DE1953338C3

DE1953338C3 - Acylderivate des Antibiotikums T-2636C und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese enthaltende pharmazeutische Mittel

Info

Publication number: DE1953338C3
Application number: DE19691953338
Authority: DE
Inventors: Toyokazu Nara; Higashide Eiji Hyogo; Harada Setsuo; Shibata Motoo; Mizuno Komei; Osaka Kishi (Japan)
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1968-10-26
Filing date: 1969-10-23
Publication date: 1976-05-06

Description

HO

NHCOCOCH₃

in der die Wasserstoffatome der Hydroxylgruppe in 8- und/oder 14-SteJlung durch Acylgruppen der allgemeinen Formel R—CO— substituiert R im Fall der Substitution in der 14-Steilung einen Alkylrest mit 2 bis 4 Kohlenstoffatomen, im Fall der Substitution in der 8-Stellung einen Alkylrest mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen und den m-Bromphenylrest darstellt, oder in beiden Fällen, den Trifluormethylrest, Crotoylrest, Phenylrest, Phenyläthylrest oder Nicotinylrest darstellt oder wobei im Fall der Substitution in 8- und 14-Stellung die beiden Wasserstoffatome durch je eine Acetylgruppe, Propionylgruppe, Crotonylgruppe oder Succinoylgruppe substituiert sind, und ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese enthaltende pharmazeutische Mittel.

Die erfindungsgemäßen Acylderivate des Antibiotikums T-2636C der oben angegebenen Formel werden dadurch hergestellt, daß man in an sich bekannter Weise das Antibiotikum T-2636C mit einem Acylierungsmittel, das die obengenannten Acylgruppen enthält, in äquimolaren Mengen umsetzt und aus dem Reaktionsgemisch die gebildeten Acylderivate in

sind, wobei R im Fall der Substitution in der 14- 20 üblicher Weise voneinander abtrennt bzw. daß man Stellung einen Alkylrest mit 2 bis 4 Kohlenstoff- stufenweise acyliert oder daß man gegebenenfalls eine

entsprechende 8,14-Diacyl verbindung in üblicher Weise durch partielle Hydrolyse in die Monoacylver-

atomen, im Fall der Substitution in der 8-Stellung einen Alkylrest mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen oder den m-Bromphenylre>t darstellt, oder in

beiden Fällen den Trifluormethylrest, Crotoylrest, 25 Das als Ausgangsmaterial verwendete Antibiotikum

Phenylrest, Phenyläthylresi oder Nicotinylrest T-2636C wird durch Kultivierung des Stammes

bindung überführt.

darstellt oder wobei im Fall der Substitution in 8- und 14-Stellung die beiden Wasserstoffatome durch je eine Acetylgruppe, Propionylgruppe, Crotonoylgruppe oder Succinoylgruppe substituiert sind.

2. Verfahren zur Herstellung von Acylderivaten des Antibiotikums T-2636 C nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich be-Streptomyces rochei var volubilis erhalten und kann in guter Ausbeute aus der Kulturbrühe isoliert werden.

Als Acylierungsmittel eignen sich die betreffenden Säuren selbst, jedoch können auch entsprechende Säurehalogenide und Säureanhydride verwendet werden. Zweckmäßigerweise wird die Reaktion in Gegenwart eines inerten organischen Lösungsmittels durch-

kannter Weise das Antibiotikum T-2636 C mit 35 geführt. Geeignet als Lösungsmittel sind beispielseinem Acylierungsmittel, das die in Anspruch 1 weise Pyridin, Tetrahydrofuran, Aceton und Äther genannten Acylgruppen enthält, in äquimolaren sowie Gemische dieser Lösungsmittel.
Mengen umsetzt und aus df:m Reaktionsgemisch Die Acylierung kann durch direkte Kondensation

die gebildeten Acylderivate in üblicher Weise von- mit dem betreffenden Acylierungsmittel in Gegenwart einander abtrennt bzw. daß man stufenweise acy- 40 oder Abwesenheit eines Kondensationsmittels wie liert oder daß man gegebenenfalls eine ent- Trifluoressigsäureanhydrid vorgenommen werden. Die sprechende 8,14-Diacylverbindung in üblicher Reaktion wird gewöhnlich bei Raumtemperatur Weise durch partielle Hydrolyse in die Mono- durchgeführt, sie verläuft jedoch auch bei etwa 0° C acylverbindung überführt. oder erhöhten Temperaturen. Die Reaktionsdauer be-

3. Pharmazeutische Mittel, gekennzeichnet 45 trägt 1 bis 50 Stunden,
durch einen Gehalt an Acylverbindungen nach Die C-8- oder C-14-Derivate können auch herge-

Anspruch 1 neben üblicher; inerten Hilfs- oder Trägerstoffen.

Die Erfindung betrifft Acylderivate des Antibiotikums T-2636 C der allgemeinen Formel

OH

οΊ·- ^{( Hj}

O-f \> "NHCOCOCH₃

in der die Wasserstoffatome cer Hydoxylgruppe in 8- und/oder 14-Stellung durch Acylgruppen der alleemeinen Formel R—CO— substituiert sind, wobei

stellt werden, indem zuerst die C-8,14-Diacylderivate gebildet werden und diese dann der Teilhydrolyse unterworfen werden.

Die C-8,14-Diacylderivate werden gebildet, indem man die Acylierung auf einmal oder stufenweise vornimmt, wobei die beiden Acylreste gleich oder verschieden sein können. Die Teilhydrolyse der Diacylderivate kann auf verschiedene Weise erfolgen. Beispielsweise behandelt man eine Lösung des Diacylderivats mit einer Säure oder mit einem Alkali oder mit einem Adsorptionsmittel, wie z. B. Kieselgel und Aluminiumoxyd. An einem Adsorptionsmittel findet die Hydrolyse unter Ausnutzung der Luftfeuchtigkeit oder einer geringen Wassermenge, die im Lösungsmittel oder im Adsorbens enthalten ist, statt Diese Reaktion kann bei Raumtemperatur oder bei niedrigeren oder erhöhten Temperaturen bei einer Dauer von einigen Minuten bis zu einigen Tagen durchgeführt werden.

Ferner kann man eine Lösung des entsprechenden D-Diacylderivats in einem inerten wasserlöslichen organischen Lösungsmittel mit dem rohen Enzym-

präparat, das aus dem Mycel oder Kulturflltrat des das Antibiotikum T-2636 C bildenden Stammes erhalten worden ist, der Kultur dieses Stammes oder Jg₁. restlichen Brühe nach der Extraktion von \-"i 63 6 C aus der Kulturbrühe behandeln und das Gemisch einige Zeit stehen lassen.

Als T-2636 C bildender Stamm ist Streptomyces rochei var volubilis geeignet, von dem eine Kultur bei der American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, unter der Nr. ATCC-21 250 hinterlegt worden ist

Wird ein erhaltenes C-8- oder C-14-Acylderivat mit einem anderen entsprechenden Acylierungsmittel behandelt, so werden die entsprechenden C-Diacylderivate mit zwei verschiedenen Acylresten erhalten. Die gebildeten C-Acylderivate können durch Konzentrierung des Reaktionsgemisches oder durch Zusatz von Wasser ausgefällt werden.

Bei der Acylierung wird im allgemeinen ein Gemisch aus dem entsprechenden C-14-Acylderivat, C-8-Acylderivat und dem C-8,14-Diacylderivat erhalten.

Die Isolierung der verschiedenen Komponenten kann in der Weise erfolgen, daß man zunächst das Gemisch ausfällt und dann das ausgefallene Produkt Chromatographien oder nach anderen üblichen Verfahren trennt.

ίο Die Stellung der Acylgruppe bei den einzelnen erhaltenen Acylderivaten kann durch ihre charakteristischen Absorptionsbanden im Hydroxylbereich des Infrarotspektrums sowie durch die Verschiebung der Methinprotonen, an die die acylierten Hydroxylgruppen gebunden sind, im kernmagnetischen Resonanzspektrum (100 MHz in CDCl₃) festgestellt werden, wie die folgende Tabelle zeigt.

IR

NMR

(ppm)

I) C-8, 14-Diacylderivate

II) C-14-Acylderivate

III) C-8-Acylderivate

3400 bis 3600 cm-1 (vOH)

3450 bis 3480 cm-· (vOH)

4,34-*	etwa	5,3
4,05 ->	etwa	5,1
4,34-^	etwa	5,3
4,05->	etwa	5,1

Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Acylderivate des Antibiotikums T-2636 C verbesserte biologische Wirkungen und therapeutische Wirkungen besitzen. Sie hemmen das Wachstum von grampositiven Bakterien sowohl in vitro als auch in vivo und sind wirksam gegen Stämme, die gegen Oleandomycin und Erythromycin resistent sind. Sie können zur Behandlung verschiedener Infektionen durch grampositive Bakterien verwendet werden.

Ihre Wirkung wurde in Vergleichsversuchen gegenüber dem aus der FR-PS 15 19 527 bekannten Spiramycinmonoacetat geprüft.

Die Aktivität der zu prüfenden Verbindungen wurde in vivo an der Maus (Stamm CFI/H) bestimmt, die mit Staphylococcus Aureus 308 A-I infiziert worden ist. Unmittelbar nach der Infektion wurden die Testsubstanzen in O,2°/oiger wäßriger Lösung von Carboxymethylcellulose den Testtieren oral verabfolgt, und die ED₅₀ werden aus der Überlebensrate der Mäuse nach 7 Tagen nach der Methode von L. J. Reed und H. Muench (Am. J. Hyg. 27, 493 [1938]) bestimmt. Die LD₅₀ wird aus der Sterblichkeit der Mäuse 7 Tage nach intreperitonaler Verabfolgung nach der Methode von L i t c h f i e 1 d und Wilcoxon (J. Pharm., 96, 99 [1949]) bestimmt.

Das Verhältnis von LD₅₀/ED₅₀ gibt den therapeutischen Index an.

Außerdem wurde die Mindesthemmkonzentration (MIC) gegenüber Staphylococcus Aureus 209 P für drei Verbindungen geprüft und nach der Methode, die in »Microbiology«, 2. Ausgabe, S. 350 (1965), McGraw-Hill Book Verlag, beschrieben ist, berechnet.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt. Der Einfachheit halber wird das Antibiotikum T-2636 C als »C« bezeichnet, so daß die erfindungsgemäßen Verbindungen im folgenden dementsprechend benannt werden.

Geprüfte Verbindung

EDso (mg/kg)

Staphylococcus

Aureus

LDso (g/kg)
Ci. p. Maus

LD50
EDso

MIC ^g/ml)
Staphylococcus
Aureus 209 P

Spiramycinmonoacetat (bekannt

aus der FR-PS 15 19 527) 37,7

C-8-Acetat 32
C-8-Trifiuoracetat 90

C-8-Propionat 30

C-8-Butyrat 60

C-8-Valerat 26

C-8-Crotonat 50

C-8-Benzoat 100

C-8-m-(Brom)-benzoat —■

C-8-Nicotinat —

0,6

5 bis 10
>5
>10
>5
>5
>5
>5
>5
>5

156 bis 312

>55

>330

192

100

2 bis 5

0,5
0,5

Fortsetzung der Tabelle

Geprüfte Verbindung

C-S -Phenylpropionat

C-14-Propionat

C-14-Butyrat

C-14-Valerat

C-14-Crotonat

C-14-Beitfoat

C-14-Nicotinat

C-14-Phenylpropionat

C-8,14-Diacetat

C-8, 14-Dipropionat

C-8,14-Diciotonat

C-8,14-Disuccinat

ED₅₀ (mg/kg)

Staphylococcus

Aureus

LD₅₀ (g/kg)
Ci. P. Maus

LD₅₀
ED₅₀

MIC (ug/ml)
Staphylococcus
Aureus 209 P

120

39

20

70

50

120

130

100

120

Die erhaltenen Ergebnisse zeigen, daß die geprüften erfindungsgemäßen Verbindungen eine ganz wesentlich geringere Toxizität aufweisen. Ihr therapeutischer Index ist bedeutend günstiger als bei dem bekannten Antibiotikum, so daß sie letzterem überlegen sind.

In den folgenden Beispielen verhalten sich Gewichtsteile zu Raumteilen wie Gramm zu Kubikzentimeter.

B ei spiel 1

C-8,14-Diacetat, C-14-Acetat und C-8-Acetat

einer Lösung von 0,92 Gcwichtsteilen in 10 Raumteilen Pyridin werden 0,22

A) Zu
T-2636C

Raumtei'e Essigsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 7 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und dann in Eiswasser gegossen. Die gebildete Flüssigkeit wird abfiltriert. Hierbei wird 1 Gewichtsteil eines Rohproduktes erhalten, das anschließend der Säulenchromatographie an 30 Gewichtsteilen Kieselgel (0,05 bis 0,20 mm, Merck) unter Verwendung von Benzol-Äthylacetat (2:1) als Lösungsmittel in vier Komponenten zerlegt wird.

Das Dünnschichtchromatogramm des Rohprodukts unter Verwendung von Benzol-Äthylacetat (2:1) als Lösungsmittel an Kieselgel des obengenannten Typs zeigt vier Komponenten mit den Rf-Werten von 0,53, 0,29, 0,15 bzw. 0,05. Diese Werte entsprechen dem C-8,14-Diacetat, C-14-Acetat, C-8-Acetat und dem T-2636 C.

Die entsprechenden Banden der Dünnschichtchromatographie werden abgekratzt und mit Äthylacetat extrahiert. Das Äthylacetat wird mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck eingeengt. C-8,14-Diacetat, C-14-Acetat und C-8-Acetat werden kristallisiert aus einem Gemisch aus Äther und Hexan, Äther und einem Gemisch aus Äther und C-8.14-Diacetat. C-14-Acetat und C-8-Acetat werden Allylacetat. Hierbei werden 0,175 Gewichtstei!" C-SJ4-Diacetat, 0,097 Gewichtsteile C-14-Acetal und 0.087 Gewichtstcile C-8-Acctat erhalten.

B) In einem Gemisch von 0,5 Raumteilen Pyridin und 2 Raumteiler! Tetrahydrofuran werden 0.2? Gewichtstcile C gelöst. Zur Lösung wird eine Lösung von 0,25 Raumteilen Acetylchlorid in 4 Raumteilcn Tetrahydrofuran bei 0° C unter Rühren gegeben. Das Gemisch wird dann 1 Stunde sich selbst überlassen.

>10

2,5 bis 5,0

42
256
250

71
100

21 bis 42

Hierauf wird das erhaltene Reaktionsprodukt der Dünnschichtchromatographie unterworfen und der Kristallisation überlassen, wie unter A) beschrieben. Es werden 0,032 Gewichtsteile C-14-Acetat (Schmelzpunkt "Ό7 bis 21O⁰C) und 0,034 Gewichtsteile C-14-Acetat (Schmelzpunkt 207 bis 210° C) und 0,034 Gewichtsteile C-8-Acetat (Schmelzpunkt 201 bis 202° C) erhalten.

C) In einem Gemisch von 0,2 Raumteilen Pyridin und 0.8 Raumteilen Tetrahydrofuran werden 0,23 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0.03 Raumteile Essigsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird dann 5 Stunden bei Raumtemperatur sich selbst überlassen und anschließend wie unter B) beschrieben aufgearbeitet. Man erhält C-14-Acetat und C-8-Acetat in der gleichen Menge und den gleichen Schmelzpunkten wie unter B).

Gewichtsanalyse in °/o
für C₂₇H₃₅NO₉

Berechnet
Gefunden
C-14-Acetat
C-8-Acetat

64,65 7,03

64,61
64,62

7,00
7,31

2,75
2,83

C-14-Acetat

C-8-Acctat

UV-Absorptionsspektrum

-235°
(C= 1,0,
C₂H₅OH)

, C.H..OH ,,₇
Λ max = /2 / μ

(£1* = 1050)

-218°
(C = 0,5,
C₂H-OH)

Α^ΟΗ = 226πιμ (£!1 = 1010)

Beispiel 2

C-14-Acetat, C-8-Acetat und C-8,14-Diacctat
In 50 Raumteilen Tetrahydrofuran werden 0,23 Gewichtstcile C gelöst. Zur Lösung werden 0,1 Raumteil Essigsäure und 0 1 Raumteil Trifluoressigsäurcanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 3 Stunden am Rückfluß erhitzt und dann unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wird in Wasser gegossen und zweimal mit je 50 Raumteilen Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird dann mit 15 Raumteilcn Wasser gut gewaschen, getrocknet und hierauf untei vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wird der Dünnscliichtchromatotiraphie (Benzol-Hexan [2:1], Silicagci HF 254 von Merck & Co.) unter-

worfen und auf die gleiche Weise wie im Beispiel 1 A zur Kristallisation gebracht, wobei 0,045 Gewichtsteile C-14-Acetat, 0,07 Gewichtsteile C-8-Acetat und 0,02 Gewichtsteile C-8,14-Diacetat in kristalliner Form erhalten werden. Die physikalischen Daten für das C-8-Acetat und das C-14-Acetat entsprechen denen des Beispiels 1, die physikalischen Daten für das C-8,14-Diacetat denen von Beispiel 1 A und 9.

Beispiel 3 ">

C- 8,14-D ipropionat, C-14-Propionat
und C-8-Propionat

Zu einer Lösung von 0,92 Gewichtsteilen C in 10 Raumteilen Pyridin werden 0,25 Raumteile Propionsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 7 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und dann auf die im Beispiel 1 A beschriebene Weise behandelt. Es werden 0,138 Gewichtsteile C-8,14-Dipropionat (physikalische Daten s. Beispiel 11), 0,138 Gewichtsteile C-14-Propionat (Schmelzpunkt 197° C) und 0,131 Gewichtsteile C-8-Propionat (Schmelzpunkt 203 bis 204° C) als farblose Kristalle erhalten.

Beispiel 5
C-8-(m-Brom)-benzoat

In 1 Raumteil Pyridin werden 0,09 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,11 Raumteiie m-Brombenzoylchlorid gegeben. Das erhaltene Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wird dann in Eiswasser gegossen und die Fällung abfiltriert. Die Fällung wird der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel HF 254 unterworfen (Lösungsmittelsystem: Benzol-Äthylacetat [2:1]). Die gewünschten Banden der Dünnschichtchromatographieplatten werden abgekratzt und mit Äthylacetat extrahiert. Das Äthylacetat wird mit Wasser gewaschen und eingeengt. Die gewünschte Verbindung wird durch Zugabe von η-Hexan zum Konzentrat ausgefällt und abfiltriert. Hierbei werden 0,028 Gewichtsteile C-8-(m-Brom)-benzoat als maßgebliches Pulver erhalten.

Gewichtsanalyse in °/o
für Cs₂H₃₀NOsBr

Berechnet
Gefunden

59,82
60,10

5,65
5,85

2,18
2,02

Gewichtsanalyse in ⁰Zo
für 0.,,Ha₇NO₈

Berechnet
Gefunden
C-14-Propionat
C-8-Propionat

65,23 7,23 2,72

-66,3° (C = 0,32,C₂H₅OH)

= 1020)

65,00 7,27
64,77 7,26

2,76
2,77

Beispiel 6

C-14-Propionat

C-8-Propionat

-222° -206°

(C = 0,5, C₂H₅OH) (C = 0,5, EtOH)

/2Ρ^Η = 227π,μ

(£ir„ = 1040)

35

(£1* = 1110)

B eispi el 4

C-8,14-Dicrotonat, C-14-Crotonat
und C-8-Crotonat

In 10 Raumteilen Pyridin werden 0,92 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,33 Raumteile ^₅ Crotonsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 17 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und dann auf die im Beispiel 1 A beschriebene Weise behandelt. Hierbei werden in Form von farblosen Kristallen 0,073 Gewichtsteile C-8,14-Dicrotonat (physi- _CQ kaiische Daten s. Beispiel 12), 0,124 Gewichtsteile " C-14-Crotonat (Schmelzpunkt 196° C) und 0,075 Gewichtsteile C-8-Crotonat (Schmelzpunkt 198 bis 200° C) erhalten.

C-8-Benzoat und C-14-Benzoat

In 10 Raumteilen Pyridin werden 0,92 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,542 Gewichtsteile Benzoesäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, worauf das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen wird. Der hierbei ausgefallene Niederschlag wird abgetrennt und mit 300 Raumteilen Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird dann nacheinander mit verdünnter Salzsäure, verdünnter Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen, hierauf mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, eingeengt und dei Dünnschichtchromatographie an Kieselgel (HF 254' unterworfen (Lösungsmittelsystem zu Benzol-Äthylacetat 2:1). Die gewünschten Banden werden von den Dünnschichtchromatographieplatten abgekratzi und mit Äthylacetat extrahiert. Das Äthylacetat wird mit Wasser gewaschen und eingeengt. C-14-Benzoa' und C-18-Benzoat werden aus Äther und einem Gemisch aus Äther und Äthylacetat kristallisiert. Hierbei werden 0,079 Gewichtsteile C-14-Benzoa (Schmelzpunkt 186 bis 188° C) und 0,052 Gewichts teile C-8-Benzoat (Schmelzpunkt 203 bis 206μ C) er halten.

Gewichtsanalyse in ⁰Zo	C	H N	JJ Gewichtsanalyse in ⁰Zo	C	ηΐμ	H N
für Ca₉H₃₇NO₉			für Cs₂H₃₇NO₈
Berechnet	66,02	7,07 2,65	Berechnet	68		,19 6,62 2,49
Gefunden			Gefunden
C-14-Crotonat	65,77	7,30 2,69	6o C-8-Benzoat	67	,85 6,63 2,58
C-8-Crotonat	66,16	6,40 2,63	C-14-Benzoat	67	,92 6,51 2,60
C-14-Crotonat	C-8-Crotonat	C-8-Benzoat		C-14-Benzoat
Wd -167°	_·	Wo -99,5°		-90,2°
(C = 0,5, EtOH)	(C	⁶5 (C = 0,5 Äthanol)	(C = 0,5 Äthanol)
UV λ „„χ = 226 Πψ	λ%	uv ;.Si"^jOH = 23o	T Ol H Oll AAM £ >· max = 227,5 ΐημ
(EtL = 1110)	(£\|	(EJL = 970)	(EIL = 933)
			609 619/11
160°
= 0,5, C₂H₃OH)
Ή₅οΗ _{= 226ΐημ}
[L = iioo)

Beispiel 7

Gewichtsanalyse in °/o
f CN

C-8-Phenylpropionat und C-14-Phenylpropionat

In 10 Raumteilen Pyridin werden 0,92 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,5 Raumteile Phenylpropionylchlorid gegeben. Das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, worauf das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen wird. Der dabei ausgefallene Niederschlag wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und der Säulenchromatographie an 30 Gewichtsteilen Silicagel (0,05 bis 0,2 mm, Hersteller Merck & Co.) unter Verwendung von Beiizol-Äthylacetat (2:1) unterworfen, wobei zwei Fraktionen erhalten werden, die C-14-Phenylpropionat und C-8-Phenylpropionat enthalten. Die Fraktionen werden eingeengt und der weiteren Reinigung mittels Dünnschichtchromatographie (Silicagel, Benzol-Äthylacetat [2:1]) in einer Weise ähnlich der von Beispiel 1A unterworfen. Hierbei werden 0,085 Gewichtsteile C-14-Phenylpropionat und 0,097 Gewichtsteile C-8-Phenylpropionat erhalten.

Ge- C-14-Phenylpropionat C-8-Phenylpropionat

wichts-

analyse

in °/o für

C₃₁H₄₁NO₈

CHM CHN

Be- 69,01 6,98 2,37 69,01 6,98 2,37

rechnet

Ge- 68,69 6,99 2,31 68,86 6,84 2,37

funden

[x]l³ -157,2° -140,2°

(C = 0,5, C₂H₅OH) (C = 0,5, C₂H₅OH)

X„iax 227 τημ 226 ΐημ

(£{i = 735) (£11 = 754)

Beispiel 8 C-34-Nicotinat

Berechnet
Gefunden

65,94
65,51

6,43
6,51

4,96
4,55

IO Hf= -93,6° (C - 0,409, C₃H₅OH)
UV: Aä"^jOH = 225,5 ηψ (£}· = 888)

Beispiel 9
C-8,14-Diacetat

A) In einem Gemisch von 0,5 Raumteilen Pyridir und 2 Raumteilen Tetrahydrofuran werden 0,23 Ge-

»5 wichtsteile C gelöst. Während die Lösung unter Kühlung mit Eiswasser gerührt wird, wird eine Lösung von 0,15 Raumteilen Acetylchlorid in 8 Raumteiler! Tetrahydrofuran allmählich zugesetzt, worauf das Gemisch 1 Stunde stehengelassen wird. Das Re-

aktionsgemisch wird dann in Eiswasser gegossen, die gebildete Fällung wird abfiltriert und aus einem Gemisch von η-Hexan und Äthylacetat umkristallisiert, wobei 0,21 Gewichtsteile kristallines C-8,14-Diacetal erhalten werden (Schmelzpunkt 136 bis 140° C).

B) In einem Gemisch von 0,5 Raumteilen Pyridir und 2,0 Raumteilen Tetrahydrofuran werden 0,23 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,5 Raumteile Essigsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und

dann, wie unter A) beschrieben, aufgearbeitet und dei erhaltene Niederschlag aus Äther umkristallisiert. Hierbei werden 0,18 Gewichtsteile reine Kristalle des C-8,14-Diacetats vom F. 136 bis 140° C erhalten.

Gewichtsanalyse in %
für C₂₉H₃₇NO₉

Berechnet
Gefunden

64,07
63,77

6.86
6,89

2.58
2,74

H/> = -211° (C = 0,5, C₂H₅OH)
UV: Ä^OH = 226n^ (£J1 =

In einem Gemisch von 10 Raumteilen Tetrahydrofuran und 2 Raumteilen Pyridin werden 0,92 Gewichtsteile C und 0,5 Gewichtsteile Nicotinylchloridhydrochlorid gelöst. Die Lösung wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Zum Reaktionsgemisch werden 300 Raumteile Äthylacetat und 150 Raumteile Wasser gegeben. Nach Abtrennung der Äthylacetatschicht wird die wäßrige Schicht auf pH 7 eingestellt und mit Äthylacetat extrahiert. Dieser letztere Extrakt wird unter Kühlung mit Wasser gewaschen und nach Trocknung mit wasserfreiem Natriumsulfat an 30 Gewichtsteilen Kieseigel (0,05 bis 0,2 mm, Merck) unter Verwendung einer Lösung von Benzol-Äthylacetat (5:5 bis 2:8) chromatographiert. Das Eluat wird unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wird dann der Dünnschichtchromatographie an 320 Gewichtsteilen Kieselgel unter Verwendung von Benzol-Äthylacetat (2:1) als Solvenz-System unterworfen, worauf die gewünschten Banden von den Dünnschichtchromatographieplatten abgekratzt und mit Methylacetat extrahiert werden. Das Äthylacetat wird mit Wasser gewaschen und eingeengt. Man kristallisiert aus Äthylacetat und erhält 0,094 Gewichtsteile kristallines C-14-Nicotinat (Schmelzpunkt 185 bis 187° C).

Beispiel 10

C-8,14-Diacetat

In 1 Raumteil Pyridin werden 0,1 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-14-Acetats gelöst. Zur Lösung werden 0,5 Raumteile Essigsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach dieser Zeit wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen. Die gebildete Fällung wird abfiltriert und aus einem Gemisch von Äther und η-Hexan umkristallisiert. Hierbei

„ U₁UU uiiwiuiuicui; ^--öjit-jjiacexai in ruiui

von farblosen Prismen erhalten. Die physikalischen Daten der Verbindung entsprechen denen des Beispiels 9.

Beispiel 11
C-8,14-Dipropionat

In 5 Raumteilen Pyridin werden 0,23 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 1,04 Raumteile Propionsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 48 Stunden bei 0° C stehengelassen, worauf es in Eiswasser gegossen wird. Die gebildete Fällung wird abfiltriert und aus einem Gemisch von Äther und η-Hexan umkristallisiert. Hierbei werden 0,23 Ge-

wichtsteile C-8,14-Dipropionat vom F. 185 bis 186' C in Form von farblosen Kristallen erhalten.

Gewichtsanalyse in °/o
IUrC₃₁H₄₁NO₈

Berechnet
Gefunden

65,13 7,23
64,98 7,20

2,45
2,38

[>]„=-206° (C = 0,5,C₂H₅OH)

UV: λ%"'^0Η = 226 πιμ (El*. = 883)

Beispiel 12
C-8,14-Dicrotonat

In 5 Raumteilen Pyridin werden 0,23 Gewichts- ¹S teile C gelöst. Zur Lösung wird 1 Raumteil Crotonsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und dann in Eiswasser gegossen. Die gebildete Fällung wird abfiltriert und aus einem Gemisch von Äther und η-Hexan umkristallisiert. Hierbei werden 0,23 Gewichtsteile C-8,14-Dicrotonat vom F. 193 bis 195° C in Form von farblosen Kristallen erhalten.

Gewichtsanalyse in ^e/o
für C₃₃H₄₁NO,

Berechnet
Gefunden

66.54
66,21

6,94
7,02

2,35
2,31

Berechnet
Gefunden

60,08
59,99

6,26
6,51

2,12
2,51

[*]?= -210° (C = 0,5,C₂H₅OH)

UV: A ££-^OH = 226 πιμ (E 1L = 904)

Beispiel 14
C-8,14-Di(trifluor)acetat

InIO Raumteilen Tetrahydrofuran werden 0,92 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 1,5 Raumteile Trifluoressigsäureanhydrid unter Kühlung mit Eis gegeben. Das Gemisch wird 2 Stunden bei Raum-

temperatur gerührt und dann in Eiswasser gegossen, wobei eine Fällung abgeschieden wird, die unmittelbar mit 300 Raumteilen Äther extrahiert wird. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen, eingeengt und zur Kristallisation bei 0 bis 5° C stehengelassen. Die gebildeten Kristalle werden aus Äther umkristallisiert. wobei 0,75 Gewichtsteile C-8,14-Di(trifluor)-acetat in Form von farblosen Nadeln vom F. 152 bis 154 C (Zers.) erhalten werden.

Gewichtsanalyse in °/o
für C₂H

Berechnet
Gefunden

53,46
53,49

4,80
4,81

2,15
2,17

[λ]»- -235° (C = 0,854,CHCl₃)

Si" ^OH

UV. λ Si" ^OH = 227 τημ

= 702)

M_n = - 120° (C = 0,5, C₂H₅OH) UV: ;.Si"'^OH = 226 ΐημ (E Γ. = 1060)

Beispiel 13
C-8,14-Disuccinat

In 4 Raumteilen Pyridin werden 0,23 Gewichtsteile C gelöst. Zur Lösung werden 0,5 Gewichtsteile Bernsteinsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 15 Stunden bei 0° C stehengelassen und dann in Eiswasser gegossen. Das Gemisch wird dann mit *° 200 Raumteilen Äthylacetat extrahiert, der Extrakt mit Wasser gewaschen und unter Kühlung in eine 2°/oige wäßrige Natriumbicarbonatlösung übergeführt. Diese Lösung wird nun durch Zusatz von 4 n-Salzsäure auf pH 2 eingestellt und dann mit 200 Raumteilen Äthylacetat extrahiert. Der erhaltene Extrakt wird mit 50 Raumteilen Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das Konzentrat wird aus Äthyäacetat-Äther umkristallisiert. Hierbei werden 0,05 Gewichtsteile des C-8,14-Disuccinats 5<> in Form farbloser Nadeln vom F. 148 bis 152° C erhalten.

Gewichtsanalyse in °/o CHN

für Cj₅H₁₁NO₁.

Beispiel 15
C-14-Acetyl-8-propionat

In 5 Raumteilen Pyridin werden 0,25 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-14-Acetats gelöst. Zur Lösung werden 0,26 Raumteile Propionsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 48 Stunden bei 0° C stehengelassen und dann auf die im Beispiel 10 beschriebene Weise aufgearbeitet. Hierbei werden 0,245 Gewichtsteile C-14-Acetyl-8-propionat vom F. 174 bis 178° C in Form von farblosen Prismen erhalten.

Gewicntsanalyse für C₃₀HSeNO₉	in °;	0	= 0,	C	H	N	51 53
Berechnet Gefunden			226 rr	64,62 64,24	7,05 6,98	2, 2,
r ι τι 70	(C	Bei	5, C₂H₆OH)
_ITW. . C,H.OH L" γ . / max	=	ιμ (£51	= 944)
		spiel 16

C-14-Acetyl-8-crotonat

In 5 Raumteilen Pyridin werden 0,25 Gewichtsteile des nach Beispiel I erhaltenen C-14-Acetats gelöst. Zur Lösung werden 0,31 Raumteile Crotonsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 48 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, worauf das Reaktionsgemisch auf die im Beispiel 10 beschriebene Weise aufgearbeitet wird. Hierbei werden 0,173 Gewich tsteile C-14-Acetyl-8-crotonat vom F. 115 bis 124° C in Form von blaßgelblichen Kristallen erhalten.

Gewichtsanalyse in °/o
für C₃iH_S9NO_e

Berechnet
Gefunden

65,36
65,55

6,90
7,24

2,46
2,41

[a]_D = -170° (C = 0,5, C₂H₅OH)
UV: λ^^ΟΗ = 227πιμ (EJL = 1040)

Beispiel 17
C-14-Acetyl-8-(m-brom)-benzoat

In 10 Raumteilen Pyridin werden 0,5 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-14-Acetats gelöst. Zur Lösung werden 0.28 Gewichtsteile m-Brombenzoylchlorid gegeben. Das Gemisch wird übei

Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und dann in 100 Raumteile Eiswasser gegossen. Hierbei scheiden sich 0,527 Gewichtsteile einer Fällung ab. Die Fällung wird in einer geringen Menge Äthylacetat unter Erhitzen gelöst. Die Lösung wird dann abkühlen gelassen, wobei sich Kristalle abscheiden. Die Kristalle werden aus Äthylacetat umkristallisiert. Man erhält 0,3 Gewichtsleile C-14-Acetyl-8-(mbrom)benzoat vom F. 201 bis 203° C als farblose Nadeln.

Gewichts analyse in °/o für C₃₄H₃SNO₉Br	C H	N	Br
Berechnet Gefunden	59,65 5,60 59,95 5,53	2,05 1,96	Ii,67 11.75
\|.λ],,= -98° (C	= 1,0,CHCl₃)
UV: A_max =	227,5 πιμ (£1	* -= 892)
	Beispiel 18

C-14-PropionyI-8-acetat

Gewichtsanalyse für C₃₀H₃₉NO₉	in °/o	C	H	N	51 78
Berechnet Gefunden		64,62 64,33	7,05 7,10	·> 2
[λ]»= -176 = UV: £»^OH =	(C = 0,5, = 227 ΐημ	, CoH₅OH) *(E\l =*	= 980)
	Beis	piel 19
	C-8	-Acetat

den Mischschmelzpunkt wird die Verbindung als C-8-Acetat identifiziert. Die physikalischen Daten des C-8-Acetats entsprechen denen des Beispiels 1.

B) In 2JO0 Raumteilen Methanol werden 10,8 Raumteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-8.14-Diacctats gelöst. Die Lösung wird unter Rühren in 75 K) Raumteile des flüssigen Rückstandes gegossen, der nach Extraktion der Kultur von Streptomyces rochei var. volubilis (ATCC Nr. 21250) mit

ίο Äthylacetat erhalten worden ist.

Das Gemisch wird 1,5 Stunden bei etwa 37° C stehengelassen. Das Methanol wird vom Gemisch unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 3000 Raumteilen Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatschicht wird mit 1000 Raumteilen 2° ciiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung und mit 800 Raumteilen gewaschen und dann getrocknet. Durch Einengung der Äthylacetatlösung unter vermindertem Druck werden farblose Kristalle erhalten.

Die Kristalle werden aus Äthylacetat umkristallisiert. Man erhält 7,9 Gewichtsteile C-8-Acetat vom F. 201 bis 202° C.

In 4 Raumteilen Pyridin werden 0,1 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-8-Acetats gelöst. Zur Lösung werden 0,2 Raumteile Propionsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und dann in 100 Raumteile Eiswasser gegossen. Die gebildete Fällung wird abfiltriert, mit 20 Raumteilen Wasser gewaschen, getrocknet und dann in einem Gemisch aus Äther und η-Hexan der Kristallisation überlassen. Hierbei werden 0,08 Teile C-14-Propionyl-8-acetat vom F. 190 bis 192° C erhalten.

45

A) In 250 Raumteilen Methanol werden 0,1 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-,8,14- 5" Diacetats gelöst. Zur Lösung werden 750 Raumteile Sörensche Phosphatpuflerlösung mit einem pH von 6,6 gegeben. Das Gemisch wird nun bei 32^C C gehalten und mit 10 Gewichisteilen eines Acetonpülvers, das aus dem Mycel von Streptomyces rochei var. volubilis (ATCC Nr. 21250) hergestellt worden ist, versetzt. Das Gemisch wird 2 Stunden stehengelassen und dann filtriert. Das Filtrat wird mit Wasser versetzt und mit Äthylacetat extrahiert. Der erhaltene Extrakt wird mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck eingeengt. Aus dem Konientrat wird der wirksame Bestandteil durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Benzol/Äthylacetat (2:1) als Solvens abgetrennt. Das dabei erhaltene Produkt wird dann aus Äther umkristallisiert, wobei 0,05 Gewichtsteile farblose Prismen erhalten werden. Durch das Infrarotspektrum, das kernmagnetische Resonanzspektnim,

Beispiel 20

C-14-Acctat und C-8-Acetat

A) In 5 Raumteilen Methanol werden 0,1 Gewichtsteile des nach Beispiel 1 erhaltenen C-8,14-Diacetats gelöst. Zur Lösung werden 2,5 Raumteile 0.1 η-Salzsäure gegeben. Das Gemisch wird 60 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, dann mit Wasser versetzt und mit 100 Raumteilen Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen und eingeengt. Das Konzentrat wird an Kieselgel der Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Benzol Äthylacetat 2:1) als Solvens zur Abtrennung und Reinigung der gewünschten Produkte auf die gleiche Weise wie im Beispiel 1 A unterworfen. Hierbei werden 0.025 Gewichtsteile C-14-Acetat und 0.020 Gewichtsteile C-8-Acetat erhalten.

B) In 25 Raumteilen Methanol werden 0.1 Gewichtsteile nach Beispiel 1 erhaltenes Diacetat gelöst. Zur Lösung werden 25 Raumteile einer 2° oigen wäßrigen Natriumbicarbonatlösung gegeben. Das Gemisch wird 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise aufgearbeitet. Hierbei werden 0,02 Gewichtsteik C-14-Acetat und 0,015 Gewichtsteile C-8-Acetat erhalten. Die physikalischen Daten von C-8- und C-14-Acetat entsprechen denen des Beispiels 1.

Beispiel 21

C-8-(Trifluor)acetat

0,86 Gewichtsteile nach Beispiel 14 erhaltene; C-8,14-Di(trifluor)acetat werden an 30 Gewichtsteilen Kieselgel (0,05 bis 0,2 mm, Merck) Chromatographien und mit einem Lösungsmittelsystem au« Benzol und Äthylacetat (7:3 bis 6:4) eluiert. Dai eingesetzte C-8,14-Di(trinuor)acetat wird an dei Oberfläche des Kieselgels teilweise hydrolysiert. Da; Eluat wird eingeengt, wobei 0,27 Gewichtsteile C-8· (Trifluor)acetat als farblose Prismen vom F. 150 bii 153^C C erhalten werden.

Gewichtsanalyse in für C₂₇H₃₂NO₈Fj	⁰U C	H	= 812)	N
Berechnet Gefunden	58,37 58,53	5,80 5,69		2,52 2,89
Mf = -216,6°	(C = 0,5, C₂H₅OH)
_Tr.,. , C,H,OH UV: K_max	= 226ηιμ (£!*
	Beispiel 22
	C-8-Propionat

In 200 Raumteilen Wasser werden 0,2 Gewichtsteile rohes Enzympräparat gelöst, das aus der Kulturbrühe von Streptomyces rochei var. volubilis (ATCC 21 250) erhalten worden ist. Zur Lösung wird eine Lösung von 0,1 Gewichtsteilen nach Beispiel 15 erhaltenes C-14-Acetyl-8-propionat in 40 Raumteilen Methanol gegeben. Das Gemisch wird 1 Stunde bei 25⁰C gerührt und dann mit 300 Raumteilen Chloroform und 100 Raumteilen Wasser extrahiert. Der Extrakt wird eingeengt und aus Äthylacetat-Äther umkristallisiert, wobei 0,08 Gewichtsteile Kristalle erhalten werden. Das Infrarotspektrum, das kernmagnetische Resonanzspektrum und der Rf-Wert der Chromatographie am Kieselgel bestätigen, daß es sich um das C-8-Propionat handelt, dessen physikalischen Daten denen des Beispiels 3 entsprechen.

Beispiel 25 C-8-Butyrat und C-14-Butyrat

In 200 Raumteilen Pyridin werden 20 Gewichtsteile C gelöst. Zu dieser Lösung werden 6 Raumteile n-Buiyrylchlorid zugegeben. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und dann in 6000 Volumteile Eiswasser eingegossen. Der Niederschlag wird nun mit 4000 Raumteilen Äthylacetat extrahiert, der Extrakt wird nacheinander mit n/10 HCl, Wasser und 2°/oiger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und dann mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Einengen wird das Konzentrat an 300 Gewichtsteiien Silicagel (Lösungsmittelsystem Benzol'Äthylacetat [9-5 :1-5]) an der Säule chromatographiert. Die gewünschten Produkte werden in fester Form durch Einengen der jeweiligen Fraktionen erhalten. Es werden 3,9 Gewichtsteile C-14-Butyrat aus der Fraktion des Eluats (7:3) und 2.8 Gewichtsteile C-8-Butyrat aus der Fraktion des Eluats (4 : 6) erhalten. C-8-Butyrat wird aus Äther; Äthylacetat und C-14-Butyrat aus Äther kristallisiert.

C-8-Butyrat: F. 201° C (Zersetzung) Mf,³ = -210^; (C = 0,51 in Äthanol) UV-Absorptionsspektrum:

Α¹ (££.=891)

Beispiel 23
C-8-Crotonat Gewichtsanalyse in °/i>
KkC₂₉H₃₉NOe

Berechnet 65,76 7,42

Durch Behandlung von 0,1 Gewichtsteilen des nach Gefunden 65,76 7,47

Beispiel 16 erhaltenen C-14-Acetyl-8-crotonats auf³⁵ C-14-Butyrat: F. 173³ C (Zersetzung) die in Beispiel 22 beschriebene Weise werden 0,075 Gewichtsteile Kristalle erhalten, die nach dem Infrarotspektrum, kernmagnetischem Resonanzspektrum und Rf-Wert der Chromatographie an Kieselgel das C-8-Crotonat darstellen und dessen physikalische Daten denen des Beispiels 4 entsprechen.

2,64 2,74

_204° (C = 0,48 in Äthanol)

U V-Absorptionsspektrum:

- Äthanol λ*,- _c

/· max = 22(),5 Γημ

(El* = 756)

Gewichtsanalyse in ⁰Zo
für C₂₈H₃₉NO₈

Beispiel 24
C-8-Benzoat

In 1 Raumteil Pyridin werden 0,1 Gewichtsteile nach Beispiel 1 erhaltenes C-14-Acetat und 0,2 Gewichtsteile Benzoesäureanhydrid gelöst. Die Lösung wird 15 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und in Eiswasser gegossen, wobei eine Fällung erhalten wird. Die Fällung wird abgetrennt, gewaschen und in 10 Raumteilen Methanol, gelöst. Zur Lösung wird eine Lösung von 0,05 Gewichtsteilen des im Beispiel 22 verwendeten rohen Enzympräparats in 50 Raumteilen Wasser gegeben. Das Gemisch wird dann gemäß Beispiel 22 aufgearbeitet. Das hierbei erhaltene Konzentrat wird dann an Kieselgel HF 254 unter Verwendung einer Mischung aus Benzol/Äthylacetat (1 : 1) auf ähnliche Weise wie im Beispiel 6 chrumatographiert und mit einem Gemisch von Benzyl- und Äthylacetat (1:1) eluiert, wobei 0,01 Gewichtsteile Kristalle erhalten werden, die nach dem Infrarotspektrum, Schmelzpunkt und Rf-Wert der Chromatographie an Kieselgel das C-8-Benzoat darstellen. Die physikalischen Daten des C-8-Ben-7nats entsnrechen denen des Beispiels 6. Berechnet
Gefunden

65,76 7.42 65,68 7,34

2,64 2,57

Beispiel 26 C-8-Valerat und C-14-Valerat

Zu 200 Raumteilen Pyridin, in denen 20 Gewichtsteile C gelöst wurden, werden 6 Raumteile n-Valerylchlorid zugesetzt. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und anschließend in 6000 Raumteile Eiswasser geschüttet. Der gebildete Niederschlag wird mit 4000 Raumteilen Äthylacetat extrahiert, nacheinander mit n/10 HCl, Wasser, 2°/oiger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Einengen wird das Konzentrat an 300 Gewichtsteiien Silicagel getrennt, das mit einem Gemisch aus Benzol zu Äthylacetat (6 : 4) als Lösungsmittel extrahiert wird. Aus der Fraktion des Eluats (6 :4) werden 2,8 Gewichtsteile C-8-Valerat und aus der Fraktion des Eluats, jeweils durch Einengen der Fraktionen (8 : 2), 3,3 Gewichtsteile C-14-Valerat erhalten. C-8-Valerat wird ausÄther/Äthylacctat und C-14-Valerat aus Äther kristallisiert.

Ll

17

C-8-Valerat: F. 180° C (Zersetzung) [_Λ]« = - 196° (C = 0,5 in Äthanol) UV-Absorptionsspektrum:

Gewichtsanalyse in Vo für C₃₀H₄₁NO₈

Berechnet Gefunden

66,2 Ii 7,60 66,C2 7,69

2,58 2,65

C-14-Valerat: F. 173° C (Zersetzung) [λ]*³ = - 188° (C = 0,53 in Äthanol) UV-Absorptionsspektrum: Ä""¹= 226,5 ΐημ (El* =756)

Gewichtsanalyse in %> für C₃₀H₄₁NO₈

Berechnet Gefunden

66,23 66,16

Beispiel

7,60 7,64

2,58 2,50

ratur über Nacht stehengelassen, worauf das Ganze =n Eiswasser gegossen wird. Der gebildete Niederschlag wird abfiltriert und dann der Saulenchromato-₂raDh°ie an 30 Gewichtsteilen Silicagel (Lösungs-

mittelsystem Benzol/Athylacetat [7-6: 3-4]) unterworfen wobei nach Umkristallisieren aus Athylacetat Ό ^ Gewichtsteile C-M-Acetyl-e-nicotinat vom F 180° C (Zersetzung) erhalten werden. Dieses Produkt wird in 22 Raumteilen Methanol gelöst,

ίο worauf 60 Raumteile einer verbrauchten Brühe zusetzt werden, die nach der Extraktion des T-2636 aus der R-2636-Kulturbrühe erhalten worden ist. Das Gemisch wird 3 Stunden bei Raumtemperatur oerührt worauf Wasser zugesetzt und anschließend

mit Methylisobutylketon extrahiert wird. Der Extrakt wird konzentriert und das Konzentrat aus Athylacetat umkristaliisiert, wobei 0,15 Gewichtsteile C-8-Nicotinat vom F. 186° C (Zersetzung) erhalten werden.

20 [_α]ΐί =z - 103° (C = 0,52 in Äthanol)
UV Absorptionsspektrum:

(£!*„ = 972)

Gewichtsanalyse in"/«
für C₃iH_3eN₂Oa

C-8-Nicotinat

1 Gewichtsteil C-14-Monoa:etat, das nach Beispiel 2 erhalten wurde, wird in 10 Raumteilen Pyridin gelöst, worauf 0,6 Gewichtstei e Nicotinylchlorid zu- Berechnet gesetzt werden. Das Gemisch wird bei Raumtempe- 3° Gefunden

65,94
65,90

6,43
6,29

4,96
4,70

Claims

Patentansprüche:

1. Acylderivate des Antibiotikums T-2636C der allgemeinen Formel

OH

H₃O

CH,