DE2801257A1 - Brustkrebs-bezogene antigene, verfahren zu ihrer extraktiven gewinnung und ihre verwendung - Google Patents
Brustkrebs-bezogene antigene, verfahren zu ihrer extraktiven gewinnung und ihre verwendungInfo
- Publication number
- DE2801257A1 DE2801257A1 DE19782801257 DE2801257A DE2801257A1 DE 2801257 A1 DE2801257 A1 DE 2801257A1 DE 19782801257 DE19782801257 DE 19782801257 DE 2801257 A DE2801257 A DE 2801257A DE 2801257 A1 DE2801257 A1 DE 2801257A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- bca
- cea
- antiserum
- breast cancer
- radioactively labeled
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 24
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims description 17
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 11
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical group OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 10
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 10
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 8
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 8
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 description 2
- 229920008262 Thermoplastic starch Polymers 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002532 anti-gammaglobulin Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/828—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
8000 MÖNCHEN 80
TEUFON: (089) 472947 TELEX: 624624 LEDER D
TELEQR.: LEDERERPATENT
28. Dezember 1977 RAN 4060/85
F. Hoffmann-La Roche & Cq. Aktiengesellschaft, Basel/Schweiz
Brustkrebs-bezogene Antigene, Verfahren zu ihrer extraktiven Gewinnung
und ihre Verwendung
Die Erfindung "bezieht sich auf neue, mit Brustkrebs
zusammenhängende Antigene, auf diese Antigene spezifische Antisera, radioaktiv markierte Formen der Antigene
und Verfahren zum Erfassen oder zum Nachweis der in Serum oder Plasma kreisenden Antigene, auf einen Diagnosesatz,
der Standardantigene oder Antisera oder deren markierte Formen zum Kachweis der Antigene in menschlichem
Blut enthält.
Im Jahre 1965 wurde ein mit einem Tumor zusammenhängendes Antigen gefunden (J. Exptl. Med. 121, 439-462, 1965),
das in der Folge als Karzinomembryo-Antigen (nachfolgend
als CEA abgekürzt) bezeichnet wurde. GEA zirkuliert in menschlichem Blut - Serum oder Plasma - und kann durch
Radioimmuntest darin nachgewiesen werden· Es scheint jedoch keine Verbindung mit Brustkrebs zu haben.
Nun 1st es gelungen, eine Reihe von Antigenen zu lokali-
809828/1024
sieren, zu Isolieren und zu reinigen» die mit Brustkrebstumoren in Verbindung stehen. Sie wurden zunächst WMKW
und "fraktioniertes MK" genannt, werden aber jetzt als
BCA (Brustkrebsantigene) bezeichnet. rtMKw und "fraktioniertes MK" können als rohe bzw. reine Formen von BCA betrachtet werden.
Die Isolierung und Reinigung von BCA, also Brustkrebsantigenen, kann nach jeder'passenden Methode erfolgen« Zu
solchen, Methoden gehört normalerweise ,das Homogenisieren
.des jeweiligen Gewebes, die Extraktion mit einem Glykoproteln-Lösungsmittel und schließlich die Chromatographie
an einer oder mehreren Säulen. Zunächst kann rohes BCA auf der Grundlage seiner Eigenschaften und einer Kreuzreaktion mit CEA-Antiserum isoliert und gereinigt werden,
steht aber einmal rohes BCA-Antiserum nach der ersten Isolierung zur Verfügung, können Isolierung und Reinigung unter Verwendung von xohem BCA-Antiserum als Leitsubstanz
während nachfolgender Extraktions- und Isolierungsverfahren erfolgen.
Reines BCA erfordert kompliziertere Isolierungsmethoden, da es mit CEA-AHtiserum keine Kreuzreaktion eingeht.
Von den für die Isolierung und Reinigung von rohem und reinem BCA zur Verfugung stehenden Methoden sind die am bequemsten angewandten die Lösungsmittelextraktion, Ionenaustausch-(Ab sorption) Chromatographie und/oder die Gelfiltration. Gewöhnlich wird eine Kombination von allen drei Methoden angewandt.
Verwendbare Lösungsmittel sind Glykoprotein-Löeungeaittel.
Das bevorzugte Lösungsmittel ist wässriges ijeonittwulfat,
vorzugsweise etwa 80 S gesättigt. Andere verwendbare Lö-Bungeeittel sind z.B. Kaliumchlorid und Perchlorsäure.
809828/1024
Die Gelfiltration erfolgt normalerweise unter Verwendung eines hydrophilen, wasserunlöslichen, vernetzten Dextranpolymergels.
Dieses Gelmaterial ist im Handel erhältlich (von der AB Pharmacia, Uppsala, Schweden unter der Bezeichnung
"Sephadex" und enthält ein dreidimensionales makroskopisches Gitter von Dextransubstanzen, die miteinander
verbunden oder vernetzt sind, und vermag unter. Quellen Wasser zu absorbieren. Bei der nachfolgend beschriebenen
Extraktion wurde "Sephadex G-200" verwendet, wobei "200"
einen Wasseraufnahmewert von etwa 20 ml/g trockenen Gels bedeutet.
Mr die Ionenaustausch-Chromatographie wird zur Isolierung
von rohem und reinem BCA Diäthylaminoäthylcellulose (nachfolgend als DEAE abgekürzt) bevorzugt. Die Diäthylaminoäthylcellulosen
bester Eignung sind solche, die Mikroteilchenform aufweisen, stabellenförmige Teilchen mit einer Teilchengrößenverteilung,
ausgedrückt als Durchmesser gleichwertiger Kugeln, in einem Bereich von etwa 20 um bis etwa
60 um besitzen, eine Kapazität von 1,0 ± 0,1 rnlq/g, eine
Wasseraufnahme von 2,3 bis 2,9 g/g trockenen Austauschers haben und in freier Basenform vorliegen.
Das verwendete Elutionsmedium kann jedes Medium sein, das so zusammengestellt werden kann, daß die gewünschten Antigene
abgetrennt werden. Es wurde gefunden, daß Natriumphosphatpuffer mit einem pH von etwa 7,0 bis 7,5 für diesen
Zweck verwendet werden können. Die Elution kann unter Anwendung von Serienverdünnungen des Puffers oder eines
Gradienten erfolgen.
Werden zwei aufeinanderfolgende Chromatographiestufen angewandt, z.B. Absorption und Gelfiltration, können sie in
jeder Reihenfolge angewandt werden.
Obgleich rohes BCA mit CEA eine Kreuzreaktion eingeht, die
809828/1024
anzeigt, daß die beiden Antigene einige Antigenstellen
gemeinsam haben, treten doch, genügend immunologische und
physikalisch-chemische Unterschiede in Erscheinung, die die Feststellung ermöglichen, daß die beiden Antigene
voneinander verschieden sind. Reines BCA ist eindeutig recht verschieden von CEA, da es mit CEA-Antiserum keine
Kreuzreaktion eingeht. Auch wurden immunologische Tests durchgeführt, um zu zeigen, daß rohes BCA und reines BCA
von CCA III (Colon carcinoma antigen III - vgl. Federal Proceedings Paseb 31 Nr. 2, 1972, Abstract Nr. 2398),
das nach seinen physikalisch-chemischen und immunchemischen Eigenschaften wahrscheinlich identisch ist mit NGP
(Normal glycoprotein - vgl. Immunochemistry 9, 1972, S.
1031-1034) "und auch verschieden von NCA (non-specific
cross-reacting antigen - vgl. Proc. Nat. Acad. Sei. 69, 1972, S. 2492-2494).'
Die BCA-Antigene können nach herkömmlichen Methoden in
Brustkrebspatienten nachgewiesen werden, und da sie zirkulieren, können sie in einer sehr frühen Stufe der Gewebsneubildung
entdeckt werden. Die Erfassung oder der Nachweis ist so von großem Wert für die Frühdiagnose von
Brustkrebs. Die am meisten bevorzugte Methode der Erfassung zirkulierender Antigene ist die des Radioimmuntests.
Eine weitere bevorzugte Technik ist die der Enzymmarkierung. Diese letztere Technik ist in den "Reviews in
Clinical Chemistry», Band 22, S. 733-738 und 1243-1255 beschrieben. Doch können auch andere Methoden angewandt
werden, wie z.B. der Haemagglutinations-Test, die Immunodiffusion,
Gegenstrom-Elektrophorese, die Komplementfixierungstechnik und die Latex-Agglutination.
Antisera sowohl für rohes BCA als auch für reines BCA können in herkömmlicher Weise, z.B. unter Verwendung von
Kaninchen, hergestellt werden. BCA und auch auf BCA spe-
809828/1024
zifische Antisera können ebenfalls in herkömmlicher Weise radioaktiv markiert werden, z.B. unter Anwendung der modifizierten
Methode von Hunter und Greenwood,
Das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis von in Blutserum oder Plasma zirkulierendem BGA umfaßt die folgenden
Stufen:
a) Zusatz einer bestimmten Menge an BCA-Antiserum zu einer Blutprobe,
b) Inkubieren des Gemischs,
c) Zusatz einer bestimmten Menge an radioaktiv markiertem BCA,
d) Inkubieren des Gemischs,
e) Trennen des BCA-Anti-BCA-Komplexes von freiem BCA,
f) Messen der Radioaktivität entweder der Komplexe oder
des freien BCA.
Gegenstand der Erfindung ist auch ein Diagnosesatz zum Nachweis von BCA in einer Probe, enthaltend BCA und/oder
BCA-Antiserum. Das BCA und/oder das BCA-Antiserum kann bzw. können- mit einem radioaktiven Isotop markiert sein,
• -ιός * '
das bequemerweise I sein kann.
Die Erfindung wird nachfolgend unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele weiter erläutert.
Der in den Beispielen 2 bis 5 zur Prüfung des Portgangs
der angewandten Chromatographiestufen angewandte Radioimmuntest wurde folgendermaßen durchgeführt:
Es wurde die Doppelantikörpertechnik angewandt: Reihenmengen der Rohextrakte (von 100 bis 3,12 μg) wurden 24 h bei
370C mit 125I CEA und 1:200 000 absorbiertem Anti-CEA inkubiert.
Zur Trennung gebunden/frei wurden 1:100 Antiziegen-Gamma-Globulin-Kaninchenserum
und 1:5 000 normales Kanin-
809828/1024
chenserum zugesetzt. Nach einer zweiten Inkubation, 1 h
"bei 370C und 20 min "bei 4°C wurden die Proben mit 5 000 g
15 min zentrifugiert, und die überstehende Flüssigkeit wurde abgesaugt und verworfen. Die Fällung wurde 1 min
lang in einem automatischen Gamma-Zähler (Packard 5130, 70 % Leistung) gezählt.
Ein Vorrat histologisch unterschiedlicher menschlicher Primärbrustkarzinome
wurde angelegt. Metastasegewebe wurde nicht verwendet. Die Gewebe wurden homogenisiert, mit 3 m
„•7.
KCl in 5 χ 10 m Natriumphosphatpuffer bei pH 7,4 extrahiert
und dann zentrifugiert (4-5 000 g/h). Das Überstehende
wurde ausgiebig gegen destilliertes Wasser dialysiert und dann lyophilisiert. Der daraus stammende Rohextrakt wur
de erneut in Natriumphosphatpuffer bei pH 7,2 (0,04 m Natriumphosphat + 0,1 m NaCl) bei einer Konzentration von 30
mg/ml suspendiert. 1^5 ml der Lösung wurden durch Gelfiltration
an einer 1,5 x 70 cm Sephadex G-200-Säule gereinigt und mit Natriumphosphatpuffer vom pH 7,2 eluiert (Strömungs
geschwindigkeit: 4 ml/cm /h). Rohes BCA wurde in den Fraktionen (14-16) erhalten, die die höchste Kreuzreaktion mit
CEA in ei
zeigten.
zeigten.
125 CEA in einer konkurrierenden Hemmung mit I-CEA-Anti-CEA
Ein Vorrat an menschlichen Primärbrustkarzinomen wurde in einem Eisbad homogenisiert, lyophilisiert, bei 40C mit 3 m
KCl in einem Phosphatpuffer (0,005 m Na2HPO. - NaH2PO, pH
7»5)» 1:100 Gew./Vol.-Verhältnis extrahiert und bei 100 000 g 1 h zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit
wurde dialysiert, zuerst gegen Leitungswasser und dann gegen destilliertes Wasser, bis das gesamte Chlorid entfernt
war, und durch Ultrafiltration aufkoneentriert (PSAC
809828/1024
Mllipore Corporation, Bedford, Massachusetts) und lyophllisiert.
800 mg des lyophilisierten Extrakts wurden erneut in 40 ml einer phosphatgepufferten Salzlösung
(0,05 m ITaH2PO. - Na2HPO1, - pH 7,2 mit einem Gehalt an
0,1 m NaCl) (nachfolgend als PBS-Puffer bezeichnet) suspendiert
und 1 h bei 100 000 g zentrifugiert, was zu einem Rohextrakt von Primärbrustkrebs-Roh-BCA führte. Die
Proteinkonzentration der überstehenden Flüssigkeit, bestimmt nach der lowry-Teehnik (Verwendung von Albumin als
Standard) betrug 11,2 mg/ml. 7,5 ml (20 mg/ml) des rohen BCA wurden an einer Sephadex G 200-Säule (2,5 x 110 cm)
gelfiltriert und mit dem- PBS-Puffer bei einer Strömungsgeschwindigkeit
von 4 ml/cm /h eluiert. Die Eluate wurden bei 280 mn vermessen, und 50 ul jeder Fraktion (5 ml)
wurden durch Radioimmuntest gegen ■"■-'i CEA-Anti-CEA geprüft.
Die Fraktionen 52-65 und 66-78, aus der Gelfiltration erhalten, wurden kombiniert, dialysiert, durch
Ultrafiltration aufkt>nzentriert und lyophilisiert. Die
Ausbeuten waren wie folgt: Fraktionen 52-65 : 71>55 mg; Fraktionen 66-78 : 55,68 mg. Das lyophilisierte Produkt
wurde erneut in phosphatgepufferter Salzlösung - PBS (20 mg/ml) suspendiert und dann 1 h bei 100 000 g zentrifugiert.
Die überstehende Flüssigkeit (3 ml), nach der Lowry-Methode geprüft (14 mg/ml), wurde an einer Sephadex
G 200-Säule (1,5 x 105 cm) gelfiltriert (Strömungsgeschwindigkeit:
4ml/cm /h). Die Eluate wurden bei 280 nm gemessen, und eine Teilmenge von 200 ul einer jeden Fraktion (4 ml)
wurde durch Radioimmuntest gegen ein -Ί CEA-Anti-CEA-System,
wie oben beschrieben, geprüft. Die Fraktionen 18-30 aus der Gelfiltration wurden gegen einen Phosphatpuffer
dialysiert und an einer Diäthylaminoäthylcellulose-Säule
(1,5 x 20 cm) chromatographiert (23 S.S. Serva), mit Phosphatpuffer ins Gleichgewicht gebracht. Die Diäthylaminoäthylcellulose-Säule
wurde mit einer Strömungsgeschwindig-
809828/1024
keit von 20 ml/cm /h mit' Phosphatpuffern unterschiedlicher
Molarität (0,005 m, 0,025 m, 0,05 m, 0,1 m, 0,5 m) eluiert.
Die im Peak ("bei 280 nm) enthaltenen Fraktionen (von jeweils
10 ml) wurden gesammelt, dialysiert und durch Ultrafiltration
zu 3f5 ml rohem BCA aufkonzentriert und durch
Radioimmuntest gegen "Ί CEA-Anti-CEA geprüft.
60 g eines lyophilisierten Homogenats eines Yorrats an
menschlichen Primärbrustkarzinomen wurden in 450 ml zweifach destillierten Wassers gelöst, und dann wurden 450 ml
kalte 2 η Perchlorsäure unter Rühren zugetropft. Der Perchlorsäure extrakt wurde 30 min bei 4 500 g zentrifugiert.
Das lyophilisierte Homogenat wurde nochmal mit 1 η Perchlorsäure extrahiert. Nach dem Sammeln wurden die überstehenden
Flüssigkeiten 12 h gegen Leitungswasser und dann 36 h gegen doppelt destilliertes Wasser dialysiert. Die Lösungen wurden
durch Ultrafiltration auf konzentriert und lyophilisiert. Die lyophilisierten Mengen wurden in 3 m Kaliumchlorid in
Phosphatpuffer lyophilisiert und 24 h bei 4°C gerührt. Nach 1-stündigem Zentrifugieren bei 100 000 g wurde die überstehende
Flüssigkeit dialysiert, durch Ultrafiltration aufkonzentriert
und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 1,4 96·
500 mg dieses lyophilisierten Materials wurden in 25 ml phosphatgepufferter Salzlösung - PBS - suspendiert und 1 h
bei 100 000 g zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde nach der Lowry-Methode (13,4 mg/ml) und durch den Ra-
125
dioimmuntest gegen '-'I CEA-Anti-CEA geprüft. 10 ml (20 mg/ ml) der überstehenden Flüssigkeit wurden, wie in Beispiel 2 beschrieben, an einer Diäthylaminoäthylcellulose-Säule (2,8 cm χ 15 cm) chromatographiert. Fraktionen (von jeweils 5 ml) wurden bei 280 nm geprüft. 200 μΐ jeder Fraktion wurden durch einen Radioimmuntest gegen ^I CEA-Anti-CEA, wie oben beschrieben, getestet.
dioimmuntest gegen '-'I CEA-Anti-CEA geprüft. 10 ml (20 mg/ ml) der überstehenden Flüssigkeit wurden, wie in Beispiel 2 beschrieben, an einer Diäthylaminoäthylcellulose-Säule (2,8 cm χ 15 cm) chromatographiert. Fraktionen (von jeweils 5 ml) wurden bei 280 nm geprüft. 200 μΐ jeder Fraktion wurden durch einen Radioimmuntest gegen ^I CEA-Anti-CEA, wie oben beschrieben, getestet.
809823/1024
Die Fraktionen wurden für jeden Molaritätswert des Elutionsmittels
nach der UT-Absorption und dem Ansprechen auf den
Radioimmuntest gesammelt, durch Ultrafiltration aufkonzentriert
und dann lyophilisiert. 20 mg des lyophilisierten Materials aus der Elution mit dem 0,05 m Puffer wurden in
2 ml phosphatgepufferter Salzlösung - PBS - gelöst. Nach 1-stündigem Zentrifugieren bei 100 000 g wurde die das rohe
BCA enthaltende überstehende Flüssigkeit nach der lowry-Methode
geprüft und enthielt nachweislich 7 mg/ml. 0,5 ml der überstehenden Flüssigkeit wurden dann an einer Sephadex G
200-Säule (1 χ 95 cm) gelfiltriert und mit phosphatgepufferter
Salzlösung -PBS- bei-einer Strömungsgeschwindigkeit von
6 ml/cm2/h eluiert. Jede Fraktion (1,4 ml) aus der Gelfiltration
wurde auf ihre Absorption bei 280 nm und auch durch Radioimmuntest gegen 12^i CEA-Anti-CEA, wie oben beschrieben,
geprüft. Die Fraktionen 21-27 aus der Gelfiltration wurden gesammelt bzw. vereinigt, dialysiert und durch Ultrafiltration
auf 1 ml aufkonzentriert. Nach 1-stündigem Zentrifugieren bei 100 000 g wurden 10 ml-Mengen der rohes
BCA enthaltenden überstehenden Flüssigkeit markiert, an Sephadex G 200 gelfiltriert und nach dem oben beschriebenen
Radioimmuntest gegen Anti-Roh-BCA geprüft.
Ein Roh-BCA-Extrakt, hergestellt, wie oben in Beispiel 1 beschrieben,
wurde an einer Diäthylaminoäthylcellulose-Säule
wie folgt chromatographiert: 200 mg des Rohextraktswurden in 40 ml 0,005 m Natriumphosphatpuffer, pH 7,5, gelöst. Die
Lösung wurde auf eine 2,4 x 30 cm-Diäthylaminoäthylcellulose-(23
S.S.Serva)Chromatographiesäule gebracht, die mit dem
0,005 m Phosphatpuffer vom pH 7,5 ins Gleichgewicht gebracht war. Die Säule wurde stufenweise mit einer Reihe von Phosphatpuffern
bei pH 7,5 (0,005 m, 0,025 m, 0,05 m, 0,1 m und 0,5 m ) eluiert. 10 ml-Fraktionen wurden bei einer Strö-
809828/1024
28Q1257
- ttf- 9
mungsgeschwindigkeit von 20 ml/h aufgefangen. Die Absorption
einer ;Jeden Fraktion wurde "bei 280 mn gemessen, wodurch
die Peaks festgelegt.wurden. Der fünfte Peak war derjenige, der die "bei weitem höchste immunologische Aktivität
mit Anti-CEA zeigte. Die Fraktionen mit diesem Peak wurden vereinigt und gegen Natriumphosphatpuffer
(0,04 m Natriumphosphat + 0,1 m NaCl) "bei pH 7>2 dialysiert.
Die Proteinkonzentration wurde auf 750 pg/ml eingestellt.
Das Material wurde dann aufkonzentriert und durch Gelfiltration an einer 1,5 x 70 cm Seßhadex G-200-Säule
gereinigt. Ein 1,5 ml-Anteil des Konzentrats wurde auf
die Säule gebracht und mit Natriumphosphatpuffer "bei pH
7,2 eluiert; 4 ml-Fraktionen wurden bei einer Strömungsgeschwindigkeit
von 4 ml/cm /h aufgefangen. Fraktion Nr. 18, die mit Anti-CEA die höchste Aktivität zeigte, wurde
zu 1 mg/ml aufkonzentriert, und 10 ul wurden mit Na 5I
nach der modifizierten Hunter-Greenwoad-Hethode markiert. Dieses markierte Material wurde wieder durch Gelfiltration
an einer 1 χ 100 cm Sephadex G-200-Säule mit Natriumphösphatpuffer
bei pH 7,2 chromatographiert. Fraktionen von 1,5 ml wurden bei einer Strömungsgeschwindigkeit von
8 ml/cm /h aufgefangen. Fraktion Nr. 18 wurde wieder aufgefangen·
Diese Fraktion reagierte mit einem Antiserum, hergestellt aus rohem BCA, aber nicht mit Anti-CEA·
Diese Fraktion enthält so Antigene (BCA) in Verbindung mit Brustkarzinom ohne Kreuzreaktion mit Anti-CEA
und reagierend nur mit einem Antikörper, der unter Verwendung von aus dieser Art von Tumor extrahierten Antigenen
hergestellt wurde·
Zu 15 ml eines rohen BCA, hergestellt, wie in Beispiel 2
beschrieben, (10 mg/ml) in einem Phosphatpuffer wurden 8,4 g (HHj)2SO^, entsprechend 80 % Sättigung, langsam eu-
Ö09828/10H
2 S Q1 2 5
gegeben. Nach 20 min Rühren wurde das Produkt 15 min bei
15 000 g zentrifugiert. Die Fällung wurde dann erneut in 8 ml Phosphatpuffer - PBS - suspendiert. Die erneut suspendierte
Fällung (rohes BCA) und die überstehende Flüssigkeit wurden nach der Dialyse gegen phosphatgepufferte
Salzlösung - PBS-Puffer - durch Radioimmuntest gegen -"--Ί
CEA-Anti-CEA geprüft. Der Proteingehalt betrug 10 mg/ml nach der Iowry-Methode· Das erneut suspendierte rohe BCA
wurde dann, wie oben in Beispiel 2 beschrieben, an einer Diäthylaminoäthylcellulose-Säule chromatographiert. Die
Fraktionen der Elution mit 0,05 m Phosphatpuffer - PBS -,
125 die nach dem Radioimmuntest gegen I CEA-Anti-CEA aktiv
waren, wurden gesammelt (16 ml), durch Ultrafiltration (P.S.A.C.) auf 3 ml aufkonzentriert und dann 1 h bei
100 000 g zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde an einer Sephadex G 200-Säule (1,05 x 105 cm) bei
einer Strömungsgeschwindigkeit von 10 ml/cm /h gelfiltriert. Die Elutionsfraktionen wurden nach dem oben beschriebenen
Radioimmuntest gegen Jl CEA-Anti-CEA und
125I CEA-Anti-Roh-BCA (aus Beispiel 3) geprüft. Die aktivsten
Fraktionen gegen JI CEA-Anti-Roh-BCA wurden ge-
sammelt (10 ml) (Lowry: 80 μg/Inl) und zu 1,8 ml aufkonzentriert.
Nach 1-stündigem Zentrifugieren bei 100 000 g wurde der Proteingehalt der überstehenden Flüssigkeit
(Brustkrebsantigen(e): BCA) nach der Iowry-Hethode bestimmt (350 ug/ml).
10 ul einer lösung von BCA mit einer Konzentration von
121S
1 mg/ml wurden mit 10 ul ie-yj Na (= 1 mci) in Gegenwart von Chloramin T (50 ml einer lösung mit einem Gehalt von
1 mg/ml wurden mit 10 ul ie-yj Na (= 1 mci) in Gegenwart von Chloramin T (50 ml einer lösung mit einem Gehalt von
16 mg/10 ml) gemischt. Das Gemisch konnte bei Raumtemperatur 55 see reagieren. 50 ul einer Natriummetabisulfitlösung
wurden dann zugesetzt (Konzentration 48 mg/10 ml).
809828/1024
-*2 - ft/ 2BQ1257
Das Reaktionsprodukt wurde dann von dem freien Jod-125
durch Chromatographie an einer Sephadex G-200-Säule,
eluiert mit einer Geschwindigkeit von 8 ml/cm /h, abgetrennt.
Ein Radioimmuntest wurde unter Verwendung von Plasma (5 ml Blut, aufgenommen in 0,1 ml ÄDTA-lösung) durchgeführt.
Die erste Inkubation erfolgte 24 h "bei 370C unter
Verwendung von 0,1 ml der Plasmaprobe und Kaninchen-Anti-BCA (das mit normalem Gewebeextrakt absorbiert worden
war). Das wie oben radioaktiv markierte Antigen wurde dann zugesetzt. Das Antigen hatte eine Aktivität von 20 000
CPM/0,1 ml. Das Gemisch wurde dann ein zweites Mal 24 h bei 370C inkubiert. Darauf erfolgte eine dritte Inkubation mit
Anti-Gammaglobulin, 4-fach verdünnt, aus dem zur Herstellung
des Antiserums verwendeten Kaninchen. Es wurde 15 min "bei 6 000 g zentrifugiert, und die Fällung wurde nach dem
Absaugen der überstehenden Flüssigkeit in einem y-Zähler
ausgezählt. *
809828/1024
Claims (17)
1. Brustkrebs-bezogene Antigene, "BCA", hergestellt durch
Extrahieren homogenisierten Brustkarzinom-Materials mit einem Glykoprotein-Lösungsmittel, Zentrifugieren,
Dialysieren der angefallenen überstehenden Flüssigkeit, Lyophilisieren, Gelfiltration und Isolieren der BCA-haltigen
Fraktionen.
2. BCA nach Anspruch 1 in Rohform.
3. BCA nach Anspruch 1 in Reinform.
4. BCA nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in radioaktiv markierter Form.
5. BCA-Antiserum, spezifisch für BCA gemäß einem der Ansprüche
1 bis 4·
6. BCA-Antiserum na&h Anspruch 5 in radioaktiv markierter
Form.
7. BCA oder BCA-Antiserum nach Anspruch 4 oder 6, radioaktiv markiert mit 125I.
8. BCA nach einem der Ansprüche 1 bis 3, markiert mit En-•
zym.
9. Verfahren zur extraktiven Herstellung von BCA, dadurch gekennzeichnet, daß homogenisiertes Brustkarzinom-Material
mit einem Glykoprotein-Iiösungsmittel extrahiert,
der Extrakt zentrifugiert, die. angefallene überstehende Flüssigkeit dialysiert, lyophilisiert, gelfiltriert
wird und die BCA-haltigen Fraktionen isoliert werden.
10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß
als Glykoprotein-Iösungsmittel wässriges Kaliumchlorid verwendet wird.
809828/1024
ORIGINAL INSPECTED
28Q1257
11. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß als Glykoprotein-Lösungsmittel Perchlorsäure
verwendet wird.
12. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß als Glykoprotein-Iösungsmittel wässriges Ammoniumsulfat
verwendet wird.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß eine etwa 80 % gesättigte Ammoniumsulfatlösung
verwendet wird.
14. Verwendung von BCA gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche in Serum oder Plasma zur Durchführung eines
Radioimmuntests.
15. Verwendung nach Anspruch 14 unter Vornahme folgender Schritte:
a) Zusatz einer "bestimmten Menge BCA-Antiserum zu einer Blutprobe,
b) Inkubieren des Gemische,
c) Zusatz einer bestimmten Menge an radioaktiv markiertem BCA,
d) Inkubieren des Gemische,
e) Trennen des BCA-Anti-BCA-Komplexes von freiem BCA
und
f) Messen der Radioaktivität entweder des Komplexes oder des freien BCA.
16. Verwendung nach Anspruch 15 unter Trennung gemäß Stufe e) durch gemeinsames Ausfällen aller BCA-Anti-BCA-Komplexe.
17. Verwendung des BCA gemäß einem der Ansprüche 1 bis 13 zur Durchführung der Immunofluoreszenz-Methode.
809828/1024
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1140/77A GB1598811A (en) | 1977-01-12 | 1977-01-12 | Carcinoma-associated antigens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2801257A1 true DE2801257A1 (de) | 1978-07-13 |
Family
ID=9716885
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19782801257 Withdrawn DE2801257A1 (de) | 1977-01-12 | 1978-01-12 | Brustkrebs-bezogene antigene, verfahren zu ihrer extraktiven gewinnung und ihre verwendung |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4383985A (de) |
| JP (1) | JPS5388317A (de) |
| DE (1) | DE2801257A1 (de) |
| FR (1) | FR2377416A1 (de) |
| GB (1) | GB1598811A (de) |
| IT (1) | IT1143800B (de) |
| NL (1) | NL7800353A (de) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL60987A0 (en) * | 1980-09-05 | 1980-11-30 | Uni Ramot & Ind Dev Ltd | Detection of breast cancer |
| US4863853A (en) * | 1982-04-21 | 1989-09-05 | Bartos Patent Development And Holding Company Limited | Method of determining the diagnostic value of monitoring serum-CEA-levels in a carcinoma patient undergoing therapy |
| US4818709A (en) * | 1983-01-21 | 1989-04-04 | Primus Frederick J | CEA-family antigens, Anti-CEA antibodies and CEA immunoassay |
| US4565789A (en) * | 1983-04-04 | 1986-01-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Cell matrix receptor system and use in cancer diagnosis and management |
| US4529693A (en) * | 1983-12-09 | 1985-07-16 | Children's Hospital Medical Center Of Northern California | Detecting neoplastic mammary epithelial cells by detecting thioesterase II marker |
| JPS60214737A (ja) * | 1984-04-06 | 1985-10-28 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 糖鎖関連抗原の製造法 |
| US4571276A (en) * | 1984-06-22 | 1986-02-18 | North American Philips Corporation | Method for strengthening terminations on reduction fired multilayer capacitors |
| US5242823A (en) * | 1986-03-07 | 1993-09-07 | International Genetic Engineering, Inc. | Cloning of the 38kd Mycoplasma hyorhinis regression-associated antigen |
| US4748112A (en) * | 1986-03-07 | 1988-05-31 | International Genetic Engineering, Inc. | Methods and compositions relating to regression-associated antigens |
| US4785077A (en) * | 1986-05-05 | 1988-11-15 | Scripps Clinic And Research Foundation | Substantially pure cytotoxicity triggering factor |
| US5030621A (en) * | 1987-04-23 | 1991-07-09 | Bystryn Jean Claude | Shed melanoma antigen compositions |
| ATE124958T1 (de) * | 1987-09-16 | 1995-07-15 | Int Genetic Eng | Mit regressionsassoziierten antigenen in zusammenhangstehende methoden und verbindungen. |
| US5112617A (en) * | 1990-03-01 | 1992-05-12 | Criscuolo Pascual A | Method for controlling cold symptoms |
| IT1244879B (it) * | 1990-12-11 | 1994-09-12 | Alberto Bartorelli | Estratti da tessuti animali, utili in terapia e in diagnostica. |
| US5281700A (en) * | 1992-08-11 | 1994-01-25 | The Regents Of The University Of California | Method of recovering endothelial membrane from tissue and applications thereof |
| US5728579A (en) * | 1994-08-11 | 1998-03-17 | President And Fellows Of Harvard College | DNA encoding Mat-8 |
| US20030211971A1 (en) * | 2001-09-17 | 2003-11-13 | Srivastava Pramod K. | Compositions and methods for prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with compositions comprising unfractionated cellular proteins |
| US7306919B1 (en) | 2001-10-31 | 2007-12-11 | Thornthwaite Jerry T | Antigen-antibody cancer recognition system |
| US20050112622A1 (en) * | 2003-08-11 | 2005-05-26 | Ring Brian Z. | Reagents and methods for use in cancer diagnosis, classification and therapy |
| US20060003391A1 (en) * | 2003-08-11 | 2006-01-05 | Ring Brian Z | Reagents and methods for use in cancer diagnosis, classification and therapy |
| WO2005099363A2 (en) | 2004-03-26 | 2005-10-27 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods of diagnosing, preventing and treating cancer metastasis |
| US8419434B2 (en) * | 2008-04-15 | 2013-04-16 | International Business Machines Corporation | Interactive recipe preparation using interactive cooking device to communicate with kitchen appliances |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3410839A (en) * | 1964-04-16 | 1968-11-12 | Rand Dev Corp | Immunochromatographic partition of soluble antigens |
| US3663684A (en) * | 1970-06-01 | 1972-05-16 | Hoffmann La Roche | Carcinoembryonic antigen and diagnostic method using radioactive iodine |
| US3956258A (en) * | 1972-05-12 | 1976-05-11 | Hoffmann-La Roche Inc. | Carcinoembryonic antigens |
| US3823126A (en) * | 1972-05-23 | 1974-07-09 | K Bjorklund | Process of separating human cancer antigen proteins by gel filtration |
| US3960827A (en) * | 1972-07-10 | 1976-06-01 | Bjoerklund K B | Cancer associated polypeptide antigen, process for its preparation, process for preparing antibodies, process of cancer diagnosis and composition useful as an immunizing agent |
| US4132769A (en) * | 1974-10-30 | 1979-01-02 | Osther Kurt B | Cancer antigen, cancer therapy, and cancer diagnosis |
| US4152410A (en) * | 1975-09-03 | 1979-05-01 | Eisai Co., Ltd. | Diagnosis reagent for neoplasm and method for diagnosis of neoplasm |
-
1977
- 1977-01-12 GB GB1140/77A patent/GB1598811A/en not_active Expired
- 1977-12-30 IT IT31482/77A patent/IT1143800B/it active
-
1978
- 1978-01-10 JP JP94578A patent/JPS5388317A/ja active Pending
- 1978-01-11 NL NL7800353A patent/NL7800353A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-01-11 FR FR7800661A patent/FR2377416A1/fr active Granted
- 1978-01-12 DE DE19782801257 patent/DE2801257A1/de not_active Withdrawn
-
1980
- 1980-07-11 US US06/167,567 patent/US4383985A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4383985A (en) | 1983-05-17 |
| IT1143800B (it) | 1986-10-22 |
| NL7800353A (nl) | 1978-07-14 |
| FR2377416A1 (fr) | 1978-08-11 |
| GB1598811A (en) | 1981-09-23 |
| FR2377416B1 (de) | 1982-08-27 |
| JPS5388317A (en) | 1978-08-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2801257A1 (de) | Brustkrebs-bezogene antigene, verfahren zu ihrer extraktiven gewinnung und ihre verwendung | |
| DE2806146C2 (de) | Tumor-spezifisches Glykoprotein und dessen Verwendung zur Krebsdiagnose beim Menschen | |
| DE3650513T2 (de) | Verzögerter immunologischer Test in fester Phase | |
| DE2816841A1 (de) | Radioimmunologische bestimmung von prokollagen (typ iii) und prokollagen- peptid (typ iii) | |
| DE2126680A1 (de) | Carcinoembryonisches Antigen | |
| CH627187A5 (de) | ||
| EP0460190B1 (de) | Verfahren zum nachweis von malignen erkrankungen | |
| US4188189A (en) | Quantitative testing for vitamin B12 | |
| EP0013930A1 (de) | Immunogen, Antikörper für ein Thymus-Hormon, markiertes Thymus-Hormon und Verfahren zur Bestimmung dieses Thymushormons | |
| DE69031662T2 (de) | Test für die alkalische Phosphatase aus Knochen | |
| EP0101603B1 (de) | Neues Protein (PP13), Verfahren zu seiner Anreicherung und Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| DE2917658A1 (de) | Reagens zur pruefung auf das hb tief s a tief g -antigen, sowie verfahren zu seiner herstellung | |
| DE69204718T2 (de) | CA-195 ähnliches immunreaktives Antigen von menschlicher Amnionflüssigkeit. | |
| Goldstein et al. | Studies on fluorescent antibody staining II. Inhibition by sub-optimally conjugated antibody globulins. | |
| US4086217A (en) | Carcinoembryonic antigens | |
| EP0100522A2 (de) | Neues Protein (PP17), Verfahren zu seiner Anreicherung und Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| DE69008178T2 (de) | Analyse von vitamin b12. | |
| EP0141326B1 (de) | Neues Protein PP20, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| DE2714751C2 (de) | ||
| Lauf et al. | The M-antigen in HK and LK sheep red cell membranes | |
| EP0029191B1 (de) | Neues Protein PP11, ein Verfahren zu seiner Gewinnung und seine Verwendung | |
| DE3050334C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung von tumorassoziierten, glykosidische Bindungen enthaltenden Substanzen (TAGS) in einer Körperflüssigkeitsprobe und Reagenz zur Durchführung des Verfahrens | |
| EP0001812A1 (de) | Verfahren zur Herstellung gereinigten Alpha-1-Fetoproteins und dessen Verwendung | |
| DE2912239C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Festphasenträgers für die Radioimmunoanalyse sowie dessen Verwendung in chromatographischen Säulen | |
| EP0345732A2 (de) | Verfahren zur Bestimmung eines Antikörpertiters |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OB | Request for examination as to novelty | ||
| OC | Search report available | ||
| 8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |