DE10322348B4 - Device for the non-contact transfer of dissectates obtained by membrane-assisted laser microdissection - Google Patents

Device for the non-contact transfer of dissectates obtained by membrane-assisted laser microdissection Download PDF

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DE10322348B4 DE2003122348 DE10322348A DE10322348B4 DE 10322348 B4 DE10322348 B4 DE 10322348B4 DE 2003122348 DE2003122348 DE 2003122348 DE 10322348 A DE10322348 A DE 10322348A DE 10322348 B4 DE10322348 B4 DE 10322348B4
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    • G01N2001/2886—Laser cutting, e.g. tissue catapult

Abstract

Vorrichtung zum berührungsfreien Transfer von durch membrangestützte Lasermikrodissektion gewonnenen Dissektaten, mit einem ein Dissektat aus einer von einer Membran getragenen Probe ausschneidenden Laser und einem das ausgeschnittene Dissektat auffangenden Aufnahmegefäß, wobei der Transfer des vom Laser ausgeschnittenen Dissektats in das Aufnahmegefäß hinein durch ein am Dissektat angreifendes Feld unterstützt ist, dadurch gekennzeichnet, dass der Ausschneideprozess das ausgeschnittene Dissektat (25) elektrostatisch auflädt und der Transfer in das Aufnahmegefäß (40,70) hinein elektrostatisch unterstützt ist, und dass unterhalb des Aufnahmegefäßes (40,70) eine erste Elektrode (45) angebracht ist, die entgegengesetzt zu dem Dissektat (25) geladen ist, und dass zwischen dem Aufnahmegerät (40) und der Membran eine zweite ringförmig ausgebildete Elektrode (55,75) angebracht ist, die ebenfalls entgegengesetzt zu dem Dissektat (25) geladen ist und im Wesentlichen parallel zur Membran ausgerichtet ist, und dass die zweite Elektrode (55,75) gegenüber der ersten Elektrode (45) eine geringere Ladungsstärke aufweist und dass der Transfer durch eine dritte Elektrode...contraption for non-contact transfer of membrane-supported Laser microdissection obtained dissecting, with a dissectate from a laser cutting out a sample carried by a membrane and a receptacle collecting the cut-out dissectate, wherein transfer of the laser-cut dissectate into the receptacle is supported by a dissecting attacking field, characterized that the cutting process electrostatically charges the excised cut (25) and the Transfer to the receptacle (40,70) into electrostatically assisted is, and that below the receptacle (40,70) has a first electrode (45) mounted opposite to the dissectate (25) is, and that between the recording device (40) and the membrane a second annular trained electrode (55,75) is attached, which is also opposite is loaded to the dissectate (25) and substantially parallel to Membrane is aligned, and that the second electrode (55,75) across from the first electrode (45) has a lower charge strength and that the transfer by a third electrode ...

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Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zum berührungsfreien Transfer von durch membrangestützte Mikrodissektion gewonnenen Dissektaten.The The invention relates to a device for non-contact transfer of membrane supported Microdissection-derived dissectates.

Die membrangestützte Lasermikrodissektion ist ein erprobtes Verfahren zur Isolierung spezifischer Areale aus komplexen Gemengen oder Geweben unter mikroskopischer Sicht. Die kleinen (einige zehn bis einige 100 Mikrometer großen) und leichten Mikrodissektate müssen dabei in Reaktionsgefäße verbracht werden, um sie der weiteren Behandlung oder Analyse zu unterwerfen. Bei der Mikrodissektion mit hochfokussierten Lichtstrahlen treten aber in Abhängigkeit von der Art des verwendeten Lichts, des zu dissezierenden Materials und insbesondere der Trägermembran aus Kunststoff elektrostatische, -magnetische und andere Kräfte auf, die den Transfer des Mikrodissektates stören.The membrane supported Laser microdissection is a proven method for isolation specific areas of complex mixtures or tissues under microscopic View. The small ones (a few tens to a few 100 microns in size) and light microdissects need thereby spent in reaction vessels to subject them to further treatment or analysis. When microdissection with highly focused light rays occur but in dependence on the type of light used, the material to be dissected and in particular the support membrane plastic electrostatic, magnetic and other forces on, which disturb the transfer of the microdissectate.

Aus DE 101 35 091 A1 und DE 19804 800 C2 sind Vorrichtungen zur Mikrodissektion bekannt.Out DE 101 35 091 A1 and DE 19804 800 C2 are known devices for microdissection.

Derzeit werden drei verschiedene Systeme angeboten:

  • 1. Stempeltechnik (Fa. MMI, Glattbrugg, CH): Ein speziell geformter Stempel wird auf die Membran gesetzt und wieder abgehoben. Das Mikrodissektat haftet am Stempel, der zum Beispiel als Deckel eines Reaktionsgefäßes ausgebildet sein kann. Dabei ist die Haftung zwischen Dissektat und Stempelmaterial (zum Beispiel 2-Komponenten-Silikon Elastosil RT 601, Wacker-Chemie) wesentlich. Eine gute Haftung am Stempel erleichtert den zuverlässigen Transfer des Dissektates, behindert aber die nachfolgende Analyse.
  • 2. Laser Pressure Catapulting (LPC, Fa. P.A.L.M., Bernried, D): Nach der Mikrodissektion wird der Laserstrahl defokussiert und das Dissektat mit einem defokussierten Laserpuls nach oben in eine Auffangvorrichtung katapultiert.
  • 3. Schwerkraft (Fa. Leica Microsystems, Wetzlar, D): Nach der Mikrodissektion fällt das Dissektat nach unten in eine Auffangvorrichtung. Die beiden letzten Verfahren arbeiten berührungsfrei.
Currently there are three different systems available:
  • 1. stamping technique (MMI, Glattbrugg, CH): A specially shaped stamp is placed on the membrane and lifted off again. The microdissectate adheres to the stamp, which may be formed, for example, as a lid of a reaction vessel. The adhesion between dissectate and stamp material (for example, 2-component silicone Elastosil RT 601, Wacker-Chemie) is essential. Good adhesion to the stamper facilitates reliable transfer of the dissectate, but hinders subsequent analysis.
  • 2. Laser Pressure Catapulting (LPC, PALM, Bernried, Germany): After the microdissection, the laser beam is defocused and the dissectate is catapulted upward with a defocused laser pulse into a collecting device.
  • 3. Gravity (Leica Microsystems, Wetzlar, D): After microdissection, the dissectate falls down into a catcher. The last two methods work without contact.

Der gerichtete und zielgenaue Transfer des Mikrodissektates mittels eines defokussierten Laserstrahles (laser pressure catapulting, Fa. P.A.L.M.) oder der Transfer mittels Schwerkraft (Fa. Leica) sind wegen der geringen Transferkräfte anfällig gegen Störkräfte. Dies ist unter anderem deshalb ein Problem, weil die Dissektate durch den Laser elektrostatisch geladen sind und auch die Auffanggefäße aus Kunststoff (zum Beispiel Polypropylen oder Polyethylen) unterschiedlich geladen sind. Eine metallische Erdung bietet sich nicht an, weil Metallionen die üblichen mikrobiologischen Analyseverfahren (Polymerasekettenreaktion, PCR) stören können. Ein ähnliches potenzielles Problem erzeugen alle Vorschläge zur Beschichtung der Dissektionsmembran oder Auffanggefäße (zum Beispiel DE 101 35 091 A1 .The directed and precise transfer of the microdissectate by means of a defocused laser beam (laser pressure catapulting, PALM) or the transfer by means of gravity (Leica) are susceptible to disturbing forces because of the low transfer forces. This is a problem, inter alia, because the dissectates are electrostatically charged by the laser and also the collecting vessels made of plastic (for example polypropylene or polyethylene) are charged differently. A metallic grounding is not suitable because metal ions can disrupt the usual microbiological analysis methods (polymerase chain reaction, PCR). A similar potential problem is generated by all proposals for coating the dissection membrane or collection vessels (for example DE 101 35 091 A1 ,

Durch Verschieben der Fokusebene des Mikroskops in die Auffangvorrichtung kann optisch geprüft werden, ob der Transfer des Mikrodissektates geglückt ist (Fa. Leica), doch ist dieses Verfahren zeitaufwändig und ungeeignet für eine high through-put Umgebung.By Moving the focal plane of the microscope in the collecting device can be visually checked whether the transfer of the microdissection has succeeded (Leica), but this method is time consuming and unsuitable for a high through-put environment.

Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung handelt es sich um eine Vorrichtung zum berührungsfreien Transfer von durch membrangestützte Lasermikrodissektion gewonnenen Dissektaten mit einem ein Dissektat aus einer von einer Membran getragenen Probe ausschneidenden Laser und einem das ausgeschnittene Dissektat auffangenden Aufnahmegerät, wobei der Transfer des vom Laser ausgeschnittenen Dissektats in das Aufnahmegerät hinein durch ein am Dissektat angreifendes Feld unterstützt ist. Die Vorrichtung zeichnet sich dadurch aus, dass der Ausschneideprozess das ausgeschnittene Dissektat elektrostatisch auflädt und der Transfer in das Aufnahmegefäß hinein elektrostatisch unterstützt ist. Ferner zeichnet sie sich dadurch aus, dass unterhalb des Aufnahmegeräts eine erste Elektrode angebracht ist, die entgegengesetzt zu dem Dissektat geladen ist, und dass zwischen dem Aufnahmegerät und der Membran eine zweite ringförmig ausgebildete Elektrode angebracht ist, die ebenfalls entgegengesetzt zu dem Dissektat geladen ist und im Wesentlichen parallel zur Membran ausgerichtet ist, und dass die zweite Elektrode gegenüber der ersten Elektrode eine geringere Ladungsstärke aufweist, und dass der Transfer durch eine dritte Elektrode unterstützt ist, wobei die dritte Elektrode gleichsinnig zu dem Dissektat geladen ist und die dritte Elektrode jenseits der Membran und oberhalb der Probe positionierbar ist. Vorteilhaft an der Vorrichtung ist, dass ein verbesserter, berührungsfreier, sicherer und zielgenauer Transfer von Dissektaten erreicht wird, der die elektrische Ladung der Membran nutzt. Das zu Grunde liegende Verfahren wird im Folgenden "Electro-Static Catapulting" ("ESC") genannt. Grundsätzlich werden die Polymermembranen (zum Beispiel Polyethylenterephthalat, PET, oder Polyethylennaphthalat, PEN) durch den hochfokussierten Laserstrahl, vorzugsweise einen UV- Laserstrahl, abladiert. Dabei entsteht ein Plasma und eine positive Ladung verbleibt an den Dissektaträndern. Durch Anlegen einer Spannung zwischen Objekt und Auffanggefäß gelangt das Dissektat entlang der dadurch entstehenden Kraftlinien in das Auffanggefäß. Durch Form und Anordnung der hierbei verwendeten Elektroden wird ein speziell fokussiertes Kraftfeld geschaffen.at the device of the invention is it is a device for non-contact transfer of membrane supported Laser microdissection obtained dissected with a dissectate from a laser cutting out a sample carried by a membrane and a recording device collecting the cut-out dissectate, wherein the transfer of the laser-cut dissected into the recording device into it a dissecting attacking field is supported. The device is drawing characterized by the fact that the cutting process cut out the Dissecting electrostatically charges and the transfer into the receiving vessel is electrostatically assisted. Further It is characterized by the fact that below the recording device a first electrode is attached, opposite to the dissectate is charged, and that between the recording device and the membrane a second annular trained electrode is attached, which is also opposite is loaded to the dissectate and substantially parallel to the membrane is aligned, and that the second electrode opposite to the first electrode has a lower charge strength, and that the Transfer is supported by a third electrode, the third electrode is charged in the same direction to the dissectate and the third electrode beyond the membrane and above the sample is positionable. Advantageous at the device is that an improved, non-contact, safe and accurate transfer of dissected data is achieved which uses the electrical charge of the membrane. The underlying Procedure is hereafter "electro-static Called "catapulting" ("ESC"). Basically the polymer membranes (for example polyethylene terephthalate, PET, or polyethylene naphthalate, PEN) by the high-focus laser beam, preferably a UV laser beam, ablated. This creates a plasma and a positive charge remains at the dissect margins. By applying a voltage between the object and the collecting vessel the dissecting along the resulting lines of force in the Collecting vessel. By The shape and arrangement of the electrodes used in this case is a special focused force field created.

Im Besonderen weist die Vorrichtung eine flächige oder ringförmige positiv geladene Elektrode in der Nähe der Membran, eine negativ geladene ringförmige Elektrode zwischen Membran und Auffanggefäß und eine stärker negativ geladene Elektrode am Ziel des Dissektattransfers, dem Auffanggefäß, auf.in the In particular, the device has a flat or annular positive Charged electrode nearby the membrane, a negatively charged annular electrode between membrane and collecting vessel and one stronger Negatively charged electrode at the target of the dissecting transfer, the collecting vessel.

Eine vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die positive Elektrode als Plättchen oder als Ring ausgebildet ist, das in den Strahlengang des Mikroskops geführt werden kann.A advantageous embodiment of the invention is that the positive electrode as a platelet or formed as a ring in the beam path of the microscope guided can be.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Außenseite des Auffanggefäßes mit der negativen Elektrode (zum Beispiel metallisiertes Klebeband) versehen ist und dass die Haltevorrichtung des Auffanggefäßes einen oder mehrere entsprechende elektrische Kontakte hat.A further advantageous embodiment of the invention is that the outside of the collecting vessel with the negative electrode (for example metallized adhesive tape) is provided and that the holding device of the collecting vessel one or has several corresponding electrical contacts.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektrode auf der Außenseite des Auffanggefäßes zwei oder mehrstufig gestaltet ist, so dass der Spannungsgradient stufenweise gestaltet ist.A further advantageous embodiment of the invention is that the electrode is on the outside of the collecting vessel two or multi-stage, so that the voltage gradient gradually is designed.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektrode am Boden des Auffanggefäßes mehrteilig gestaltet ist und dass jedes Teil getrennt angesteuert werden kann, so dass mehrere Dissektate an unterschiedliche Orte des Auffanggefäßes transferiert werden können.A further advantageous embodiment of the invention is that the electrode is designed in several parts at the bottom of the collecting vessel and that each part can be controlled separately, so that several Dissected transferred to different locations of the collection vessel can be.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektroden so angeordnet sind, dass eine gekrümmte oder gewinkelte Feldrichtung resultiert. Dadurch kann die Auffangvorrichtung außerhalb des Strahlengangs des Mikroskops angeordnet werden.A further advantageous embodiment of the invention is that the electrodes are arranged so that a curved or Angled field direction results. This allows the catcher outside the beam path of the microscope are arranged.

Eine weitere, hieraus abgeleitete vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektroden so angeordnet sind, dass eine elektrische Linse entsteht, in deren Brennpunkt sich das Auffanggefäß befindet.A further, derived therefrom advantageous embodiment of the invention is that the electrodes are arranged so that a electric lens is formed, in the focal point of the collecting vessel is located.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektrode auf dem Auffanggefäß zwei- oder mehrteilig ausgebildet ist und dass die verschiedenen Teile getrennt angesteuert werden können, damit mehrere Dissektate an unterschiedlichen, örtlich voneinander verschiedenen Stellen des Auffanggefäßes zu liegen kommen.A further advantageous embodiment of the invention is that the electrode is formed on the collecting vessel two or more parts is and that the different parts are controlled separately can, so that multiple dissections at different, spatially different locations to lie the collecting vessel come.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Membran aus magnetischem Material besteht oder mit magnetischen Partikeln dotiert oder beschichtet ist und dass durch entsprechend angeordnete Magnete die Linsenwirkung verstärkt oder unterstützt wird.A further advantageous embodiment of the invention is that the membrane is made of magnetic material or with magnetic particles is doped or coated and that by appropriately arranged Magnets enhances the lens effect or supported becomes.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Elektrode auf der Außenseite des Auffanggefäßes umgepolt werden kann, damit das aufgefangene Dissektat zu einem gewählten Zeitpunkt wieder aus der Auffangvorrichtung herauskatapultiert werden kann. Dies kann dann sinnvoll sein, wenn die Auffangvorrichtung nicht das Reaktionsgefäß ist.A further advantageous embodiment of the invention is that the electrode is on the outside the receiving vessel reversed so that the trapped dissected at a chosen time can be catapulted out of the catcher again. This can be useful if the collecting device is not the Reaction vessel is.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die Mikrodissektion unter einer Schutzgasatmosphäre oder einer angereicherten Atmosphäre stattfindet, damit die an den Rändern entstehende Ladung gezielt erzeugt wird.A further advantageous embodiment of the invention is that the microdissection under a protective gas atmosphere or an enriched atmosphere takes place, so that at the edges generated charge is generated selectively.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass dotierte Membranen verwendet werden, damit die entstehenden Ladungen gezielt modifiziert werden.A further advantageous embodiment of the invention is that doped membranes are used so that the resulting Cargoes to be modified specifically.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die aufgebrachten Membranen beprägt sind, damit Stellen unterschiedlicher Ladungsdichte entstehen.A further advantageous embodiment of the invention is that the applied membranes are embossed so that places different Charge density arise.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass die angelegte Spannung über der Zeit verändert wird. Dadurch kann zum Beispiel kurzzeitig eine hohe Spannung zur Ablösung der Dissektates eingesetzt werden und danach eine niedrigere, um eine Bewegung der nicht dissezierten Membran zu vermeiden.A further advantageous embodiment of the invention is that the applied voltage over changed over time becomes. As a result, for example, a high voltage for a short time Replacement of the Dissektates are used and then a lower one Avoid movement of the non-dissected membrane.

Eine weitere vorteilhafte Ausgestaltung der Erfindung besteht darin, dass durch eine Strommessung die Größe der Ladung des Dissektates gemessen wird, woraus die Größe des Dissektates abgeschätzt werden kann.A further advantageous embodiment of the invention is that by a current measurement the size of the charge of the dissectate is measured, from which the size of the dissectate estimated can be.

Weitere Ausgestaltungen der Vorrichtung ergeben sich aus den Unteransprüchen.Further Embodiments of the device will become apparent from the dependent claims.

Literaturliterature

  • DE 101 35 091 A1DE 101 35 091 A1
  • DE 198 18 425 A1DE 198 18 425 A1
  • EP 0 926 480 A2EP 0 926 480 A2

In 1 wird aus einer auf einem Objektträger 5 aufgebrachten PET-Membran von vorzugsweise 1,4 μm Dicke 10 mit dem darauf befindlichen Objekt (mikroskopischer Gewebeschnitt) 15 mittels eines ultravioletten hochfokussierten gepulsten Laserstrahls von 337 nm Wellenlänge 20 ein Mikrodissektat 25 ausgeschnitten. Dadurch entsteht an dessen Rändern eine Ladung 30.In 1 gets out of a on a slide 5 applied PET membrane of preferably 1.4 microns thick 10 with the object on it (microscopic tissue section) 15 by means of an ultraviolet highly focused pulsed laser beam of 337 nm wavelength 20 a microdissectate 25 cut out. This creates a charge at its edges 30 ,

An die oberhalb angebrachte Elektrode 35 und die auf das Auffanggefäß 40 geklebte Elektrode 45 wird eine Spannung 50 angelegt, die zeitlich moduliert ist.To the above attached electrode 35 and the on the receptacle 40 glued electrode 45 becomes a tension 50 created, which is modulated in time.

In 2 ist eine ähnliche Anordnung wie in 1 dargestellt. Zusätzlich ist hier eine Ringelektrode 55 am Gefäßhals angebracht, mit der das Spannungsfeld zweistufig (Spannung 1, 60, und Spannung 2, 65) erzeugt wird.In 2 is a similar arrangement as in 1 shown. In addition, here is a ring electrode 55 attached to the vessel neck with which the stress field is divided into two stages (voltage 1, 60 , and tension 2, 65 ) is produced.

In 3 ist eine ähnliche Anordnung wie in 2 dargestellt. Das Auffanggefäß ist als Röhrchendeckel (Cap, 70) mit einer Füllung 72 ausgebildet, das im Winkel zur PET-Membran angebracht ist. Die Richtungsänderung der Flugbahn wird durch eine Ringelektrode 75 gewährleistet. Die Elektrode 45 am Auffanggefäß 70 ist zweiteilig ausgebildet, wobei die beiden Teile durch einen Schalter 47 getrennt angesteuert werden können.In 3 is a similar arrangement as in 2 shown. The collecting vessel is designed as a tube cap (Cap, 70 ) with a filling 72 formed, which is mounted at an angle to the PET membrane. The direction change of the trajectory is through a ring electrode 75 guaranteed. The electrode 45 at the collecting vessel 70 is formed in two parts, the two parts by a switch 47 can be controlled separately.

Claims (14)

Vorrichtung zum berührungsfreien Transfer von durch membrangestützte Lasermikrodissektion gewonnenen Dissektaten, mit einem ein Dissektat aus einer von einer Membran getragenen Probe ausschneidenden Laser und einem das ausgeschnittene Dissektat auffangenden Aufnahmegefäß, wobei der Transfer des vom Laser ausgeschnittenen Dissektats in das Aufnahmegefäß hinein durch ein am Dissektat angreifendes Feld unterstützt ist, dadurch gekennzeichnet, dass der Ausschneideprozess das ausgeschnittene Dissektat (25) elektrostatisch auflädt und der Transfer in das Aufnahmegefäß (40,70) hinein elektrostatisch unterstützt ist, und dass unterhalb des Aufnahmegefäßes (40,70) eine erste Elektrode (45) angebracht ist, die entgegengesetzt zu dem Dissektat (25) geladen ist, und dass zwischen dem Aufnahmegerät (40) und der Membran eine zweite ringförmig ausgebildete Elektrode (55,75) angebracht ist, die ebenfalls entgegengesetzt zu dem Dissektat (25) geladen ist und im Wesentlichen parallel zur Membran ausgerichtet ist, und dass die zweite Elektrode (55,75) gegenüber der ersten Elektrode (45) eine geringere Ladungsstärke aufweist und dass der Transfer durch eine dritte Elektrode (35) unterstützbar ist, wobei die dritte Elektrode (35) gleichsinnig zu dem Dissektat (25) geladen ist und die dritte Elektrode (35) jenseits der Membran und oberhalb der Probe positionierbar ist.A device for the non-contact transfer of dissectates obtained by membrane-assisted laser microdissection, comprising a laser cutting a dissectate from a sample carried by a membrane and a receiving vessel collecting the dissected dissect, the transfer of the laser-cut dissectate into the receiving vessel through a dissected-attacking field is supported, characterized in that the cutting process removes the excised cut ( 25 ) electrostatically charged and the transfer into the receptacle ( 40 . 70 ) is electrostatically assisted, and that below the receptacle ( 40 . 70 ) a first electrode ( 45 ), which are opposite to the dissectate ( 25 ) and that between the recording device ( 40 ) and the membrane a second ring-shaped electrode ( 55 . 75 ), which are also opposite to the dissectate ( 25 ) and is aligned substantially parallel to the membrane, and that the second electrode ( 55 . 75 ) opposite the first electrode ( 45 ) has a lower charge strength and that the transfer through a third electrode ( 35 ), the third electrode ( 35 ) in the same direction as the dissectate ( 25 ) and the third electrode ( 35 ) is positionable beyond the membrane and above the sample. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Lasermikrodissektion unter einer Schutzgasatmosphäre erfolgt, welche die elektrostatische Aufladung des Dissektats (25) begünstigt.Apparatus according to claim 1, characterized in that the laser microdissection is carried out under a protective gas atmosphere which the electrostatic charging of the dissectate ( 25 ) favors. Vorrichtung Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Membran dotiert ist und die Dotierung die elektrostatische Aufladung des Dissektats (25) begünstigt.Device according to claim 1 or 2, characterized in that the membrane is doped and the doping is the electrostatic charging of the dissectate ( 25 ) favors. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Membran magnetisch ausgebildet ist und der Verlauf der magnetischen Feldlinien den elektrostatischen Transfer unterstützt.Device according to one or more of the preceding Claims, characterized in that the membrane is magnetically formed and the course of the magnetic field lines is the electrostatic Transfer supported. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Ausschneideprozess das ausgeschnittene Dissektat (25) positiv auflädt und die dritte, oberhalb der Probe positionierbare Elektrode (35) positiv und die beiden anderen unterhalb der Membran auf der Seite des Aufnahmegefäßes (40,70) angebrachten Elektroden (55,75) negativ aufladbar sind.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the cutting-out process removes the excised dissectate ( 25 ) and the third, above the sample positionable electrode ( 35 ) positive and the other two below the membrane on the side of the receptacle ( 40 . 70 ) attached electrodes ( 55 . 75 ) are negatively chargeable. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die dritte, oberhalb der Probe positionierbare Elektrode (35) ringförmig oder als Plättchen ausgebildet und im Wesentlichen parallel zur Membran ausrichtbar ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the third electrode, which can be positioned above the sample ( 35 ) is formed annularly or as platelets and can be aligned substantially parallel to the membrane. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die dritte, oberhalb der Probe positionierbare Elektrode (35) in den Strahlengang eines Mikroskops einführbar ist, mit dem die Probe beobachtbar ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the third electrode, which can be positioned above the sample ( 35 ) can be introduced into the beam path of a microscope, with which the sample is observable. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die unterhalb des Aufnahmegefäßes (40,70) angebrachte Elektrode (45) auf die Außenseite des Aufnahmegefäßes (40,70) aufgebracht ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the below the receptacle ( 40 . 70 ) mounted electrode ( 45 ) on the outside of the receptacle ( 40 . 70 ) is applied. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die unterhalb des Aufnahmegefäßes (40,70) angebrachte Elektrode (45) aus mehreren, separat schaltbaren Teilelektroden gebildet ist, die einen stufigen Spannungsgradienten erzeugen und die Verteilung mehrerer Dissektate (25) auf unterschiedliche Orte im Aufnahmegefäß (40,70) gewährleisten.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the below the receptacle ( 40 . 70 ) mounted electrode ( 45 ) is formed of a plurality of separately switchable sub-electrodes, which generate a gradual voltage gradient and the distribution of multiple dissectates ( 25 ) to different locations in the receptacle ( 40 . 70 ) guarantee. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die unterhalb des Aufnahmegefäßes (40,70) angebrachte Elektrode (45) umpolbar und dadurch ein aufgenommenes Dissektat (25) aus dem Aufnahmegefäß (40,70) herauskatapultierbar ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the below the receptacle ( 40 . 70 ) mounted electrode ( 45 ) and thereby a recorded dissectate ( 25 ) from the receptacle ( 40 . 70 ) can be catapulted out. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Membran Prägungen aufweist, die ein Ladungsmuster auf der Membran erzeugen.Device according to one or more of the preceding Claims, characterized in that the membrane has embossments which are a charge pattern on the membrane. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass während des Ausschneideprozesses die Elektrodenspannungen (50,60,65) veränderbar sind, um mit einer hohen Spannung die Ablösung des Dissektats (25) zu unterstützen und eine Bewegung des nicht-dissezierten Membranbereichs zu vermindern.Device according to one or more of preceding claims, characterized in that during the cutting process the electrode voltages ( 50 . 60 . 65 ) are variable in order to release the dissecting agent at a high voltage ( 25 ) and to reduce movement of the non-dissected membrane area. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass eine Ladung (30) des Dissektats (25) mittels einer Strommessung messbar ist und hieraus die Größe des Dissektats (25) ableitbar ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that a charge ( 30 ) of the dissectate ( 25 ) is measurable by means of a current measurement and from this the size of the dissectate ( 25 ) is derivable. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Aufnahmegefäß (40,70) probenspezifisch beschichtet ist.Device according to one or more of the preceding claims, characterized in that the receptacle ( 40 . 70 ) is coated sample-specific.
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