Bioverteilung über
einen Patienten bzw. Subjekt nichtspezifisch zu sein.
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Die
vorliegende Erfindung versucht die angeführten Nachteile des Stands
der Technik zu verbessern durch Bereitstellen von Verbindungen,
welche noch schneller radioaktiv markiert werden können, insbesondere
einen lokalisierten bzw. eingegrenzten Bereich von Gewebe oder ein
Organ in einem Patienten spezifisch targetieren, und welche stabiler
sind als die Verbindungen des Stands der Technik und weniger toxisch
sind. Weiterhin sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung
typischerweise für
die Verwendung in pharmazeutischen Formulierungen geeignet. Es ist
ein weiteres typisches Ziel der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren
zur Diagnose oder Therapie einer Erkrankung bei einem Patienten
bereitzustellen.
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Zusammenfassung
der Erfindung
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In Übereinstimmung
mit einer ersten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung, welche radioaktiv
markiert werden kann, mit der allgemeinen Formel (I) bereitgestellt:
worin n eine ganze Zahl von
2 bis 4 darstellt,
worin jeder R
4 und
R
5 unabhängig
aus -H, CH
3, COOH, NO
2,
CH
2OH, H
2PO
4, HSO
3, CN, C(=O)NH
2 und CHO ausgewählt ist;
X und Y gleich
oder verschieden sind und aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus C-R,
N, P und C-Z, worin R ausgewählt
ist aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxyl, Nitro, Nitroso, Amino, gegebenenfalls
substituiertem Alkyl, gegebenenfalls substituiertem Aryl, gegebenenfalls
substituiertem Aralkyl, Cyano, -COOR', COCOOR', NH-COCH
2Br,
-NH-CO-CH=CH-COOR',
worin R' ein Wasserstoffatom
oder eine Alkylgruppe ist, worin mindestens eines von X und Y C-Z
ist;
W aus der Gruppe, bestehend aus NH, S und O ausgewählt ist;
und
Z eine funktionalisierte Gruppe ist, die die Verbindung
der Formel (I) an eine molekulare Erkennungseinheit, ausgewählt aus
-NH-(CH
2)
p-Ar-NH
2 und -NH-(CH
2)
p-Ar-NCS, binden
kann,
worin p eine ganze Zahl von 1 bis 4 ist und Ar gegebenenfalls
substituiertes Phenyl ist;
worin die optionalen Substituenten
ausgewahlt sind aus der Gruppe, bestehend aus Amino, Halogen, Hydroxy, Mercapto,
Nitro, Cyano, Thiocyano, Alkyl, Alkoxy, Halogenalkyl, Acyl, Acylamino,
Acyloxy, Carboxyl, Alkoxycarboxyl, Carbamoyl, Pyridoylamino, Carboxyalkylcarbamoyl,
N-Carboxylalkylcarbamoyl, Sulfo, Sulfamoyl, mono- oder di-alkyliertem
oder phenyliertem Sulfamoyl, gegebenenfalls mit einem oder mehreren
Alkylsubstituenten, Alkylsulfonyl, Alkoxysulfonyl, gegebenenfalls
Hydroxy-enthaltendem Phenylsulfonyl oder Phenoxysulfonyl;
oder
ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon.
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Es
versteht sich, dass innerhalb dieser Patentbeschreibung der Ausdruck "molekulare Erkennungseinheit" ein(e) Antikörper, Protein,
Peptid, Kohlenhydrat, Nukleinsäure,
Oligonukleotid, Oligosaccharid, Liposom oder ein anderes Molekül, welches
einen Teil eines spezifischen Bindungspaares bilden kann, einschließt.
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Typischerweise
ist in einer Verbindung der Formel (I) jedes R4 und
R5 H; ist W NH und n 2 bis 4, noch üblicher
2 oder 3, immer noch typischer 2.
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Wie
hierin verwendet, bezieht sich der Ausdruck "Aryl" auf
einzelne, polynukleare, konjugierte und verschmolzene Reste von
aromatischen Kohlenwasserstoffen oder aromatischen heterocyclischen
Ringsystemen. Beispiele für
solche Gruppen sind Phenyl, Biphenyl, Terphenyl, Quaterphenyl, Naphthyl,
Tetrahydronaphthyl, Anthracenyl, Dihydroanthracenyl, Benzanthracenyl,
Dibenzanthracenyl, Phenanthracenyl, Fluorenyl, Pyrenyl, Indenyl,
Azulenyl, Chrysenyl, Pyridyl, 4-Phenylpyridyl, 3-Phenylpyridyl,
Thienyl, Furyl, Pyrryl, Indolyl, Pyridazinyl, Pyrazolyl, Pyrazinyl,
Thiazolyl, Pyrimidinyl, Chinolyl, Isochinolyl, Benzofuranyl, Benzothienyl,
Purinyl, Chinazolinyl, Phenazinyl, Acridinyl, Benzoxazolyl, Benzothiazolyl,
Heteroaryl, Pyridin und Het-CH=CH2- und dergleichen.
Typischerweise ist Aryl Phenyl, Pyridyl, Naphthyl, Anthracenyl oder
dergleichen, und Heteroaryl ist typischerweise Pyridin und Het-CH=CH2. Noch typischer ist Aryl Phenyl.
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Wie
hierin verwendet, bezieht sich der Ausdruck "Aralkyl" auf Alkylgruppen, die mit einer oder
mehreren Arylgruppen substituiert sind, wie im Voraus definiert.
Beispiele für
solche Gruppen sind Benzyl, 2-Phenylethyl und 1-Phenylethyl.
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Wie
hierin verwendet, bedeutet der Ausdruck "gegebenenfalls substituiert", dass der Rest,
welcher als gegebenenfalls substituiert beschrieben ist, einen oder
mehrere Substituenten tragen kann, die aus Amino, Halogen, Hydroxy,
Mercapto, Nitro, Cyano, Thiocyano, Alkyl, Alkoxy, Halogenalkyl,
Acyl, Acylamino, Acyloxy, Carboxyl, Alkoxycarboxyl, Carbamoyl, Pyridoylamino,
Carboxyalkyl-carbamoyl, N-Carboxyalkylcarbamoyl, Sulfo, Sulfamoyl,
mono- oder dialkyliertes oder phenyliertes Sulfamoyl, welches einen
oder mehrere Alkylsubstituenten tragen kann, Alkylsulfonyl, Alkoxysulfonyl,
gegebenenfalls hydroxyhaltiges Phenylsulfonyl oder Phenoxysulfonyl
gewählt
sind.
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In Übereinstimmung
mit einer zweiten Ausführung
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine Verbindung der Formel
(I) bereitgestellt, wie in der ersten Ausführungsform der vorliegenden
Erfindung beschrieben, welche mit einem Metallion komplexiert ist.
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Das
Metallion wird typischerweise aus 64Cu, 67Cu, 99mTc, Ga,
In, Co, Re, Fe, Au, Ag, Rh, Pt, Bi, Cr, W, Ni, V, Pb, Ir, Zn, Cd,
Mn, Ru, Pd, Hg, Ti, und der Lanthanoidgruppe der Elemente im Periodensystem,
wie Sm, Ho, Gd, Tb, Sc, Y, und den Aktiniden gewählt.
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Das
Metallion ist ferner typischerweise ein Radionuklid, das aus der
Gruppe von 64Cu, 67Cu, 99mTc und Radionukliden von In(III), Ga(III),
Fe(III), Cu(II), Ti(IV) und anderen Radionukliden der Lanthanoide,
Re, Sm, Ho und Y gewählt
wird.
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In Übereinstimmung
mit einer dritten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine pharmazeutische Formulierung
bereitgestellt, welche eine Verbindung der Formel (I), wie sie in
der ersten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben ist, oder ein Metallkomplex,
einen radioaktiv markierten Komplex oder ein pharmzeutisch akzeptables
Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst.
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In Übereinstimmung
mit einer vierten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine diagnostische Formulierung
bereitgestellt, die eine Verbindung der Formel (I), wie in der ersten
Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben, oder ein Metallkomplex,
radioaktiv markierten Komplex oder ein pharmazeutisch akzeptables
Salz davon und ein Reduktionsmittel in einem pharmazeutisch akzeptablen
Träger
umfasst.
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In Übereinstimmung
mit einer fünften
Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine Verwendung einer
Verbindung der Formel (I) oder eines Metallkomplexes, radioaktiv
markierten Komplexes oder pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon
bei der Herstellung eines Medikamentes zur Diagnose oder Therapie
einer Erkrankung in einem Subjekt bereitgestellt.
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In Übereinstimmung
mit einer sechsten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine Verbindung der Formel
(I), wie in der ersten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung, oder ein Metallkomplex, radioaktiv markierten
Komplex oder pharmazeutisch akzeptables Salz davon bereitgestellt,
wenn in der Diagnose oder Therapie eine Erkrankung in einem Subjekt
verwendet.
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In Übereinstimmung
mit einer siebten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird ebenfalls eine Konjugatverbindung
bereitgestellt, die mindestens eine Verbindung der Formel (I), wie
in der ersten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben, oder ein Metallkomplex,
radioaktiv markierten Komplex oder ein pharmazeutisch akzeptables
Salz davon, gebunden an mindestens einer molekularen Erkennungseinheit,
umfassend ein(en) Antikörper,
Protein, Peptid, Kohlenhydrat, Oligonukleotid, Oligosaccharid, Liposom oder
dergleichen, umfasst.
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In Übereinstimmung
mit einer achten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Verwendung einer Konjugatverbindung,
wie sie in der siebten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben ist, bei der Herstellung
eines Medikamentes zur Diagnose oder Therapie einer Erkrankung in
einem Subjekt beschrieben.
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In Übereinstimmung
mit einer neunten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Konjugatverbindung bereitgestellt,
wie in der siebten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben, wenn sie in der Diagnose
oder Therapie einer Erkrankung in einem Subjekt verwendet wird.
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In Übereinstimmung
mit einer zehnten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Verwendung einer Verbindung
der Formel (I) oder eines Metallkomplexes, radioaktiv markierten
Komplexes, einer Konjugatverbindung oder eines pharmazeutisch akzeptablen
Salzes davon bei der Herstellung eines Medikamentes zur Bildgebung
in einem Subjekt bereitgestellt.
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In Übereinstimmung
mit einer elften Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I) oder
eines Metallkomplexes, eines radioaktiv markierten Komplexes, einer
Konjugatverbindung oder eines pharmazeutischen akzeptablen Salzes
davon bereitgestellt, wenn bei der Bildgebung in einem Subjekt verwendet.
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In Übereinstimmung
mit einer zwölften
Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I) mit
der folgenden Struktur bereitgestellt:
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Genaue Beschreibung der
Erfindung
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Die
Verbindungen der Formel (I) umfassen jene Verbindungen, in denen
n für eine
ganze Zahl von 2 bis 4, typischerweise von 2 oder 3, noch typischerweise
von 2 steht. Mindestens eines von X und Y ist eine C-Z-Gruppe, wobei Z wie
vorausgehend definiert ist und p 1 bis 4, noch typischer 1 bis 2
und sogar noch typischer 1 ist. Für gewöhnlich ist eines von X eine
C-Z-Gruppe, und das andere ist eine Gruppe C-R, wobei R wie im Voraus
definiert ist.
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Ein
Beispiel einer Verbindung der Formel (I) ist:
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Die
Z-Gruppe in einer Verbindung der Formel (I) kann einen Punkt der
Anheftung einer Verbindung der Formel (I) an einer molekularen Erkennungseinheit
bereitstellen.
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Die
molekulare Erkennungseinheit ist typischerweise ein Antikörper, Protein,
Peptid, Oligonukleotid, Oligosaccharid. Insbesondere ist die molekulare
Erkennungseinheit typischerweise ein Antikörper und noch typischerweise
ein monoklonaler Antikörper.
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Somit
stellen Verbindungen der Formel (I) ein Verfahren der Anheftung
von Radionuklidmetallionen wie In(III), Ga(III), Fe(III), Tc(IV)
oder Tc(V), Re(VII), Cu(II), Ti(IV), anderen Radionukliden der Lanthanoide, Rhenium,
Samarium, Holmium, Yttrium und dergleichen an molekularen Erkennungseinheiten,
wie monoklonalen Antikörpern,
rezeptorspezifischen Proteinen, Peptiden oder Oligonukleotiden für die In-vivo-Bildgebung und
-therapie bereit.
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Die
Verbindungen der allgemeinen Formel (I) werden üblicherweise durch die Anheftung
einer funktionellen Verknüpfungsgruppe
an ein geeignetes Kryptat hergestellt. Verfahren der Synthese von
Kryptaten, die als Vorläufer
für die
Verbindungen der Formel (I), in welchen W NH ist, brauchbar sind,
sind in dem Patent der Vereinigten Staaten Nr. 4 497 737 im Namen
von Sargeson et al., wobei die Offenbarung davon hierin durch den
Bezug darauf einbezogen ist, beschrieben. Andere Kryptate, in denen
W S oder O ist, können
durch analoge Verfahren hergestellt werden. Sargeson et al. beschreiben
die Synthese von "Kryptat"-Metallkäfig-Verbindungen durch
die Kondensation eines Tris-(diamin)-Metallionenkomplexes,
wie in der Spalte 3, Zeilen 30 bis 35 beschrieben, mit Formaldehyd
und einem geeigneten Nukleophil. Um die Verbindungen der Formel
(I) zu erhalten, wird ein geeignetes Nukleophil gewählt, um
die gewünschte
funktionalisierte Verknüpfungsgruppe
Z, wie sie in der Formel (I) definiert ist, zu erhalten. Insbesondere
wird Bezug genommen auf die Spalte 4, Zeilen 17 bis 27, des US-Patentes Nr. 4 497
737. Alternativ kann eine funktionalisierte Verknüpfungsgruppe
Z an eine funktionelle Gruppe eines Kryptats gebunden werden, hergestellt
durch die Verfahren, welche von Sargeson et al. gelehrt werden (siehe
beispielsweise Beispiel 9 in Spalte 9, Zeilen 65, bis Spalte 12,
Zeile 10 von Sargeson et al.), und zwar durch standardmäßige Synthesetechniken.
Sofern erforderlich, kann eine Schutzgruppe in die Kryptatstruktur
eingeführt
werden, um die latente Funktionalität für die gewünschte funktionalisierte Verknüpfungsgruppe
Z, wie in der Formel (I) definiert, während der Synthese des gewünschten
Kryptat-Vorläufers zu
schützen.
Geeignete Schutzgruppen sind zum Beispiel in Greene, T. W., Protective
Groups in Organic Synthesis (John Wiley & Sons, New York, 1981) und McOmie,
J. F. W., Protective Groups in Organic Chemistry (Plenum Press,
London, 1973) beschrieben.
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Zum
Beispiel werden Verbindungen der Formel (I), worin die Z-Gruppe
eine mono- oder di-substituierte Aminogruppe umfasst, und worin
der Substituent gegebenenfalls substituiertes Alkyl ist, leicht
durch die Behandlung der Aminoverbindung mit dem geeigneten Halogen-substituierten
Alkyl hergestellt. Typischerweise kann die Verbindung der Formel
(I), worin Z -NH-CH2-CH2-NH2 ist, durch die Behandlung einer Verbindung
der Formel (I), worin R NH2 ist, mit BrCH2CH2NH2 in
Gegenwart von NaHCO3 oder dergleichen mit
geeigneter Schützung
hergestellt werden.
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Verbindungen
der Formel (I), worin R1 -NCS ist, können hergestellt
werden durch die Umsetzung der Aminoverbindung mit Thiophosgen (siehe
WO 87/12631), Kozak et al., Cancer Res. 49, 2 639 (1989). Substituierte
Säurehalogenidverbindungen
werden hergestellt, indem eine Verbindung der Formel (I), worin
R NH2 ist, mit BrCH2COBr
bei 4 °C
gemäß der Prozedur
von C. J. Mathias et al., Bioconjugate Chem., 1, 204 (1990), umgesetzt
wird. Verbindungen mit einem elektrophilen Rest können ebenfalls
mittels Verfahren, die im Fachbereich bekannt sind, hergestellt
werden, wie in ACC Chem. Res. 17, 202-209 (1984). Verbindungen mit
aktiven Estern (CH)p-C(O)-X können durch
die Prozeduren von Bodanszky, M., The Peptide. Analysis Synthesis Biology,
Hrsg. E. Gross and J. Meienhofer, Bd. 1, S. 105-196, Academic Press,
Inc., Orlando, FL. (1979) und Bodanszky, M., Principles of Peptide
Synthesis, S. 9-58, Springer Verlag, New York (1984) hergestellt
werden. Andere Verbindungen der Formel (I) können aus solchen Verbindungen
mittels Standardprozeduren, wie in Modern Synthetic Reactions, H
O House, 2. Ausgabe, Benjamin, Inc. Philippines, 1972 beschrieben,
hergestellt werden.
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In
einer typischen Ausführungsform
können
Verbindungen der Formel (I), in welchen X oder Y C-Z ist, wobei
die Gruppe Z eine Gruppe NH(CH2)pR1 oder NH(CH2)pArR1 ist, durch
eine Schiff'sche
Basen-Kondensationsreaktion einer Verbindung der Formel (I) (oder
eines Metallkomplexes davon), worin X oder Y NH2 ist, mit
einem Aldehyd der Formel HC(O)(CH2)p-1R1 oder HC(O) (CH2)p-1ArR1 hergestellt
werden. (Noch typischer wird die Schiff'sche Basen-Kondensationsreaktion am
meisten geeignet zwischen einem Kupferkomplex von Verbindungen der
Formel (I), worin X oder Y NH2 ist, mit
einem Aldehyd der Formel HC(O)(CH2)p-1R1 oder HC(O)(CH2)p-1R1 durchgeführt.) In
einer besonderen Form dieser Ausführungsform wird eine Verbindung
der Formel (I) durch die Reaktion von Nitrobenzaldehyd mit dem Kupferkomplex
eines Aminokryptats, wie von Sargeson et al. beschrieben, erhalten.
Die Reaktion wird typischerweise in einer Inertgasatmosphäre und in
Gegenwart von Lösungsmittel
und Verdünnungsmitteln,
die üblicherweise
gegenüber
den Reaktanten inert sind, durchgeführt. Geeignete Lösungsmittel
umfassen aliphatische, aromatische oder halogenierte Kohlenwasserstoffe,
wie Benzol, Toluol, Xylole; Chlorbenzol, Chloroform, Methylenchlorid,
Ethylenchlorid; Ether und ätherische
Verbindungen wie Dialkylether, Ethylenglykolmono- oder -dialkylether,
THF, Dioxan; Alkanole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol; Ketone wie Aceton,
Methylethylketon; Nitrile wie Acetonitril oder 2-Methoxypropionitril; N-N-dialkylierte
Amide wie Dimethylformamid; Dimethylsulfoxid, Tetramethylharnstoff;
sowie Mischungen von diesen Lösungsmitteln
miteinander. Wenn das Amin oder ein Salz davon in Wasser löslich ist, dann
kann das Reaktionsmedium Wasser bei niedriger Temperatur sein. Die
Verbindungen der Formel (I) können
zu pharmazeutisch akzeptablen Salzen mittels anerkannter Prozeduren
umgewandelt werden.
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Typischerweise
werden für
die medizinische Verwendung Salze der Verbindungen der vorliegenden Erfindung
pharmazeutisch akzeptable Salze sein; obgleich andere Salze bei
der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung oder des pharmazeutisch
akzeptablen Salzes davon verwendet werden können. Mit pharmazeutisch akzeptables
Salz sind jene Salze gemeint, welche innerhalb des Umfangs einer
vernünftigen medizinischen
Beurteilung für
die Verwendung bezüglich
des Kontaktes mit Geweben von Menschen und niederen Tieren ohne
unangemessene Toxizität,
Reizung, allergischen Reaktionen und dergleichen geeignet sind und
im Einklang stehen mit einem vernünftigen Nutzen/Risiko-Verhältnis. Pharmazeutisch
akzeptable Salze sind im Fachbereich allgemein bekannt.
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Geeignete
pharmazeutisch akzeptable Salze der Verbindungen der vorliegenden
Erfindung können hergestellt
werden durch Mischen einer pharmazeutisch akzeptablen Säure, wie
Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Benzoesäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Oxalsäure, Kohlensäure, Weinsäure oder
Zitronensäure.
Geeignete pharmazeutisch akzeptable Salze der Verbindungen der vorliegenden
Erfindung schließen
deshalb Säureadditionssalze
ein.
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Zum
Beispiel beschreiben S. M. Berge et al. pharmazeutisch akzeptable
Salze detailliert in J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1-19.
Die Salze können
in situ während
der Entisolierung und Reinigung der Verbindungen der Erfindung hergestellt
werden, oder separat durch die Umsetzung der freien Basenfunktion mit
einer geeigneten organischen Säure.
Repräsentative
Säureadditionssalze
schließen
Acetat-, Adipat-, Alginat-, Ascorbat-, Asparat-, Benzolsulfonat-,
Benzoat-, Bisulfat-, Borat-, Butyrat-, Camphorat-, Camphersulfonat-,
Citrat-, Cyclopentanpropionat-, Digluconat-, Dodecylsulfat-, Ethansulfonat-,
Fumarat-, Glucoheptonat-, Glycerophosphat-, Hemisulfat-, Heptonat-,
Hexanoat-, Hydrobromid-, Hydrochlorid-, Hydroiodid-, 2-Hydroxy-ethansulfonat-,
Lactobionat-, Lactat-, Laurat-, Laurylsulfat-, Malat-, Maleat-,
Malonat-, Methansulfonat-, 2-Naphthalinsulfonat-, Nicotinat-, Nitrat-,
Oleat-, Oxalat-, Palmitat-, Pamoat-, Pectinat-, Persulfat-, 3-Phenylpropionat-,
Phosphat-, Picrat-, Pivalat-, Propionat-, Stearat-, Succinat-, Sulfat-,
Tartrat-, Thiocyanat-, Toluolsulfonat-, Undecanoat-, Valeratsalze
und dergleichen ein. Repräsentative
Alkali- oder Erdalkalimetallsalze schließen Natrium-, Lithium-, Kalium-,
Calcium-, Magnesium- und dergleichen, sowie nichttoxische Ammonium-, quaternäre Ammonium-
und Aminkationen, einschließlich,
jedoch nicht beschränkt
auf Ammonium, Tetramethylammonium, Tetraethylammonium, Methylamin,
Dimethylamin, Trimethylamin, Triethylamin, Ethylamin und dergleichen
ein.
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Die
Radiomarkierung von Verbindungen der Formel (I) und Salzen davon
kann durch die Verwendung von Prozeduren, die im Fachbereich anerkannt
sind, bewerkstelligt werden. Zum Beispiel kann die Radiomarkierung
des Chelators mit 67Cu erreicht werden,
indem Kupfer in einer wässrigen
Acetatlösung
zu einer Verbindung der Formel (I) in einer wässrigen Lösung gegeben wird und bei Raumtemperatur
inkubiert wird.
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Alternativ
kann die Radiomarkierung einer Verbindung der Formel (I) zum Beispiel
mit Technetium erreicht werden, indem ein Reduktionsmittel wie Zinn(II)-Salze, üblicherweise
Zinn(II)-chlorid, zu einer wässrigen Lösung einer
Verbindung der Formel (I) gegeben wird, gefolgt von der Reaktion
mit einer wässrigen
Natriumpertechnetatlösung
(Na99mTcO4). Die
Reihenfolge des Mischens dieser drei Komponenten ist angenommenermaßen nicht
kritisch. Gleichwohl wird üblicherweise
das Reduktionsmittel zu dem Chelator der Formel (I) hinzugesetzt.
Andere geeignete Reduktionsmittel umfassen Alkalimetalldithionite
wie Natriumdithionit, Natriumborhydrid, Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, andere
lösliche
Dithionite wie Kaliumdithionit oder Ammoniumdithionit, ein lösliches
Bisulfit oder Metabisulfit wie Natriumbisulfit, Kaliumbisulfit,
Lithiumbisulfit, Ammoniumbisulfit, Natriummetabisulfit, Kaliummetabisulfit,
Lithiummetabisulfit oder Ammoniummetabisulfit, oder eine wässrige Lösung von
Schwefeldioxid.
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Technetium-99m
in Form einer wässrigen
Lösung
von Natriumpertechnetat ist leicht von im Handel verfügbaren Molybdän-99/Technetium-99m-Generatoren
erhältlich,
oder alternativ kann instantes 99mTc verwendet
werden. Cu-64 ist im Handel von Australian Nuclear Science & Technology Organisation
verfügbar,
und 67Cu von dem US-Department of Energy,
Brookhaven, USA.
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Die
Konjugatverbindungen der siebten Ausführungsform dieser Erfindung
können
durch die Reaktion eines radioaktiv markierten Metallkomplexes einer
Verbindung der Formel (I) zusammen mit einer molekularen Erkennungseinheit
gebildet werden. Die Radionuklide, welche für das Komplexieren mit den
Verbindungen der Formel (I) brauchbar sind, umfassen typischerweise
Metallionen, welche mindestens zwei Oxidationszustände, am üblichsten
einen Oxidationszustand von +2 oder +3, aufweisen. In einer typischen
Ausführungsform wird
der radioaktiv markierte Metallkomplex aus 64Cu, 67Cu und 99mTc, Sm,
Ho, Re, Sc, Cu, Pd, Rh und Y gewählt.
Die üblichsten
Metallionen umfassen 64Cu, 67Cu, 99mTc. Diese radioaktiv markierten Metallkomplexe
werden dann mit einer molekularen Erkennungseinheit umgesetzt. Die
so gebildete radioaktiv markierte molekulare Erkennungseinheit ist
für diagnostische,
therapeutische und Radiobildgebungsanwendungen brauchbar.
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Alternativ
kann ein Konjugat einer Verbindung der Formel (I) zuerst hergestellt
werden, und dann kann sie radioaktiv markiert werden.
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Somit
kann die Radiomarkierung von molekularen Erkennungseinheiten, wie
proteinartigen Materialien, unter Verwendung der Verbindungen der
Formel (I) auf zwei Arten durchgeführt werden, nämlich:
- (a) Vormarkierung einer Verbindung der Formel
(I) mit einem geeigneten Radionuklid, gefolgt von der Konjugation
der resultierenden radiokomplexierten Verbindung an proteinartigem
oder anderem Material, oder
- (b) Konjugieren der Verbindung der Formel (I) an proteinartigem
oder anderem Material für
eine anschließende
Radiomarkierung.
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Die
Bildung einer Konjugatverbindung der Formel (I) wird für gewöhnlich durch
die Reaktion der funktionalisierten Verknüpfungsgruppe mit einer Thiol-,
Amino-, Carboxyl-, Hydroxyl-, Aldehyd-, aromatischen oder heteroaromatischen
Gruppe, die in der molekularen Erkennungseinheit vorliegt, erreicht.
Zum Beispiel kann eine Amino- oder Hydroxygruppe der funktionalisierten
Verknüpfungsgruppe
mit einer freien Carboxylgruppe der molekularen Erkennungseinheit
oder vice versa umgesetzt werden. Geeigneterweise kann ein Kupplungsmittel
wie Carbodiimid zur Anwendung kommen, um die Kupplungsreaktion zu
erleichtern.
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Die
Konjugatverbindungen gemäß der siebten
Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung können mehr
als ein Molekül
einer Verbindung der Formel (I) zu einer beliebigen molekularen
Erkennungseinheit enthalten. Die Metallkomplexierung und Radiomarkierung
von Verbindungen der Formel (I) und pharmazeutisch akzeptablen Salzen
davon kann bewerkstelligt werden, indem im Fachbereich anerkannte
Prozeduren zur Anwendung kommen. Zum Beispiel kann die Radiomarkierung
der Konjugatverbindungen mit 64Cu erreicht
werden, indem eine wässrige
Acetatlösung
von 64Cu der Konjugatverbindung in einer
wässrigen
Lösung
hinzugesetzt wird und fünf
Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert wird. Eine Zusammensetzung,
die ein nicht komplexiertes Konjugat in Übereinstimmung mit der Erfindung
umfasst, kann ebenfalls Radiochemikern, Technikern, Radiopharmazeuten,
Doktoren und dergleichen in Form eines Kits zur Radiomarkierung
direkt vor der Verwendung gegeben werden.
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In
einer typischen Form dieser Erfindung umfasst das Kit einen ersten
Behälter,
welcher ein Radiomarkierungsmetallion, für gewöhnlich in Lösung, enthält, und einen zweiten Behälter, welcher
eine Konjugatverbindung enthält,
wie in der achten Ausführungsform
der vorliegenden Erfindung beschrieben. Das Kit involviert dann
beim Gebrauch das Mischen der Inhalte des ersten und zweiten Behälters, um
die radioaktiv markierte Konjugatverbindung zu erhalten.
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Typischerweise
sind die Verbindungen der Formel (I) oder des Metallkomplexes, radioaktiv
markierten Komplexes oder pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon
für die
Markierung von molekularen Erkennungseinheiten zur Verwendung bei
Verfahren der Diagnose und Therapie einer Erkrankung brauchbar.
Insbesondere sind die typischen radioaktiv markierten molekularen
Erkennungseinheiten monoklonale Antikörper und Fragmente davon, Peptide,
Oligonukleotide, Oligosaccharide oder Liposom oder ein Teil eines
spezifischen Bindungspaares.
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Die
Anwendungen von radioaktiv markierten molekularen Erkennungseinheiten
umfassen die Diagnose, Bildgebung und Therapie einer Erkrankung
wie Krebs. Üblicherweise
weisen die Verbindungen der Formel (I) und ihre Metallkomplexe und/oder
Salze davon einen diagnostischen Nutzen als bildgebende Mittel in
vitro und in vivo auf. Das Verfahren der Diagnose unter Verwendung
der oben genannten bildgebenden Mittel wird aus der Lokalisation
der radioaktiv markierten konjugierten Verbindungen in spezifischen
Organen und Geweben in einer Person resultieren.
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Das
Verfahren der Diagnose wird üblicherweise
zuerst die Verabreichung einer effektiven Menge einer radioaktiv
markierter Verbindung der Formel (I) an eine Person einschließen; und
anschließend
das Beobachten der Person nach einer geeigneten Zeitdauer, um zum
Beispiel die Anwesenheit oder Abwesenheit eines Krebses festzustellen,
wie es durch die Lokalisation der Radiomarkierung an einer bestimmten
Stelle der Person nachgewiesen wird. Normalerweise soll der Beobachtungsschritt
für eine
Information sorgen bezüglich
der Lage eines beliebigen Krebses, wenn er vorhanden ist. Die wirksame
Menge oder Dosierung der radioaktiv markierten Verbindung der Formel
(I) wird von der gewünschten
Menge an Radioaktivität
abhängen,
die für
die diagnostische Anwendung benötigt
wird, im Gleichgewicht mit der Sicherheitsanforderung, die Person,
insbesondere ihre Organe und Gewebe, nicht schädlichen Mengen an Strahlung
auszusetzen. Geeignete Dosierungen für eine beliebige gegebene Anwendung
kann durch Fachleute im relevanten Fachbereich durch nicht mehr
als routinemäßiges Experimentieren
bestimmt werden, denen die Schulung hierin gegeben wird.
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Das
Verfahren der Therapie wird typischerweise Verbindungen der Formel
(I) oder die Metall-Komplexe, radioaktiv markierte Komplexe und/oder
pharmazeutisch akzeptable Salze davon umfassen, die als zytotoxische
Mittel nützlich
sind. In einer typischen Ausführungsform
umfasst die Therapie der Erkrankung eine Behandlung von Krebs, abnormalen
Zellstörungen
und die Behandlung von Tumoren. In solchen Anwendungen ist die radioaktiv
markierte Verbindung der Formel (I) üblicherweise an eine molekulare
Erkennungseinheit konjugiert, die spezifisch an den Tumor oder eine
abnormale Zelle binden kann. Beispiele solcher molekularen Erkennungseinheiten
umfassen einen Teil von spezifischen Bindungspaaren und sind den
Fachleuten im relevanten Fachbereich bekannt und umfassen üblicherweise
Antikörper/Antigen-Paare
und dergleichen.
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Das
Verfahren der Therapie wird normalerweise die Verabreichung einer
effektiven Menge einer radioaktiv markierten Verbindung der Formel
(I) an eine Person einschließen.
Die wirksame Menge oder Dosierung wird von der gewünschten
Menge an Radioaktivität
abhängen,
die für
die diagnostische Anwendung benötigt wird,
im Gleichgewicht mit der Sicherheitsanforderung, die Person, insbesondere
ihre Organe und Gewebe, nicht schädlichen Mengen an Strahlung
auszusetzen. Geeignete Dosierungen für eine beliebige gegebene Anwendung
kann durch Fachleute im relevanten Fachbereich durch nicht mehr
als routinemäßiges Experimentieren
bestimmt werden, denen die Schulung hierin gegeben wird.
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Üblicherweise
würde die
Behandlung für
die Dauer des Zustands sein, und Kontaktzeiten würden üblicherweise für die Dauer
des Zustands sein.
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Ferner
wird es einem normalen Fachmann im Fachbereich offenkundig sein,
dass die optimale Menge und der optimale Intervall der einzelnen
Dosierungen einer Verbindung der vorliegenden Erfindung durch die Natur
und das Ausmaß des
Zustands, der behandelt wird, die Art, den Weg und der Stelle der
Verabreichung und der Natur des jeweiligen Wirbeltiers, das behandelt
wird, bestimmt werden wird. Solche optimalen Bedingungen können auch
durch herkömmliche
Techniken bestimmt werden.
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Es
wird einem normalen Fachmann im Fachbereich auch offenkundig sein,
dass der optimale Ablauf einer Behandlung, wie die Anzahl der Dosen
der Verbindung der vorliegenden Erfindung, die pro Tag während einer
definierten Anzahl von Tagen gegeben wird, durch Fachleute im Fachbereich
unter Verwendung von herkömmlichen
Tests zur Bestimmung des Behandlungsablaufs ermittelt werden kann.
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Ebenfalls
im Umfang der vorliegenden Erfindung eingeschlossen sind Proarzneistoffe
der erfindungsgemäßen Verbindung. Üblicherweise
werden Proarzneistoffe funktionale Derivate einer Verbindung der
Formel (I) gemäß der ersten
Ausführungsform
der Erfindung sein, die in vivo einfach in die erforderliche Verbindung
umgewandelt werden, für
eine Verwendung in der vorliegenden Erfindung, wie hierin beschrieben.
Typische Prozeduren für
die Auswahl und die Präparation
von Proarzneistoffen sind den Fachleuten im Fachbereich bekannt
und werden zum Beispiel in H. Bundgaard (Hrsg.), Design of Prodrugs,
Elsevier, 1985 beschrieben.
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Wenn
bei der Behandlung einer Erkrankung eingesetzt, kann die Verbindung
der Formel (I) gemäß der ersten
Ausführungsform
der Erfindung oder ein Metallkomplex, ein radioaktiv markierter
Komplex oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon allein verabreicht
werden. Jedoch ist es im Allgemeinen wünschenswert, dass diese Verbindungen
in Verbindung mit anderen chemotherapeutischen Behandlungen, die
herkömmlich
bei Patienten zur Behandlung der Krankheit durchgeführt werden,
verabreicht werden. Zum Beispiel kann ein Tumor herkömmlich durch
eine Operation behandelt werden, und die Verbindung der Formel (I)
gemäß der ersten
Ausführungsform
der Erfindung oder ein Metallkomplex, ein radioaktiv markierter
Komplex oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon, um den Ruhezustand
von Mikrometastasen zu verlängern und
das Wachstum eines beliebigen verbliebenen Primärtumors zu stabilisieren und
zu hemmen.
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Typischerweise,
wenn bei der Behandlung von soliden Tumoren angewandt, können Verbindungen der
vorliegenden Erfindung mit chemotherapeutischen Mitteln verabreicht werden,
wie: Adriamycin, Taxol, Fluorouricil, Melphalan, Cisplatin, Alpha-Interferon,
COMP (Cyclophosphamid, Vincristin, Methotrexat und Prednison), Etoposid,
mBACOD (Methortrexat, Bleomycin, Doxorubicin, Cyclophosphamid, Vincristin
und Dexamethason), PROMACE/MOPP (Prednison, Methotrexate (w/Leucovin-Rettung),
Doxorubicin, Cyclophosphamid, Taxol, Etoposid/Mechlorethamin, Vincristin,
Prednison und Procarbazin), Vincristin, Vinblastin, Angioinhibins, TNP-470,
Pentosanpolysulfat, Thrombozytenfaktor 4, Angiostatin, LM-609, SU-101,
CM-101, Techgalan,
Thalidomid, SP-PG und dergleichen. Andere chemotherapeutische Mittel
schließen
Alkylierungsmittel, wie Stickstoffsenfe, einschließlich Mechloethamin,
Melphan, Chlorambucil, Cyclophosphamid und Ifosfamid; Nitrosoharnstoffe,
einschließlich
Carmustin, Lomustin, Semustin und Streptozocin; Alkylsulfonate,
einschließlich
Busulfan; Triazine, einschließlich
Dacarbazin; Ethylenimine, einschließlich Thiotepa und Hexamethylmelamin; Folsäureanaloga,
einschließlich
Methotrexat; Pyrimidinanaloga, einschließlich 5-Fluorouracil, Cytosin-arabinosid;
Purinanaloga, einschließlich
6-Mercaptopurin und 6-Thioguanin;
Antitumor-Antibiotika, einschließlich Actinomycin D; die Anthracycline,
einschließlich
Doxorubicin, Bleomycin, Mitomycin C und Methramycin; Hormone und
Hormon-Antagonisten, einschließlich
Tamoxifen und Kortiosteroide und diverse Mittel, einschließlich Cisplatin
und Brequinar ein.
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Wenn
bei der Behandlung einer Krankheit verwendet, kann die Verbindung
der Formel (I) gemäß der ersten
Ausführungsform
der Erfindung oder ein Metallkomplex, ein radioaktiv markierter
Komplex oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon allein verabreicht
werden. Jedoch ist es im Allgemeinen wünschenswert, dass sie als pharmazeutische
Formulierungen verabreicht werden. Im Allgemeinen können pharmazeutische
Formulierungen der vorliegenden Erfindung gemäß Verfahren präpariert
werden, die normalen Fachleuten im Fachbereich bekannt sind, und
können
dementsprechend einen pharmazeutisch akzeptablen Träger, ein
Verdünnungsmittel
und/oder ein Adjuvans einschließen.
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Diese
Formulierungen können über standardmäßige Wege
verabreicht werden. Im Allgemeinen können die Kombinationen über den
topischen, transdermalen, intraperitonealen, intrakraniellen, intrazerebroventrikularen,
intrazerebralen, intravaginalen, intrauterinen, oralen, rektalen
oder parenteralen (z. B. intravenös, intraspinal, subkutan oder
intramuskulär)
Weg verabreicht werden. Darüber
hinaus kann die Verbindung der Formel (I) gemäß der ersten Ausführungsform
der Erfindung oder ein Metallkomplex, ein radioaktiv markierter Komplex
oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon in biologisch abbaubare
Polymere, die eine anhaltende Freisetzung ermöglichen, eingebracht werden,
wobei die Polymere in der Nähe
davon implantiert werden, wo die Arzneimittelabgabe gewünscht ist,
zum Beispiel beim Ort zum Beispiel eines Tumors, oder so implantiert
werden, dass die aktiven Wirkstoffe systemisch langsam freigesetzt
werden. Osmotische Minipumpen können
auch verwendet werden, um für
eine kontrollierte Abgabe von hohen Konzentrationen der aktiven Wirkstoffe
durch Kanülen
zum Ort des Interesses, wie direkt in, zum Beispiel, eine metastatische
Wucherung oder in die vaskuläre
Versorgung zu diesem Tumor zu sorgen.
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Die
Träger,
Verdünnungsmittel
und Adjuvantien müssen „akzeptabel" sein, und zwar in
dem Sinne, dass sie kompatibel mit den anderen Inhaltsstoffen der
Formulierung, und nicht schädlich
für den
Empfänger davon
sind.
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Beispiele
für pharmazeutisch
und tiermedizinisch akzeptable Träger oder Verdünnungsmittel
sind entsalztes oder destilliertes Wasser; Salzlösung; Öle auf pflanzlicher Basis wie
Erdnussöl,
Saffloröl,
Olivenöl, Baumwollsamenöl, Maisöl, Sesamöle, wie
Erdnussöl,
Saffloröl,
Olivenöl,
Baumwollsamenöl,
Maisöl,
Sesamöl, Arachisöl oder Kokosnussöl; Silikonöle einschließlich Polysiloxane,
wie Methylpolysiloxan, Phenylpolysiloxan und Methylphenylpolysolpoxan;
flüchtige
Silicone; Mineralöle,
wie flüssiges
Paraffin, weiches Paraffin oder Squalan; Cellulosederivate, wie
Methylcellulose, Ethylcellulose, Carboxymethylcellulose, Natrium-Carboxymethylcellulose
oder Hydroxypropylmethylcellulose; niedere Alkanole, zum Beispiel
Ethanol oder Isopropanol; niedere Aralkanole; niedere Polyalkylenglykole
oder niedere Alkylenglykole, zum Beispiel Polyethylenglykol, Polypropylenglykol,
Ethylenglykol, Propylenglykol, 1,3-Butylenglykol oder Glycerin; Fettsäureester,
wie Isopropylpalmitat, Isopropylmyristat oder Ethyloleat; Polyvinylpyrridon;
Agar; Carrageenan; Tragantgummi oder Acaciagummi und Petrolatum
bzw. Rohvaselin. Üblicherweise
wird der Träger
oder die Träger
von 10 bis 99,9 Gew.-% der Zusammensetzungen bilden.
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Für die Verabreichung
als eine injizierbare Lösung
oder Suspension können
nicht-toxische parenteral akzeptable Verdünnungsmittel oder Träger Ringer-Lösung, isotonische
Salzlösung,
phosphat-gepufferte Salzlösung,
Ethanol und 1,2-Propylenglykol beinhalten.
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Adjuvantien
schließen üblicherweise
Weichmacher, Emulgatoren, Verdickungsmittel, Konservierungsmittel,
bakterizide und puffernde Mittel ein.
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Verfahren
zur Herstellung von parenteral verabreichbaren Zusammensetzungen
sind den Fachleute im Fachbereich offenkundig und sind ausführlicher
in, zum Beispiel, Remington's
Pharmaceutical Science, 15. Ausgabe, Mack Publishing Company, Easton,
Pa. beschrieben, hiermit durch Bezugnahme hierin eingeschlossen.
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Die
radioaktiv markierten molekularen Erkennungseinheiten, besonders
radioaktiv markierte Antikörper
sind in der Medizin besonders nützlich,
zum Beispiel beim Lokalisieren von bestimmten Gewebetypen und in
der Therapie von Zellstörungen.
Die radioaktiv markierten Antikörper
können
auch dazu verwendet werden, um Metallionen zu einen spezifischen
Gewebetyp, sowohl in vitro als auch in vivo, zielzusteuern.
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Eine
typische Verwendung der radioaktiv markierten Verbindungen der Formel
(I) ist es, monoklonale Antikörper,
die spezifisch für
Dickdarm-, Eierstock-, Lymphom-, Brust- und/oder Blasenkrebs sind,
mit Betastrahler-Radionukliden von Metallen, wie Sm, Ho, Re, Sc,
Cu, Pd, Pb, Rh und Y radioaktiv zu markieren, zur Therapie des oben
erwähnten
Krebs. Eine weitere typische Verwendung ist bei der radioaktiven
Markierung eines monoklonalen Antikörpers, der für die Metastase
von Dickdarmkrebs spezifisch ist, für eine Diagnose und Therapie.
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In
einer weiteren typischen Ausführungsform
kann der Antikörper
in der konjugierten Verbindung ein vollständiges Antikörpermolekül oder ein
Fragment davon oder ein Analogon von eines von diesen sein, das dafür sorgt,
dass der Antikörper
eine spezifische Bindungsregion umfasst. Der Antikörper kann
ein humanisierter monoklonaler oder ein Fragment davon sein. Der
Antikörper
kann auch ein rekombinanter Antikörper sein. Der Antikörper kann
für eine
beliebige Anzahl von antigenen Determinanten spezifisch sein, ist
aber typischerweise für
eine antigene Determinante spezifisch.
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In
einer weiteren typischen Ausführungsform
wird eine radioaktive Markierung von monoklonalen Antikörpern mit 67Cu (Beta- und Gammastrahler) und 64Cu (Positronen- und Betaemitter) für eine kombinierte
Radioimmunoszintographie (RIS) (SPECT und PET) und Radioimmuntherapie
(RIT) bereit gestellt. Andere Radionuklide umfassen Auger-emittierende
Mittel, wobei die Verbindung der Formel (I) an den monoklonalen
Antikörper
gekoppelt ist und mit einem Augeremittierenden Isotop, wie Fe-59
oder Cu-64 markiert ist.
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In
noch einer weiteren typischen Ausführungsform wird eine zweistufige
vortargetierte Radioimmuntherapie bereit gestellt, wobei ein monoklonaler
Antikörper
mit einem ersten daran angebunden Markermolekül in eine Person injiziert
wird. Sobald der Antikörper
aus dem System freigesetzt und am Tumor lokalisiert wurde, wird
der Person eine zweite Injektion verabreicht. Diese zweite Injektion
schließt
typischerweise den radioaktiv markieren Komplex der Formel (I),
gebunden an ein zweites Markermolekül, das das erste Markermolekül auf dem
abgezielten Antikörper
erkennt, ein. Alternativ kann die zweite Injektion typischerweise
das zweite Markermolekül
allein sein, und wenn es aus dem System freigesetzt wurde, wird
der Person der radioaktiv markierte Komplex der Formel (I), an das
erste Markermolekül
gebunden, verabreicht. Beide Prozeduren sorgen für eine Amplifikation des Zielorts
und verringern die Einwirkung des radioaktiv markierten Komplexes
auf normales Gewebe. Weiterhin typisch ist das erste Markermolekül Biotin
und das zweite Markermolekül
ist Avidin oder Streptavidin. Noch typischer ist das erste Markermolekül kleiner
als der abgezielte Antikörper.
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Die
Erfindung stellt auch eine zweistufige Prozedur bereit, die die
Verabreichung eines Antikörper-DNA-Konjugats oder eines
Antikörper-Oligonukleotid-Konjugats, gefolgt
vom Targetieren mit einer radioaktiv markierten komplementären DNA
oder einem komplementären Oligonukleotid,
einschließt.
Diese Prozedur sieht auch eine Amplifikation des Zielorts vor und
verringert die Einwirkung des radioaktiv markierten Komplexes auf
normales Gewebe.
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Die
Erfindung stellt auch eine Verwendung von Verbindungen der Formel
(I) oder Metallkomplexen, radioaktiv markierte Komplexen, Konjugat-Verbindungen
oder pharmazeutisch akzeptablen Salze davon als Mittel für die Magnetresonanzbildgebung
(MRI) bereit. In dieser Form der Erfindung wird dabei typischerweise ein
Komplex einer Verbindung der Formel (I) oder ein Konjugat der siebten
Ausführungsform
mit einem paramagnetischen Metallion, typischerweise Fe (III), Mn
(II), gebildet, der als ein Kontrastmittel zum Verstärken von Bildern
verwendet werden kann. Weiterhin können Komplexe wie diese in
der Form einer pharmazeutischen Formulierung angewendet werden,
wo der Komplex mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger, Hilfsstoff oder
Vehikel davon vorliegt.
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Die
pharmazeutischen Formulierungen, die für die verschiedenen Ausführungsformen
dieser Erfindung beschrieben werden, umfassen typischerweise eine
Formulierung in der Form einer Suspension, Lösung oder eine andere geeignete
Formulierung. Physiologisch akzeptable Suspendiermedien können zusammen mit
oder ohne Adjuvantien verwendet werden. Weiterhin liegen die pharmazeutischen
Formulierungen typischerweise in einer flüssigen Form vor und noch typischer
liegen sie in injizierbarer Form vor. Noch stärker typisch sind die injizierbaren
Formulierungen in geeigneten physiologisch akzeptablen Trägern gelöst, die
im Fachbereich anerkannt sind.
-
Die
industrielle Verwendung der Verbindungen der Formel (I) umfasst
ferner ihre Anhaftung an feste Oberflächen, wie Polymere, für eine Verwendung
bei der Konzentrierung von Metallionen und der Reinigung von Wasser
oder gebunden an eine Elektrodenoberfläche für die Detektion von spezifischen
Metallionen.
-
Kurze Beschreibung
der Zeichnungen
-
Die
vorliegende Erfindung wird weiter veranschaulicht werden, nur als
Beispiel, mit Bezug auf die begleitenden Figuren; in welchen:
-
1a und 1b graphische
Darstellungen der Serumstabilität
des 67Cu-Komplexes der Verbindung (4) bei
0 beziehungsweise 7 Tagen sind;
-
2 eine
graphische Darstellung des Effekts des pH-Wertes auf die Komplexierung von 64Cu mit Verbindung (3) ist;
-
3 eine
graphische Darstellung der Biodistribution eines 64Cu-Komplexes
von Verbindung (4) ist;
-
4 eine
graphische Darstellung der Biodistribution eines 64Cu-Komplexes
von Verbindung (1) ist;
-
5 eine
graphische Darstellung der Biodistribution eines 64Cu-Komplexes
von Verbindung (3) ist; und
-
6 eine
graphische Darstellung der Biodistribution eines 64Cu-markierten
Konjugats von B72.3, konjugiert mit Verbindung (3), bei Tumor tragenden
Nacktmäusen
ist.
-
7 eine
graphische Darstellung des radiotherapeutischen Effekts von 30 MBq
von 64Cu-markiertem Konjugat
von B72.3, konjugiert mit Verbindung (3), bei Tumor tragenden Nacktmäusen ist.
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Beispiele
-
Die
folgenden Beispiele dienen nur zur Veranschaulichung der Erfindung
und sollten nicht als Einschränkung
der Allgemeingültigkeit
der obigen Beschreibung interpretiert werden. Beispiel
1: Herstellung von Verbindung (3)
-
Verbindung (3)
-
Die
Herstellung der Verbindung (3) wird in den Schemata 1 und 2 veranschaulicht.
Schema
1. Schiff'sche Base-Kondensationsreaktion
von Verbindung (1) mit p-Nitrobenzaldehyd
Schema
2. Reduktion von Verbindung (2) zu Verbindung (3).
-
A. Präparation von Verbindung (2)
-
Verbindung
(2) wurde durch eine Schiff'sche
Base-Reaktion von
Verbindung (1) mit p-Nitrobenzaldehyd präpariert. Eine Synthese von
Verbindung (1) wird in Aust. J. Chem (1994) 47, 143 – 179 beschrieben.
Ein Kupfer-Komplex von (1) wurde in trockenem Ethanol gelöst (2,4
mMol in 100 ml) und p-Nitrobenzaldehyd (2,2 mMol) wurde zugefügt. Die
Reaktionsmischung wurde bis zur Trockene eingedampft und (mit trockenem
Ethanol) zweimal rekonstituiert, um jegliches Wasser zu entfernen.
Die Reaktionsmischung wurde noch einmal in trockenem Ethanol rekonstituiert
und 30 min lang unter Stickstoffgas gerührt. Natriumcyanoborhydrid
(25 mMol), Eisessig (2 mMol) und aktivierte 3 Å Molekularsiebe wurden zugefügt, und
die Reaktion wurde über Nacht
rühren
gelassen. Die Mischung wurde filtriert, zur Trockene eingedampft
und mit Chloroform und Wasser (100 ml : 200 ml) extrahiert. Die
Wasserschicht wurde auf 2 1 verdünnt,
auf SP Sephadex C25 sorbiert und mit 0,3 M Natriumacetat eluiert
(Schema 1).
-
B. Herstellung der Verbindung
(3)
-
Zu
Palladium/C-Katalysator (20 mg) in Wasser (0,5 ml) wird Natriumborhydrid
(50 mg) in Wasser (0,5 ml) unter Stickstoffgas zugegeben. Dieser
Mischung wird dann die Verbindung (2) (30 mg), gelöst in etwa
0,1 M Natriumhydroxid (0,5 ml) zugegeben. Die Mischung wird bei
Raumtemperatur für
weitere 30 min oder bis die Lösung
klar wird, umrühren
gelassen. Ein 2 ml großes
Glas-Vial wird auf Eis gekühlt.
Die Mischung wird 0,22 μm
filtriert in das gekühlte
Vial, um den suspendierten Palladium/C-Katalysator zu entfernen.
Diesem gekühlten
Filtrat wird konzentrierte Chlorwasserstoffsäure tropfenweise zugegeben,
bis das gesamte überschüssige Natriumborhydrid
gelöscht
wird (d. h. bis die Gasentwicklung bei Zugabe von Säure aufhört). Die
Produktmenge wird durch Titration mit einer bekannten Konzentration
von 64Cu, wie in Beispiel 2 beschrieben,
bestimmt. Das Produkt wird gefroren bei einem pH-Wert von <1 in einem mit einem
Gummistöpsel
verschlossenen Vial unter Stickstoffgas aufbewahrt. Ausbeute: >95 % (Schema 2). Das
Endprodukt ist charakterisiert durch 1H-NMR in D2O
bei 298K (Bruker Avance DPX 400). 1H-NMR
3,28 ppm, m 6H, CH2 (Käfig); 3,39 ppm, m, 6H, CH2 (Käfig);
3,59 ppm, s, 6H, CH2 (Käfig); 3,71 ppm, s, 6H, CH2 (Käfig);
4,45 ppm, s, 2H, CH2; 7,51 ppm, d, 2H, Ar;
7,70 ppm, d, 2H, Ar.
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Beispiel 2 Komplexierung
von 64Cu durch die Verbindung (3)
-
Die
Wirkung des pH-Wertes auf die Komplexierung von 64Cu
durch die Verbindung (3) wurde untersucht. Die Verbindung (3) wurde
in Puffer mit einem pH-Wert von 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 und
9,0 verdünnt. Eine
ausreichende Menge an 64Cu wurde zugegeben
und es wurde die Komplexierungsrate bei (t = 1, 2,5, 5, 10, 60 und
90 min) (siehe unten stehendes Verfahren) durch Instant-Dünnschichtchromatographie
(ITLC-SG) überwacht.
Eine vollständige
Komplexierung (>98
%) wurde innerhalb 1 min für
alle pH-Werte ≥ 4,0
erzielt. Die Komplexierungsrate bei einem pH-Wert 3,0 war langsamer.
(2).
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Überwachen
der Komplexierung durch ITLC-SG
-
ITLC-SG-Streifen
(10 cm × 0,8
cm) wurden mit ~1 μl
Reaktionsmischung 1 cm vom Boden des Streifens (Ausgangspunkt) betupft
und wurden in einem Lösungsmittel,
das 0,1 M Natriumacetat (pH-Wert 4,5) : Ethanol = 9:1 enthielt,
entwickelt. 64Cu-Verbindung (3) bleibt am
Ausgangspunkt (Rf = 0,0), und "freies" 64Cu erscheint
an der Lösungsmittelfront
(Rf = 1,0).
-
Ein
typisches Verfahren der radioaktiven Markierung des Liganden wird
durch Einstellen des pH-Wertes einer wässrigen Lösung des Liganden auf einen
pH-Wert von 5,0 bewerkstelligt. Ein ausreichendes Volumen von 64/67Cu-Lösung (in
der Regel in 0,02 M HCl oder verdünnt in 0,1 M Natriumacetatpuffer
mit einem pH-Wert von 5,0) wird zugegeben zur Bildung eines 1:1-Komplexes.
Die Wirksamkeit der Markierung wird durch ITLC-SG wie oben beschrieben
ermittelt. Eine radiochemische Hauptspezies wird beobachtet.
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Beispiel 3 Serumstabilität von 67Cu-Komplex der Verbindung (4)
-
Serum-Stabilitätsuntersuchungen
wurden durch Inkubieren eines 67Cu-Komplexes
von verwandten Spezies (4) in Humanplasma bei 37°C durchgeführt.
-
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In
verschiedenen Zeitintervallen wurde der Komplex von dem Plasma durch
Größenausschlusschromatographie
abgetrennt und es wurde die Komplexaufspaltung bewertet. Die Ergebnisse
zeigten, dass nicht mehr als 2 des Kupfers aus dem Komplexbildner
während
der ersten 174 Stunden bei 37°C
verloren gehen. (1a und 1b).
-
Beispiel 4 Synthese von
B72.3, konjugiert mit (3) unter Verwendung von 1-Ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl)carbodiimid
(EDC)
-
Ein
typisches Verfahren zur radioaktiven Markierung eines Antikörpers (wie
B72.3) ist das Inkubieren des Antikörpers mit dem Liganden (wie
der Verbindung (3)) in Gegenwart von EDC bei einem pH-Wert von 5, 0
während
30 min bei 37°C.
Der nicht umgesetzte Ligand und EDC-Nebenprodukte werden durch Waschen mit
Puffer (pH-Wert 5,0) auf einer Größenausschluss-Ultrafiltrationsmembran
entfernt. Das gereinigte Immunkonjugat wird an einen leichten Überschuss
von 64/67Cu exponiert. Die Reaktion wird
bei Raumtemperatur weiterlaufen gelassen, und das Markieren ist
in weniger als 5 min beendet. Überschüssiges 64/67Cu wird durch Waschen mit 0,1 M EDTA
in PBS (pH-Wert 7,2) auf einer Größenausschluss-Ultrafiltrationsmembran
oder durch Abtrennung auf einer Größenausschlusssäule (Sephadex
G25, eluiert mit PBS, pH-Wert 7,2) entfernt, (Schema 3)
-
Die
Bedingungen für
das radioaktive Markieren von B72.3 wurden über die Inkubationszeit (30
min), Reaktions-pH-Wert
(5,0), Konzentration von B72.3 (5 mg/ml) und das Molverhältnis von
B72.3:EDC:Ligand (1:1000:250) optimiert.
-
Schema
3. Synthese von Protein, konjugiert mit der Verbindung (3) unter
Anwendung von EDC.
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Beispiel 5 Bioverteilung
von Cu-Komplexen von (1), (3) und (4) bei Balb/C-Mäusen
-
Die
Bioverteilung der 64Cu-Komplexe der Verbindungen
(1), (3) und (4) (0,10 ml intravenöse Injektion) wurde bei Balb/C-Mäusen (5
Tiere pro Zeitpunkt) in 3-, 5-, 10-, 15-, 20- und 30-Minuten-Zeitintervallen
evaluiert. Bioverteilungsstudien wurden doppelt durchgeführt. Die
Bioverteilung der radioaktiven Markierung ist in den Tabellen 1,
2 und 3 aufgeführt
und ist in Diagrammform in den 3, 4 und 5 veranschaulicht.
-
Beispiel 6 Bewertung des 64Cu-markierten Konjugats von B72.3 mit der
Verbindung (3) bei tumortragenden Nacktmäusen
-
Der
B72.3-Antikörper
erkennt das TAG-72-Antigen, welches auf kolorektalen und Ovar-Tumoren
exprimiert wird. Das in der vorliegenden Studie angewandte Tiermodell
verwendet LS174t-Zellen, welche ebenfalls TAG-72-Antigen exprimieren.
Die Bioverteilung des 64Cu-Immunkonjugats (0,10
ml intravenöse
Injektion) wurde bei LS174t-Tumor tragenden Nacktmäusen (5
Tiere pro Zeitpunkt) in 1-, 3-, 5-, 24- und 48-Stunden-Zeitintervallen bewertet.
Bioverteilungsstudien wurden doppelt durchgeführt. Die Bioverteilung der
radioaktiven Markierung ist in Tabelle 4 angegeben und ist in Diagrammform
in 6a veranschaulicht; die Bioverteilung des
Komplexes der Verbindungen (1), (2) und (3) zeigt, dass, wenn der
Ligand sich tatsächlich
in irgendeiner Form von dem Antikörper loslöst, er sich rasch aus dem System
klärt und
nicht das 64Cu freisetzt.
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Es
versteht sich, dass der Ausdruck "SarAr", wie in den folgenden Tabellen und
in der Beschreibung verwendet, sich auf die Verbindung (3), wie
in Beispiel 1 gezeigt, bezieht.
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Tabelle
7 Maximale Strahlungsdosis-Schätzungen
für
64Cu-Sar-B72.3
-
Tabelle
8 Maximale Strahlungsdosis-Schätzungen
für
131I-B72.3
-
Beitrag
zur Organdosis von der Aktivität
im Tumor Es wird angenommen, dass der Tumor eine kleine Quelle ist,
die im Unterleib gelegen ist, welcher einen Beitrag zu allen anderen
Organdosen leistet. Damit das als MIRDOSE3 bekannte Computersoftwareprogramm
angewandt werden kann, wird angenommen, dass die Aktivität in den
Eierstöcken
liegt.
-
Die
oben angegebene Ovar-Dosis wurde getrennt berechnet. Es ist nicht
die Tumordosis.
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Blasen-Verweilzeit – Die über die
Blase ausgeschiedene Aktivität
ist nahezu insignifikant.
-
Die
Gesamt-Blasen- und Urin-Verweilzeiten in Tabelle 5 wurden als die
Urinaktivität
bei der Dosisberechnung verwendet. Es wurden kein(e) Ausscheidungsmodell
oder angenommene Entleerungszeit (voiding time) verwendet. Tabelle
9. Maximale Strahlungsdosis-Schätzungen
für
90Y
-
Beitrag
zur Organdosis von der Aktivität
im Tumor Es wird angenommen, dass der Tumor eine kleine Quelle ist,
die im Unterleib gelegen ist, welcher einen Beitrag zu allen anderen
Organdosen leistet. Damit das als MIRDOSE3 bekannte Computersoftwareprogramm
angewandt werden kann, wird angenommen, dass die Aktivität in den
Eierstöcken
liegt. Die oben angegebene Ovar-Dosis wurde getrennt berechnet.
Es ist nicht die Tumordosis.
-
Blasen-Verweilzeit – Die über die
Blase ausgeschiedene Aktivität
ist nahezu insignifikant.
-
Die
Gesamt-Blasen- und Urin-Verweilzeiten in Tabelle 5 wurden als die
Urinaktivität
bei der Dosisberechnung verwendet. Es wurden kein(e) Ausscheidungsmodell
oder angenommene Entleerungszeit verwendet. Tabelle
10. Strahlungsdosis-Schätzungen
für I-B72.3
(7 days)
-
Radiotherapeutische
Studie
-
Die
radiotherapeutische Studie wurde in zwei Teilen durchgeführt.
- Teil
A: wo die theoretischen Dosen für
Ziel- und Nicht-Ziel-Organe
für die
analogen Radioimmunokonjugate berechnet wurden.
- Teil B: wo die verschiedenen radioaktiven Spiegel von 64Cu-Sar3
in tumortragende Mäuse
injiziert wurden und die therapeutische Wirkung des Produkts als
eine Verlängerung
der Tierüberlebenszeit überwacht
wurde.
-
Radiotherapeutische Studie – Teil A
-
Bioverteilungsstudien
von 123I- und 111In-radioaktiv
markiertem B72.3 wurden bei LS174t-Tumor tragenden Nacktmäusen durchgeführt (siehe
Tabelle 5,6). Standardberechnungen wurden unter Verwendung der Computersoftware
MIRDOSE 3 durchgeführt,
die zum Vergleichen der Ziel- mit der Nicht-Ziel-Dosis ihrer analogen
therapeutischen Gegenstücke
(90Y bzw. 131I)
mit 3 verwendet wurde (siehe Tabelle 7, 8, 9).
-
Die
theoretische akkumulierte Maximaldosis (welche 10 Halbwertszerfällen entspricht)
für jedes
Radioimmunkonjugat wurde berechnet. Die Gesamtkörperdosis für 64Cu-SarAr-B72.3
war signifikant niedriger (0,09 rad/mCi) als bei analogen Produkten
(131I-B72.3, 2,64 rad/mCi; 90Y-B72.3,
2,387 rad/mCi). Vergleichs-Maximaldosen für Tumore verschiedener Größen wurden
berechnet. Die Dosen für 131I- und 90Y-B72.3
scheinen besser zu sein als für 64Cu-SarAr-B72.3. Allerdings verhindert die
mangelnde Stabilität
des Radioimmunkonjugats an der Tumorstelle in realen biologischen
Systemen, dass der Tumor die akkumulierte Maximaldosis erhält bzw. aufnimmt.
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Somit
wurden die Dosen für
Ziel- und Nicht-Ziel-Organe neu berechnet unter der Annahme, dass
die Radioimmunokonjugate (
131I- und
90Y) für
ungefähr
24 Stunden an der Tumorstelle stabil waren und die Nicht-Ziel-Organe für bis zu
7 Tage dosiert wurden, was eine natürliche biologische Klärung bzw.
Clearance erlaubte. MIRDOSE 3 wurde zur Neuberechnung der Dosis
für verschiedene
Organe unter diesen Bedingungen verwendet (siehe Tabelle 10, 11).
Die relevantesten sich ergebenden Ziel- und Nicht-Ziel-Anteile sind
in Tabelle 12 angegeben. Tabelle
12 Verhältnis
Ziel:Nicht-Ziel-Dosen für
jedes Radioimmunkonjugat
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*MIRDOSE
3 wurde zur Schätzung
der Dosen für
menschliche Organe verwendet unter der Annahme, dass die Verweilzeiten
im Menschen die gleichen sind wie im Tiermodell. Es wird anerkannt,
dass dies die Genauigkeit der Dosisschätzungen beeinflusst.
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Radiotherapeutische
Studie – Teil
B
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Um
die therapeutische Wirkung von 64Cu in einem
realen biologischen System zu bewerten, wurden kolorektales LS174t-Karzinom
tragende Nacktmäuse
mit verschiedenen Dosen (0, 10, 20, 30, 40 MBq) von 64Cu-SarAr-B72.3
injiziert.
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Die
Ergebnisse sind in Tabelle 13 angegeben und ein typisches Profil
einer Studie ist in
1 angegeben. Für alle Aktivitätsspiegel
von höher
als 20 MBq wurde eine signifikante Verlängerung des Lebens der Maus
erzielt. Es folgen Details zu den Versuchen. Tabelle
13 Verlängerung
des Lebens der Maus im Verhältnis
zu
64Cu-SarAr-B72.3 – Teil B
- 1Mehr als 30 %
der Tiere; 2mehr als 50 Kontrolltiere.
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1. Radiotherapeutische Wirkung von 30
MBq von 64Cu-SarAr-B72.3 bei tumortragenden
Mäusen.
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Experimente
für die
radiotherapeutische Studie – Teil
B
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Tiermodell:
LS174t-Tumorgewebe von Nacktmäusen
wurde in Nacktmäuse
für jedes
Experiment transplantiert.
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Tierauswahl:
Nur Tumore von 3,5–5,5
mm tragende Tiere
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7
Tage nach der Transplantation wurden für jede Studie gewählt. Bis
zu 10 Tiere pro Dosis.
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Injektion:
Das Produkt wurde in die Nacktmäuse
am 7. Tag nach der Transplantation von Tumorgewebe injiziert.
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Dosen:
Verschiedene Aktivitäten
von Cu-64-SarAr-B72.3 wurden in die Mäuse injiziert. Kontrolltiere erhalten
nur Antikörper.
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Überwachen
der Tiere: Die Tiere wurden im Hinblick auf Veränderungen der Tumorgröße überwacht.
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Tiermasse
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Verhaltens- und physische
Abnormalitäten (z.
B. Bewegung/Gangart, Nahrungsaufnahme und Krümmen) (Für jede der
oben genannten Charakteristika nahm die Häufigkeit des Wiegens zu)
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Histologie, Hämatologie
und Biochemie:
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Die
Tiere wurden zu vorbestimmten Zeitpunkten geopfert (2 Tage, 1, 2,
3, 4 Wochen, 2, 3, 4, 5 und 6 Monate).
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Die
radiotoxischen Wirkungen wurden überwacht.
(durchgeführt
durch einen externen Pathologen des Department of Veterinary Anatomy
and Pathology, University of Sydney) (Abteilung für veterinäre Anatomie und
Pathologie, Universität
Sydney).
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Endpunkt der Studie:
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- 1) Körpergewichtsverlust > 20
- 2) Rascher Gewichtsverlust von > 10 % über
Nacht.
- 3) Geschwürbildung
vom Tumor
- 4) Einschränkung
des normalen Verhaltens (z. B. Fähigkeit,
Nahrung aufzunehmen oder zu trinken).
- 5) Tumorgröße 10 × 10 mm
(UK Cancer Council) (Britischer Krebsrat)
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Beispiel 7
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Entsprechend
der Beschreibung der oben bereitgestellten Erfindung können spezifische
bevorzugte pharmazeutische Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung
zubereitet werden, und Beispiele hierfür sind weiter unten angegeben.
Die folgenden spezifischen Formulierungen sind lediglich als erläuternde
Beispiele von Formulierungen, und nicht als eine Beschränkung des
Umfangs der vorliegenden Erfindung in irgendeiner Weise auszulegen.
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Eine
Verbindung der Formel (I) kann allein verabreicht werden, gleichwohl
ist es bevorzugt, dass sie als eine pharmazeutische Formulierung
verabreicht wird.
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Beispiel 7(a) – Zusammensetzung
für die
parenterale Verabreichung
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Eine
pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung für die intramuskuläre Injektion könnte so
zubereitet werden, dass sie 1 ml sterile isotonische Kochsalzlösung und
1 mg Verbindung der Formel (I) enthält.
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Desgleichen
kann eine pharmazeutische Zusammensetzung für die intravenöse Infusion
250 ml sterile Ringer-Lösung und
5 mg Verbindung der Formel (I) umfassen.
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Beispiel 7(b) – Injizierbare
parenterale Zusammensetzung
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Eine
pharmazeutische Zusammensetzung dieser Erfindung in einer für die Verabreichung
durch Injektion geeigneten Form kann durch Mischen von 1 Gew.-%
der Verbindung der Formel (I) in 12 Vol.-% Propylenglykol und isotonischer
Kochsalzlösung
zubereitet werden. Die Lösung
wird durch Filtration sterilisiert.
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Modifizierungen
und Variationen, wie sie einer Person mit Erfahrung offensichtlich
sein sollten, gelten als innerhalb des Umfangs der vorliegenden
Erfindung liegend. Es versteht sich, dass die vorliegende Erfindung
nicht auf die oben beschriebene(n) spezielle(n) Ausführungsform(en)
beschränkt
sein sollte. In der ganzen Patentschrift sind, wenn der Kontext
nichts anderes angibt, die Ausdrücke "umfassen", "umfasst", "umfassend" oder andere Variationen
davon in der Bedeutung zu verstehen, dass die angegebene ganze Zahl
eingeschlossen ist und nicht das Vorkommen anderer ganzer Zahlen
ausschließt,
auch wenn diese anderen ganzen Zahlen nicht explizit angegeben sind.