DE212020000279U1 - Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser mit Überzugsschicht aus Pullulan - Google Patents
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Abstract
Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser, umfassend einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs, dadurch gekennzeichnet, dass die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr mit einer Überzugsschicht versehen ist, die aus Pullulan besteht.
Description
- Technischer Bereich
- Das Gebrauchsmuster gehört zum Bereich der Stammzellen und bezieht sich auf ein Kryokonservierungsrohr für Stammzellen, insbesondere auf ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser, das eine Überzugsschicht aus Pullulan enthält.
- Stand der Technik
- In den letzten Jahren wird durch die In-Vitro-Zellkultur von mesenchymalen Stammzellen im Fruchtwasser zur Untersuchung der biologischen Eigenschaften proliferierender Zellen und zur Induktion der Differenzierung nachgewiesen, dass solche Zellen über das Potenzial für eine multidirektionale Differenzierung verfügen und als Keimzellen für die klinische Forschung verwendet werden können.
- Eine wichtige Forschungsrichtung für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser ist die Verbesserung ihrer Aktivität nach der Kryokonservierung und Wiederherstellung.
- Zusammenfassung
- Der Zweck des Gebrauchsmusters besteht darin, ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser bereitzustellen, das eine Überzugsschicht aus Pullulan enthält, um die Aktivität von mesenchymalen Stammzellen im Fruchtwasser nach Kryokonservierung und Wiederherstellung zu verbessern.
- Der obige Zweck wird durch die folgenden technischen Lösungen erreicht:
- Ein Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser umfasst einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs. Die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr ist mit einer Überzugsschicht versehen, die aus Pullulan besteht.
- Ferner beträgt die Überzugsschichtdicke des Pullulans 0,3 bis 0,5 mm.
- Nützliche Leistungen:
- Das Kryokonservierungsrohr vom Gebrauchsmuster ist mit einer Innenwand versehen, die eine Überzugsschicht aus Pullulan enthält. Wenn das Kryokonservierungsrohr nach dem Gebrauchsmodell zur Kryokonservierung von mesenchymalen Stammzellen im Fruchtwasser eingesetzt wird, sind Anzahl und Aktivität der der Zellen nicht deutlich reduziert, die bei -80 °C für 6 Monaten kryokonserviert sind. Die Kryokonservierungswirkung ist signifikant besser als die herkömmlichen Zellenkryokonservierungsrohren.
- Figurenliste
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1 ist eine schematische Darstellung der Struktur vom Kryokonservierungsrohr des vorliegenden Gebrauchsmusters, und1 ist die Überzugsschicht aus Pullulan. - Ausführliche Ausführungsformen
- Ausführungsbeispiel 1 Herstellung eines Kryokonservierungsrohrs
- Ein im Handel erhältliches 2ml-Corning-Kryokonservierungsrohr wird eingesetzt, um ein Kryokonservierungsrohr nach diesem Gebrauchsmuster bereitzustellen. Die spezifischen Schritte sind wie folgt:
- Schritt S1: Das Pullulan (sterilisiert durch Bestrahlung mit γ-Kobalt 60, erworben von Shanghaier Yuanye Biotechnologie GmbH, CAS-Nr.: 9057-02-7) in sterilem Wasser lösen, um eine Pullulanlösung mit einer Konzentration von 3 mg / ml bereitzustellen;
- Schritt S2: 2 ml der obigen Lösung in ein 2ml Corning-Kryokonservierungsrohr geben und über Nacht bei der Raumtemperatur stehen lassen;
- Im Schritt S3 kann eine gleichmäßige Überzugsschicht aus Pullulan auf der Innenwand des Kryokonservierungsrohrs mit Dicke von 0,3 bis 0,5 mm nach langsamem Gießen der Lösung in das Kryokonservierungsrohr und 1-stündigem Austrocknen bei 50 °C gebildet werden.
- Ausführungsbeispiel 2 Der Einfluss der Innenwandbeschichtung des Kryokonservierungsrohrs auf den Gefriereffekt
- Experimentelle Methode
- Kultur der mesenchymalen Stammzellen im Fruchtwasser
- Menschliche mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser in DMEM / F12-Medium, das 10% fötales Rinderserum und 10 ng / ml b-FGF enthält, bei 37 °C, 5% CO2 und gesättigter Feuchtigkeit kultivieren.
- Zusammensetzung des Kryokonservierungsmittels
- 5% DMSO (Dimethylsulfoxid, Volumenprozent), 3% HES (Hydroxyethylstärke, Massenvolumenprozentsatz) und 4% HSA (Humanalbumin, Massenvolumenprozentsatz) RPMI 1640-Kulturmedium wird als das Kryoprotektivum eingesetzt.
- Kryokonservierung bei niedriger Temperatur
- Menschliche mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser in gutem Wachstumszustand mit PBS waschen, dann durch das vorgekühlte Kryokonservierungsmittel bei 4 °C in eine Zellsuspension vorbereiten und diese in 2ml-Kryokonservierungsrohr mit jeweils 5 × 108 Zellen verteilen. Es nach 30-minütigem Äquilibrieren im Kühlschrank bei 4 °C zum direkten Einfrieren bei -80 °C in den Tiefkühlschrank stellen. Dann es nach 6-monatigem Einfrieren schnell bei 42 °C wieder erwärmen und auf verschiedene Indikatoren testen.
- Der Versuch ist in zwei Gruppen unterteilt, bzw. Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und herkömmliche Kryokonservierungsgruppe. Für die Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht wird das in Ausführungsbeispiel 1 bereitgestellte Kryokonservierungsrohr mit Überzugsschicht aus Pullulan eingesetzt; und für die herkömmliche Kryokonservierungsgruppe wird das unbehandelte Corning-Kryokonservierungsrohr direkt eingesetzt. Jede Gruppe hat zu jedem Zeitpunkt 5 Wiederholungen vorgesehen.
- Prüfung der Indikatoren
- Anzahl der kernhaltigen Zellen: Nach dem Verdünnen der Zellsuspension mit dem Leukozytenverdünnungsmittel wird auf einem Hämozytometer gezählt. Dreimal wiederholen und den Durchschnitt ermitteln.
- Anwendung der Trypanblau-Ausschlussmethode zur Zählung lebensfähiger Zellen:
- 0,5 ml Zellsuspension in ein EP-Rohr geben und dann etwa 0,1 ml 0,5%-ige Trypanblau-Farbstofflösung hinzufügen, es 2 Minuten lang mischen, dann die Objektträger vorbereiten und sie unter dem Mikroskop untersuchen. Mit einem Hämozytometer zählen, um die Trypanblau-Abstoßungsrate zu berechnen.
- II. Versuchsergebnisse
- Tabelle 1 zeigt die Anzahl der kernhaltigen Zellen und die Trypanblau-Abstoßungsrate der mesenchymalen Stammzellen im Fruchtwasser in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht und der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe nach der Kryokonservierung von 6 Monaten. Tab. 1 Testergebnisse verschiedener Indikatoren (n = 5)
Gruppe Anzahl der kernhaltigen Zellen (× 108) Trypanblau-Ausschlussrate (%) Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht 4,57±0,26 95,43±2,76 Herkömmliche Kryokonservierungsgruppe 3,21±0,18 81,32±3,21 - Tabelle 1 zeigt, dass mit Pullulan beschichtete Kryokonservierungsrohr einen Kryokonservierungsschutz für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser aufweisen. Die Anzahl und Aktivität der Zellen in der Kryokonservierungsgruppe mit Überzugsschicht bei der Kryokonservierung von -80 °C für 6 Monaten sind signifikant besser als diejenigen der herkömmlichen Kryokonservierungsgruppe.
Claims (2)
- Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser, umfassend einen Hauptkörper des Kryokonservierungsrohrs, dadurch gekennzeichnet, dass die Innenwand des Hauptkörpers vom Kryokonservierungsrohr mit einer Überzugsschicht versehen ist, die aus Pullulan besteht.
- Kryokonservierungsrohr für mesenchymale Stammzellen im Fruchtwasser nach
Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Überzugsschichtdicke des Pullulans 0,3 bis 0,5 mm beträgt.
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