DE2152620C3 - Mutanase, process for its production and its use - Google Patents

Mutanase, process for its production and its use

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DE2152620C3 DE2152620A DE2152620A DE2152620C3 DE 2152620 C3 DE2152620 C3 DE 2152620C3 DE 2152620 A DE2152620 A DE 2152620A DE 2152620 A DE2152620 A DE 2152620A DE 2152620 C3 DE2152620 C3 DE 2152620C3
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Description

werden, deren wesentliches gemeinsames Merkmal ihre Fähigkeit ist, die a-1 ^-verketteten Polysaccharide, also Mutan, die auch im Zahnbelag vorhanden sind, anzugreifen. Dementsprechend kann Mutan als eine Klasse von Glucanen mit unterschiedlichen Graden der Wasserlöslichkeit angesehen werden. Diese Unlöslichkeit ergibt sich als direkte Folge des Gehaltes an a-1,3-Bindungen. Die Zahnbelag-Matrix enthält eine Reihe derartiger Glucane mit unterschiedlichen Anteilen an dieser kritischen Bindung. Mutan wird somit definiert als eine Klassenbezeichnung für Glucane, die durch Streptokokken erzeugt werden und mehr als 50% a-l^-Glucosid-Bindungen enthalten. be whose essential common feature is their ability, the a 1 ^ -verketteten polysaccharides, so Mutan, which are also present in dental plaque to attack. Accordingly, mutan can be viewed as a class of glucans with varying degrees of water solubility. This insolubility is a direct consequence of the content of a-1,3 bonds. The plaque matrix contains a number of such glucans with different proportions of this critical bond. Mutan is thus defined as a class name for glucans which are produced by streptococci and contain more than 50% al ^ -glucoside bonds.

In einer Veröffentlichung von Hasegawa et al in Journal of Biol. Chem., VoI. 244, 5460-5470, 1969, ist eine endo-a-D-(l —>3)-GIucanase beschrieben worden, die aus Trichodermaviride hergestellt wurde. Diese Glucanase ist jedoch nicht in der Lage, Mutan aufzubrechen. Demgegenüber ist jedoch Mutanase in der Lage, Pseudonigeran, ein Zellwand-GIucan di;s Apsergillus-nigcr aufzubrechen, das vorwiegend ci-1,3-verkettet ist. Der von Hasegawa verwendeite Mikroorganismus erzeugt jedoch keine Mutanase, selbst dann nicht, wenn in dem Kulturmedium Mutain als Teil der Kohlenstoffquelle anstelle des Pseudonigerans verwendet wird.In a publication by Hasegawa et al in Journal of Biol. Chem., VoI. 244, 5460-5470, 1969, an endo-a-D- (1 -> 3) -glucanase is described made from Trichodermaviride. However, this glucanase is unable to mutan break up. In contrast, however, mutanase is able to produce pseudonigeran, a cell wall glycan di; s Apsergillus nigcr, which is predominantly ci-1,3-chained is. However, the microorganism used by Hasegawa does not generate a mutanase, not even if mutain is present in the culture medium as part of the carbon source instead of the pseudonigeran is used.

Die anfänglichen Screeningverfahren zur Auffindung von Mutanase produzierenden Mikroorganismen können selbstverständlich mit allen Arten von Mikroorganismen enthaltendem Material durchgeführt werden, so z. B. auch unter Heranziehung von aus Zahnabschabungen erhaltenem Zahnbclag zur Verwendung als Substrat und Kohlenstoffquelle. Für dieses Screening, ganz zu schweigen für eine Produktion in großem Maßstab, ist jedoch ein Mutan wesentlich günstiger, das speziell durch Kultivierung eines Mutan produzierenden Mikroorganismus erhallen werden kann. So läßt sich speziell Mutan durch Kultivierung eines Baktcriums der Gattung Streptococcus, ζ. B. Streptococcus mutans oder Streptococcus sanguis und insbesondere mit dem als OMZ 176 identifizierbaren Stamm Streptococcus mutans erzeugen. Dieser Stamm ist unter der Nummer 350.71 beim CBS (Centraalburcau voorSchimmelcultures, Baarn, Holland) hinterlegt worden.The initial screening procedures to find mutanase-producing microorganisms can of course be carried out with all types of material containing microorganisms be, so z. B. also using Zahnbclag obtained from tooth scrapes for Use as substrate and carbon source. For this screening, not to mention a production on a large scale, however, a mutan is much cheaper that can be produced specifically by cultivating a Mutan producing microorganism can be obtained. So can mutan specifically by cultivation of a bacterium of the genus Streptococcus, ζ. B. Streptococcus mutans or Streptococcus sanguis and in particular with the identifiable as OMZ 176 Generate strain Streptococcus mutans. This strain is under the number 350.71 with the CBS (Centraalburcau voorSchimmelcultures, Baarn, Holland).

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Einzympräparat zur Verfügung zu stellen, mit dem sich Polysaccharide mit einem Anteil von mehr als 50% an α-1,3-Glucosid-Bindungen enzymatisch abbauen lassen, so daß ein solches Präparat auch zur Entfernung von Zahnstein und zur Verhinderung von ZaImstcinbildung einsetzbar ist.The invention is based on the object of a single-yeast preparation to make available, with which polysaccharides with a proportion of more than 50% to break down enzymatically at α-1,3-glucoside bonds, so that such a preparation can also be used for removal of tartar and to prevent ZaImstcinbildung can be used.

Die Lösung der Erfindungsaufgabe besteht in der Bereitstellung einer Mutanase in Form eines α-1,3-Glucanase-Präparats, das erhältlich ist durch Kultivierung eines Mutanase produzierenden Mikroorganismus auf einem Medium, dessen vorwiegende KohlenstoffquellQ ein aus einem Streptococcus produziertes Mutan ist und in welchem während der KuI-tivierungeinpH-Wertzwi· chenetwa 2 und 9 und eine Temperatur zwischen 10 und 45° C eingehalten wird, und durch anschließende Gewinnung der erzeugten Mutanase aus der Fennentationslüsung.The solution to the problem of the invention consists in providing a mutanase in the form of an α-1,3-glucanase preparation, obtainable by culturing a mutanase producing microorganism on a medium, the predominant carbon source of which is that produced from a Streptococcus Mutan is and in which during the cultivation a pH value between about 2 and 9 and one Temperature between 10 and 45 ° C is maintained, and by subsequent recovery of the generated Mutanase from the fennentation solution.

Das zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mutanase als Bestandteil des Kultivierungsmediums benötigte Mutan wird zweckmüßig durch Kultivierung des bereits erwähnten Stammes Streptococcus mutans CBS 350,71 gewonnen.That required for the production of the mutanase according to the invention as a component of the cultivation medium Mutan becomes useful by cultivating the aforementioned Streptococcus mutans strain CBS 350.71 won.

Um die in dem eingesetzten Mutan vorhandenen a-1,6-Glucosid-Bindungen zu zerstören und folglich ein Mutan zu erhalten, das ausschließlich oder nahezu Ί ausschließlich a-l.S-GIucosid-Bindungen enthält, ist bei einer weiterhin bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens zur Herstellung der erfindungsgemnßen Mutanase vorgesehen, daß das Mutan vor seiner Weiterverwendung oxidiert und anschließend reduziertTo destroy the α-1,6-glucoside bonds present in the mutan used and consequently to obtain a mutan that contains exclusively or almost exclusively a-l.S-glucoside bonds is in a further preferred embodiment of the process for the preparation of the invention Mutanase provided that the mutan oxidized before its further use and then reduced

K) wird. Dabei kann die Oxidation mit Perjodat durchgeführt werden.K) will. The oxidation can be carried out with periodate.

Bereits aufgefundene Mutanase produzierende Mikroorganismen stammen aus den Gruppen Trichoderrna harzianum, Penicillium lilacinum, PenidlliumMutanase-producing microorganisms that have already been found come from the Trichoderrna groups harzianum, Penicillium lilacinum, Penidllium

ι ί funiculosum, Penicillium melinii und Penicillium janthinellum. Aus diesen Spezies seien beispielsweise die schon früher verfügbaren Stämme Penicillium lilacinum NRRL 896, Penicillium funiculosum NRRL 1132 und NRRL 1768 sowie Penicillium meliniiι ί funiculosum, Penicillium melinii and Penicillium janthinellum. From these species, for example, the previously available strains Penicillium lilacinum NRRL 896, Penicillium funiculosum NRRL 1132 and NRRL 1768 as well as Penicillium melinii

ji NRRL 1931 genannt. Weiterhin seien in diesem Zusammenhang die erst im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung hinterlegten Stämme Trichoderma Harzianum CBS 243.7 und Penidllium lilacinum CBS 595.71 erwähnt.ji called NRRL 1931. Furthermore are in this context the Trichoderma strains deposited in connection with the present invention Harzianum CBS 243.7 and Penidllium lilacinum CBS 595.71 mentioned.

r> Bei der Verwendung des erfindungsgernäßen Mutanase-Präparats kann die Mutanase in einem nichttoxischen Träger (z. B. Wasser), dispcrgiert werden. Für die Behandlung des Zahnsteins auf lebenden Zähnen wird die Mutanase in ein oral applizicrbarcsr> When using the mutanase preparation according to the invention the mutanase can be dispersed in a non-toxic carrier (e.g. water). For the treatment of tartar on living teeth, the mutanase is administered orally

ίο Präparat eingebracht, z. B. in eine Zahnpasta, ein Mundwasser, ein Mundspray oder in einen Kaugummi. Es besteht aber auch die Möglichkeit, daß die Mutanase in einem verzehrbaren Präparat, beispielsweise einem Schokoladepräparat, einem Getränk, inίο Product introduced, e.g. B. in a toothpaste Mouthwash, a mouth spray, or a chewing gum. But there is also the possibility that the Mutanase in an edible preparation, for example a chocolate preparation, a drink, in

r, Drops oder Pastillen vorliegt. Bevorzugt werden länger in der Mundhöhle verbleibende Präparate wie Drops, Kaugummi oder Pastillen. Diese können so aufgebaut sein, daß sie die Mutanase nur allmählich freigeben und somit dem Enzym eine ausreichender, drops or lozenges. Preferred be longer Preparations remaining in the oral cavity such as drops, chewing gum or lozenges. These can be like that be built up that they release the mutanase only gradually and thus the enzyme a sufficient

in Zeit zum Angriff des Zahnbelags zur Verfugung steht. Eine weitere Verwendung für die erfindungsgemäße Mutanase ist die Behandlung künstlicher Zähne (Zahnprothesen), bei denen sich ebenfalls Zahnbclag bildet, der sich mit der Mutanase entfernen läßt. Zuis available in time to attack the dental plaque. Another use for the mutanase according to the invention is the treatment of artificial teeth (Dental prostheses), in which dental plaque also forms, which can be removed with the mutanase. to

r> diesem Zwecke kann die Mutanase in ein Einweichoder Reinigungspräparat, z. B. in eine Gebiß-Behandlungslösung, eingebracht sein.For this purpose, the mutanase can be incorporated into a soaking or cleaning preparation, e.g. B. in a denture treatment solution, be brought in.

Als weitere orale Applikationsformen für die Mutanase seien solche Präparatestücke in Festform wieOther forms of oral administration for the mutanase include such pieces of preparation in solid form as

-,(i beispielsweise Tabletten, Bonbons oder Toffees gcnann*, die in der Mundhöhle in eine an den Zähnen haftende Position gebracht werden können. Auf diese Weise wird ein Langdauereffekt erzielt.-, (i can, for example, tablets, sweets or toffees *, which can be brought into a position that adheres to the teeth in the oral cavity. To this In this way, a long-term effect is achieved.

Um bei den vorerwähnten oral anwendbaren Prä-In order to be able to use the aforementioned orally

-,-> paraten eine für die Vermeidung einer Zahnstcinbildung oder für die Entfernung gebildeten Zahnsteins ausreichende Enzymaktivität zu erzielen, sollte eine Konzentration zwischen 0,02 und KH)O Mutanase Einheiten pro Gramm Präparat angewendet werden.-, -> Prepare one for avoiding tooth streak formation or to achieve sufficient enzyme activity to remove tartar that has formed, a Concentration between 0.02 and KH) O Mutanase units per gram of preparation are used.

mi Für viele Zwecke hat sich eine Aktivität von 0,1 bis 500 Mutanase-Einheiten und innerhalb dieses Bereichs eine solche von 0,2 bis 100 Mutanase-Einheiten pro Gramm Präparat als zweckmäßig erwiesen.
Die Mutanase enthaltenden ZusammensetzungenFor many purposes, an activity of 0.1 to 500 mutanase units and, within this range, an activity of 0.2 to 100 mutanase units per gram of preparation has proven to be expedient.
The compositions containing the mutanase

h-, können selbstverständlich auch andere Enzyme,/. B. Dextranase, enthalten. Da sich gezeigt hat, daß die vollständige Auflösung der in der Zahnbelagsmatrix vorliegenden Verbindungen in einem gewissen Maße h -, of course, other enzymes can also be used, /. B. dextranase included. Since it has been shown that the complete dissolution of the compounds present in the dental plaque matrix to a certain extent

auch von einem Gehalt an Nicht-KohlehydnU-Swbstanzeii in dieser Matrix abhängt, kann sich eine Zugabe von Lipase und Protease zu dem Präparat zur Ergänzung der von der Mutanase entfalteten Enzymwirkung als vorteilhaft erweisen.also depends on the content of non-carbohydrate substances in this matrix, an addition of lipase and protease to the preparation can be beneficial Supplementing the enzyme action unfolded by the mutanase prove beneficial.

Die in einem Präparat enthaltene Mutanase-Aktivität kann in der von Tsuchiya, et al, J. Bacterial. 64, 513-519 (1952) beschriebenen Methode bestimmt werden, wobei anstelle von Dextran Mutan verwendet wird.The mutanase activity contained in a preparation can be found in the method described by Tsuchiya, et al, J. Bacterial. 64, 513-519 (1952) described method, using mutan instead of dextran is used.

Polysaccharide vom Typ der Mutane können auch in der Industrie, beispielsweise in Rohrleitungen oder Vorratsgefäßen auftreten, die mit wässerigen Zuckcr-Iösungcn,z. B. Melasse, in Berührung kommen, wenn in die Anlage Polysacclmrid produzierende Mikroorganismen gelangen. Für diesen Zweck kann die crfindungsgcmäße Mutanasc in Einweich- oder Reinigung>präparaten enthalten sein und dazu dienen, durch die Mutane verursachte Verstopfungen und Waridbelägc zu beseitigen.Polysaccharides of the mutane type can also be used in industry, for example in pipelines or Storage vessels occur which are filled with aqueous Zuckcr-Iösungcn, z. B. molasses, come in contact when Polysaclmride-producing microorganisms enter the plant. For this purpose, the mutanasc of the invention can be contained in soaking or cleaning preparations and serve to to remove blockages and warid deposits caused by the mutans.

Das bei den nachfolgenden Ausführ.ngsbeisielcn verwendete Mutan kann durch Kultivierung von Streptococcus mutans OMZ 176 (CBS Nr. 350.71) in einer Hirn-Herz-Infusion (Difco) während einer Zeitdauer von 12 Stunden erzeugt werden. Die hierbei erhaltene Nährbrühe wird in einen Fermentator eingeimpft, derein Substrat folgender Zusammensetzung enthält:The mutan used in the following examples can be obtained by culturing Streptococcus mutans OMZ 176 (CBS No. 350.71) in a brain-heart infusion (Difco) during a Duration of 12 hours can be generated. The nutrient broth thus obtained is inoculated into a fermenter, which is a substrate of the following composition contains:

Dialysicrbarc Teile von Bacto Tryptose 30 g/l Dialysicrbarc Teile von Bacto Hefeextrakt 15 g/l Bacto-Casamino-Säuren 7,5 g/lDialysicrbarc parts of Bacto tryptose 30 g / l Dialysicrbarc parts of Bacto yeast extract 15 g / l Bacto-Casamino Acids 7.5 g / l

K2HPO4 12 g/IK 2 HPO 4 12 g / l

Glukose 12,5 g/lGlucose 12.5 g / l

Beispiel 1example 1

Eine in einer Schüttclflaschc befindliche Salzlösung (Mandels et al, J. Bact. 83, 400-408, 1962) wird mit Trichodcrma harzianum CBS Nr. 243.71 beimpft und 96 .stunden lang geschüttelt. Die Kohlenstoffquellc besteht aus 0,2% Glucose und 0,2% Mutan. Diese Kühlflüssigkeit wird in einen Fermentator eingebracht, der ein Substrat derselben Zusammensetzungenthält. In den Fermentator wird Luft in einer Menge von 1 Liter pro Minute und pro Liter Kühlflüssigkeit eingeführt. Die Temperatur der Kulturflüssigkcit beträgt 28° C und die Drehgeschwindigkeit des Rührwerkes 300 Umdrehungen pro Minute. Der pH-Wert stellt sich automatisch auf 6,0 ein. Nach 160 Stunden beträgt die Niutanase-Aktivität 2,5 Einheiten pro Milliliter Kühlflüssigkeit.A saline solution in a shaker bottle (Mandels et al, J. Bact. 83, 400-408, 1962) is inoculated with Trichodcrma harzianum CBS No. 243.71 and shaken for 96 hours. The carbon source consists of 0.2% glucose and 0.2% mutan. This cooling liquid is placed in a fermenter containing a substrate of the same composition. In the fermenter there is air in a Amount of 1 liter per minute and per liter of coolant introduced. The temperature of the culture liquid is 28 ° C and the speed of rotation of the agitator 300 revolutions per minute. The pH value automatically adjusts to 6.0. After 160 Hours, the niutanase activity is 2.5 units per milliliter of cooling liquid.

Beispiel 2Example 2

Es wird ein Mutan eingesetzt, dessen cc-l,6-Bindungcn aufgebrochen sind. Zu diesem Zweck wird das Mutan in einer Perjodatlösung (4 Mol Perjodat pro Mol Anhydroglukose) oxidiert. Die Molarität des Perjodats wird unter 0,05 gehalten. Die Oxidation wird während einer Zeitdauer von 144 Stunden imA mutan is used whose cc-1,6 bonds have been broken. For this purpose, the Mutan is oxidized in a periodate solution (4 moles of periodate per mole of anhydroglucose). The molarity of the Periodate is kept below 0.05. The oxidation is during a period of 144 hours in

■Γι■ Γι

Dunkcfn bei 4° C durchgeführt. Anschließend wird das Mutan abzentrifugiert und über Nacht gegen fließendes Leitungswasser dialysicrt. Die Reduktion erfolgt bei Zimmertemperatur in einer wäßrigen Natrium-Borhydrid-Lösung(2 g Natrium-Borhydrid pro Gramm Mutan). 24 Stunden später wird die Mischung mit 32%iger Salzsäure neutralisiert. Das so modifizierte Mutan wird gewaschen und lyophilisier . D e nachfolgende Herstellung der Mutanase wird ents irechend Beispiel 1 ausgeführt, mit der Maßgabe, daß anstelle des in Beispiel 1 eingesetzten Mutans das vorstehend erzeugte Mutan und statt des Stammes Trichoderma harzianum CBS Nr. 243.71 nunmehr er Stamm Penicillium lilacinum CBS 595.71 für die KuI-tivierung verwendet wird. Nach 184stündiger Kultivierung erhält man eine Ausbeute von 0,26 Mutanase-Einheiten pro Milliliter Kulturfiltrat. Die Dcxtranase-Aktivität beträgt weniger als 0,02 Dextranase-Einheiten pro Milliliter K?:?turfiltrat. Ähnliche Resultate wurden bei Verwendung von Penicillium funiculosum erhalten.Darkened at 4 ° C. Then will the mutan centrifuged off and dialysed against running tap water overnight. The reduction is carried out at room temperature in an aqueous sodium borohydride solution (2 g sodium borohydride per Grams of mutan). 24 hours later, the mixture is neutralized with 32% hydrochloric acid. The mutan modified in this way is washed and lyophilized. D e subsequent preparation of the mutanase is carried out according to Example 1, with the proviso that instead of the mutan used in Example 1, the mutan produced above and instead of the strain Trichoderma harzianum CBS No. 243.71 now he Strain Penicillium lilacinum CBS 595.71 is used for the cultivation. After 184 hours of cultivation, a yield of 0.26 mutanase units per milliliter of culture filtrate is obtained. The dextranase activity is less than 0.02 dextranase units per milliliter of body filtrate. Similar Results were obtained using Penicillium funiculosum.

Um die Abbauwirkung der erfindungsgemäßen Mutanase auf Mutan nachzuweisen, wird die durch isoclcktrischc Fokussierung gereinigte Mutanasc auf einer Agar-Platte getestet. 45 mg Mutan, 225 mg Agar und 15 ml 0,2 N Acetat-Puffer mit einem pH-Wert von 5,0 werden durchgerührt und bis zum Kochen erhitzt. Unmittelbar anschließend wird die Mutan-Suspcnsion in einen Petri-Kolben eingegossen. Nach der Verfestigung werden in die mutanhaltige Agarplattc einige Löcher gebohrt. Diese Löcher werden mit gereinigter Mutanasc (Aktivität etwa 2 Mutanasc-Einhcitcn[0,03 ml]) gefüllt und die Platten über Nacht bei 37° C inkubiert. Das Mutan in der unmittelbaren Umgebung der Löcher ist nunmehr vollständig hydrolysiert. Gereinigte Dextranase in einer Konzentration von 2(M) Dextranase-Einheiten pro Milliliter zeigt dagegen überhaupt keine Abbauwirkung auf das Mutan.In order to demonstrate the degradation effect of the mutanase according to the invention on mutan, the by isocyclic focusing of purified Mutanasc tested on an agar plate. 45 mg Mutan, 225 mg Agar and 15 ml of 0.2 N acetate buffer with a pH value of 5.0 are stirred through and heated to boiling. Immediately afterwards, the Mutan suspension poured into a Petri flask. After solidification, a few holes are drilled into the mutan-containing agar plate. These holes are filled with purified Mutanasc (activity about 2 Mutanasc units [0.03 ml]) and the plates Incubated overnight at 37 ° C. The mutan in the immediate vicinity of the holes is now completely hydrolyzed. Purified dextranase at a concentration of 2 (M) dextranase units per Milliliters, on the other hand, show no degradation at all on the mutan.

Zum weiteren Nachweis für die Abbauwirkung der erfindungsgemäßen Mutanasc auf Mutan wurden 50 mg Iyophilisierter Zahnbclag, der von Schulkindern stammte, in 100 ml Wasser durch Ultraschall suspendiert. Das Material wurde zentrifugiert und die Extraktion des Sediments zweimal mit Mengen von 10 ml doppelt destilliertem Wasser wiederholt. Der lösliche Teil wurde abgegossen. Der unlösliche Rückstand (38,5 mg) wurde in 10 ml Acetat-Puffer suspendiert und bis zum Kochen erhitzt. 1 ml der BelagSuspension wurde 4 Stunden lang mit 1 ml gereinigter Mutanase, deren Aktivität 2,2 Mutanase-Einhciten betrug, inkubiert. Die Menge des freigesetzten reduzierenden Zuckers wurde kolorimetrisch bestimmt. Dabei ergab sich, daß die Mutanase 0.12 mg rcduzierenden Zucker, der als Glukose bestimmt wurde, freigesetzt hatte. Eine Probe mit gereinigter Dextranase anstelle von Mutanase (240 Dcxtranase-Einheiten je ml) zeigte keinerlei Freisetzung irgendeines reduzierenden Zuckers.For further evidence of the degradation effect of the Mutanasc according to the invention on Mutan were 50 mg of lyophilized dental plaque obtained from school children in 100 ml of water by ultrasound suspended. The material was centrifuged and the extraction of the sediment twice with amounts of Repeatedly 10 ml of double distilled water. The soluble part was poured off. The insoluble residue (38.5 mg) was suspended in 10 ml of acetate buffer and heated to a boil. 1 ml of the coating suspension was purified with 1 ml for 4 hours Mutanase, the activity of which was 2.2 mutanase units, was incubated. The amount of reducing sugar released was determined colorimetrically. It was found that the mutanase had released 0.12 mg of reducing sugar, which was determined to be glucose. A sample with purified dextranase instead of mutanase (240 Dcxtranase units per ml) did not show any release of any reducing sugar.

Claims (11)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Mutanase in Form eines ct-l,3-Glucanase-Präparats, das durch Hydrolyse Mutane mit einem Gehaltvon mehr als 50% an a-l,3-GIucosid-Bindungen zersetzt, erhältlich durch Kultivierung eines Mutanase-produzierenden Mikroorganismus auf einem Medium, dessen vorwiegende Kohlenstoffquelle ein aus einem Streptococcus produziertes Mutan ist und in welchem während der Kultivierung ein pH-Wert zwischen etwa 2 und 9 und eine Temperatur zwischen 10 und 45° C eingehalten wird, und durch anschließende Gewinnung der erzeugten Mutanase aus der Fermentationslösung.1. Mutanase in the form of a ct-l, 3-glucanase preparation which, by hydrolysis, mutans with a Content of more than 50% of α-1,3-glucoside bonds decomposed, obtainable by culturing a mutanase-producing microorganism on a medium whose primary carbon source is a mutan produced from a Streptococcus and in which during the Cultivate a pH between about 2 and 9 and a temperature between 10 and 45 ° C is complied with, and by subsequent recovery of the mutanase produced from the fermentation solution. 2. Verfahren zur Herstellung einer Mutanase nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Mutan durch Kultivierung des Streptococcusmutans CBS 350.71 hergestellt wird.2. A method for producing a mutanase according to claim 1, characterized in that the mutan is produced by culturing the Streptococcus mutans CBS 350.71. 3. Verfahren zur Herstellung einer Mutanase nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Mutan vor seiner Weiterverwendung oxidiert und reduziert wird, um seine α-1,6-Bindungen zu zerstören.3. A method for producing a mutanase according to claim 1, characterized in that the mutan is oxidized and reduced to its α-1,6 bonds before further use destroy. 4. Verfahren zur Herstellung einer Mutanase gemäß Anspruch 1, insbesondere nach einem oder beiden der vorhergehenden Ansprüche 2 und 3, dadurch gekennzeichnet, daß als Mutanase-produzierender Mikroorganismus ein Stamm von Trichoderma harzianum, Penicillium lilacinum, Peni-.rillium funiculosum, Penicillium melinii und Penicillium janthinellum eingesetzt wird.4. A method for producing a mutanase according to claim 1, in particular according to one or both of the preceding claims 2 and 3, characterized in that the mutanase-producing microorganism is a strain of Trichoderma harzianum, Penicillium lilacinum, Peni-.rillium funiculosum, Penicillium melinii and Penicillium janthinellum is used. 5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Stämme Trichoderma harzianum CBS 243.71 oder Penicillium lilacinum CBS 595.71 oder Penicillium lilacinum NRRL896 oder Penicillium funiculosum NRRL 1931 eingesetzt werden.5. The method according to claim 4, characterized in that the strains Trichoderma harzianum CBS 243.71 or Penicillium lilacinum CBS 595.71 or Penicillium lilacinum NRRL896 or Penicillium funiculosum NRRL 1931 can be used. 6. Oral applizicrbarcs Präparat zur Zersetzung von Mutan, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Mutanase gemäß Anspruch 1.6. Oral preparation for decomposition of mutan, characterized by a content of a mutanase according to claim 1. 7. Extraoral applizierbares Präparat zur Zersetzung von Mutan, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Mutanase gemäß Anspruch 1.7. Extra-orally administrable preparation for the decomposition of mutan, characterized by a content of a mutanase according to claim 1. 8. Präparat nach Anspruch 6 zur Behandlung von Zahnbelag oder Gebissen, dadurch gekennzeichnet, daß das Präparat zwischen 0,02 und 1 (X)O Mutanase-Einheiten pro Gramm enthält.8. A preparation according to claim 6 for the treatment of plaque or teeth, characterized in that the preparation is between 0.02 and 1 (X) O Contains mutanase units per gram. 9. Präparat nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Mutanase in einer Zahnpaste, einem Mundwasser, einem Mundspray oder einem verzehrbaren Produkt, vorzugsweise in einem Schokoladcpräparat oder einem Getränk, enthalten ist.9. A preparation according to claim 8, characterized in that the mutanase in a toothpaste, a mouthwash, an oral spray or an edible product, preferably in one Chocolate preparation or a drink. 10. Präparat nach Anspruchs, dadurch gekennzeichnet, daß die Mutanase in einem festen Stück, vorzugsweise in einer Tablette, einem Karamel oder einem Toffeestück, enthalten ist, das in der Mundhöhle haftet.10. A preparation according to claim, characterized in that the mutanase in a solid Piece, preferably in a tablet, a caramel or a toffee stick, is contained that sticks in the oral cavity. 11. Präparat nach Anspruchs, dadurch gekennzeichnet, daß die Mutanase in einem Kaugummi, in Drops oder in Pastillen enthalten ist.11. A preparation according to claim, characterized in that the mutanase is contained in a chewing gum, in drops or lozenges. ΙΊΙΊ Die Bildung von Zahnstein »teilt eine Erscheinung dar, welche die Gesundheit der Zähne beeinträchtigt. Um die Gesundheit der Zähne zu erhalten, komm es darauf an, die Zähne vom Zahnsteinbelag frei zu halten. Gebildeter Zahnstein muß also entfernt Würden. Bei der zahnärztlichen Untersuchung wird dies üblicherweise durch Abkratzen des Zahnbelags van den Zähnen bewerkstelligt.The formation of tartar »shares an appearance which affects the health of the teeth. To keep your teeth healthy, come it is important to keep the tartar free of the teeth. Formed tartar must therefore be removed. At the dental exam this will be usually done by scraping off the plaque from the teeth. Es wurden aber auch bereits umfangreichere L ntersuchungen mit dem Ziel durchgeführt, die Entstehung von Zahnstein von vornherein zu verhindern. Hierfür war es zunächst erforderlich, die chemische Natur des Zahnbelags aufzuklären. Dabei zeigte sich, daß der Zahnbelag wesentliche Anteile von Polysacchariden enthält. Man nimmt an, daß sie das unlösliche Skelett oder die Matrix für den Zusammenhalt ces Zahnbelags bilden. Ihre Entstehung hat man auf bakterielle Vorgänge zurückgeführt, bei denen einige cer regelmäßig im Zahnbelag vorhandenen Bakterien gewisse dietäre Kohlehydrate in diese Polysaccharide umwandeln. Hierbei soll der Einwirkung von Streptokokken auf dietäre Sucrose besondere Bedeutung zukommen.However, more extensive investigations have already been carried out with the aim of preventing the formation of tartar from the outset. For this it was first necessary to clarify the chemical nature of the dental plaque. It turned out that that the dental plaque contains substantial proportions of polysaccharides. It is believed that they are the insoluble Skeleton or the matrix for cohesion ces Form dental plaque. Their development has been traced back to bacterial processes in which some cer Bacteria regularly present in dental plaque convert certain dietary carbohydrates into these polysaccharides convert. The effect of streptococci on dietary sucrose is said to be of particular importance. Es ist bekannt, daß eine Reihe von Mikroorganismen Polysaccharide erzeugen. Hierzu gehört auch Dextran. In der Literatur ist verschiedentlich Zahnstein sogar mit Dextran identifiziert worden. Dies r at zu Vorschlägen geführt, den Zahnstein an Ort u id Stelle durch eine Behandlung mit Dextranase anzugreifen (GB-PS 202629). In vitro durchgeführte Untersuchungen haben aber gezeigt, daß zwar die löslichen Dextrane sich durch Dextranase abbauen lasst η, die unlöslichen Polysaccharide jedoch lediglich in einem sehr begrenzten Ausmaß angegriffen werden. Es konnte jedoch die Synthese eines unlöslichen Polysaccharids in einem System, das einen Polysaccharid erzeugenden Mikroorganismus enthielt, verhindert werden, wenn Dextranase zugegen war. Bis heute Ii at sich jedoch die Verwendung von Dextranase für οι al verabreichbare Präparate zu dem Zweck, gebildeten Zahnstein zu entfernen oder auch nur die Zahnbclagbildung zu reduzieren, als nicht ausreichend wirksam erwiesen. Die Gründe hierfür dürften in der besonderen chemischen Struktur der Zahnstein in einem wesentlichen Umfang mitbildenden Polysaccharide a\ sehen sein.A number of microorganisms are known to produce polysaccharides. This also includes dextran. In the literature, tartar has even been identified with dextran on various occasions. This advice led to proposals to attack the tartar on site and at the site by treatment with dextranase (GB-PS 202629). Investigations carried out in vitro have shown, however, that although the soluble dextrans can be broken down by dextranase, the insoluble polysaccharides are only attacked to a very limited extent. However, the synthesis of an insoluble polysaccharide in a system containing a polysaccharide-producing microorganism could be prevented when dextranase was present. To date, however, the use of dextranase for preparations which can be administered orally for the purpose of removing tartar that has formed or even just reducing the formation of dental plaque has not proven to be sufficiently effective. The reasons for this are likely in the particular chemical structure of the calculus to a substantial extent mitbildenden polysaccharides a \ see his. Man nimmt an, daß der wesentliche und kriti.se ic Bestandteil des Zahnsteins aus Polysacchariden mit a-l,3-Glucosid-Bindungen besteht. Diese Polysaccharide sind in Wasser unlöslich. Sie werden au;h nicht durch Dextranase angegriffen. Ihre Gegenwart im Zahnbelag scheint für die Resistenz des Zahnbelages gegenüber einem Angriff durch Dextranase von Bedeutung zu sein. Ein solches Polysaccharid-Material, bei dem es sich um ein extrazellularcs Glucan mit einem Anteil von mehr als 50% an a-1,3-Gluc:>-sid-Bindungcn handelt, ist unter der Bezeichnung »Mutan« bekannt. Dementsprechend werden clic Eizyme, welche diese Polysaccharide über eine Hydrolyse und Solubilisierung angreifen, als Mutanate bezeichnet. Lubnruntcrsuchungen über Mutan und Mutanase sind in dem nachveröffentlichten Aufsatz. »Enzymatic Hydrolysis ami Structure of Water - Insoluble Glucan produced by Glucosyllransfcrascs from a Strain of Streptococcus Mutans« in HeIv. Odon. Acta, Volume 14, Supplemcntum V, 89-UM; 1970, beschrieben.It is assumed that the essential and critical ic Part of the tartar consists of polysaccharides with a-1,3-glucoside bonds. These polysaccharides are insoluble in water. You will au; h not attacked by dextranase. Their presence in plaque appears to account for the resistance of the plaque to attack by dextranase Meaning to be. One such polysaccharide material that is an extracellular glucan with a proportion of more than 50% of α-1,3-Gluc:> -sid bonds is under the name "Mutan" known. Accordingly, clic eggs, which attack these polysaccharides via hydrolysis and solubilization, are called mutanates designated. Oil investigations on Mutan and Mutanase are in the postpublished article. “Enzymatic Hydrolysis ami Structure of Water - Insoluble Glucan produced by Glucosyllransfcrascs from a Strain of Streptococcus Mutans "in HeIv. Odon. Acta, Volume 14, Supplements V, 89-UM; 1970, described. Mutanase kann als cine Enzvniklasse aimeselu ηMutanase can be used as a cine Enzvniklasse aimeselu η
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