DE2350247B1 - Diagnostic agent for the detection of glucose in body fluids - Google Patents

Diagnostic agent for the detection of glucose in body fluids

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DE2350247B1
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glucose
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hydrogen peroxide
body fluids
catalyst
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DE2350247A
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German (de)
Inventor
Dr Langisch Hans Alfred
Jaroslav Stourac
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Hach Lange GmbH
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Dr Bruno Lange GmbH
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose

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Description

Das folgende Beispiel soll die Erfindung näher erläutern: Beispiel In einer Gesamtmenge von 100 ml, aufgefüllt mit wäßrigem Phosphatpuffer, liegen vor: 1. 25mM/1, entsprechend 600 mg, Natriumtartrat 2. 150 mM/l, entsprechend 2500 mg, Kaliumjodid 3. 500 U Glucoseoxydase (GOD) 4. 0,01°/o, entsprechend 10 mg, eines Lösungsvermittlers in Form einer oberflächenaktiven Verbindung, wie eines Polyoxyäthylensorbitanoleates. The following example is intended to explain the invention in more detail: example In a total amount of 100 ml, made up with aqueous phosphate buffer, lie before: 1. 25mM / 1, corresponding to 600 mg, sodium tartrate 2. 150 mM / l, corresponding to 2500 mg, potassium iodide 3. 500 U glucose oxidase (GOD) 4. 0.01%, corresponding to 10 mg, one Solubilizer in the form of a surface-active compound such as a polyoxyethylene sorbitan oleate.

Unter Anwenden eines 0,1molaren Phosphatpuffers wird auf einen pH-Wert von 6,5 bis 7,2, vorzugsweise auf 7,0, eingestellt. Applying a 0.1 molar phosphate buffer is adjusted to pH from 6.5 to 7.2, preferably set to 7.0.

Die Glucosebestimmung erfolgt in herkömmlicher Weise photometrisch dergestalt, daß entsprechende Anteile der zu untersuchenden Probe, aus der zuvor, insbesondere unter Anwenden von Trichloressigsäure, die Eiweißkomponenten ausgefällt worden sind, bzw. The glucose is determined photometrically in a conventional manner in such a way that corresponding proportions of the sample to be examined, from the previously, in particular by applying trichloroacetic acid, the protein components are precipitated have been, or

eines Standardgemisches mit der Reaktionslösung vermischt und nach 30minütigem Stehen bei Raumtemperatur die Extinktion bei 366 nm gemessen und in entsprechender Weise umgerechnet wird.a standard mixture mixed with the reaction solution and after After standing for 30 minutes at room temperature, the absorbance was measured at 366 nm and converted into is converted accordingly.

Claims (2)

Patentansprüche: 1. Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Glucose in Körperflüssigkeiten mit einem Gehalt an Glucoseoxydase, einem wasserlöslichen Jodid, einem Puffer, einem oberflächenaktiven Mittel und einem Katalysator, dadurch gekennz e i c h n e t, daß als Katalysator ein Tartrat enthalten ist. Claims: 1. Diagnostic agent for the detection of glucose in body fluids containing glucose oxidase, a water-soluble one Iodide, a buffer, a surfactant and a catalyst, thereby marked that a tartrate is contained as a catalyst. 2. Diagnostisches Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Natriumtartrat in einer Menge vor25 mM/l, Kaliumjodid in einer Menge von 150 mM/l und 500 U Glucoseoxydase enthalten sind. 2. Diagnostic agent according to claim 1, characterized in that that sodium tartrate in an amount of 25 mM / l, potassium iodide in an amount of 150 mM / l and 500 U glucose oxidase are included. Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Mittel zum Nachweis von Glucose in Körperflüssigkeiten mit den im Oberbegriff des Patentanspruchs 1 angegebenen Merkmalen. The invention relates to a diagnostic agent for the detection of Glucose in body fluids with those specified in the preamble of claim 1 Features. Bei bestimmten krankhaften Veränderungen ergeben sich in Körperflüssigkeiten, wie Blut und Harn, gegenüber den Normalwerten Abweichungen des Glucosegehaltes nach oben und unten. Der erstere Fall liegt z. B. vor bei der Zuckerkrankheit, der letztere bei vegetativer Dystonie. Die quantitative Glucosebestimmung ermöglicht somit einen Befund bezüglich der Art und des Ausmaßes der Erkrankung. With certain pathological changes arise in body fluids, like blood and urine, deviations of the glucose content compared to the normal values above and below. The former case is e.g. B. before in the case of diabetes, the latter in vegetative dystonia. The quantitative determination of glucose thus enables one Findings regarding the type and extent of the disease. Die in Anwendung kommende analytische Arbeitsweise beruht grundsätzlich darauf, daß die von störenden Bestandteilen, wie Eiweißkörpern durch Fällung befreite Körperflüssigkeit auf ihren Glucosegehalt dadurch untersucht wurde, daß vermittels Glucoseoxydase die Glucose durch den im wäßrigen Medium vorliegenden Sauerstoff in Gluconsäure unter Ausbilden von Wasserstoffperoxid oxidiert und das Wasserstoffperoxid zur Oxidation eines Agens angewandt wird, das einer photometrischen Bestimmung zugänglich ist. Uber das zu Wasser reduzierte Wasserstoffperoxid besteht somit eine direkte Proportionalität zwischen dem Gehalt an Glucose und demjenigen Agens, das der eigentlichen analytischen Auswertung zugeführt wird. The analytical working method used is fundamentally based ensure that the troublesome components such as protein bodies are freed by precipitation Body fluid was examined for its glucose content by mediating Glucose oxidase removes glucose from the oxygen present in the aqueous medium oxidized in gluconic acid to form hydrogen peroxide and the hydrogen peroxide is used to oxidize an agent that is accessible to photometric determination is. There is thus a direct response to the hydrogen peroxide which has been reduced to water Proportionality between the glucose content and that agent that is the actual agent analytical evaluation is supplied. Dieser grundsätzliche Verfahrenszug ist mit zwei Schwierigkeiten verbunden. Die eine besteht darin, daß das die Oxidation der Glucose katalysierende Enzym je nach Herkunft und Aufbereitung unterschledliche Aktivitäten besitzt, jedoch läßt sich diese Schwierigkeit weitestgehend durch Standardisierung und Vergleichsanalyse, also durch Ausführen einer Differenzanalyse, beheben und die andere Schwierigkeit, die man über die Jahre versucht hat auszuräumen, besteht darin, daß die Umsetzung zwischen dem Wasserstoffperoxid und dem eigentlichen Nachweisagens einer katalytischen Förderung bedarf. This basic procedural move presents two difficulties tied together. One is that it catalyzes the oxidation of glucose However, the enzyme has different activities depending on its origin and preparation this difficulty can be largely resolved by standardization and comparative analysis, so by performing a difference analysis, fix and the other difficulty, what has been tried over the years is that the implementation between the hydrogen peroxide and the actual detection agent a catalytic Promotion needs. Zwecks photometrischer Bestimmung durch Extinktion verwendet an als zu oxidierendes Agens allgemein entweder eine Aminoverbindung, insbesondere die Aminoaromaten, als organische Verbindungen und Kaliumjodid als anorganische Verbindung. Die Aminoaromaten sind bekanntlich stark oxidationsempfindlich und erfahren somit durch Wasserstoffperoxid eine entsprechende Verfärbung, und Kaliumjodid wird in freies Jod überführt, das durch Komplexbildung in Form von Kaliumtrijodid in Wasser löslich ist. For the purpose of photometric determination by extinction used as agent to be oxidized generally either an amino compound, in particular the Aromatic amino compounds as organic compounds and potassium iodide as inorganic compounds. The aromatic amino compounds are known to be highly sensitive to oxidation and are therefore experienced a corresponding discoloration by hydrogen peroxide, and potassium iodide is in Free iodine is transferred by complex formation in the form of potassium triiodide in water is soluble. Man hat sich nun bemüht, diese letztere Reaktion katalytisch zu beeinflussen, wobei gemäß der DT-PS 1284124 das Anwenden von Molybdat vorgeschlagen wurde. Auf grundsätzlich der gleichen Ebene liegt die Katalyse der Wasserstoffperoxidreduktion unter thbertragen des Sauerstoffs auf das zu oxidierende analytische Agens unter Anwenden von Vanadaten (DT-OS 1 598 828), sowie das Anwenden von Wolframaten, Uranylsalzen und Borsäure (DT-OS 2163421). Efforts have now been made to influence this latter reaction catalytically, according to DT-PS 1284124 the use of molybdate was proposed. on The catalysis of hydrogen peroxide reduction is basically on the same level transferring the oxygen to the analytical agent to be oxidized Use of vanadates (DT-OS 1 598 828), as well as the use of tungstates, uranyl salts and boric acid (DT-OS 2163421). Bei diesen Versuchen zur Lösung des anstehenden Problems geht es offensichtlich darum, einen Ersatz für das Ferment Peroxydase, das die in Rede stehende Redox-Reaktion zu katalysieren vermag, zu finden, da dieses Ferment außerordentlich empfindlich ist und in einer nicht leicht durchschaubaren Weise durch Sulfhydrylgruppen in seiner Aktivität beeinflußt wird. Bei dem geschilderten Stand der Technik geht es im wesentlichen darum, einen Katalysator für die Redox-Reaktion auf der Grundlage der anionoiden Säurekomponente anzuwenden, wie sie durch die entsprechenden Sauerstoffverbindungen einer Reihe von Übergangsmetallelementen gebildet werden. In these attempts to solve the problem at hand, it works obviously a matter of finding a substitute for the peroxidase ferment that is in question Can catalyze redox reaction, to find that this ferment is extraordinary is sensitive and in a not easily transparent way by sulfhydryl groups is influenced in its activity. In the case of the state of the art described it is essentially about having a catalyst based on the redox reaction to apply the anionoid acid component, as provided by the corresponding oxygen compounds a series of transition metal elements. All diese bisherigen technischen Lösungen konnten jedoch aus dem einen oder anderen Grunde nicht befriedigen. Sei es, daß das Anwenden von Arylaminen oder anderen organischen Reduktionsmitteln auf Grund deren Instabilität Schwierigkeiten machte und eine von den anderen Komponenten getrennte Lieferung und Zubereitung erforderte, oder aber, daß bei Anwenden von beständigem Kaliumjodid als das zu oxidierende und der quantitativen Messung zuzuführende Agens erhebliche Ungenauigkeiten festgestellt wurden. All these previous technical solutions could, however, from the do not satisfy one reason or another. Be it the use of arylamines or other organic reducing agents because of their instability difficulties made and delivery and preparation separate from the other components required, or that when using permanent potassium iodide as that to be oxidized and the quantitative measurement agent to be added significant inaccuracies were found became. Der Erfindung liegt nun die Aufgabe zugrunde, die unter Anwendung der bisher bekanntgewordenen Mittel durchgeführten Verfahren zur Glucosebestimmung in Körperflüssigkeiten dadurch einfacher und verläßlicher zu gestalten, daß eine neuartige Zusammensetzung vorgeschlagen wird, die sich von der bisherigen dadurch unterscheidet, daß ein neuartiger Katalysator für die Übertragnug des Sauerstoffs vorgeschlagen wird. The invention is now based on the object of using the previously known means carried out procedures for glucose determination to make it easier and more reliable in body fluids that a novel composition is proposed, which differs from the previous one distinguishes that a new type of catalyst for the transfer of oxygen is suggested. Diese Aufgabe wird gelöst durch ein diagnostisches Mittel mit den Merkmalen nach dem Oberbegriff des Patentanspruchs 1, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß als Katalysator ein Tartrat enthalten ist. This problem is solved by a diagnostic means with the Features according to the preamble of claim 1, which is characterized is that a tartrate is included as a catalyst. Eine vorteilhafte Ausgestaltung des diagnostischen Mittels nach der Erfindung ist im Patentanspruch 2 beschrieben. Das Tartrat findet in einer für katalysierende Agentien relativ großen Menge Anwendung, woraus sich ergeben könnte, daß es sich möglicherweise nicht nur um eine rein katalytische Funktion handelt. An advantageous embodiment of the diagnostic agent according to the The invention is described in claim 2. The tartrate takes place in a for catalyzing Agents relatively large amount of application, which could result in it possibly not just a purely catalytic function. Eine eindeutige Erklärung für den Reaktionsmechanismus kann noch nicht gegeben werden, jedoch sind die erhaltenen Ergebnisse reproduzierbar und überraschend konstant, was bezüglich der vorbekannten Redox-Katalysatoren auf der Grundlage der Übergangsmetallverbindungen nicht der Fall ist. A clear explanation for the reaction mechanism can still be found cannot be given, but the results obtained are reproducible and surprising constant, which is based on the prior art redox catalysts Transition metal compounds is not the case.
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