DE4205938A1 - Immunotoxine - Google Patents
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Description
Die vorliegende Erfindung betrifft neuartige Immunotoxine, die
durch covalente Bindung von Pflanzentoxinen an einen monoklonalen
Antikörper vom Typ CD30 erzeugt werden.
Einige Pflanzentoxine hemmen über die Inaktivierung von Ribosomen
die Proteinsynthese von euraryontischen Zellen und entfalten auf
diese Weise zytotoxische Aktivität. Diese Moleküle werden als
"Ribosomen inaktivierende Proteine" klassifiziert und abgekürzt
als RIPs bezeichnet. Es lassen sich zwei Typen von RIPs unter
scheiden. Der eine Typ (bezeichnet als Typ 2) besteht aus
Heterodimeren, die aus zwei unterschiedlichen durch Disulfid
brücken verbundenen Peptidketten zusammengesetzt sind; eine der
Peptidketten bindet an die Oberfläche von Zielzellen, während die
andere Peptidkette die zytotoxische Aktivität besitzt. Der andere
Typ von Toxinen (bezeichnet als RIP Typ 1) besteht aus einer
einzelnen Peptidkette. Zur Beseitigung der Zytotoxizität ist eine
Konjugation dieser Peptidkette an einen Carrier notwendig, der
die Fähigkeit zur Bindung an Zelloberflächenmembranen besitzt.
Derartige Carrier können z. B. Antikörper sein, die für ein
bestimmtes Zellantigen spezifisch sind.
Bei der hier beschriebenen Erfindung kommen Typ 1 RIPs zur
Anwendung. Diese Proteine wurden in der wissenschaftlichen und
Patentliteratur mehrfach beschrieben einschließlich Methoden zu
ihrer Gewinnung, Reinigung und Bestimmung der biologischen
Aktivität. Zu den verwendeten RIPs Typ 1 zählen Mitglieder der
Saporin Familie wie z. B. Saporin 6 (SO6) (F. Stirpe et al.,
Biochem. J. 216, 433 (1986)) und andere Proteine wie z. B. Bryodin
(Stirpe et al., Biochem. J. 240, 659 (1986)), Bryodin-L (europäi
sche Patentveröffentlichung 03 90 040), Momorchochin (europäische
Patentveröffentlichung 03 90 040), Dianthin 30 und 32 (F. Stirpe
et al., Biochem J. 195, 399 (1981) und A.I. Falasca, Biochem. J.
1 95 399 (1981)), von Asparagus officinalis extrahierte Toxine
(Bolognesi et al., Biochem. Biophys. Acta 1087, 293, 1990 (1983))
und europäische Patentveröffentlichung 03 90 040, PAP-S (Barbie
ri et al., 203, 55 (1982)), Gelonin (Stirpe et al., J. Biol.
Chem. 255, 6947 (1989)) und Trichosanthin (Maraganore et al., J.
Biol. Chem. 262, 11628 (1987)).
Jedes Toxin vom RIP Typ 1 kann für die Herstellung von Immunkon
jugaten verwendet werden. Darüber hinaus ist es möglich,
Glykoprotein-Toxine in zuckerfreier oder in einer partiell
deglykolisierten Form zur Kopplung einzusetzen.
Die andere Komponente der hier vorgestellten Immunotoxine ist ein
monoklonaler CD30 Antikörper und insbesondere der monoklonale
Antikörper Ber-H2 mit der "cluster of differentiation"-Nr. CD30.
Dieser Antikörper wurde 1987 kurz und ausführlich 1989 von
R. Schwarting et al. (Leukocyte Typing III, Blood . . .) be
schrieben. Der Antikörper Ber-H2 wird durch das gleichnamige
Hybridom sezerniert, das bei der European Collection of Animal
Cell Culture (ECACC), Public Health Laboratory Service, Porton
Down, Salisbury, Wiltshire U.K. entsprechend den Bestimmungen des
Budapester Übereinkommens unter der vorläufigen Nummer Ber-H2
92012823 am 28.01.1992 hinterlegt wurde.
Das von dem monoklonalen Antikörper Ber-H2 erkannte CD30-Antigen
ist ein Glykoprotein mit einer Molekülmasse von 120 kD, wenn diese
durch eine SDS-Elektrophorese bestimmt wird. Das Besondere an dem
CD30-Antigen ist, daß es im normalen Organismus nur an sehr
wenigen T-Zell- und B-Zell-Blasten und an diesen auch nur in
geringer Dichte vorhanden ist, (Stein et al., "International
Journal of Councer 1982", Blood 66, 848 (1985) Leukocyte
Typing III und IV), während es aber bei einer Reihe von lymph
proliferativen Prozessen in hoher Konzentration exprimiert wird.
Zu den stark CD30-positiven malignen Lymphomen gehören in erster
Linie die Hodgkin-Lymphome, das anaplastische großzellige
Lymphom wie auch die akute Form der adulten T-Zell-Leukämie.
Wegen des äußerst seltenen Vorkommens des CD30-Moleküls im
normalen Organismus (bis auf wenige aktivierte B- und T-Zell-
Blasten sind sämtliche Körperzellen negativ) und der hohen
Expression dieses Moleküls auf den Tumorzellen der oben genannten
Lymphome erscheint ein Ber-H2 enthaltendes Immunotoxin für die
Eliminierung von CD30-positiven Tumorzellen hervorragend
geeignet.
Immunotoxine, die für eine Eliminierung von Hodgkin Lymphomzellen
bzw. von CD30-positiven Tumorzellen verwendet werden können, sind
in der Literatur bekannt. Solche Immunotoxine sind z. B. in
WO91/07437 und WO91/07941 oder bei Engert et al., Cancer Res. 50,
2929 (1990) beschrieben. Diese Immunotoxine enthalten als
zytotoxische Komponente die A-Kette des Ricins, welches ein Toxin
des RIP Typ 2 darstellt. Die Wirkung von an Antikörper gebundenen
Ricin A Ketten wurde in vielen Studien untersucht; die klinische
Anwendung ergab bisher nur wenig zufriedenstellende Resultate.
Der Grund hierfür liegt in der ungünstigen in vivo Pharmakokine
tik dieser Immunotoxine (J. Biol. Resp. Modifiers., 7, 559
(1988)).
Es konnte jetzt gezeigt werden, daß Immunotoxine, die durch
Konjugation des monoklonalen Antikörpers Ber-H2 mit Toxinen des
RIP Typ 1 hergestellt wurden, den Immunotoxinen mit Toxin RIP
Typ 2 überlegen sind. Das gilt sowohl für die Entfernung von
CD30-positiven Zellen in vitro als auch in vivo. In den durch
geführten Experimenten zeigten die Konjugate mit Toxinen von RIP
Typ 1 eine deutlich höhere zytotoxische Kapazität als Ricin-A-
Ketten enthaltende Immunotoxine (Siena et al., Transplantation
43, 421 (1987), Blatt 69, 345 (1987)).
Die Herstellung des hier beschriebenen Immunotoxins erfolgte
unter Anwendung konventioneller Methoden wie sie in EP-A-16 911
und in "Monoclonal antibody-toxin conjugates: liming the magic
bullet", Thorpe et al., Monoclonal Antibodies in Clinical
Medicine, Academic Press, Seiten 168-190 (1982) beschrieben sind.
Zur Konjugation des Toxins mit dem Antikörper eignen sich
heterobifunktionale Reagentien wie z. B. N-Succinimidyl-3-(2-
pyridyldithio)-propionat (SPDP), 2-Tminothiolan (Traut′s
Reagenz), S-Acetyl-mercaptobernsteinsäureanhydrid (SAMSA),
Carbodiimid, Glutaraldehyd und ähnliche Reagentien. Die Anwen
dungsweise dieser Reagentien ist in der einschlägigen Literatur
beschrieben. Für die Herstellung des hier vorgestellten Immunoto
xins wird eine Kopplung mit Hilfe von Iminothiolan bevorzugt.
Dieses Reagenz erlaubt, das Toxin wie auch den Antikörper
getrennt zu derivatisieren.
Die Ber-H2-Toxinkonjugate sollen parenteral (intramuskulär oder
intravenös) angewendet werden. Deswegen muß das Immunotoxin in
einer entsprechenden pharmazeutischen Präparation vorliegen, z. B.
als sterile Lösung oder lösliche Suspension oder gefrierge
trocknete Substanz, die mit entsprechenden Lösungsmitteln
rekonstituiert werden kann. Die Dosis ist von verschiedenen
Faktoren abhängig z. B. von der Ausbreitung und der Art der Er
krankung, von dem Zustand der Patienten sowie von anderen
Therapiemaßnahmen. Die Dosis beträgt in den meisten Fällen
zwischen 0,01 mg/kg und 5 mg/kg, wobei eine Dosis zwischen
0,01 mg/kg und 0,5 mg/kg bevorzugt ist.
Die therapeutische Anwendung kann eine oder mehrere Applikationen
pro Tag über einen Zeitraum von einer bis mehreren Wochen
umfassen.
Die derivatisierten Toxine und Antikörpermoleküle werden unter
Herstellung einer Disulfidbrücke konjugiert. Die in der vor
liegenden Erfindung verwendeten Ber-H2 Antikörper vom Typ CD30
und der Toxine werden entsprechend nachfolgend beschriebener
konventioneller Methoden gereinigt und charakterisiert.
Nachfolgend werden die Herstellung und die Charakterisierung
einiger, für die vorliegende Erfindung repräsentativer Immunoto
xine im genauer beschrieben:
Zur Produktion des monoklonalen Antikörpers Ber-H2 wird die
gleichnamige Hybridzellinie herangezogen. Der Ber-H2-
Antikörper besitzt den Isotyp IgGI und erkennt ein für das
CD30 Molekül spezifisches Epitop. Die Hybridomazellinie wird
in der Zellkultur unter Verwendung von Standardkulturbedin
gungen in mit 10% fetalem Kälberserum supplementiertem RPMI
1640 Medium expandiert.
Um eine größere Menge Antikörper zu erhalten, können
außerdem 1-3 × 106 Hybridomzellen intraperitoneal in mit
Pristan (2,6,10,14-Tetramethyl-pentadecan, Sigma), behandel
te nu/nu Mäuse (Swiss background) injiziert werden; unter
diesen Bedingungen produzieren Hybridomzellen in der Maus
einen intraperitonealen Tumor mit Aszitesbildung. Der
Aszites enthält den Antikörper in sehr hoher Konzentration.
Die Bindungsaktivität des in die Zellkulturüberstand oder in
den Aszites sezernierten Ber-H2 Antikörper wird auf zwei
verschiedene Arten geprüft. Einmal wird die Bindung der
Antikörper an die CD30-positive Zellinie L540 mit Hilfe der
indirekten Fluoreszenztechnik (siehe Figur 1) analysiert.
Bei dem anderen Verfahren wird die selektive Bindung der
gewonnenen Ber-H2 Antikörper an CD30-positive Tumorzellen in
Gefrierschnitten mit Hilfe der Immunhistologie überprüft.
Der Antikörper wird aus Kulturüberstand oder Aszites mit
Hilfe der Affinitätschromatographie unter Verwendung von
Protein A-Säulen und Hydroxyapatitsäulen isoliert und
gereinigt.
Affinitätschromatographie (Ey P.L. et al., Immunochemistry
15, 420 (1972)). Die steril gewonnene Kulturflüssigkeit oder
Aszitesflüssigkeit wird durch Zentrifugation und Filtration
über einen Nitrocellulosefilter mit 0,45 µm Porengröße
geklärt. Das Filtrat wird 1:2 in Puffer (1,5 M Glycin, 3 M
NaCl, pH-Wert 9,8) verdünnt und über eine Sepharose-Pro
tein A Säule (Pharmacia) gegeben. Der Antikörper (IgG1) wird
anschließend durch Applikation eines 0,1 M Natriumcitratpuf
fers, pH-Wert 6,0 eluiert. Bei andern Subklassen erfolgt die
Elution bei einem pH-Wert von 3,5 oder 3,0. Die IgG1
enthaltenden Fraktionen werden mit Hilfe eines ELISA-Testes
(enzyme linked immunosorbent assay) identifiziert.
Hydroxyapatitchromatographie (Bio-Rad) (Stalkel et al., J.
Immonol. Methods 76, 157, (1985)). Gepoolte Ber-H2-Antikör
per enthaltende Fraktionen werden gegen einen 50 mM Phos
phatpuffer vom pH-Wert 6,8 dialysiert und anschließend über
die Hydroxyapatitchromatographiesäule gegeben. Der Antikör
per wird mit einem linearen Kaliumphosphat-Gradienten eines
Puffers (50 bis 500 mM, pH-Wert 6,8) eluiert. Die Antikörper
enthaltenden Fraktionen werden gesammelt, dialysiert gegen
physiologische Kochsalzlösung, anschließend mit Hilfe der
Ultrafiltration konzentriert und über einen Filter mit der
Porengröße von 0,2 µm filtriert.
Der so erhaltene gereinigte Antikörper wird jetzt durch
Affinitätschromatographie unter sterilen Bedingungen und
unter Anwendung einer endotoxinentfernenden Gelsäule
(Pierce) endotoxinfrei gemacht.
Die Endotoxinbeimischung, die unter 0,125 EU liegen muß,
wird mit dem LAL-Test (Wittaker) bestimmt. Alle Lösungen,
die für die Reinigung des Antikörpers verwendet wurden,
wurden mit pyrogenfreiem und autoklaviertem sterilen Wasser
angesetzt. Das Glasmaterial wurde bei 190°C sterilisiert.
Kunststoffmaterialien wurden von möglichen Pyrogenen durch
Behandlung mit Natronlauge oder Detergenzien entsprechend
der Instruktion der Hersteller befreit. Die Reinheit des
Antikörpers wurde mit Hilfe der Elektrophorese unter
denaturierenden Bedingungen (Laemmli U.K., Nature 227, 680
(1970)) überprüft; der Reinheitsgrad erwies sich jeweils
höher als 98%. An einem Aliquod des gereinigten Antikörpers
wurde die Bindungskapazität mit Hilfe der Fluorzytometrie
(Figur 1) evaluiert. Der gereinigte Antikörper zeigte eine
ähnlich gute Bindung gegenüber der L540-Zellinie oder CD30-
positiven Tumorzellen in Gefrierschnitten von Morbus-Hodgkin
Gewebe wie der Antikörper aus der Zellkultur oder der
Aszitesflüssigkeit.
Die Bindungsaktivität des monoklonalen Antikörpers Ber-H2
wurde sowohl mit Hilfe der indirekten Immunfluoreszenz unter
Anwendung eines Zytofluorimeters an CD30-positiven Zel
linien, z. B. der Hodgkinzellinie L540, der HUT 102 und K562
wie auch mit der Alkalischen-Phosphatase-Antialkalischen-
Phosphatasereaktion an acetonfixierten Gefrierschnitten von
Morbus Hodgkin Gewebe analysiert. Mit der gleichen Methodik
wurde auch der gereinigte Antikörper vor und nach seiner
Konjugation mit dem Toxin analysiert. Zum Zwecke dieser
Testung wurden 1 × 1 106 CD30-positive Zellen 30 Minuten lang
in 100 µl Lösung inkubiert. Nach dreimaligen Waschen in
einem isoosmolaren Puffer, der 1% Serumalbumin enthielt,
wurden die Proben mit 100 µl eines Fluoroescinisothiocyanat
(FITC) konjugierten Antimaus-Immunglobulins konjugiert. Nach
drei Waschvorgängen erfolgte die Analyse in einem fluo
reszenzaktivierten Fluorimeter. Zur Gewebsschnittanalyse
wurden Gefrierschnitte von CD30-positiven Lymphomen ca. 10
bis Minuten lang in Aceton-pro-Analysi bei Zimmertemperatur
fixiert und anschließend mit ca. 300 µl Ber-H2-Antikörper
präparation inkubiert. Nach einem kurzen Waschen wurde ein
Kaninchen-anti-Maus Ig Antikörper als Brückenantikörper
appliziert. Nach erneutem Waschen wurde dann der Apapkomplex
bestehend aus alkalischer Phosphatase und Antikörpern gegen
alkalische Phosphatase für 30 Minuten aufgetragen. Nach
erneutem Waschen erfolgte die Sichtbarmachung der gebundenen
alkalischen Phosphatasemoleküle mit Hilfe der Neufuchsinre
aktion (Stein et al., Lab. Invest. (1985)).
Wie bereits oben erwähnt, wurden die Toxine aus Pflanzenma
terialien extrahiert und anschließend nach in der Literatur
mitgeteilten Verfahren gereinigt. Z.B. wurde Saporin 6 aus
Saporin officinalis Samen (Stirpe et al., Biochem. J. 216,
617 (1983)) extrahiert und nach Barbieri et al (J. Chroma
togr. 408, 235 (1987)) gereinigt. Die Reinheit des Toxins
wurde mit Hilfe der SDS-Elektrophorese analysiert. Sie
erwies sich höher als 99%. Momordin wurde aus den Samen der
Momordica charantia (L Barbieri et al., Biochem. J. 186, 443
(1980)) extrahiert und nach der von Barbieri et al. be
schriebenen Methode (J. Chromagr., 408, 235 (1987)) gerei
nigt. Die Reinheit dieses Toxins wurde ebenfalls mit der
SDS-Elektrophorese untersucht. Der Reinheitsgrad erwies sich
höher als 99%. PAP-S wurde aus Samen der Phytolacca
americana extrahiert (Barbieri et al., Biochem. J. 203, 55
(1982)). Die Reinheit bestimmt mit der SDS-Gelelektrophorese
erwies sich höher als 99%.
Die Aktivität der Toxine wurde mittels eines Proteinsyn
these-Hemmtestes unter Anwendung eines in vitro Trans
lationssystems mit Kaninchenretikulozyten-Lysaten studiert
(F. Stirpe et al., Biochem. J. 240, 659 (1986)). Die IC50
(d. h. die molare Konzentration, die eine 50%-ige Hemmung
der Proteinsynthese in dem beschriebenen System verursacht)
wurde durch die Einbauhemmung von 14C-Leucin bestimmt. Die
IC50 für Saporin, Momordin und PAP-S betrug 3,7 × 10-11 M (F.
Stirpe et al., Biochem. J. 216, 617 (1983)) bzw. 6 × 10-11 M
(L. Barbieri et al., Biochem. J. 186, 334 (1980)) bzw. 3,7
× 10-11 M (L. Barbieri et al., Biochem. J. 203, 55 (1982)).
Die Toxinkonjugation wurde durch chemische Reaktion zwischen
den Ber-H2-Antikörpern und der RIP Typ 1 Toxine erhalten,
wobei beide Reaktionspartner mit 2-Iminothiolan (2-IT)
(Dinota et al., Brit. Journal Cancer 60, 315 (1989))
derivatisiert wurden.
Den Toxinlösungen (9 mg/ml in 50 mM Natriumborat, pH-Wert 9)
wurden 125 I-markiertes Toxin (106 c.p.m.) und 2-IT (Endkon
zentration 1,0 mM) hinzugegeben. Nach 30 Minuten langer
Inkubation bei Raumtemperatur wurde die Reaktion durch
Zugabe von Glycin in einer Endkonzentration von 200 mM
gestoppt. Nach weiteren 30 Minuten bei Raumtemperatur wurde
das Ellman′s Reagenz in Dimethylformamid in einer Endkonzen
tration von 2,5 mM hinzugegeben. Nach weiteren 30 Minuten
Inkubation wurde das Gemisch über eine Sephadex-G-25-Säule
(Pharmacia) gegeben. Die Elution erfolgte mit phosphatge
pufferter Saline (PBS). Die Derivatisierung der Toxine wurde
an einem Aliquat auf der Basis der optischen Dichte bei
280 nm und bei 412 nm vor und nach der Reaktion mit Dit
hiothreitol (DTT) in einer Endkonzentration von 55 mM
bestimmt.
Der Antikörperlösung (5 bis 25 mg/ml in 50 mM Natriumborat
pH 9) wurde eine Lösung von 2-IT in einer Endkonzentration
von 0,6 mM hinzugegeben. Die Derivatisierung und die
eingeführten SH-Gruppen wurden in gleicher Weise wie bei den
Toxinen bestimmt.
Die derivatisierten Toxine wurden in einem Amicon-Konzen
trator in Stickstoffatmosphäre konzentriert und reduziert
durch Zugabe 1/10 des Volumens von 0,55 mM DTT. Das redu
zierte Toxin wurde von dem reduzierenden Reagenz durch
Passage über eine Sephadex G25 Säule befreit und direkt in
einem Amicon-Konzentrator gesammelt, in dem sich auch der
derivatisierte Antikörper befand. Das Reaktionsgemisch wurde
auf 1/4 des Volumens konzentriert und bei Raumtemperatur für
20 Stunden inkubiert und anschließend über eine hochauflö
sende Gelfiltrationssäule mit Sephacryl S-200 (Pharmacia)
gegeben und mit PBS eluiert. Die in den eluierten Fraktionen
erhaltene Radioaktivität wurde mit der optischen Dichte bei
280 nm verglichen. Der erste Peak korrelierte mit einem
Konjugat von hohem Molekulargewicht, der zweite Peak mit
einem Konjugat von niedrigem Molekulargewicht; dann folgten
Trimere, Dimere und Monomere des Toxins. Der freie Antikör
per wurde mit der letzten Fraktion des niedrig-molekularen
Konjugats koeluiert wie aus dem teilweise sich überlappenden
Peak der Radioaktivität und der optischen Dichtmessung bei
280 nm hervorgeht (Figur 2).
Die Fraktionen, die das niedrig-molekulare Konjugat enthiel
ten, wurden gesammelt; das Verhältnis von Toxin zu dem Ber-
H2-Antikörper wurde ermittelt, indem die Absorption bei
280 nm und die Radioaktivität der Peaks des niedrig-moleku
laren Konjugats und des freien Toxins in Bezug gesetzt
wurden. Mit der beschriebenen Technik wurden Immunotoxine
präpariert; repräsentativ für die Erfindung sind das
Immuntoxin Ber-H2-Saporin 6 (Ber-H2/SO-6), Ber-H2/PAP-S und
Ber-H2/Momordin. Das molare Verhältnis von Toxin und
Antikörper bewegte sich - abhängig von dem Toxin und dem
derivatisierenden Reagenz - zwischen 1 und 3. Im einzelnen
beträgt dieses Verhältnis im Durchschnitt für das Immunoto
xin Ber-H2/SO-6 2,25, für das Immunotoxin Ber-H2/PAP-S 1,55
und für das Immuntoxin Ber-H2/Momordin 1,75.
Die Bindungsaktivität wie auch die biologische Aktivität der
Konjugate wurde bestimmt mit der unter 3. beschriebenen
Technik. Wie in Figur 1 illustriert beeinträchtigt die
Konjugation die Bindungscharakteristik des Ber-H2-Antikör
pers in keiner Weise.
Die biologische Aktivität wird durch die Hemmung des
Einbaus von 14-Leucin in Proteine gemessen, die in einem
Retikulozyten-Lysatsystem wie unter 4. beschrieben,
produziert werden. Die ermittelten IC50-Werte der hier
beschriebenen Immunotoxine charakterisieren die Erfindung
(Tabelle 1).
Das Verfahren wurde nach der Beschreibung von Stirpe et
al., Biochem. J. 240, 659 (1986 durchgeführt). 2 × 104
COLE-Zellen, L428-Zellen oder L540-Zellen wurden in
200 µl RPMI 1640 Medium in einer 96-Mikrotiterlochplatte
bei 37°C 24 Stunden lang entweder mit dem Antikörper, dem
Toxin oder dem entsprechenden Immunotoxin in Konzen
trationen zwischen 5 × 10-15 (5 × 10-13 für COLE-Zellen) und
5 × 10-8 M inkubiert. Dann wurden H3-Leucin (2 µCi/Loch)
hinzugegeben; nach einer Inkubation von 18 Stunden bei
37°C wurden die Zellen mit einem Zellharvester (Titertek-
Flow) geerntet. Die inkorporierte Aktivität wurde in
einem ß-Counter (LKB) gemessen und die IC50 der verschie
denen Moleküle mittels einer linearen Regressionsanalyse
berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 wiedergege
ben.
Es sei darauf hingewiesen, daß der IC50-Wert des freien
Toxins höher ist als 10-8 M, während der Ber-H2-Antikörper
überhaupt keine Toxizität entfaltet, sogar nicht in den
höchsten Konzentrationen.
Claims (10)
1. Immunotoxine, gekennzeichnet durch einen Gehalt an monoklo
nalen CD30 Antikörpern, kovalent gebunden an RIP Typ 1-
Toxine.
2. Immunotoxine nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
die monoklonalen Antikörper dem Typ Ber-H2 angehören.
3. Immunotoxine nach den Ansprüchen 1 oder 2, dadurch gekenn
zeichnet, daß die RIP Typ 1-Toxine ausgewählt sind aus der
Gruppe bestehend aus Saporin, Bryodin, aus Asparagus offici
nalis gereinigte Toxin, PAP, Momordin, Momorcochin-S,
Dinathin, Gelonin und Trichosanthin.
4. Immunotoxin nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß das
RIP Typ 1-Toxin Saporin, PAP und/oder Momordin ist.
5. Verfahren zum Herstellen der Immunotoxine nach den An
sprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man das Toxin
über heterobifunktionale Reagenzien an den Antikörper
bindet.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man
als heterobifunktionale Reagenzien N-Succinimidyl-3-(2-
pyridyldithio)-propionat, 2-Iminothiolan, S-Acetyl-mercapto
bernsteinsäureanhydrid, Carbodiimid oder Glutaraldehyd
verwendet.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man
als heterobifunktionales Reagenz 2-Iminothiolan verwendet.
8. Pharmazeutische Präparate zur Behandlung von Tumoren,
dadurch gekennzeichnet, daß sie als Wirkstoff Immunotoxine
nach den Ansprüchen 1 bis 4 enthalten.
9. Pharmazeutische Präparate nach Anspruch 8 zur selektiven
in vivo oder ex vivo Elimination von CD30-positiven Zellen.
10. Pharmazeutische Präparate nach den Ansprüchen 8 oder 9,
dadurch gekennzeichnet, daß sie den Wirkstoff in Lösung oder
als Suspension in therapeutisch wirksamer Dosierung enthal
ten.
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DE4205938A DE4205938A1 (de) | 1992-02-27 | 1992-02-27 | Immunotoxine |
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-
1992
- 1992-02-27 DE DE4205938A patent/DE4205938A1/de not_active Withdrawn
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