DE2032988A1 - Ovular and seminal cell extracts - having a haploid chromosome set for therapeutic and diagnostic use - Google Patents
Ovular and seminal cell extracts - having a haploid chromosome set for therapeutic and diagnostic useInfo
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Abstract
Description
Verfahren zur Herstellung sowie zur diagnostischen und the-rapoutischen Anwendung von Zellextrakten zur Samenzellen und Mizellen Vorliegendes Verfahren dient zur Herstellung sowie diagnestischen und therapeutischen Anwendung besonderer Zellextrakte aus Samenzellen und Eizellen. Es ist gekennzeichnet durch die Verwendung korpuskulärer Zellbestandteile (-Organellen) und von hochmolekularen Fraktionen solcher Zellen bzw. den aus ihnen gewonnen Abbauprodukten. -Die Herstellung solcher Präparate geschieht nach bekannten Verfahren der Organaufarbeitung und -Extraktgewinnung. Das Verfahren bezieht sich demnach auf die Verwendung besonderer Ausgangsstoffe.Process for the production as well as for the diagnostic and therapeutic Application of cell extracts to sperm cells and micelles Present procedure is used for the production as well as diagnostic and therapeutic application of special Cell extracts from sperm cells and egg cells. It is characterized by the use corpuscular cell components (organelles) and high molecular weight fractions such cells or the degradation products obtained from them. -The manufacture of such Preparations are made according to known methods of organ processing and extraction. The procedure therefore relates to the use of special starting materials.
Unter korpuskulären Zellbestandteilen bzw. -Organellen sind insbesondere zu verstehen, der Zellkern und seine Bestandteile, ebenso zytoplasmatische Zellbestandteile in Art der Mitochondrien, Ribosomen, Goligiapparat und ihre Membranen. Diese korpuskulären Zellbestandteile bestehen aus SonglomoratXen von Molekülen; jedoch sind unter den hochmolekularen Fraktionen auch freie lösliche Moleküle zu verstehen Insbesondere die verschiedenartigen Ribonuclein-Säuren, dann aber auch DNS, Proteine, Proteine, Fermente, Lipide und Polysaccaride.Among the corpuscular cell components or organelles are in particular to understand the nucleus and its components, as well as cytoplasmic cell components in the type of mitochondria, ribosomes, goligi apparatus and their membranes. This corpuscular Cell components consist of SonglomoratXen of molecules; however are among the High molecular weight fractions also mean free soluble molecules in particular the various ribonucleic acids, but also DNA, proteins, proteins, Ferments, lipids and polysaccharides.
Abbauprodukte können als Metabolite in den Zellextrakten enthalten sein oder aus den genannten hochmolekularen Stoffen nach bekannten chemischen oder fermentchemischen Verfahren gewonnen werden.Degradation products can be contained in the cell extracts as metabolites be or from the named high molecular weight substances according to known chemical or fermentation chemical processes are obtained.
Als Ausgangsgewebe können sowohl Spermien von Saugetieren, als auch von Fischen Verwendung fixen und als mizellen in besonderem Maße Rogen von Fischen, z.B. von Forellen und Karpfen. Zur Beseitigung von Begleitstoffen werden die bekannten Methoden einschließlich der Trypsinbehandlung eingesetzt. Die Aufschließung der Zellen erfolgt. nach dem bekannten Homogenisierung- und Mahlverfahren, ggfs. auch in tiefgefrorenem Zustand. Die Trennung der Zellorganellen geschieht durch Zentrifugtation ggfs. unter Verwendung eines Gradienten, z.B. aus Fruktose.Both mammalian sperm and of fish use fixed and as micelles especially roe of fish, e.g. from trout and carp. The known Methods including trypsin treatment are used. Unlocking the Cells takes place. according to the known homogenization and grinding process, if necessary. Also in the frozen state. The cell organelles are separated by centrifugation possibly using a gradient, e.g. from fructose.
Danach erfolgt ggfs. die weitere chemische Aufschließung nach den bekannten Methoden der Herstellung für Organ- und Zellantigene, bzw. - Extrakte.Thereafter, if necessary, the further chemical digestion takes place according to the known methods of production for organ and cell antigens or extracts.
Die Auftrennung von Molekülen kann durch Gelfiltration, chromatographisch und elektrophoretisch erfolgen (vergl. C.Steffen: Allgemeine und experimentelle Immunologie und Immunpathologie: Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart; H.M. Rauen: Biologisches Taschenbuch, Springer-Verlag sowie einschlägige Einzelveröffentlichungen in Fachzeitschriften.) Es hat sich gezeigt, daß die beanspruchten Wirkstoffe aus Zellen mit haploldem Chromosomensatz als Plischung wie auch zum Teil isoliert, den Stoffwechsel von normalen Gewebezellen unspezifisch in besonderem Maße aktivieren und Synthese und Prolieferationsvorgänge auslösen. Diese Wirkung ist nicht organspezifisch und übertrifft die Wirkung von Gewebeextrakten aus anderen Organarten. Die therapeutische Anwendung kann nach allen üblichen Anwendungsarten der Organo-Therapie erfolgen.The separation of molecules can be done by gel filtration, chromatographically and carried out electrophoretically (cf. C. Steffen: Allgemeine und experimentalelle Immunology and Immunopathology: Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart; H.M. Rauen: Biological Paperback, Springer-Verlag and relevant individual publications in specialist journals.) It has been shown that the claimed active ingredients from cells with haploldem chromosome set as a mixture as well as partially isolated, the metabolism of normal tissue cells Activate unspecifically to a special degree and synthesis and proliferative processes trigger. This effect is not organ-specific and exceeds the effect of Tissue extracts from other types of organs. The therapeutic application can after all usual types of application of organotherapy take place.
Eine Kombination oder chemische bzw. adäsive Konjugation mit andersartigen Organextrakten oder zytotropen Zellfraktionen ist ebenso möglich wie die Kombination bzw.A combination or chemical or adhesive conjugation with other types Organ extracts or cytotropic cell fractions are just as possible as a combination respectively.
Konjugation mit den verschiedensten natürlichen und synthetischen Hormonen, insbesondere aus Schilddrüse, Nabenniere, den Keimdrüsen und deren Derivaten, dann auch mit Spurenelementen, von z. B. mit Salzen von Zink, Mangan, Magnesium, Eisen, Calcium.Conjugation with the most diverse natural and synthetic Hormones, in particular from the thyroid, the adrenal gland, the gonads and their derivatives, then also with trace elements, from z. B. with salts of zinc, manganese, magnesium, Iron, calcium.
r'ine besondere Art der weiteren Verwendung, insbesondere der Antigenbestandteile des X- bzw Y-Chromosoms aus haploiden Zellen liegt in der aktiven Immunisierung von antikörperbildenden Individuen. Auch diese erfolgt nach den bekannten immunologischen Methoden, ggfs.A special type of further use, especially the antigen components of the X or Y chromosome from haploid cells is in active immunization from antibody-producing individuals. This is also done according to the known immunological Methods, if necessary
unter Mitverwendung von Adjuvantien, z.B. dem Freund'sche Adjuvans oder einer kolloidalen Komplexverbindung nach Aluminium-Hydroxyd und Kieselsäure.with the use of adjuvants, e.g. Freund's adjuvant or a colloidal complex compound according to aluminum hydroxide and silica.
Die Gewinnung von Antikörperseren mit Immunglobulinen gelen des Y-Chromosom muß iiber die Herstellung eines ntikörperscrums gegen das X-Chromosom erfolgen. Man kann dabei von Säugetier zellen mit zwei X-Chromosomen z.H. aus Ovar, ausgehen und die Zellkerne bzw. während der Mitose auch Yf-Chromosome isolieren und als Antigen verwenden oder aber Antigene aus den haploiden Zellkernen von Fischrogen verwenden. Dieser muß von Begleitstoffen befreit werden, bevor die Zellkerne isoliert werden, die dann als Antigen wiederholt parentaral einem antikörperbildenden Individum eingespritzt werden.Obtaining antibody sera with immunoglobulins from the Y chromosome must take place via the production of a body crum against the X chromosome. You can use mammalian cells with two X chromosomes z.H. from ovary, go out and isolate the cell nuclei or, during mitosis, also Yf chromosomes and act as antigen or use antigens from the haploid cell nuclei of fish roe. This must be freed from accompanying substances before the cell nuclei are isolated, which is then repeatedly injected as an antigen parenterally into an antibody-producing individual will.
Das davon erhaltene Antikörperserum mit Immunglobulinen gegen X-Chromosome wird nun bei optimalen Bedinungem Samenzellen von Säugern oder auch Vögeln bzw. Fischen zugesetzt, wobei die Samenzellen ebenfalls von Begleitstoffen der Sexualdrüsen vorher befreit werden müssen. Nach eingetretener Agglutination der Samenzellen mit X-Chromosom werden die nicht agglutinlerten Zellen mit R-Chromosom isoliert und erneut dieser Isolierungsprozedur unterworfen. Die daraus gewonnen Zellkerne werden nun in analoger Weise der aktiven Immunisierung und Herstellung eines Antiserums mit Immunglobulinen gegen Y-chromosome verwendet. Mit diesem Serum kann man dann in entsprechender Weise ein Antikörperserum gegen artgleiche homologe X-Chromosome gewinnen.The antibody serum obtained therefrom with immunoglobulins against X chromosomes If the conditions are optimal, sperm cells from mammals or birds or Fish added, the sperm cells also from accompanying substances of the sex glands must be released beforehand. After agglutination of the sperm cells with X chromosome, the non-agglutinated cells with R chromosome are isolated and subjected to this isolation procedure again. The cell nuclei obtained from it are now in a manner analogous to active immunization and production of an antiserum with immunoglobulins used against Y chromosomes. With this serum you can then in a corresponding manner an antibody serum against homologous ones of the same kind Win X chromosomes.
Die Trennung der mit Immunglobulin beladenen Zellen kann durch Zell-Elektrophorese, wie auch durch Schwerkrafttrennung, ggfs. unter Mitverwendung eines Gradienten erfolgen. The cells loaded with immunoglobulin can be separated by cell electrophoresis, as well as by gravity separation, possibly with the use of a gradient.
Die Antikörperseren gegen Zellkernfraktionen mit X-Chromosom bzw. Y-Chromosom können zur Geschlechtsbestimmung benutzt werden. Dabei kann das Sperma vor der Insemination bei erwünschter Knabengeburt mit dem Immunglobulin->egen das X-Chromosom und erwünschter Mädchengeburt mit dem Antikörperserum gegen Y-Chromosome behandelt werden. Bekanntlich hängt das genetische Geschlecht vom Besitz des t-Chromosoms ab. The antibody sera against cell nucleus fractions with the X chromosome or Y chromosomes can be used to determine sex. The sperm can before the insemination with the desired boy birth with the immunoglobulin-> egen the X chromosome and desired girl birth with the antibody serum against Y chromosomes be treated. As is well known, the genetic sex depends on the possession of the t-chromosome away.
Ein Chromosom stammt jeweils von der Mutter, das andere vom Vater. Die Muter hat nur X-Chromosome, der Vater X- sowie Y-Chromosome. Zwei X-Chromosome bedeuten deshalb weiblich, X- und Y-Chromosome männlich. Die Ausschaltung des Y-Chromosoms im Sperma führt also zu weiblichen Individuen, während die Ausschaltung des X-Chromosoms zu-m.annlichen führen muß. One chromosome comes from the mother, the other from the father. The mother only has X chromosomes, the father X and Y chromosomes. Two X chromosomes therefore mean female, X and Y chromosomes mean male. The elimination of the Y chromosome So in sperm leads to female individuals while turning off the X chromosome to-m.annlichen must lead.
Vor der Behandlung des Spermas muß dieses von den Begleitsekreten der Geschlechtsdrüsen befreit werden. Before the treatment of the sperm, this must be from the accompanying secretions the sex glands are freed.
Diese Sekrete müssen dann nachträglich aber wieder zugesetzt werden. Auch die Mutter insbesondere gegen Y-Chromosom behandelt werden. These secretions then have to be added again afterwards. Even the mother in particular should be treated against the Y chromosome.
Dosisabhängig wird hier mit Verdünnungen des Serums gegen Y-Chromosome die Aufnahme von Y chromosomhaitigen 'Spermien erleichtert und bei höheren Konzentrationen dieses Sereums die Konzeption mit dem y chromosomhaltigen Sperma verhindert. Dose-dependent is here with dilutions of the serum against Y chromosomes the uptake of Y chromosome-containing sperm is facilitated and at higher concentrations this sereum prevents conception with the y-chromosome-containing sperm.
Die Antikörperseren gegen das X- bzw. Y-Chromosom können diagnostisch für die Bestimmung des Kerngeschlechts ggfs. unter Mitverwendung von Immunfluoreszenz- und Traser methoden angewandt werden. The antibody sera against the X or Y chromosome can be used diagnostically to determine the nucleus sex, if necessary with the use of immunofluorescence and tracer methods.
Präwarte aus korpuskulären Bestandteilen oder hochmolekularen Extrakte aus haploiden Zellen finden besonders Anwendung bei Organerkrankungen zur Förderung von Regeneration und Zellproliferation, zur Förderung des Haarwuchses und der Behandlung von Fertilität und Sterilität.Prewarts made from corpuscular components or high-molecular extracts from haploid cells are particularly used in organ diseases to promote regeneration and cell proliferation, to promote hair growth and the treatment of fertility and sterility.
Bislang wurden keine korpuskulären oder hochmolekularen Zellbestandteile aus Zellen mit haploidem Chromosomensatz prophylaktisch, therapeutisch oder diagnostisch verwendet. Es wurde lediglich versucht aus den Sexualsekreten hormonähnliche Stoffe zu extrahieren. Diese haben jedoch keine Beziehung zu dem vorliegenden Verfahren.So far, no corpuscular or high molecular weight cell components have been found from cells with a haploid chromosome set for prophylactic, therapeutic or diagnostic purposes used. The only attempt was made to produce hormone-like substances from the sex secretions to extract. However, these have no relation to the present proceedings.
Beispiele 1. Herstellung eines Antikörperserums mit Immunglobulinen gegen Y-Chromosome des Rindes. Examples 1. Preparation of an antibody serum with immunoglobulins against Y-chromosomes of the bovine.
Nicht denaturierter Rogen von Forellen wird in gepufferter Tyrode-Salzlösung bei ph 7,4 durch vorsichtiges Zentrifugieren wiederholt gewaschen. Danach werden die Eizellen mit einer isotronen Trypsinlösung angedaut und anschließend von der Lösung freigespült, mit flüssigem Stickstoff tiefgekühlt. In diesem Zustand gemahlen, wieder aufgetaut und die Zellkerne-durch vorsichtiges Zentrifugieren in einem Sacchrosegradienten gewonnen. Die Homogenisierung kann aber auch im frischen Zustand erfolgen.Undenatured trout roe is placed in Tyrode's buffered saline solution washed repeatedly at pH 7.4 by careful centrifugation. After that will be the egg cells are digested with an isotronous trypsin solution and then removed from the Solution flushed free, frozen with liquid nitrogen. Ground in this condition, thawed again and the cell nuclei - by careful centrifugation in a sucrose gradient won. However, the homogenization can also take place in the fresh state.
Die gewonnenen Zellen werden nun gefriergetrocknet und können durch Bedampfung mit Säure-dämpfon im Vakuums chemisch nach DBP Nr. 1090 821 aufgeschlossen werden.The cells obtained are now freeze-dried and can through Vaporization with acid-dämpfon in a vacuum chemically digested according to DBP No. 1090 821 will.
werden nun Kaninchen im Abstand von 8 Tagen, 3 x abwechselnd s.c., i.m. und i.p. aktiv immunisiert mit einer Suspension von lo Partikel pro ml Lösungsmittel.are now rabbits at an interval of 8 days, 3 times alternately s.c., in the. and i.p. actively immunized with a suspension of 10 particles per ml of solvent.
8 Tage nach der letzten Boosterung wird das Tier entblutet und der Agglutinationstiter des Serums gegenüber dem Antigen getestet, Es wird nun frisches Stiersperma von Beglcitselrreten aus prostata und den Sexualdrüsen befreit und mit dem Antikörperserum inkubiert. Nach eingetretener Agglutination werden die nicht agglutinierten Spermazellen isoliert durch Gradientenzentrifugation oder Zellelektrophorese.8 days after the last booster, the animal is bled and the The agglutination titer of the serum was tested against the antigen. It is now fresh Bull semen is freed from the prostate and the sex glands and with incubated with the antibody serum. After agglutination has occurred, they will not agglutinated sperm cells isolated by gradient centrifugation or cell electrophoresis.
Diese Prozedur wird 1 - 2 mal wiederholz um die mit Immunglobulin beladenen Spermien mit X-Chromosomen zu beseitigen. Die isolierten Spermien mit Y-Chromosomen werden nun in ähnlicher Weise wie die Einzellen auTgearbeitet und die daraus gewonnenen Zellkerne zur aktiven Immunisierung eines Kaninchens oder Hammels verwendet.This procedure is repeated 1 - 2 times around that with immunoglobulin eliminate sperm laden with X chromosomes. The isolated sperm with Y chromosomes are now worked out in a similar way to the single cells the cell nuclei obtained therefrom for the active immunization of a rabbit or Mutton used.
Auf diese Weise werden Immunglobuline gegen die Y-Chromosome gewonnen.In this way, immunoglobulins against the Y chromosomes are obtained.
Vor der künstlichen Besamung werden die Samenzellen zunächst aus der Spermaflüssigkeit isoliert und wieder holt gewaschen. Danach wird das Anti-Y-Serum zugesetzt und die nicht agglut-inierenden Zellen isoliert und wieder mit der Samenflüssigkeit aufgenommen. Diese Samen zellen enthalten das X-Chromosom und werden nun zur Be samung verwendet, um ein weibliches Tier als Nachkommen zu erhalten.Before artificial insemination, the sperm cells are first extracted from the Sperm fluid isolated and washed again. After that, the anti-Y serum added and the non-agglutinating cells isolated and again with the seminal fluid recorded. These sperm cells contain the X chromosome and are now used for Be samung used to obtain a female as offspring.
2. Gewinnung von aufgeschlossenen Totalextrakten aus Rindersperma mit Y-Chromosomen Hier agglutiniert man die gewaschenen Samenzellen des Rindes mit dem Antikörperserum, das nach Beispiel 1 gegen Y-Chromosome gewonnen wurde, Nach erfolgter Agglutination isoliert man nun die nicht egglutinierten Samenzellen. Diese enthalten das X-Chromesom. Damit kann ggfs. ein Antiserum gegen die gleiche Spezies gewonnen werden.2. Obtaining digested total extracts from bovine semen with Y-chromosomes Here the washed sperm cells of the bovine are agglutinated the antibody serum that was obtained against Y chromosomes according to Example 1, according to Once agglutination has taken place, the non-egglutinated sperm cells are now isolated. These contain the X chromesome. This can possibly. An antiserum against the same species be won.
Beispiele für die Herstellung der korpuskulären Zel'lhestandteile mit hochmolekularen Extrakten, bzw. daraus gewonnenen Abbauprodukte dürften sich erübrigen, weil die Herstellungsmethoden denen entsprechen, wie sie für die Herstellung von Gewebeextrakten und -Antigenen aus anderen Organen verwendet werden.Examples of the production of corpuscular cell components with high molecular weight extracts or degradation products obtained therefrom should be unnecessary because the production methods correspond to those of how they are used for the production of tissue extracts and antigens from other organs.
Patentansprüche: 1. Verfahren zur Herstellung sowie diagnostischen und therapeutischen Anwendung von Zellextraktion aus Samenzellen und Eizellen mit hapleidem Chromosomensatz, gekennzeichnet durch die Verwendung von korpulkulären und hochmolekularen Fraktionen (Nucleinsäuren, Proteinen, Proteiden, Lipiden und Dolysaccariden) sowie deren Abbauprodukten, die nach bekannten Verfahren der Gewebeestraktion und .ntigenisollerung gewonnen werden.Claims: 1. Method of manufacture as well as diagnostic and therapeutic application of cell extraction from sperm and egg cells with hapleidem set of chromosomes, characterized by the use of corpulular and high molecular weight fractions (nucleic acids, proteins, proteins, lipids and Dolysaccharides) as well as their degradation products, which are produced according to known methods of tissue traction and .ntigenisollerung can be obtained.
2. Verfahren nach Anspruch l, gekennzeichnet durch die Konjugation oder komibinierte Anwendung mit andersartigen Gewebeextrakten, zytotropen Schlepperstoffen, nativen und künstlichen Hormonen und bzw. oder Spurenelementen.2. The method according to claim l, characterized by the conjugation or combined use with other types of tissue extracts, cytotropic carrier substances, native and artificial hormones and / or trace elements.
3. Verfahren nach Anspruch 1, zur Isolierung von Spermien mit Y- bzw. mit X-Chromosomen, gekennzeichnet durch die Herstellung eines Antikörperserums mit Immunglobulinen gegen Zellkerne aus Ovarien oder Eizellen mit dem @-Chromosom als Antigen nach bekannten immunologischen Verfahren. Agglutination von Spermien mit diesem Serum und Trennung des agglutinierten vom nicht agglutinierten Sperma.3. The method according to claim 1, for the isolation of sperm with Y or with X chromosomes, characterized by the production of an antibody serum with Immunoglobulins against cell nuclei from ovaries or egg cells with the @ chromosome as Antigen according to known immunological methods. Sperm agglutination with this serum and separation of the agglutinated from the non-agglutinated sperm.
Claims (1)
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702032988 DE2032988A1 (en) | 1970-07-03 | 1970-07-03 | Ovular and seminal cell extracts - having a haploid chromosome set for therapeutic and diagnostic use |
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| DE19702032988 DE2032988A1 (en) | 1970-07-03 | 1970-07-03 | Ovular and seminal cell extracts - having a haploid chromosome set for therapeutic and diagnostic use |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2032988A1 true DE2032988A1 (en) | 1972-01-05 |
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|---|---|---|---|
| DE19702032988 Pending DE2032988A1 (en) | 1970-07-03 | 1970-07-03 | Ovular and seminal cell extracts - having a haploid chromosome set for therapeutic and diagnostic use |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE2032988A1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2476321A1 (en) * | 1980-02-15 | 1981-08-21 | Bryant Bernard | Mono-specific antibody against male cells - used to separate sperm into male and female fractions(SE 14.9.81) |
| FR2500305A1 (en) * | 1981-02-24 | 1982-08-27 | Mancori Alvaro | Sperm extract for therapeutic and cosmetic cell revitalisation - by centrifuging to open spermatozoa cells and recovery of supernatant liq. |
| WO1983000392A1 (en) * | 1981-07-25 | 1983-02-03 | Mettler, Lieselotte | Method allowing to assay for antibodies against the sperm by means of either enzymatic or radio-immunoassays |
| FR2594333A1 (en) * | 1986-02-18 | 1987-08-21 | Etu Physio Hygiene Cosmet Cent | New composition for cosmetic use, characterised by the constituents of snails' eggs |
-
1970
- 1970-07-03 DE DE19702032988 patent/DE2032988A1/en active Pending
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