DE212020000277U1 - Cryopreservation tube for mesenchymal placental stem cells with a coating of dandelion polysaccharide - Google Patents
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Abstract
Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Plazentastammzellen, umfassend einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs, dadurch gekennzeichnet, dass die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr mit einer Überzugsschicht versehen ist, die aus Löwenzahnpolysaccharid besteht.
Description
Technischer BereichTechnical part
Das Gebrauchsmuster gehört zum Bereich der Stammzellen und bezieht sich auf ein Kryokonservierungsrohr für Stammzellen, insbesondere auf ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Plazentastammzellen, das eine Überzugsschicht aus Löwenzahnpolysaccharid enthält.The utility model belongs to the field of stem cells and relates to a cryopreservation tube for stem cells, in particular to a cryopreservation tube for mesenchymal placental stem cells, which contains a coating layer of dandelion polysaccharide.
Stand der TechnikState of the art
Mesenchymale Plazentastammzellen sind eine Art pluripotenter Stammzellen, bei denen es sich um pluripotente Stammzellen mit Selbstreplikationsfähigkeit handelt.Placental mesenchymal stem cells are a type of pluripotent stem cells, which are pluripotent stem cells with self-replication ability.
Eine wichtige Forschungsrichtung für mesenchymale Plazentastammzellen ist die Verbesserung ihrer Aktivität nach der Kryokonservierung und Wiederherstellung.An important direction of research for mesenchymal placental stem cells is to improve their activity after cryopreservation and recovery.
ZusammenfassungSummary
Der Zweck des Gebrauchsmusters besteht darin, ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Plazentastammzellen bereitzustellen, das eine Überzugsschicht aus Löwenzahnpolysaccharid enthält, um die Aktivität von mesenchymalen Plazentastammzellen nach Kryokonservierung und Wiederherstellung zu verbessern.The purpose of the utility model is to provide a cryopreservation tube for mesenchymal placental stem cells which contains a coating layer of dandelion polysaccharide to improve the activity of mesenchymal placental stem cells after cryopreservation and restoration.
Der obige Zweck wird durch die folgenden technischen Lösungen erreicht:
- Ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Plazentastammzellen umfasst einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs. Die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr ist mit einer Überzugsschicht versehen, die aus Löwenzahnpolysaccharid besteht.
- A placental mesenchymal stem cell cryopreservation tube includes a main body of the cryopreservation tube. The inner wall of the main body of the cryopreservation tube is coated with a coating layer made of dandelion polysaccharide.
Ferner beträgt die Überzugsschichtdicke der Löwenzahnpolysaccharid 0,4 bis 0,6 mm.Further, the coating thickness of the dandelion polysaccharide is 0.4 to 0.6 mm.
Nützliche Leistungen:Useful services:
Das Kryokonservierungsrohr vom Gebrauchsmuster ist mit einer Innenwand versehen, die eine Überzugsschicht aus Löwenzahnpolysaccharid enthält. Wenn das Kryokonservierungsrohr nach dem Gebrauchsmodell zur Kryokonservierung von mesenchymalen Plazentastammzellen eingesetzt wird, sind Anzahl und Aktivität der der Zellen nicht deutlich reduziert, die bei -80 °C für 6 Monaten kryokonserviert sind. Die Kryokonservierungswirkung ist signifikant besser als die herkömmlichen Zellenkryokonservierungsrohren.The utility model cryopreservation tube is provided with an inner wall that contains a coating of dandelion polysaccharide. If the cryopreservation tube is used for the cryopreservation of mesenchymal placental stem cells according to the utility model, the number and activity of those cells that are cryopreserved at -80 ° C for 6 months are not significantly reduced. The cryopreservation effect is significantly better than the conventional cell cryopreservation tubes.
FigurenlisteFigure list
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1 ist eine schematische Darstellung der Struktur vom Kryokonservierungsrohr des vorliegenden Gebrauchsmusters, und1 ist die Überzugsschicht aus Löwenzahnpolysaccharid.1 Fig. 13 is a schematic representation of the structure of the cryopreservation tube of the present utility model, and1 is the coating layer made of dandelion polysaccharide.
Ausführliche AusführungsformenDetailed embodiments
Ausführungsbeispiel
Ein im Handel erhältliches 2ml-Corning-Kryokonservierungsrohr wird eingesetzt, um ein Kryokonservierungsrohr nach diesem Gebrauchsmuster bereitzustellen. Die spezifischen Schritte sind wie folgt:
- Schritt S1: Die Löwenzahnpolysaccharid (sterilisiert durch Bestrahlung mit γ-Kobalt 60, erworben von Shanghaier Yuanye Biotechnologie GmbH, Artikelnummer: S28147) in sterilem Wasser lösen, um eine Löwenzahnpolysaccharidlösung mit einer Konzentration von 3 mg / ml bereitzustellen;
- Schritt S2: 2 ml der obigen Lösung in ein 2ml Corning-Kryokonservierungsrohr geben und über Nacht bei der Raumtemperatur stehen lassen;
- Im Schritt S3 kann eine gleichmäßige Überzugsschicht aus Löwenzahnpolysaccharid auf der Innenwand des Kryokonservierungsrohrs mit Dicke von 0,4 bis 0,6 mm nach langsamem Gießen der Lösung in das Kryokonservierungsrohr und 1-stündigem Austrocknen bei 50 °C gebildet werden.
- Step S1: Dissolve the dandelion polysaccharide (sterilized by irradiation with γ-cobalt 60, purchased from Shanghai Yuanye Biotechnologie GmbH, item number: S28147) in sterile water to provide a dandelion polysaccharide solution with a concentration of 3 mg / ml;
- Step S2: Put 2 ml of the above solution in a 2 ml Corning cryopreservation tube and leave to stand overnight at room temperature;
- In step S3, a uniform coating layer of dandelion polysaccharide can be formed on the inner wall of the cryopreservation tube with a thickness of 0.4 to 0.6 mm after slowly pouring the solution into the cryopreservation tube and drying it at 50 ° C. for 1 hour.
Ausführungsbeispiel 2 Der Einfluss der Innenwandbeschichtung des Kryokonservierungsrohrs auf den GefriereffektEmbodiment 2 The influence of the inner wall coating of the cryopreservation tube on the freezing effect
Experimentelle MethodeExperimental method
Kultur der mesenchymalen PlazentastammzellenCulture of the mesenchymal placental stem cells
Menschliche mesenchymale Plazentastammzellen in DMEM / F12-Medium, das 10% fötales Rinderserum und 10 ng / ml b-FGF enthält, bei 37 °C, 5% CO2 und gesättigter Feuchtigkeit kultivieren.Cultivate human placental mesenchymal stem cells in DMEM / F12 medium containing 10% fetal bovine serum and 10 ng / ml b-FGF at 37 ° C, 5% CO 2 and saturated humidity.
Zusammensetzung des KryokonservierungsmittelsComposition of the cryopreservative
5% DMSO (Dimethylsulfoxid, Volumenprozent), 3% HES (Hydroxyethylstärke, Massenvolumenprozentsatz) und 4% HSA (Humanalbumin, Massenvolumenprozentsatz) RPMI 1640-Kulturmedium wird als das Kryoprotektivum eingesetzt.5% DMSO (dimethyl sulfoxide, volume percent), 3% HES (hydroxyethyl starch, mass volume percentage) and 4% HSA (human albumin, mass volume percentage) RPMI 1640 culture medium is used as the cryoprotectant.
Kryokonservierung bei niedriger TemperaturCryopreservation at low temperature
Menschliche mesenchymale Plazentastammzellen in gutem Wachstumszustand mit PBS waschen, dann durch das vorgekühlte Kryokonservierungsmittel bei 4 °C in eine Zellsuspension vorbereiten und diese in 2ml-Kryokonservierungsrohr mit jeweils 5 × 108 Zellen verteilen. Es nach 30-minütigem Äquilibrieren im Kühlschrank bei 4 °C zum direkten Einfrieren bei -80 °C in den Tiefkühlschrank stellen. Dann es nach 6-monatigem Einfrieren schnell bei 42 °C wieder erwärmen und auf verschiedene Indikatoren testen.Wash human mesenchymal placental stem cells in good growth state with PBS, then prepare a cell suspension with the pre-cooled cryopreservative at 4 ° C. and distribute this in 2 ml cryopreservation tubes with 5 × 10 8 cells each. After equilibrating for 30 minutes in the refrigerator at 4 ° C, freeze it directly at -80 ° C in the freezer. Then, after 6 months of freezing, quickly reheat it at 42 ° C and test for various indicators.
Der Versuch ist in zwei Gruppen unterteilt, bzw. Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und herkömmliche Kryokonservierungsgruppe. Für die Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht wird das in Ausführungsbeispiel
Prüfung der IndikatorenExamination of the indicators
Anzahl der kernhaltigen Zellen: Nach dem Verdünnen der Zellsuspension mit dem Leukozytenverdünnungsmittel wird auf einem Hämozytometer gezählt. Dreimal wiederholen und den Durchschnitt ermitteln.Number of nucleated cells: after diluting the cell suspension with the leukocyte diluent, count on a hemocytometer. Repeat three times and find the average.
Anwendung der Trypanblau-Ausschlussmethode zur Zählung lebensfähiger Zellen:
- 0,5 ml Zellsuspension in ein EP-Rohr geben und dann etwa 0,1 ml 0,5%-ige Trypanblau-Farbstofflösung hinzufügen, es 2 Minuten lang mischen, dann die Objektträger vorbereiten und sie unter dem Mikroskop untersuchen. Mit einem Hämozytometer zählen, um die Trypanblau-Abstoßungsrate zu berechnen.
- Put 0.5 ml of cell suspension in an EP tube and then add about 0.1 ml of 0.5% trypan blue dye solution, mix for 2 minutes, then prepare the slides and examine them under the microscope. Count on a hemocytometer to calculate trypan blue rejection rate.
VersuchsergebnisseTest results
Tabelle 1 zeigt die Anzahl der kernhaltigen Zellen und die Trypanblau-Abstoßungsrate der mesenchymalen Plazentastammzellen in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe nach der Kryokonservierung von 6 Monaten.
Tab. 1 Testergebnisse verschiedener Indikatoren (n = 5)
Tabelle 1 zeigt, dass mit Löwenzahnpolysaccharid beschichtete Kryokonservierungsrohr einen Kryokonservierungsschutz für mesenchymale Plazentastammzellen aufweisen. Die Anzahl und Aktivität der Zellen in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht bei der Kryokonservierung von -80 °C für 6 Monaten sind signifikant besser als diejenigen der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe.Table 1 shows that cryopreservation tubes coated with dandelion polysaccharide have cryopreservation protection for mesenchymal placental stem cells. The number and activity of cells in the overcoated cryopreservation group in cryopreservation of -80 ° C for 6 months are significantly better than those of the conventional cryopreservation group.
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