DE2450523A1 - Verfahren zum nachweis von antigenen oder antikoerpern - Google Patents

Verfahren zum nachweis von antigenen oder antikoerpern

Info

Publication number
DE2450523A1
DE2450523A1 DE19742450523 DE2450523A DE2450523A1 DE 2450523 A1 DE2450523 A1 DE 2450523A1 DE 19742450523 DE19742450523 DE 19742450523 DE 2450523 A DE2450523 A DE 2450523A DE 2450523 A1 DE2450523 A1 DE 2450523A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
receptors
antigen
antibody
receptor
antibodies
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19742450523
Other languages
English (en)
Other versions
DE2450523B2 (de
DE2450523C3 (de
Inventor
Irene Bornstein
Andreas A Kapsalis
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baxter International Inc
Original Assignee
Baxter Laboratories Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Laboratories Inc filed Critical Baxter Laboratories Inc
Publication of DE2450523A1 publication Critical patent/DE2450523A1/de
Publication of DE2450523B2 publication Critical patent/DE2450523B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2450523C3 publication Critical patent/DE2450523C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/819—Multifunctional antigen or antibody
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Magnetic Means (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von Substanzen, im allgemeinen von Proteinen, die in Blutplasma oder Serumproben als Antigene oder Antikörper wirken können. Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Nachweis von Antigenen oder Antikörpern, die bei Hepatitis auftreten.
Die Erfindung macht von bekannten Radioimmunoanalysen (RIA) oder radioiojEunologischen Verfahren Gebrauch, Diese Verfahren können für den Nachweis einer speziellen Substanz, z.B. eines Antigens oder Antikörpers' verwendet werden, wobei ein radioaktives Material oder eine andere Markierungssubstanz an einen bestimmten Antikörper angelagert wird und dann die Menge des so markierten Antikörpers, der mit einem Feststoff-Antigen verbunden oder daran angelagert ist, gemessen wird. Durch Messung der radioaktiven Emission der unbekannten Probe und Vergleich mit Standardkurven, die bei Verwendung einer bekannten Menge Antigen erhalten wurden, ist es so bei radioaktiv markierten Antikörpern möglich, zu bestimmen, ob eine Plasma- oder Serumproben ein spezielles Antigen oder einen speziellen Antikörper enthält.
Viele der bekannten RIA-Verfahren für den Nachweis von Antigenen oder Antikörpern,einschließlich der bei Hepatitis vorkommenden Antigene und Antikörper,aktivieren zunächst den Antikörper durch Anlagerung an feste Phasen oder Substrate. Solche Verfahren sind in den folgenden Literaturstellen beschrieben: US-PS 3.646.346; Int. Arch. Allergy 42, 816-825 (1972)*und The Journal of Immunology 109,4, 834-841 (1972)!* Mit den bisher bekannten RIA-Verfahren konnten bisher nur entweder Antigene oder Antikörper nachgewiesen werden, wenn ein einziges RIA-Verfahren verwendet wurde.
♦Veröffentlichung von J.V. Auer et al ♦♦Veröffentlichung von CM. Lang *x al
509821 /0661
.24B0523
Im Gegensatz zum Stand der Technik ist im Verfahren der vorliegenden Erfindung das Antigen an eine feste Komponente gebunden. Ähnliche "bekannte Verfahren sind z.B. beschrieben in: The Journal öf Immunology 109,1, 171-173 (1972); Vox sanguinis 24, 66-75 (1972) und The Journal of Immunology
***
105,1, 129-137 (1969). Nach diesen Verfahren lpssen sich entweder nur Antigene oder Antikörper nachweisen, nicht aber beide, und sie unterscheiden sich von der vorliegenden Erfindung auch in anderen Einzelheiten.
Es wurde nun ein Verfahren zum Nachweis von Proteinen gefunden, die als Antigene oder Antikörper wirken können, das durch die folgenden Schritte gekennzeichnet ist:
(a) Zumindest teilweises Überziehen eines Paares von Rezeptoren mit einem bekannten Antigen,
(b) Zugabe der zu untersuchenden Probe zu beiden Rezeptoren,
(c) Zugabe von markiertem Antikörper zu einer der beiden Rezeptoren,
(d) Stehenlassen der beiden Rezeptoren,
(e) Entfernen des Inhalts des Gefäßes mit dem anderen Rezeptor und Zugabe der gleichen Menge markierten Antikörpers wie im Schritt (c),
(f) Stehenlassen der beiden Rezeptoren,
(g) Entfernen des nicht gebundenen Inhalts der beiden Rezeptoren,
(h) Messung der von jedem Rezeptor ausgesandten
Strahlungsmenge und
(i) Vergleich der von den beiden Rezeptoren abgesandten Strahlungsmenge mit der von einer Blindprobe ausgesandten Strahlungsmenge.
"■Veröffentlichung von Joel D. Rosenthal et al * ♦Veröffentlichung von Yi. R. Peterson et al ♦*♦Veröffentlichung von Sydny E. Salmon et al
509821 /0661
Bei deli Verfahren der vorliegenden Erfindung wird jede der zu "bestimmenden Proben mit den Oberflächen von zwei Feststoff- Antigenen, d.h. von Antigenen, die an eine feste Phase angelagert sind, in Kontakt gebracht. Die feste Phase kann ein Reagenzglas oder ein ähnlicher Rezeptor oder auch ein fester Träger, wie z.B. poröse Glasperlen sein. In der Beschreibung dieser Erfindung wird das Wort Rezeptor zur Bezeichnung jedes geeigneten festen Antigenträgers benutzt.
Nachdem die Probe zu dem festen Antigen hinzugefügt worden ist, wird eine bestimmte Menge markierter Antikörper zu einer der Rezeptoren (im folgenden "Indikator"-Rezeptor genannt) hinzugegeben. Nach einer t
bestimmten Zeit wird 'der Inhalt des zweiten Rezeptors (im folgenden "Unterscheidungs"-Rezeptor genannt) entleert, der Rezeptor gewaschen und die gleiche Menge an markiertem Antikörper hinzugegeben wie zum Indikator-Rezeptor. Beide Rezeptoren
werden dann eine bestimmte Zeitspanne ruhig stehen gelassen. Der nicht gebundene oder nicht angelagerte Inhalt jedes Rezeptors wird dann entfernt und die von jedem Rezeptor ausgesandte Strahlung gemessen. Durch Vergleich der von jedem Rezeptor ausgesandten Strahlungsmenge mit Blindproben oder Standardkurven, die mit einer gegebenen Antigen- oder Antikörpermenge erhalten wurden oder durch Vergleich der von zwei Rezeptoren ausgesandten Strahlungsmenge kann dann bestimmt werden, ob die Probe Antigene oder Antikörper enthält.
Die vorliegende Erfindung umfaßt eine Anzahl von Einzelschritten. Im ersten Schritt wird ein Paar identischer Rezeptoren, wie z.B. Teströhrchen oder zwei gleiche Mengen fester Teilchen, wie Glasperlen, mit einem bekannten Antigen überzogen.
50982 1/066 1
Die Rezeptoren können aus einem wasserunlöslichen Material, wie z.B. Polystyrol, Polyäthylen, Polypropylen, Nitrocellulose, Acrylamid oder Copolyweren von Acrylnitril mit Styrol hergestellt sein. Kleine Teilchen aus diesen Materialien können ebenfalls als Antigenträger benutzt werö.en. Diese Materialien wurden ausgewählt, weil die meisten Proteine, insbesondere die bei Hepatitis auftretenden Antigene an sie gebunden oder angelagert werden.
Um die Rezeptoren für die erfindungsgemäße Verwendung herzurichten, werden die gewünschten Antigene durch einfaches Zusammenbringen jedes Rezeptors mit annähernd gleichen Mengen bekannter Antigene in Lösung an die Rezeptoren angelagert? Diese werden als die featen Antigene bezeichnet. Nachdem das bekannte Antigen eine bestimmte Zeitlang in Kontakt mit den Rezeptoren gebracht worden war, wird der nicht angelagerte Inhalt jedes Rezeptors entfernt und jeder Rezeptor gewaschen. Das Antigen kann auch durch geeignete chemische Reaktionen, wie z.B. mit durch Bromcyan aktivierter Cellulose, an die feste Phase angelagert werden.
An diesem Punkte des erfindungsgemäßen Verfahrens können die Rezeptoren in einen Gleichgewichtszustand gebracht werden, indem sie
Jeine bestimmte Zeit mit einem Rinderseruraalbumin oder einem anderen Protein, das nicht von der gleichen Art ist, wie das zu untersuchende Antigen oder der Antikörper, zusammengebracht werden. Der Schritt dient dazu, die Anlagerung an diejenigen Rezeptoren zu vollziehen, die nicht
von dem bekannten Antikörper besetzt sind, wodurch die Adsorption der nichtspezifischen Proteine während der folgenden Verfahrensschritte εηΐ ein Minimum heruntergesetzt
*Der pH-Wert der Antigenlösung wird durch Zugabe geeigneter Puffer auf zwischen etwa 5 und 9 gebalten. Ein Teil des Antigens lagert sich an die Rezeptoren an. Dieses xtfird als Feststoff-Antigen bezeichnet.
509821 /0661
wird. Nach der Einstellung des Gleichgewichts wird der Überschuß der Äquilibrierlösung von den Rezeptoren durch Waschen und Trockenschütteln entfernt. Überzogene Rezeptoren sind bei Lagerung bei 50C einige Monate haltbar.
Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Probe, die auf Antigene oder Antikörper geprüft v/erden soll, zu zwei Rezeptoren . gegeben. Bei der Benutzung des. erfindungsgemäßen Verfahrens zur Untersuchung von menschlichem Blut auf Hepatitis-Antigen oder -Antikörper zeigt die Anwesenheit von Antigen, daß der Blutspender Hepatitis hat, während die Anwesenheit von Antikörpern zeigt, daß der Blutspender irgendwann Hepatitis gehabt hat.
Nach Zugabe der Proben wird lediglich zu dem Indikator-Rezeptor ein markierter Antikörper hinzugegeben. Ein markierter Antikörper ist ein Protein, das sich mit einem bekannten Antigen kombinieren kann und an das irgendein radioaktives Material, z.B. ein radioaktives Jodisotop, wie
1 25
J , angelagert wurde. Andererseits kann auch ein Enzym, wie z.B. Alkali-Phosphatase von Meerrettich-Peroxidase an den Antikörper angelagert werden, um als Markierung zu dienen. Ein geeignetes Verfahren zur Herstellung markierter Antikörper wird in Biochem. J. 89, 114-123 (1965)* diskutiert.
Nachdem beide Teströhrchen mindestens eine Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert worden waren, wird der Inhalt des Unterscheidungs-Rezeptors ausgewaschen und markierter Antikörper hinzugegeben. Nach einer bestimmten Zeit, im allgemeinen nach mindestens einer Stunde, wird dei Inhalt beider Teströhrchen ausgegossen, beide Teströhrchen werden gewaschen und die Restradioaktivität der Röhrchen mit einem \?-Strahlenzähler gemessen.
♦Veröffentlichung von F.G. Greenwood et al
509821/0661
Nachdem die Radioaktivität jedes Rezeptors gemessen worden ist, werden die Meßwerte mit bekannten Kontrollproben verglichen. Wenn der Wert von beiden Rezeptoren gegenüber bekannten Blindproben oder normalen Proben, maximal ist, so kann daraus gefolgert werden, daß die untersuchte Probe weder Antigen noch Antikörper enthält. Wenn der Wert von dem Indilrator-Rezeptor signifikant niedriger liegt als der Maximalwert der Blindprobe.
und der Wert von dem Unterscheidungs-Rezeptor groß ist oder nahe an der Blindprobe liegt, enthält die Probe Antigen. Wenn der Wert von beiden Rezeptoren im Vergleich zur Blindprobe niedrig liegt, enthält die Probe Antikörper.
Die Gründe hierfür sind folgende: Wenn die Probe weder Antigen noch Antikörper enthält, ist der Wert von beiden Rezeptoren hoch. Der Wert von dem Indikator-Rezeptor ist deswegen hoch, weil der markierte Antikörper sich mit dem Festphasen-Antigen verbinden kann - , deshalb verbindet es sich nicht mit einem etwaigen Antigen in7 Probe. Der Wert des Unterscheidur.gs-Rezeptors ist hoch, weil sich der markierte Antikörper mit dem Festphasen-Antigen verbindet, da sich vor der Zugabe des markierten Antikörpers kein Antikörper aus der Probe mit dem Festphasen-Antigen verbunden hat.
Wenn die Probe Antigen enthält, ist der Wert von dem Indikator niedrig, weil das Antigen in der flüssigen Probe mit dem Festphasen-Antigen um die begrenzte Menge an hinzugefügtem markierten Antikörper konkurriert und so die Menge des an die feste Phase gebundenen Isotops verringert. So können nur kleine Mengen des markierten Antikörpers mit dem Festphasen-Antigen reagieren und daran gebunden werden.
509821/0661
Andererseits ist der Wert von dem Unterscheidungs-Rezeptor hoch, weil das Antigen in der Probe sich nicht mit dem Pestphasen-Antigen verbindet und vcr der Anlagerung des markierten Antikörpers ausgewaschen wird. Der zu dem Unterscheidungs-Rezeptor hinzugefügte markierte Antikörper verbindet sich somit mit dem Festphasen-Antigen und "bewirkt, daß der Unterseheidungc-Rezeptor den gleichen Radioaktivitätswert hat wie die Blindprobe.
\ienn die Probe Antikörper enthält, haben beide Rezeptoren
einen niedrigen Wert, weil in den beiden Rezeptoren der Antikörper in der Probe sich mit dem Festphasen-Antigen verbindet und damit die Menge des Festphasen-Antigens, das für eine Kombination mit dem markierten Antikörper zur Verfügung steht, ganz beträchtlich verringert,
Das erfindungsgemäße Verfahren ist insbesondere brauchbar für den Nachweis von Hepatitis-Antigenen und -Antikörpern. Gegenüber allen bekannten Antigen-Antikörper-Reaktionen, die alle nur entweder Antigen oder Antikörper nachweisen können, nicht aber beide, bietet das erfindungsgemäße Verfahren eine Möglichkeit, mit der sowohl Hepatitis-Antigen als auch -Antikörper mit einer einzigen Versuchsreihe nachgewiesen werden können.
Da der Nachweis von Hepatitis-Antigen und -Antikörper ein bevorzugtes Anwendungsgebiet des erfindungsgemäßen Verfahrens darstellt, wird im folgenden ein Verfahren beschrieben, bei dem das nachzuweisende Protein Hepatitis-Antigen oder -Antikörper ist. Das erfindungsgemäße Verfahren kann jedoch für den Nachweis aller Antigen-Antikörper-Systeme verwendet werden*·
509821/066 1
In einer speziellen Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens werden Polystyrol-Teströhrchen einer Größe von 10x75 mm als Rezeptoren benutzt. Die Röhrchen werden mit 0,2 ml einer gereinigten Hepatitis-Antigenlösung* überzogen. Die Lösung hat einen pH-Wert von etwa 7,4 und enthält etwa 1014 Hepatitis-Antigen-Teilchen*pro ml in 0,2 m Äthylendismin/Essigsäure-Puffer mit einem Gehalt von 0,001 m MgCl,,. Die Röhrchen werden über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen.
Am nächsten Morgen wird die Antigenlösung aus den Röhrchen entfernt. Dann wird mit 1 ml einer 0,5 5»igen Rinderalbuminlösung 4 Stunden lang das Gleichgewicht eingestellt. / mit phosphatgepufferter Salzlösung mit einem pH-Wert von 7,2 gewaschen. Die so präparierten Röhrchen sind bei etwa 50C mehrere Monate ohne Aktivitätsverlust lagerfähig.
125 Der Hepatitis-Antikörper*wird dann mit J J markiert, wie es in Biochem. J. 89, 114-123 (1963) beschrieben ist. Der Antikörper kann auch mit anderen leicht nachweisbaren Substanzen markiert werden, wie z. B. mit Nitrophenylgruppen, die mit Elektronen-Spin-Resonanz-Verfahren bestimmt werden können, oder mit Enzymen, wie alkalischer Phosphatase oder Meerrettich-Peroxida se.
Pur die Analyse von Plasma oder Serumproben wird das folgende Verfahren benutzt: 0,1 ml der zu bestimmenden Probe wird zu jeweils 2 Teströhrchen oder anderen oben beschriebenen Rezeptoren hinzugegeben. Nachdem die Röhrchen eine Stunde bei Raumtemperatur belassen worden waren, wird 0,1 ml der markierten Antikörperlösung zu einem der Röhrchen, das im folgenden "Indikator"-Röhrchen genannt wird, hinzugegeben. Zur gleichen Zeit wird der Inhalt des anderen Röhrchens, im folgenden "Unterscheidungs"-Röhrchen genannt, ausgegossen.
*"hepatitis associated antigen"
509821 / 0 6 B 1
Das Unterscheidungs-RÖhrchen wird dann einige Male mit phosphatgepufferter Salzlösung mit einem pH-Wert von etwa 7,2 gewaschen und 0,1 ml markierter Antikörper sowie 0,1 ml phosphatgepufferter Salzlösung hinzugegeben. Die 0,1 ml phosphatgepufferter Salzlösung beeinflussen die Antigen-Antikörper-Reaktiori nur insofern, als sie das (Lösungsmittel-) Volumen der Unterscheidungs-Rezeptoren gleich dem Volumen der Indikator-Rezeptoren machen. Dadurch, wird gewährleistet, daß die Reaktion in dem Unterscheidungs-Rezeptor nicht von der in dem Indikator-Rezeptor wegen der Volumendifferenzen abweicht.
Nach 2 Stunden wird der Inhalt beider Röhrchen entfernt und die Röhrchen werden gewaschen. Die Röhrchen werden dann in einen^-Strahlenzähler (deep well gamraa counter) überführt und ihre Radioaktivität gemessen. Durch Vergleich des CPM - Wertes für jedes Röhrchen ist es möglich, entweder Antigen oder Antikörper oder keines von beiden in der Probe nachzuweisen.
Die Tabelle I zeigt die Ergebnisse, die bei Benutzung des obigen Verfahrens mit normalem Serum als Blindprobe , d.h., Serum, das kein Hepatitis-Antigen oder -Antikörper enthält, und mit Proben aus einer Testreihe des "National Institute of Health" (NIH) erhalten wurden.
Tabelle I
CPM $ des Normalgeh.
Probe Indikator Unterscheid. Ί
Normal 2519 3882
Normal 2345 3200
NIH-Test
Nr.
234 747 3630
243 1846 3677
231 118 332
248 15 2612
ik ate >r Unterscheid. Ergebnis Normal
00 100 Antigen
30 .8 102.4 Antigen
76 .0 103.7 Antikörper
4. .9 23.5 Antikörper
0 .6 73.7
509821 /0661
Die NIH-Testreihen-Kumraern 234 und 243 sind Serumproben, die Hepatitis-Antigen enthalten. Wie schon vorher erläutert, zeigt ein Indikator-Röhrchen mit einem CPM-Wert, der niedriger liegt als die Blindprobe oder normale Kontrolle, zusammen mit einem Unterscheidungs-Röhrchen mit einem CPM-Wert, der hoch oder in der Nähe der Blindprobe liegt, daß in der untersuchten Probe Antigen vorhanden ist.
Die OPM-Werte für die FIH-Testreihen-Nutnmern 234- und 243 decken sich mit den erwarteten Werten und zeigen, daß mit dieser Methode Antigene nachgewiesen werden können.
Die niit den NIH-Testreihen-Numroern 231 und 248 erhaltenen Ergebnisse zeigen, daß die Methode zum Nachweis von Antikörpern geeignet ist. Wie schon vorher erörtert, zeigen niedrige CPM-Werte der Indikator- und Unterscheidungs-Rezeptoren im Vergleich zu den Blindproben-CPM-Werten die Anwesenheit von Antikörpern an. Die bei der Untersuchung von den NIH-Testreihen-Nummern 231 und 248 erhaltenen Werte zeigen die Anwesenheit von Hepatitis-Antikörpern in den untersuchten Proben.
509821 /0661

Claims (6)

- 11 Pat ent ansprüche
1) Verfahren zum Nachweis von Proteinen, die als Antigene oder Antikörper wirken können, gekennzeichnet durch die folgenden Schritte:
a) Zumindest teilweises Überziehen eines Paares von Rezeptoren mit einem "bekannten Antigen,
b) Zugabe der zu untersuchenden Probe zu beiden Rezeptoren,
c) Zugabe von markiertem Antikörper zu einer der beiden Rezeptoren,
d) Stehenlassen der beiden Rezeptoren,
e) Entfernen des Inhalts des Gefäßes mit dem anderen Rezeptor und Zugabe der gleichen Menge markierten Antikörpers wie im Schritt c), ■
f) Stehenlassen der beiden Rezeptoren,
g) Entfernen des nicht gebundenen Inhalts der beiden Rezeptoren,
h) Messung der von jedem Rezeptor ausgesandten Strahlungsmenge und
i) Vergleich der von den beiden Rezeptoren ausgesandten Strahlungsmenge mit der von einer Blindprobe ausgesandten Strahlungsmenge.
2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Rezeptoren aus einem wasserunlöslichen Material bestehen.
3) Verfahren nach Anspruch 1-2, dadurch gekennzeichnet, daß das Antigen im Schritt a) Hepatitis-Antigen und der Antikörper im Schritt c) den Antikörper zum Hepatitis-Antigen darstellt.
509821/0661
4·) Verfahren nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß der markierte Antikörper in Schritt c) mit einem
125
radioaktiven Jodisotop, vorzugsweise mit J ' markiert ist,
5) Verfahren nach Anspruch 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß die Schritte d) und f) so lange durchgeführt werden, daß eine maximale Bindung des Materials in den Rezeptoren
zueinander oder zu den anderen Rezeptoren erreicht wird.
6) Verfahren nach Anspruch 1-5» dadurch gekennzeichnet, daß als wasserunlösliches Material Polystyrol, Polyäthylen,
Polypropylen, Nitrocellulose, Mischpolymere von Acrylnitril mit Styrol oder Glasperlen verwendet wird.
509821/0661
DE2450523A 1973-10-26 1974-10-24 Verfahren zum immunologischen Nachweis von Proteinen Expired DE2450523C3 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/410,066 US3949064A (en) 1973-10-26 1973-10-26 Method of detecting antigens or antibodies

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2450523A1 true DE2450523A1 (de) 1975-05-22
DE2450523B2 DE2450523B2 (de) 1976-10-07
DE2450523C3 DE2450523C3 (de) 1978-06-22

Family

ID=23623067

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2450523A Expired DE2450523C3 (de) 1973-10-26 1974-10-24 Verfahren zum immunologischen Nachweis von Proteinen

Country Status (15)

Country Link
US (2) US3949064A (de)
JP (1) JPS5762020B2 (de)
AU (1) AU476619B2 (de)
BE (1) BE820660A (de)
BR (1) BR7408886A (de)
CA (1) CA1036493A (de)
DE (1) DE2450523C3 (de)
ES (1) ES431413A1 (de)
FR (1) FR2249334B1 (de)
GB (1) GB1436934A (de)
IL (1) IL45707A (de)
LU (1) LU71027A1 (de)
NL (1) NL7413552A (de)
SE (1) SE7413484L (de)
ZA (1) ZA746098B (de)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2905657A1 (de) * 1978-02-14 1979-08-16 Sanyo Chemical Ind Ltd Konjugate aus immunologisch aktiver substanz und glas, verfahren zu deren herstellung und verwendung derselben
DK151398B (da) * 1976-08-20 1987-11-30 Immuno Ag Apparat til immunologisk bestemmelse af antigener eller antistoffer og anvendelse af dette apparat

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4172117A (en) * 1974-05-20 1979-10-23 Biotest-Serum-Institut Gmbh Method for the simultaneous measurement of antigens and their antibodies by solid-phase radioimmunoassay
US4225784A (en) * 1976-06-17 1980-09-30 Smith Kline Instruments, Inc. Covalently bound biological substances to plastic materials and use in radioassay
JPS604422B2 (ja) * 1976-10-07 1985-02-04 持田製薬株式会社 抗原の定量方法
USRE34394E (en) * 1978-01-23 1993-09-28 Baxter Diagnostics Inc. Method and composition for double receptor, specific binding assays
US4242322A (en) * 1978-06-07 1980-12-30 Electro-Nucleonics Laboratories, Inc. Methods and materials for detecting antigens and antibodies
US4393040A (en) * 1981-03-24 1983-07-12 Lopapa Institute, Inc. In-vitro diagnostic method for detection of acetylsalicylic acid ingestion
US4994373A (en) 1983-01-27 1991-02-19 Enzo Biochem, Inc. Method and structures employing chemically-labelled polynucleotide probes
US5242798A (en) * 1983-07-21 1993-09-07 Scripps Clinic And Research Foundation Synthetic polypeptides corresponding to portions of proteinoids translated from brain-specific mRNAs, receptors, methods and diagnostics using the same
PH21409A (en) * 1983-07-21 1987-10-15 Scripps Clinic Res Synthetic polypeptides and pharmaceutical composition containing the same
WO1986000991A1 (en) * 1984-07-24 1986-02-13 Commonwealth Serum Laboratories Commission Method for determining mimotopes
US5182082A (en) * 1991-01-23 1993-01-26 Becton, Dickinson And Company Multiple aliquot device for distributing a liquid solution into a well
US5877028A (en) * 1991-05-29 1999-03-02 Smithkline Diagnostics, Inc. Immunochromatographic assay device
US5998220A (en) * 1991-05-29 1999-12-07 Beckman Coulter, Inc. Opposable-element assay devices, kits, and methods employing them
US6168956B1 (en) 1991-05-29 2001-01-02 Beckman Coulter, Inc. Multiple component chromatographic assay device
US5348867A (en) * 1991-11-15 1994-09-20 George Georgiou Expression of proteins on bacterial surface
US5698686A (en) * 1994-10-20 1997-12-16 Arch Development Corporation Yeast telomerase compositions
US5807552A (en) * 1995-08-04 1998-09-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions for conferring immunogenicity to a substance and uses thereof
AU727445B2 (en) * 1995-08-18 2000-12-14 Donald W Landry Detection of organic compounds through regulation of antibody-catalyzed reactions
US6689757B1 (en) 1996-02-12 2004-02-10 M.L. Laboratories Plc Methods for vaccination and vaccines therefor
US20020034732A1 (en) * 1997-07-30 2002-03-21 Daniel J. Capon Compositions and methods for determining anti-viral drug susceptibility and resistance and anti-viral drug screening
US6610838B1 (en) 1997-09-10 2003-08-26 Symbicom Aktiebolag P13 antigens from Borrelia
CN1230444C (zh) * 1998-11-16 2005-12-07 德克萨斯州立大学董事会 含有hiv细胞毒t淋巴细胞表位的hiv多肽或肽或其多聚核苷酸表达构建体的用途
WO2002036777A1 (en) * 2000-11-02 2002-05-10 The National University Of Singapore aopB GENE, PROTEIN, HOMOLOGS, FRAGMENTS AND VARIANTS THEREOF, AND THEIR USE FOR CELL SURFACE DISPLAY
EP2292762A3 (de) 2002-12-20 2012-12-12 Board of Regents, The University of Texas System VMP-artige Sequenzen von krankheitserregenden Borrelienspezies und -stämmen
CN1820020B (zh) * 2003-05-06 2010-04-28 技术持有有限公司 Sars-冠状病毒病毒样颗粒以及应用方法
CA2526690C (en) 2003-05-23 2014-01-14 Board Of Regents The University Of Texas System Structure based and combinatorially selected oligonucleoside phosphorothioate and phosphorodithioate aptamer targeting ap-1 transcription factors
EP1998800A2 (de) 2006-01-18 2008-12-10 University Of Chicago Zusammensetzungen und verfahren in verbindung mit stayphylokokken-bakterienproteinen
EP2115002B1 (de) 2007-02-02 2014-08-20 Baylor Research Institute Impfstoffe aus basis eines targeting-antigens für dcir-exprimierte und antigen-präsentierenden zellen
MX2009008143A (es) * 2007-02-02 2009-10-20 Baylor Res Inst Antienos multivariables acomplejados con anticuerpo monoclonal humanizado de apuntamiento.
TWI422594B (zh) 2007-02-02 2014-01-11 Baylor Res Inst 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體（ｄｃ-ａｓｇｐｒ）接合抗原呈現細胞之藥劑
KR20090114466A (ko) 2007-02-23 2009-11-03 베일러 리서치 인스티튜트 덱틴-1을 통한 사람 항원제시세포 활성화의 치료학적 적용
TW200900078A (en) * 2007-02-23 2009-01-01 Baylor Res Inst Activation of human antigen-presenting cells through CLEC-6
NZ589341A (en) 2007-02-23 2012-02-24 Baylor Res Inst Activation of human antigen-presenting cells through dendritic cell lectin-like oxidized ldl receptor-1 (lox-1)
US9138470B2 (en) * 2007-11-02 2015-09-22 The Johns Hopkins University Multi-component L2 vaccine for prevention of human papilloma virus infection
WO2010009346A2 (en) 2008-07-16 2010-01-21 Baylor Research Institute Hiv vaccine based on targeting maximized gag and nef to dendritic cells
CN102333540B (zh) 2008-10-06 2015-04-22 芝加哥大学 与细菌eap、emp和/或adsa蛋白相关的组合物和方法
PT3281947T (pt) 2009-04-03 2020-05-07 Univ Chicago Composições e métodos relacionados com variantes da proteína a (spa)
US10080799B2 (en) 2010-02-12 2018-09-25 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Methods and compositions related to glycoprotein-immunoglobulin fusions
US8808699B2 (en) 2010-04-05 2014-08-19 The University Of Chicago Compositions and methods related to protein A (SpA) antibodies as an enhancer of immune response
US8821894B2 (en) 2010-07-02 2014-09-02 The University Of Chicago Compositions and methods related to protein A (SpA) variants
WO2012034067A1 (en) 2010-09-09 2012-03-15 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens
US9567346B2 (en) 2010-10-29 2017-02-14 Life Technologies Corporation Biotin derivatives
US8945588B2 (en) 2011-05-06 2015-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides
US9968668B2 (en) 2012-04-26 2018-05-15 The University Of Chicago Staphylococcal coagulase antigens and methods of their use
BR112015006840A2 (pt) 2012-09-27 2017-11-21 Res Found Dev vírus chikungunya atenuado
US10358667B2 (en) 2013-03-07 2019-07-23 University Of Maryland, Baltimore Immunotherapeutic potential of modified lipooligosaccharides/lipid A
JP6836500B2 (ja) 2014-05-16 2021-03-03 ベイラー リサーチ インスティテュートＢａｙｌｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ 自己免疫状態および炎症状態を治療するための方法および組成物
US10662226B2 (en) 2016-10-28 2020-05-26 The Regents of the University of Caiifomia Synthetic beta-amyloid peptides capable of forming stable antigenic oligomers
US11413336B2 (en) 2018-03-23 2022-08-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Coccidioides antigens and methods of their use
WO2020041360A1 (en) 2018-08-21 2020-02-27 Quidel Corporation Dbpa antibodies and uses thereof
CN113811547B (zh) 2019-03-27 2024-06-25 国家医疗保健研究所 具有cd40激活特性的重组蛋白
EP4061835A1 (de) 2019-11-21 2022-09-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Neue immuntherapien gegen pd-1 mit anti-pd-1/il-15-immunzytokinen
US11376320B2 (en) 2020-03-05 2022-07-05 Iowa State University Research Foundation, Inc. Immunogenic and vaccine compositions against SARS-CoV-2
WO2021228836A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Recombinant proteins with ox40 activating properties
WO2023144779A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Pfizer Inc. Coronavirus antigen variants

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE337223B (de) * 1967-05-23 1971-08-02 Pharmacia Ab
SE343210B (de) * 1967-12-20 1972-03-06 Pharmacia Ab
US3646346A (en) * 1968-12-26 1972-02-29 Pharmacia Ab Antibody-coated tube system for radioimmunoassay
US3867517A (en) * 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK151398B (da) * 1976-08-20 1987-11-30 Immuno Ag Apparat til immunologisk bestemmelse af antigener eller antistoffer og anvendelse af dette apparat
DE2905657A1 (de) * 1978-02-14 1979-08-16 Sanyo Chemical Ind Ltd Konjugate aus immunologisch aktiver substanz und glas, verfahren zu deren herstellung und verwendung derselben

Also Published As

Publication number Publication date
BR7408886A (pt) 1976-05-04
FR2249334B1 (de) 1977-03-25
BE820660A (fr) 1975-02-03
LU71027A1 (de) 1975-04-17
DE2450523B2 (de) 1976-10-07
JPS5762020B2 (de) 1982-12-27
CA1036493A (en) 1978-08-15
ES431413A1 (es) 1976-10-16
AU7378774A (en) 1976-04-01
USRE29955E (en) 1979-04-03
SE7413484L (de) 1975-04-28
JPS5075095A (de) 1975-06-20
FR2249334A1 (de) 1975-05-23
NL7413552A (nl) 1975-04-29
DE2450523C3 (de) 1978-06-22
GB1436934A (en) 1976-05-26
IL45707A0 (en) 1974-11-29
AU476619B2 (en) 1976-09-30
IL45707A (en) 1977-01-31
ZA746098B (en) 1975-11-26
US3949064A (en) 1976-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2450523A1 (de) Verfahren zum nachweis von antigenen oder antikoerpern
DE3586983T2 (de) Verfahren und vorrichtung fuer immunotest.
DE68911674T2 (de) Testverfahren und reagenzsatz dazu.
DE2618386C2 (de) Diagnostisches Verfahren zum Bestimmen der Anwesenheit oder Abwesenheit nachzuweisender biologischer Teilchen
DE68913086T2 (de) Qualitativer Enzymtest zur visuellen Auswertung.
EP0224134B1 (de) Verfahren zur Quantifizierung von Zellpopulationen bzw. Subpopulationen sowie hierfür geeignetes Reagenz
DE2262413A1 (de) Direkte radioimmunpruefung auf antigene und ihre antikoerper
DE69523040T2 (de) Verfahren zur acridinium - markierung von mikropartikeln und anwendung in einem messinstrument
DE3872500T2 (de) Verwendung eines mit biotin verknuepften immobilisierten rezeptors in einer testvorrichtung, einem testsatz und einer methode zur bestimmung eines liganden.
DE1517934A1 (de) Mit Molekularsieb ueberzogenes Adsorbens aus kleinen Teilchen und Verfahren mit dessen Anwendung
DE2633877A1 (de) Verfahren zur immunpruefung auf antigene in fester phase
CH630465A5 (de) Verfahren zum nachweis oder zur bestimmung eines antikoerper/antigen-komplexes in einer fluidprobe.
DE69332236T2 (de) Verfahren zur Dissoziierung von einem Immunokomplex und dafür verwendeter Immunoassay
DE2608667A1 (de) Diagnostisches feststoffreagens und verfahren zu dessen herstellung
DE3922960A1 (de) Verfahren zur bestimmung eines analyten
DD202178A5 (de) Verfahren und reagens zur untersuchung von antigen-antikoerper-reaktionen
DE3873877T2 (de) Bestimmung von monokinen.
DE3021208A1 (de) Verfahren zur bestimmung von antigen, antikoerper oder antigen-antikoerperkomplex sowie ein bestimmungsreagenziensatz hierfuer
EP0185372B1 (de) Verfahren zur Herstellung eines immunreaktiven porösen Trägermaterials
DE4328070C1 (de) Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in einem Volumen einer flüssigen Probe sowie seine Anwendung zur Bestimmung von anti-TSH-Rezeptor-Autoantikörpern in einem Patientenserum
DE2419884A1 (de) Verfahren und vorrichtung zur bestimmung von trijodthyronin
DE2824903A1 (de) Immunanalyseverfahren
DE69211805T2 (de) Testsatz und Verfahren zum Nachweiss von Mikroorganismen assoziiert mit periodontalen Krankheiten unter Verwendung Surfactantmischung als Extraktionskomposition
DE3688072T2 (de) Immuntestverfahren und satz.
DD249768A5 (de) Verfahren zur bestimmung eines partners einer immunreaktion

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
8339 Ceased/non-payment of the annual fee