DE1517733C

DE1517733C - Process for the production of a bacterial preparation suitable for the inoculation of legume seeds

Info

Publication number: DE1517733C
Authority: DE
Inventors: Per Staffan Södertälje Delin (Schweden)
Original assignee: Astra AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Publication date: 1971-11-18

Description

ΙΟΙ// DD
1 2 ΙΟΙ // DD
1 2

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zui Herstellung terien ein Unterschied der Fähigkeit, trockenen und eines für die Impfung von Leguminosen-Samen ge- heißen Bedingungen zu widerstehen, vorliegt und daß eigneten Bakterienpräparates. Diese frei in der Erde Rhizobium-Bakteri'en als unterschiedliche Stämme lebenden Bakterien besitzen die Fähigkeit, die Wurzeln verschiedener Widerstandsfähigkeit auftreten,
von Pflanzen, die zu der Familie Leguminosae gehören, 5 Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung zu befallen: Dabei bilden sich an den Wurzeln der Le- eines für die Impfung von Leguminosen-Samen geguminosen Knötchen, und unter bestimmten Bedin- eigneten Bakterien-Präparates ist dadurch gekenngungen kennen diese Knötchen den Stickstoff der Luft zeichnet, daß man Rhizobium-Bakterien mit guten in eine organisch gebundene Form umwandeln. Diese Befall- und Stickstoff bindungsfähigkeiten in VerTatsache'benutzt man in der Landwirtschaft zur Bo- io bindung mit einer bestimmten Leguminosen-Art in denverbesserung. an sich bekannter Weise auf einem KulturmediumThe invention relates to a method for producing a difference between the ability to withstand dry conditions and conditions hot for the inoculation of legume seeds and that suitable bacterial preparations are present. These bacteria living freely in the ground as different strains of Rhizobium bacteria have the ability to occur at the roots of different resistance,
of plants belonging to the Leguminosae family, 5 To infest the method according to the invention for production: In this case, nodules which are gummed for the inoculation of leguminous seeds are formed on the roots of the leathers and, under certain conditions, bacterial preparation is thereby formed Kenngungen these nodules know the nitrogen in the air so that Rhizobium bacteria can be converted into an organically bound form with good results. These infestation and nitrogen-binding abilities in fact are used in agriculture to bind soil with a certain type of legume for improvement. in a manner known per se on a culture medium

Weiterhin ist bekannt, daß bestimmte Rhizobium- züchtet, die so erhaltene Bakterienkultur bei einerIt is also known that certain Rhizobium breeds, the bacterial culture thus obtained in a

Stämme mit bestimmten Leguminosen eine Stickstoff Temperatur von höchstens 95° C trocknet und sodannStrains with certain legumes are dried at a nitrogen temperature of at most 95 ° C and then

bindende Symbiose bilden. Beispielsweise bindet das Züchten und Trocknen der Bakterienkultur we-form a binding symbiosis. For example, growing and drying the bacterial culture binds

Rhizobium trifoli Stickstoff mit Klee, nicht aber mit 15 nigstens noch einmal wiederholt. Zweckmäßig trock-Rhizobium trifoli nitrogen with clover, but not repeated at least once again at 15. Appropriately dry

Erbsen und Wicken, und Rhizobium leguminosarum net man jeweils mindestens 7 Tage,Peas and vetches and Rhizobium leguminosarum are net each for at least 7 days,

bindet Stickstoff bei Erbsen und Bohnen, nicht aber bei Günstigerweise wird das Züchten und Trocknen sobinds nitrogen in peas and beans, but not in Favorably growing and drying is done that way

Klee. oft wiederholt,- bis mindestens 90°/₀ der BakterienClover. repeated, - to at least 90 ° / ₀ of the bacteria

Die deutsche Patentschrift 1 056 082 beschreibt ein beim Trocknen an Luft überleben. Das Trocknen kann Verfahren zur Herstellung eines Azotobakter-Präpa- 20 beispielsweise durch Überführen der Bakterienkultur rates durch Züchtung von Azotobakter-Kulturen in auf ein Trockenmittel, beispielsweise mit hygroskopieinem Kulturmedium und anschließende Trocknung sehen Eigenschaften, wie Kieselsäuregel, durchgeführt "der Bakterienkultur. Es zeigte sich aber in der Ver- werden. Auch können andere herkömmliche Trockengangenheit, daß ein entsprechendes Verfahren für die verfahren angewendet werden, wie beispielsweise BeGewinnung von Rhizobium-Präparaten nicht geeignet 25 lüften mit einem geeigneten, gegebenenfalls erhitzten ist, da die Trockenpräparate ihre Aktivität ganz oder Gas oder Gasgemisch oder auch Vakuumtrocknen zum größten Teil verloren haben. Daher war man bis- , oder Sprühtrocknen. Auchfkann man, wenn erwünscht, her der Auffassung, daß Phizobium-Präparate nur in Wärmestrahlung allein oder in Verbindung mit einer feuchter Form, wie in Verbindung mit feuchter Erde anderen Methode anwenden. Schließlich ist es auch oder feuchtem Torf, lagerfähig seien und in den Handel 30 möglich, Ultraviolettlichtbestrahlung anzuwenden, wokommen könnten, nicht dagegen in der Form von bei man gegen Sonneneinstrahlung resistente Bak-Trockenpräparaten. Dies aber hatte seinerseits die terienpräparate erhält.German patent specification 1 056 082 describes survival when dried in air. The drying can Process for the production of an azotobacter preparation, for example by transferring the bacterial culture rates by growing azotobacter cultures on a desiccant, for example with a hygroscopic agent Culture medium and subsequent drying see properties such as silica gel performed "of the bacterial culture. However, it was shown in the process. Other conventional drying processes, that a corresponding procedure is used for the procedure, such as, for example, BeGewinnung of Rhizobium preparations not suitable 25 ventilate with a suitable, possibly heated one is because the dry preparations completely dry their activity or gas or gas mixture or vacuum drying have lost for the most part. Therefore one was up- or spray-drying. You can also, if desired, ago believes that Phizobium preparations can only be used in thermal radiation alone or in conjunction with a wet form, as in connection with wet earth use another method. After all, it is too or moist peat, which can be stored and where it is possible to use ultraviolet light irradiation but not in the form of dry Bakery preparations that are resistant to sunlight. But this, in turn, had received the serial preparations.

nachteilige Folge, daß mit solchen feuchten Präparaten Im.folgenden wird die Erfindung an Hand einigerdisadvantageous consequence that with such moist preparations Im.folgend the invention is based on some

die Leguminosen-Samen nicht vorgeimpft werden Beispiele weiter erläutert.The legume seeds are not pre-inoculated, examples are explained further.

konnten, sondern das Impfen vom Landwirt selbst 35 Eine Zahl von Rhizobium-Stämmen aus verschie-' unmittelbar vor dem Auslegen der Saat erfolgen denen Impfgruppen ist in den unten aufgeführten mußte. Dies führte nicht nur zu einer zusätzlichen Tabellen gezeigt, wobei alle gute Befall-und Stickstoff-Arbeitsbelastung des Landwirtes, sondern oftmals auch bindungsfähigkeiten in Verbindung mit der verwenzu mangelhaften Ergebnissen, wenn nämlich der Land- deten Leguminosen-Art besaßen. Diese Stämme wurwirt nicht darauf achtete, daß die so geimpften Samen 40 den getrennt auf Kulturmedien nach Dorn gezüchtet nur bei feuchtem Wetter ausgelegt werden durften, oder (s. beispielsweise Marta Dorn: Über den Einfluß er versehentlich die geimpften Samen bis zum Auslegen phytopathogener Pilze auf die Entwicklung und Ineinige Zeit liegen ließ, so daß sie austrocknen konnten. fektionskraft von drei Rhizobium-Arten, Zentralblattbut vaccination by the farmer himself 35 A number of Rhizobium strains from different Immediately before laying out the seeds, those vaccination groups should be given in those listed below had to. Not only did this lead to additional tables being shown, all showing good infestation and nitrogen workloads of the farmer, but often also attachment skills in connection with the use poor results, namely when the landed possessed legume species. These strains are host did not ensure that the seeds inoculated in this way were grown separately on culture media according to Dorn were only allowed to be laid out in damp weather, or (see, for example, Marta Dorn: On the Influence he accidentally the inoculated seeds up to laying phytopathogenic fungi on the development and in some Allowing time for them to dry out. power of three Rhizobium species, central leaf

Aus der deutschen Patentschrift 658 764 ist weiterhin für Bakteriologie, 109, S. 120, 1956). Die Stämme ein Verfahren zur Züchtung von für die Butylalkohol- 45 wurden dann unter aseptischen Bedingungen auf der Aceton-Gärung geeigneten Bakterien bekannt, indem einen Seite von semipermeablen Membranen verman nach einer Hitzebehandlung die Bakterien auf schmiert; die Membranen wurden dann mit der beNährböden mit alkalischer Reaktion ohne Erhitzen schmierten Seite nach oben auf das gleiche Kulturweiter züchtet und gegebenenfalls beide Züchtungs- medium gelegt, dem 2°/„ Agar-Agar zugesetzt war, arten mehrere Male wiederholt. Auch hier handelt es 5° um ein festes Kulturmedium zu erhalten. Nach 3- bis sich aber um andere Bakterienstämme, die im Gegen- 5tägiger Bebrütung bei 28° C wurden die Membranen satz zu Rhizobium-Bakterien zur Sporenbildung be- mit der daranhängenden Bakterienmasse unter asepfähigt sind. Eine Übertragung dieses bekannten Ver- tischen Bedingungen in halb mit trockenem Kieselfahrens auf Rhizobium-Stämme konnte nicht nahe- säuregel mit Feuchtigkeitsindikator gefüllte Präparatgelegen haben, da man entsprechend den obigen Aus- 55 röhren übergeführt, in denen man die Bakterien führungen der Auffassung war, daß Rhizobium-Bakte- 2 Tage bei 28° C trocknen ließ, worauf die Temperatur rien durch Austrocknen in ihrer Gesamtheit zerstört dann auf 70⁰C gesteigert und 7 Tage auf dieser Höhe würden. gehalten wurde. Die Membranen mit den BakterienFrom the German patent specification 658 764 is still for bacteriology, 109, p. 120, 1956). The strains, a process for the cultivation of bacteria suitable for butyl alcohol, were then known under aseptic conditions for acetone fermentation by smearing the bacteria on one side of semipermeable membranes after a heat treatment; The membranes were then grown on the same culture with the side smeared on the culture media with an alkaline reaction without heating and, if necessary, both culture medium, to which 2% agar agar had been added, were repeated several times. Here, too, it is a matter of 5 ° to obtain a solid culture medium. However, after 3 to 5 other bacterial strains that were incubated for the opposite day at 28 ° C., the membranes became Rhizobium bacteria to form spores and the bacteria mass attached to them are capable of asep. A transfer of this known vertical conditions in half with dry silica method to Rhizobium strains could not have been near acid gel filled with moisture indicator, since one transferred according to the above-mentioned tubes in which the bacterial guides were of the opinion that Rhizobium bacteria allowed to dry for 2 days at 28 ° C, whereupon the temperature rien destroyed by drying out in its entirety, then increased to 70 ⁰ C and 7 days at this level. was held. The membranes with the bacteria

Aufgabe der Erfindung war es nunmehr, ein für die wurden dann wieder auf Agar-Platten mit DomsThe object of the invention was now, one for which were then again on agar plates with doms

Impfung von Leguminosen-Samen geeignetes Bakte- 60 Kulturmedium gebracht, wobei die die BehandlungInoculation of legume seeds brought suitable bacteria-60 culture medium, with the treatment

rienpräparat in der Form eines Trockenpräparates zu überlebenden Bakterien sich vermehrten und Kolonienrienpräparat in the form of a dry preparation to survive bacteria multiply and colonies

erhalten, mit Hilfe dessen die Impfung der Legumino- bildeten. Diese wurden als Mutterkulturen für das zurobtained, with the help of which the vaccination of the Legumino-formed. These were used as mother cultures for the

sen-Samen bereits beim Samenhändler erfolgen kann, Impfung von Leguminosen-Samen verwendete Ma-sen seeds can already be done at the seed dealer, vaccination of legume seeds used ma-

was mit feuchten Präparaten nicht möglich ist, da die terial und die nachfolgenden Vergleichsversuche be-which is not possible with moist preparations, since the material and the subsequent comparative tests

Samen beim Händler trockengehalten werden müssen 65 nutzt. Natürlich ist es auch möglich, das "VerfahrenSeeds must be kept dry at the dealer 65 uses. Of course it is also possible to use the 'procedure

oder wenigstens nach der Impfung wieder austrocknen. zu wiederholen, und die Zeit sowie auch die Tem-or at least dry out again after vaccination. to repeat, and the time as well as the tem-

Dic Erfindung baut nun auf der Erkenntnis auf, peratur der Behandlung können variiert werden, jeThe invention is now based on the knowledge that the temperature of the treatment can be varied, depending on

daß innerhalb einer Population von Rhizobium-Bak- nach der speziellen Resistenz des Ausgangsmaterialsthat within a population of Rhizobium-Bak- according to the special resistance of the starting material

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und der erwünschten Resistenz des Bakterienpräparates. and the desired resistance of the bacterial preparation.

Nun wurde ein Vergleich zwischen den Ausgangsstämmen und dem so nach der Erfindung erhaltenen Bakterienpräparat durchgeführt. Die Bakterien wurden unter aseptischen Bedingungen in der zehnfachen Menge Wasser mit einer geeigneten Menge von inertem Klebstoff, in diesem Fall Montmorillonit oder Äthyl-hydroxyäthylcellulose, suspendiert. Diese Suspensionen wurden dann auf Samen und im Laboratorium auf Glasperlen mit einem Durchmesser von 2 mm untersucht. Durch die Zugabe von Klebstoff haften die Bakterien gut an den Samen und Glasperlen an. Die Glasperlen wurden an Stelle von Samen verwendet, wenn man quantitative Messungen der Abtötungsgeschwindigkeit unter Laboratoriumsbedingungen durchführte. Die Samen wurden verwendet, wenn man die Bildung von Kriötchen und die Stickstoff-Fixierung. untersuchte.A comparison was now made between the starting strains and that obtained in accordance with the invention Bacterial preparation carried out. The bacteria were aseptic in ten fold Amount of water with a suitable amount of inert glue, in this case montmorillonite or Ethyl hydroxyethyl cellulose, suspended. These suspensions were then on seeds and in the laboratory on glass beads with a diameter of 2 mm examined. By adding glue, the bacteria adhere well to the seeds and glass beads on. The glass beads were used in place of seeds when making quantitative measurements of the Killing rate performed under laboratory conditions. The seeds were used if you look at the formation of ticks and the nitrogen fixation. examined.

Die oben gezeigten Versuche auf Glasperlen ergaben die folgenden Ergebnisse:The experiments on glass beads shown above gave the following results:

Zur Untersuchung des ,Selektionseffektes des Verfahrens nach der Erfindung wurde die Zeit der Abtötung von 99 °/₀ verschiedener in der unten aufgeführten Tabelle angegebener Rhizobium-Stämme für den unbehandelten Ausgangsstamm und für einen bei 7O⁰C während 7 Tagen selektierten Stamm bestimmt. Suspensionen der einzelnen Bakterienkulturen wurden auf Glasperlen mit 2 mm Durchmesser unter aseptischen Bedingungen übergeführt, dann ließ man sie trocknen und bei 28° C und einer relativen Feuchtigkeit von 50 bis 70°/₀ stehen. Verschiedene Suspensionen von unterschiedlicher Verdünnung wurden von jedem untersuchten Stamm hergestellt, da die Ausgangskulturen viel zu konzentriert waren. Die Ausgangskultur wurde auf das Zehnfache verdünnt, wobei Verdünnungen von 10^s, 10^β, ΙΟ⁷ und ΙΟ⁸ schätzungsweise eine Menge von 10000, 1000, 100 und 10 Zellen pro Milliliter ergaben. Jede Verdünnung war also zehnmal stärker als die vorangehende Verdünnung. Jeweils von dem unbehandelten Stamm und dem nach der Erfindung erhaltenen Bakterienpräparat wurden vier Suspensionen hergestellt, d. h. zusammen acht Suspensionen je untersuchten Rhizobium-Stamms. Jede Suspension wurde in einer Menge von 2,0 ml über 70 g (= etwa 3500 Stück) Glasperlen in einem 500-ml-Erlenmeyer-Kolben verteilt, der während der Versuchszeit von mehr als 2 Monaten bei 28° C und einer Feuchtigkeit von 50 bis 70% stehengelassen wurde. Unmittelbar am Anfang und in Intervallen von 7 bis 10 Tagen wurden Proben von etwa 100 Glasperlen von jedem Präparat abgezogen. Die Zahl lebender Zellen in jeder Probe wurde durch Lebendauszählung bestimmt (s. beispielsweise R. A. Stanier, M. D oud or of f und E. A. Adelberg, General Microbiology, MacMillan & Co., London, 1958).To investigate the, selection effect of the method according to the invention, the time of killing was 99 determines ° / ₀ different specified in the table below Rhizobium strains for the untreated starting strain and for a selected at 7O ⁰ C for 7 days strain. Suspensions of the individual bacterial cultures were transferred to glass beads 2 mm in diameter under aseptic conditions, then allowed to dry and stand _{at 28 ° C. and a relative humidity of 50 to 70 ° / 0.} Different suspensions of different dilutions were made from each strain examined, since the starting cultures were far too concentrated. The starting culture was diluted tenfold, with dilutions of 10 ^s , 10 ^β ^{, ΙΟ 7} and ΙΟ ⁸ producing an estimated amount of 10,000, 1000, 100 and 10 cells per milliliter. Each dilution was ten times stronger than the previous dilution. Four suspensions were produced for each of the untreated strain and the bacterial preparation obtained according to the invention, ie a total of eight suspensions for each examined Rhizobium strain. Each suspension was distributed in an amount of 2.0 ml over 70 g (= about 3500 pieces) of glass beads in a 500 ml Erlenmeyer flask, which was stored at 28 ° C and a humidity of 50% for the test period of more than 2 months until 70% has been left. Immediately at the beginning and at 7-10 day intervals, samples of approximately 100 glass beads were withdrawn from each preparation. The number of living cells in each sample was determined by live counting (see, for example, RA Stanier, M. D oud or of f and EA Adelberg, General Microbiology, MacMillan & Co., London, 1958).

Die Glasperlen einer Probe wurden jeweils mit 5 ml Wasser unter aseptischen Bedingungen ¹I₂ Stunde geschüttelt, wobei sich die Zellen von den Glasperlen lösten und in die Wasserphase gingen. Bestimmte Mengen dieser 5 ml wurden dann auf der Oberfläche von Agar-Kulturplatten verteilt, und man ließ die einzelnen Zellen zu sichtbaren Kolonien auf den Platten wachsen. Aus der Zahl der Kolonien auf den Platten, der Zahl der Glasperlen der Probe und der pro Platte verwendeten Menge der 5-ml-Wasserphase wurde die Zahl der lebenden ,Bakterien pro Glasperle der
rechnet:The glass beads of a sample were each shaken with 5 ml of water under aseptic conditions for ¹ l ₂ hours, during which the cells detached from the glass beads and went into the water phase. Certain amounts of these 5 ml were then spread on the surface of agar culture plates, and the individual cells were allowed to grow into visible colonies on the plates. From the number of colonies on the plates, the number of glass beads in the sample and the amount of 5 ml water phase used per plate, the number of living bacteria per glass bead was determined
calculates:

Probe nach der folgenden Formel be-Sample according to the following formula

n = n =

M a-bM. away

worin η die Zahl der lebenden Bakterien pro Glasperle der Probe, M die Zahl der Kolonien pro Platte, α die Zahl der Glasperlen der Probe und b die auf der Platte verteilte Menge der 5-ml-Wasserphase bedeutet. Die Versuchsbedingungen wurden so gewählt, daß M zwischen 10 und 200, ä in der Größenordnung von 100 und b 0,1, 0,01, 0,001 oder 0,0001 ist. Durch Bestimmung von η unmittelbar nach der Behandlung der Glasperlen mit den Bakteriensuspensionen erhielt man auf diese Weise einen Ausgangswert /z₀ zum ' Zeitpunkt 0 für die verschiedenen Stämme. Wiederholte Bestimmungen von η ,wurden dann in Intervallen von 7 bis 10 Tagen durchgeführt. Da die Bakterien nach und nach auf den Glasperlen absterben,.where η is the number of living bacteria per glass bead of the sample, M is the number of colonies per plate, α is the number of glass beads of the sample and b is the amount of 5 ml water phase distributed on the plate. The experimental conditions were chosen so that M is between 10 and 200, a is in the order of 100 and b is 0.1, 0.01, 0.001 or 0.0001. By determining η immediately after the treatment of the glass beads with the bacterial suspensions, an initial value / z ₀ at time 0 was obtained for the various strains. Repeated determinations of η were then made at intervals of 7 to 10 days. As the bacteria gradually die on the glass beads.

hatte man zu erwarten, daß nach einer bestimmten Zeit η = 0,01 · n₀ wird. Dies bedeutet, daß nur 1 °/₀ der zum Zeitpunkt 0 lebenden Zellen noch am Leben war oder daß die Bakterien zu 99°/₀ abgetötet wurden. Je länger es dauert, daß dieser Abtötungsgrad erreicht "wird, desto resistenter ist das Bakterienpräparat. Die folgende Tabelle I, in der die Zeiten in Tagen zur 99°/_oigen Abtötung für verschiedene Stämme angegeben sind, zeigt, daß die nach der Erfindung hergestellten Bakterienpräparate viel resistenter und besser als die Ausgangsstämme sind, mit Ausnahme des Luzerne-Stammes, der schon bei Beginn eine große Resistenz besitzt.one had to expect that after a certain time η = 0.01 · n ₀ . This means that only 1 ° / ₀ of living cells at time 0 was still alive or that the bacteria to 99 ° / were killed _0th The longer it takes, that this degree of destruction is "achieved, the more resistant is the bacterial preparation. The following Table I in which the periods ° / _o by weight killing are shown for different strains in days to 99, shows that the produced according to the invention Bacterial preparations are much more resistant and better than the original strains, with the exception of the alfalfa strain, which is very resistant right from the start.

Tabelle ITable I. 3535 Rh. japonicum,Rh. Japonicum, Ausgangs
stammStarting
tribe Bakterien-
präparat nach
der ErfindungBacteria-
preparation after
the invention 4° Sojastamm4 ° soy strain . 8. 8th 55 '-55 '- Rh. meliloti, LuzerneRh. Meliloti, alfalfa Rh. trtfoli, KleestammRh. Trtfoli, clover stem 6565 6565 Rh. leguminosarum,Rh. Leguminosarum, 2020th 6565 Erbsen-Wicken-StammPea vetch trunk 88th 5555 45 Rh. phaseoli, Bohnen45 Rh.phaseoli, beans stammtribe 88th 4646 Rh. lupini, LupinenstammRh. Lupini, lupine stem 77th 2222nd

Vergleichende Kulturversuche auf Samen wurden in der folgenden Weise durchgeführt:Comparative culture experiments on seeds were carried out in the following manner:

Stämme von drei Rhizobiumarten, Rhizobium trifoli, Rhizobium meliloti und Rhizobium leguminosarum, wurden als unbehandelte Ausgangsstämme als Rt, Rm und Rl sowie nach 7tägiger Selektierung nach der Erfindung bei 70⁰C als Rt 7, Rm 7 und Rl 7 untersucht. Samen wurden zur Zeit 0 mit einer ver-Strains of three Rhizobium species, Rhizobium trifoli, Rhizobium meliloti and Rhizobium leguminosarum were examined as untreated parent strains as Rt, Rm and Rl and after 7 days triage according to the invention at 70 ⁰ C as Rt 7, Rm and Rl 7. 7 Seeds were at the time 0 with a ver

. dünnten Suspension der Ausgangsstämme und Bakr terienpräparate nach der Erfindung geimpft, und von den getrockneten Samen wurde eine bestimmte Zahl verwendet, um verschieden lange vom Zeitpunkt 0 an zu wachsen. In jedem Fall wurden Proben zur Abschätzung der Bakterienzahl pro Samen entnommen. Die Zahl der gewachsenen Pflanzen, die Knötchen zeigten, wurde aufgezeichnet. In Tabelle II sind die Ergebnisse von sechs solchen Experimenten aufgezeichnet. In der letzten Spalte eines jeden Experimentes ist die Zahl lebender Bakterien pro Samen in bestimmten Zeitabständen nach der Impfung wieder-. inoculated thin suspension of the starting strains and bacterial preparations according to the invention, and of the dried seeds were given a certain number to differentiate the length of time from 0 to grow. In each case, samples were taken to estimate the number of bacteria per seed. The number of plants grown showing nodules was recorded. In Table II are the Results from six such experiments are recorded. In the last column of each experiment is the number of living bacteria per seed at certain time intervals after vaccination.

gegeben. Die entsprechenden rechten Spalten geben die Zahl der Pflanzen von zehn Pflanzen wieder, die eine Knötchenbildung zeigten.given. The corresponding right-hand columns show the number of plants out of ten plants that showed nodulation.

• Das Ergebnis in der Tabelle zeigt, daß es mit^werfindungsgcmäß erhaltenen Bakterienpräparaten .nröglich ist, Knötchenbildung nach einer beachtlich'längeren''^:^: Zeit zwischen Impfung und Aussäen zu erhalten" als mit dem entsprechenden- unbehandelten Ausgangsstamm. ■ ■• The result in the table shows that it is .nröglich with erfindungsgcmäß received ^w bacteria preparations beachtlich'längeren nodule formation after '' ^{^:} to get time between vaccination and seeding "as the entsprechenden- untreated starting strain ■ ■.

Table II

(Fortsetzung Tabelle II)(Continuation of Table II)

Zahl dernumber of Pflanzenplant Zahl dernumber of Pflanzenplant lageposition Bakterienbacteria mitWith Bakterienbacteria mitWith pro Samenper seed KnötchenNodules pro Samenper seed KnötchenNodules ΐ" YVTΐ "YVT pro zehnper ten pro zehnper ten ■*,.■*■&■■*&■ * ,. ■ * ■ & ■■ * & Pflanzenplant Pflanzenplant

TageDays

nachafter

Impfungvaccination

Zahl der Bakterien pro SamenNumber of bacteria per seed

Pflanzenplant

mitWith

Knötchen pro zehn PflanzenNodules per ten plants

Zahl der Bakterien pro SamenNumber of bacteria per seed

Pflanzenplant

mitWith

Knötchen pro zehn PflanzenNodules per ten plants

Samen von Trifolium pratense, Klee I Rt I RtSeeds of Trifolium pratense, Klee I Rt I Rt

11 8-10⁴ 8-10 ⁴ 99 2-10^s 2-10 ^s 1010 1010 00 00 1 -10⁶ 1 -10 ⁶ 1010 2020th ■—■ - 00 8-10«8-10 « 99 30.30th 7-10⁴ 7-10 ⁴ 1010 ,40".40 " 6-10⁴ 6-10 ⁴ 99 9090 —- 88th

Samen von Medicago sativa, Luzerne I Rm I Rm7Medicago sativa seeds, alfalfa I Rm I Rm7

11 5-10⁴ 5-10 ⁴ 1010 7-10⁴ 7-10 ⁴ 1010 1010 2-10² 2-10 ² 66th 9-10³ 9-10 ³ 1010 2020th 00 00 2-10³ 2-10 ³ 1010 3030th —- 00 7-10² 7-10 ² 1010 4040 3-10² 3-10 ² 88th 9090 —- 77th

35 Samen von Pisum sativum, Erbse
I RI I Rl 735 seeds of Pisum sativum, pea
I RI I Rl 7

11 2-10⁶ 2-10 ⁶ 1010 5-10⁴ 5-10 ⁴ 99 1010 4-10⁴ 4-10 ⁴ 22 2-10⁴ 2-10 ⁴ 1010 2020th 5-10³ 5-10 ³ 00 2-10⁴ 2-10 ⁴ 1010 3030th 00 1 -10«1 -10 « 88th 4040 8-10³ 8-10 ³ 77th 9090 — ■- ■ 55

Claims

Patent claims:

1. Process for the production of a bacterial preparation suitable for the inoculation of legume seeds, characterized in that one Rhizobium bacteria with good Infestation and nitrogen-fixing abilities in connection with a certain type of legume cultivates the bacterial culture obtained in this way on a culture medium in a manner known per se dried at a temperature not exceeding 95 ° C and then growing and drying the bacterial culture repeated at least one more time.

2. The method according to claim 1, characterized in that one in each case at least 7 days dries.