DE1943096A1

DE1943096A1 - Enzyme system

Info

Publication number: DE1943096A1
Application number: DE19691943096
Authority: DE
Inventors: Hurst Thomas Lighthall
Original assignee: Tate and Lyle Ingredients Americas LLC
Current assignee: Primary Products Ingredients Americas LLC
Priority date: 1968-08-26
Filing date: 1969-08-25
Publication date: 1970-03-05
Also published as: NL164608C; DE1943096B2; FR2017036A1; IT1050160B; BE737924A; GB1230545A; JPS5429570B1; NL6912965A; NL164608B

Description

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Anmelder: A.E. Staley Manufacturing CompanyApplicant: A.E. Staley Manufacturing Company

Enzym - SystemEnzyme system

Die Erfindung bezieht sich auf eine Kombination oder ein Gemisch von hydrolysierenden Enzymen, die zur Verzuckerung von Stärke geeignet sind, wenn man ein Stärke-Hydrolysat damit innerhalb eines bestimmten pH-Bereich behandelt.The invention relates to a combination or a Mixture of hydrolyzing enzymes that cause saccharification of starch are suitable if a starch hydrolyzate is treated with it within a certain pH range.

Die vielseitige allgemeine Technik zur Gewinnung von Zuckern, und insbesondere Dextrose, aus Stärke ist allgemein bekannt. Das technische Wissen dazu findet sich in guter Zusammenstellung auf den Seiten 553 bis 568 in "Starch Chemistry and Technology',¹ Band 2 von Whistler & Pasehall.The versatile general technique for obtaining sugars, and particularly dextrose, from starch is well known. The technical knowledge can be found in good compilation on pages 553 to 568 in "Starch Chemistry and Technology", ¹ Volume 2 by Whistler & Pasehall.

Viele Jahre wurde angenommen, daß Glucoamylase lediglich die Fähigkeit habe, Stärke zu Dextrose zu hydrolysieren. Jedoch wurde früher schon gefunden, daß Glucoamylase auch befähigt ist, Dextrose zu nicht-dextrosen Produkten, wie beispielsweise Isomaltose und Isomaltotriose und sonstige α-D-(1,6)-verknüpfte Oligosaccharide, zu polymerisieren. Diese Polymerisation oder umgekehrte Wirksamkeit macht erklärbar, warum es so schwierig ist, eine quantitative Hydrolyse von Stärke zu Dextrose zu erreichen, Insbesondere dann, wenn man als Hydrolysierungsmittel ein Enzym, wie beispielsweise Glucoamylase benutzt.For many years it was believed that glucoamylase only had the ability to hydrolyze starch to dextrose. However it has already been found earlier that glucoamylase is also capable of converting dextrose to non-dextrose products such as, for example Isomaltose and isomaltotriose and other α-D- (1,6) -linked Oligosaccharides to polymerize. This polymerization, or reverse effectiveness, explains why it is so difficult is to achieve quantitative hydrolysis of starch to dextrose, especially when used as a hydrolyzing agent an enzyme such as glucoamylase is used.

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Wenngleich zur Zeit der Grund für diese umgekehrte Wirksamkeit noch nicht vollständig verstanden ist, wird angenommen, daß dies mit der Tatsache zusammenhängt, daß Enzym-Reaktionen reversibel sind, und daß dann, wenn man ein Enzym über eine längere Zeitspanne wirken läßt, eventuell ein Prodi ict-Gleichgewieht sich einstellt* Eine vollständigere Diskussion über die Umkehrwirkung oder Rückpolymerisation von Verzuckerung bewirkenden Enzymen kann gefunden werden in "international Chemical Engineering" Band 4, Nr. 3, Seiten 530-534Although at the moment the reason for this reversed effectiveness is not yet fully understood, it is believed that this is related to the fact that enzyme reactions are reversible, and that when you have an enzyme over a Allow a longer period of time to act, possibly a Prodi ict equilibrium arises * A more complete discussion of the reverse effect or back polymerization of saccharification causing enzymes can be found in "international Chemical Engineering "Vol. 4, No. 3, pp. 530-534

Die Polymerisations- oder Umkehr-Wirkung von beispielsweise Glucoamylase kann bis zu einem gewissen Ausmaß geändert werden durch Abänderung der Bedingungen, unter denen das Stärke-Material verzuckert wird. Beispielsweise kann man Stärke-Umsetzungsprozesse bei einer Stärke-Konzentration durchführen, die .niedriger ist (beispielsweise 10 %) als die vom wirtschaftlichen Standpunkt aus wünschenswertere Stärke-Konzentration von 30 bis Ko %, Im allgemeinen ist jedoch die durch die Verwendung einer geringeren Stärke-Konzentration erreichbare erhöhte Ausbeute an Dextrose nicht hoch genug, um die zusätzlichen Ausgaben auszugleichen, die beim Kristallisieren oder Konzentrieren der verdünnten Dextrose-Lösung aufgewendet werden müssen.The polymerization or reverse action of, for example, glucoamylase can be altered to some extent by changing the conditions under which the starch material is saccharified. For example, starch conversion processes can be carried out at a starch concentration which is lower (for example 10 %) than the starch concentration of 30 to Ko%, which is more desirable from an economic point of view. The increased yield of dextrose achievable in concentration is not high enough to offset the additional expense involved in crystallizing or concentrating the dilute dextrose solution.

Ein anderer Versuch ist vorgeschlagen worden, der darin besteht, daß man den Verzuckerungsvorgang bei einem pH-Wert durchführt, der für die Polymerisations- oder Rückbildungs-Wirkung von Glucoamylase weniger vorteilhaft ist. Das Problem bei diesem Versuch liegt darin, daß jede nennenswerte Änderung des pH-Wertes auch die Aktivität des Enzyms zur Herstellung von Dextrose beträchtlich vermindert. Um diesen Aktivitäts-Another attempt has been suggested which consists in taking the saccharification process at pH which is less beneficial for the polymerization or regression effect of glucoamylase. The problem in this experiment lies in the fact that any significant change in the pH value also the activity of the enzyme for the production considerably diminished by dextrose. To this activity

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verlust des Enzyms auszugleichen, wird es notwendig, die für den Verzuckerungsprozess erforderliche Menge an Enzym zu erhöhen, insbesondere dann, wenn vergleichbare Ausbeuten an Dextrose aufrecht erhalten werden sollen. Der Anstieg an Kosten, der aus der Verwendung von zusätzlichem Enzym resultiert, und auch die zusätzlichen Kosten, die infolge des Auftretens von größeren Mengen an Verunreinigungen, bedingt durch¹ die Verwendung von größeren Mengen an Enzym, hinzutreten, machen einen solchen Enzym-Verzuckerungsprozess wirtschaftlich unattraktiv. To compensate for the loss of the enzyme, it becomes necessary to increase the amount of enzyme required for the saccharification process, especially if comparable yields of dextrose are to be maintained. The increase in costs resulting from the use of additional enzyme and also the additional costs due to the occurrence of larger amounts of impurities due to ^1, the use of larger amounts of enzyme should occur, make such an enzyme saccharification economically unattractive.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, diese Nachteile zu beheben.The invention is based on the object of addressing these disadvantages remedy.

Es wurde gefunden, daß dies gelingt mit dem erfind*ungsgemäßen Enzym-System, welches aus Amylo-l,6-glucosidase und Glucoamylase besteht, und welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es die Fähigkeit hat, verdünnte Stärke unter solchen Bedingungen zu Dextrose zu verzuckern, die die Tendenz haben, die Rück— bildungswirkung von Glucoamylase zu Inhibieren.It has been found that this succeeds with the inventive Enzyme system, which consists of amylo-1,6-glucosidase and glucoamylase, and which is characterized in that it has the ability to saccharify diluted starch to dextrose under conditions that tend to reverse the inhibit the formation of glucoamylase.

Das erfindungsgemäße Enzym-System hat insbesondere den Vorteil, daß sich damit die Verzuckerung von gekochten oder verdünnten Stärken unter ständig praktisch gleichbleibender Gewinnung von Dextrose in hohen Ausbeuten durchführen läßt.The enzyme system according to the invention has the particular advantage that thus the saccharification of cooked or diluted starches with constantly practically constant recovery of Dextrose can be carried out in high yields.

In der beigefügten Zeichnung ist die Wirkung des erfindungsgemäßen Enzym-Systems beispielsweise veranschaulicht. Es zeigen:In the accompanying drawing is the effect of the invention Enzyme system exemplified. Show it:

Pig.l in graphischer Darstellung die Wirkung des pH-Wertes auf die Umwandlung von Stärke zu Dextrose mit Glucoamylase, und zwar sowohl in Anwesenheit als auch in Abwesenheit von Amylo-l,6-glucosidase,Pig.l graphically shows the effect of the pH value on the conversion of starch to dextrose with glucoamylase, both in the presence and in Absence of amylo-1,6-glucosidase,

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Pig. 2 in graphischer Darstellung die Wirkung, die der Gesamtfeststoffgehalt auf die Dextrose-Ausbeuten in verschiedenen Verzuckerungs-Enzymsystemen hat, .und 'Pig. 2 graphically shows the effect that the Has total solids on the dextrose yields in various saccharification enzyme systems, .and '

Fig. 3 in graphischer Darstellung die Wirkung, die steigende Konzentrationen an Glucoamylase auf die Ausbeuten an Dextrose bei, pH-Werten von etwa 6,0 haben.Fig. 3 in graphical representation the effect, the increasing Concentrations of glucoamylase affect the yields of dextrose at pH values of about 6.0.

In der vorliegenden Beschreibung und in den Ansprüchen wird die Abkürzung "D" zur Bezeichnung des Dextrose-Gehaltes einer Lösung (zum Unterschied von dem Gehalt an sonstigen Zuckern und Dextrin) benutzt, und der Dextrose-Gehalt ist angegeben als Gewichtsprozent Dextrose in einer Lösung. Die "D"-Werte, ' die angeführt werden, wurden durch Messen der spezifischen Drehung und Vergleich dieser Ablesungen mit der spezifischen Drehung, die hergestellte Standardproben mit bekannten Dextrose-Konzentrationen aufwiesen, bestimmt. Es wurde gefunden, daß diese Arbeitsweise, wenn man sie mit sonstigen Prüfmethoden vergleicht, einen Zuverläßigkeitsgrad von 95 % hat.In the present description and in the claims, the abbreviation "D" is used to denote the dextrose content of a solution (as opposed to the content of other sugars and dextrin), and the dextrose content is given as percent by weight of dextrose in a solution. The "D" values reported were determined by measuring the specific rotation and comparing these readings with the specific rotation exhibited by standard samples prepared with known concentrations of dextrose. It has been found that this procedure, when compared with other test methods, has a degree of reliability of 95 % .

Die Erfindung bezieht sich auch auf ein Verfahren zur Her- w stellung von Dextrose, bei dem ein verdünntes Stärke-Hydrolysat verzuckert wird, und das erfindungsgemäß dadurch gekennzeichnet ist, daß die Verzuckerung mit einem Enzym-System aus Glucoamylase und Amylo-l,6rglucosidase bei einem pH-Wert vorgenommen wird, bei dem Rückbildungswirkung von Glucoamylase inhibiert ist.The invention also relates to a process for preparing w position of dextrose, in which a thinned starch hydrolyzate is saccharified and is according to the invention characterized in that the saccharification with an enzyme system consisting of glucoamylase and amylo-l, 6rglucosidase at at a pH at which the restoring action of glucoamylase is inhibited.

Das erfindungsgemäße Verfahren zeichnet sich ganz allgemein durch seine besondere Wirksamkeit, die relativ einfache Durchführbarkeit, die gute Wiederholbarkeit, gleichgültig ob inThe method according to the invention is very general due to its special effectiveness, the relatively simple feasibility, the good repeatability, regardless of whether in

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kleinen Ansätzen oder im groß-technischen Betrieb gearbeitet wird, die Möglichkeit, entweder ansatzweise oder kontinuierlich die Umsetzung durchzuführen und die entsprechenden Anlagen auszuwerten, sowie durch die Art, in welcher sich das gewonnene Umsetzungsprodukt reinigen und gegebenenfalls kristallisieren läßt. Eine der bevorzugten Ausführungsformen des erfindungsgemäßen Verzuckerungs-Verfahrens läßt sich durch die nachfolgend angegebenen Verfahrensschritte und Konditionen charakterisieren.Small batches or large-scale technical operations are possible, either batchwise or continuously to carry out the implementation and to evaluate the corresponding systems, as well as by the way in which the The reaction product obtained can be purified and optionally allowed to crystallize. One of the preferred embodiments the saccharification process according to the invention can be carried out through the process steps and conditions given below characterize.

1. Durch Vermischen von körniger Stärke mit Wasser zu einer Konzentration von zwischej
Aufschlämmung zubereitet.1. By mixing granular starch with water to a concentration of between
Prepared slurry.

Konzentration von zwischen 20 bis 25° Baume wird eine Stärke-Concentration of between 20 to 25 ° Baume will be a strength

2. Die Stärke-Aufschlämmung wird dann unter Verwendung einer Säure oder vorzugsweise eines Enzyms oder einer Kombination einer Säure und eines Enzyms auf einen D.E. von vorzugsweise zwischen 15 und 20 verdünnt.2. The starch slurry is then prepared using a Acid or preferably an enzyme or a combination of an acid and an enzyme to a D.E. of preferably diluted between 15 and 20.

J5. Danach wird die verdünnte Stärke-Aufschläramung, sofern notwendig, auf einen pH-Wert zwischen 4,5 und 6,7* vorzugsweise auf einen pH-Wert zwischen 5*9 und 6,3 und auf einen Peststoffgehalt von zwischen 20 bis 55 % eingestellt.J5. Thereafter, the diluted starch slurry is adjusted, if necessary, to a pH value between 4.5 and 6.7 *, preferably to a pH value between 5 * 9 and 6.3 and to a pesticide content of between 20 to 55 % .

4. Das eingestellte Stärke-Hydrolysat wird durch Zugabe eines Enzym-Systems aus Glucoamylase und Amylo-l,6-glueosidase zu dem Stärke-Hydrolysat und dadurch, daß man das Hydrolysat während einer Zeitspanne von 24 Stunden bis 100 Stunden oder während einer zur Erzielung der gewünschten Umwandlung zu Dextrose ausreichenden Zeit auf einer Temperatur zwischen 50 bis 55 ° C hält, verzuckert.4. The adjusted starch hydrolyzate is added by adding a Enzyme system from glucoamylase and amylo-l, 6-glueosidase to the starch hydrolyzate and by making the hydrolyzate for a period from 24 hours to 100 hours or at a temperature between 50 for a time sufficient to achieve the desired conversion to dextrose Holds up to 55 ° C, saccharified.

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5· Nachdem der gewünschte Verzuckerungsgrad erreicht worden ist, werden, wenn dies notwendig erscheint, die Enzyme durch Erhitzen des Gemisches auf eine Temperatur zwischen 74 bis 94° C inaktiviert.. · \ .5 · After the desired degree of saccharification has been achieved If necessary, the enzymes are activated by heating the mixture to a temperature between 74 and 94 ° C inactivated .. · \.

6. Schließlich wird die Dextrose-Lösung gereinigt und auf eine Konzentration von 40 bis 45° Baume und einen Feststoffgehalt von 78 bis 85 % konzentriert oder es kann gegebenenfalls auskristallisiert werden.6. Finally, the dextrose solution is purified and concentrated to a concentration of 40 to 45 ° Baume and a solids content of 78 to 85 % or it can optionally be crystallized out.

Von den zuvor aufgeführten sechs Verfahrensstufen ist die Verzuckerungs-Stufe die für das Verfahrens-Ergebnis entscheidenste. Of the six procedural steps listed above, the is Saccharification stage the most decisive for the process result.

Die Verzuckerungs-Stufe, das ist die Stufe, in der ein verdünntes Stärke-Hydrolysat zu Dextrose umgewandelt wird, besteht darin, daß man ein Stärke-Hydrolysat mit einem erfin- _; dungsgemäßen Enzym-System unter solchen Bedingungen in Kontakt bringt, daß die Rückbildungswirkung (Umwandlung von Dextrose zu nient-dextrösen Produkten) von Glucoamylase inhibiert wird. Dabei wirkt Glucoamylase als das Enzym, welches die Stärke zu Dextrose hydrolysiert, und Amylo-l,6-glucosidase dient als das Enzym, durch welches die Amylopectin-Fraktion der Stärke an ihren 1-6-glucosidischen Bindungen hydrolysiert wird.The saccharification stage, that is, the stage in which a dilute starch hydrolyzate is converted to dextrose, consists in that a starch hydrolyzate with an invented _; brings the enzyme system according to the invention into contact under such conditions that the regression effect (conversion of dextrose to non-dextrous products) of glucoamylase is inhibited. Glucoamylase acts as the enzyme that hydrolyzes the starch to dextrose, and amylo-1,6-glucosidase acts as the enzyme by which the amylopectin fraction of the starch is hydrolyzed at its 1-6 glucosidic bonds.

Das Enzym Glucoamylase, das in der Verzuckerungsstufe eingesötzt wird, kann man mittels einer Anzahl verschiedener Mikroorganismen, insbesondere mit Hilfe von Aspergillus, Clostridium, Mucor und Rhizobus genera, nach bekannten Arbeitsmethoden gewinnen.The enzyme glucoamylase, which is used in the saccharification stage can be achieved by means of a number of different microorganisms especially with the help of Aspergillus, Clostridium, Mucor and Rhizobus genera, using known working methods.

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Brauchbare Glucoamylase-Zubereitungen in Form von filtrierten Kulturbrühen kann man von ausgewählten Stämmen des Aspergillus niger und von ausgewählten Stämmen des Aspergillus phoenicis erhalten.Usable glucoamylase preparations in the form of filtered Culture broths can be obtained from selected strains of Aspergillus niger and from selected strains of Aspergillus phoenicis obtain.

Da Glucoamylase-Zubereitungen normalerweise auch noch beträchtliche Mengen an störenden Enzymen, u.a. Transglucosidase (ein Enzym, das die Fähigkeit hat, Dextrose zu nicht fermentierbaren Polysacchariden zu polymerisieren), enthalten, ist es außerordentlich wünschenswert, praktisch alle diese störenden Enzyme zu entfernen, bevor man die Glucoamylase zur Verzuckerung von Stärke zu Dextrose einsetzt. Es sind verschiedene Verfahren zum Reinigen von Glucoamylase bekannt, mit der diese praktisch frei von störenden Enzymen gemacht werden kann. Die Wirkung, die Transglucosidase bei der Verzuckerung von Stärke mittels Glucoamylase hat, ist beschrieben worden in "Cereal Chemistry", Band;-45, Selten 658-669 (1966).Since glucoamylase preparations are usually also considerable Levels of interfering enzymes, including transglucosidase (an enzyme that has the ability to prevent dextrose) polymerize fermentable polysaccharides), it is extremely desirable to contain practically all of these to remove interfering enzymes before using the glucoamylase to saccharify starch to dextrose. They are different Process for the purification of glucoamylase is known, with which these are made practically free of interfering enzymes can. The effect that transglucosidase has in saccharifying starch by means of glucoamylase has been described in "Cereal Chemistry", Vol .; -45, Selten 658-669 (1966).

Das Enzym Amylo-Uö-glucosidase, das häufig auch als "Pullulanase" bezeichnet wird, ist ein Enzym, welches die Fähigkeit ha£, nur a-l,6-glucosidische Bindungen der Amylopectin-Fraktion von Stärke selectiv zu hydrolysieren. Über andere Enzyme, die a-lio-glucosidische Bindungen zu hydrolysieren vermögen, wird in der Literatur unter den Bezeichnungen "Iso-Amylase" und '& Enzym" berichtet.The enzyme amylo-Uö-glucosidase, which is often also called "pullulanase" is an enzyme which has the ability to form only a-1,6-glucosidic bonds of the amylopectin fraction from starch to hydrolyze selectively. Via other enzymes that are able to hydrolyze a-lio-glucosidic bonds in the literature under the names "Iso-amylase" and '& Enzyme' reports.

Die Herstellung eines Enzyms, welches Amylo-l,6-glucosidase-Aktivität zeigt, beschreiben Bender & Wallenfels in "Biochemische Zeitschrift" Band 334, Seiten 79 bis 95 (1961). Weitere Informationen, die die Verwendung und die Herstellung dieses Enzyms betreffen, kann man in "Methods of Enzymology", Band 8, Seiten 555 - 559 (I966) finden. Gemäß der zuvorThe production of an enzyme which shows amylo-1,6-glucosidase activity is described by Bender & Wallenfels in "Biochemische Zeitschrift" Volume 334, pages 79 to 95 (1961). Further information relating to the use and production of this enzyme can be found in "Methods of Enzymology", Volume 8, pages 555-559 (1966). According to the previously

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angegebenen Vorveröffentlichungen kann man Amylo-l,6-glucosidase in geeigneter Weise aus dem Organismus Aerobacter aerogenes gewinnen. Bestimmte Stämme dieses Organismus Aerobacter aerogenes sollen, wie berichtet wurde, besonders gute Quellen zur Gewinnung dieses Enzyms sein. So wurde beispielsweise gefunden, daß Aerobacter aerogenes (U-58), von dem angegeben ist, daß es sich um einen direkten Abkömmling des von Bender & Wallenfels isolierten Original-Stammes handelt, eine besonders gute Quelle für dieses h System ist. Verschiedene ultraviolett-induzierte Mutanten von Aerobacter aerogenes (U*-58) können ebenfalls verwendet werden. Andere beschriebene Stämme von Aerobacter aerogenes, die eingesetzt werden können, sind beispielsweise Aerobacter aerogenes ATCC 9621 und ATCC I5050. . _ ■ 'given prior publications, amylo-1,6-glucosidase can be obtained in a suitable manner from the organism Aerobacter aerogenes . Certain strains of this organism, Aerobacter aerogenes, have been reported to be particularly good sources for obtaining this enzyme. For example, it has been found that Aerobacter aerogenes (U-58), which is stated to be a direct descendant of the original strain isolated by Bender & Wallenfels, is a particularly good source for this h system. Various ultraviolet-induced mutants of Aerobacter aerogenes (U * -58) can also be used. Other described strains of Aerobacter aerogenes which can be used are, for example, Aerobacter aerogenes ATCC 9621 and ATCC I5050. . _ ■ '

Präparationen von Amylo-l,6-glucosidase oder Pullulanase können mittels des Organismus Aerobacter aerognes durch bekannte Züchtungsmethoden gewonnen werden. Eine geeignete Arbeitsweise ist in der zuvor erwähnten Veröffentlichung von Bender & Wallenfels beschrieben. Gewünschtenfalls kann man . ' die rohe Präparation vor der Benutzung reinigen. Es ist Jedoch die Brauchbarkeit des Enzyms für das erfindungsgemäße Verfahren nicht auf Präparationen einer bestimmten Reinheit beschränkt. Allerdings ist es selbstverständlich vorteilhaft, wenn man ein solches Enzym einsetzt, das im wesentlichen frei von Verunreinigungen ist. ' 'Preparations of amylo-1,6-glucosidase or pullulanase can be obtained by means of the organism Aerobacter aerognes by known breeding methods. A suitable mode of operation is described in the aforementioned publication by Bender & Wallenfels. If desired, you can. '' clean the raw preparation before use. However, the usefulness of the enzyme for the process according to the invention is not restricted to preparations of a specific purity. However, it is of course advantageous to use such an enzyme which is essentially free from impurities. ''

Die Menge an Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase, die für die Verzuckerung von Stärke zu Dextrose eingesetzt werden sollte, hängt von mehreren Paktoren ab, beispielsweise von (1) der Potenz des Enzyms, (2) den Verzuckerungsbedingungen (wie beispielsweise pH-Wert, Temperatur, Feststoffgehalt der Stärke,usw.).,The amount of glucoamylase and amylo-1,6-glucosidase required for the saccharification of starch to dextrose should be used, depends on several factors, for example (1) the Potency of the enzyme, (2) the saccharification conditions (such as pH value, temperature, solids content of the starch, etc.).,

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(3) Umwandlungszeit und (4) Kosten für das Enzym und die VerfahrensfUhrung. Damit beim erfindungsgemäßen Verfahren in besonders wirtschaftlicher und besonders wirksamer Weise die Stärke zu Dextrose verzuckert wird, verwendet man die Enzyme vorzugsweise in solchen Mengen,mit denen sich die höchsten Ausbeuten an Dextrose zu den geringst-möglichen Kosten gewinnen lassen. Da der bei weitem am stärksten ins Gewicht fallende Einzelkosten-Paktor bei einem enzymatischen Verfahren der Verzuckerung das Enzym ist, setzt man vorzugsweise so wenig an Enzym wie praktisch möglich ein. Beim erfindungsgemäßen Verfahren lassen sich fortlaufend hohe Dextrose-Ausbeuten erzielen, wenn man eine so geringe Menge wie 4 bis 15 Einheiten Glucoamylase je g an Stärke-Trockensubstanz und 0,5 bis 6,0 Einheiten an Amylo-l,6-glucosidase je g an Trockensubstanz benutzt. In dem Maße, wie hoch gereinigte Enzyme preisgünstiger erhältlich werden, kann man gewünschtenfalls mit größeren Mengen an Enzym arbeiten.(3) conversion time and (4) cost of the enzyme and the Procedure. Thus with the method according to the invention in a particularly economical and particularly effective manner If the starch is saccharified to dextrose, the enzymes are preferably used in such amounts that the get the highest yields of dextrose at the lowest possible cost. Since by far the strongest ins Weight-decreasing unit cost factor with an enzymatic If the enzyme is saccharified, it is preferable to use as little enzyme as is practically possible. When the invention Processes can consistently achieve high yields of dextrose when using as little as 4 to 15 units of glucoamylase per g of starch dry matter and 0.5 to 6.0 units of amylo-1,6-glucosidase per g Dry matter used. As highly purified enzymes become more cheaply available, one can, if desired work with larger amounts of enzyme.

Die Potenz- oder Aktivitäts-Einheiten von Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase, die vorstehend erwähnt werden, sind für die Zwecke der vorliegenden Erfindung wie folgt zu verstehen: The potency or activity units of glucoamylase and Amylo-1,6-glucosidase mentioned above are to be understood as follows for the purposes of the present invention:

Eine Einheit von Glucoamylase ist definiert als die .Menge an Enzym, mit der 100 mg Stärke innerhalb 48 Stunden bei 60° C und einem pH-Wert von 4,0 im wesentlichen zu Dextrose umgewandelt werden. Eine Einheit von Amylo-l,6-glucosidase ist definiert als die Menge des in 1,0 ml der Lösung vorhandenen Enzyms, die mit überschüssigem Pullulan als Substrat unter Standardversuchsbedingungen innerhalb einer Stunde bei 45° C den Reduktionswert auf einen solchen Wert anhebt, der äquivalent ist 1 mg an Maltose.One unit of glucoamylase is defined as the amount of Enzyme with which 100 mg starch is essentially converted to dextrose within 48 hours at 60 ° C and a pH value of 4.0 will. One unit of amylo-1,6-glucosidase is defined as the amount of that present in 1.0 ml of the solution Enzyme that is taking with excess pullulan as a substrate Standard test conditions within one hour at 45 ° C raises the reduction value to such a value that is equivalent is 1 mg of maltose.

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Umwandlungszeiten zwischen 48 bis 210 Stunden reichen im allgemeinen aus, um mit dem erfindungsgemäßen Enzym-System eine Umwandlung der Stärke zu Dextrose zu bewirken. Man kann jedoch gegebenenfalls diese Zeitspannen auch vergrößern oder vermindern dadurch, daß man die Menge an während der Verzuckerung benutztem Enzym etwas erhöht oder erniedrigt. Conversion times between 48 and 210 hours are sufficient in general, in order to bring about a conversion of the starch to dextrose with the enzyme system according to the invention. One can however, if necessary, these periods of time also increase or decrease by increasing or decreasing the amount of enzyme used during the saccharification.

Man erhält das verdünnte Stärke-Hydrolysat, welches mit dem erfindungsgemäßen Enzym-System und beim erfindungsgemäßenThe diluted starch hydrolyzate is obtained, which with the enzyme system according to the invention and in the invention

" Verfahren vorzugsweise eingesetzt wird dadurch, daß man ein verdünnendes Enzym, wie beispielsweise a-Amylase verwendet. Es sind gegebenenfalls jedoch auch Mineralsäuren, wie beispielsweise Chlorwasserstoff- oder Schwefelsäure brauchbar. Im allgemeinen bringt allerdings die Verwendung eines mit einem Enzym verdünnten Hydrolysate gewisse Vorteile gegenüber dem Einsatz eines mit Säure verdünnten Hydrolysate. Einer dieser Vorteile ist darin zu sehen, daß höhere Ausbeuten an Dextrose mit einem Enzym-verdünnten Stärke-Hydrolysat eher erreichbar sind, als wenn ein mit Säure verdünntes Stärke-Hydrolysat eingesetzt wird. Dieser Vorteil ist aus Figur 2 zu erkennen. Ein weiterer Vorteil bei der Benutzung von a-Amylase als'verdünnendes Enzym besteht darin, daß die"The method is preferably used by one diluting enzyme such as α-amylase is used. However, mineral acids, such as, for example, hydrochloric or sulfuric acid, can also be used if appropriate. In general, however, the use of one brings with it certain advantages over an enzyme diluted hydrolyzate the use of a hydrolyzate diluted with acid. One of these advantages is to be seen in the fact that higher yields of Dextrose with an enzyme-diluted starch hydrolyzate are more likely to be achieved than with an acid-diluted starch hydrolyzate is used. This advantage can be seen from FIG. Another advantage of using α-Amylase als'verdünnendes enzyme consists in that the

a-Amylase die Fähigkeit hat, die Rückbildung der verdünnten Stärke während der Verzuckerung mittels eines Enzym-Systems aus Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase zu inhibieren.a-Amylase has the ability to regress the diluted starch during saccharification by means of an enzyme system from glucoamylase and amylo-1,6-glucosidase.

Durch die vorliegende Erfindung wird es möglich, Dextrose aus praktisch beliebigen Arten, die verschiedene Reinheit aufweisen können, an Stärken und Stärke enthaltenden Material! en zu gewinnen. Beispielsweise kanri man Dextrose ausThe present invention makes it possible to produce dextrose from practically any kind of starch and starch-containing material, which can have different purities! en to win. For example, you can get dextrose out

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- li -- li -

Getreidestärke, wie beispielsweise Mais, Reis, Zuckerhirse und Weizen; Knollenstärke, wie beispielsweise Kartoffel und Tapioca; Weichstärke, wie beispielsweise Weichmais und Weich-Zuckerhirse; hoch Amylo«-haltiger Stärke; separierten Stärke-Fraktionen, z.B. Amylose und Amylopektin; rohen oder ungereinigten Stärke-haltigen Materialien, wie beispielsweise geweichter Mais; und in ähnlicher Weise Stärke, die modifiziert worden ist, beispielsweise durch Oxidation oder Säure-Hydrolyse, herstellen. Mit vorteilhaftem Ergebnis können ebenso beliebige Gemische oder Kombinationen der zuvor aufgeführten Substanzen eingesetzt werden.Corn starch such as corn, rice, sugar millet and wheat; Tuber starch, such as potato and tapioca; Soft starch such as soft corn and soft millet; high amylo "starch; separated Starch fractions, e.g., amylose and amylopectin; raw or unrefined starch-containing materials, such as softened corn; and similarly starch that has been modified, for example by oxidation or acid hydrolysis, produce. Any mixtures or combinations of the substances listed above can also be used with advantageous results can be used.

Wie zuvor bereits erwähnt besteht einer der Vorteile der vorliegenden Erfindung darin, daß gleichbleibend höhere Ausbeuten an Dextrose erhalten werden, wenn zum Verzuckern der Stärke zu Dextrose ein erfindungsgemäßes Enzym-System aus Amylo-1,6-glucosidase und Glucoamylase benutzt wird. Es wird angenommen, daß diese Ausbeute-Zunahme zurückzuführen ist auf die nicht zu erwartende Fähigkeit dieses Enzym-Systems (Glucoamylase und Amylö-l,6-glueosidase), die Stärke bei einem solchen pH-Wert zu verzuckern, der die Rückbildungswirkung der Glucoamylase zu inhibieren vermag. Diese Wirkung ist graphisch in Figur veranschaulicht; darin ist die prozentuale Ausbeute an mittels zweier Enzym-Systeme gewonnener Dextrose (von denen eines Glucoamylase war und das andere aus Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase bestand) bei verschiedenen pH-Werten in Vergleich zu einander gestellt. Figur 1 zeigt ferner, daß bei einem pH-Wert von 6,0 bis 6,2 so hohe Ausbeuten an Dextrose wie 99 %+ erhalten werden können, wenn man ein Enzym-System aus Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase einsetzt; wenn jedoch das Enzym-System aus Glucoamylase besteht und keine Amylo-1,6-glucosidase enthält, wurden optimale Ausbeuten von etwa 96 % erhalten. Es wird angenommen, daß dann, wenn man die Verzuckerung bei einem pH-Wert von etwa 6,0 bis 6,2 vornimmt, Glucoamylase, wenn überhaupt, nur eine geringe Polymerisationsoder Rückbildungs-Wirkung ausübt. As already mentioned above, one of the advantages of the present invention is that consistently higher yields of dextrose are obtained if an enzyme system according to the invention composed of amylo-1,6-glucosidase and glucoamylase is used to saccharify the starch to dextrose. It is assumed that this increase in yield is due to the unexpected ability of this enzyme system (glucoamylase and amyl oil 1,6-glueosidase) to saccharify the starch at such a pH that the glucoamylase has the reverse effect able to inhibit. This effect is illustrated graphically in Figure; it shows the percentage yield of dextrose obtained by means of two enzyme systems (one of which was glucoamylase and the other consisted of glucoamylase and amylo-1,6-glucosidase) at different pH values. FIG. 1 also shows that at a pH of 6.0 to 6.2, dextrose yields as high as 99 % + can be obtained if an enzyme system composed of glucoamylase and amylo-1,6-glucosidase is used; however, when the enzyme system consists of glucoamylase and does not contain amylo-1,6-glucosidase, optimal yields of about 96 % were obtained. It is believed that when saccharification is carried out at a pH of about 6.0 to 6.2, glucoamylase has little, if any, polymerization or regeneration effect.

00 98 10/153000 98 10/1530

6ADORiGINAi.6ADORiGINAi.

Figur 2 läßt erkennen, daß auch dann mit einem Enzym-SystemFigure 2 shows that even then with an enzyme system

aus Glucoamylase und Amylo-lje-glucosldase erheblich höhere Ausbeuten an Dextrose erhältlich sind, wenn der Gesamtfeststoff gehalt erhöht ist. Dies ist ein besonderswichtiger Aspekt vom wirtschaftlichen Standpunkt aus gesehen, da dadurch die Kosten für Eindampfen (die erforderlich werden, wenn kristallisiert werden soll oder wenn die Dextrose-Lösungen konzentriert werden müssen) und Reinigung ganz erheblich vermindert werden.considerably higher from glucoamylase and amylo-lje-glucosldase Yields of dextrose are available when total solids is increased. This is a particularly important one From an economic point of view, as this reduces the cost of evaporation (which are when to crystallize or when the dextrose solutions must be concentrated) and cleaning can be reduced considerably.

Aus Figur 3 kann man erkennen, daß selbst dann, wenn die Menge an Glucoamylase von 10 Einheiten auf 40 Einheiten je g an Stärke D.S. erhöht wird, die Dextrose-Ausbeuten noch unterhalb 96 % bleiben. Diese in Figur 3 veranschaulichten Ergebnisse können verglichen werden mit den z.B. in Tabelle I zusammengestellten Ergebnissen, die anschaulich machen, daß Dextrose-Ausbeuten von mehr als 99 % erhalten wurden. Dies kann demzufolge als Beweisanzeichen dafür angesehen werden, daß es möglich ist, beim Arbeiten mittels des erfindungsgemäßen Enzym-Systems mit minimalen Mengen an Enzym maximale Dextrose-Ausbeuten zu erhalten.From FIG. 3 it can be seen that even if the amount of glucoamylase is increased from 10 units to 40 units per g of starch DS, the dextrose yields still remain below 96 % . These results illustrated in FIG. 3 can be compared with the results compiled, for example, in Table I, which make it clear that dextrose yields of more than 99 % were obtained. Accordingly, this can be regarded as evidence that it is possible to obtain maximum dextrose yields with minimal amounts of enzyme when working by means of the enzyme system according to the invention.

Man kann die Verzuckerung von Stärke zu Dextrose mit jeder beliebigen Art von Stärke-haltigem Material ausführen. Bevorzugt wird jedoch dazu ein Stärke-Hydrolysat eingesetzt, daS auf einen D.E. von weniger als 35 verdünnt worden ist und einen Feststoff gehalt von weniger als 55 % hat. Während der Verzuckerung (in Anwesenheit von Glucoamylase und Amylo-1,6-glucosidase) wird das Stärke-Hydrolysat auf einem pH-Wert zwischen 4,5 und 6,7 und einer Temperatur von zwischen 25 und 60° C gehalten. Vorzugsweise hält man das Stärke-HydrolysatThe saccharification of starch to dextrose can be carried out with any type of starch-containing material. However, a starch hydrolyzate is preferably used for this purpose, since it has been diluted to a DE of less than 35 and has a solids content of less than 55 % . During the saccharification (in the presence of glucoamylase and amylo-1,6-glucosidase) the starch hydrolyzate is kept at a pH between 4.5 and 6.7 and a temperature between 25 and 60 ° C. The starch hydrolyzate is preferably kept

0098 10/1 53 00098 10/1 53 0

bei einem pH-Wert zwischen 5*8 und 6,j5 und einer Temperatur zwischen 45 und 55° C. Unter diesen Bedingungen läßt sich der gewünschte Verzuckerungsgrad innerhalb einer Zeitspanne von zwischen etwa 350 und 100 Stunden erreichen.at a pH between 5 * 8 and 6, j5 and a temperature between 45 and 55 ° C. Under these conditions the desired degree of saccharification within a period of time of between about 350 and 100 hours.

In den nachfolgenden Beispielen wird,die Erfindung illustriert,The invention is illustrated in the following examples

Examples 1 to 14

1,000 g an pulverförmiger Mais-Stärke mit einer für Nahrungsmittelzwecke geeigneten Reinheit (etwa 900 g an Trpckenfeststoffen) wurden in 1,500 ml Leitungswasser eingeschlämmt. 2,5 g an CaCO^ wurden hinzugegeben, und der pH-Wert wurde mit einer Natriumcarbonatlösung auf 6,2 eingestellt. Die Stärke-Aufschlämmung wurde in einem Schnellkochtopf gekocht und 10 Minuten lang unter einem Dampfdruck (149° C) von 3,94 kg/cm gehalten. Dann wurde die gekochte Paste in 200 ml an 1,0 ml bakterielle a-Amylase (Aquazyme 120) enthaltendem Wasser eingebracht. Die Paste wurde mit den Enzym-Lösung kräftig durchgemischt, und die Temperatur in dem Aufnahmebehälter wurde durch gesteuertes Einfließenlassen der Paste bei 77 bis 85° C gehalten. Nachdem die gesamte Menge an Stärke-Paste mit der a-Amylase vermischt worden war, wurde die Temperatur der Lösung Schnelllauf 60° C abgesenkt und dann wurden 2,1 ml (etwa 9·900 Einheiten, wie zuvor definiert) an Novo Glucoamylase zugegeben. Die Temperatur wurde auf etwa 50 C weiter abgesenkt, und es wurden Proben mit gleichem Gewicht davon abgewogen. Die Proben wurden in verschiedener Weise mit unterschiedlichen Mengen an Amylo-l,6-glueosidase behandelt, um die Wirkungen von pH-Wert, Enzym-Menge, Bebrütungstemperatur, Bebrütungszeit und Konzentration an Trockenfeststoffen auf die Dextrose-Ausbeute anschaulich zu machen. Die Amylo-l,6-glucosidase wurde als wäßrige1,000 g of powdered corn starch of a food grade grade (about 900 g of dry solids) was slurried in 1,500 ml of tap water. 2.5 g of CaCO ^ was added and the pH was adjusted to 6.2 with a sodium carbonate solution. The starch slurry was cooked in a pressure cooker and held under a steam pressure (149 ° C) of 3.94 kg / cm for 10 minutes. Then the boiled paste was placed in 200 ml of water containing 1.0 ml of bacterial α-amylase (Aquazyme 120). The paste was vigorously mixed with the enzyme solution, and the temperature in the receiving container was kept at 77 to 85 ° C. by allowing the paste to flow in in a controlled manner. After all of the starch paste had been mixed with the α-amylase, the temperature of the solution was high-speed lowered to 60 ° C and then 2.1 ml (about 9 x 900 units as previously defined) of Novo glucoamylase was added. The temperature was lowered further to about 50 C and samples of the same weight were weighed out. The samples were treated in various ways with varying amounts of amylo-1,6-glueosidase to illustrate the effects of pH, amount of enzyme, incubation temperature, incubation time and dry solids concentration on the dextrose yield. The amylo-1,6-glucosidase was found to be aqueous

009810/15 30009810/15 30

■■■.-./)■■■ .-. /)

- 14 -- 14 -

Lösung zugegeben. Die Amylo-l,6-glucosidase war aus dem Organismus Aerobaeter aerogenes mittels der in "Biochemische Zeitschrift", Band 334, Seiten 79-95 (1961) beschriebenen Arbeitsweise gewonnen worden. Nachdem die Enzyme zugegeben worden waren, wurde die Stärke-Aufschlämmung bei 48 bis 50 C und einem pH-Wert von 5,6 bis 5,9 48 Stunden lang der Umwandlung unterworfen, Innerhalb einer Zeitspanne von 72 oder 96 Stunden wurde die Enzym-Umwandlung durch Einlassen von einer so ausreichenden Menge Wasserdampf, daß die Temperatur innerhalb von 5 Minuten auf 90° C anstieg und diese dann etwa 10 Minuten lang gehalten wurde, gestoppt.Solution added. The amylo-1,6-glucosidase was obtained from the organism Aerobaeter aerogenes by means of the procedure described in "Biochemische Zeitschrift", Volume 334, Pages 79-95 (1961). After the enzymes were added, the starch slurry was subjected to conversion at 48 to 50 C and pH 5.6 to 5.9 for 48 hours . Enzyme conversion was completed over a period of 72 or 96 hours by letting in sufficient steam that the temperature rose to 90 ° C. within 5 minutes and then held it for about 10 minutes.

Es wurden für die verschiedenen Enzym-Kombinationen die D.Werte bestimmt, und diese sind in Tabelle I angegeben.The D. values were determined for the various enzyme combinations and these are given in Table I.

-E₁₊ --E ₁₊ - Tabelle ITable I. pHpH Temp.Temp. ZeitTime D.S.D.S. D.D. 11 Einh,/gUnit / g E₂++E ₂ ++ 5,95.9 ⁰C ⁰ C Std.Hours. 30,030.0 89,89 33 Beispielexample 11,011.0 Einh./gUnit / g 6,06.0 5555 7272 IlIl 97,97 88th 11 11,011.0 __ 6,16.1 ItIt titi IlIl 95,95 00 22 11,011.0 2,02.0 5,45.4 ItIt ItIt ItIt 93,93, 11 33 11,011.0 4,04.0 5,55.5 5050 IlIl ItIt 96,96, 77th ■-la·■ -la · 11,011.0 -- 5,55.5 ItIt IlIl ItIt 96,96, 11 VJlVJl 11,011.0 1,01.0 5,55.5 ItIt ItIt IlIl 96,96, 44th 66th 11,011.0 2,0-2.0- 4,04.0 ItIt IlIl 30,230.2 96,96, 88th 77th 11,011.0 4,04.0 5,85.8 5555 9090 36,236.2 90,90 44th 88th ii,oii, o -- 5,85.8 5050 IlIl 34,334.3 97,97 33 99 11,011.0 -- 5,85.8 5050 IlIl 29,129.1 98,98 33 1010 11,011.0 1,01.0 5,85.8 5050 IlIl 30,930.9 99,99 00 1111 11,011.0 2,02.0 6,16.1 5050 9696 30,030.0 99,99 11 1212th 11,Ό11, Ό 3,03.0 6,26.2 5050 7272 30,030.0 99,99 1313th 11,011.0 3,03.0 5050 7272 1414th 3,03.0

= Glucoamylase ++ E₂ = Amylo-l,6-glucosidase= Glucoamylase ++ E ₂ = amylo-1,6-glucosidase

0098 10/15300098 10/1530

Aus den vorstehenden Beispielen kann man erkennen, daß in Abwesenheit von Amylo-l,6-glucosidase beachtlich geringere Ausbeuten an Dextrose erhalten worden sind.From the above examples it can be seen that in the absence of amylo-1,6-glucosidase, considerably less Yields of dextrose have been obtained.

Examples 15 to 22

In den folgenden Beispielen wird die Wirkung der Gesamt-Trockensubstanz der Stärke auf die Gewinnung von Dextrose veranschaulicht, und zwar (1) mit einem aus Glucoamylase und Amylo-l,6-glucosidase bestehenden Enzym-System und (2) einem nur Glucoamylase enthaltenden EnzyniTSystem. Die Konditionen und Verzuckerungsverfahren waren bei allen Systemen die gleichen, wie sie im Zusammenhang mit den Beispielen 1 bis 14 beschrieben worden sind, ausgenommen die in der nachstehenden Tabelle II angegebenen Verschiedenheiten.In the following examples the effect of the total dry matter of starch on the production of dextrose, namely (1) with one of glucoamylase and Amylo-1,6-glucosidase existing enzyme system and (2) an enzyme system containing only glucoamylase. The conditions and saccharification procedures were the same for all systems as used in connection with Examples 1 through 14, with the exception of those below Table II indicated differences.

Table II

Beispielexample E₁₊
Einh.E ₁₊
An H. Einh.An H. Gesamt-
Trockens.
d. StärkeTotal-
Dry.
d. strength pHpH Zeit
Std.
bei 55 CTime
Hours.
at 55 C Dextrose
AusbeuteDextrose
yield 1515th 99 33 2020th 6,0-6,26.0-6.2 9696 99,499.4 1616 99 33 3030th 6,o-6_r26, o-6 _r 2 9696 98,598.5 1717th 99 33 4040 6,0-6,26.0-6.2 9696 96,896.8 1818th 99 - 3- 3 5050 6,0-6,26.0-6.2 9696 94,594.5 1919th 99 -- 2020th 4,2-4,44.2-4.4 9696 98,898.8 2020th 99 -- 3030th 4,2-4,44.2-4.4 • 96• 96 97,897.8 2121st 99 -- 4o4o 4,2-4,44.2-4.4 9696 96,396.3 2222nd 99 5050 4,2-4,44.2-4.4 9696 95,195.1

+ E₁ = Glucoamylase ++ E₀ = Amylo-l,6-glucosidase+ E ₁ = glucoamylase ++ E ₀ = amylo-1,6-glucosidase

00981 0/153000981 0/1530

-16 --16 -

Examples 23-30

Die nachfolgenden Beispiele veranschaulichen den Effekt, den die Anwendung eines höheren pH-Wertes auf die Dextrose-Ausbeuten hat, wenn nur Glucoamylase benutzt wird. Die Konditionen, Arbeitsweisen bei der Verzuckerung waren im wesentlichen die gleichen, wie sie mit Bezug auf die Beispiele 1 bis 14 beschrieben sind, ausgenommen die in der nachstehenden Tabelle III vermerkten Angaben. Die Beispiele 29 und 30 sind die gleichen wie die Beispiele 12 und 13, die in Tabelle I aufgeführt sind; sie wurden hier nur wiederholt, damit man die Werte leichter vergleichen kann.The following examples illustrate the effect that the application of a higher pH to dextrose yields when only glucoamylase is used. The conditions, Saccharification modes of operation were essential the same as described with reference to Examples 1 to 14 except for the following Information noted in Table III. Examples 29 and 30 are the same as Examples 12 and 13, those listed in Table I; they have only been repeated here to make it easier to compare the values can.

E₁₊
Einh.E ₁₊
An H. Tabelle IIITable III Gesamt-
Trockens.
d. StärkeTotal-
Dry.
d. strength J&L·J & L Temp.
⁰ CTemp.
⁰ C Zeit
Std.Time
Hours. Dextrose
AusbeuteDextrose
yield Beispielexample 1010 Einh.An H. 30,030.0 4,24.2 5555 9696 95,795.7 2323 1010 __ 30,030.0 6,06.0 5555 9696 91,791.7 2424 1515th - -- - 30,030.0 6,06.0 5555 9696 94,594.5 2525th 2020th -- 30,030.0 6,06.0 5555 9696 95,495.4 2626th 3030th -- 30,030.0 6,06.0 5555 9696 95,695.6 2727 4o4o - -- - 30,030.0 6,06.0 5555 9696 95,695.6 2828 9,09.0 -- 30,930.9 5,85.8 5050 9696 99,399.3 2929 9,09.0 3,03.0 30,030.0 6,16.1 5050 7272 99,099.0 3030th 3,03.0

0 0 9 8 10/15300 0 9 8 10/1530

Claims

1. Enzyme system, characterized by a composition of amylo-1,6-glucosidase and glucoamylase, which is capable of To saccharify diluted starch to dextrose under such conditions, under which the retroactive formation of the glucoamylase is essentially inhibited.

2. Enzyme system according to claim 1, characterized in that that the enzymes have a proportionate amount of action equivalent to 0.05 to 0.8 units of amylo ~ 1,6-glucosidase per unit Glucoamylase are present.

3. Enzyme system according to claim 1, characterized in that that the enzymes are equivalent in a proportionate amount of action 1.5 to 4.0 units of amylö-ljo-glucosidase per unit Glucoamylase are present.

4. Enzyme system according to any one of the claims! to 3." characterized in that the enzymes in a saccharification of the starch to dextrose at such a pH, in which the restorative effect of glucoamylase essentially is inhibited, guaranteed proportional amount of action are available.

0 098 10/1530

- is—- is--

5. Enzyme system according to claim 4, characterized in that that the pH is 4.5 to 6.7. .

6. enzyme system according to any one of the preceding claims, characterized gekennzeichne t ₃ that is additionally a-amylase in the dilute strength sufficient quantity is available for the inhibition of regression.

7 «Process for the production of dextrose, characterized . that a dilute starch hydrolyzate with an enzyme system consisting of glucoamylase and amylo-. 1,6-glucosidase, in which the regression effect of the Glucoamylase inhibiting pH saccharified.

8. The method according to claim "J _s, characterized in that one works at a pH of 4.5 to 6.7.

9. The method according to claim 7, characterized in that

that a starch hydrolyzate diluted with enzyme is used as the starch hydrolyzate begins and works at a pH of 5.8 to 6.3.

10. The method according to any one of claims 7 to 9, characterized in that the enzymes are used in the enzyme system in a proportionate amount of action which is equivalent to 0.05 to 0.8 units of amylo-1,6-glucosidase each Unit glucoamylase.

00 9810/1530

11. The method according to any one of claims 7 to 9 » characterized in that the enzymes are used in the enzyme system in a proportionate amount of action which 1.5 to 4.0 units of amylo-1,6-glucosidase is equivalent per unit of glucoamylase.

12. The method according to any one of claims 7 to 11, characterized in that a glucoamylase is used which is essentially free of transglucosidase.

13 · method according to any one of claims 7 to 12, characterized in that an enzyme system is used which, in addition to α-amylase in to inhibit the Recovery of the diluted starch contains sufficient quantities.

0 0 9810/1530

-50 --50 -

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