DE2020789A1 - Verfahren zur chromatographischen Trennung von Substanzgemischen - Google Patents
Verfahren zur chromatographischen Trennung von SubstanzgemischenInfo
- Publication number
- DE2020789A1 DE2020789A1 DE19702020789 DE2020789A DE2020789A1 DE 2020789 A1 DE2020789 A1 DE 2020789A1 DE 19702020789 DE19702020789 DE 19702020789 DE 2020789 A DE2020789 A DE 2020789A DE 2020789 A1 DE2020789 A1 DE 2020789A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- molecular sieve
- column
- separation
- ion exchange
- sieve material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 9
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 54
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 31
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 18
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 12
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 12
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 claims description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 101000878595 Arabidopsis thaliana Squalene synthase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 16
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 11
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 10
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 10
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 5
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 4
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 3
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 108010038061 Chymotrypsinogen Proteins 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N chromate(2-) Chemical compound [O-][Cr]([O-])(=O)=O ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J39/00—Cation exchange; Use of material as cation exchangers; Treatment of material for improving the cation exchange properties
- B01J39/26—Cation exchangers for chromatographic processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
Patentanwälte Dipl.-Ing. F. weickmann,
D1PL.-IN0. H.Weickmann, D1PL.-PHYS. Di. K. FiNCKE
- HRK Dipl.-Ing. F. A.Weickmann, Dipl.-Chem. B. Huber
• MÜNCHEN 16, DEN
POSTFACH 160120
Boehringer Mannheim GmI)Hj Mannheim
Verfahren zur chromategraphischen Trennung
von Substa&jBgemisohen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren sar chromatographischen
Trennung von Su"batanagemieohen unter Verwendung von Molekularsiebmaterial
und gegebenenfalls Ionenaustauscbiaaterial.
Molekularsiebmaterialien trennen Substanzgemische unterschiedlichen Molekulargewichts. Die Rausanetastruktur dieser gelartigen Molekularsiebmaterialien besitzt Hohlräume, in welche
die Moleküle verschieden schnell hineindiffundieren können,
in Abhängigkeit von der Molekülgröße. Substanzen mit gro0em florekUlVdl'umen ttr*i'nge*n feidht'in ^ie ΤοτβΆ oin, während die
kleinen Moleküle in das GsI fcineindiffundieren und daher
einen längeren Meg zurücklegen als die großen« D#P Trermbereich
von MolekularsiebiAaterialisn v;ird durch den Vor-
209810/0881
«■ 2
netzungsgrad der; Gelmatrix festgelegt unä es kommt nur zu
einer Auftrennung von Substanzgemischen, wenn die Poren des
Gels ausreichend groi3 sind. Der Gelchromatographie sind daher
durch die Fraktipnierungsbereiehe der einzelnen Molekularsieb-.mafcerialien
enge Grenzen gesetzt. Ähnliche Grenzen liegen auch hinsichtlich der Säulendimensionen vor, da das sehr weiche
M'olekularsiebmaterial durch höheren hydrostatischen Druck, ,,,wie er bei Säulen größerer Dimension vorliegt, zusammengedrückt wird, so daß sowohl die uäulendmxSiläßigkeit als auch
die Trennwirkung negativ beeinflußt wird.
An Ionenaustauschern können Substanzen nur getrennt werden, wenn die Ladungen verschieden sind» Bei Substanzen gleioher
ladungsverteilung erfolgt daher durch IonenaustauscherrOhromatographie.
keine Auftrennung des Substanzgemisohes, auch
wenn unterschiedliche MoIe 1mlargewichte vorliegen. Eb mußte
daher bisher in solchen Fällen nach der lenenaus tausch er«-
Chropiatographie eine weitere Chromatographie in einer Molekularsiebkolonne
durchgeführt werden. Dies erforderte nicht*nur zusätzlichen Aufwand, sondern ergab durch di© Notwendigkeit
mindestens zweimaliger Elution auch eine unerwünschte Konzentrationsverringerung,
die durch Eindampfen und dergleichen
zusätzliche Arbeitsschritte wieder rückgängig gemacht v/erden mußtee
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, diese lachteile zu
beseitigen»
Das erfjbidungs gemäße Verfahren zur chromate graphischen Trennung
von Substaazgeraisehen unter Verwendung von Molekularsiebmaterial
und gegebenenfalls Ionenaaetaueohmaterial besteht
darin? daß mindestens swsi verschiedene.a. star ehromatographischen
Trennung durch Molekularsiebung uad gegebenenfalls
Ionenauatausch geeignete Materialien unraittelfoax3 hintereinander
geschaltet verwendet werden, wobei mindestens
209810/0681.
■20 2 O 789
einem Ionen- oder/und Kationenaustauschermaterial oder/und
Molekularsiebmaterial mindestens ein Molekularsiebmaterial
nachgeordnet wird und das Moiekularsiebmaterial mit stärkerer
Vernetzung vor dem Moiekularsiebmaterial mit geringerer Vernetzung angeordnet ist* '
Die beim erfindungsgemäßen Verfahren angewendeten verschiedenen Chromatographiematerialien sind in Fließrichtung des
Subsianzgeraisches so aufeinanderfolgend angeordnet, daß aus
einem vorgeschalteten Material axistretendes Eluat unmittelbar auf das nachgeschaltete Chromatographieiriaterial aufgegeben wird* Vorzugsweise erfolgt diese Anordnung der verschiedenen
Materialien in einer einsigen Säule, wobei die verschiedenen Materialien durch eingeseifte Siebe oder andere
poröse Materialien getrennt sind, Es ist jedooh auch möglich,
die verschiedenen Materialien in mehreren nacheinander geschal* tenen Säulen anzuordnen, wobei jedocli das Leervolumen zwischen
zwei Säulen so gering ..gehalten-werden muß, daß keine wesentliche
Konzentrationsverraindert^ eluierten Materials erfolgt.
Dies ist beispielsweise möglich durch Anordnung sehr enger Verbindungsleitungen mit einem Gesamtvolumen, das zweckmäßig
geringer ist als das innerhalb von 5 Min. vorzugsweise innerhalb von 1 Min» durch die ßäulo laufende FlUssigkeitsvolumen.
Die besten Ergebnisse werden jedoch bei völliger Ausschaltung «ines Leervolumens erhalten.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsge*·
mäßen Verfalirens werden in einer Säule ttoeireiftande* mehrere
Molekularsiebmaterialien unterschiedlichen Vernetzungsgrades
übereinandergesehiehtet, wobei die verschiedenen
Materialien nach abnehmendem Vernetzungagrad angeordnet werden, so daß die unterste Schicht in der Säule aus dem
Material mit dem niedrigsten Vernetsungsgrad besteht* Mit · ·
einem derartigen Vorgehen wird es möglich, in einem einzigen Arbeitsgang Substanzgemische au trennen, die bisher nur auf ^
umständliche Weise unter Verwendung laehrerer Säulen voneinander
getrennt werden konnten, wobei eine starke Ver-.
209810/0681
ORIGINAL INSPECTED
dünnung der Lttmingen der Gemische in Kauf genommen werden
mußte. VoTzugsvc-iae werden die e filz einen Schichten öo.r Säule
hierbei durch poröse Zwischenschichten, z„B, Siebe, voneinander
getrennt, welche auf solefio V/eise innerhalb der
Säule -ar/»*»pr<ini>t sind, daß sie das Gewicht der jeweils dar-
-GtälocMcht aufnehmen'♦ Besonders geeignet ist
die in der deutschen Patentanmeldung P 20 08 354.9 beschriebene Kombinationssäule.
Bei den Molekularsiebmaterialien handelt es sich um weiche gelartige Substanzen, vorwiegend auf Basis vernetzter
Dextrane, von denen bisher angenommen worden war, daß ihre Eigenschaften wesentlich vom darauf lastenden hydrostatischen
Druck beeinflußt v/erden. So wurde allgemein gelehrt, daß mit der Erhöhung des hydrostatischen Drucks die Durchflußgeschwindigkeit
erheblich einkt. Auch wurde angenommen, daß
bei Säulen, die langer als 1 m sind, erhebliche Schwierigkeiten auftreten. Bei besonders niedrig vernetzten Gelen,
z.B. SephRdex 6-200, wurde sogar vorgeschrieben, daß eine
Niveaudifferenz von 10 - 15 cm nicht überschritten werden darf. Überraschenderweise lassen sich bei Anwendung des
erfindungsgemäßen Verfahrens beliebig hohe hydrostatische Drucke aufrechterhalten, ohne daß die befürdhteten Schwierigkeiten
und die Verringerung der Durchflußgeschwindigkeit auftraten. So wurde gefunden, daß bei einem erfindungsgemäß
abgeordneten Gelbett von 100 cm Höhe, welches in fünf Schichten zu je 20 cn durch Siebe unterteilt war, bei einem Wasserdruck
von 130 cm nur eine unbedeutende Verringerung der
Durchflußgeschwindigkeit im Vergleich zu einem 20 cm hohen Gelbett bei gleichem hydrostatischem Druck auftrat, während
bei nicht unterteilter Anordnung einer 100 cm hohen Gelschicht und 130 cm Wassersäule die Durchflußgeschwindigkeit
bereits auf die Hälfte absank.
209810/0681
' Für das erfindungsgemäße Verfahren sind die bekannten Molekularsiebmaterialien
für die Gelchromatographie geeignet, /"bei denen es sich überwiegend um Dextrane handelt, die in
unterschiedlichem Ausmaß vernetzt sind. Als Vernetzungsmittel
wird hier beispielsweise EjichlorhydriK verweridet
(Sephadex)* Andere geeignete vernetzte Dextrt: ·.» sind z.B.
unter der Bezeichnung Sepharose und Agarose im Handel. Außer
Dextranen eignen sich beispielsweise auch vernetzte Polyacrylamide
und andere Substanzen auf Basis von langkettigen Molekülen,
die unter Bildung weicher poröser Gele miteinander vernetzt sind.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform des erf,indungsgemäßen
Verfahrens werden Kationen-oder/und Anionenaustauscher und
in
mindestens ein MolekularsiebmateriaVdieeer Reihenfolge unmittelbar
hintereinander angeordnet. Auoh für diese Aubführungsform
gilt das oben für die Anwendung verschiedener, ' nacheinander angeordneter. Molekularsiebmaterialien ausgeführte,
Vorzugsweise werden die verschiedenen Materialschichten in einer einzigen Säule übereinander angeordnet und lediglich
durch dünne poröse Trägerschichten voneinander getrennt, insbesondere durch Siebeinsätze· Als ganz besonders zweckmäßig
erwiesen sich hierbei Säulenaegmente, die sich mit Siebsegmenten kombinieren lassen, wie dies bei der obenerwähnten
Kombinationssäule der Pail ist.
Das die oberste Schicht darstellende Ionenaustauschmaterial
kann if ein Kationenaustauscher oder ein Anionenaustauscher sein·
Es ist auch möglich, sowohl ein Anionen- als auch ein Kationenaustauschermaterial
vorzusehen, wobei diese sowohl gemischt, als auch in Schichten getrennt angeordnet werden können»
* Schließlich*ist*eV auch* möglich,'verschiedene- Kationenbzw, Anionenauatauscheriaaterialien geschichtet anzuwenden,
wobei diese Materialien unterschiedliche Ionenstärke aufweisen.
2 0 9 8 10/0681
- β—
In Fließrichtung dem lonenaustauschniaterial näciigeschaltet .
wird ein Molekularsiebraaterial» Dieses Molakularaiebmaterial
kann aus einer einzigen Schicht "bestehen«, Es kann after auqh
aus mehreren Schichten unterschiedlichen Vernetzungsgrades "bestehen, die dann Ihrerseits, wie bereits angegeben, nach
fallendem Vernetzungsgrad angeordnet werden.
Bei dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens
ist es möglich, im Ionenaustauschmaterial Substanzen mit · unterschiedlicher lonenstärke zu trennen. Bei der Elution
werden dann die Substanzen gleicher lonenstärke, die im Ionenaustauschmaterial nicht aufgetrennt werden, im darauffolgenden
Molekularsiebmaterial ebenfalls aufgetrennt, so daß auch schwierige Trennungsprobleme nunmehr auf einfache Weise
in bisher nicht für möglich gehaltenem Ausmaß aufgetrennt werden können, ohne daß ein umfangreicher apparativer Arbeitsaufwand
erforderlich ist* '
Für die Elution werden beim erfindungsgemäßen Verfahren sowohl
Gradientenelution als auch stufenweise Elution eingesetzte
Diese Elutionsarten sind an sich bekannt.
Pur das erfindungsgemäße Verfahren wesentlich ist die angegebene
Reihenfolge der verschiedenen angewendeten Chromatographiematerialien,,
sowie die Ausschaltung von Zwischenvolumina zwischen den einzelnen Schichten Wenn τοη der angegebenen
Reihenfolge abgewichen wird oder zwischen den einzelnen Materialschichten wesentliche Iieervolumina vorhanden
sind9 lassen sieh die Vorteile der Erfindung nicht
mehr erzielen und die Trennungsergebnisse werden wesentlich
verschlechtert. Bei erfindungsgemäßer Arbeitsweise hingegen wird die Zahl der theoretischen Böden vergrößert,
die Säulendimension verkleinert 9 Verdünnung, vermieden und
zusätzliche.Rechromatographie umgangen„ Die bisher geltenden
Grenzen für die chromatographisclie Trennung von Substancemischen
werden daher durch die erfindungsgemäSe Arbeitsweise erheblich erweitert«
209810/0881
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung in Verbindung
mit der beigefügten Zeichnung,
Ein Substanztestgeinisch enthaltend je 20 mg Dextranblau,
Katalane, Hämoglobin, Chymotrypsinogen, Cytochrom C und
Phenylalanin in 1,2 ml 0,05 M Phosphat-Puffer pH 7,5 wurde
auf eine mit einem Molekularsiebmaterial auf Dextranbasis gefüllte Säule gegeben. Die Gelbettdimension betrug in
jedeia Fa1IIe 2 χ 150 cm. Folgende Versuche wurden durchgeführt:
1. Das Gelbett bestand aus einer einzigen Schicht (Sephadex
G-1QG), Die angewandte Gelbettlänge ist als maximal anzusehen
und kann praktisch nicht mehr gesteigert werden. Eine Trennung von Dextranblau und Katalase ließ sich trotz-»·
dem nicht erreichen, vie aus Figur 1 hervorgeht, in der die Substanzkonzentrationen gegen das eluierte Volumen
aufgetragen sind. Die Elution erfolgte mit 0,05 M Phosphat-Puffer pH 7,5.
2. Es wurde eine gleiche Säule verwendet, jedoch mit einem
Molekularsiebmaterial auf Dextranbasis von geringerem
Ve^netzungsgrad (Sephadex G-200). Hierbei konnte eine
Auftrennung von Dextranblau und Katalase erreicht werden,
,eine Auftrennung von Hämoglobin, Ghymotrypsinogen und
Oytochrom C war jedoch nicht befriedigend möglich (vergl.
Abb. 2).
3. Es wurde eine Säule verwendet, die oben eine 100 cm
Schicht von Sephadex höheren Vernetzungsgrades und anschließend eine 50 cm Schicht geringeren Vernetzungsgrades
(Sephadex G-100 bzw. G-200) enthielt. V/ie Abb.
zeigt, wird hierbei eine Trennung sämtlicher im Tectgemisch
vorhandener Substanzen erreicht. '"
209810/0681
Als Säule vnirde die in der deutschen Patentanmeldung
P 20 08 354« 9 "beschriebene Kombinationssäule mit eingeschraubtem
Sieb verwendet»
4. Es vnirde eine Säule wie unter 3 beschrieben, verwendet, ' wobei jedoch die Reihenfolge der beiden Molekularsiebmaterialien
umgekehrt "wurde. Wie Abb. 4 zeigt, tritt eine starke Verdünnung des aufgetragenen Probenvolumens auf
r> und die Trennung im niedermolekularen Substanzbereioh wird
wieder aufgehoben (Hämoglobin, Chymotrypsinogen, Cytochrom C
veraclimiert).
5. Es wurde eine Säule verwendet, in der übereinander 4 MoIekularsiebmaterialien
mit von oben nach unten abnehmendem Vemetzungsgrad angeordnet waren. Die Schichthöhen waren
wie folgt: 20 cm (Sephädex G-2.5-),
30 cm (Sephadex G-50),
50 cm (Sephadex G-100),
50 cm (Sephadex G-200).
50 cm (Sephadex G-100),
50 cm (Sephadex G-200).
Abb, 5 zeigt, daß eine sehr gute Trennung erhalten wird, so
daß im Bereich zwischen Cytochrom C und Phenylalanin noch 3-4 weitere Substanzen aufgetrennt werden könnten. Auch·
die Trennung von Katalase und Hämoglobin ist so gut, daß noch eine weitere Substanz dazwischen vorhanden sein könnte
bzw, ein Gelbett wesentlich kleineren Ausmaßes zur vollständigen Auftrennung der Substanzen ausreicht.
v· ·-■
209810/0681
Ein Substanztestgeinisch, enthaltend je 40 rag Katalase
Ovalbumin, gelöst in 0,2 M Tris-Puffer pH 7,6 wurde auf
eine Ionenaustauschersäule (2 χ 20 cm; DEAE-Sephadex H 25)
gegeben und mit einem Gradienten des gleichen Puffers eluiert. Eine Trennung der beiden Substanzen gelang hierbei
nicht, wie Abb. 6 zeigt.
Der "vorstehend beschriebene Versuch wurde wiederholt, {je·*·
doch wurde eine kombinierte Säule verwendet, bei der unmittelbar
auf den Ionenaustauscher folgend eine Molekularsiebmaterialschieht
(130 cm Sephadex G-200) angeordnet --wurde,
Ionenaustauschermaterial und Molekularsiebmaterial waren durch ein in der Säule angebrachtes und an der Säulenwand
befestigtes Sieb ohne Ieervolumen getrennt. Wie Abb. 7 zeigt,
konnte auf diese Weise eine vollständige Trennung der beiden
Substanzen erhalten werden.
,* Jt-
209810/0681
Claims (6)
1. Verfahren zur chromatographischen Trennung von Substanzgemischen
unter Verwendung iron Molekularsiebmaterial und
gegebenenfalls lonenaustauschmaterial, dadurch gekennzeichnet,
daß mindestens zwei verschiedene, "zur chroraatographischen
Trennung durch Molekularsiebung und gegebenenfalls Ionenaustausch geeignete Materialien unmittelbar hintereinander
geschaltet, verwendet werden, wobei mindestens einem Anionen- oder/und Kationenaustauschermaterial oder/und
Molekularsiebraaterial mindestens ein Holekularsiebiaaterial
nachgeordnet v/ird und das stärker vernetzte dem weniger
stark vernetzten Molekularsiebaaterial vorgeschaltet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß in
einer Säule das Molekularsieibiaaterial mit dem lonenaustauschmaterial
überschichtet ferwendet wird.
3· Verfahren nach Anspruch 1 oder 2f dadurch gekennzeichnet,
daß.mehrere Molekularsiebmaterialien init unterschiedlichem
Vernetzungsgrad verwendet werden.
4. Verfahren nach Anspruch 2 oäer 3f dadurch gekennzeichnet,
daß die einzelnen Schichten in der Säule durch dünne poröse Schichten getrennt werden.
5. Verfahren naeh Anspruch 4S iafinrch gekennzeichnet, daß als
poröse Schicht ein mit der Säoleavand verbundenes Sieb verwendet
wird«
6. Verfahren naeh einem der■ voz&ergehendeii Ansprüche, dadurch
gekennzeichnet, daß die einzelnem Hatsrialschichten im
wesentlichen; ohne Iieervoltuiea fm@iaa&dergrenze&d angeordnet
werden. ' ' - ' ·-"."■
Z 0 S S 1 Q / % 81 1 - ORlQlMAi INSPECTED
- 11 -
7* Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß Kationen- und AnioxienaußtauBCher gemein-.\
sam verv/endet werden. ;
209810/0681
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702020789 DE2020789B2 (de) | 1970-04-28 | 1970-04-28 | Verfahren zur chromatographischen trennung von substanzgemischen |
| AT163371A AT321246B (de) | 1970-04-28 | 1971-02-25 | Verfahren zur säulenchromatographischen Trennung von Substanzgemischen |
| US00134256A US3787317A (en) | 1970-04-28 | 1971-04-15 | Process for the chromatographic separation of mixtures |
| CH588871A CH556188A (de) | 1970-04-28 | 1971-04-22 | Verfahren zur chromatographischen trennung von substanzgemischen. |
| NL7105603A NL7105603A (de) | 1970-04-28 | 1971-04-26 | |
| GB1159171*[A GB1340567A (en) | 1970-04-28 | 1971-04-27 | Process for the chromatographic separation of mixtures |
| CA111,536A CA969483A (en) | 1970-04-28 | 1971-04-27 | Process for the chromatographic separation of mixtures |
| FR717115249A FR2086432B1 (de) | 1970-04-28 | 1971-04-28 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19702020789 DE2020789B2 (de) | 1970-04-28 | 1970-04-28 | Verfahren zur chromatographischen trennung von substanzgemischen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2020789A1 true DE2020789A1 (de) | 1972-03-02 |
| DE2020789B2 DE2020789B2 (de) | 1972-09-14 |
Family
ID=5769658
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19702020789 Pending DE2020789B2 (de) | 1970-04-28 | 1970-04-28 | Verfahren zur chromatographischen trennung von substanzgemischen |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3787317A (de) |
| AT (1) | AT321246B (de) |
| CA (1) | CA969483A (de) |
| CH (1) | CH556188A (de) |
| DE (1) | DE2020789B2 (de) |
| FR (1) | FR2086432B1 (de) |
| GB (1) | GB1340567A (de) |
| NL (1) | NL7105603A (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7022144B2 (en) | 2002-12-09 | 2006-04-04 | L'oreal | Oxidizing compositions containing a mixture of polymers including at least one copolymer based on acrylamide and 2-acrylamido-2-methylpropanesulphonic acid |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE413986B (sv) * | 1973-03-23 | 1980-07-07 | Exploaterings Ab Tbf | Sett att separera amfipatiska emnen innehallande bade hydrofila och hydrofoba grupper samt gelprodukt for genomforande av separationen |
| US4740306A (en) * | 1986-03-17 | 1988-04-26 | Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Chromatographic column |
| US5223435A (en) * | 1986-06-06 | 1993-06-29 | Genetech, Inc. | Amino acid sequence determination with mobile peptide |
| US5039488A (en) * | 1986-06-06 | 1991-08-13 | Genentech, Inc. | Devices for amino acid sequence determination |
| US4910336A (en) * | 1988-11-25 | 1990-03-20 | Uop | Process for separating phenylalanine from salts |
| US5071560A (en) * | 1989-07-17 | 1991-12-10 | Uop | Process for purifying phenylalanine |
| TW407137B (en) * | 1996-10-21 | 2000-10-01 | Food Industry Res & Dev Inst | Process for separating organogermanium compounds and inorganogermanium compounds from a germanium-containing pharmaceutical plant or its processed products |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2911362A (en) * | 1952-11-24 | 1959-11-03 | Dow Chemical Co | Separation of water-soluble organic compounds |
| US3069897A (en) * | 1959-02-19 | 1962-12-25 | Phillips Petroleum Co | Chromatographic analysis |
| US3263488A (en) * | 1963-03-04 | 1966-08-02 | Hewlett Packard Co | Method for gas chromatography |
| US3502545A (en) * | 1968-09-27 | 1970-03-24 | Monsanto Co | Process for the separation of water-soluble polymeric materials from unbound protein or peptide using semiporous gel |
| US3536614A (en) * | 1969-06-09 | 1970-10-27 | Nalco Chemical Co | Method of gel chromatography |
-
1970
- 1970-04-28 DE DE19702020789 patent/DE2020789B2/de active Pending
-
1971
- 1971-02-25 AT AT163371A patent/AT321246B/de not_active IP Right Cessation
- 1971-04-15 US US00134256A patent/US3787317A/en not_active Expired - Lifetime
- 1971-04-22 CH CH588871A patent/CH556188A/de not_active IP Right Cessation
- 1971-04-26 NL NL7105603A patent/NL7105603A/xx unknown
- 1971-04-27 CA CA111,536A patent/CA969483A/en not_active Expired
- 1971-04-27 GB GB1159171*[A patent/GB1340567A/en not_active Expired
- 1971-04-28 FR FR717115249A patent/FR2086432B1/fr not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7022144B2 (en) | 2002-12-09 | 2006-04-04 | L'oreal | Oxidizing compositions containing a mixture of polymers including at least one copolymer based on acrylamide and 2-acrylamido-2-methylpropanesulphonic acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2020789B2 (de) | 1972-09-14 |
| FR2086432B1 (de) | 1973-06-08 |
| CA969483A (en) | 1975-06-17 |
| NL7105603A (de) | 1971-11-01 |
| FR2086432A1 (de) | 1971-12-31 |
| US3787317A (en) | 1974-01-22 |
| AT321246B (de) | 1975-03-25 |
| GB1340567A (en) | 1973-12-12 |
| CH556188A (de) | 1974-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2705734C3 (de) | Dialysemembran für die Hämodialyse | |
| DE2449749A1 (de) | Verfahren zur entgiftung von saponinen | |
| DE2020789A1 (de) | Verfahren zur chromatographischen Trennung von Substanzgemischen | |
| DE3506162A1 (de) | Verfahren zur herstellung von kaliumsulfaten und von gekoernten magnesium-kaliumsulfaten, sowie so hergestellte granulate | |
| DE2924744A1 (de) | Verfahren zur reindarstellung von urokinase | |
| Kühn | The regionalisation of cities: An analysis of city/hinterland discourses in spatial research and planning | |
| DE2448371C2 (de) | Verfahren zur Isolierung der Transferrine aus biologischem Material | |
| Meyer | Zur Theorie der wirtschaftlichen Integration | |
| DE3029877C1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines OElaufsaugmittels | |
| Sato et al. | Über die Atmungsfarbstoffe von Paramecium | |
| DE1494772A1 (de) | Behaelterfuellmasse mit verbesserter Festigkeit und Gleichmaessigkeit | |
| DE2323955A1 (de) | Verfahren zur reinigung von karzinoembryonischem antigen | |
| Schmitt | Zum Agrarbericht 1989 der Bundesregierung | |
| Rademacher | Subjektive Bewertung der Schalldämmung, untersucht an elektrisch nachgebildeten Schalldämmkurven | |
| Caspary | Zusammenhang zwischen der Verschärfung des Hochwasserrisikos in Südwestdeutschland seit Mitte der siebziger Jahre und einem veränderten Winterklima | |
| DE934578C (de) | Verfahren zur Herstellung von Zonenfilterrohr mit mehreren Filterzonen unterschiedlicher spezifischer Leistung | |
| Günzel | Computerspiele im Kunstunterricht | |
| AT140573B (de) | Verfahren zur Herstellung eines hydraulisch wirkenden Bindemittels in Pulverform (Mörtelbasis). | |
| Kleinschmidt | Strategische Außenwirtschaftsbeziehungen. Die Bundesrepublik, die Türkei und der Kalte Krieg 1945–1970 | |
| DE1523037A1 (de) | Gradient-Formkoerper,insbesondere zur Anwendung bei der Chromatographie | |
| AT253467B (de) | Verfahren zur Herstellung von Dispersionen | |
| DE2225452B2 (de) | Verfahren zur herstellung von weitporigem adsorptionsmittel fuer chromatographiezwecke | |
| Haacke | Meinungsvielfalt in der Bundesrepublik | |
| Preetz et al. | Darstellung, 11B-NMR-und Schwingungsspektren isomerenreiner Halogenohydrodecaborate XnB10H10-n2-; X= Cl, Br, I; n= 1, 2/Preparation, 11B NMR and Vibrational Spectra of Pure Isomeric Halohydrodecaborates XnB10H10-n2-; X= Cl, Br, I; n= 1, 2 | |
| Tatur | Sozialbewegung und institutioneller Wandel in Polen und Rußland |