DE3529733A1 - Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismen - Google Patents
Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismenInfo
- Publication number
- DE3529733A1 DE3529733A1 DE19853529733 DE3529733A DE3529733A1 DE 3529733 A1 DE3529733 A1 DE 3529733A1 DE 19853529733 DE19853529733 DE 19853529733 DE 3529733 A DE3529733 A DE 3529733A DE 3529733 A1 DE3529733 A1 DE 3529733A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- chemical compound
- spp
- organic chemical
- compound according
- agar
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
- A01N47/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides
- A01N47/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having a double or triple bond to nitrogen, e.g. cyanates, cyanamides containing —N=CX2 groups, e.g. isothiourea
- A01N47/44—Guanidine; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/365—Nocardia
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue organisch-
chemische Verbindung, welche im folgenden kurz Rodaplutin
genannt wird, ein Verfahren zu ihrer Herstellung auf im
wesentlichen mikrobiologischem Wege und ihre Verwendung
als Mikrobizid und Schädlingsbekämpfungsmittel vorzugsweise
zur Bekämpfung von tierischen Schädlingen, Schadpilzen,
Bakterien und Unkräutern.
Es wurde das neue Rodaplutin, für das aufgrund der vorliegenden
spektroskopischen und sonstigen analytischen
Ergebnisse die folgende Formel (I)
vorgeschlagen wird, gefunden.
Weiterhin wurde gefunden, daß das neue Rodaplutin zur Bekämpfung
von Schädlingen (und Parasiten) bei Pflanzen (und
Warmblütern) verwendet werden kann. Es weist insbesondere
eine hohe Wirksamkeit gegen Arthropoden (wie Insekten und
Spinnentiere), Pilze und Bakterien sowie herbizide Eigenschaften
auf. Die neue Verbindung und diese Verbindung
enthaltende Mittel können aufgrund dieser Eigenschaften
besonders vorteilhaft im Pflanzenschutz, Vorratsschutz,
im Hygienebereich sowie in der Tierzucht und Tierhaltung
eingesetzt werden.
Die neue Verbindung der Formel I wird dadurch erhalten,
daß man geeignete Mikroorganismen der Ordnung Actinomycetales,
vorzugsweise aus der Gattung Nocardioides in
üblicher Weise in einem Nährmedium, welches assimilierbare
Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie Mineralsalze
enthält, unter aeroben Bedingungen kultiviert und die
gewünschte Verbindung nach üblichen Methoden isoliert.
Bei Kenntnis der Eigenschaften der neuen erfindungsgemäßen
Verbindung ist es mit Hilfe von üblichen chromatographischen,
spektroskopischen und/oder mikrobiologischen
(z. B. Hemmhoftest) Methoden leicht und rasch möglich, in
Routineverfahren solche geeigneten Mikroorganismenstämme
auszusuchen, welche das erfindungsgemäße Rodaplutin
produzieren.
Für die mikrobiologische Herstellung der erfindungsgemäßen
Verbindung werden bevorzugt Nocardioides albus-Stämme eingesetzt.
Ganz besonders bevorzugt werden hierbei die
Nocardioides albus-Stämme VN 14 und VA 10 sowie die
Varianten und Mutanten dieser Stämme, welche die für die
Ausführung der vorliegenden Erfindung wesentlichen Merkmale
aufweisen.
Die Stämme VN 14 und VA 10 sind neu und wurden bei der
Deutschen Sammlung von Mikroorganismen (DSM), Grisebachstraße 8,
3400 Göttingen, Bundesrepublik Deutschland
hinterlegt.
Stamm VN 14 wurde als Nocardioides albus Prauser (1976)
aufgrund seiner Morphologie, Physiologie und der Zellwandbestandteile
(Chemotyp I nach Lechevalier
& Lechevalier, 1970) bestimmt.
Stamm VN 14 wurde am 19.11.1979 aus einer Erdprobe mit
Hilfe des Ausstrichverfahrens auf KEHE-Agar isoliert.
Herkunft der Erdprobe: UDSSR, Georgien, Südseite des
Kaukasus, an der Grusinischen Heeresstraße zwischen Tiflis
und Ordschonikidse, unter Hainbuchen, 9.9.1979
(F. Vobis).
VN 14 wächst auf Agar-Medien mit Luft- und Substratmycel.
Die stark verzweigten Hyphen im Substratmycel haben einen
Durchmesser von 0,5 bis 0,8 µm. Die Hyphen können in stäbchenförmige
oder coccoide Zellen (Sporen) zerfallen. Das
Luftmycel besteht aus geraden bis unregelmäßig gebogenen,
langen Hyphen. Verzweigungen sind spärlich, meist beim
Austritt der Hyphen aus dem Substrat. Die Luftmycelhyphen
zergliedern sich vollständig in zahlreiche Sporen, die in
langen Ketten hintereinander liegen. Die Sporen sind stäbchenförmig
und besitzen glatte Oberflächen. Die Größe der
Sporen beträgt:
Länge 0,6 bis 0,9 µm, Breite 0,4 bis 0,6 µm. Es wurden keine beweglichen Stadien beobachtet.
Länge 0,6 bis 0,9 µm, Breite 0,4 bis 0,6 µm. Es wurden keine beweglichen Stadien beobachtet.
1. Temperaturbereich des Wachstums
Getestet in Röhrchen auf E-Agar; Inkubationszeit: 8 Tage
Unter 1. verwendete Abkürzungen:
W = Wachstum
SM = Substratmycel
SP = Substratverfärbendes Pigment
LM = Luftmycel
+ = gut entwickelt
(+) = schwach entwickelt
- = fehlt bzw. keine Entwicklung
W = Wachstum
SM = Substratmycel
SP = Substratverfärbendes Pigment
LM = Luftmycel
+ = gut entwickelt
(+) = schwach entwickelt
- = fehlt bzw. keine Entwicklung
2. Gelatine Verflüssigung
Test auf Glucose-Pepton-Gelatine-Medium in Röhrchen bei
20°C, Kontrolle nach 14 Tagen.
Gelatine-Verflüssigung: stark
Gelatine-Verflüssigung: stark
3. Stärke-Hydrolyse
Getestet auf Stärke-Agar und E-Agar in Petri-Schalen
(⌀ 2 cm); Nachweis der Stärke mit Jodjodkalium-Lösung nach
8 Tagen; Wachstumstemperatur 20°C, Wachstum auf beiden
Medien gut bis sehr gut.
Stärkeabbau: stark
Stärkeabbau: stark
4. Peptonisierung von Casein
Getestet auf halbkonzentriertem Magermilch-Agar (Ca/2) in
Petrischalen (⌀ 2 cm); bebrütet bei 20°C; Wachstum gut;
Kontrolle nach 8 Tagen: deutlich sichtbarer heller Hof um
die Kolonien.
Casein-Peptonisierung: stark
Casein-Peptonisierung: stark
5. Bildung von melanoidem Pigment
Test auf Tyrosin-Agar (ISP Nr. 7), Tyrosin-Agar nach
Gordon & Smith (1955) und Pepton-Hefe-Eisen-Agar
(ISP Nr. 6) in Röhrchen. Inkubiert bei 20°C, kontrolliert
nach 14 Tagen.
Ergebnis: kein melanoides Pigment
Ergebnis: kein melanoides Pigment
6. Nitrat-Reduktion
Getestet auf Saccharose-Nitrat-Agar: bebrütet bei 20°C in
Röhrchen: Nachweis des Nitrits nach Müller & Melchinger
(1964).
Nitrat-Reduktion: stark
Nitrat-Reduktion: stark
7. Verwertung verschiedener Kohlenstoffquellen
Getestet mit Mineralsalz-Agar (Pridham-Gottlieb-Agar)
unter Zugabe verschiedener C-Quellen bebrütet bei 28°C in
Kulturröhrchen.
Hierbei bedeuten:
++: Wachstum gleich oder besser als auf Glucose
+ : Wachstum schlechter als auf Glucose
- : Wachstum gleich oder schlechter als auf Mineralsalz- Agar
++: Wachstum gleich oder besser als auf Glucose
+ : Wachstum schlechter als auf Glucose
- : Wachstum gleich oder schlechter als auf Mineralsalz- Agar
Stamm VA 10 wurde als Nocardioides albus Prauser (1976)
aufgrund seiner Morphologie, Physiologie und der Zellwandbestandteile
(Chemotyp I nach Lechevalier
& Lechevalier, 1970) bestimmt.
Stamm VA 10 wurde am 19.11.1979 aus einer Erdprobe mit
Hilfe des Ausstrichverfahrens auf KEHE-Agar isoliert.
Herkunft der Erdprobe: UDSSR, Georgien, Südseite des
Kaukasus, an der Grusinischen Heeresstraße zwischen Tiflis
und Ordschonikidse, unter Hainbuchen, 9.9.1979
(F. Vobis).
VA 10 wächst auf Agar-Medien mit Luft- und Substratmycel.
Die stark verzweigten Hyphen im Substratmycel haben einen
Durchmesser von 0,5 bis 0,8 µm. Die Hyphen können in stäbchenförmige
oder coccoide Zellen (Sporen) zerfallen. Das
Luftmycel besteht aus geraden bis unregelmäßig gebogenen,
langen Hyphen. Verzweigungen sind spärlich, meist beim
Austritt der Hyphen aus dem Substrat. Die Luftmycelhyphen
zergliedern sich vollständig in zahlreiche Sporen, die in
langen Ketten hintereinander liegen. Die Sporen sind stäbchenförmig
und besitzen glatte Oberflächen. Die Größe der
Sporen von VA 10 beträgt:
Länge 0,8 bis 1,0 µm, Breite 0,4 bis 0,5 µm. Es wurden keine beweglichen Stadien beobachtet.
Länge 0,8 bis 1,0 µm, Breite 0,4 bis 0,5 µm. Es wurden keine beweglichen Stadien beobachtet.
1. Temperaturbereich des Wachstums
Getestet in Röhrchen auf E-Agar; Inkubationszeit: 8 Tage
Abkürzungen vergleiche C1 bei Stamm VN 14 (oben)
2. Gelatine-Verflüssigung
Test auf Glucose-Pepton-Gelatine-Medium in Röhrchen bei
20°C, Kontrolle nach 14 Tagen.
Gelatine-Verflüssigung: stark
Gelatine-Verflüssigung: stark
3. Stärke-Hydrolyse
Getestet auf Stärke-Agar und E-Agar in Petri-Schalen
(⌀ 2 cm), Nachweis der Stärke mit Jodjodkalium-Lösung nach
8 Tagen, Wachstumstemperatur 20°C, Wachstum auf beiden
Medien gut bis sehr gut.
Stärkeabbau: stark
Stärkeabbau: stark
4. Peptonisierung von Casein
Getestet auf halbkonzentriertem Magermilch-Agar (Ca/2) in
Petrischalen (⌀ 2 cm), bebrütet bei 20°C; Wachstum gut;
Kontrolle nach 8 Tagen; deutlich sichtbarer heller Hof um
die Kolonien.
Casein-Peptonisierung: stark
Casein-Peptonisierung: stark
5. Bildung von melanoidem Pigment
Test auf Tyrosin-Agar (ISP Nr. 7), Tyrosin-Agar nach
Gordon & Smith (1955) und Pepton-Hefe-Eisen-Agar
(ISP Nr. 6) in Röhrchen. Inkubiert bei 20°C, kontrolliert
nach 14 Tagen.
Ergebnis: kein melanoides Pigment
Ergebnis: kein melanoides Pigment
6. Nitrat-Reduktion
Getestet auf Saccharose-Nitrat-Agar: bebrütet bei 20°C in
Röhrchen: Nachweis des Nitrits nach Müller & Melchinger
(1964).
Nitrat-Reduktion: stark
Nitrat-Reduktion: stark
7. Verwertung verschiedener Kohlenstoffquellen
Getestet mit Mineralsalz-Agar (Pridham-Gottlieb-Agar)
unter Zugabe verschiedener C-Quellen bebrütet bei 28°C in
Kulturröhrchen.
Hierbei bedeuten:
++: Wachstum gleich oder besser als auf Glucose
+ : Wachstum schlechter als auf Glucose
- : Wachstum gleich oder schlechter als auf Mineralsalz- Agar
++: Wachstum gleich oder besser als auf Glucose
+ : Wachstum schlechter als auf Glucose
- : Wachstum gleich oder schlechter als auf Mineralsalz- Agar
Zusammensetzung verwendeter Nährmedien:
1. Saccharose-Nitrat-Agar
30 g Saccharose, 2 g NaNO3, 1 g K2HPO, 0,5 g MgSO4O7 H2O, 0,5 g KCl, 0,01 g FeSO4 × 7 H2O, 10-20 g Agar, 1000 ml destilliertes Wasser, pH 7,0-7,3
30 g Saccharose, 2 g NaNO3, 1 g K2HPO, 0,5 g MgSO4O7 H2O, 0,5 g KCl, 0,01 g FeSO4 × 7 H2O, 10-20 g Agar, 1000 ml destilliertes Wasser, pH 7,0-7,3
2. Stärke-Agar
Lösung 1: 10 g lösliche Särke, anlösen mit wenig destilliertem Wasser zu einem Brei und verdünnen auf 500 ml.
Lösung 1: 10 g lösliche Särke, anlösen mit wenig destilliertem Wasser zu einem Brei und verdünnen auf 500 ml.
Lösung 2: 1 g K2HPO4, 1 g MgSO4 × 7 H2O, 1 g NaCl, 2 g
(NH4)2SO4, 2 g CaCO3, 500 ml destilliertes Wasser,
1 ml Spurenelementlösung (0,1 g FeSO4 × 7 H2O, 0,1 g
MnCl2 × 4 H2O, 0,1 g ZnSO4x7 H2O, 100 ml destilliertes
Wasser)
Lösung 1 und Lösung 2 werden gemischt und mit 15-20 g Agar versetzt.
Lösung 1 und Lösung 2 werden gemischt und mit 15-20 g Agar versetzt.
3. Tryosin-Agar
15 g Glycerin, 0,5 g L-Tyrosin, 1 g L-Asparagin, 0,5 g K2HPO4, 0,5 g MgSO4 × 7 H2O, 0,5 g NaCl, 0,01 g FeSO4 × 7 H2O, 1000 ml destilliertes Wasser, 1 ml Spurenelementlösung (0,1 g FeSO4 × 7 H2O, 0,1 g MnCl2 × 4 H2O, 0,1 g ZnSO4 × 7 H2O, 100 ml destilliertes Wasser), pH 7,2-7,4, 15-20 g Agar
15 g Glycerin, 0,5 g L-Tyrosin, 1 g L-Asparagin, 0,5 g K2HPO4, 0,5 g MgSO4 × 7 H2O, 0,5 g NaCl, 0,01 g FeSO4 × 7 H2O, 1000 ml destilliertes Wasser, 1 ml Spurenelementlösung (0,1 g FeSO4 × 7 H2O, 0,1 g MnCl2 × 4 H2O, 0,1 g ZnSO4 × 7 H2O, 100 ml destilliertes Wasser), pH 7,2-7,4, 15-20 g Agar
Weitere gemäß der vorliegenden Beschreibung eingesetzte
Medien vergleiche D. Schäfer: "Beiträge zur Klassifizierung
und Taxonomie der Actinoplanaceen", Dissertation,
Universität Marburg, 1973.
Die Struktur der neuen erfindungsgemäßen Verbindung wurde
anhand von umfangreichen analytischen, insbesondere
spektroskopischen Untersuchungen ermittelt. Da jedoch bei
kompliziert gebauten Stoffen Irrtümer in der Interpretation
der analytischen Befunde nicht immer völlig ausgeschlossen
werden können, soll Rodaplutin auch durch einige
charakteristische physikalisch-chemische Daten sowie
Spektren beschrieben werden:
a) Aussehen: farbloses, amorphes Pulver
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser,
löslich in Methanol und DMSO
schwer löslich in Chloroform
c) Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel, KG Si60 F254,
Fa. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik
Deutschland):
d) CHCl3:CH3OH: konz. NH3 (4:4:2 Vol.-Teile) Rf: 0,42
e) Molgewicht: 565
f) Summenformel (Elementaranalyse): C24H39N9O7
g) Spektren: UV Fig. 1
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
Das neue Rodaplutin wird erfindungsgemäß durch die Fermentation
geeigneter Mikroorganismenstämme der Ordnung
Actinomycetales, wie DSM 3176 oder DSM 3177 oder deren
Mutanten oder Varianten erzeugt.
Das erfindungsgemäße Fermentationsverfahren kann mit Hilfe
fester, halbfester oder flüssiger Nährmedien durchgeführt
werden. Bevorzugt werden wäßrig-flüssige Nährmedien verwendet.
Die Beimpfung der Nährmedien erfolgt nach allgemein üblichen
Methoden, z. B. über Schrägröhrchen oder Kolbenkulturen.
Die Kultur erfolgt unter aeroben Bedingungen und kann
gemäß den allgemein üblichen Methoden wie unter Verwendung
von Schüttelkulturen z. B. in Schüttelkolben, von luftbewegten
Kulturen oder von Submerskulturen durchgeführt
werden. Bevorzugt erfolgt die Kultivierung im aeroben
Submersverfahren in belüfteten Fermentern, z. B. in üblichen
Submersfermentationstanks. Es ist möglich, die
Kulturen kontinuierlich oder diskontinuierlich durchzuführen.
Vorzugsweise wird diskontinuierlich gearbeitet.
Die Kultur kann in allen Nährmedien durchgeführt werden,
welche bekannterweise zur Kultivierung von Mikroorganismen
der Ordnung Actinomycetales verwendet werden. Das Nährmedium
muß eine oder mehrere assimilierbare Kohlenstoffquellen
und Stickstoffquellen sowie Mineralsalze enthalten,
wobei diese Produkte in Form von definierten
Einzelbestandteilen, aber auch in Form von komplexen Gemischen,
wie sie insbesondere biologische Produkte verschiedenen
Ursprungs darstellen, vorliegen können. Als
Kohlenstoffquellen kommen alle üblichen Kohlenstoffquellen
in Frage. Beispielsweise seien Kohlenhydrate, insbesondere
Polysaccharide, wie Stärke oder Dextrine, Disaccharide,
wie Maltose oder Rohrzucker, Monosaccharide, wie Glycose
oder Xylose, Zuckeralkohole, wie Mannit oder Glycerin
sowie natürlich vorkommende Gemische wie Malzextrakt,
Melasse oder Molkepulver genannt. Als Stickstoffquellen
kommen alle üblichen organischen und anorganischen Stickstoffquellen
in Frage. Beispielsweise seien Eiweißstoffe,
Eiweißhydrolysate, Aminosäuren, wie Glutaminsäure,
Asparaginsäure, Arginin, Lysin, Ornithin oder Serin,
Nucleosidbasen, wie Cytosin oder Uracil sowie Sojabohnenmehl,
Baumwollsamenmehl, Linsenmehl, Erbsenmehl, lösliche
und unlösliche, pflanzliche Proteine, Maisquellwasser,
Hefeextrakt, Peptone und Fleischextrakt sowie Ammoniumsalze
und Nitrate, z. B. NH4Cl, (NH4)2SO4, Na NO3 und KNO3
aufgeführt. Die Mineralsalze, welche im Nährmedium
enthalten sein sollten, liefern z. B. folgende Ionen:
Mg++, Na⁺, K⁺, Ca++, NH4⁺, Cl-, SO4 --, PO4 --- und NO3 -
sowie Ionen der üblichen Spurenelemente, wie Cu, Fe, Mn,
Mo, Zn, Co, Ni. Falls die Kohlenstoff- oder Stickstoffquellen
bzw. das verwendete Wasser nicht ausreichend diese
Salze bzw. Spurenelemente enthalten, ist es zweckmäßig,
das Nährmedium entsprechend zu ergänzen. Die Zusammensetzung
der Nährmedien kann in weiten Bereichen variiert
werden. Art und Zusammensetzung der Nährmedien werden
im allgemeinen davon abhängig sein, welche Bestandteile
jeweils besonders günstig zur Verfügung stehen. Im allgemeinen
enthalten die Nährlösungen vorzugsweise etwa 0,5
bis 8%, insbesondere 0,6 bis 6% Kohlenstoffquellen,
vorzugsweise etwa 0,5 bis 4%, insbesondere 0,5 bis 2%
Stickstoffquellen und vorzugsweise etwa 0,001 bis 0,5%,
insbesondere 0,003 bis 0,3% Mineralsalze.
Bei der Durchführung des Verfahrens kann es günstig sein,
zu Beginn der Kultivierung nur relativ geringe Konzentrationen
der löslichen Nährlösungsbestandteile zu verwenden
und dann im Laufe der ersten 3 Kultivierungstage durch
häufigere Zusätze diese Bestandteile in Form steriler,
relativ konzentrierter Lösung dem Kulturansatz fraktioniert
zuzufüttern.
Der pH-Wert der wachsenden Kulturen sollte vorzugsweise
zwischen etwa 5 und etwa 10, insbesondere zwischen 6,5 und
9,5 gehalten werden. Ein zu starker pH-Abfall in den
sauren Bereichen kann durch Zusätze einer organischen oder
anorganischen Base, vorzugsweise von CaCO3 vermieden
werden. Wie in der Fermentationstechnologie üblich, kann
auch eine automatische pH-Regulierung durchgeführt werden,
bei der sterile organische oder anorganische Säure, z. B.
H2SO4, oder sterile Lauge, z. B. NaOH in Abständen in die
Kulturlösung eingespritzt wird.
Es ist zweckmäßig sicherzustellen, daß die Mikroorganismen
ausreichend mit Sauerstoff sowie den Nährstoffen in
Kontakt gebracht werden. Dies kann nach den allgemein üblichen
Methoden wie Schütteln und Rühren erfolgen.
Die Züchtungstemperatur kann zwischen etwa 15 und etwa
40°C, vorzugsweise zwischen 20 und 35°C liegen, besonders
bevorzugt liegt sie bei etwa 28°C. Die Dauer der Züchtung
kann stark variiert werden, wobei z. B. die Zusammensetzung
des Nährmediums und die Züchtungstemperatur eine Rolle
spielen. Die jeweiligen optimalen Bedingungen können von
jedem Fachmann auf dem mikrobiologischen Gebiet leicht
festgelegt werden.
Es hat sich herausgestellt, daß die Menge der sich in der
Kulturbrühe anreichernden erfindungsgemäßen Verbindung im
allgemeinen ihr Maximum etwa 1 bis 10, vorzugsweise etwa
4 bis 7 Tage nach Züchtungsbeginn erreicht. Das gewünschte
Endprodukt der Fermentation kann mit Hilfe von dünnschichtchromatographischen
Untersuchungen, im Plattendiffusionstest
mit einem geeigneten Pilz als Teststamm
oder anhand der insektiziden Wirksamkeit bestimmt werden.
Wie allgemein bei mikrobiologischen Verfahren sollten
Fremdinfektionen der Kulturmedien vermieden werden. Hierzu
werden die üblichen Vorkehrungen getroffen, wie Sterilisation
der Nährmedien, der Kulturgefäße sowie der für die
Belüftung notwendigen Luft. Zur Sterilisation der Vorrichtungen
können z. B. die Dampf- als auch die Trockensterilisation
verwendet werden, wobei die Temperaturen
vorzugsweise bei 100 bis 140°C, insbesondere bei 120 bis
130°C liegen können.
Falls bei der Kultivierung in unerwünschter Menge Schaum
entsteht, können die üblichen chemischen Schaumdämpfungsmittel,
z. B. flüssige Fette und Öle, Öl-Wasser-Emulsionen,
Paraffine, höhere Alkohole, wie Octadecanol, Siliconöle,
Polyoxyethylen- bzw. Polyoxypropylenverbindungen (z. B. in
Mengen bis etwa 1%) zugesetzt werden. Schaum kann auch
mit Hilfe der üblichen mechanischen Vorrichtungen (welche
z. B. Zentrifugalkräfte benutzen) gedämpft oder beseitigt
werden.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann aus dem Kulturmedium
nach allgemein üblichen physikalisch-chemischen Methoden
isoliert werden. Die Isolierung kann z. B. gemäß den
üblichen Extraktionsverfahren, Fällungsverfahren und/oder
Chromatographieverfahren erfolgen. Der isolierte Stoff
kann mit Hilfe der genannten Methoden auch feingereinigt
werden. Für viele Fälle ist jedoch eine Feinreinigung
nicht erforderlich, da gegebenenfalls vorhandene geringfügige
Verunreinigungen die Wirksamkeit der Verbindung
nicht nachteilig beeinflußt.
Um bei den oben angegebenen Isolierungs- und Reinigungsmethoden
die Fraktionen herauszufinden, in welchen die
erfindungsgemäße Verbindung in höchster Konzentration bzw.
Reinheit vorliegt, können die üblichen physikalisch-
chemischen Methoden, z. B. Messen einer charakteristischen
Bande im Spektrum oder der Rf-Werte, Bestimmung der antimikrobiellen
Aktivität usw. herangezogen werden. Diese
Methoden können auch verwendet werden, um in Routineverfahren
geeignete Mikroorganismen aufzufinden.
Die Isolierung und Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindung
kann z. B. im Falle, daß ein flüssiges wäßriges
Nährmedium verwendet wird, wie folgt vorgenommen werden:
Nach seiner Anreicherung im Kulturüberstand werden Kulturfiltrat
und Mycel mit üblichen Methoden separiert (z. B.
Zentrifugation).
Aus dem Kulturfiltrat kann die erfindungsgemäße Verbindung
mit Hilfe von üblichen Extraktionsverfahren, Fällungsverfahren
und/oder Chromatographieverfahren isoliert und gegebenenfalls
gereinigt werden. Die Chromatographie kann
in Form der Säulenchromatographie durchgeführt werden.
Als Adsorptionsmittel können die üblichen anorganischen
oder organischen Adsorptionsmittel eingesetzt werden, wie
z. B. Aluminiumoxid, Kieselgel, Magnesiumsilikat, Aktivkohle,
Cellulose, Cellulosederivate, Kunstharze wie Polyamide,
z. B. acetyliertes Polyamid, Dextrangele oder modifizierte
Dextrangele. Als Laufmittel können die verschiedensten
Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemische verwendet
werden, in welchen die erfindungsgemäße Verbindung löslich
ist. Bevorzugt werden Wasser, Ammoniaklösung, Chloroform
und Methanol oder ihre Gemische (beispielsweise Gemische
aus Chloroform, Methanol und wäßrigem NH3 oder Methanol
und Wasser) eingesetzt.
Bevorzugt werden zur Isolierung der erfindungsgemäßen Verbindung
Chromatographie-Verfahren verwendet, z. B. unspezifische
Adsorption an Sorbentien wie Kieselgel, Ionenaustauschchromatographie
oder Geldiffusionschromatographie.
Dies sind die von der Reinigung wasserlöslicher, geladener
Naturstoffe her bekannten Methoden.
Aus ihren Lösungen kann die erfindungsgemäße Verbindung
nach den üblichen Methoden, z. B. Verdampfen des Lösungsmittels,
Gefriertrocknung usw. erhalten werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird
aus dem bei der aeroben Kultur der Stämme bei etwa 28°C
erhaltenen Fermentationsgut (Kulturbrühe und Mycel) durch
Zentrifugation das Kulturfiltrat gewonnen.
Der neue Stoff kann auch aus dem Kulturfiltrat durch Adsorption
an Aktivkohle bzw. an geeignete Harze isoliert
werden. Als ökonomischste Methode erwies sich die Bindung
des erfindungsgemäßen Stoffes an unspezifische Adsorberharze
auf Polystyrolbasis (z. B. Amberlite XAD oder Lewatit
OC 1031). Die Desorption des erfindungsgemäßen Stoffes
wird fraktioniert, durch Mischungen aus Wasser und organischen
Lösungsmitteln, insbesondere Wasser/Methanol
vorgenommen. Die durch den Test gegen Plutella maculipennis
ermittelten aktiven Fraktionen werden unter reduziertem
Druck bis zur vollständigen Entfernung des organischen
Lösungsmittels konzentriert und gefriergetrocknet.
Das gefriergetrocknete Rohprodukt wird in Wasser aufgenommen
und nach dem Abtrennen der unlöslichen Bestandteile
durch übliche chromatographische Verfahren weiter gereinigt.
Bevorzugt werden dabei eine erneute Bindung an Adsorberharze
(z. B. Lewatit OC 1031), eine weitere Reinigung
der aktiven Fraktionen durch Chromatographie an üblichen
Kationenaustauschern (z. B. CM-Sephadex). Der neue Stoff
wird schließlich durch übliche chromatographische Methoden,
vorzugsweise durch Chromatographie an Kieselgel, rein
dargestellt.
Aufgrund seiner günstigen biologischen Eigenschaften kann
die erfindungsgemäße Verbindung als Schädlingsbekämpfungsmittel
zur Bekämpfung von Pflanzenschädlingen, Vorratsschädlingen
und Materialschädlingen verwendet werden,
wobei tierische Schädlinge, insbesondere Insekten,
Spinnentiere und Nematoden sowie mikrobielle Schädlinge,
insbesondere Pilze und Bakterien bekämpft werden können.
Darüber hinaus ist auch die Bekämpfung von Parasiten
(Endo- und Ektoparasiten) bei Warmblütern, insbesondere
in der Tierzucht und Tierhaltung durch die erfindungsgemäße
Verbindung möglich. Die Anwendungsbeispiele der neuen
Verbindung werden im folgenden erläutert:
Der Wirkstoff eignet sich bei guter Verträglichkeit zur
Bekämpfung von tierischen Schädlingen, insbesondere Insekten,
Spinnentieren und Nematoden, die in der Landwirtschaft,
in Forsten, im Vorrats- und Materialschutz sowie
auf dem Hygienesektor vorkommen. Sie sind gegen normal
sensible und resistente Arten sowie gegen alle oder
einzelne Entwicklungsstadien wirksam. Zu den oben erwähnten
Schädlingen gehören:
Aus der Ordnung der Isopoda z. B. Oniscus asellus, Armadillidium
vulgare, Porcellio scaber.
Aus der Ordnung der Diplopoda z. B. Blaniulus guttulatus.
Aus der Ordnung der Chilopoda z. B. Geophilus carpophagus, Scutigera spec.
Aus der Ordnung der Symphyla z. B. Scutigerella immaculata.
Aus der Ordnung der Thysanura z. B. Lepisma saccharina.
Aus der Ordnung der Collembola z. B. Onychiurus armatus.
Aus der Ordnung der Orthoptera z. B. Blatta orientalis, Periplaneta americana, Leucophaea maderae, Blattella germanica, Acheta domesticus, Gryllotalpa spp., Locusta migratoria migratorioides, Melanoplus differentialis, Schistocerca gregaria.
Aus der Ordnung der Dermaptera z. B. Forficula auricularia.
Aus der Ordnung der Isoptera z. B. Reticulitermes spp..
Aus der Ordnung der Anoplura z. B. Phylloxera vastatrix, Pemphigus spp., Pediculus humanus corporis, Haematopinus spp., Linognathus spp.
Aus der Ordnung der Mallophaga z. B. Trichodectes spp., Damalinea spp.
Aus der Ordnung der Thysanoptera z. B. Hercinothrips femoralis, Thrips tabaci.
Aus der Ordnung der Heteroptera z. B. Eurygaster spp., Dysdercus intermedius, Piesma quadrata, Cimex lectularius, Rhodnius prolixus, Triatoma spp.
Aus der Ordnung der Homoptera z. B. Aleurodes brassicae, Bemisia tabaci, Trialeurodes vaporariorum, Aphis gossypii, Brevicoryne brassicae, Cryptomyzus ribis, Doralis fabae, Doralis pomi, Eriosoma lanigerum, Hyalopterus arundinis, Macrosiphum avenae, Myzus spp., Phorodon humuli, Rhopalosiphum padi, Empoasca spp., Euscelis bilobatus, Nephotettix cincticeps, Lecanium corni, Saissetia oleae, Laodelphax striatellus, Nilaparvata lugens, Aonidiella aurantii, Aspidiotus hederae, Pseudococcus spp. Psylla spp.
Aus der Ordnung der Diplopoda z. B. Blaniulus guttulatus.
Aus der Ordnung der Chilopoda z. B. Geophilus carpophagus, Scutigera spec.
Aus der Ordnung der Symphyla z. B. Scutigerella immaculata.
Aus der Ordnung der Thysanura z. B. Lepisma saccharina.
Aus der Ordnung der Collembola z. B. Onychiurus armatus.
Aus der Ordnung der Orthoptera z. B. Blatta orientalis, Periplaneta americana, Leucophaea maderae, Blattella germanica, Acheta domesticus, Gryllotalpa spp., Locusta migratoria migratorioides, Melanoplus differentialis, Schistocerca gregaria.
Aus der Ordnung der Dermaptera z. B. Forficula auricularia.
Aus der Ordnung der Isoptera z. B. Reticulitermes spp..
Aus der Ordnung der Anoplura z. B. Phylloxera vastatrix, Pemphigus spp., Pediculus humanus corporis, Haematopinus spp., Linognathus spp.
Aus der Ordnung der Mallophaga z. B. Trichodectes spp., Damalinea spp.
Aus der Ordnung der Thysanoptera z. B. Hercinothrips femoralis, Thrips tabaci.
Aus der Ordnung der Heteroptera z. B. Eurygaster spp., Dysdercus intermedius, Piesma quadrata, Cimex lectularius, Rhodnius prolixus, Triatoma spp.
Aus der Ordnung der Homoptera z. B. Aleurodes brassicae, Bemisia tabaci, Trialeurodes vaporariorum, Aphis gossypii, Brevicoryne brassicae, Cryptomyzus ribis, Doralis fabae, Doralis pomi, Eriosoma lanigerum, Hyalopterus arundinis, Macrosiphum avenae, Myzus spp., Phorodon humuli, Rhopalosiphum padi, Empoasca spp., Euscelis bilobatus, Nephotettix cincticeps, Lecanium corni, Saissetia oleae, Laodelphax striatellus, Nilaparvata lugens, Aonidiella aurantii, Aspidiotus hederae, Pseudococcus spp. Psylla spp.
Aus der Ordnung der Lepidoptera z. B. Pectinophora gossypiella,
Bupalus piniarius, Cheimatobia brumata, Lithocolletis
blancardella, Hyponomeuta padella, Plutella
maculipennis, Malacosoma neustria, Euproctis chrysorrhoea,
Lymantria spp. Bucculatrix thurberiella, Phyllocnistis
citrella, Agrotis spp., Euxoa spp., Feltia spp.,
Earias insulana, Heliothis spp., Laphygma exigua, Mamestra
brassicae, Panolis flammea, Prodenia litura, Spodoptera
spp., Trichoplusia ni, Carpocapsa pomonella, Pieris
spp., Chilo spp., Pyrausta nubilalis, Ephestia kuehniella,
Galleria mellonella, Tineola bisselliella, Tinea
pellionella, Hofmannophila pseudospretella, Cacoecia podana,
Capua reticulana, Choristoneura fumiferana, Clysia
ambiguella, Homona magnanima, Tortrix viridana.
Aus der Ordnung der Coleoptera z. B. Anobium punctatum, Rhizopertha dominica, Bruchidius obtectus, Acanthoscelides obtectus, Hylotrupes bajulus, Agelastica alni, Leptinotarsa decemlineata, Phaedon cochleariae, Diabrotica spp., Psylliodes chrysocephala, Epilachna varivestis, Atomaria spp., Oryzaephilus surinamensis, Anthonomus spp., Sitophilus spp., Otiorrhynchus sulcatus, Cosmopolites sordidus, Ceuthorrhynchus assimilis, Hypera postica, Dermestes spp., Trogoderma spp., Anthrenus spp., Attagenus spp., Lyctus spp., Meligethes aeneus, Ptinus spp., Niptus hololeucus, Gibbium psylloides, Tribolium spp., Tenebrio molitor, Agriotes spp., Conoderus spp., Melolontha melolontha, Amphimallon solstitialis, Costelytra zealandica.
Aus der Ordnung der Hymenoptera z. B. Diprion spp., Hoplocampa spp., Lasius spp., Monomorium pharaonis, Vespa spp.
Aus der Ordnung der Coleoptera z. B. Anobium punctatum, Rhizopertha dominica, Bruchidius obtectus, Acanthoscelides obtectus, Hylotrupes bajulus, Agelastica alni, Leptinotarsa decemlineata, Phaedon cochleariae, Diabrotica spp., Psylliodes chrysocephala, Epilachna varivestis, Atomaria spp., Oryzaephilus surinamensis, Anthonomus spp., Sitophilus spp., Otiorrhynchus sulcatus, Cosmopolites sordidus, Ceuthorrhynchus assimilis, Hypera postica, Dermestes spp., Trogoderma spp., Anthrenus spp., Attagenus spp., Lyctus spp., Meligethes aeneus, Ptinus spp., Niptus hololeucus, Gibbium psylloides, Tribolium spp., Tenebrio molitor, Agriotes spp., Conoderus spp., Melolontha melolontha, Amphimallon solstitialis, Costelytra zealandica.
Aus der Ordnung der Hymenoptera z. B. Diprion spp., Hoplocampa spp., Lasius spp., Monomorium pharaonis, Vespa spp.
Aus der Ordnung der Diptera z. B. Aedes spp., Anopheles
spp., Culex spp., Drosophila melanogaster, Musca spp.,
Fannia spp., Calliphora erythrocephala, Lucilia spp.,
Chrysomyia spp., Cuterebra spp., Gastrophilus spp., Hyppobosca
spp., Stomoxys spp., Oestrus spp., Hypoderma
spp., Tabanus spp., Tannia spp., Bibio hortulanus, Oscinella
frit, Phorbia spp., Pegomyia hyoscyami, Ceratitis
capitata, Dacus oleae, Tipula paludosa.
Aus der Ordnung der Siphonaptera z. B. Xenopsylla cheopis,
Ceratophyllus spp..
Aus der Ordnung der Arachnida z. B. Scorpio maurus, Latrodectus mactans.
Aus der Ordnung der Arachnida z. B. Scorpio maurus, Latrodectus mactans.
Aus der Ordnung der Acarina z. B. Acarus siro, Argas spp.,
Ornithodoros spp., Dermanyssus gallinae; Eriophyes ribis,
Phyllocoptructa oleivora, Boophilus spp., Rhipicephalus
spp., Amblyomma spp., Hyalomma spp., Ixodes spp., Psoroptes
spp., Chorioptes spp., Sarcoptes spp., Tarsonemus
spp., Bryobia praetiosa, Panonychus spp., Tetranychus
spp..
Zu den pflanzenparasitären Nematoden gehören Pratylenchus
spp., Radopholus similis, Ditylenchus dipsaci, Tylenchulus
semipenetrans, Heterodera spp., Meloidogyne spp.,
Aphelenchoides spp., Longidorus spp., Xiphinema spp.,
Trichodorus spp..
Der erfindungsgemäße Wirkstoff weist eine starke mikrobizide
Wirkung auf und kann zur Bekämpfung von unerwünschten
Mikroorganismen praktisch eingesetzt werden. Die
Wirkstoffe sind insbesondere für den Gebrauch als Pflanzenschutzmittel
geeignet.
Fungizide Mittel im Pflanzenschutz werden eingesetzt zur
Bekämpfung von Plasmodiophoromycetes, Oomycetes, Chytridiomycetes,
Zygomycetes, Ascomycetes, Basidiomycetes,
Deuteromycetes.
Bakterizide Mittel werden im Pflanzenschutz zur Bekämpfung
von Pseudomonadaceae, Rhizobiaceae, Enterobacteriaceae,
Corynebacteriaceae und Streptomycetaceae eingesetzt.
Beispielhaft aber nicht begrenzend seien einige Erreger
von pilzlichen und bakteriellen Erkrankungen, die unter
die oben aufgezählten Oberbegriffe fallen, genannt:
Xanthomonas-Arten, wie beispielsweise Xanthomonas campestris
pv. oryzae;
Pseudomonas-Arten, wie beispielsweise Pseudomonas syringae pv. lachrymans:
Erwinia-Arten, wie beispielsweise Erwinia amylovora;
Pythium-Arten, wie beispielsweise Pythium ultimum;
Phytophthora-Arten, wie beispielsweise Phytophthora infestans;
Pseudoperonospora-Arten, wie beispielsweise Pseudoperonospora humuli oder Pseudoperonospora cubense;
Plasmopara-Arten, wie beispielsweise Plasmopara viticola;
Peronospora-Arten, wie beispielsweise Peronospora pisi oder P. brassicae;
Erysiphe-Arten, wie beispielsweise Erysiphe graminis;
Sphaerotheca-Arten, wie beispielsweise Sphaerotheca fuliginea;
Podosphaera-Arten, wie beispielsweise Podosphaera leucotricha;
Venturia-Arten, wie beispielsweise Venturia inaequalis;
Pyrenophora-Arten, wie beispielsweise Pyrenophora teres oder P. graminea;
(Konidienform: Drechslera; Syn: Helminthosporium);
Cochliobolus-Arten, wie beispielsweise Cochliobolus sativus;
(Konidienform: Drechslera, Syn: Helminthosporium);
Uromyces-Arten, wie beispielsweise Uromyces appendiculatus;
Puccinia-Arten, wie beispielsweise Puccinia recondita;
Tilletia-Arten, wie beispielsweise Tilletia caries;
Ustilago-Arten, wie beispielsweise Ustilago nuda oder Ustilago avenae;
Pellicularia-Arten, wie beispielsweise Pellicularia sasakii;
Pyricularia-Arten, wie beispielsweise Pyricularia oryzae;
Fusarium-Arten, wie beispielsweise Fusarium culmorum;
Botrytis-Arten, wie beispielsweise Botrytis cinerea;
Septoria-Arten, wie beispielsweise Septoria nodorum;
Leptosphaeria-Arten, wie beispielsweise Leptosphaeria nodorum;
Cercospora-Arten, wie beispielsweise Cercospora canescens;
Alternaria-Arten, wie beispielsweise Alternaria brassicae;
Pseudocercosporella-Arten, wie beispielsweise Pseudocercosporella herpotrichoides.
Pseudomonas-Arten, wie beispielsweise Pseudomonas syringae pv. lachrymans:
Erwinia-Arten, wie beispielsweise Erwinia amylovora;
Pythium-Arten, wie beispielsweise Pythium ultimum;
Phytophthora-Arten, wie beispielsweise Phytophthora infestans;
Pseudoperonospora-Arten, wie beispielsweise Pseudoperonospora humuli oder Pseudoperonospora cubense;
Plasmopara-Arten, wie beispielsweise Plasmopara viticola;
Peronospora-Arten, wie beispielsweise Peronospora pisi oder P. brassicae;
Erysiphe-Arten, wie beispielsweise Erysiphe graminis;
Sphaerotheca-Arten, wie beispielsweise Sphaerotheca fuliginea;
Podosphaera-Arten, wie beispielsweise Podosphaera leucotricha;
Venturia-Arten, wie beispielsweise Venturia inaequalis;
Pyrenophora-Arten, wie beispielsweise Pyrenophora teres oder P. graminea;
(Konidienform: Drechslera; Syn: Helminthosporium);
Cochliobolus-Arten, wie beispielsweise Cochliobolus sativus;
(Konidienform: Drechslera, Syn: Helminthosporium);
Uromyces-Arten, wie beispielsweise Uromyces appendiculatus;
Puccinia-Arten, wie beispielsweise Puccinia recondita;
Tilletia-Arten, wie beispielsweise Tilletia caries;
Ustilago-Arten, wie beispielsweise Ustilago nuda oder Ustilago avenae;
Pellicularia-Arten, wie beispielsweise Pellicularia sasakii;
Pyricularia-Arten, wie beispielsweise Pyricularia oryzae;
Fusarium-Arten, wie beispielsweise Fusarium culmorum;
Botrytis-Arten, wie beispielsweise Botrytis cinerea;
Septoria-Arten, wie beispielsweise Septoria nodorum;
Leptosphaeria-Arten, wie beispielsweise Leptosphaeria nodorum;
Cercospora-Arten, wie beispielsweise Cercospora canescens;
Alternaria-Arten, wie beispielsweise Alternaria brassicae;
Pseudocercosporella-Arten, wie beispielsweise Pseudocercosporella herpotrichoides.
Der Wirkstoff erlaubt in den zur Bekämpfung von Pflanzenkrankheiten
notwendigen Konzentrationen eine Behandlung
von oberirdischen Pflanzenteilen, von Pflanz- und Saatgut,
und des Bodens.
Der erfindungsgemäße Wirkstoff eignet sich auch zur Bekämpfung
von Ekto- und Endoparasiten bei Warmblütern,
beispielsweise auf dem Gebiet der Tierhaltung und Viehzucht,
wobei durch die Bekämpfung der Schädlinge bessere
Ergebnisse, z. B. höhere Milchleistungen, höheres Gewicht,
längere Lebensdauer usw. erreicht werden können.
Die Anwendung des erfindungsgemäßen Wirkstoffes geschieht
auf diesen Gebieten in bekannter Weise, wie durch orale
Anwendung in Form von beispielsweise Tabletten, Kapseln,
Tränken, Granulaten, durch dermale Anwendung in Form
beispielsweise des Tauchens (Dippen), Sprühen (Sprayen),
Aufgießen (pour-on und spot-on) und des Einpuderns sowie
durch parenterale Anwendung in Form beispielsweise der
Injektion.
Es werden auf diesen Gebieten z. B. auch Zecken und solche
Arthropoden erfaßt, bei welchen Teile ihrer Entwicklung
im Tier ablaufen. Darüber hinaus ist die erfindungsgemäße
Verbindung auch zur Bekämpfung von Würmern - insbesondere
solche der Klasse Nematoda - geeignet, die Parasiten von
Warmblütern sind. Außerdem kann die erfindungsgemäße
Verbindung zur Bekämpfung von dermalen Pilzinfektionen bei
Warmblütern verwendet werden.
Der Wirkstoff kann in die üblichen Formulierungen übergeführt
werden, wie Lösungen, Emulsionen, Suspensionen,
Pulver, Schäume, Pasten, Granulate, Aerosole, Wirkstoff-
imprägnierte Natur- und synthetische Stoffe,
Feinstverkapselungen in polymeren Stoffen und in Hüllmassen
für Saatgut, ferner in Formulierungen mit Brennsätzen,
wie Räucherpatronen, -dosen, -spiralen u. ä., sowie
ULV-Kalt- und Warmnebel-Formulierungen.
Diese Formulierungen werden in bekannter Weise hergestellt,
z. B. durch Vermischen des Wirkstoffs mit Streckmitteln,
also flüssigen Lösungsmitteln, unter Druck stehenden
verflüssigten Gasen und/oder festen Trägerstoffen,
gegebenenfalls unter Verwendung von oberflächenaktiven
Mitteln, also Emulgiermitteln und/oder Dispergiermitteln
und/oder schaumerzeugenden Mitteln. Im Falle der
Benutzung von Wasser als Streckmittel können z. B. auch
organische Lösungsmittel als Hilfslösungsmittel verwendet
werden. Als flüssige Lösungsmittel kommen im wesentlichen
in Frage: Aromaten, wie Xylol, Toluol, oder Alkylnaphthaline,
chlorierte Aromaten oder chlorierte aliphatische
Kohlenwasserstoffe, wie Chlorbenzole, Chlorethylene
oder Methylenchlorid, aliphatische Kohlenwasserstoffe,
wie Cyclohexan oder Paraffine, z. B. Erdölfraktionen,
Alkohole, wie Butanol oder Glycol sowie deren
Ether und Ester, Ketone, wie Aceton, Methylethylketon,
Methylisobutylketon oder Cyclohexanon, stark polare
Lösungsmittel, wie Dimethylformamid und Dimethylsulfoxid,
sowie Wasser: mit verflüssigten gasförmigen Streckmitteln
oder Trägerstoffen sind solche Flüssigkeiten gemeint,
welche bei normaler Temperatur und unter Normaldruck
gasförmig sind, z. B. Aerosol-Treibgas, wie Halogenkohlenwasserstoffe
sowie Butan, Propan, Stickstoff
und Kohlendioxid; als feste Trägerstoffe kommen in Frage:
z. B. natürliche Gesteinsmehle, wie Kaoline, Tonerden,
Talkum, Kreide, Quarz, Attapulgit, Montmorillonit
oder Diatomeenerde und synthetische Gesteinsmehle, wie
hochdisperse Kieselsäure, Aluminiumoxid und Silikate;
als feste Trägerstoffe für Granulate kommen in Frage:
z. B. gebrochene und fraktionierte natürliche Gesteine
wie Calcit, Marmor, Bims, Sepiolith, Dolomit sowie
synthetische Granulate aus anorganischen und organischen
Mehlen sowie Granulate aus organischem Material
wie Sägemehl, Kokosnußschalen, Maiskolben und Tabakstengel;
als Emulgier und/oder schaumerzeugende Mittel kommen
in Frage: z. B. nichtionogene und anionische Emulgatoren,
wie Polyoxyethylen-Fettsäure-Ester, Polyoxyethylen-
Fettalkohol-Ether, z. B. Alkylarylpolyglykol-Ether,
Alkylsulfonate, Alkylsulfate, Arylsulfonate sowie Eiweißhydrolysate;
als Dispergiermittel kommen in Frage:
z. B. Lignin-Sulfitablaugen und Methylcellulose.
Es können in den Formulierungen Haftmittel wie Carboxymethylcellulose,
natürliche und synthetische pulverige,
körnige oder latexförmige Polymere verwendet werden, wie
Gummiarabicum, Polyvinylalkohol, Polyvinylacetat, sowie
natürliche Phospholipide, wie Kephaline und Lecithine,
und synthetische Phospholipide. Weitere Additive können
mineralische und vegetabile Öle sein.
Es können Farbstoffe wie anorganische Pigmente, z. B.
Eisenoxid, Titanoxid, Ferrocyanblau und organische Farbstoffe,
wie Alizarin-, Azo- und Metallphthalocyaninfarbstoffe
und Spurennährstoffe wie Salze von Eisen, Mangan,
Bor, Kupfer, Kobalt, Molybdän und Zink verwendet werden.
Die Formulierungen enthalten im allgemeinen zwischen 0,1
und 95 Gewichtsprozent Wirkstoff, vorzugsweise zwischen
0,5 und 90%.
Der erfindungsgemäße Wirkstoff kann in seinen handelsüblichen
Formulierungen sowie in den aus diesen Formulierungen
bereiteten Anwendungsformen in Mischung mit anderen
Wirkstoffen, wie Insektiziden, Lockstoffen, Sterilantien,
Akariziden, Nematiziden, Fungiziden, wachstumsregulierenden
Stoffen oder Herbiziden vorliegen. Zu den Insektiziden
zählen beispielsweise Phosphorsäureester, Carbamate,
Carbonsäureester, chlorierte Kohlenwasserstoffe,
Phenylharnstoffe, durch Mikroorganismen hergestellte Stoffe
u. a.
Der erfindungsgemäße Wirkstoff kann ferner in seinen
handelsüblichen Formulierungen sowie in den aus diesen
Formulierungen bereiteten Anwendungsformen in Mischung mit
Synergisten vorliegen. Synergisten sind Verbindungen,
durch die die Wirkung der Wirkstoffe gesteigert wird, ohne
daß der zugesetzte Synergist selbst aktiv wirksam sein
muß.
Der Wirkstoffgehalt der aus den handelsüblichen Formulierungen
bereiteten Anwendungsformen kann in weiten Bereichen
variieren. Die Wirkstoffkonzentration der Anwendungsformen
kann von 0,0000001 bis zu 95 Gew.-% Wirkstoff,
vorzugsweise zwischen 0,0001 und 1 Gew.-% liegen.
Die Anwendung geschieht in einer den Anwendungsformen
angepaßten üblichen Weise.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung soll
anhand der folgenden Beispiele erläutert werden.
Der Stamm VA 10 wurde bei etwa 4°C im Kühlschrank
auf einem Schrägagarröhrchen gehalten. Der hierzu
verwendete HA-Agar enthielt 4 g Hefeextrakt, 10 g
Malz, 4 g Dextrose und 15 g Agar in 1 l Leitungswasser:
der pH-Wert wurde auf 7,3 eingestellt.
Submerskulturen wurden entweder bei -20°C oder in
flüssigem Stickstoff gelagert.
Für die Fermentation wurde eine Nährlösung eingesetzt,
welche 40 g Mannit, 5 g Arginin, 2 g MgSO4 · 7
H2O, 0,5 g KH2PO4, 1 g NaCl, 0,5 g Bacto-Hefeextrakt
und 2 ml Spurenelementlösung SL 4 in 1 l
Leitungswasser enthielt: der pH-Wert wurde auf 7,0
eingestellt. Die Spurenelementlösung SL 4 enthielt
5 g EDTA, 2 g FeSO4 · 7 H2O, 0,1 g ZnSO4 · 7 H2O,
30 mg MnCl2 · 4 H2O, 0,3 g H3BO3, 0,2 g CoCl2 · 6 H2O,
10 mg CuCl2 · 2 H2O, 20 mg NiCl2 · 6 H2O, 30 mg
Na2MoO4 · 2 H2O in 1 l destilliertem Wasser: der
pH-Wert wurde auf 0,3 eingestellt.
a) Durchführung im Kolbenmaßstab
1000 ml Erlenmeyerkolben, die 120 ml Nährlösung enthielten, wurden aus einer Schrägagarkultur beimpft und auf der rotierenden Schüttelmaschine bei 280 Upm und einem Schüttelkreis von 5 cm bei 28°C 6 Tage inkubiert. Als Vorkultur für einen 200 l-Fermenter diente eine 48 h alte Kultur.
1000 ml Erlenmeyerkolben, die 120 ml Nährlösung enthielten, wurden aus einer Schrägagarkultur beimpft und auf der rotierenden Schüttelmaschine bei 280 Upm und einem Schüttelkreis von 5 cm bei 28°C 6 Tage inkubiert. Als Vorkultur für einen 200 l-Fermenter diente eine 48 h alte Kultur.
b) Durchführung in 200 l-Maßstab
Die Fermentation wurde im 200 l-Fermenter durchgeführt, der 200 l der unter a) beschriebenen Nährlösung enthielt: zusätzlich wurden 40 ml Polyglykol (Desmophen 3900) zugegeben. Die Sterilisation erfolgte für 30 min bei 121°C Bei 28°C Inkubationstemperatur und 200 Upm des Rührers wurden 200 l Luft pro Minute in die Kulturflüssigkeit eingeleitet. Die Impfmaterialmenge betrug 1% der unter a) beschriebenen Kultur.
Die Ernte erfolgte nach 96 h.
Die Fermentation wurde im 200 l-Fermenter durchgeführt, der 200 l der unter a) beschriebenen Nährlösung enthielt: zusätzlich wurden 40 ml Polyglykol (Desmophen 3900) zugegeben. Die Sterilisation erfolgte für 30 min bei 121°C Bei 28°C Inkubationstemperatur und 200 Upm des Rührers wurden 200 l Luft pro Minute in die Kulturflüssigkeit eingeleitet. Die Impfmaterialmenge betrug 1% der unter a) beschriebenen Kultur.
Die Ernte erfolgte nach 96 h.
Der Stamm VN 14 wurde bei etwa 4°C im Kühlraum auf
einem Schrägagarröhrchen gehalten. Der hierzu verwendete
HA-Agar enthielt je Liter 4 g Hefeextrakt,
10 g Malz, 4 g Dextrose und 15 g Agar (Rest:
Wasser) und hat einen pH-Wert von 7,3. Sporenlösungen
des Stammes VN 14 wurden bei -20°C aufbewahrt,
Submerskulturen in flüssigem Stickstoff.
Für die Fermentation wurde eine Nährlösung eingesetzt,
welche, außer Leitungswasser, 2% Haferflocken,
2% Tomatenmark und 1% Tri-Na-Citrat-
2-hydrat enthielt und einen pH-Wert von 6,0 aufwies.
a) Durchführung im Kolbenmaßstab
1000 ml Erlenmeyerkolben, die 120 ml Nährlösung (vgl. 1 oben) enthielten, wurden aus einer Schrägagarkultur beimpft und auf der rotierenden Schüttelmaschine bei 280 Upm (Umdrehungen pro Minute) und 28°C für 5 Tage inkubiert. Als Vorkultur für den 200 l-Fermenter diente eine 48 h alte Kultur.
1000 ml Erlenmeyerkolben, die 120 ml Nährlösung (vgl. 1 oben) enthielten, wurden aus einer Schrägagarkultur beimpft und auf der rotierenden Schüttelmaschine bei 280 Upm (Umdrehungen pro Minute) und 28°C für 5 Tage inkubiert. Als Vorkultur für den 200 l-Fermenter diente eine 48 h alte Kultur.
b) Durchführung im 200 l-Fermenter
Die Fermentation wurde in einem 200 l-Fermenter durchgeführt, der 200 l Nährlösung enthielt. Die Nährlösung bestand aus 4000 g Haferflocken, 4000 g Tomatenmark, 2000 g Tri-Na-Citrat-2-hydrat und 40 ml Polyglykol (Desmophen 3900) gelöst in Leitungswasser. Die Sterilisation erfolgte für 30 min bei 121°C. Bei 28°C Inkubationstemperatur und 200 Upm des Rührers wurden 200 l Luft pro Minute in die Kulturflüssigkeit eingeleitet. Die Impfmaterialmenge betrug 1% der unter a) beschriebenen Kultur. Die Ernte erfolgte nach 113 Stunden.
Die Fermentation wurde in einem 200 l-Fermenter durchgeführt, der 200 l Nährlösung enthielt. Die Nährlösung bestand aus 4000 g Haferflocken, 4000 g Tomatenmark, 2000 g Tri-Na-Citrat-2-hydrat und 40 ml Polyglykol (Desmophen 3900) gelöst in Leitungswasser. Die Sterilisation erfolgte für 30 min bei 121°C. Bei 28°C Inkubationstemperatur und 200 Upm des Rührers wurden 200 l Luft pro Minute in die Kulturflüssigkeit eingeleitet. Die Impfmaterialmenge betrug 1% der unter a) beschriebenen Kultur. Die Ernte erfolgte nach 113 Stunden.
Die gemäß Beispiel 1a erhaltene Kulturbrühe einer
200 l-Fermentation wurde mit 200-250 l/h in einem
Westfalia-Separator separiert. Der Überstand wurde
über eine mit 50 l eines hydrophoben Trägerharzes
auf Polystyrolbasis (Lewatit OC 1031) beschickte
Säule von 30 cm Durchmesser gegeben. Es wurde mit
500 l entmineralisiertem Wasser nachgewaschen und
mit 300 l technischem Methanol desorbiert. Das
Desorbat wurde unter reduziertem Druck bis zu
einer wäßrigen Suspension konzentriert und gefriergetrocknet.
Auf diese Weise wurden 24,8 g
Rohprodukt erhalten.
24,8 g des gefriergetrockneten Rohprodukts wurden
in 600 ml Wasser fein suspendiert. Nach dem Abfiltrieren
des unlöslichen Rückstandes wurde das Filtrat
an einer Säule (50 × 150 mm) mit einem hydrophoben
Trägerharz auf Polystyrolbasis (Lewatit
OC 1031) adsorbiert. Die Säule wurde mit 1 l
entionisiertem Wasser gewaschen und stufenweise
nacheinander mit je 600 ml 10, 20, 30, 50 und
70%igem wäßrigem Methanol desorbiert. Die erhaltenen
Desorbate wurden unter reduziertem Druck
konzentriert und gefriergetrocknet.
Die höchste insektizide Aktivität wurde im
Lyophilisat von Durchlauf und Waschwasser gefunden
(zusammen 16,96 g).
10 g dieses Lyophilisats wurden in 800 ml entionisiertem
Wasser gelöst und über eine Säule
(25 × 300 mm) mit einem carbomethoxyliertem Polysaccharid
(CM-Sephadex) in der NH4⁺-Form gegeben.
Die Säule wurde mit einem Gradienten von 0 bis
25 mmol/l NH3 und 2 l Gesamtvolumen fraktioniert
eluiert (9 ml/min, Fraktiongröße: 10 ml.
Die insektiziden Fraktionen (Fraktionen 121 bis
200) erhielten nach Gefriertrocknung 104 g angereichertes
Präparat.
300 mg des angereicherten Rodaplutin-Präparates
wurden in 3 ml einer Mischung von CHCl3, MeOH und
25% NH3wässr. (4+4+2 Teile v/v) gelöst und an
Kieselgel 60 (LiChroprep Si 60, 40-63 µm, Lobar
Fertigsäule C), mit Chloroform, MeOH und 25%
wäßriger NH3 (4+4+2 Teile v/v) chromatographiert.
Nacheinander wurden dabei 2 Substanzen fraktioniert
(Fraktionsgröße 10 ml), eluiert, die durch
ihre Absorption bei 254 nm detektiert wurden.
Durch Dünnschichtchromatographie auf Kieselgel
(Merck Nr. 5729) mit dem Fließmittel CHCl3, CH3OH,
25% wäßriger NH3 (4+4+2 Teile, v/v) wurde in den
Fraktionen 43-48 eine Substanz mit dem Rf-Wert
0,49 in den Fraktionen 53-65 eine Substanz mit dem
Rf-Wert 0,42 und in den Fraktionen 49-52 eine
Mischung beider Substanzen nachgewiesen. Beide
Substanzen fallen durch ihre Fluoreszenzlösung und
die positive Reaktion mit einem Fluoreszenzindikator
für Aminogruppen (Fluram) auf.
Die in den Fraktionen 43-48 enthaltene Substanz
wurde als "Leucylblasticidin S" identifiziert und
verworfen.
Aus den Fraktionen 53-65 wurden durch Gefriertrocknen
160 mg Rodaplutin gewonnen.
Entsprechend kann Rodaplutin auch aus der Fermentationsbrühe
gemäß Ib isoliert werden.
Die biologische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindung
soll anhand der folgenden Beispiele erläutert
werden:
Lösungsmittel: 3 Gewichtsteile Aceton
Emulgator: 1 Gewichtsteil Alkylarylpolyglykolether
Zur Herstellung einer zweckmäßigen Wirkstoffzubereitung
vermischt man 1 Gew.-Teil Wirkstoff mit der angegebenen
Menge Lösungsmittel und der angegebenen Menge Emulgator
und verdünnt das Konzentrat mit Wasser auf die gewünschten
Konzentrationen.
Kohlpflanzen (Brassica oleracea) werden durch Sprühen mit
der Wirkstoffzubereitung der gewünschten Konzentration behandelt.
Nach Antrocknen der Spritzbrühe wird von der
behandelten Pflanze ein Blatt entnommen, in eine Plastikdose
gelegt und mit Larven des Meerettichkäfers (Phaedon
cochleariae) besetzt. Nach 2 bis 4 Tagen wird jeweils ein
weiteres Blatt von derselben Pflanze für die Nachfütterung
verwendet.
Nach der gewünschten Zeit wird die Abtötung in % bestimmt.
Dabei bedeutet 100%, daß alle Tiere abgetötet werden; 0%
bedeutet, daß keine Tiere abgetötet wurden.
Bei diesem Test zeigte z. B. bei einer Konzentration von
0,04% nach 14 Tagen das Rodaplutin eine Abtötung von
100%.
Lösungsmittel: 3 Gewichtsteile Aceton
Emulgator: 1 Gewichtsteil Alkylarylpolyglykolether
Zur Herstellung einer zweckmäßigen Wirkstoffzubereitung
vermischt man 1 Gew.-Teil Wirkstoff mit der angegebenen
Menge Lösungsmittel und der angegebenen Menge Emulgator
und verdünnt das Konzentrat mit Wasser auf die gewünschten
Konzentrationen.
Kohlpflanzen (Brassica oleracea) werden durch Sprühen mit
der Wirkstoffzubereitung der gewünschten Konzentration behandelt.
Nach Antrocknen der Spritzbrühe wird von der behandelten
Pflanze ein Blatt entnommen, in eine Plastikdose
gelegt und mit Raupen der Kohlschabe (Plutella maculipennis)
besetzt. Nach 2 bis 4 Tagen wird jeweils ein
weiteres Blatt von derselben Pflanze für die Nachfütterung
verwendet.
Nach der gewünschten Zeit wird die Abtötung in % bestimmt.
Dabei bedeutet 100%, daß alle Tiere abgetötet wurden; 0%
bedeutet, daß keine Tiere abgetötet wurden.
Bei diesem Test zeigte z. B. bei einer Konzentration von
0,0008% nach 14 Tagen das Rodaplutin eine Abtötung von
100%.
Lösungsmittel: 3 Gewichtsteile Aceton
Emulgator: 1 Gewichtsteil Alkylarylpolyglykolether
Die zweckmäßige Wirkstoffzubereitung erfolgt durch
Mischung von 1 Teil Wirkstoff mit den angegebenen Mengen
Aceton und Emulgator sowie anschließende Verdünnung mit
Wasser auf die gewünschten Konzentrationen.
Die Blattläuse (Myzus persicae) werden auf einen Bohnentrieb
aufgesetzt und durch kurzes Eintauchen in die jeweilige
Konzentration behandelt. Die Auswertung auf den
Grad der Abtötung in % erfolgt nach 10 Tagen.
Bei diesem Test erzielte Rodaplutin bei einer Verdünnung
von 0,02% nach 10 Tagen eine Abtötung von 100%.
Lösungsmittel: 3 Gewichtsteile Aceton
Emulgator: 1 Gewichtsteil Alkylarylpolyglykolether
Zur Herstellung einer zweckmäßigen Wirkstoffzubereitung
vermischt man 1 Gewichtsteil Wirkstoff mit der angegebenen
Menge Lösungsmittel und der angegebenen Menge Emulgator
und verdünnt das Konzentrat mit Wasser auf die gewünschten
Konzentrationen.
Je 20 Eier der Mittelmeerfruchtfliege werden auf Kunstfutterbrei
in ein Döschen gelegt. Das Futter ist mit Wirkstoff
in der angegebenen Konzentration behandelt. Die
Summe der abgetöteten Eier, Larven, Puppen und Imagines
bezogen auf die Zahl eingesetzter Eier ergibt die Abtötung
in %.
Dabei bedeutet 100%, daß alle Tiere abgetötet wurden; 0%
bedeutet, daß keine Tiere abgetötet wurden.
Bei diesem Test zeigte z. B. bei einer Konzentration von
0,02% nach 21 Tagen das Rodaplutin eine Abtötung von
100%.
Lösungsmittel: 3 Gewichtsteile
Emulgator: 1 Gewichtsteil Alkylarylpolyglykolether
Zur Herstellung einer zweckmäßigen Wirkstoffzubereitung
vermischt man 1 Gewichtsteil Wirkstoff mit der angegebenen
Menge Lösungsmittel und der angegebenen Menge Emulgator
und verdünnt das Konzentrat mit Wasser auf die gewünschte
Konzentration.
Bohnenpflanzen (Phaseolus vulgaris), die stark von allen
Entwicklungsstadien der gemeinen Spinnmilbe oder Bohnenspinnmilbe
(Tetranychus urticae) befallen sind, werden mit
einer Wirkstoffzubereitung der gewünschten Konzentration
behandelt.
Nach der gewünschten Zeit wird die Abtötung in % bestimmt.
Dabei bedeutet 100%, daß alle, und 0%, daß keine Spinnmilben
abgetötet wurden.
Bei diesem Test zeigte das Rodaplutin z. B. bei einer Konzentration
von 0,0008% nach 14 Tagen 100% Wirkung.
Sporen oder Keime wurden in einer Endkonzentration von
etwa 5 106 ml-1 in Potato-Dextrose-Agar suspendiert. Der
Agar wurde in einer Schichtdicke von 0,3 cm gegossen. In
den Agar wurden runde Löcher im Durchmesser von 0,9 cm
gestanzt, in die 0,1 ml Testlösung eingefüllt wurden. Die
Testplatten wurden bei 24°C inkubiert und nach 24 h oder
72 h ausgewertet.
Rodaplutin zeigte in einer Konzentration von 0,5 mg/ml
nach 72 h eine deutliche Hemmung der Luftmycel- und
Sporenbildung bei Aspergillus niger DSM 1988.
Lösungsmittel: 35 Gewichtsteile Ethylenglykolmonomethylether
35 Gewichtsteile Nonylphenolpolyglykolether
35 Gewichtsteile Nonylphenolpolyglykolether
Zur Herstellung einer zweckmäßigen Wirkstoffzubereitung
vermischt man 3 Gew.-Teile Wirkstoff mit 7 Gew.-Teilen des
oben angegebenen Lösungsmittel-Gemisches und verdünnt das
so erhaltene Konzentrat mit Wasser auf die gewünschte
Konzentration.
Etwa 10-25 Psoroptes cuniculi werden in 1 ml der zu
testenden Wirkstoffzubereitung gebracht, die in Tablettennester
einer Tiefziehverpackung pipettiert wurden. Nach
24 Stunden wird der Abtötungsgrad bestimmt.
Bei diesem Test zeigte bei einer Konzentration von 80 ppm
das Rodaplutin eine Abtötung von 100%.
Im vorstehenden Text bedeuten Mengenangaben, wo nichts
anderes angegeben wird, Volumenteile, Prozentangaben beziehen
sich auf Gewichtsprozente.
Erläuterung einiger verwendeter Produktnamen:
AMBERLITE XAD (Warenzeichen der Fa. Rohm und Haas,
Philadelphia, USA)
ist ein unspezifisches hydrophobes Absorberharz auf Polystyrolbasis.
ist ein unspezifisches hydrophobes Absorberharz auf Polystyrolbasis.
CM SEPHHADEX (Warenzeichen der Fa. Pharmacia, Uppsala,
Schweden)
ist ein carboxymethyliertes Polysaccharid.
ist ein carboxymethyliertes Polysaccharid.
DESMOPHEN 3900 (Warenzeichen der Fa. Bayer AG, Leverkusen,
Bundesrepublik Deutschland)
ist ein Polyglykol.
ist ein Polyglykol.
FLURAM (Warenzeichen der Fa. Hoffmann La Roche, Basel,
Schweiz)
ist ein Fluoreszenzreagenz für Aminogruppen.
ist ein Fluoreszenzreagenz für Aminogruppen.
LEWATIT OC 1031 (Warenzeichen der Fa. Bayer AG, Leverkusen,
Bundesrepublik Deutschland)
ist ein unspezifisches hydrophobes Absorberharz auf Polystyrolbasis.
ist ein unspezifisches hydrophobes Absorberharz auf Polystyrolbasis.
LOBAR Fertigsäulen
LI CHROPREP Si (Warenzeichen der Fa. E. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland)
ist eine mit Kieselgel gefüllte Fertigsäule.
LI CHROPREP Si (Warenzeichen der Fa. E. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland)
ist eine mit Kieselgel gefüllte Fertigsäule.
Fig. 1 UV-Spektrum
Abszisse: Wellenlänge (nm)
Ordinate: Extinktion
Maximum: λ: 271 nm
Spez. Extinktion: (E1 1)271: 134
Lösungsmittel: Wasser
Konzentration: 0,01243 mg/ml
Abszisse: Wellenlänge (nm)
Ordinate: Extinktion
Maximum: λ: 271 nm
Spez. Extinktion: (E1 1)271: 134
Lösungsmittel: Wasser
Konzentration: 0,01243 mg/ml
Fig. 2 IR-Spektrum (in KBr)
Abszisse: Wellenzahl (cm-1) bzw. Wellenlänge (µm)
Ordinate: Durchlässigkeit (%)
Abszisse: Wellenzahl (cm-1) bzw. Wellenlänge (µm)
Ordinate: Durchlässigkeit (%)
Fig. 3 1H-NMR-Spektrum
Meßfrequenz: 300,13 MHz
Meßtechnik: Puls-Fourier-Transformation
Chemische Verschiebung: δ (ppm)
Externer Standard: 3-(Trimethylsilyl)-propionsäure- d4-Natriumsalz in D2O
Lösungsmittel: D2O
Konzentration: 80 mg/0,6 ml
Meßfrequenz: 300,13 MHz
Meßtechnik: Puls-Fourier-Transformation
Chemische Verschiebung: δ (ppm)
Externer Standard: 3-(Trimethylsilyl)-propionsäure- d4-Natriumsalz in D2O
Lösungsmittel: D2O
Konzentration: 80 mg/0,6 ml
Fig. 4 13-C-NMR-Spektrum:
Meßfrequenz: 75,48 MHz
Meßtechnik: Puls-Fourier-Transformation
Chemische Verschiebung: δ (ppm)
Externer Standard: 3-(Trimethylsilyl)-propionsäure- d4-Natriumsalz in D2O
Lösungsmittel: D2O
Konzentration: 80 mg/0,6 ml
Meßfrequenz: 75,48 MHz
Meßtechnik: Puls-Fourier-Transformation
Chemische Verschiebung: δ (ppm)
Externer Standard: 3-(Trimethylsilyl)-propionsäure- d4-Natriumsalz in D2O
Lösungsmittel: D2O
Konzentration: 80 mg/0,6 ml
Fig. 5 Massenspektrum
Meßtechnik: Elektronenstoßionisation (EI)
Abszisse: mK-Verhältnis
Ordinate: Intensität
Meßtechnik: Elektronenstoßionisation (EI)
Abszisse: mK-Verhältnis
Ordinate: Intensität
Claims (12)
1. Verbindung der Formel (I)
2. Organisch-chemische Verbindung, gekennzeichnet durch
die folgenden Eigenschaften und Parameter:
a) Aussehen: farbloses, amorphes Pulver
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser, löslich in Methanol und DMSO, schwer löslich in Chloroform
c) Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel, KG Si60 F254, Fa. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland): CHCl3: CH3OH: konz. NH3 (4:4:2 Vol.-Teile) Rf: 0,42
d) Molgewicht: 565
e) Summenformel (Elementaranalyse): C24H39N907
f) Spektren: UV Fig. 1
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
a) Aussehen: farbloses, amorphes Pulver
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser, löslich in Methanol und DMSO, schwer löslich in Chloroform
c) Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel, KG Si60 F254, Fa. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland): CHCl3: CH3OH: konz. NH3 (4:4:2 Vol.-Teile) Rf: 0,42
d) Molgewicht: 565
e) Summenformel (Elementaranalyse): C24H39N907
f) Spektren: UV Fig. 1
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
3. Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel (I)
oder der organisch-chemischen Verbindung, welche
durch die folgenden Eigenschaften und Parameter
gekennzeichnet ist:
a) Aussehen: farbloses, amorphes Pulver
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser, löslich in Methanol und DMSO, schwer löslich in Chloroform
c) Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel, KG Si60 F254, Fa. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland): CHCl3:CH3OH: konz. NH3 (4:4:2 Vol.-Teile) Rf: 0,42
d) Molgewicht: 565
e) Summenformel (Elementaranalyse): C24H39N9O7
f) Spektren: UV Fig. 1
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
dadurch gekennzeichnet, daß man hierfür geeignete Mikroorganismen der Ordnung Actinomycetales, vorzugsweise der Gattung Nocardioides, insbesondere Nocardioides albus-Stämme in einem Nährmedium, welches assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie Mineralsalze enthält unter aeroben Bedingungen kultiviert und die gewünschte Verbindung nach allgemein üblichen Methoden isoliert.
a) Aussehen: farbloses, amorphes Pulver
b) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser, löslich in Methanol und DMSO, schwer löslich in Chloroform
c) Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel, KG Si60 F254, Fa. Merck, Darmstadt, Bundesrepublik Deutschland): CHCl3:CH3OH: konz. NH3 (4:4:2 Vol.-Teile) Rf: 0,42
d) Molgewicht: 565
e) Summenformel (Elementaranalyse): C24H39N9O7
f) Spektren: UV Fig. 1
IR Fig. 2
1H-NMR Fig. 3
13C-NMR Fig. 4
MS Fig. 5
dadurch gekennzeichnet, daß man hierfür geeignete Mikroorganismen der Ordnung Actinomycetales, vorzugsweise der Gattung Nocardioides, insbesondere Nocardioides albus-Stämme in einem Nährmedium, welches assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie Mineralsalze enthält unter aeroben Bedingungen kultiviert und die gewünschte Verbindung nach allgemein üblichen Methoden isoliert.
4. Verfahren gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Nocardioides albus-Stämme VA 10 oder VN 14
gemäß DSM 3176 und DSN 3177 sowie deren Mutanten und
Varianten einsetzt.
5. Organisch-chemische Verbindung gemäß Anspruch 1 oder
2, erhältlich nach dem Verfahren gemäß den Ansprüchen
3 und 4.
6. Schädlingsbekämpfungsmittel, gekennzeichnet durch
einen Gehalt an der organisch-chemischen Verbindung
gemäß den Ansprüchen 1, 2 und 5.
7. Verwendung der organisch-chemischen Verbindung gemäß
den Ansprüchen 1, 2 und 5 zur Bekämpfung von Schädlingen,
insbesondere von Insekten, Nematoden und
Mikroben.
8. Verfahren zur Bekämpfung von Schädlingen, dadurch gekennzeichnet,
daß man die organisch-chemische
Verbindung gemäß den Ansprüchen 1, 2 und 5 auf Schädlinge,
vorzugsweise Insekten, Nematoden und Mikroben
oder ihren Lebensraum einwirken läßt.
9. Verfahren zur Herstellung von Schädlingsbekämpfungsmitteln,
dadurch gekennzeichnet, daß man die organisch-
chemische Verbindung gemäß den Ansprüchen 1,
2 und 5 mit Streckmitteln und/oder oberflächenaktiven
Mitteln vermischt.
10. Mikroorganismen, der Ordnung Actinomycetales, vorzugsweise
der Gattung Norcardioides, insbesondere
Norcardioides albus-Stämme, die bei einer Kultivierun
in einem Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie
Mineralsalze enthaltendem Nährmedium die organisch-
chemische Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 produzieren.
11. Nocardioides albus-Stämme VA 10 und VN 14, entsprechend
DSM 3176 und DSN 3177 sowie deren Mutanten
und Varianten, welche die organisch-chemische Verbindung
gemäß den Ansprüchen 1 oder 2 produzieren.
12. Organisch-chemische Verbindung gemäß den Ansprüchen
1, 2 und 5 zur Bekämpfung von Erkrankungen, welche
durch Parasiten oder Mikroben hervorgerufen werden.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19853529733 DE3529733A1 (de) | 1985-08-20 | 1985-08-20 | Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19853529733 DE3529733A1 (de) | 1985-08-20 | 1985-08-20 | Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismen |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3529733A1 true DE3529733A1 (de) | 1987-02-26 |
Family
ID=6278908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19853529733 Withdrawn DE3529733A1 (de) | 1985-08-20 | 1985-08-20 | Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE3529733A1 (de) |
-
1985
- 1985-08-20 DE DE19853529733 patent/DE3529733A1/de not_active Withdrawn
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0268177B1 (de) | Schädlingsbekämpfungs- und Pflanzenbehandlungsmittel | |
EP0794704B1 (de) | Mikroorganismen enthaltende granulate | |
EP0022964B1 (de) | Neue Nikkomycine, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel | |
EP0669079A1 (de) | Wasserdispergierbare Granulate auf der Basis lebender Organismen | |
US4585761A (en) | Antibiotics, a process for their preparation and their use as plant protection agents | |
US4558139A (en) | Bafilomycin pesticides | |
DE3317824A1 (de) | Phosphorsaeureester | |
EP0180806B1 (de) | Organisch-chemische Verbindung | |
DE3642452A1 (de) | Substituierte 4-amino-pyrimidine | |
DE3529733A1 (de) | Peptidylnucleosid, seine herstellung und mikroorganismen | |
EP0213393B1 (de) | Phosphonsäureester | |
DE3529732A1 (de) | Die verwendung von leucylblasticidin s als schaedlingsbekaempfungsmittel | |
DE3402075A1 (de) | Organisch-chemische verbindung und verfahren zu ihrer herstellung | |
DE3607287A1 (de) | Verfahren zur herstellung von borrelidin und seine verwendung zur schaedlingsbekaempfung | |
EP0305837B1 (de) | Thionophosphonsäureester | |
EP0345597B1 (de) | O-Halogencyclobutyl-S-alkyl-(di)thiophosphon(r)säureester, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel | |
EP0078986A1 (de) | Herbizide, insektizide und fungizide Mittel | |
EP0258631A2 (de) | Alkoximinoalyklamide | |
DD153995A5 (de) | Schaedlingsbekaempfungsmittel | |
DD146242A5 (de) | Schaedlingsbekaempfungsmittel | |
EP0090242A1 (de) | Neue N-carboxylierte N-Methylcarbamate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel | |
DE3809778A1 (de) | Pyrimidinyl-thionophosphorsaeureester | |
EP0216105A1 (de) | Diazaphosphorine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel | |
EP0507142A2 (de) | O-Halogencyclobutyl-S-alkyl-(di) thiophosphorsäureesteramide, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel | |
EP0507140A2 (de) | O-Halogencyclopentyl-S-alkyl-(di)thiophosphor(phosphon)-säureester-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Schädlingsbekämpfungsmittel |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8130 | Withdrawal |