DE2163421C3 - Method for determining glucose in body fluids - Google Patents
Method for determining glucose in body fluidsInfo
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Description
in einer Konzentration von 0,005 bis 3' wendel wird.in a concentration of 0.005 to 3 'helix.
ange-1970 wurden außerdem verschiedene ausführliche Arbeiten über die Blutzuckerbestimmung nach der GOD/POD (Glukoseoxydase/Peroxydase)-Methode unter Verwendung eines neuen Chromogens veröffentlicht, bei dessen Verwendung eine Eichkurve erhalten wird, die bis zu etwa 500 mg % Glukose geradlinig verläuft (W. Werner et al. Zeitschrift Analytische Chemie, Bd. 252, S. 224 bis 228; K. Kahle et al, Zeitschrift Analytische Chemie, Bd. 252, S. 228 bis 231; H. Wieiinger, Der Krankenhausarzt, Heft 9, 1970, S. 390 bis 391; deutsche Patentschrift 1 648 840).In addition, various detailed works on blood sugar determination according to the GOD / POD (glucose oxidase / peroxidase) method using a new chromogen published, when used, a calibration curve is obtained which is straight up to about 500 mg% glucose (W. Werner et al. Zeitschrift Analytische Chemie, Vol. 252, pp. 224 to 228; K. Kahle et al, Journal of Analytical Chemistry, Vol. 252, pp. 228 to 231; H. Wieiinger, The Hospital Doctor, Volume 9, 1970, Pp. 390 to 391; German patent specification 1 648 840).
Bei den in den vorstehend zitierten Literaturstellen beschriebenen Bestimmungsmethoden werden im allgemeinen Eichkurven erhalten, die bis zu 300 mg % Glukose geradlinig verlaufen. In den zuletzt zitierten Arbeiten wird ein geradliniger Verlauf der Eichkurven bis 500 mg "/„ Glukose angegeben. Werden höhere Werte errechnet, so muß die Bestimmung nach ent-In the determination methods described in the literature references cited above, calibration curves are generally obtained which are straight up to 300 mg% glucose. In the papers cited last, a straight course of the calibration curves up to 500 mg "/" glucose is given. If higher values are calculated, the determination must be based on
Die Bestimmung der Glukose in Körperflüssigkeiten z. B. Blut, Plasma. Serum und Urin hat in der Erkennung und Verlaufskontrolle des Diabetes mellitus eine besondere Bedeutung.The determination of glucose in body fluids e.g. B. blood, plasma. Serum and urine did in the detection and follow-up of diabetes mellitus are of particular importance.
Es gibt eine Reihe von Verfahren zur Glukosebestimmung im Serum, von denen die auf spezifischer
Fermentwirkung beruhende Methode mit Glukoseoxydase — Pcroxydase sehr häufig angewendet wird.
Bei der Einwirkung der Glukoseoxydase auf Glukose 4° sprechender Verdünnung des Analysenguts wiederholt
entsteht Glukonsäure und Wasserstoffperoxyd. Letz- werden.There are a number of methods for determining serum glucose, the more specific of which are
Fermentation based method with glucose oxidase - Pcroxydase is very often used.
By the action of glucose oxidase on glucose 4 ° speaking dilution of Analysenguts repeatedly arises gluconic and hydrogen peroxide. Last to be.
Die Aufgabe der Erfindung bestand daher in der Schaffung eines Glukose-Bestimmungsverfahrens, mit dem auch bei höheren Glukose-Konzentrationen ge-♦5 radlinige Eichkurven erhalten werden.The object of the invention was therefore to create a glucose determination method with which is also possible with higher glucose concentrations ♦ 5 straight calibration curves can be obtained.
Diese Aufgabe wird bei einem Verfahren zur Bestimmung der Glukose in Körperflüssigkeiten, bei dem in an sich bekannter Weise die eiweißfreie Analysenlösung mit einem Reagens zusammengebrachtThis task is in a method for the determination of the glucose in body fluids which brought together the protein-free analysis solution with a reagent in a manner known per se
daher kann durch einen unterschiedlichen Gehalt des 5° wird, das Glukoseoxydase, ein Chromogen, ein wasser-Blutes an Zystein oder Glutathion ein falsches Ergebnis lösliches Jodid, einen Redoxkatalysator und einen der Glukosebestimmung erhalten werden. Lösungsvermittler enthält, dadurch gelöst, daß alstherefore, by a different content of the 5 °, the glucose oxidase, a chromogen, a water-blood of cysteine or glutathione, a false result of soluble iodide, a redox catalyst and one of the glucose determination can be obtained. Contains solubilizer, solved in that as
Zum zweiten ist der durch Oxydation aus dem Redoxkatalysator ein wasserlösliches Salz der WoIf-Chromogen entstandene Farbstoff im Testansatz nur ramsäure oder der Borsäure oder ein Uranylsalz und beschränkt löslich. Bei höherer Glukosekonzentration 55 als Lösungsvermittler für den entstehenden Farbstoff fällt er in größeren Mengen an, wobei seine Löslichkeit ein wasserlöslicher Fettsäureester oder Fettsäürc-Secondly, the dye produced by oxidation from the redox catalyst, a water-soluble salt of the WoIf chromogen, is only ramic acid or boric acid or a uranyl salt and has limited solubility. With a higher glucose concentration 55 as a solubilizer for the resulting dye, it is obtained in larger quantities, its solubility being a water-soluble fatty acid ester or fatty acid.
teres wird in Anwesenheit eines Wasserstoffdonators (Chromogen) durch Peroxydasc zu Wasser reduziert, wobei das Chromogen zu einem Farbstoff oxydiert wird.teres is reduced to water by peroxydasc in the presence of a hydrogen donor (chromogen), whereby the chromogen is oxidized to a dye.
Diese Methode weist zwei störanfällige Komponenten auf. Zum ersten wird das nur begrenzt haltbare Hilfsferment Peroxydase in seiner Aktivität durch Verbindungen mit Sulfhydrylgruppen beeinflußt undThis method has two failure-prone components. First of all, this will only have a limited shelf life Auxiliary ferment peroxidase is influenced in its activity by compounds with sulfhydryl groups and
überschritten wird. Es kommt zu Trübungen, die ein zu hohes Ergebnis vortäuschen.is exceeded. The result is cloudiness that simulates a result that is too high.
Es hat nicht an Versuchen gefehlt, die dargestellten Mängel zu beheben.There has been no lack of attempts to remedy the deficiencies presented.
Um die für die Glukosebestimmung spezifische Reaktion der Glukoseoxydase ohne die störanfällige Peroxydasereaktion durchzuführen, wurde unter anderem das gebildete Wasserstoffperoxyd durch die katalytischeTo find the specific reaction for glucose determination of glucose oxidase without performing the peroxidase reaction, which is susceptible to interference, was among other things the hydrogen peroxide formed by the catalytic
äther, vornehmlich Polyoxyäthylensorbitanoleat oder Polyoxyäthylenlauryläther in einer Konzentration von 0,001 bis 2% zugesetzt wird.ether, mainly polyoxyethylene sorbitan oleate or polyoxyethylene lauryl ether in a concentration of 0.001 to 2% is added.
Bevorzugt wird dabei als Redoxkatalysator ein Salz der Wolframsäure, z. B. Natriumwolframat in einer Konzentration von 0,005 und 3 % angewendet.The preferred redox catalyst is a salt of tungstic acid, e.g. B. sodium tungstate is applied at a concentration of 0.005 and 3 % .
Man erhält mit dem erfindungsgemäßen Verfahren vollkommen geradlinige Eichkurven bis über 1100 mg/With the method according to the invention, perfectly straight calibration curves are obtained up to over 1100 mg /
Wirkung von Jodid und Molybdat deutsche Patent- 6s 100 ml Glukose.Effect of iodide and molybdate German patent 6s 100 ml glucose.
schrift 1284 124) oder Vanadat (deutsche Offenle- Zur Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrenswriting 1284 124) or vanadate (German Offenle- To explain the method according to the invention
gungsschrift 1 598 828) reduziert und dabei ein Chro- sei folgendes Beispiel gebracht:gungsschrift 1 598 828) and a chro- let the following example be given:
mögen zu Farbstoff oxydiert. Außer den beiden ge- Reagentien:like oxidized to dye. Besides the two reagents:
I. ReaktionslösungI. reaction solution
a) 15 U Glukoseoxydasea) 15 U glucose oxidase
50 mg Natriumwolframat 500 mg Kaliumjodid 8 mg o-Dianisidin 5 mg Polyoxyäthylenlauryläther50 mg sodium tungstate 500 mg potassium iodide 8 mg o-dianisidine 5 mg polyoxyethylene lauryl ether
b) 15 U Glukoseoxydase 150 mg Uranylacetat 500 mg Kaliumjodidb) 15 U glucose oxidase 150 mg uranyl acetate 500 mg potassium iodide
8 mg o-Dianisidin 100 mg Polyoxyäthylensorbitanoleat8 mg of o-dianisidine, 100 mg of polyoxyethylene sorbitan oleate
c) 15 U Glukoseoxydase 100 mg Natriumtetraborat 500 mg Kaliumjodid 10 mg Polyoxyäthylensorbitanoleatc) 15 U glucose oxidase 100 mg sodium tetraborate 500 mg potassium iodide 10 mg polyoxyethylene sorbitan oleate
werden in etwa 80 ml 0,1 M Phosphatpuffer pH 7,2 gelöst und mit diesem Puffer auf 100 ml aufgefüllt.are dissolved in about 80 ml of 0.1 M phosphate buffer pH 7.2 and made up to 100 ml with this buffer.
2. Standard:2. Standard:
200 mg Glukose/100 ml dest. Wasser
Arbeitsvorschrift:200 mg glucose / 100 ml dist. water
Working regulation:
0,1 ml Blut bzw. Glukosestandard werden mit je I ml Trichloressigsäure (5"„ig) versetzt. Die Analyse wird zentrifugiert.0.1 ml of blood or glucose standard are mixed with 1 ml of trichloroacetic acid (5%). The analysis is centrifuged.
0,1 ml Überstand bzw. Standardgemisch werden zu 2,0 ml Reaktionslösung gegeben und 30 min bei Zimmertemperatur oder 15 min bei 37'" C stehen ίο gelassen.0.1 ml of supernatant or standard mixture are added to 2.0 ml of reaction solution and 30 min at Let stand room temperature or 15 min at 37 '"C ίο.
Nach dieser Zeit werden die Extinktionen von Analyse und Standard bei 436 mm gegen die Reaktionslösung als Leerwert photometrisch gemessen. Die Berechnung erfolgt nach der Formel:After this time, the absorbances of the analysis and the standard are measured at 436 mm against the reaction solution measured photometrically as a blank. The calculation is based on the formula:
Extinktion AnalyseAbsorbance analysis
—— —7 ■ 200 = me Glukose/ICO ml—— —7 ■ 200 = me glucose / ICO ml
Extinktion StandardAbsorbance standard
Für die einzelnen Elemente der erfindungsgemäßen Kombination der Merkmale wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung kein Schutz beansprucht.For the individual elements of the combination of the features according to the invention, in the context of present application no protection is claimed.
Claims (2)
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| DE19712163421 DE2163421C3 (en) | 1971-12-21 | Method for determining glucose in body fluids |
Applications Claiming Priority (1)
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| DE19712163421 DE2163421C3 (en) | 1971-12-21 | Method for determining glucose in body fluids |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2163421A1 DE2163421A1 (en) | 1973-07-12 |
| DE2163421B2 DE2163421B2 (en) | 1975-06-19 |
| DE2163421C3 true DE2163421C3 (en) | 1976-02-05 |
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