DE1926817B

DE1926817B - Vaccines containing rubella antigens

Info

Publication number: DE1926817B
Authority: DE
Inventors: Charles Prof.Dr. Alfortville Val-de-Marne; Bonneau Marc Dr. Tassin Rhone; Pilet (Frankreich)
Original assignee: Institut Merieux SA
Current assignee: Institut Merieux SA

Description

Die Erfindung betrifft eine Brucellose-Antigene enthaltende Vaccine.The invention relates to a vaccine containing brucellosis antigens.

Aus der deutschen Auslegeschrift 1 148 703 ist die Herstellung einer Brucellose-Vaccine bekannt, wobei eine an Antigenen reiche Bakteriensuspension aus einer Brucellakultur extrahiert wird. Da diese Vaccine agglutinogene Antigene enthält, verursacht sie eine Bildung von agglutinierenden Antikörpern in dem Empfängerorganismus, die später von den durch eine normale Reaktion gegen eine Krankheit eines nicht geimpften Organismus gebildeten Antikörpern nicht unterschieden werden können. Hierdurch ist es praktisch nicht möglich, festzustellen, ob man es mit einem kranken oder mit einem geimpften Organismus zu tun hat, was zu Fehldiagnosen führen kann.The German Auslegeschrift 1 148 703 the production of a brucellosis vaccine is known, wherein a bacterial suspension rich in antigens is extracted from a Brucella culture. Because this vaccine contains agglutinogenic antigens, it causes the formation of agglutinating antibodies in the Recipient organism that is later affected by a normal response to a disease of one not antibodies formed in the vaccinated organism cannot be distinguished. This makes it practical not possible to determine whether you are dealing with a sick organism or with a vaccinated organism has to do, which can lead to misdiagnosis.

Es wurde gemäß der deutschen Auslegeschrift 1265 916 schon vorgeschlagen, solche Brucellose-Vaccinen zu verwenden, die weder toxisch noch agglutinogen sind, also keine Bildung von nachweisbar agglutinierenden Antikörpern im geimpften Organismus nach sich ziehen, weil die Agglutininbildung unerwünscht sei. Solche nicht agglutinogenen Vaccinen werden aus Mutanten von Brucella-Stämmen, vorzugsweise aus einem in »rauher« Phase kultivierten Mikrobenstamm hergestellt.According to the German Auslegeschrift 1265 916, such brucellosis vaccines have already been proposed to use that are neither toxic nor agglutinogenic, so no formation of detectable agglutinating antibodies in the vaccinated organism, because the agglutinin is undesirable. Such non-agglutinogenic vaccines are obtained from mutants of Brucella strains, preferably made from a strain of microbes cultivated in the "rough" phase.

Die bekannten nicht agglutinogenen Vaccinen befriedigen jedoch nicht vollständig, da sie trotz der Fabrikat'onskontrollen, denen sie unterworfen sind, in gewissen Fällen zur Bildung einer nicht zu vernachlässigenden Menge von agglutinierenden Antikörpern Anlaß geben, was dazu führt, daß Organismen als krank betrachtet werden, die einfach geimpft worden waren. Es wurde gefunden, daß eine Brucellose-Antigene enthaltende Vaccine, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie soviel Brucellose-Immunserum enthält, daß alle agglutinogenen Stellen des Brucellose-Antigens abgesättigt sind, in dem Empfängerorganismus keine oder nur so wenig agglutinierende Antikörper bildet, daß jede Verwechslung eines geimpften mit einem kranken Organimus vermieden wird.However, the known non-agglutinogenic vaccines are not completely satisfactory because, despite the Manufacture controls to which they are subject, in certain cases to the formation of a not to be neglected Amount of agglutinating antibodies give rise to what leads to organisms considered sick who had simply been vaccinated. It was found that a brucellosis antigens containing vaccine, which is characterized by the fact that it contains so much brucellosis immune serum contains that all agglutinogenic sites of the brucellosis antigen are saturated in the recipient organism forms no or only so few agglutinating antibodies that one can be confused with vaccinated with a sick organism is avoided.

Die erfindungsgemäße Brucellose-Antigene enthaltende Vaccine verliert ihren agglutinogenen Charakter derart, daß die agglutinierenden Antikörper im geimpften Organismus nicht mit der Menge der durch die Reaktion des Organimus gegenüber der Krankheit hervorgerufenen agglutinierenden Antikörper verwechselt werden können. Außerdem besitzt sie den Vorteil, daß ihre Immunisierungskraft den bisher bekannten Brucellose-Vaccinen allgemein überlegen ist, ja sogar eine unspezifische Immunisierung auch gegen andere Krankheiten möglich ist.Containing the brucellosis antigens according to the invention Vaccine loses its agglutinogenic character in such a way that the agglutinating antibodies in the vaccinated The organism does not match the amount of the reaction of the organism to the disease evoked agglutinating antibodies can be confused. She also owns the Advantage that their immunizing power is generally superior to the previously known brucellosis vaccines, yes, even unspecific immunization against other diseases is possible.

Von bekannten Seroanavaccinen unterscheidet sich die erfindungsgemäße Vaccine durch die Tatsache, daß durch die Seroanavaccinen dem Empfängerorganismus die gegen die Krankheit spezifischen Antikörper auf einmal geliefert werden, wodurch die Antigene dem Organismus den Aufbau seiner eigenen Antikörper gestatten. Gemäß der Erfindung werden demgegenüber die Mengenverhältnisse der Antigene und des Immunserums genau bestimmt, damit eine nichtagglutinogene Vaccine erhalten wird.The vaccine according to the invention differs from known seroana vaccines by the fact that through the Seroanavaccinen the recipient organism specific antibodies against the disease to be delivered all at once, causing the antigens to allow the organism to build up its own Allow antibodies. In contrast, according to the invention, the quantitative proportions of the antigens and the immune serum precisely determined so that a non-agglutinogenic vaccine is obtained.

Weiterhin werden die Seroanavaccine des bekannten Typus im allgemeinen durch Inaktivierung eines Mikroorganismus durch Formol und Hinzufügen des Serums gewonnen, während die Vaccine gemäß der Erfindung auf der Basis von Antigenen gebildet werden, die an sich inaktiv sind.Furthermore, the Seroanavaccine of the known type are generally inactivated by a Microorganism obtained by formol and adding the serum, while the vaccine according to the Invention can be formed on the basis of antigens, which are inactive per se.

Gemäß der Erfindung wird vorzugsweise das verwendete Antigen mit einem heterologen Immunserum verbunden, d. h. einem Serum, das von einer anderen Tierart stammt als diejenige, für die es bestimmt ist. In bestimmten Fällen kann jedoch ein homologes Immunserum ebenfalls in Verbindung mit dem Antigen verwendet werden.According to the invention, the antigen used is preferably mixed with a heterologous immune serum connected, d. H. a serum obtained from a species different from that for which it is intended. In certain cases, however, a homologous immune serum can also be associated with the antigen be used.

Das gemäß der Erfindung verwendete Antigen kann ein Antigen auf der Basis von Bestandteilen oder Extrakten von Mikroben sein. Es kann z. B. aus Bakterien, die durch ein Inaktivierungsmittel, wie Formol, Wärme oder Merthiolat, vollkommen inaktiviert worden sind, oder aus vollständigen lebenden Bakterien, die einem verdünnten oder avirulenten Stamm angehören, bestehen.The antigen used according to the invention may be an ingredient-based antigen or extracts of microbes. It can e.g. B. from bacteria, which by an inactivating agent, such as formol, heat or merthiolate, have been completely inactivated, or from whole living Bacteria belonging to a dilute or avirulent strain exist.

Das Antigen kann auch durch agglutinogene, einer Lyse unterworfenen Bakterien gebildet werden, wobei die Lyse z. B. durch enzymatische Einwirkung, durch Ultraschall oder auf chemischem Wege mittels Produkten wie Basen oder Säuren erfolgt ist. Das Antigen kann außerdem ein aus Bakterienhüllen oder durch Extraktion erhaltenes agglutinogenes Antigen sein.The antigen can also be produced by agglutinogenic, lysed bacteria, whereby the lysis z. B. by enzymatic action, by ultrasound or by chemical means Products such as bases or acids is made. The antigen can also be obtained from bacterial coats or agglutinogenic antigen obtained by extraction.

Das gemäß der Erfindung verwendete Serum kann entweder Blutserum oder Lactoserum sein. Es muß nur der einzigen Bedingung genügen, daß es eine entsprechend der Natur des Antigens der Vaccine ausreichende Dosis Antikörper enthält.The serum used according to the invention can be either blood serum or lactoserum. It must only the only condition that it is sufficient according to the nature of the antigen of the vaccine Dose contains antibodies.

Das Herstellungsverfahren für die erfindungsgemäße Vaccine ist im wesentlichen dadurch gekennzeichnet, daß man auf eine bestimmte Menge von agglutinogenen Brucellose-Antikörpern eine zur Absättigung der agglutinogenen Stellen des Antigens notwendige und ausreichende Menge Immunserum einwirken läßt.The manufacturing process for the vaccine according to the invention is essentially characterized by that a certain amount of agglutinogenic brucellosis antibodies one to saturation the agglutinogenic sites of the antigen necessary and sufficient amount of immune serum can act.

Zur Bestimmung der notwendigen und ausreichenden Menge des Serums kann man folgendermaßen vorgehen:The following can be used to determine the necessary and sufficient amount of serum Action:

Man gießt eine bestimmte Menge von agglutinogenem Antigen und jeweils unterschiedliche Mengen von agglutinierendem Immunserum in eine Reihe von Reagenzgläsern (Serie Nr. 1). Man hält die Gläser mit der Mischung aus Antigen und Serum auf 37° C. Darauf wird das Serum in jedem Reagenzglas gewonnen, was durch Zentrifugieren durchgeführt werden kann, wenn das Antigen teilchenförmig vorliegt, und durch Filtrieren und Extrahieren über eine chromatografischc Säule, wenn das Antigen löslich ist.A certain amount of agglutinogenic antigen is poured in, and different amounts are poured in each case of agglutinating immune serum into a series of test tubes (series # 1). You keep the glasses with you the mixture of antigen and serum to 37 ° C. The serum is then obtained in each test tube, which can be done by centrifugation if the antigen is particulate, and by Filter and extract on a chromatographic column if the antigen is soluble.

Die derart aus der Reagenzglasreihe (Serie Nr. 1) gewonnenen Seren werden in eine neue Reihe von Reagenzgläsern (Serie Nr. 2) gegossen und mit neuen vorbestimmten Mengen von agglutinogenem Antigen zusammengebracht. Man beläßt die Röhren mit der neuen Mischung aus Antigen und Serum 24 Stunden bei 37° C. Die Reagenzgläser der Serie Nr. 2, in denenThe sera thus obtained from the test tube series (series no. 1) are transferred to a new series of Test tubes (series No. 2) are poured and filled with new predetermined amounts of agglutinogenic antigen brought together. The tubes are left with the new mixture of antigen and serum for 24 hours at 37 ° C. The test tubes of series No. 2 in which

sich eine neue Agglutination zeigt, sind solche, in denen das verwendete Serum noch agglutinierende Antikörper im Überschuß enthielt. Die kleinste Serummenge, die eine erneute Agglutination der Antigene der Gläser der Serie Nr. 2 erlaubt, entspricht der notwendigen und ausreichenden Menge von agglutinierendem Serum, die gleichsam zur Sättigung der gesamten in der Serie Nr. 1 verwendeten agglutinierenden Antigene erforderlich ist.A new agglutination appears are those in which the serum used is still agglutinating Antibody contained in excess. The smallest amount of serum that causes re-agglutination of the Antigens allowed in glasses of series No. 2 corresponds to the necessary and sufficient amount of agglutinating serum, which were used to saturate the whole in series no agglutinating antigens is required.

Diese Methode gestattet die leichte Bestimmung der Mengenverhältnisse der Antigene und des Immunserums in vitro, die angewendet werden müssen, um die Vaccine gemäß der Erfindung herzustellen.This method allows the easy determination of the proportions of the antigens and the immune serum in vitro that must be used to produce the vaccines according to the invention.

Zur Herstellung der Vaccine genügt es dann, die entsprechenden Mengen von Antigen und Immun- ¹S serum, vorzugsweise unter Rühren einzustellen.To prepare the vaccine, it is sufficient then, the respective amounts of antigen and the immune serum ¹ S, preferably set with stirring.

Gemäß einer Abänderung des Verfahrens ist es ebenfalls möglich, die Antigene in Gegenwart eines Überschusses an Immunserum einzustellen, und danach z. B. durch Filtrieren das Serum abzutrennen, ^zo das anschließend für andere Zwecke verwendet werden kann.According to a modification of the method, it is also possible to adjust the antigens in the presence of an excess of immune serum, and then e.g. B. to separate the serum by filtration, ^zo which can then be used for other purposes.

Beispielsweise konnte festgestellt werden, daß man eine Vaccine gegen die Brucellose erhalten kann, die vollkommen nicht agglutinogen ist und keine Bildung von agglutinierenden Antikörpern verursacht, wobei die Vaccine 5 bis 10 Milliarden Bakterien je ml Serum und einen Titer von 8000 internationalen Einheiten besitzt.For example, it was found that a vaccine against brucellosis can be obtained is completely non-agglutinogenic and does not cause the formation of agglutinating antibodies, whereby the vaccine 5 to 10 billion bacteria per ml of serum and a titer of 8000 international units owns.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert:The invention is illustrated in more detail by the following examples:

Beispiel I
Herstellung einer nicht agglutinogenen Anti-Example I.
Production of a non-agglutinogenic anti-

brucellose-Vaccine mit Hilfe von Blutserum
1. Herstellung der Bestandteilebrucellosis vaccine with the help of blood serum
1. Manufacture of the components

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A. Bakterien der Gattung BrucellaA. Bacteria of the genus Brucella

Man verwendet entweder einen Brucellastamm wie z. B. Brucella abortus Stamm Buck 19 oder einen über ein brucellosekrankes Tier isolierten Brucellastamm. Der ausgewählte Brucellastamm wird auf Kulturmedien gesät, die entweder flüssig (Serum-Bouillon, Tryptose-Glyzerin-Bouiilon) oder fest (Serum-Gelose, Tryptose-Glyzerin-Gelose) sind.Either a brucella strain such as B. Brucella abortus strain Buck 19 or one above an animal suffering from brucellosis, isolated strain of brucella. The selected Brucella strain is grown on culture media sown, which are either liquid (serum broth, tryptose-glycerin broth) or solid (serum gelose, Tryptose-Glycerin-Gelose) are.

Gemäß der üblichen bakteriologischen Verfahrensweise besät man den Brucellastamm über 20 sterile Kulturmedien vom Typ einer Serum-Gelose-Schrägkultur in Roux-Kolben von 1 Liter Inhalt. Die besäten Kolben werden für 4 Tage in einen Brutschrank mit einer Temperatur von 37° C gesetzt. Danach werden die erhaltenen Bakterienkolonien geerntet, wobei man 10 ml sterile isotonische physiologische Kochsalzlösung in jeden Kolben gießt und die Bakterien in der Lösung suspendiert.According to the usual bacteriological procedure, the brucella strain is sown over 20 sterile ones Culture media of the type of a serum gelose slant culture in 1 liter Roux flasks. The seeded Flasks are placed in an incubator at 37 ° C for 4 days. After that the bacterial colonies obtained are harvested, leaving 10 ml sterile isotonic physiological Pour saline into each flask and suspend the bacteria in the solution.

Die gesamten verschiedenen Bakteriensuspensionen werden in einer sterilen Flasche gesammelt, und es wird gemäß der üblichen Verdünnungsmethode durch Einsäen auf Gelose eine Kulturreihe hergestellt.All the various bacterial suspensions are collected in a sterile bottle, and it a culture series is prepared according to the usual dilution method by seeding on gelose.

Durch Verwendung von geeigneten Verdünnungen wird eine Baktiensuspension hergestellt, die etwa 100 Milliarden Bakterien je ml Suspension enthält. Man bringt 5 ml der Bakteriensuspension dieses Titers in ein Zentrifugenrohr. Diese Probe wird mit großer Geschwindigkeit 30 Minuten lang zentrifugiert. Es werden zwei Phasen in dem Zentrifugenrohr erhalten, nämlich eine überstehende flüssige Phase A, die in einer auf 4° C gehaltenen Flasche aufgefangen und auf vollständige Abwesenheit von Mikrobenkörpern geprüft wird, und eine dickflüssige Phase B, die am Boden absetzt. Sie besteht aus Bakterienkörpern.By using suitable dilutions, a bacterial suspension is produced which is approximately Contains 100 billion bacteria per ml of suspension. 5 ml of the bacterial suspension of this titer are added into a centrifuge tube. This sample is centrifuged at high speed for 30 minutes. It two phases are obtained in the centrifuge tube, namely a supernatant liquid phase A, which in collected in a bottle kept at 4 ° C and checked for the complete absence of microbial bodies is checked, and a viscous phase B, which settles on the bottom. It consists of bacterial bodies.

Die Phase B wird entnommen und erneut in 10 ml einer auf 5% verdünnten Formaldehydlösung suspendiert. Die mit Formol inaktivierte Bakteriensuspension wird im Reagenzglas in ein Wasserbad von 58° C 30 Minuten lang eingestellt und anschließend 30 Minuten lang mit großer Geschwindigkeit zentrifugiert. Man erhält zwei Phasen im Zentrifugen rohr, nämlich eine überstehende flüssige Phase, die verworfen wird, und eine dickflüssige bakterienhaltige Phase B₁, die sich am Boden absetzt.Phase B is removed and resuspended in 10 ml of a formaldehyde solution diluted to 5%. The bacterial suspension inactivated with formol is placed in a test tube in a water bath at 58 ° C. for 30 minutes and then centrifuged at high speed for 30 minutes. Two phases are obtained in the centrifuge tube, namely a supernatant liquid phase, which is discarded, and a thick, bacteria- _{containing phase B 1} , which settles on the bottom.

Die Phase B₁ setzt sich aus durch Wärme und Formol inaktivierten Bruceilabakterien zusammen.Phase B ₁ consists of Bruceila bacteria which have been inactivated by heat and formol.

Die Bakterienphase B₁ wird dann in ein Reagenzglas gebracht und in der gesamten Phase A wieder suspendiert. Diese letzte Bakteriensuspension (A + B₁) wird als Suspension C bezeichnet. Sie enthält annähernd 500 Milliarden inaktivierte Brucellabakterien in einem Volumen von etwa 5 ml.The bacterial _{phase B 1} is then placed in a test tube and resuspended in the entire phase A. This last bacterial suspension (A + B ₁ ) is referred to as suspension C. It contains approximately 500 billion inactivated brucella bacteria in a volume of about 5 ml.

Die Bakteriensuspension C bildet den ersten Bestandteil der erfindungsgemäßen Vaccine.The bacterial suspension C forms the first component the vaccine according to the invention.

B. Antibrucellose-SerumB. Antibrucellosis Serum

Ein Antibrucellose-Serum, das reich an Antikörpern ist, wird durch Hyperimmunisation eines erwachsenen gleich warmblütigen Tieres mit Hilfe einer agglutinogenen Antibrucellose-Vaccine gewonnen.Antibrucellosis serum rich in antibodies is produced by hyperimmunization of an adult like warm-blooded animals obtained with the help of an agglutinogenic antibrucellosis vaccine.

Man injiziert beispielsweise einem zweijährigen und von jeder Krankheit freien Hammel subkutan eine Suspension von Brucella abortus Stamm Buck 19, die 20 Milliarden lebende Bakterien enthält. Eine gleiche Injektion nimmt man 8 und 14 Tage nach der ersten Vaccinierung vor. 10 Tage nach der letzten Vaccineinjektion entnimmt man dem Tier nüchtern durch Punktion der Halsvene Blut. Man entnimmt steril 200 ml Blut in eine Flasche, läßt das Blut gerinnen und fängt das Serum in einer neuen Flasche auf. Das Serum wird durch Aufwärmen im Wasserbad bei 56° C 30 Minuten lang inaktiviert. Die Sterilität des Serums wird geprüft. Der Titer der agglutinierenden Antikörper des Serums wird nach dem langsamen Serumagglutinationsverfahren von Wright im Röhrchen bestimmt. Ein agglutinierendes Serum mit einem Titer von 8000 internationalen agglutinierenden Einheiten pro ml stellt den zweiten Bestandteil der Vaccine dar.For example, a two year old mutton free of any disease is injected subcutaneously Suspension of Brucella abortus strain Buck 19 containing 20 billion live bacteria. One the same Injection is made 8 and 14 days after the first vaccination. 10 days after the last vaccine injection blood is taken from the animal on an empty stomach by puncturing the jugular vein. One removes sterile Put 200 ml of blood in a bottle, allow the blood to clot and collect the serum in a new bottle. The Serum is inactivated by warming it up in a water bath at 56 ° C for 30 minutes. The sterility of the Serum is checked. The titer of the agglutinating antibodies of the serum is after the slow Wright tube serum agglutination method determined. An agglutinating serum with a A titre of 8000 international agglutinating units per ml represents the second component of the Vaccine.

2. Vaccinehersteilung2. Vaccine production

Die endgültige Herstellung der Vaccine wird folgendermaßen durchgeführt:The final manufacture of the vaccine is carried out as follows:

Man gießt in eine sterile Flasche
5 ml der Suspension C und
100 ml des agglutinierenden Antibrucellose-Serums mit einem Titer von 8000 internationalen agglutinierenden Einheiten.It is poured into a sterile bottle
5 ml of suspension C and
100 ml of the agglutinating antibrucellosis serum with a titer of 8000 international agglutinating units.

Diese Mengenverhältnisse von Vaccine und Serum sind diejenigen, die gemäß der vorstehend beschriebenen Methode bestimmt worden sind.These proportions of vaccine and serum are those according to that described above Method have been determined.

Das Gemisch wird 60 Minuten in ein Wasserbad einer Temperatur von 37° C gestellt, dann bei 37° C 24 Stunden unter zeitweilig unterbrochenem und mäßigem Rühren in einen Brutschrank gestellt und anschließend 24 Stunden auf 4° C gekühlt. Man erhält so die endgültige Substanz von 500 ml Volumen,The mixture is placed in a water bath at 37 ° C for 60 minutes, then at 37 ° C Put in an incubator for 24 hours with intermittent and moderate stirring and then cooled to 4 ° C for 24 hours. This gives the final substance of 500 ml volume,

die 500 Milliarden inaktivierte Bruceilabakterien enthält. Die Sterilität des Endproduktes wird geprüft. Die hergestellte Vaccine wird darauf den üblichen Unschädlichkeits- und Wirksamkeitskontrollen unterworfen. which contains 500 billion inactivated Bruceila bacteria. The sterility of the end product is checked. The vaccine produced is then subjected to the usual safety and efficacy controls.

Es wird ferner eine Spezialkontrolle zur Bestimmung der agglutinogenen Eigenschaften der Vaccine durchgeführt. Hierzu wird die Vaccine Tieren injiziert, von deren Serum man eine Agglutininbestimmung durchführt, beispielsweise 15, 30 und 45 Tage nach der Seruminjektion.There will also be a special control to determine the agglutinogenic properties of the vaccines accomplished. For this purpose, the vaccine animals are injected, from whose serum an agglutinin determination is made carried out, for example 15, 30 and 45 days after the serum injection.

Example 2

Herstellung einer nicht agglutinogenen Antibrucellose-Vaccine mit Hilfe von LactoserumProduction of a non-agglutinogenic antibrucellosis vaccine with the help of lactoserum

1. Herstellung der Bestandteile1. Manufacture of the components

A. Bakterien der Gattung BruceilaA. Bacteria of the genus Bruceila

Die Bakterien des Stammes Brucella B 19 werden gemäß Beispiel 1 hergestellt.The bacteria of the strain Brucella B 19 are produced according to Example 1.

B. Antibrucellose-LactoserumB. Antibrucellosis Lactoserum

Das Antibrucellose-Lactoserum wird in folgender Weise hergestellt. Man geht aus von einem inaktiven Stamm Brucella B 19 und einem lebenden Stamm Brucella B 19. Bei einer milchgebenden Kuh führt man die folgenden Injektionen durch:The antibrucellosis lactoserum is produced in the following way. One assumes an inactive one Strain Brucella B 19 and a live strain Brucella B 19. Leads in a dairy cow the following injections:

Im Zeitraum von 2 Wochen werden zwei Injektionen je Woche von 100 Millionen inaktivierten Brucella B 19 und anschließend innerhalb von 3 Wochen zwei Injektionen von 10 Millionen lebenden Brucella B 19 je Woche vorgenommen. Alle Injektionen werden in eine Zitze durchgeführt.
Das Abziehen des Serums beginnt 48 Stunden nach der letzten Injektion. Man trennt die kleinen Buttermilchbestandteile durch Lab ab und extrahiert die Immunoglobuline durch Ausfällen mit Ammoniumsulfat. Over a period of 2 weeks, two injections of 100 million inactivated Brucella B 19 per week and then within 3 weeks two injections of 10 million living Brucella B 19 per week are carried out. All injections are given into a teat.
Serum withdrawal begins 48 hours after the last injection. The small buttermilk components are separated off with rennet and the immunoglobulins are extracted by precipitation with ammonium sulfate.

ίο Die Gegenwart von Antikörpern wird durch Titerbestimmung bei der Serum-Agglutination bestimmt. Nach dem Beginn der Serumgewinnung werden weiterhin zweimal wöchentlich 10 Millionen lebender Brucella vom Stamm B 19 injiziert.ίο The presence of antibodies is determined by titer determined in serum agglutination. After the start of serum collection will continue 10 million live Brucella of strain B 19 injected twice a week.

Unter diesen Bedingungen wird wahrnehmbar die höchste Konzentration von Antibrucellose-Antikörpern in dem Serum erzielt. Man kann jedoch auch eine von diesen Bedingungen abweichende Serumgewinnung vornehmen, ohne deshalb vom Erfin-Under these conditions the highest concentration of anti-brucellosis antibodies becomes noticeable achieved in the serum. However, it is also possible to obtain serum which deviates from these conditions make without therefore from the invention

ao dungsgedanken abzuweichen.ao thought to deviate.

2. Vaccineherstellung2. Vaccine manufacture

Man stellt die Vaccine gemäß der Erfindung mit Hilfe der gemäß A hergestellten Antibrucellose-Vaccine und dem gemäß B hergestellten Lactoserum her. Die erhaltene Vaccine weist ähnliche qualitative Eigenschaften auf, wie die gemäß Beispiel 1 erhaltene Vaccine.The vaccines according to the invention are prepared using the antibrucellosis vaccines prepared according to A. and the lactoserum prepared according to B. The vaccine obtained has similar qualitative properties Properties like the vaccine obtained according to Example 1.

Claims

Claim:

Vaccines containing brucellosis antigens, characterized in that they contain so much Brucellosis immune serum contains all that agglutinogenic Sites of the brucellosis antigen are saturated.