DE212020000282U1 - Cryopreservation tube for mesenchymal umbilical cord stem cells with a coating made of polygalacturonic acid - Google Patents
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Abstract
Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Nabelschnurstammzellen, umfassend einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs, dadurch gekennzeichnet, dass die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr mit einer Überzugsschicht versehen ist, die aus Polygalacturonsäure besteht.
Description
Technischer BereichTechnical part
Das Gebrauchsmuster gehört zum Bereich der Stammzellen und bezieht sich auf ein Kryokonservierungsrohr für Stammzellen, insbesondere auf ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Nabelschnurstammzellen, das eine Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure enthält.The utility model belongs to the field of stem cells and relates to a cryopreservation tube for stem cells, in particular a cryopreservation tube for mesenchymal umbilical cord stem cells, which contains a coating layer made of polygalacturonic acid.
Stand der TechnikState of the art
Mesenchymale Nabelschnurstammzellen (Mesenchymal Stem Cells, MSCs) beziehen sich auf eine Art multifunktionaler Stammzellen, die im neugeborenen Nabelschnurgewebe vorhanden sind. Sie können in viele Arten von Gewebezellen differenzieren und haben breite klinische Anwendungsaussichten aufzuweisen.Mesenchymal stem cells (MSCs) refer to a type of multifunctional stem cell that is present in newborn umbilical cord tissue. They can differentiate into many types of tissue cells and have wide clinical application prospects.
Eine wichtige Forschungsrichtung für mesenchymale Nabelschnurstammzellen ist die Verbesserung ihrer Aktivität nach der Kryokonservierung und Wiederherstellung.An important direction of research for umbilical cord mesenchymal stem cells is to improve their activity after cryopreservation and recovery.
ZusammenfassungSummary
Der Zweck des Gebrauchsmusters besteht darin, ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Nabelschnurstammzellen bereitzustellen, das eine Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure enthält, um die Aktivität von mesenchymalen Nabelschnurstammzellen nach Kryokonservierung und Wiederherstellung zu verbessern.The purpose of the utility model is to provide a cryopreservation tube for mesenchymal umbilical cord stem cells which contains a coating layer of polygalacturonic acid to improve the activity of mesenchymal umbilical cord stem cells after cryopreservation and restoration.
Der obige Zweck wird durch die folgenden technischen Lösungen erreicht: Ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Nabelschnurstammzellen umfasst einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs. Die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr ist mit einer Überzugsschicht versehen, die aus Polygalacturonsäure besteht.The above purpose is achieved by the following technical solutions: A cryopreservation tube for mesenchymal umbilical cord stem cells comprises a main body of the cryopreservation tube. The inner wall of the main body of the cryopreservation tube is provided with a coating layer made of polygalacturonic acid.
Ferner beträgt die Überzugsschichtdicke der Polygalacturonsäure 0,4 bis 0,6 mm.Furthermore, the coating thickness of the polygalacturonic acid is 0.4 to 0.6 mm.
Nützliche Leistungen:
- Das Kryokonservierungsrohr vom Gebrauchsmuster ist mit einer Innenwand versehen, die eine Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure enthält. Wenn das Kryokonservierungsrohr nach dem Gebrauchsmodell zur Kryokonservierung von mesenchymalen Nabelschnurstammzellen eingesetzt wird, sind Anzahl und Aktivität der der Zellen nicht deutlich reduziert, die bei -80 °C für 6 Monaten kryokonserviert sind. Die Kryokonservierungswirkung ist signifikant besser als die herkömmlichen Zellenkryokonservi erungsrohren.
- The cryopreservation tube of the utility model is provided with an inner wall that contains a coating layer of polygalacturonic acid. If the cryopreservation tube is used for the cryopreservation of mesenchymal umbilical cord stem cells according to the utility model, the number and activity of those cells that are cryopreserved at -80 ° C for 6 months are not significantly reduced. The cryopreservation effect is significantly better than the conventional cell cryopreservation tubes.
FigurenlisteFigure list
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1 ist eine schematische Darstellung der Struktur vom Kryokonservierungsrohr des vorliegenden Gebrauchsmusters, und1 ist die Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure.1 Fig. 13 is a schematic representation of the structure of the cryopreservation tube of the present utility model, and1 is the coating layer made of polygalacturonic acid.
Ausführliche AusführungsformenDetailed embodiments
Ausführungsbeispiel 1 Herstellung eines KryokonservierungsrohrsEmbodiment 1 Manufacture of a cryopreservation tube
Ein im Handel erhältliches 2ml-Corning-Kryokonservierungsrohr wird eingesetzt, um ein Kryokonservierungsrohr nach diesem Gebrauchsmuster bereitzustellen. Die spezifischen Schritte sind wie folgt:
- Schritt S1: Die Polygalacturonsäure (sterilisiert durch Bestrahlung mit γ-Kobalt 60, erworben von Shanghaier Yuanye Biotechnologie GmbH, Artikelnummer: S11085) in sterilem Wasser lösen, um eine Polygalacturonsäurelösung mit einer Konzentration von 5 mg / ml bereitzustellen;
- Schritt S2: 2 ml der obigen Lösung in ein 2ml Corning-Kryokonservierungsrohr geben und über Nacht bei der Raumtemperatur stehen lassen;
- Im Schritt S3 kann eine gleichmäßige Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure auf der Innenwand des Kryokonservierungsrohrs mit Dicke von 0,4 bis 0,6 mm nach langsamem Gießen der Lösung in das Kryokonservierungsrohr und 1-stündigem Austrocknen bei 50 °C gebildet werden.
- Step S1: Dissolve the polygalacturonic acid (sterilized by irradiation with γ-cobalt 60, purchased from Shanghai Yuanye Biotechnologie GmbH, article number: S11085) in sterile water to provide a polygalacturonic acid solution with a concentration of 5 mg / ml;
- Step S2: Put 2 ml of the above solution in a 2 ml Corning cryopreservation tube and let stand overnight at room temperature;
- In step S3, a uniform coating layer of polygalacturonic acid can be formed on the inner wall of the cryopreservation tube with a thickness of 0.4 to 0.6 mm after slowly pouring the solution into the cryopreservation tube and drying it for 1 hour at 50 ° C.
Ausführungsbeispiel 2 Der Einfluss der Innenwandbeschichtung des Kryokonservierungsrohrs auf den GefriereffektEmbodiment 2 The influence of the inner wall coating of the cryopreservation tube on the freezing effect
Experimentelle MethodeExperimental method
Kultur der mesenchymalen NabelschnurstammzellenCulture of mesenchymal umbilical cord stem cells
Menschliche mesenchymale Nabelschnurstammzellen in DMEM / F12-Medium, das 10% fötales Rinderserum und 10 ng / ml b-FGF enthält, bei 37 °C, 5% CO2 und gesättigter Feuchtigkeit kultivieren.Cultivate human umbilical cord mesenchymal stem cells in DMEM / F12 medium containing 10% fetal bovine serum and 10 ng / ml b-FGF at 37 ° C, 5% CO 2 and saturated humidity.
Zusammensetzung des KryokonservierungsmittelsComposition of the cryopreservative
5% DMSO (Dimethylsulfoxid, Volumenprozent), 3% HES (Hydroxyethylstärke, Massenvolumenprozentsatz) und 4% HSA (Humanalbumin, Massenvolumenprozentsatz) RPMI 1640-Kulturmedium wird als das Kryoprotektivum eingesetzt.5% DMSO (dimethyl sulfoxide, volume percent), 3% HES (hydroxyethyl starch, mass volume percentage) and 4% HSA (human albumin, mass volume percentage) RPMI 1640 culture medium is used as the cryoprotectant.
Kryokonservierung bei niedriger TemperaturCryopreservation at low temperature
Menschliche mesenchymale Nabelschnurstammzellen in gutem Wachstumszustand mit PBS waschen, dann durch das vorgekühlte Kryokonservierungsmittel bei 4 °C in eine Zellsuspension vorbereiten und diese in 2ml-Kryokonservierungsrohr mit jeweils 5 × 108 Zellen verteilen. Es nach 30-minütigem Äquilibrieren im Kühlschrank bei 4 °C zum direkten Einfrieren bei -80 °C in den Tiefkühlschrank stellen. Dann es nach 6-monatigem Einfrieren schnell bei 42 °C wieder erwärmen und auf verschiedene Indikatoren testen.Wash human mesenchymal umbilical cord stem cells in good growth state with PBS, then prepare a cell suspension with the pre-cooled cryopreservative at 4 ° C. and distribute this in 2 ml cryopreservation tubes with 5 × 10 8 cells each. After equilibrating for 30 minutes in the refrigerator at 4 ° C, freeze it directly at -80 ° C in the freezer. Then, after 6 months of freezing, quickly reheat it at 42 ° C and test for various indicators.
Der Versuch ist in zwei Gruppen unterteilt, bzw. Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und herkömmliche Kryokonservierungsgruppe. Für die Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht wird das in Ausführungsbeispiel 1 bereitgestellte Kryokonservierungsrohr mit Überzugsschicht aus Polygalacturonsäure eingesetzt; und für die herkömmliche Kryokonservierungsgruppe wird das unbehandelte Corning-Kryokonservierungsrohr direkt eingesetzt. Jede Gruppe hat zu jedem Zeitpunkt 5 Wiederholungen vorgesehen.The experiment is divided into two groups, respectively the cryopreservation group with coating layer and the conventional cryopreservation group. For the cryopreservation group with a coating layer, the cryopreservation tube provided in exemplary embodiment 1 with a coating layer made of polygalacturonic acid is used; and for the conventional cryopreservation group, the untreated Corning cryopreservation tube is used directly. Each group has 5 repetitions at each point in time.
Prüfung der IndikatorenExamination of the indicators
Anzahl der kernhaltigen Zellen: Nach dem Verdünnen der Zellsuspension mit dem Leukozytenverdünnungsmittel wird auf einem Hämozytometer gezählt. Dreimal wiederholen und den Durchschnitt ermitteln.Number of nucleated cells: after diluting the cell suspension with the leukocyte diluent, count on a hemocytometer. Repeat three times and find the average.
Anwendung der Trypanblau-Ausschlussmethode zur Zählung lebensfähiger Zellen: 0,5 ml Zellsuspension in ein EP-Rohr geben und dann etwa 0,1 ml 0,5%-ige Trypanblau-Farbstofflösung hinzufügen, es 2 Minuten lang mischen, dann die Objektträger vorbereiten und sie unter dem Mikroskop untersuchen. Mit einem Hämozytometer zählen, um die Trypanblau-Abstoßungsrate zu berechnen.To use the trypan blue exclusion method to count viable cells: add 0.5 ml of cell suspension to an EP tube, then add about 0.1 ml of 0.5% trypan blue dye solution, mix for 2 minutes, then prepare the slides and examine them under the microscope. Count on a hemocytometer to calculate trypan blue rejection rate.
VersuchsergebnisseTest results
Tabelle 1 zeigt die Anzahl der kernhaltigen Zellen und die Trypanblau-Abstoßungsrate der mesenchymalen Nabelschnurstammzellen in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe nach der Kryokonservierung von 6 Monaten.
Tab. 1 Testergebnisse verschiedener Indikatoren (n = 5)
Tabelle 1 zeigt, dass mit Polygalacturonsäure beschichtete Kryokonservierungsrohr einen Kryokonservierungsschutz für mesenchymale Nabelschnurstammzellen aufweisen. Die Anzahl und Aktivität der Zellen in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht bei der Kryokonservierung von -80 °C für 6 Monaten sind signifikant besser als diejenigen der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe.Table 1 shows that cryopreservation tubes coated with polygalacturonic acid have cryopreservation protection for mesenchymal umbilical cord stem cells. The number and activity of cells in the overcoated cryopreservation group in cryopreservation of -80 ° C for 6 months are significantly better than those of the conventional cryopreservation group.
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