DE1618728C

DE1618728C - Process for the production of isoprenyl alcohols with 9, 11 and 12 isoprene units

Info

Publication number: DE1618728C
Authority: DE
Inventors: Hideaki Fukuoka; Toyoda Masashi Kawagoe; Seo Hiroshi Kawagoe; Shimizu Toru Tokio; Fukawa (Japan)
Original assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Current assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Publication date: 1972-07-06

Description

Die verfahrensgemäß erhältlichen Isoprenylalkohole sind Substanzen der folgenden allgemeinen FormelThe isoprenyl alcohols obtainable according to the process are substances of the following general formula

CH₃ CH ₃

CH,CH,

:C== CH-CH₂-\CH₂—C = CH —CH₂/„—CH₂-C = CH-CH₂-OH: C == CH-CH ₂ - \ CH ₂ -C = CH -CH ₂ / "- CH ₂ -C = CH-CH ₂ -OH

in der η 7, 9 und 10 bedeutet, d. h., dabei handelt es sich um Isoprenylalkohole mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten. in which η means 7, 9 and 10, that is, these are isoprenyl alcohols with 9, 11 and 12 isoprene units.

In chemischer Hinsicht handelt es sich bei Isoprenylalkoholen um Isoprenpolymerisate mit 1,4-Addition, die am Ende eine primäre Hydroxygruppe tragen. Diese Substanzen gehören zu einer Seitenkettenkomponente eines Coenzyme Q, das als Medikament und Vitamin K₂ verwendet werden kann. Die Verfahrensgemäß erhältlichen Isoprenylalkohole sind nicht nur als Zwischenprodukte zur Herstellung dieser Substanzen, sondern auch selbst als Medikamente geeignet.From a chemical point of view, isoprenyl alcohols are isoprene polymers with 1,4-addition which have a primary hydroxyl group at the end. These substances belong to a side chain component of a coenzyme Q, which can be used as a drug and vitamin K ₂ . The isoprenyl alcohols obtainable according to the process are suitable not only as intermediates for the preparation of these substances, but also themselves as medicaments.

Solche Isoprenylalkohole mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten wurden bisher kaum in der Natur gefunden. Der einzige gesicherte Isoprenylalkohol ist Solanesol, ein Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten, der in Tabakblättern gefunden wurde (vgl. R. L. Rowland et al., »J. Am. ehem. Sol.«, 78, S. 4680 [1956]). F. W. Hemming et al. haben zwar in einer chromatographischen Fraktion, die aus einer unverseiften Masse von Spadix von Arum maculatum extrahiert worden war, die Existenz eines Isoprenylalkohols mit 10 Isopreneinheiten vermutet, die Struktur dieser vermuteten, papierchromatographisch abgetrennten Substanz konnte jedoch bisher nicht geklärt werden (»Proc. Roy. Soc, London,« B. 158, S. 291 [1963]). Außerdem war es bereits bekannt, daß Isoprenylalkohole in Blättern von Aesculus hippocastanum und Blättern von Ficus elastica enthalten sind (vgl. »Biochem. J.«, 102, S. 313ff. [1967], und »Biochem. J.«, 102, S. 325ff. [1967]). Es ist jedoch bisher niemals gelungen, die Isoprenylalkohole daraus in technischem Maßstabe zu extrahieren.Such isoprenyl alcohols with 9, 11 and 12 isoprene units have so far hardly been found in nature. The only secured isoprenyl alcohol is Solanesol, an isoprenyl alcohol with 9 isoprene units that is found in Tobacco leaves was found (see R. L. Rowland et al., "J. Am. Former Sol.", 78, p. 4680 [1956]). F. W. Hemming et al. have in a chromatographic Fraction which has been extracted from an unsaponified mass of spadix of Arum maculatum was, the existence of an isoprenyl alcohol with 10 isoprene units suspected, the structure of this suspected, However, it has not yet been possible to clarify the substance separated by paper chromatography (»Proc. Roy. Soc, London, "B. 158, p. 291 [1963]). In addition, it was already known that isoprenyl alcohols in Leaves of Aesculus hippocastanum and leaves of Ficus elastica are included (cf. "Biochem. J.", 102, p. 313ff. [1967], and “Biochem. J. ", 102, p. 325ff. [1967]). So far, however, it has never been possible to convert the isoprenyl alcohols therefrom on an industrial scale extract.

Auch die Herstellung von solchen Isoprenylalkoholen, die sehr lange Isoprenseitenketten aufweisen, auf synthetischem Wege, hat sich als äußerst schwierig erwiesen, so daß bisher auch kein technisches Verfahren zur Synthese dieser Verbindungen bekannt ist.Also the production of such isoprenyl alcohols, which have very long isoprene side chains, by synthetic means, has proven extremely difficult proven, so that up to now no technical process for the synthesis of these compounds is known.

Es wurde nun überraschend gefunden, daß eine Isoprenylalkoholfraktion mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten aus den Blättern des Maulbeerbaumes und Seidenraupenexkrementen durch Molekulardestillation isoliert werden kann. Da Maulbeerbaumblätter und Seidenraupenexkremente in Japan in großem Umfange vorhanden sind bzw. anfallen, eignet sich dieses Verfahren zur technischen Gewinnung von Isoprenylalkoholen mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten. Das Verfahren zur Gewinnung von Isoprenylalkoholen mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten ist nun dadurch gekennzeichnet, daß man aus Maulbeerbaumblättern oder Seidenraupenexkrementen mit einem organischen Lösungsmittel eine fettartige Masse extrahiert, diese mit Alkali verseift, die nicht verseiften Anteile abtrennt und anschließend durch Molekulardestillation und fraktionierte Abkühlung und/oder Adsorptionschromatographie reinigt. It has now been found, surprisingly, that an isoprenyl alcohol fraction with 9, 11 and 12 isoprene units from the leaves of the mulberry tree and silkworm excrement by molecular distillation can be isolated. Since mulberry leaves and silkworm excrement in Japan in large Scope are available or arise, this process is suitable for the technical extraction of Isoprenyl alcohols with 9, 11 and 12 isoprene units. The process of obtaining isoprenyl alcohol with 9, 11 and 12 isoprene units is now characterized in that one is made from mulberry leaves or silkworm excrement extracted a fatty mass with an organic solvent, this saponified with alkali, the unsaponified parts are separated off and then by molecular distillation and fractional cooling and / or adsorption chromatography purifies.

Eine nähere Beschreibung der Isolierung und Sammlung der dabei erhaltenen Isoprenylalkoholfraktionen und der. Bestimmung ihrer Struktur geht aus der folgenden Beschreibung in Verbindung mit den Zeichnungen hervor.A more detailed description of the isolation and collection of the isoprenyl alcohol fractions obtained and the. Determination of their structure is based on the following description in conjunction with the drawings.

F i g. 1 zeigt ein IR-Absorptionsspektrum einer erfindungsgemäß isolierten Substanz;F i g. 1 shows an IR absorption spectrum of a substance isolated according to the invention;

F i g. 2 gibt ein IR-Absorptionsspektrum einer erfindungsgemäß isolierten, hydrierten Substanz wieder, undF i g. 2 shows an IR absorption spectrum of a hydrogenated substance isolated according to the invention, and

F i g. 3 zeigt ein NMR-Spektrum einer erfindungsgemäß isolierten Substanz.F i g. 3 shows an NMR spectrum of a substance isolated according to the invention.

Zuerst wird ein Extrakt, der durch Extraktion von trockenen Seidenraupenexkrementen mit Aceton erhalten wird, mit Methanol-Kali-Lauge verseift und anschließend mit Hexan extrahiert. Die auf diese Weise erhaltene nichtverseifte Fraktion wird als Rohmaterial verwendet. Sie wird in Hexan oder Aceton aufgelöst. Die Lösung wird zur Reinigung einer geeigneten Kombination aus einer fraktionierten Abkühlung und Ausfällung (beispielsweise einer tiefen fraktionierten Abkühlung und Ausfällung), einer Molekulardestillation sowie einer Adsorptionschromatographie unter Verwendung von Kieselgel oder aktivem Aluminiumoxyd unterzogen. Nach dem Abtrennen der Lösung von Verunreinigungen, wie Sterin, Kohlenwasserstoffen, gesättigten Alkoholen, Carotinoiden und Phytol, wobei der Reinigungsgrad mittels Dünnschichtchromatographie kontrolliert wird, wird eine einheitliche Substanz erhalten.First, an extract is obtained by extracting dry silkworm excrement with acetone is, saponified with methanol-potassium hydroxide solution and then extracted with hexane. The on this Unsaponified fraction thus obtained is used as a raw material. It is made in hexane or Dissolved acetone. The solution is used to purify a suitable combination of a fractionated Cooling and precipitation (e.g. deep fractional cooling and precipitation), one Molecular distillation and adsorption chromatography using silica gel or active Subjected to aluminum oxide. After separating the solution from impurities such as Sterol, hydrocarbons, saturated alcohols, carotenoids and phytol, with the degree of purification is checked by means of thin layer chromatography, a uniform substance is obtained.

Die auf diese Weise erhaltene Substanz macht 10 bis 15% der nichtverseiften Fraktion der Seidenraupenexkremente aus, mittels Dünnschichtchromatographie wird die Reinheit der Substanz festgestellt.The substance obtained in this way makes up 10 to 15% of the unsaponified fraction of the silkworm excrement off, the purity of the substance is determined by means of thin-layer chromatography.

Bei der Dünnschichtchromatographie (Kieselgel) besitzt diese Substanz Rf-Werte, wie sie in der Tabelle 1 angegeben sind. Diese Substanz ist bei Normaltemperatur eine hellgelbe ölige Flüssigkeit, welche einen Brechungsindex von nf⁹- von 1,5112 besitzt. Unterhalb —30°C verfestigt sie sich in Aceton, Äthanol oder Hexan zu weißen Kristallen.In thin-layer chromatography (silica gel), this substance has Rf values as shown in Table 1. At normal temperature, this substance is a light yellow oily liquid with a refractive index of nf ⁹ - 1.5112. Below -30 ° C it solidifies in acetone, ethanol or hexane to form white crystals.

Table 1

Entwicklerdeveloper Rf-WerteRf values Chloroform—Methanol (4:1)
Isobutanol Chloroform-methanol (4: 1)
Isobutanol 0,84
0,61
0,50
0,48
0,27
0,020.84
0.61
0.50
0.48
0.27
0.02 Chloroform
Benzol chloroform
benzene Chloroform—Benzol (1:4)
η-Hexan Chloroform-benzene (1: 4)
η-hexane

Bei der Adsorptions-Dünnschichtchromatographie tritt diese Substanz als ein einziger Fleck, welcher eineIn adsorption thin layer chromatography, this substance appears as a single spot, which is a

reine Isoprenylalkohplgruppe darstellt, auf. Bei der Papierchrornatographiß rnit umgekehrten Phasen zeigt sich, daß diese Substanz leipht isoliert werden kann und drei Isoprenylalkohple enthält.represents pure Isoprenylalkohplgruppe on. In the Paper chromatography shows with reversed phases that this substance can easily be isolated and contains three isoprenyl alcohols.

Diese !Substanz enthält eine vergleichsweise gerjnge Menge an Splanespl mit ? Isopreneinheiten und setzt sich hauptsächlich aus Isoprenylalkoholen mit 11 und 12 Isopreriein^eiten zusammen. Diese zwei Isoprenylalkohole verhalten siph bei der Papierchromatographie mit umgekehrten Phasen sehr ähnlich. Aus dem Molekplargewipht, 4em NMR-Spektrum sowie der Elementaranalyse geht hervor, daß sie 11 bzw. 12 Isppreneinheiten entfalten. Die Rf-Werte dieser Substanz bei der Papierchrpmatographie mit umgekehrten Phasen gehen aus der nachstehenden Tabelle 2 hervor.This substance contains a comparatively small amount Amount of Splanespl with? Isoprene units and is composed mainly of isoprenyl alcohols with 11 and 12 isopreria units together. These two isoprenyl alcohols behave very similarly to paper chromatography with reversed phases. Out The molecular weighted, 4em NMR spectrum and the elemental analysis show that they are 11 resp. Unfold 12 Isppren units. The Rf values of these Substance in paper chromatography with inverted Phases are shown in Table 2 below.

Table 3

Tabelle 2Table 2 Entwicklerdeveloper Flecken 1Stains 1 Rf-WerteRf values Flecken 3Stains 3 Solanesol
aus
TabakSolanesol
out
tobacco Flecken 2Stains 2 blätternscroll Aceton acetone 0,66
0,35
0,440.66
0.35
0.44 0,77
0,620.77
0.62 0,77
0,620.77
0.62 Essigsäure ...
90°/_oiges
Propanol ..Acetic acid ...
90 ° / _o sodium
Propanol .. 0,72
0,47
0,550.72
0.47
0.55 Feste Phase:Fixed phase:

Filterpapier, wobei die Phase mittels 5°/oig^em flüssigem Paraffin/n-Hexan umgekehrt ist.Filter paper, said phase by means of 5 ° / oig ^em liquid paraffin / n-hexane is reversed.

Der Siedepunkt des vorstehend erwähnten einen Fleckens beträgt in einer Molekulardestillatipnsapparatur unter einem Vakuum von 1Q~³ mm Hg 180 bis 240° C. Wie aps dem Infrarotabsorptionsspektrum von F^; i g. 1 hervorgeht, ist eine Absorption einer C== O-Doppelbindung bei 1600 cm"¹ vorhanden, . während eine JJydrpxylgruppeThe boiling point of the above-mentioned one spot is ^{180 to 240 ° C in a molecular distillation apparatus under a vacuum of 10 -3} mm Hg. As shown in the infrared absorption spectrum of F ^; i g. 1, there is an absorption of a C == O double bond at 1600 cm " ¹ , while a hydroxyl group

-C = G-CH₂OH-C = G-CH ₂ OH

bei 1000 cm"¹ zu erkennen ist. Wird diese Substanz hydriert, dann verschiebt pich die Absorption bei lOQO cmr¹ nach 1050 em¹, was bedeutet, daß sich der iiydrpxylrestat 1000 cm " ¹ can be seen. If this substance is hydrogenated, then the absorption shifts at 10000 cm- ¹ to 1050 ^cm-1 , which means that the hydroxyl radical

Die verfahrensgemäß erhaltene
Substanz (Analysenwerte) The obtained according to the method
Substance (analysis values)

C55H.80QC55H.80Q

(theoretische Werte von Isoprenylalkohpl mit 11 Isopreneinheiten) ,..(theoretical values of isoprenyl alcohol with 11 isoprene units), ..

Die verfahrensgemäß erhaltene Substanz, hydriert (Analysenwerte) ...The substance obtained according to the process, hydrogenated (analysis values) ...

Cs₅H₁JuOCs ₅ H ₁ JuO

(theoretische Werte des hydrierten Isoprenyjalkohols mit 11 Isopreneinheiten) (theoretical values of the hydrogenated isopreny alcohol with 11 isoprene units)

Die verfahrensgemäß erhaltene Sub·? stanz, analysiert (Analysenwerte) ..The sub ·? punching, analyzed (analysis values) ..

C5 7H92O2C5 7H92O2

(theoretische Werte des acetylierten Ispprenylalkohols mit 11 Isopren-(Theoretical values of the acetylated Ispprenyl alcohol with 11 isoprene

einheiten) units)

- Clig 4 jQH_? - QH- Clig 4 jQH _? - QH

gebildet hat. Diese Tatsache stimmt mit den von R ο w la η d et al. bei Spjanesol, Phytol und Farnesol gewonnenen Erkenntnissen (vgl, F i g. 2) überein.has formed. This fact agrees with that of R ο w la η d et al. with Spjanesol, Phytol and Farnesol obtained knowledge (see, Fig. 2) agree.

Darüber hinaus wird durch das Infrarptabsprptionsspektrum die Anwesenheit von irgendwelchen anderen funktioneilen Gruppen oder Ringen ausgeschlossen. In dem ultravioletten Teil des Absorptionsspektrums sowie in dem sichtbaren Teil des Absorptionsspektrums sind keine besonderen Absorptionen zu erkennen.In addition, the presence of any others is indicated by the infrared absorption spectrum functional groups or rings excluded. In the ultraviolet part of the absorption spectrum as well as in the visible part of the absorption spectrum, no particular absorptions can be seen.

In der Tabelle 3 sind die Analysenwerte zusammengefaßt. Man sieht, daß diese Substanz eine Isoprenylalkohplgruppe mit durchschnittlich 11 Isopreneinheiten ist. : , ■■'" : ' Table 3 summarizes the analytical values. It can be seen that this substance is an isoprenyl alcohol group with an average of 11 isoprene units . :, ■■ '":'

86,0086.00

86,09 83,7486.09 83.74

83,66 84,5783.66 84.57

84,4684.46

Wasserstoff hydrogen

.11,80.11.80

11,82 13,9511.82 13.95

14,30 11,4914.30 11.49

11,4511.45

Das Hauptmolekulargewicht der verfahrensgemäß erhaltenen Substanz wird mittels eines Dampfdruck-The main molecular weight of the substance obtained according to the process is determined by means of a vapor pressure

.30 Verfahrens zu 773 ermittelt; es liegt nahe bei dem Molekulargewicht von 766 eines Isoprenylalkohpls mit 11 Isppreneinheiten. Wild die Menge des bei Normaltemperatur absorbierten Wasserstoffs mittels eines PJatinkatalysatprs gemessen, so stellt sich heraus, daß 1 Mol Wasserstoff pro 7Q,5 g der yerfahrensgemäß erhaltenen Substanz absorbiert wird..30 procedure to 773 determined; it is close to the 766 molecular weight of an isoprenyl alcohol 11 Isppren units. Wildly the amount of hydrogen absorbed at normal temperature by means of a Pjatinkatalysatprs measured, it turns out that 1 mol of hydrogen per 7.5 g of y according to the method obtained substance is absorbed.

Beträgt das Molekulargewicht 766, dann sind 11 Doppelbindungen vorhanden. Dies bedeutet, daß jede Isopreneinheit nicht gesättigt ist. Aus dem Massenspektrum dieser Substanz geht hervor, daß nur eine" Signalgruppe einer Anzahl von Massen, die ein Vielfaches der Isopreneinheiten darstellt, vorhanden ist. Diese Tatsache bekräftigt, daß die Isopreneinheiten regulär über 1,4-Bindungen verknüpft sind.If the molecular weight is 766, there are 11 double bonds. This means that any isoprene unit is not saturated. From the mass spectrum of this substance it can be seen that only one "signal group of a number of masses which represents a multiple of the isoprene units is present is. This fact confirms that the isoprene units are regularly linked via 1,4 bonds.

Die F i g, 3 zeigt das NMR-Spektrum (Proton-Typ mit ,60 Megazyklen) der erfahrensgemäß erhaltenen Substanz. Es werden Protonensignale einer Methin-(-CH=), Methylen-(—CH_S—) und Methylgruppe (= C-CH₃) sowie Hydrpxy! (OH) und Methylen (= CH — CH₂ — OH) in der ,«-Stellung der HydrpxylgrNppe festgestellt. Wird dieses Produkt hydriert, d.h. ,ein gesättigter Alkohol hergestellt, dann yersclwindet das Methinsigna}, während sich das Prptonsignal der Hydroxylgruppe in drei Signale aufteilt.FIG. 3 shows the NMR spectrum (proton type with 60 megacycles) of the substance obtained according to the method. Proton signals of a methine - (- CH =), methylene - (- CH _S -) and methyl group (= C-CH ₃ ) as well as hydrpxy! (OH) and methylene (= CH - CH ₂ - OH) in the, «position of the hydroxyl group. If this product is hydrogenated, that is, a saturated alcohol is produced, the methine signal is eroded, while the prptone signal of the hydroxyl group is divided into three signals.

Daraus sowie aus der Messung der Signälstärke geht hervor, daß die erfindungsgemäße Substanz ein primärer Isoprenylalkohpl mit durchschnittlich 11 isppreneinheiten ist.
Aus den vorstehenden Ausführungen geht hervor,From this, as well as from the measurement of the signal strength, it can be seen that the substance according to the invention is a primary isoprenyl alcohol with an average of 11 isoprenal units.
From the above it follows that

daß die Yerfahrensgemäß erhaltene Substanz eine Mischung aus Solanesol mit 9 Isoprenejnheiten und zwei neuen primären 1,4-Additions-Ispprenylalkpholen mit %1 lind \2 Isopreneinheiten darstellt.that the substance obtained according to the method is a mixture of solanesol with 9 isoprene units and two new primary 1,4-addition-isoprenyl alcohols with 1 and 2 isoprene units.

Beispiele für Rphinaterialien, welche Maulbeerbaumblätterkomponenten enthalten, die bei dem beanspruchten Verfahren eingesetzt werden können, sind Maulbeerbaumblpter selbst spwie Seidenraupenexkremente. 'Examples of rphin materials which mulberry leaf components which can be used in the claimed process, are mulberry trees themselves like silkworm droppings. '

Die Identifizierung von Isoprenylalkohol mit 11 Isopreneinheiten wird wie folgt durchgeführt:The identification of isoprenyl alcohol with 11 isoprene units is carried out as follows:

Die gereinigte Mischung aus Isoprenylalkoholen mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten wird einer Adsorp-The purified mixture of isoprenyl alcohols with 9, 11 and 12 isoprene units is an adsorption

Beispiele für organische Lösungsmittel, welche in et al. hergestellt worden ist, vermischt und geschmolder Lage sind, fettartige Bestandteile aus dem Roh- zen, dann sinkt der Schmelzpunkt der weißen Kristalle material zur extrahieren, sind Aceton, Chloroform, nicht ab; die chromatographischen Eigenschaften und Äther oder Hexan. die verschiedenen Spektren der weißen Kristalle sindExamples of organic solvents which are described in et al. has been made, blended and melted If fat-like constituents are found in the raw material, the melting point of the white crystals drops material to extract are acetone, chloroform, not ab; the chromatographic properties and Ether or hexane. are the different spectra of the white crystals

Hinsichtlich der Isolierung von Isoprenylalkohol mit ^c 5 vollständig mit denjenigen von Solanesol identisch. 9 Isopreineinheiten hat sich herausgestellt, daß der
Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten, ,dadurch isoliert werden kann, daß die Isoprenylalkbhölmischung
in Acet.cn aufgelöst wird, die erhaltene Lösung aufWith regard to the isolation of isoprenyl alcohol with ^c 5 completely identical to that of Solanesol. 9 isopure units it has been found that the
Isoprenyl alcohol with 9 isoprene units,, can be isolated in that the isoprenyl alcohol mixture
is dissolved in Acet.cn, the resulting solution

0 bis —10°C abgekühlt wird und nur der Isöprenyl- io tionschromatographie unter Verwendung von Kieselalkoholi mit 9 Isopreneinheiten äuskristallisiert wird; gel; und eines Entwicklers, beispielsweise 10⁰I₀IgQm wahlweise können die nichtyerseiften Bestandteile (Volumen/Volumen) Äthyläther, der η-Hexan enthalt, einer Molekulardestillation unterzogen werden, worauf unterzogen. Auf diese Weise wird eine farblose ölige das Destillat in Benzol aufgelöst wird und die Lösung Masse erhalten, welche bei der Papierchromatographie mit einer Lösung von Thioharnstoff in Methanol zur 15 mit umgekehrten Phasen unter Verwendung von Bildung eines Addukts aus Thioharnstoff-Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten Versetzt wird, worauf
das gebildete Addukt mit Wasser zersetzt wird.0 to -10 ° C is cooled and only the isoprenyl ion chromatography using silica alcohol with 9 isoprene units is re-crystallized; gel; and a developer, for example 10 ⁰ I ₀ IgQm optionally, the non-soap constituents (volume / volume) ethyl ether containing η-hexane can be subjected to molecular distillation, whereupon subjected. In this way, a colorless oily distillate is dissolved in benzene and the solution mass is obtained, which is added in paper chromatography with a solution of thiourea in methanol to 15 with reversed phases using the formation of an adduct of thiourea-isoprenyl alcohol with 9 isoprene units on what
the adduct formed is decomposed with water.

Daher wird der Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten mittels eines Verfahrens isoliert, bei welchem 20 die nichtverseiften Bestandteile nach einer fraktionierten Abkühlung und Ausfällung,, einer Molekulardestillation und anschließend einer fraktionierten Abkühlung und Ausfällung gereinigt werden, worauf eineTherefore, the isoprenyl alcohol with 9 isoprene units is isolated by means of a process in which 20 the unsaponified constituents after fractional cooling and precipitation, molecular distillation and then purified by fractional cooling and precipitation, whereupon a

Ν,Ν'-Dimethylformamid als Lösungsmittel einen Rf-Wert von 0,43 besitzt, einen Schmelzpunkt von 9 bis 10⁰C aufweist und einen Brechungsindex von nf° = 1,5094 zeigt. ;Ν, Ν'-dimethylformamide as solvent has an Rf value of 0.43, has a melting point of 9 to 10 ⁰ C and shows a refractive index of nf ° = 1.5094. ;

Das Molekulargewicht der öligen Masse ist wie folgt:The molecular weight of the oily mass is as follows:

Test (1)Test (1)

772 767,3772 767.3

Test (2)Test (2)

756 767,3756 767.3

Die Elementaranalyse
folgt:The elemental analysis
follows: der öligenthe oily Masse ist wieMass is like Gefunden Found Berechnet als C₆₅H₉₀O ..Calculated as C ₆₅ H ₉₀ O .. CC. HH 86,11%
86,09%86.11%
86.09% 11,93%
11,82%11.93%
11.82%

Auflösung in Aceton erfolgt und die Lösung auf 0 bis 25 G_ef_un(j_en —10⁰C abgekühlt wird; man kann auch so verfahren, Berechnet daß, die nichtverseiften Bestandteile _ mittels einer
Molekulardestillation und anschließend!mittels fraktionierter Abkühlung und Ausfällung gereinigt werden,
worauf sich eine weitere Auflösung in Aceton, und 30
eine Abkühlung der Lösung auf eine Temperatur von
0 bis —10⁰C anschließt. Ferner ist es möglich, die
nichtverseiften Bestandteile mittels einer Molekulardestillation und anschließend durch Behandlung mit
Thioharnstoff zur Gewinnung eines Addukts aus Thio- 35
harnstoff-lsoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten zu
reinigen, wobei das Addukt einer Adsorptionschroma- Wird die ölige Masse hydriert, so stellt man fest, daßDissolution in acetone takes place and the solution is _{cooled to 0 to 25 G e} f _{un (} j _en -10 ⁰ C; one can also proceed in this way, Calculated that the unsaponified constituents _ by means of a
Molecular distillation and then! Purified by means of fractional cooling and precipitation,
which is followed by a further dissolution in acetone, and 30
a cooling of the solution to a temperature of
0 to -10 ⁰ C then follows. It is also possible to use the
unsaponified constituents by means of molecular distillation and then by treatment with
Thiourea for obtaining an adduct from thio-35
urea isoprenyl alcohol with 9 isoprene units
clean, with the adduct of an adsorption chromium. If the oily mass is hydrogenated, it is found that

tographie zur Isolierung von Isoprenylalkohol mit 11,0 Doppelbindungen in dem Molekül zugegen sind, 9 Isopreneinheiten unterzogen wird. wenn das Molekulargewicht der öligen Masse 767,3tography for the isolation of isoprenyl alcohol with 11.0 double bonds are present in the molecule, 9 isoprene units. when the molecular weight of the oily mass is 767.3

Der Isoprenylalkohol mit 11 Isopreneinheiten wird 40 beträgt.The isoprenyl alcohol with 11 isoprene units will be 40.

nach einein Verfahren isoliert, bei welchem die ge- Das Infrarotspektrum und das NMR-Spektrum derisolated by a method in which the infrared spectrum and the NMR spectrum of the

reinigte Mischung aus Isoprenylalkoholen mit 9,11 und öligen Masse sind mit den Spektren der Mischung von 12 Isöpreneinheiten einer Adsorptionschromatogra- Isoprenylalkoholen vollständig identisch. Aus den 'phie unterzögen wird, wobei ein Kieselgel und ein vorstehend erwähnten Tatsachen ist der Schluß zu geeigneter Entwickler, wie beispielsweise 10%iger 45 ziehen, daß die ölige Masse Undecaisoprenol, d.h. (Volumen/Volumen) Äthyläther, der n-HeXan enthält, Isoprenylalkohol mit 11 Isopreneinheiten, ist. verwendet wird. . . · . Die Identifizierung von Isoprenylalkohol mit 12 Iso-Purified mixture of isoprenyl alcohols with 9.11 and oily mass are matched with the spectra of the mixture of 12 isoprene units of an adsorption chromatography isoprenyl alcohol completely identical. From the 'phie undergoes taking a silica gel and one of the above facts is the conclusion a suitable developer such as 10% 45 draws the oily mass undecaisoprenol, i. (Volume / Volume) Ethyl ether containing n-HeXane, isoprenyl alcohol with 11 isoprene units. is used. . . ·. The identification of isoprenyl alcohol with 12 iso-

Der Isoprenylalkohol mit 12 isöpreneinheiten wird. preneinheiten wird wie folgt durchgeführt:The isoprenyl alcohol with 12 isopren units is. pren units is carried out as follows:

nach, einem Verfahren isohert, bei wolchem die ge- ' Die gereinigte Mischung von Isoprenylalkoholenaccording to a process isohert, at which the purified mixture of isoprenyl alcohols

reinigte Mischung äiis Isoprenyialkoholen mit 9, 11 5° mit 9, 11 und 12 Isopreneinheiten wird einer Adsorp-Purified mixture of isoprene alcohols with 9, 11 5 ° with 9, 11 and 12 isoprene units is an adsorption

'und .12 Isopreneinheiten einer Adsorptiohschromato- tionschromatographie unter Verwendung von Kiesel-'and .12 isoprene units of an adsorption chromatography using silica

gräphie unter Verwendung von Kieselgel und eines gel und einem Entwickler, beispielsweise 5%igemgräphie using silica gel and a gel and a developer, for example 5%

geeigneten Entwicklers, wie beispielsweise 5%igem (Volumen/Volumen) Äthyläther,' der η-Hexan enthält,suitable developer, such as 5% (volume / volume) ethyl ether containing η-hexane,

. (Volumen/Volumen) Äthyläther, der η-Hexan enthält, unterzogen. Auf diese Weise wird eine farblose ölige. (Volume / volume) ethyl ether containing η-hexane subjected. In this way it becomes a colorless oily

unterzogen wird. , 55 Masse erhalten, welche bei der Papierchromatographieis subjected. , 55 mass obtained, which in paper chromatography

Die Identifizierung von Isoprenylalkohol mit 9 Iso- mit umgekehrten Phasen unter Verwendung von preneinheiten wird wie folgt durchgeführt: · Ν,Ν'-Dimethylformamid als Lösungsmittel einen Rf-The identification of isoprenyl alcohol with 9 iso- with reversed phases using prene units is carried out as follows: Ν, Ν'-dimethylformamide as a solvent an Rf-

Die gereinigte Mischung aus Isoprenyialkoholen; mit Wert von 0,34 besitzt, einen Schmelzpunkt von 15 bis 9,11 und 12 Isopreneinheiten, welche nach dem bean- 16°C aufweist und einen Brechungsindex von nf?" spruchten Verfahren erhalten wird, wird mittels 60 = 1,5095 zeigt.The purified mixture of isoprene alcohols; with a value of 0.34, a melting point of 15 to 9.11 and 12 isoprene units, which according to the approximately 16 ° C. and a refractive index of nf? " is obtained, is shown by means of 60 = 1.5095.

Adsorptionschrömatographie unter Verwendung eines Kieselgels abgetrennt. Eine Fraktion, welche, zum Schlub eluiert worden ist, wird bei Normaltemperatur ^verfestigt. Der Feststoff wird zur Gewinnung von „ weiten Kristallen mit einem F. von 38 bis 40^üC aus-65 Aceton auskristallisiert. Werden die weißen Kristalle mit Solähesöl (mit 9 Isöpreneiriheiten), welches aus Tabakblättern nach dem Verfahren von Ro wiandSeparated adsorption chromatography using silica gel. A fraction which has been eluted at the end is solidified at normal temperature. The solid is crystallized from acetone to obtain large crystals with a ^{temperature of 38 to 40 ° C.} Are the white crystals with Solähesöl (with 9 Isöpreneiriheiten), which wiand from tobacco leaves according to the procedure of Ro

Das Molekulargewicht der öligen Masse ist wie folgt: ;The molecular weight of the oily mass is as follows:;

Test(l)Test (l) Test (2)Test (2) Gefunden i... ν ν :·^:::::^::"-::
Berechnet Found i ... ν ν ^·: ^::::: "- ::
Calculated • 837 ^;
835,4• 837 ^;
835.4 829
835,4 ·829
835.4

Die Elementaranalyse der öligen Masse ist wie folgt:The elemental analysis of the oily mass is as follows:

Gefunden ...
Berechnet als'Found ...
Calculated as'

86,19% 86,26%86.19% 86.26%

12,00% 11,82%12.00% 11.82%

Wird die ölige Masse hydriert, so stellt man fest, daß 12,17 Doppelbindungen in dem Molekül zugegen sind, wenn man annimmt, daß das Molekulargewicht der öligen Masse 835,4 beträgt.If the oily mass is hydrogenated, it is found that 12.17 double bonds are present in the molecule assuming that the molecular weight of the oily mass is 835.4.

Das Infrarotspektrum und das NMR-Spektrum der öligen Masse sind vollständig mit den Spektren der Mischung von Isoprenylalkoholen identisch. Aus den vorstehend angegebenen Tatsachen ist der Schluß zu ziehen, daß die ölige Masse Undecaisoprenol, d. h. Isoprenylalkohol mit 12 Isopreneinheiten ist.The infrared spectrum and the NMR spectrum of the oily mass are complete with the spectra of the Mixture of isoprenyl alcohols identical. From the facts given above, the conclusion is closed draw that the oily mass is undecaisoprenol, d. H. Is isoprenyl alcohol with 12 isoprene units.

example 1

140 g der fettartigen Bestandteile, die durch Acetonextraktion aus 3,3 kg Seidenraupenexkrementen erhalten werden, werden mit Kalilauge—Methanol verseift, wobei die Verseifung 2 Stunden lang unter Rühren bei einer Temperatur von 6O⁰C durchgeführt wird. Die gesamte Masse wird mit Hexan versetzt, worauf die Hexanphase mit 90%igem Methanol und anschließend mit Wasser zur Gewinnung von 100 g einer nichtverseiften Masse mit einer rötlichbraunen Farbe gewaschen wird. 100g der nichtverseiften Masse werden in η-Hexan gelöst, worauf die Lösung auf 0° C abgekühlt wird. Die ausgefällten Kristalle werden durch Filtration gesammelt. Das Filtrat wird zur Entfernung von η-Hexan destilliert. Nach dem Auflösen des erhaltenen Rückstands in Aceton (in der 5f achen Volumenmenge) wird die Lösung auf —40⁰C abgekühlt, worauf die Kristalle durch Filtration abgetrennt werden und die geschilderte Arbeitsweise 2- bis 3mal zur Gewinnung' von 15 g einer hellgelben öligen Masse (bei Zimmertemperatur) wiederholt wird.140 g of the fat-like components, which are obtained by acetone extraction from 3.3 kg silkworm excrement, be saponified with potassium hydroxide-methanol to give the hydrolysis is carried out for 2 hours with stirring at a temperature of 6O ⁰ C. Hexane is added to the entire mass, whereupon the hexane phase is washed with 90% strength methanol and then with water to obtain 100 g of a non-saponified mass with a reddish-brown color. 100 g of the unsaponified mass are dissolved in η-hexane, whereupon the solution is cooled to 0 ° C. The crystals precipitated are collected by filtration. The filtrate is distilled to remove η-hexane. After dissolving the obtained residue in acetone (in 5f surfaces volume quantity), the solution is cooled to -40 ⁰ C, whereupon the crystals are separated by filtration, and the described operation of 2- g to 3 times for obtaining 'of 15 a light yellow oily mass (at room temperature) is repeated.

In dieser öligen Masse sind Isoprenylalkohole und etwas Sterin enthalten. Diese ölige Masse wird einer Molekulardestillation unter einem Vakuum von weniger als 10-'mm Hg unterzogen, wobei eine zwischen 180 und 240⁰C siedende Fraktion gesammelt wird. Als Ergebnis werden 10 g einer hellgelben öligen Masse (nf° = 1,5110) erhalten.This oily mass contains isoprenyl alcohol and some sterol. This oily mass is subjected to molecular distillation under a vacuum of less than 10 Hg'mm, wherein a boiling 180-240 ⁰ C fraction is collected. As a result, 10 g of a light yellow oily mass (nf ° = 1.5110) are obtained.

Es stellt sich heraus, daß die hellgelbe ölige Masse bei der Dünnschichtchromatographie einen einzigen Fleck ergibt; aus dem Infrarotspektrum sowie dem NMR-Spektrum ist zu ersehen, daß eine Mischung aus Isoprenylalkoholen vorliegt.It turns out that the light yellow oily mass is a single one in thin layer chromatography Stain results; from the infrared spectrum and the NMR spectrum it can be seen that a mixture of Isoprenyl alcohols is present.

Aus einer Reihe von Analysen der öligen Masse mittels Papierchromatographie mit umgekehrten Phasen geht ferner hervor, daß diese Masse aus jeweils 45% Isoprenylalkoholen mit 11 und 12 Isopreneinheiten und ungefähr 10% Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten besteht.From a series of analyzes of the oily mass using reversed phase paper chromatography It also emerges that this mass consists in each case of 45% isoprenyl alcohols with 11 and 12 isoprene units and approximately 10% isoprenyl alcohol with 9 isoprene units.

10 g der Isoprenylalkoholmischung werden unter Verwendung von 100 g Kieselgel einer Adsorptionschromatographie unterzogen. Unter Verwendung von Äthyläther, welcher η-Hexan als Entwickler enthält, wird die Mischung zuerst mit 5%igem (Volumen/ Volumen) Äthyläther, der η-Hexan enthält, zur Isolierung der Fraktion (A) und anschließend mit 10%igem (Volumen/Volumen) Äthyläther, der η-Hexan enthält, zur Isolierung der Fraktion (B) sowie schließlich mit 15%igem (Volumen/Volumen) Äthyläther, der η-Hexan enthält, zur Isolierung der Fraktion (C) behandelt. Jede der isolierten Fraktionen (A), (B) und (C) wird zur Entfernung des Lösungsmittels behandelt, wobei Fraktionen mit 4 bzw. 0,8 g erhalten werden.10 g of the isoprenyl alcohol mixture are subjected to adsorption chromatography using 100 g of silica gel. Under the use of Ethyl ether, which contains η-hexane as a developer, is the mixture first with 5% (volume / Volume) Ethyl ether, which contains η-hexane, for the isolation of fraction (A) and then with 10% (volume / volume) ethyl ether, which contains η-hexane, for the isolation of fraction (B) as well finally with 15% (volume / volume) ethyl ether containing η-hexane to isolate the fraction (C) treated. Each of the isolated fractions (A), (B) and (C) is used to remove the solvent treated, with fractions of 4 and 0.8 g are obtained.

Zur Vervollständigung der Reinigung einer jeden Fraktion ist es erforderlich, die Absorptionschromato-To complete the purification of each fraction, it is necessary to use the absorption chromato-

graphie zu wiederholen; es ist jedoch möglich, diese nur einmal durchzuführen, wenn die Chromatographie sehr sorgfältig ausgeführt wird.to repeat graphics; however, it is possible to do this to be carried out only once if the chromatography is carried out very carefully.

Durch die vorstehend erwähnte Identifizierungsmethode wird bekräftigt, daß die Fraktion (A) Iso- prenylalkohol mit 11 Isopreneinheiten, die Fraktion(B) Isoprenylalkohol mit 12 Isopreneinheiten und die Fraktion (C) Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten (d. h. Solanesol) ist.The identification method mentioned above confirms that fraction (A) iso- prenyl alcohol with 11 isoprene units, the fraction (B) isoprenyl alcohol with 12 isoprene units and the fraction (C) is isoprenyl alcohol having 9 isoprene units (i.e. solanesol).

Example 2

140 g einer dunkelgrünen öligen Masse, welche durch Aceton-Extraktion von 400 g trockenen Maulbeerbaumblättern erhalten werden, werden mit Kalilauge—Methanol unter Erhitzen verseift. Die gesamte 140 g of a dark green oily mass obtained by acetone extraction from 400 g of dry mulberry leaves are obtained are saponified with potassium hydroxide solution-methanol with heating. The whole

Masse wird mit Hexan versetzt, worauf die Hexanphase abgetrennt wird und zur Gewinnung von 70 g einer rötlichbraunen nichtverseiften Masse gut mit 90%igem Methanol gewaschen wird.
70 g der nichtverseiften Masse werden in einem 5fachen Volumen aufgelöst, worauf die Lösung zur Ausfällung von Sterin u. dgl. auf — 10⁰C abgekühlt wird. Das ausgefällte Sterin sowie ähnliche Bestand' teile werden aus dem Filtrat abgetrennt, worauf das Filtrat zur Erzielung von Kristallen auf —35°C abgekühlt wird. Die Kristalle werden von dem Filtrat abgetrennt und mit kaltem Aceton gewaschen. Auf diese Weise werden 40 g Kristalle erhalten, die bei Normaltemperatur in eine orangegefärbte ölige Masse übergehen. Hexane is added to the mass, whereupon the hexane phase is separated off and washed thoroughly with 90% methanol to obtain 70 g of a reddish-brown unsaponified mass.
70 g of unsaponified material are dissolved in a 5-fold volume, and the solution to precipitate sterol and the like on -.. Is cooled to -10 ⁰ C. The precipitated sterol and similar components are separated from the filtrate, whereupon the filtrate is cooled to -35 ° C. to obtain crystals. The crystals are separated from the filtrate and washed with cold acetone. In this way, 40 g of crystals are obtained which turn into an orange-colored oily mass at normal temperature.

Diese orangegefärbte ölige Masse wird unter einem Vakuum von 10~^s mm Hg einer Molekulardestillation unterzogen, wobei eine Fraktion gesammelt wird, die bei einer Temperatur von 180 bis 240⁰C übergeht. Als Ergebnis dieser Destillation werden 10 g einer orangegefärbten öligen Masse erhalten. Die orangegefärbte ölige Masse wird in Hexan gelöst, worauf die Lösung auf -4O⁰C zur Ausfällung von Kristallen abgekühlt wird. Die Kristalle werden durch Filtration abgetrennt; dabei werden 5 g der Isoprenylalkoholmischung erhalten. This orange-colored oily mass is ^{subjected to molecular distillation under a vacuum of 10 ~ s} mm Hg, a fraction which passes over at a temperature of 180 to 240 ^{° C. being collected.} As a result of this distillation, 10 g of an orange-colored oily mass are obtained. The orange colored oily matter is dissolved in hexane, and the solution is cooled to ⁰ -4o C to precipitate crystals. The crystals are separated off by filtration; 5 g of the isoprenyl alcohol mixture are obtained.

Die Isoprenylalkoholmischung wird nach der im Beispiel 1 beschriebenen Weise einer Adsorptionschromatographie unterzogen, wobei 1,5 g Isoprenylalkohol mit 12 Isopreneinheiten, 1,5 g Isoprenylalkohol mit 11 Isopreneinheiten und 0,5 g Isoprenylalkohol mit 9 Isopreneinheiten erhalten werden.The isoprenyl alcohol mixture is subjected to adsorption chromatography in the manner described in Example 1, 1.5 g of isoprenyl alcohol with 12 isoprene units, 1.5 g isoprenyl alcohol with 11 isoprene units and 0.5 g isoprenyl alcohol with 9 isoprene units can be obtained.

Diese Isoprenylalkohole besitzen dieselben Eigenschaften wie die aus Seidenraupenexkrementen gewonnenen Isoprenylalkohole. These isoprenyl alcohols have the same properties as the isoprenyl alcohols obtained from silkworm excrement.

Example 3

100 g der unverseiften Masse, die nach der im Beispiel 1 beschriebenen Weise aus Seidenraupenexkrementen gewonnen wird, werden unter einem Vakuum von 10-³mm Hg zur Abtrennung einer bei 180 bis 240⁰C übergehenden Fraktion von Phytol und Sterin, die bei einer Temperatur von weniger als 180⁰C destil-100 g of unhydrolyzed mass, which is obtained by the method described in Example 1 from silkworm excrement, be under a vacuum of 10 ^-3 mm Hg for separating a passing over at 180 to 240 ⁰ C fraction of phytol and sterol, at a temperature of less than 180 ⁰ C distill-

109549/537109549/537

Claims

9 109 10

lieren, subjected to molecular distillation. 30 g then mixed with water and with ether extra of the fraction obtained, which are hiert at a temperature. The extract is washed with water, distilled over from 180 to 240 ° G, are redissolved in acetone and the solvent from the extract ·: dissolved, whereupon the solution for the separation of; in this way 8 g of a crude crystal are cooled to -35 ° C. 25 g of the S isoprenyl alcohol with 9 isoprene units were obtained.
Crystals which at normal temperature turn into an orange If the crude isoprenyl alcohol changes to an adsorption-colored, oily state, they are subjected to chromatography (50 g of silica gel) and obtained by filtration. 10% ig ^em (volume / volume) ether treated, the

The orange-colored oily mass is a mixture containing η-hexane, then 5 g of a pure Isoaus approximately pure isoprenyl alcohols. 8 g of iso- io prenyl alcohol with 9 isoprene units were obtained. The

prenyl alcohol with 12 isoprene units, 6 g isoprenyl pure product is recrystallized from acetone, whereby

alcohol with 11 isoprene units and 1.5 g of isoprenyl crystals can be obtained, which have a melting point

alcohol with 9 isoprene units are obtained when have 40 ⁰ C. The product results in the thin

the above-mentioned mixture after the in-layer chromatography as well as in the paper chromatography described manner of an adsorption chromatography with reversed phases a single one

togiaphie is subjected. Stains. The infrared adsorption spectrum as well as the

,. ■ The NMR spectrum of the product agrees with the in

Example 4 described in the references given above

Spectra match.

10 g of the isoprenyl alcohol mixture, which according to Bei ao B is ρ ie 1 7
game 1 is obtained, -will be in 5 times the volume
Acetone dissolved, whereupon the solution to precipitate 600 g of unsaponified mass of a crude Isoprenylalkohols having 9 isoprene units Example 1 described manner is cooled from silkworm ^v at a temperature from 0 to -10 ⁰ C after the & ■ *. Excrement is obtained, the precipitated crude isoprenyl alcohol is dissolved in 600 g of n-hexane with 9 isoprene-25, whereupon the precipitated crystals from the attach will be separated from the same solvent to dissolve. The filtrate is washed several times recovering 0.8 g of isoprenyl alcohol with 9 isoprene times with 10% ^ei n methanol. The n-hexane units (F. approx. 38 ⁰ C) recrystallized further. Layer is concentrated and the concentrate is in vermitc'it the product with Isoprenylalkohol dissolved acetone, and the solution is cooled to ⁰ ° C which is derived from tobacco leaves, is then thirtieth Crystals are precipitated in this way, which, when examined by means of paper chromatography, will consist mainly of sterol and saturated alcohols with reversed phases; the crystals are kept from the solution, filtered. The filtrate is then cooled to −40 ° C., ■ κ -, -. Example 5 whereupon the precipitated crystals are removed by filtration. ■; ·., ·; - i 35 and washed with cold acetone; _; , 10 g deir Isoprenylalkoholmischung in accordance examples are then the crystals under the same game, is obtained 3, by the method described above in Example 4 Bedingungin Siert umkristallibeschriebeneri ^ manner for the recovery of Ig isoprenyl. In this way, 180 g of a light yellow alcohol with 9 isoprene units (F. 38 ⁰ C) are treated. oily mass obtained.

From the infrared adsorption spectrum and the 4P The oily mass is used to collect 100 g NMR spectrum, it can be seen that the product is that of a fraction obtained under a vacuum of standard isoprenyl alcohol with 9 isoprene units l-10 ~ ^s mm Hg at a temperature from 180 to speaks. : r; 240 ° C passes, a molecular distillation under Example 6 pulled. The fraction is then used in the manner described in,,: ι 45 examples to obtain

500 g of the unsaponified mass, which after the 5 g. Isoprenyl alcohol with 9 isoprene units with

Example 1 described'Methode treated from silkworm thi-urea

feces obtained are under one _{; :} . ; ₍ '

Vacuum of ΙΟ " ⁸ mm Hg to collect a frac- claim:. · ..

tion that passes between Ϊ80 and 240 ° C; one so _u;

Subjected to molecular distillation. The fraction is _^,:; Process for the production of isoprenyl alcohol dissolved 200 ml of benzene, whereupon the solution with 100 ml of oils with 9, 11 and 12 isoprene units, dadurc h

a 10% (weight / volume); _{Tliipharnstoff-;} geke η η ζ calibrate η et that from mulberry methahpl solution at a temperature of .20 ⁰ C tree leaves or silkworm excrement with

is mixed; _; in addition, benzene is added to an organic solvent of a fatty type until a homogeneous system is obtained. The mass extracted, this saponified with alkali, the non-

The homogeneous system obtained is separated off overnight in a saponified fraction and then through

Left to stand in the refrigerator, followed by the precipitated molecular distillation and fractional cooling

The crystals are washed well with cold benzene and purified by adsorption and / or adsorption chromatography.

1 sheet of drawings