DE4204132C2

DE4204132C2 - Preparation for the production of vaccines for immunotherapy

Info

Publication number: DE4204132C2
Application number: DE4204132A
Authority: DE
Inventors: Rudolf Dr Pekar; Helmut Dr Winkelstroeter
Original assignee: Individual
Current assignee: Brander Marcel G Dr Med Brunnen Ch Cremer
Priority date: 1991-02-12
Filing date: 1992-02-12
Publication date: 1997-12-18
Anticipated expiration: 2012-02-13
Also published as: DE4204132A1

Description

Die Erfindung betrifft eine Aufbereitung für die Gewinnung von Vakzinen für eine Immuntherapie und aus der Aufbereitung hergestellte Vakzine.The invention relates to a preparation for the production of vaccines for Immunotherapy and vaccine made from the preparation.

Für eine Immuntherapie bei der Nachbehandlung von Tumorerkrankungen, sind Vakzine bekannt, die in einem flüssigen Träger aus menschlichen Tumorzellen ge wonnene, insbesondere wenigstens zum Teil einer Behandlung mit Neuraminidase unterzogene Zellpräparate enthalten. Für diese Zellpräparate werden von beliebigen Fremdspendern stammende Tumorgewebsarten verwendet, die bestimmte Antigene tragen, wobei Zellkulturen angelegt, aufgearbeitet und mit einem Zytostatikum inakti viert sowie schließlich lyophilisiert werden, um auf diese Weise Zellwandpräparate zu erhalten, die Antigene tragen.For immunotherapy in the aftercare of tumor diseases Vaccine known to ge in a liquid carrier from human tumor cells won, in particular at least in part, treatment with neuraminidase containing cell preparations. For these cell preparations, any Foreign donor-derived tumor tissue types used certain antigens wear, with cell cultures created, processed and inactivated with a cytostatic fourth and finally lyophilized in order to prepare cell wall preparations get that carry antigens.

Bei der Anlegung von Kulturen von Krankheitserregern und Mikroparasiten, die von einem bestimmten Patienten stammen, werden bisher im wesentlichen ausschließlich von fremden Quellen stammende Nährlösungen verwendet, wobei, unter anderem, aseptisch gewonnene, embryonale Proteinextrakte z. B. zellfreie, aus Gehirn, Herz, Lunge, Muskel, Leber, Haut von Tierembryos gewonnene Proteinextrakte eingesetzt werden. Solche Kulturen erleichtern eine Diagnose. Es ist auch bekannt, ähnliche Kulturen, die ebenfalls artfremde Proteinextrakte als Nährlösung enthalten, für die Züchtung spezifischer Krankheitserreger zu verwenden und dann die Krankheitserre ger nach bekannten Verfahren z. B. durch Erhitzung zu inaktivieren, um sie als Immunogen ver wenden zu können. Eine Vielzahl bekannter Impfverfahren, insbesondere gegen Viruserkrankungen, beruht auf der Her stellung entsprechender Vorkulturen. Nachteilig ist hier immer, daß das art- bzw. individuenfremde Eiweiß bei der Verwendung als Impfvakzine zu unerwünschten Allergiereak tionen seitens des Patienten führen kann.When creating cultures of pathogens and microparasites by come from a particular patient have so far been essentially exclusive nutrient solutions from foreign sources are used, whereby, among other things, aseptically obtained, embryonic protein extracts e.g. B. cell-free, from the brain, heart, Lung, muscle, liver, skin protein extracts obtained from animal embryos are used will. Such cultures facilitate diagnosis. It is also known to be similar Cultures that also contain foreign protein extracts as nutrient solution for which To use breeding specific pathogens and then the pathogen ger by known methods z. B. inactivate by heating to ver as an immunogen to be able to turn. A variety of known vaccination procedures, especially against viral diseases, is based on the her provision of appropriate pre-cultures. The disadvantage here always that the alien or individual protein in the Use as vaccine vaccine for unwanted allergy reactions tion on the part of the patient.

Bei der mikroskopischen Untersuchung von Nativblut fallen, insbesondere bei bestimmten Erkrankungen, und praktisch immer bei Präkanzerose und Kanzerose lebhaft bewegliche Formen auf, die normalerweise hämatologisch nicht beachtet werden. Es handelt sich hier um annähernd kugelige, stark bewegliche Gebilde, welche bei der Phasenkonstrastuntersuchung optisch als im Zentrum aufgehellte Ringe erscheinen. Für die Betrach tung von Kleinstformen dieser Gebilde eignet sich besonders die Dunkelfeld-Blutuntersuchung. Die Größe dieser Gebilde reicht von der Grenze des Sichtbaren bis zu etwa 1/3 jener von Erythrocyten. Übliche Blutfärbemethoden reihen diese Formen als große Randkörnchen der Erythrocyten oder als freie Howell-Jolly-Körperchen (rundliche Reste des verschwin denden Zellkernes im Protoplasma der Erythrocyten) ein. Das obligate Auftreten dieser Formen in Tumorpräparaten wird durch das Procedere der Färbung (Fixierung und Abpülen) ver hindert. Diese Formen können wachsen, sprossen, dich vermeh ren und sind bei geeigneter Präparation auch innerhalb der Erythrocyten zu sehen, wo sie solitär, paarig und in Gruppen auftreten und angenommen werden kann, daß sie das Zytoplasma der Erythrocyten fermentativ verbrauchen, wodurch dieses va kuolisiert wird. Auch unter Heranziehung dieser Beobachtun gen kann angenommen werden, daß das gesunde, insbesondere Jedoch das vom kranken Patienten stammende Blut symbiontische bzw. parasitäre Mikroorganismen mit wahrscheinlich mykoti scher Natur enthält. Bereits Enderlein hat auf die Phänomene des obligaten Blutparasitismus hingewiesen. Mit steigender Alkalität des Blutes und sinkender Abwehr des Organismus ist immer eine zunehmende Virulenz sowie ein Überwiegen des zel lulären Befalles gegenüber dem Serum festzustellen. Die be schriebenen Mikroorganismen werden auch innerhalb der weißen Blutkörperchen, vor allem auch innerhalb der Makrophagen, ge sehen. Da diese Mikroorganismen auch innerhalb der Zellorga nellen vital bleiben, scheint es, daß sie sich von der kör pereigenen Abwehr verborgen vermehren können. Von den einzel nen Wissenschaftlern werden die erwähnten Mikroorganismen verschieden bezeichnet. So spricht Enderlein von Endobionten, v. Bremer von Syphonosporen, Gerlach von Mikromyceten, Scheller von Viromyceten, Körnchen und Ringen usw. Die Be obachtung, daß Leukämie der Mäuse durch zellfreie Übertra gung übertragbar sind, hat schon Versuche ausgelöst im Blut oder Knochenmark zytopathogene Organismen nachzuweisen.When microscopic examination of native blood falls, especially with certain diseases, and practically always with precancerous and cancerous forms vividly mobile forms which are normally not considered in the haematological field. It is almost spherical, highly agile Formations, which are optical in the phase contrast examination appear as lightened rings in the center. For the viewer Small forms of these structures are particularly suitable the dark field blood test. The size of these structures ranges from the limit of the visible to about 1/3 of that of erythrocytes. Common blood staining methods rank these Forms as large marginal granules of the erythrocytes or as free Howell-Jolly bodies (rounded remnants of the vanishing the cell nucleus in the protoplasm of the erythrocytes). The obligatory occurrence of these forms in tumor preparations through the procedure of staining (fixation and rinsing) ver prevents. These shapes can grow, sprout, multiply ren and are also within the Erythrocytes can be seen where they are solitary, in pairs and in groups occur and can be assumed to be the cytoplasm of the erythrocytes are used fermentatively, whereby this is collapsed. Also using this observation gene can be assumed to be healthy, especially However, the blood from the sick patient is symbiotic or parasitic microorganisms with probably mycoti contains nature. Enderlein already has an eye on the phenomena of the obligatory blood parasitism. With increasing Alkalinity of the blood and decreasing defense of the organism increasing virulence and predominance of the zel lular infestation compared to the serum. The be Written microorganisms are also inside the white one Blood cells, especially within the macrophages, ge see. Because these microorganisms also exist within the cell organ remain vital, it seems that they are different from the body hidden defense can increase. From the individual The aforementioned microorganisms become scientists differently labeled. So Enderlein speaks of endobionts, v. Bremer von Syphonosporen, Gerlach von Mikromyceten, Scheller of viromycetes, granules and rings, etc. The Be observation that leukemia of the mice by cell-free transmission transferable has already triggered experiments in the blood or bone marrow to detect cytopathogenic organisms.

Pekar spricht in diesem Zusammenhang von "Onko-Mykoplas men" oder "Kommensalen" welche bei induzierender Milieu änderung, z. B. seelischer oder körperlicher Überbelastung starke äußere Reize, insbesondere Strahlung usw. aus Symbi onten entstehend, zusammen mit chronischen Reizen, an der Bildung von Tumoren mitbeteiligt sein könnten.In this context, Pekar speaks of "Onko-Mykoplas men "or" commensals "which in an inducing environment change, e.g. B. mental or physical overload strong external stimuli, especially radiation etc. from Symbi emerging, along with chronic stimuli, at the Formation of tumors could be involved.

Luc Montagnier berichtete auf dem 8. Virologiekongreß in Berlin 1990, daß die üblicherweise auf der Zelloberfläche parasitierenden Mykoplasmen in die Zelle eindringen können, wenn eine systemische Mykoplasmose besteht.Luc Montagnier reported on the 8th Virology Congress in Berlin 1990 that usually on the cell surface parasitic mycoplasma can enter the cell, if there is systemic mycoplasmosis.

Auch andere molekular-immunologische Untersuchungen haben gezeigt, daß auch das Krebsgeschehen zum Teil ein immuno logisches Problem ist, so daß ein immunologisch-therapeu tisches Vorgehen sinnvoll erscheint. Es wurden in diesem Zusammenhang verschiedene Arten der Immunisierung versucht. Von den am meist verwendeten Verfahren seien hier angeführt: Eine spezifisch aktive Immunisierung mit tumorassozierten Antigenen in Form von biologisch immunogenen Proteinen, die frei von Nukleinsäuren sind, eine Immunisierung mit von außen zugeführten monoklonalen Antikörpern als sogenannte Idiotyp zur Bildung von Antitumor-Antikörpern, z. B. des tu morassoziierten Antigen CA 125; eine Immunisierung mit Extrakten von klonierten Tumorzellen und deren Oberflächenantigenen; eine Immunisierung mit inaktivierten Extrakten aus ganzen Zellen und eine Immunisierung mit autologen, virusmodifizierten Tumor-Zellvakzinen. Die letztgenannte Möglichkeit ist in den DE 38 06 565 A und DE 39 22 444 A beschrieben. Dabei soll dem Prinzip nach durch die Körperreaktion auf das NDV-Virus eine Antigenreaktion auf die mit diesem Virus inkubiertem Tumor auslöser bewirkt werden. Die Karzinomzellen werden hier durch Bestrahlung inakti viert. Bei den bisherigen Verfahren werden immunogene Proteine, d. h. gentechnisch gewonnene, monogonale Antikörper, virusmodifizierte Tumorzellvakzine oder Extrakte aus klonierten Tumorzellen bzw. Extrakte aus ganzen Zellen verwendet, wobei die Tumorzellen von Fremdspendern stammen oder durch Klonen erhalten werden.Also have other molecular immunological studies shown that cancer is partly immuno logical problem is so that an immunological-therapeu tical approach seems reasonable. It was in this Related different types of immunization attempts. Of the most commonly used processes are listed here: A specifically active immunization with tumor-associated Antigens in the form of biologically immunogenic proteins that are free of nucleic acids, immunization with of externally supplied monoclonal antibodies as so-called Idiotype for the formation of anti-tumor antibodies, e.g. B. the tu morassociated antigen CA 125; immunization with cloned extracts Tumor cells and their surface antigens; immunization with inactivated Extracts from whole cells and immunization with autologous, virus-modified Tumor cell vaccines. The latter possibility is in DE 38 06 565 A and DE 39 22 444 A. described. The principle is based on the body reaction the NDV virus has an antigenic response to the tumor incubated with this virus triggers are effected. The carcinoma cells are inactivated here by radiation fourth. In previous methods, immunogenic proteins, i.e. H. genetically engineered obtained monogonal antibodies, virus-modified tumor cell vaccines or extracts from cloned tumor cells or extracts from whole cells, the Tumor cells come from external donors or are obtained by cloning.

Hauptaufgabe der Erfindung ist es, eine Aufbereitung anzugeben, die für die Gewin nung von Vakzinen für eine Immuntherapie geeignet ist. Eine Teilaufgabe der Erfin dung besteht in der Schaffung einer neuen Vakzine für die Immuntherapie spezifischer Tumorerkrankungen.The main object of the invention is to provide a preparation for the profit vaccine is suitable for immunotherapy. A sub-task of the Erfin is to create a new vaccine more specifically for immunotherapy Tumor diseases.

Die Hauptaufgabe der Erfindung wird bei einer Aufbereitung nach Patentanspruch 1 gelöst.The main object of the invention is in a preparation according to claim 1 solved.

Eine wesentliche Überlegung der Erfindung besteht darin, daß die Aufbereitung un mittelbar aus körpereigenen Stoffen des Patienten hergestellt wird, also spezifisch auf den jeweiligen Patienten abgestimmt ist. Dabei ist es möglich, mit relativ einfachem Laboratoriumsaufwand zu arbeiten, so daß für die Herstellung der Aufbereitung und der aus ihr gewinnbaren Vakzine übliche medizinische Laboratorien in Frage kommen, wodurch erst der tatsächliche Einsatz der aus der Aufbereitung gewonnenen Vakzine beim jeweiligen Patienten organisatorisch einfach möglich wird.An important consideration of the invention is that the preparation un is produced indirectly from the patient's own substances, that is, specifically is tailored to the respective patient. It is possible with relatively simple Laboratory effort to work, so that for the preparation of the preparation and the medical laboratories customary from the vaccine that can be obtained from it, only then the actual use of the vaccine obtained from the preparation organizationally easy for each patient.

Wenn man bei der Herstellung von Vakzinen aus der Aufbereitung Allergiereaktionen des Patienten weitestgehend vermeiden will, kann man eine Kultur nach Anspruch 2 für die Aufbereitung verwenden. Dabei wird grundsätzlich verhindert, daß fremde Mikroorganismen oder Eiweißbestandteile in die Kultur eingeschleppt werden. If you have allergy reactions in the preparation of vaccines from the reprocessing of the patient as far as possible, a culture according to claim 2 can be used use for preparation. This basically prevents strangers Microorganisms or protein components are introduced into the culture.

Eine weitere Möglichkeit ist im Anspruch 3 angegeben, wobei durch die Ausgestaltung nach Anspruch 4 eine weitere Vereinfachung erzielt wird, da dem Patienten jeweils nur eine Blutprobe entnommen werden muß.Another possibility is specified in claim 3, whereby by the design According to claim 4, a further simplification is achieved because the patient only a blood sample must be taken.

In manchen Fällen ist es allerdings vorteilhafter, wenn man in der Aufbereitung ein Nährmedium gemäß Anspruch 5 verwendet. Hier kann man sogar bewußt, insbesonde re bei einer ergänzenden Karzinomtherapie davon ausgehen, daß diese embryonalen Proteinextrakte eine Allergiereaktion auslösen, wobei man eine Koppelung dieser Allergiereaktion mit der Antikörperreaktion auf die aus den Mikroorganismen gewonne ne Vakzinebestandteile zur Verstärkung der Gesamtwirkung anstrebt.In some cases, however, it is more advantageous if one is used in the preparation Culture medium according to claim 5 is used. Here you can even consciously, especially re with a complementary carcinoma therapy assume that these embryonic Protein extracts trigger an allergy reaction, with a coupling of these Allergy reaction with the antibody response to those obtained from the microorganisms strives for vaccine components to enhance the overall effect.

Ein Nährmedium nach Anspruch 5 wird sich vielfach auch empfehlen, wenn man in der Aufbereitung eine Kultivierung von vom Patienten stammenden Gewebepräparaten, insbesondere von Präparaten aus Karzinomen anstrebt.A nutrient medium according to claim 5 will also be recommended in many cases if you are in the Preparation a cultivation of tissue preparations originating from the patient, especially carcinoma preparations.

Unter Heranziehung der oben dargelegten, grundsätzlichen Überlegungen können ver schiedene, wenigstens zum Teil bekannte Verfahren für die Herstellung der Aufberei tung und der Vakzine nach Anspruch 6 eingesetzt werden. Dabei lassen sich Vakzine in entsprechender Verdünnung sowohl für die enterale als auch die parenterale Appli kation herstellen. In beiden Applikationsformen wird die Vakzine zur Unterstützung der Therapie bei Tumorerkrankungen und Auto-Aggressionskrankheiten eingesetzt.Using the basic considerations set out above, ver different, at least partially known processes for the preparation of the preparation device and the vaccine according to claim 6 are used. It can be vaccine in appropriate dilution for both enteral and parenteral appli manufacture cation. In both application forms the vaccine is used to support the Therapy for tumor diseases and auto-aggression diseases used.

Weitere Einzelheiten und Vorteile des Erfindungsgegenstandes entnimmt man der nachfolgenden Beschreibung von zwei möglichen Ausführungsbeispielen, wobei das erste Ausführungsbeispiel sich mit der Herstellung und dem Einsatz einer Aufbereitung aus dem Eigenblut und das zweite Ausführungsbeispiel mit der Herstellung einer Aufbereitung unter Verwendung operativ gewonnener Tumorpräparate gefaßt. Further details and advantages of the subject matter of the invention can be found in following description of two possible embodiments, the first embodiment deals with the manufacture and use of a preparation from the own blood and the second embodiment with the production of a Preparation summarized using surgically obtained tumor preparations.

example 1

Von einem nüchternen Patienten wurden 10 cm³ Blut aus der Vene abgenommen. 2 cm³ davon werden mit 4 cm³ Aqua ad injec tionem gemischt und gut geschüttelt, so daß Hämolyse (Plat zen der Blutzellen) auftritt.10 cm³ of blood were taken from the patient Vein removed. 2 cm³ of it with 4 cm³ Aqua ad injec tionem mixed and shaken well so that hemolysis (plat blood cells) occurs.

Das so gewonnene Hämolysat wird drei Tage bei 37°C im Brut schrank inkubiert.The hemolysate obtained in this way is incubated for three days at 37 ° C incubated in the cabinet.

Die restlichen 8 cm³ Blut werden zur Gewinnung von Serum ver wendet. 2 ml dieses Serums wird in Fläschchen abgefüllt und ebenfalls inkubiert.The remaining 8 cm³ of blood are used to obtain serum turns. 2 ml of this serum is filled into vials and also incubated.

Nach drei Tagen wird das Hämolysat zentrifugiert, durch ein Filter mit der Porengröße <0,3 Nanometer steril filtriert und nach mikroskopischer Kontrolle, um das Vorhandensein von Zellen sicher ausschließen zu können, werden 2 ml des fil trierten Hämolysates in das Serum als homologes Nährmedium eingebracht.After three days, the hemolysate is centrifuged through a Filters with a pore size of <0.3 nanometers are sterile filtered and after microscopic inspection to check for the presence of To be able to exclude cells safely, 2 ml of the fil hemolysates entered the serum as a homologous nutrient medium brought in.

Das Hämolysat erscheint bei der mikroskopischen Nachkontrolle im Phasenkontrastverfahren zellfrei, zeigt aber bei der Be trachtung mittels Dunkelfeld-Technik ein ganz anderes Bild. Es zeigen sich in großer Anzahl virusähnliche Kleinstformen an der Grenze der mikroskopischen Sichtbarkeit. Dabei han delt es sich offensichtlich um Vorstufen von sich später in der Kultur entwickelnden mykoplasmaähnlichen Wuchsformen.The hemolysate appears during the microscopic follow-up inspection cell-free in the phase contrast method, but shows in the case of loading a completely different picture using dark field technology. A large number of virus-like tiny forms can be seen at the limit of microscopic visibility. Here han it is obviously a preliminary stage of itself later the mycoplasma-like growth forms developing in culture.

Die erwähnte Mischung aus 2 cm³ Serum und 2 cm³ Hämolysat bleibt für drei Tage im Brutschrank, wobei ein Teil dieser Kultur mit sterilem Paraffinöl überschichtet wird, um auch Formen zu züchten, die nur im anaeroben Milieu gedeihen. Schon nach wenigen Stunden wachsen jene schon besprochenen Mikroorganismen, die im Phasenkontrastverfahren als myko plasmaähnliche Körper, also eindeutig als Erreger zu erken nen sind, die aus der Blutaufbereitung entstanden sind.The mentioned mixture of 2 cm³ serum and 2 cm³ hemolysate remains in the incubator for three days, part of which Culture is overlaid with sterile paraffin oil, too To breed forms that only thrive in the anaerobic environment. After just a few hours, those already discussed grow Microorganisms in the phase contrast process as myko plasma-like bodies, so to be clearly recognized as pathogens are those that have arisen from blood processing.

Gewöhnlich befindet sich die Kulter nach Ablauf von drei Tagen auf dem Höhepunkt der Entwicklung. Es werden dann die aerobe und die anaerobe Kultur zusammengeführt, der Über stand verworfen und der Bodensatz mit 5 cm³ physiologischer Kochsalzlösung aufgefüllt. Es ist auch möglich, die beschrie bene Kultur durch Überimpfen des Bodensatzes in frische wie der aus dem Serum erzeugte Nährlösung ein- oder mehrmals zu wiederholen, wobei auch hier aerobe und anaerobe Bedingungen eingehalten werden. Die schließlich erhaltene Suspension des Bodensatzes in physiologischer Kochsalzlösung wird für die Verwendung als spezifisches Immunogen (hinsichtlich der myko plasmaähnlichen Körper) und als unspezifisches Immunogen (hin sichtlich der veränderten Zytoplasmafraktion) zwei Stunden lang bei 70°C inaktiviert. Schließlich werden aus dieser Sus pension sechs Verdünnungsstufen für die parenterale Applika tion und nach den Regeln der Homöopathie sieben Potenzierun gen für die enterale Verabreichung hergestellt.The cult is usually after three Days at the peak of development. Then it will be the aerobic and anaerobic culture merged, the over was discarded and the sediment with 5 cm³ physiological Saline filled up. It is also possible to describe the culture by inoculating the sediment in fresh like the nutrient solution generated from the serum one or more times repeat, again with aerobic and anaerobic conditions be respected. The suspension of the finally obtained Sediment in physiological saline is used for Use as a specific immunogen (with regard to myko plasma-like body) and as a non-specific immunogen (hin the changed cytoplasmic fraction) two hours long inactivated at 70 ° C. Eventually this Sus pension six dilution levels for parenteral applications tion and seven potentiations according to the rules of homeopathy gene for enteral administration.

application

Um die immunologisch relevanten Rezeptoren aller drei Keim blätter erfassen zu können, wird bei einer möglichen Art der Anwendung die Vakzinebehandlung sowohl enteral als auch par enteral durchgeführt. Es wird mit der höchsten Stufe begon nen. Für die parenterale Behandlung erfolgt die Applikation subcutan und intracutan. Als Dosis wird für die erste Injek tion 1/2 ml der "Stärke 6" empfohlen. Nach einer Woche kann auf 1 ml gesteigert werden. Wird diese Dosis gut vertragen, kann im wöchentlichen Abstand rasch auf eine Injektion der "Stärke 3" übergegangen werden. Ab "Stärke 3" sollte nur mehr alle drei Wochen 1 ml subcutan gegeben werden.To the immunologically relevant receptors of all three germs To be able to record sheets is possible with a possible type of Application of vaccine treatment both enterally and par performed enterally. It starts with the highest level nen. The application is carried out for parenteral treatment subcutaneously and intracutaneously. The dose is given for the first injection tion 1/2 ml of "strength 6" recommended. After a week you can be increased to 1 ml. If this dose is well tolerated, can be promptly injected at weekly intervals "Strength 3" to be transferred. From "strength 3" should only more 1 ml subcutaneously every three weeks.

Gleichzeitig wird vom Patienten die Einnahme der homöopa thisch aufbereiteten Potenzierungen vorgenommen. Dabei wird mit der höchsten Potenzierung und 3 × 5 Tropfen täglich be gonnen. Über den Verdauungstrakt wird das immunologische Substrat der Abwehr, wie der Waldeyer′sche Rachenring und die Peyer′schen Plaques angesprochen.At the same time, the patient stops taking homeopathy prepared potentizations. Doing so with the highest potentiation and 3 × 5 drops daily fine. This becomes immunological via the digestive tract Defense substrate, such as the Waldeyer throat ring and addressed the Peyer plaques.

Störende Nebenerscheinungen konnten bisher nicht beobachtet werden, was auch nicht zu erwarten war, da es sich bei der Aufbereitung bzw. Vakzine um Eigenantigen handelt.So far, disturbing side effects have not been observed , which was also not to be expected, since it was the Preparation or vaccine is self-antigen.

Therapy outlook

Die aus den Eigenblutaufbereitungen gewonnenen Vakzine wer den seit 1 Jahr in einer Multi-Centerstudie geprüft. Derzeit wurden 70 Einzelfälle in dieser Studie dokumentiert mit einer Endauswertung ist Anfang 1992 zu rechnen. Bei der emp fohlenen, oben beschriebenen Anwendungsmodalität kam es in keinem Fall zu Nebenerscheinungen. Durch die erzielte Akti vierung des Immunsystems wurden bei chronisch Kranken Ver besserungen des Krankheitsverlaufes erzielt, wobei besonde re Therapieerfolge bei Krebs, insbesondere den Leukämiefor men und bei Auto-Aggressionskrankheiten (z. B. Lupus erythe matodes, Myositiden, Sklerodermie und PCP) erzielt wurden. Es wird angenommen, daß diese Erfolge auch mit der unspezi fischen Immunmodulation zusammenhängen. Ferner wird angenom men, daß ein Teil des erzielten Erfolges darauf zurückzu führen ist, daß durch die Filtration nur die vitalsten Er reger in das homologe Nährmedium gelangen, wobei sich dann bei der Kultur die erwünschten, obligaten patientenspezifi schen Mikroorganismen bilden können.The vaccine obtained from the autologous blood preparation tested in a multi-center study for 1 year. Currently 70 individual cases were documented in this study a final evaluation is expected in early 1992. At the emp foal, application modality described above it came in no side effects. By the achieved Akti The immune system was developed in chronically ill ver Improvements in the course of the disease achieved, with particular Successful therapy for cancer, especially leukemia and auto-aggression diseases (e.g. Lupus erythe matodes, myositids, scleroderma and PCP) were achieved. It is believed that these successes also with the unspecific fish related immune modulation. It is also assumed that part of the success achieved can be traced back to it lead is that by filtration only the most vital Er get lively into the homologous nutrient medium, whereby then the desired, obligatory patient-specific culture can form microorganisms.

Nach letzten Untersuchungen (November 1991) von Frau Professor Kirchhoff am Institut für Mikrobiologie der Uni versität Hannover sind die beschriebenen Mikroorganismen keine Mykoplasmen.According to the last investigations (November 1991) by Ms. Professor Kirchhoff at the University's Institute for Microbiology Hannover University are the described microorganisms no mycoplasma.

Eine vollständige Identifikation und Klassifikation der auf tretenden Mikroorganismen war bisher noch nicht möglich. In der Folge ist an eine gentechnologische Klassifikation und an eine elektromikroskopi sche Klassifikation gedacht.A full identification and classification of the emerging microorganisms has not yet been possible. In the consequence is a genetic engineering classification and an electromicroscope Classification thought.

Example 2

Ein operativ gewonnenes Tumorpräparat wird nativ ohne jeden Zusatz unter sterilen Kautelen ehemöglichst so präpariert, daß mit Schere und Pinzette unspezifische Ge websanteile entfernt und das Tumorgewebe, das beispielsweise einen Gewichtsanteil von 8 bis 10 g besitzt, in kleine Stücke zerlegt wird. Diese werden mit 12 ml steriler Kochsalzlösung suspendiert und mit einem Turbogenerator (10 l, 20.000 U/min Ultra- Turrax, IKA-Werke, Staufen/Breisgau) so lange zerkleinert, bis die mikroskopische Kontrolle nur noch Zellfragmente zeigt. Die Kontrolle erfolgt z. B. unter Ölimmersion mittels eines Phasenkontrastmikroskopes. Wenn die mikrofoskopische Prüfung zufrie denstellende Ergebnisse ergibt, wird zentrifugiert, wonach die Satzoberschicht über dem Bodensatz dekantiert wird.A surgically obtained tumor preparation becomes sterile without any additive Kautelen previously prepared so that with scissors and tweezers unspecific Ge Removed web parts and the tumor tissue, for example a part by weight from 8 to 10 g, is broken down into small pieces. These become sterile with 12 ml Saline solution suspended and with a turbogenerator (10 l, 20,000 rpm ultra- Turrax, IKA-Werke, Staufen / Breisgau) until the microscopic Control only shows cell fragments. The control takes place e.g. B. under oil immersion using a phase contrast microscope. If the microscopic examination was successful results, centrifugation is carried out, after which the top layer is over the sediment is decanted.

Aus dem Bodensatz und einem Teil des Obersatzes des Zentrifugates können Teil vakzine für eine verstärkte Tumortherapie hergestellt werden. Dies ist Gegenstand der Trennanmeldung P 42 44 894 aus der vorliegenden Anmeldung und wird daher nicht näher erläutert. Für die Herstellung einer Aufbereitung nach der vorliegenden Erfin dung und einer daraus gewonnenen Vakzine wird ein Teil des Obersatzes des Zen trifugates verwendet, der an sich die polymorphen, körpereigenen Mikroorganismen aber auch zytoplasmatische Bestandteile der Zelle enthält. Für die Herstellung der Vakzine werden beim Ausführungsbeispiel zwei bis drei Fläschchen à 10 ml mit einer Kulturlösung aus aseptisch gewonnenen Extrakten aus verschiedenen Organen (Herz, Muskel, Lunge, Leber, Haut) eines Schafembryos, zellfrei, Proteingehalt 30 mg pro 1 ml Extrakt in der Lösung einer sterilen physiologischen Kochsalzlösung zur Hälfte gefüllt und mit 2 ml der aus dem Obersatz des Zentrifugates gewonnenen Zytroplas malösung versetzt. In einem Fläschchen wird die Lösung zur Gewinnung einer anaer oben Kultur mit 0,5 ml entkeimtem Paraffinöl überschichtet. Nach vier Tagen wird die Hälfte des Fläschcheninhaltes, vor allem der Bodensatz, auf neue Kulturfläschchen übertragen und dieser Vorgang wird dreimal wiederholt. Nach der letzten Passage wird scharf zentrifugiert, der Obersatz des Zentrifugates verworfen und der verbleibende Untersatz in 5 ml physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Danach erfolgt eine In aktivierung im Wasserbad für wenigstens zwei Stunden bei 70°C und schließlich der Zusatz von verschiedenen Adjuvans.Part of the sediment and part of the top part of the centrifugate can be used vaccine for enhanced tumor therapy. This is the subject of Separation application P 42 44 894 from the present application and is therefore not explained in more detail. For the preparation of a preparation according to the present invention dung and a vaccine obtained from it becomes part of the top sentence of Zen trifugates, which in itself is the polymorphic, endogenous microorganisms but also contains cytoplasmic components of the cell. For the production of the In the exemplary embodiment, vaccines are two to three vials of 10 ml each with one Culture solution from aseptically obtained extracts from various organs (heart, Muscle, lungs, liver, skin) of a sheep embryo, cell-free, protein content 30 mg per 1 ml extract in half a solution of sterile physiological saline filled and with 2 ml of the cytroplas obtained from the top of the centrifugate mal solution offset. In a vial, the solution for obtaining an anaer Culture overlaid with 0.5 ml of sterilized paraffin oil. After four days, the Half of the vial content, especially the sediment, on new culture vials transmitted and this process is repeated three times. After the last passage centrifuged sharply, discarded the top of the centrifugate and the remaining Base suspended in 5 ml of physiological saline. Then an In activation in a water bath for at least two hours at 70 ° C and finally the Addition of various adjuvants.

Es liegt nun eine Vakzine vor, die ebenso wie die Vakzine nach Beispiel 1 verwendbar ist oder die auch in einer Menge von 1 ml Subkutan in Abständen von 14 Tagen verabreicht werden kann. Eine subkutane Anwendung ist vor allem auch bei einer Ver wendung der Vakzine als Teilvakzine zu den oben beschriebenen, vorher anzuwen denden Vakzinen vorgesehen. There is now a vaccine which, like the vaccine according to Example 1, can be used is or also in an amount of 1 ml subcutaneously every 14 days can be administered. Subcutaneous use is especially important for ver Application of the vaccine as a partial vaccine to those described above, to be used beforehand end vaccines provided.

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Weber, A.: Über die Ursache der Krebskrankheit. Verlag Gebr. Parcus KG München.Weber, A .: About the cause of cancer. Publisher Gebr. Parcus KG Munich.

Claims

1. Preparation for obtaining vaccines for immunotherapy, characterized in that the preparation consists of a culture of the patient's own, polymorphic microorganisms in a nutrient medium, a preparation containing the microorganisms used for inoculating the nutrient medium by cultivation is obtained from autologous blood or from tissue preparations originating from the patient in a liquid medium and by subsequent filtration free of complete body cells.

2. Preparation according to claim 1, characterized in that the culture as a contains homologous nutrient medium from serum obtained from the patient's own blood.

3. Preparation according to claims 1 and 2, characterized in that the the body's own microparasites are obtained from an autologous blood hemolysate.

4. Preparation according to claims 1 to 3, characterized in that Se rum and hemolysate can be obtained from the same blood sample.

5. Preparation according to claim 1, characterized in that the nutrient medium contains aseptically obtained, embryonic protein extracts.

6. vaccine produced from a preparation according to one of claims 1 to 5, characterized in that they are the body's own derived from the culture Contains microparasites in inactivated form.