DE1926817A1

DE1926817A1 - Vacuum and process for their preparation

Info

Publication number: DE1926817A1
Application number: DE19691926817
Authority: DE
Inventors: Marc Bonneau; Pilet Dr Charles
Original assignee: INST ME IEUX
Current assignee: INST ME IEUX
Priority date: 1968-05-28
Filing date: 1969-05-27
Publication date: 1970-01-15
Also published as: LU56161A1; DE1966436B2; FR2009493A1; BE733615A; DE1966436A1; DE1966436C3; AT293612B; GB1248097A; CH513979A; IE33123L; IT1053697B; NL6908122A; IE33123B1

Description

Dr. Th. Berendt PatentanwaltDr. Th. Berendt patent attorney

693-P 8 München 80 693-P 8 Munich 80

Rottalstr. 9Rottalstrasse 9

Anmelder; INSTITUT JSERIEDX Applicant; INSTITUT JSERIEDX

Lyon (Rhone) / FrankreichLyon (Rhone) / France

'Vaccinen und Verfahren zu ihrer Herstellung¹¹ 'Vaccines and their method of manufacture ¹¹

Die Erfindung betrifft neue Vaccinen und Verfahren au ihrer Herstellung.The invention relates to new vaccines and methods thereof Manufacturing.

Vaccinen, die gegenwärtig laufend verwendet werden, verursachen eine Bildung von agglutinierenden AntikSrpem in äem Empfängerorganismus, die später von den durch eine normale Reaktion gegen eine Krankheit eines nicht geimpften Organismus gebildeten Antikörpern nicht unterschieden werden können.Vaccines that are currently in continuous use cause a formation of agglutinating AntikSrpem in the recipient organism, those later formed by the normal response to disease of an unvaccinated organism Antibodies cannot be distinguished.

Daraus ergibt sich, dass wenn man beispielsweise eine Kontrolluntersuchung von spezifischen Antikörpern einer Krankheit vornimmt, es praktisch nicht möglich ist festzustellen, ob man es mit einem kranken oder mit einem geimpften Organismus zu tun hat.It follows that, for example, if you have a check-up By making specific antibodies a disease makes, it is practically impossible to determine if you can has to do with a sick or vaccinated organism.

Eine derartige Verwechslung hat schwerwiegende Nachteile zur Folge, besonders in der Veterinärmedizin und bei Krankheiten mit einer langsamen Entwicklung, wobei die sichtbaren Symptome nicht gestatten, eine klare Unterscheidung eines kranken Organismus von einem geimpften Organismus vorzunehmen. Dieser Nachteil ist zum Beispiel besonders bei der Brucellose ausgeprägt. Such a mix-up has serious disadvantages, especially in veterinary medicine and disease with a slow development, the visible symptoms not allowing a clear distinction of a sick one Organism from a vaccinated organism. This The disadvantage is particularly pronounced in brucellosis, for example.

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Um diesem Nachteil abzuhelfen, wurde schon vorgeschlagen,solche nicht-agglutinogenen Vaccinen zu verwenden, die grundsätzlich keine Bildung von nachweisbar agglutinierenden Antikörpern im geimpften Organismus nach eich ziehen· Ein bekanntes Verfahren zur Herstellung von solchen nicht-agglutinogenen Vaccinen besteht darin, dass man die Herstellung der Vaccinen aus einem in "rauher" Phase kultivierten Mikrobenstamm vornimmt.In order to remedy this disadvantage, it has already been proposed that such non-agglutinogenic vaccines to use that in principle No formation of detectable agglutinating antibodies in the vaccinated organism. Refer to calibration · A well-known process for the production of such non-agglutinogenic vaccines consists of the production of the vaccines from a strain of microbes cultivated in the "rough" phase.

Die bekannten nicht-agglutinogenen Vaccinen befriedigen jedoch nicht vollständig, da sie trotz der Fabrikationskontrollen, denen sie unterworfen sind, in gewissen Fällen zur Bildung einer nicht zu vernachlässigenden Menge von agglutinierenden Antikörpern Anlass geben, was dazu führt, dass Organismen als krank betrachtet werden, die einfach geimpft worden waren.However, the known non-agglutinogenic vaccines are not completely satisfactory because, despite the factory controls, to which they are subjected, in certain cases to the formation of a not insignificant amount of agglutinating Antibodies give rise, which leads to organisms being considered sick that have simply been vaccinated.

Gemäss der Erfindung erhält man auf einfache Art und Weise nicht-agglutinogene Vaccinen, die in dem Empfänger Organismus keine Bildung von agglutinierenden Antikörpern veranlassen oder die nur die Bildung einer so geringen Menge von agglutinierenden Antikörpern verursachen, dass jede Verwechslung eines geimpften mit einem kranken Organismus vermieden wird.According to the invention, they are obtained in a simple manner non-agglutinogenic vaccines present in the recipient organism do not cause the formation of agglutinating antibodies or which only cause the formation of such a small amount of agglutinating antibodies Antibodies ensure that any mistake between a vaccinated and a sick organism is avoided.

Erfindungsgemäss ist es also möglich, auf einfache Art und Weise eine Vaccine so abzuwandeln, dass sie ihren agglutinogenen Charakter verliert, d.h. es so einzurichten, dass der geimpfte Organismus agglutinierende Antikörper in ausreichend geringer Menge enthält, dass diese nicht mit der Menge der durch die Reaktion des Organismus gegenüber der Krankheit hervorgerufenen agglutinierenden Antikörper verwechselt werden kann.According to the invention it is therefore possible in a simple manner to modify a vaccine so that it loses its agglutinogenic character, i.e. to adapt it to the vaccine Organism agglutinating antibodies in sufficiently low Amount contains that this does not match the amount of by the Reaction of the organism to the disease evoked agglutinating antibodies can be mistaken for.

Sie Vaccinen gemäss der Erfindung besitzen ebenfalls den Vorteil, dass sie eine den bisher bekannten Vaccinen allgemein überlegene Immunisierungskraft besitzen.You vaccines according to the invention also have the advantage that they have an immunizing power that is generally superior to the vaccines known to date.

Gegenstand der Erfindung ist eine neue Vaccine, die keine Bildung von agglutinierenden Antikörpern im Empfänger Organismus veranlasst, die im wesentlichen dadurch gekennzeichnet ist,The invention relates to a new vaccine which does not produce agglutinating antibodies in the recipient organism caused, which is essentially characterized by

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dass sie das !Produkt aus der Kombination von Antigenen, die der Krankheit entsprechen , gegen die immunisiert werden soll, mit dem der gleichen Krankheit entsprechenden Immunserum ist, wobei eine zur vollständigen Abeättigung der agglutinogenen Stellen der Antigene notwendige und ausreichende Menge des Immunserums in der Vaccine vorliegt.that it is the product of the combination of antigens that correspond to the disease against which immunization is to be carried out with the immune serum corresponding to the same disease, with an amount of the immune serum in the vaccine which is necessary and sufficient to completely saturate the agglutinogenic sites of the antigens is present.

Es ist hervorzuheben, dass die Vaccinen gemäss der vorliegenden Erfindung sich von Seroanavaccinen des bekannten Typus durch die !Datsache unterscheiden, dass die Seroanavaccinen zvan. Ziel haben, dem Empfängerorganismus die spezifischen Antikörper auf einmal zu liefern, die diesem die Bekämpfung der Krankheit erlauben, die ihn befallen hat. Hierbei ermöglichen die Antigene dem Organismus den Aufbau seiner eigenen Antikörper. Gemäss der Erfindung werden demgegenüber die Mengenverhältnisse der Antigene und des Immunserums genau bestimmt, damit eine nichtagglutinogene Vaccine erhalten wird.It should be emphasized that the vaccines according to the present invention differ from seroana vaccines of the known type by the fact that the seroana vaccines zvan. The aim is to provide the recipient organism with the specific antibodies that allow it to fight the disease that has attacked it. The antigens enable the organism to build up its own antibodies. According to the invention, on the other hand, the proportions of the antigens and the immune serum are precisely determined so that a non-agglutinogenic vaccine is obtained.

Weiterhin werden die Seroanavaccine des bekannten Typus im allgemeinen durch Inaktivierung eines Mikroorganismus durch Pormol und Hinzufügen des Serums gewonnen, während die Vaccine gemäss der Erfindung auf der Basis von Antigenen gebildet werden, die an sich inaktiv sind,,Furthermore, the Seroanavaccine of the known type in generally obtained by inactivating a microorganism by Pormol and adding the serum during the vaccine are formed according to the invention on the basis of antigens which are inherently inactive,

Gemäss der Erfindung wird vorzugsweise das verwendete Antigen mit einem heterologen Immunserum verbunden, d«h. einem Serum, das von einer anderen Tierart stammt als diejenige, für die es bestimmt ist. In bestimmten Fällen kann jedoch ein homologes Immunserum ebenfalls in Verbindung mit dem Antigen verwendet v/erden.According to the invention, the antigen used is preferably combined with a heterologous immune serum, ie. a serum, that comes from a different species than the one for which it is intended. In certain cases, however, a homologous Immune serum also used in conjunction with the antigen.

Die Erfindung ist nicht auf eine Vaccine, die den Organismus gegen eine bestimmte Krankheit immun macht, beschränkt, sondern kann vorteilhaft auf alle agglutinogenen Vaccinen angewendet werden. Somit kann die Erfindung zur Schaffung von Vaccinen sehr verschiedener Art dienen, wie Vaccinen gegen Brucellose, Colibazillen, Salmonellose, Staphylokokken, Streptokokken,The invention is not restricted to a vaccine which makes the organism immune to a specific disease, but can advantageously be applied to all agglutinogenic vaccines. Thus, the invention can be used to create vaccines of very different types, such as vaccines against brucellosis, coli bacilli, salmonellosis, staphylococci, streptococci,

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Tuberkolose, Keuchhusten, Cholera, Fest, New-Castle-Krankheit und Grippe usw.Tuberculosis, Whooping Cough, Cholera, Feast, New Castle Disease and flu etc.

Diese Vaccinen können ebenso gut sowohl in der Humanmedizin wie in der Veterinärmedizin Verwendung finden.These vaccines can be used equally well in both human medicine as used in veterinary medicine.

Das gemäße der Erfindung verwendete Antigen kann ein Antigen auf der Basis von Bestandteilen oder Extrakten von Mikroben sein. Es kann zum Beispiel aus Bakterien, die durch ein Inaktivierungsmittel,wie Pormol, Wärme oder Merthiolat>vollkommen inaktiviert worden sind, oder aus vollständigen lebenden Bakterien, die einem verdünnten oder avirulenten Stamm angehören, bestehen.The antigen used according to the invention may be an antigen based on components or extracts of microbes be. It can for example consist of bacteria caused by an inactivating agent such as Pormol, heat or merthiolate> have been completely inactivated, or from complete living Bacteria belonging to a dilute or avirulent strain exist.

" Das Antigen kann auch durch agglutinogene, einer Lyse unterworfenen Bakterien gebildet werden, wobei die Lyse zum Beispiel durch enzymatische Einwirkung, durch Ultraschall oder auf chemischem Wege mittels Produkten wie Basen oder Säuren erfolgt ist. Das Antigen kann ausserden ein aus Bakterienhüllen oder durch Extraktion erhaltenes agglutinogenes Antigen 3ein."The antigen can also be lysed by agglutinogenic agents Bacteria are formed, the lysis for example by enzymatic action, by ultrasound or on takes place chemically by means of products such as bases or acids is. The antigen can also consist of bacterial envelopes or agglutinogenic antigen obtained by extraction 3ein.

Das gemäss der Erfindung verwendete Serum kann entweder Blutserum oder Lactoserum sein. Es muss nur der einzigen Bedingung genügen, dass es eine entsprechend der Natur des Antigens der Vaccine ausreichende Dosis Antikörper enthält.The serum used according to the invention can be either blood serum or lactoserum. It just has to be the only condition It is sufficient that it contains a sufficient dose of antibodies in accordance with the nature of the antigen in the vaccine.

Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung von nicht-agglutinogenen Vaccinen, das im wesentlichen dadurch gekennzeichnet ist, dass man auf eine bestimmte Menge von agglutinogenen.Antikörpern, die der Krankheit entsprechen, gegen die immunisiert «erden soll, eine zur Absättigung der agglutinogenen Stellen des Antigens notwendige und ausreichend Menge Immunserum einwirken lässt.The invention also relates to a process for the production of non-agglutinogenic vaccines, essentially thereby is characterized by a certain amount of agglutinogenic antibodies that correspond to the disease, against which immunized «is supposed to be, one to saturate the agglutinogenic sites of the antigen necessary and sufficient Amount of immune serum to act.

Zur Bestimmung der notwendigen und ausreichenden Menge des Serums kann man folgendermassen vorgehen:To determine the necessary and sufficient amount of the Serums can be done as follows:

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Man giesst eine bestimmte Menge von agglutinogenem Antigen und jeweils unterschiedliche Kengen von agglutinierendem Immunserum in eine Reihe von Reagenzgläsern (Serie Nr. 1). Man hält die Gläser oit der Mischung aus Antigen und Serum auf 37⁰C. Darauf wird daa Serum in jedem Reagenzglas gewonnen, was durch Zentrifugieren durchgeführt werden kann, wenn das Antigen teilchen· förmig vorliegt, und durch Filtrieren und Extrahieren über eine chromatografieche Säule, wenn das Antigen löslich, ist.A certain amount of agglutinogenic antigen and in each case different denominations of agglutinating immune serum are poured into a series of test tubes (series no. 1). It holds the lenses oit the mixture of antigen and serum at 37 ⁰ C. Then is obtained daa serum in each test tube, which can be carried out by centrifugation when the antigen particles · present form, and filtering and extracting a chromatografieche column, when the antigen is soluble.

Die derart aus der Reagenzglasreihe (Serie Nr. 1) gewonnenen Seren werden in eine neue Reihe von Reagenzgläsern (Serie Nr. 2) gegossen und mit neuen vorbestimmten Mengen von sgglutinogeneia Antigen zusammengebracht. Man belässt die Röhren mit der neuen Mischung aus Antigen und Serum 24 Stunden bei '37⁰C. Die Reagenzgläser der Serie Nr. 2, in denen sich eine neue Agglutination zeigt, sind solche, in denen das verwendete Serum noch agglutinierende Antikörper im Überschuss enthielt. Die kleinste Serummenge, die eine erneute Agglutination der Antigene der Gläser der Serie Nr. 2 erlaubt, entspricht der notwendigen und ausreichenden Meng· von agglutinierendem Serum, die gleichsam zur Sättigung der gesamten ia der Serie Nr. 1 verwendeten agglutinierenden Antigene erforderlich ist.The sera thus obtained from the test tube series (series no. 1) are poured into a new series of test tubes (series no. 2) and combined with new predetermined amounts of sgglutinogeneia antigen. It leaves the tubes with the new mixture of antigen and serum for 24 hours at '37 ⁰ C. The test tubes of the series no. 2, in which a new agglutination itself shows, are those in which the serum used still contained agglutinating antibodies in excess . The smallest amount of serum that allows renewed agglutination of the antigens in the glasses of series no. 2 corresponds to the necessary and sufficient amount of agglutinating serum that is required to saturate all of the agglutinating antigens generally used in series no.

Diese Methode gestattet die leichte Bestimmung der Mengenverhältnisse der Antigene und des Immunserums in vitro, die angewendet werden müssen, um die Vaccine geaäss der Erfindung herzustellen.This method allows the easy determination of the proportions of the antigens and the immune serum in vitro which must be used to prepare the vaccines according to the invention to manufacture.

Zur Herstellung der Vaccine genügt es dann, die entsprechenden Mengen von Antigen und Imnuneerua, vorzugsweise unter Rühren einzustellen.To prepare the vaccine, it is then sufficient to add the appropriate amounts of antigen and immunorea, preferably with stirring to adjust.

Gemäes einer Abänderung des Verfahrens ist es ebenfalls möglich, die Antigene in Gegenwart eines Überschusses an Immunserum einzustellen, und danach, ζφα Beispiel durch Filtrieren,' das Serum abzutrennen, das anschliessend für andere Zwecke verwendet werden kann.According to a modification of the method, it is also possible to adjust the antigens in the presence of an excess of immune serum, and then, ζφα example by filtering, to separate the serum, which can then be used for other purposes.

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Beispielsweise konnte festgestellt werden, dass man eine.Vaccine gegen die Brucellose erhalten kann, die vollkommen nicht» agglutinogen ist und keine Bildung von agglutinierenden Antikörpern verursacht _t wobei die Vaccine 5 bis 10 Milliarden Bakterien je ml Serum und einen Titer von 80C0 internationalen Einheiten besitzt.For example, it was found that one eine.Vaccine can be obtained against brucellosis, which is not totally agglutinogen "and _t does not cause formation of agglutinating antibodies wherein the vaccine possesses 5 to 10 billion bacteria per ml serum and a titer of 80C0 international units.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert..The invention is illustrated in more detail by the following examples. Beispiel 1example 1

Herstellung einer nicht-agglutinogenen Antibrucellose-Vaccine mit Hilfe von Blutserum Production of a non-agglutinogenic antibrucellosis vaccine with the help of blood serum

1. Herstellung der Beatandteile A. Bakterien der Gattung Bruceila V 1. Production of the Beatand parts A. Bacteria of the genus Bruceila V

Man verwendet entweder einen Brusellastamm wie s.B. Bruce 11a abortus Sterne Buck 19 oder tintn Ubtr ein brucellosekrankee Tier isolierten Brucellastasa. DKr ausgewählte Brucellaeteaa wird auf Kulturmedien gesät» dis entweder flUseig (Serum-Bouillon, Iryptose-Qlyserin-Bouillon) oder fest (Serum-Geloss, Tryptoee-Glyzerin-Oelose) sind.One uses either a Brusella strain like s.B. Bruce 11a abortus star Buck 19 or tintn Ubtr a brucellosis sufferer Animal isolated brucellastasa. DKr selected Brucellaeteaa is sown on culture media either in liquid form (serum broth, Iryptose-Glyserin broth) or solid (serum geloss, Tryptoe-Glycerin-Oelose) are.

Gemüse der üblichen bakteriologischen Verfahrensweise besät «an den Brucellastanm über 20 sterile Kulturmedien .vom Typ einer Serum-Gelose-Schrägkultur in Roux-Kolben von einem Liter Inhalt. Die beaäten Kolben werden für 4 Tage in einen Brutschrank mit einer Temperatur von 37° C gesetzt· Danach werden die erhaltenen Bakterienkolonien geerntet, wobei man XO fei sterile isotonische physiologische Kochsalslösung in jeden Kolben giesst und die Bakterien in der Lösung suspendiert.Vegetables sown using the usual bacteriological method the Brucellastanm over 20 sterile culture media .of the type one Serum gelose slant culture in one liter Roux flask. The seeded flasks are placed in an incubator at a temperature of 37 ° C. for 4 days. The obtained flasks are then placed Bacterial colonies are harvested by pouring XO sterile isotonic saline solution into each flask and suspend the bacteria in the solution.

Die gesamten verschiedenen Bakteriensuspensionen werden in einer sterilen Flaeche gesammelt und es wird gemäss der üblichen VerdUnnungsmethode durch Einsäen auf Gelose eine Kulturreihe hergestellt.All the different bacterial suspensions are in one collected in a sterile area and a culture series is prepared according to the usual dilution method by seeding on gelose.

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Ouroh Verwendung von geeigneten Verdünnungen wird eine Bakterienauapeneion hergestellt, die etwa 100 Milliarden Bakterienje ml Suspension enthält. Man bringt 5 ml der Bakteriensuspension dieses Titers in ein Zentrifugenrohr. Biese Probe wird mit grosser Geschwindigkeit 30 Minuten lang .zentrifugiert. Ee werden zwei Phasen in dem Zentrifugenrohr erhalten, nämlichOuroh use of suitable dilutions will produce a bacterial auapeneion containing about 100 billion bacteria per ml Contains suspension. 5 ml of the bacterial suspension of this titer are placed in a centrifuge tube. This sample is with centrifuged at high speed for 30 minutes. Ee two phases are obtained in the centrifuge tube, viz

eine überstehende flüssige Phase A₁ die in einer auf 4⁰C gehaltenen Flasche aufgefangen und auf vollständige Abwesenheit von llikrobenkörpern geprüft wird, unda supernatant liquid phase A ₁ which is collected in a kept at 4 ⁰ C bottle and tested for complete absence of llikrobenkörpern, and

eine dickflüssige Phase B, die an Boden absetzt. Sie besteht aus Bakterienkörpern.a viscous phase B that settles on the bottom. she consists from bacterial bodies.

Die Phase B wird entnommen und erneut in 10 ml' einer auf 5 i> verdünnten Formaldehydlösung suspendiert. Die mit Formol inaktivierte Bakteriensuspension wird im Reagenzglas in ein Wasserbad von 58⁰C 30 Hinuten lang eingestellt und anschliessend Hinuten lang mit grosser Geschwindigkeit zentrifugiert. Man erhält zwei Phasen im Zentrifugenrohr, nämlichPhase B is removed and resuspended in 10 ml 'of a diluted to 5 i> formaldehyde solution. The inactivated with formaldehyde bacterial suspension is adjusted 30 Hinuten long in a test tube in a water bath at 58 ⁰ C and then centrifuged Hinuten at high speed. Two phases are obtained in the centrifuge tube, viz

eine überstehende flüssige Phase, die verworfen wird, unda supernatant liquid phase which is discarded, and

eine dickflüssige bakterienhaltige Phase B₁, die sich am Boden absetzt.a viscous phase B ₁ containing bacteria, which settles on the bottom.

Die Phase B₁ setzt sich aus durch Wärm· und Formol inaktivierten Brucellabakterien sueamaen.Phase B ₁ consists of brucella sueamaen inactivated by heat and formol.

Die Bakterienphase B₁ wird dann in ein Reagenzglas gebracht und in der gesamten Phase A wieder suspendiert. Diese letzte Bakteriensuspension ( A + B₁) wird ale Suspension C bezeichnet. Sie enthält annähernd fünfhundert Milliarden inaktivierte Bruoellabakterien in einem Volumen von etwa 5 ml.The bacterial _{phase B 1} is then placed in a test tube and resuspended in the entire phase A. This last bacterial suspension (A + B ₁ ) is called suspension C. It contains approximately five hundred billion inactivated Bruoella bacteria in a volume of about 5 ml.

Die Bakteriensuspension C bildet den ersten Bestandteil der erfindungsgenäasen Vaccine.The bacterial suspension C forms the first component of the Inventive vaccines.

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B. Aatibrucelloee-SerumB. Aatibrucelloee Serum

Ein Antibrucellose-Serum, das reich an Antikörpern ist, wird durch Hyperimaunisation eines erwachsenen gleich warmblütigen Tieres alt Hilfe einer agglutinogenen Antibrucellose-Vaeein® gewonnen.An anti-brucellosis serum that is high in antibodies will be used by hyperimaunization of an adult equally warm-blooded Animal's old help of an agglutinogenic Antibrucellosis Vaeein® won.

Man injiziert beispielsweise einem zweijährigen und von jeder Krankheit freien Hammel subkutan eine Suspension von Bruceila abortus Stamm Buck 19, die 20 Milliarden lebende Bakterien enthält. Eine gleiche Injektion nimmt man 8 und 14 Tage nach der ersten Vaccinierung vor. Zehn Tage nach der letzten Vaccineinjektion entnimmt man dem Tier nüchtern durch Funktion dar Halsvene Blut. Man entnimmt steril zweihundert ml Blut in eine Flasche,lässt das Blut gerinnen und fängt das Serum in einer neuen FlascL. auf. Das Serum wird durch Aufwärmen im Wasserbad bei 56⁰C 30 Minuten lang inaktiviert. Die Sterilität des Serums wird geprüft. Der Titer der agglutinierenden Antikörper des. Serums wird nach dem langsamen Serumagglutinationsverfahren von Wright im Röhrchen bestiamt. Ein agglutinierendes Serum mit einem Tit er von 8000 internationalen agglutinierenden Einheiten pro al stellt den zweiten Bestandteil der Vaccine dar·For example, a two year old mutton free from any disease is injected subcutaneously with a suspension of Bruceila abortus strain Buck 19 containing 20 billion live bacteria. The same injection is given 8 and 14 days after the first vaccination. Ten days after the last vaccine injection, blood is drawn from the animal on an empty stomach through the function of the jugular vein. Two hundred ml of blood are taken under sterile conditions into a bottle, the blood is allowed to clot and the serum is collected in a new bottle. on. The serum is inactivated by warming up in a water bath at 56 ^° C. for 30 minutes. The sterility of the serum is checked. The agglutinating antibody titer of the serum is determined in a tube using Wright's slow serum agglutination method. An agglutinating serum with a titre of 8000 international agglutinating units per al represents the second component of the vaccine

2. Vaccineheratsllumr2. Vaccine Herbs llumr

Die endgültige Herstellung der Vaccine wird folgendermassenThe final manufacture of the vaccine is as follows

durchgeführt ι carried out ι

Man gieest in ein· steril· Tl&eoh«You pour into a · sterile · Tl & eoh «

5 al der Suspension C und5 al of suspension C and

100ml dee agglutinierenden Antibruoellose-Seruna mit einem Titer von 8000 internationalen agglutinierenden Einheiten.100ml of agglutinating anti-crushing serum with a Titer of 8000 international agglutinating units.

Diese Mengenverhältnisse von Vaccine und Serum sind diejenigen, die gemäss der vorstehend beschriebenen Methode bestimmt worden sind.These proportions of vaccine and serum are those determined according to the method described above have been.

Das Gemisch wird 60 Minuten in ein Wasserbad einer TemperaturThe mixture is placed in a temperature water bath for 60 minutes

η bei 37⁰C 24 Sη at 37 ⁰ C 24 S

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von 37°C gestellt, dann bei 37⁰C 24 Stunden unter zeitweiligprovided by 37 ° C, then at 37 ⁰ C for 24 hours under temporary

unterbrochen«* und massig*» BUhren in einen Brutschrank gestellt und aasohliessend 24 Stunden auf 4⁰C gekühlt. Man erhält so die endgültige Suhstans von hundertfttnf ml Volumen, die fünfhundert Milliarden inaktivierte Bruoellabakterien enthält. Die Sterilität des Endproduktes wird geprüft. Die hergestellte Vaccine wird darauf den üblichen tJnschädlichkeits- und Wirksamkeit8-kontrollen unterworfen.found interrupted, "* and massive *» Buhren in an incubator and cooled aasohliessend 24 hours on 4 ⁰ C. The final suhstans of a hundred and fifty ml volume are thus obtained, which contains five hundred billion inactivated Bruoella bacteria. The sterility of the end product is checked. The vaccine produced is then subjected to the usual harmfulness and efficacy controls.

Ee wird ferner eine Spesialkontrolle sur Bestimmung der agglu-..tinogenen Eigeneohaften der Vaooine durchgeführt. Hierzu wird die Vaccine Tieren injiziert, von deren Serum man eine AgglutininiJbestiuBung durchfuhrt, beispielsweise 15, 30 und 45 Tage nach der Seruminjektion·Furthermore, a special check is carried out to determine the agglutinogenic inherent liability of the Vaooine. This is done the vaccine is injected into animals from whose serum an agglutinin test is carried out, for example for 15, 30 and 45 days after the serum injection

Beispiel 2 Herstellung einer nioht-agglutinogenen intibrucellose-Vacoine Example 2 Production of a non-agglutinogenic intibrucellosis vacoine e von I/fl e from I / fl

1> Herstell^fftff der Bes^sTTi teile1> Manufacture of the Bes ^ sTTi parts

A. Bakterien der Gattung Bruoell»A. Bacteria of the genus Bruoell »

Die Bakterien des Stammes Brucella B 19 werden gemäss Beispiel 1 hergestellt.The bacteria of the strain Brucella B 19 are according to the example 1 manufactured.

B. Anticruoalloae-LactOBorunB. Anticruoalloae-LactOBorun

Das Antibruoellose-Ieaotoserum wird in folgender, Weise hergestellt. Man geht aus von einem inaktivierten Stamm Brucella B 19 und eine« lebenden Staat Bruoella B 19« Bei einer ailohgebenden Kuh führt man die folgenden Injektionen durchs Im Zeitraum von zwei Wochen werden swei Injektionen je Woche von 100 Millionen inaktivierten Bruoella B 19 und ansohliessend innerhalte von drei Wochen swei Injektionen von 10 Millionen lebenden Brucell®. B IS ^;'-j« tioche vorgenommen. Alle Injektionen werden in eine Zits@ durchgeführt.The antibruoellosis leak serum is prepared in the following way. One assumes an inactivated strain Brucella B 19 and a "living state Bruoella B 19". The following injections are carried out in a cow giving birth. Over a period of two weeks, two injections per week are made of 100 million inactivated Bruoella B 19 and subsequently contained three weeks two injections of 10 million live Brucell®. B IS ^; '-j «tioche made. All injections are carried out in a Zits @.

Das Absiehen des ü@^äffl@ beginnt 43 Stunden nach der letzten Injektion. Man trennt die kleinen Buttermilchbestandteile durch Lab ab und extrahiert die Immunoglobulins durch Ausfällen mitWithdrawal of the ü @ ^ äffl @ begins 43 hours after the last injection. The small buttermilk components are separated Lab from and extracted the immunoglobulins by precipitating with

Ammoniumsulfat. . .Ammonium sulfate. . .

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Die Gegenwart von Antikörpern wird durch TiterbeStimmung bei der Serum-Agglutination bestimmt. Nach dem Beginn der Serumgewinnung werden weiterhin zweimal wöchentlich 10 Millionen lebender Bruceila vom Stamm B 19 injiziert.The presence of antibodies is determined by titer determination determined by serum agglutination. After starting serum collection, 10 million will continue twice a week live Bruceila from strain B 19 injected.

Unter diesen Bedingungen wird wahrnehmbar die höchste Konzentration von Antibrucelloee-Antikörpern in dem Serum ersielt. Man kann jedoch auch eine von diesen Bedingungen abweichende Serumgewinnung vornehmen, ohne deshalb vom Erfindungsgedanken abzuweichen.Under these conditions, the highest concentration of antibrucellous antibodies is perceptibly obtained in the serum. However, it is also possible to obtain serum which deviates from these conditions, without departing from the idea of the invention to deviate.

2. Vaccineherstellung2. Vaccine manufacture

Man stellt die Vaccine gemäss der Erfindung mit Hilfe der gemäss A hergestellten Antibrucellose-Veccine und dem geraäos B hergestellten Lectoserum her. Die erhaltene Vaccine weist ähnliche qualitative Eigenschaften auf, wie die gemäsB Beispiel 1 erhaltene Vaccine.The vaccine according to the invention is made with the aid of the A produced antibrucellosis Veccine and the geraäos B produced Lectoserum. The vaccine obtained is similar qualitative properties, such as those according to Example 1 received vaccine.

Beispiel 3Example 3 Here teilung einer nioht-agglutinogenen Antisalmonellen-VaccineHere division of a non-agglutinogenic antisalmonella vaccine

Man geht aus von eines Sterna Salmonella Pullorum Gallinarum, den aan auf gewöhnlicher Gelose kultiviert und nach 48 Stunden erntet.One assumes a Sterna Salmonella Pullorum Gallinarum, the aan cultivated on ordinary gelose and after 48 hours reaps.

Die Vaccine wird gemäss Beispiel 1 hergestellt. Man stellt ein Antisalnoaellen-Blutserum gemüse Beispiel 1 oder ein Anti» salfflonellen-Lactoeerua genäse Beispiel 2 her.The vaccine is produced according to Example 1. An anti-salmonella blood serum, vegetable example 1, or an anti-salfflonella-lactoeerua-like example 2 is produced.

Die Mengenverhältnisse von Vaccine und Serum werden wie in Beispiel 1 angegeben bestirnt. Bs wird ein Gemisch der entsprechenden Mengen hergestellt. Man erhält eine wirksame Antisalaonellen-Vaccine ohne Agglutisiations&raf t.The proportions of vaccine and serum are as in Example 1 indicated with a star. A mixture of the appropriate quantities is produced. An effective antisalaonella vaccine without agglutination is obtained.

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Example 4

Herstellung einer nicht-agglutinogenen Vaocine gegen den Virus der New Caatle~Kraakheit^_ ...,,. -,=.,«=*-«,Production of a non-agglutinogenic vaocine against the virus of the New Caatle strain ^ _ ... ,,. -, =., «= * -«,

Eine Viruskultur der Hew Castle-Kraakheit wird über Eier mit Huhnerembryonen in Alter von 10 Tagen durchgeführt. Man injiziert den Virus in die Chorioallantois des Eis, Die Eier werden im Brutschrank bei einer Temperatur von 38,5° 30 Stunden lang bebrütet, anschliessend aus dem Brutschrank herausgenommen und die bebrüteten Eier bei einer Temperatur von 4⁰C 12 Stunden lang aufbewahrt. Anschliessend wirr?. ChorioaHantoie-Plüssigkeit entnommen und der Virus ti ber durch Hamaggutination bsstimmt.Hew Castle infectious virus culture is carried out on eggs with chicken embryos at 10 days of age. Injecting the virus into the chorioallantoic of the egg, the eggs are incubated long in an incubator at a temperature of 38.5 ° 30 hours, then taken out from the incubator and stored the incubated eggs at a temperature of 4 ⁰ C for 12 hours. Then confused? ChorioaHantoie fluid is removed and the virus is corrected by hamaggutination.

Hit Hilfe des erhaltenen Virus stellt man sine Vaccine und ein Serum gem&fes Beispiel 1 her· Danach bestimmt man die entsprechenden Mengen und bereitet ein Gemisch; wie in Beispiel 1 angegeben ist.With the help of the virus obtained, you put your vaccine and a serum according to example 1. Then the appropriate ones are determined Quantities and prepares a mixture; as indicated in Example 1.

Es kann analog Beispiel 2 auch eine Vaccine gemäss der Erfindung mit Hilfe von Lactoserum hergestellt werden. Weitere Ausführungsformen zur Vaccineherstellung sind im Bahmen der Er- ■ findung durchführbar·Analogously to example 2, a vaccine according to the invention can also be used be made with the help of lactoserum. Other embodiments for vaccine production are within the scope of the ■ finding feasible

- Patentansprüche -- patent claims -

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Claims

PatentansprücheClaims

1. Vaccine, die keine Bildung von agglutinierenden Antikörpern im Empfängerorganismus veranlasst, dsdurch gekennzeichnet, dees sie das Produkt aus der Kombination von agglutinogenen Antigene», die der Krankheit entsprechen, gegen die iseunisiert werden soll, mit dem entsprechenden ImounseruB ist, wobei eine zur vollständigen Abeättigung der agglutinogenen Stellen dee Antigens notwendige und ausreichende Mange des Iaaunserums in der Vaccine vorliegt.1. Vaccines which do not induce the formation of agglutinating antibodies in the recipient organism, characterized by the fact that they are the product of the combination of agglutinogenic antigens, which correspond to the disease against which the iseunization is to be carried out, with the corresponding immunization, one of which is complete Abatement of the agglutinogenic sites of the antigen necessary and sufficient amount of the laun serum is present in the vaccine.

2. Vaccine nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie aus Antigenen und Immunseren der Brucellose,2. Vaccine according to claim 1, characterized in that it consists of antigens and immune sera of brucellosis, der Colibacillose, den S&laonellosen, den Staphylokokken- und Streptokokkanerkrankungen, der Tuberkoloae, des Keuchhustens, der Cholera, der Esst, der Kew-Caetle-Krankheit und/oder der Grippe zusammengesetzt ist und gegen diese Krankheiten immunisiert.the Colibacillose, the S & laonellose, the staphylococcal and Streptococcan diseases, tuberculosis, whooping cough, cholera, eating, Kew-Caetle disease and / or the Flu is composed and immunized against these diseases.

3. Vaccine nach Anspruch 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Antigen enthält, das auf der Basis von Bestandteilen oder Extrakten von Mikroben hergestellt worden ist. .3. Vaccine according to claim 1 to 2, characterized in that it contains an antigen that is on the Based on ingredients or extracts made by microbes. .

4. Vaccine nach Anspruch 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Antigen enthält, das durch voll-4. Vaccine according to claim 1 to 2, characterized in that it contains an antigen which is

' ständig, insbesondere Bit Fonaol, Wärme und/oder Merthiolat inaktivierte Bakterien oder durch einen abgeschwächten Stamm angehörende lebende Bakterien gebildet wird.'constantly, especially bit fonaol, heat and / or merthiolate inactivated bacteria or live bacteria belonging to a weakened strain.

5· Vaccine nach. Anspruch 1 bis 2, dadurch g e k e η η -ζ e i c h η e t, dass sie ein Antigen enthält, das durch agglutinogene, durch enzyaatische Einwirkung, durch Ultraschall oder durch chemische Einwirkung, insbesondere mit einer Base oder einer Säure, einer Xyse unterworfene Bakterien gebildet wird.5 · Vaccine after. Claim 1 to 2, characterized in that it contains an antigen which by agglutinogenic, by enzymatic action, by ultrasound or formed by chemical action, in particular with a base or an acid, xyzed bacteria will.

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6 «vaccine according to claim 1 to 2, characterized in that that it contains an antigen that is formed by bacterial envelopes.

7 «Vaocine according to claim 1 to 2, characterized in that it contains an antigen through Extraction of an agglutinogenic antigen has been obtained.

8. Vaccine according to claim 1 to 7 »characterized in that that it contains a heterologous serum.

9. Vaccine according to claim 1 to 7, characterized in that that it contains a homologous serum.

10. Vaeoine according to claim 1 bia 9 t characterized in that it contains a blood serum as Sana.

11. Vaeoine according to claim I bia 9, characterized g e k e η η - selohnet, daaa it contains a laotoserum as a serum

12 · The method lur producing a Vaooine according to claim 1 characterized bia ll _t gekennseiohnet that bringing together a agglutinogenea antigen and tin Immuneerum in proportions dia lur Abeättigung represents total agglutinating stables dta antigen by dam Twin serum is necessary and sufficient.

13. Verfahren aur Herstellung einer Vaeoine nach Anspruch 12, dadurch gekennseiohnet, dase man tine gegebene Menge τοη agglutinogenen Antigenen mit einem Ubaraohusa dta entsprechenden Immunseruma matmatntrri ngt und ansehliessend dan überechuss des Struma abtrennt·13. The method aur production of a vaeoine according to claim 12, known by the fact that one is given tine Amount of τοη agglutinogenic antigens with a Ubaraohusa dta corresponding immune serum matmatntri ngt and then dan Separates excess of the goiter

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