DE10304331A1

DE10304331A1 - Enzyme preparation for removing biofilms from household hard surfaces, e.g. toilets or baths, in the absence of biocides

Info

Publication number: DE10304331A1
Application number: DE10304331A
Authority: DE
Inventors: Ronald Dr. Breves; Frank Dr. Janßen; Alexander Dr. Ditze; Karl-Heinz Dr. Maurer; Jaume Josa; Beatrix Dr. Kottwitz
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2003-02-04
Filing date: 2003-02-04
Publication date: 2004-08-12
Anticipated expiration: 2023-02-05
Also published as: DE10362020A1; DE10362020B4; DE10304331B4

Abstract

Enzyme preparation (I) that can be used to remove biofilms from household hard surfaces in the absence of biocides used for killing biofilm-producing microorganisms is new : Independent claims are also included for: (1) biocide-free hard surface cleaner (II) comprising (I); (2) product (III) comprising (I) or (II) and an aerosol or foam dispenser; (3) hydrolyzing biofilms on hard household surfaces by treatment with (I), (II) or (III) without permanently damaging the vitality of the microbial cells; (4) hydrolyzing biofilms on hard household surfaces by applying (I) or (II) to the surface, optionally using (III), optionally wiping or rubbing the surface with a cloth, sponge, brush or other cleaning utensil, rinsing the surface with clear water (optionally after allowing (I) or (II) to act for 1-30 minutes, a few hours or overnight), and drying the surface with a dry cloth; (5) product comprising (II) and a multicompartment bottle; (6) test system for studying biofilm hydrolysis, comprising a biofilm grown with a mixed population of representative microorganisms that occur in household biofilms, which is incubated with a test enzyme preparation and then examined for any hydrolysis by chemical and optical methods.

Description

Die Erfindung betrifft Haushaltsreiniger mit Enzymen, die in der Lage sind, Biofilme zu zerstören und auf diese Weise harte Oberflächen im Haushalt von bakteriellen Belägen zu reinigen, ohne daß zusätzliche Biozide eingesetzt werden müssen.The invention relates to household cleaners with enzymes that are able to destroy and on biofilms this way hard surfaces in the household of bacterial deposits to clean without additional biocides must be used.

Als Biofilm bezeichnet man den Bewuchs von Oberflächen durch Mikroben und vor allem die von ihnen kollektiv abgegebene und sie umhüllende gallertartige Schutzschicht. Dieser Schleim ist gleichzeitig der Grund dafür, daß unter realen Bedingungen lebende Bakterien, wie auch andere Biofilme produzierende Mikroorganismen, wesentlich widerstandsfähiger gegenüber – auch biozidhaltigen – Reinigungsmitteln sind als Laborkulturen, die normalerweise aus einzelnen frei schwimmenden Bakterien, sog. planktonischen Zellen, bestehen. Biofilme führen in technischen Systemen zu massiven Beeinträchtigungen und können in der Medizin hartnäckige Infektionen hervorrufen, die gegenüber herkömmlichen Antibiotika weitgehend resistent sind. Im Haushalt sind die durch Biofilme hervorgerufenen Beeinträchtigungen sowohl hygienischer als auch ästhetischer Natur.The vegetation is called biofilm of surfaces through microbes and especially those that they collectively release and enveloping them gelatinous protective layer. This slime is also the one The reason for this, that under Bacteria living under real conditions, as well as other biofilms producing Microorganisms, much more resistant to cleaning agents, including those containing biocides are considered laboratory cultures that are usually made up of individual free-floating Bacteria, so-called planktonic cells, exist. Biofilms lead to technical systems to massive impairments and can in stubborn of medicine Cause infections that are largely compared to conventional antibiotics are resistant. In the household are those caused by biofilms impairments both more hygienic and more aesthetic Nature.

Die Bekämpfung von Biofilmen durch Biozide ist nur bedingt möglich, da die größtenteils aus Polysacchariden bestehende Schleimmatrix die Zellen vor der Einwirkung der Biozide schützt (sog. Pseudoresistenz). Um überhaupt eine Wirkung zu erzielen, müßten die Biozide daher wesentlich höher dosiert eingesetzt werden, als es für eine vergleichbare Menge unassoziiert vorliegender Bakterien vonnöten wäre. Der Einsatz von Bioziden im Haushalt ist jedoch unter ökologischen Gesichtspunkten ungünstig, so daß die Bestrebungen eher dahin gehen, Reinigungsmittel mit nur geringen Konzentrationen oder völlig ohne Biozide bereitzustellen. Dies ließ sich jedoch bislang nicht mit dem Wunsch nach einer möglichst vollständigen Entfernung bakterieller Biofilme – und damit optimaler Hygiene – in Einklang bringen.Combating biofilms through Biocides are only possible to a limited extent, because for the most part slime matrix consisting of polysaccharides the cells in front of the Exposure to biocides protects (so-called pseudo resistance). To at all to have an effect Biocides therefore much higher can be used in doses as for a comparable amount bacteria unassociated would be required. The use of biocides in the household, however, is under ecological Viewpoints unfavorable, So that the Efforts tend to go there, detergents with only minor Concentrations or totally without providing biocides. So far, however, this has not been possible with the desire for one if possible complete Removal of bacterial biofilms - and thus optimal hygiene - in harmony bring.

Die europäische Patentschrift EP 946 207 B1 (entspr. WO 98/26807) lehrt die enzymatische Behandlung von Biofilmen mit Kombinationen aus Hydrolasen, die zur Ablösung und Entfernung der Biofilme von der Oberfläche dienen, und Oxidoreductasen, die die enthaltenen Bakterien abtöten. Mit diesen Systemen werden harte Oberflächen aus den unterschiedlichsten Materialien in verschiedenen industriellen Bereichen, beispielsweise Kühltürmen, Molkereibetrieben oder Chemieanlagen, gereinigt und desinfiziert, aber auch weiche Oberflächen wie Haut, Haare oder Textilien.The European patent specification EP 946 207 B1 (corresponds to WO 98/26807) teaches the enzymatic treatment of biofilms with combinations of hydrolases, which serve to detach and remove the biofilms from the surface, and oxidoreductases, which kill the bacteria present. These systems are used to clean and disinfect hard surfaces made of a wide variety of materials in various industrial areas, such as cooling towers, dairies or chemical plants, but also soft surfaces such as skin, hair or textiles.

EP 388 115 befaßt sich mit der Zerstörung und Enffernung von Schleim auf industrellen, wasserumspülten Oberflächen. Hierzu werden Glucanasen, Cellulasen, Amylasen und/oder Proteasen eingesetzt, die gezielt die Polysaccharide der Schleimmatrix zersetzen; anschließend sollen die nunmehr zugänglichen Mikroorganismen der Wirkung von Bioziden ausgesetzt werden. EP 388 115 deals with the destruction and removal of mucus on industrial, water-washed surfaces. For this purpose, glucanases, cellulases, amylases and / or proteases are used which specifically decompose the polysaccharides of the slime matrix; then the now accessible microorganisms are to be exposed to the action of biocides.

In der WO 01/09295 werden Enzyme mit einer β-(1,6)-Endoglucanaseaktivität sowie entsprechende DNA-Sequenzen beansprucht, weiterhin eine Enzymzubereitung zum Abbau β-1,6-glucanhaltiger Materialien und ihre Verwendung. Die β-(1,6)-Endoglucanasen dienen auch zur Entfernung von Biofilmen von verschiedenen Oberflächen. Hauptsächlich befaßt sich diese spanische Schrift jedoch mit dem Abbau der β-1,6-glucanreichen Zellwand bestimmter Pilze.WO 01/09295 describes enzymes with a β- (1,6) endoglucanase activity as well appropriate DNA sequences claimed, further an enzyme preparation for the degradation of β-1,6-glucan Materials and their use. The β- (1,6) endoglucanases serve also for removing biofilms from different surfaces. Mainly deals with this Spanish writing, however, with the breakdown of the β-1,6-glucan-rich Cell wall of certain fungi.

Auch die WO-Schrift 96/36569 beschreibt eine enzymatische Methode zur Enffernung von Biofilmen. Hierbei wird eine Mannanase, gegebenenfalls in Kombination mit mindestens einem weiteren Enzym, eingesetzt, um in industriellen wasserführenden Systemen die Schleimbildung zu vermeiden und bestehenden Schleim zu enffernen. Gemäß WO 96/17632 kann diese Aufgabe auch mit Kombinationen kurzkettiger Glykolkomponenten mit mindestens einem Enzym aus der Gruppe Polysaccharidasen, Proteasen, Lipasen und Glycoproteasen gelöst werden.WO 96/36569 also describes an enzymatic method to remove biofilms. in this connection becomes a mannanase, possibly in combination with at least another enzyme, used to water industrial water Systems to avoid slime formation and existing slime to remove. According to WO 96/17632 can do this task with combinations of short chain glycol components with at least one enzyme from the group polysaccharidases, proteases, Lipases and glycoproteases dissolved become.

Die internationale Anmeldung WO 01/53010 lehrt ebenfalls einen enzymatischen Prozeß zur Entfernung von Biofilmen von verschiedenen mit Wasser oder wäßrigen Lösungen umspülten Oberflächen in industriellen Systemen sowie im medizinischen Bereich, wobei sich die Biofilme sowohl oberhalb der Wasseroberfläche, also an fes/flüssig/Luft-Grenzflächen, als auch unter Wasser, an fest/flüssig- Grenzflächen, befinden. Bei den eingesetzten Enzymen handelt es sich um Carbohydrasen oder Proteasen, Kombinationen aus diesen beiden Enzymen sind ebenfalls möglich. Gegebenenfalls kann die Reinigungslösung neben den genannten Enzymen weitere Aktivstoffe wie Konosionsinhibitoren, Tenside, Biozide etc. enthalten.The international application WO 01/53010 also teaches an enzymatic process for removing biofilms of various surfaces rinsed with water or aqueous solutions in industrial systems as well as in the medical field, with the biofilms both above the water surface, ie at solid / liquid / air interfaces, as also under water, on solid / liquid Interfaces, are located. The enzymes used are carbohydrases or proteases, combinations of these two enzymes are also possible. If necessary, the cleaning solution in addition to the enzymes mentioned other active substances such as corrosion inhibitors, surfactants, biocides etc. contain.

Die in der Literatur beschriebenen Systeme bekämpfen allesamt Biofilme in industriellen Anlagen und/oder auf weichen Oberflächen. Zudem wurde ihre Wirksamkeit stets nur an Biofilmen getestet, die im Labor gezüchtet waren und nur von einigen wenigen ausgewählten Bakterienarten gebildet wurden, so daß diese Systeme nur bedingt auf reale Bedingungen übertragbar sind.Those described in the literature Combat systems all biofilms in industrial plants and / or on soft Surfaces. In addition, their effectiveness was only ever tested on biofilms that bred in the laboratory and were formed by only a few selected types of bacteria were so these systems are only partially transferable to real conditions.

Die Aufgabe dieser Erfindung ist es, Reinigungsmittel bereitzustellen, die ohne den Einsatz von Bioziden in der Lage sind, Biofilme auf harten Oberflächen im Haushalt aufzulösen und die filmbildenden Mikroorganismen zu entfernen.The object of this invention is it to provide cleaning products that use no biocides are able to dissolve biofilms on hard surfaces in the home and to remove the film-forming microorganisms.

Die Zusammensetzung bakterieller Biofilme auf Haushaltsoberflächen ist bislang wenig erforscht worden; die wenigen Forschungsergebnisse erlauben auch keine Aussage über etwaige Unterschiede zwischen Biofilmen auf Flächen in der Industrie und in Privathaushalten. Entsprechend war auch die Beurteilung der Wirksamkeit eines Mittels problematisch und die Vergleichbarkeit einzelner Ergebnisse keineswegs immer gegeben.Little has been researched into the composition of bacterial biofilms on household surfaces; the few research results also do not allow a statement about any differences between biofilms on surfaces in industry and in private households. The assessment of the Effectiveness of a remedy problematic and the comparability of individual results is not always given.

Daher wurden zunächst Versuche zur Charakterisierung von WC-Biofilmen unternommen. Anhand der erhaltenen Ergebnisse wurden dann Modellbiofilme aus mehreren Mikroorganismen gezüchtet, die die tatsächlichen Verhältnisse auf Haushaltsoberflächen genauer widerspiegeln als die bislang meist untersuchten Biofilme aus einzelnen im Labor verfügbaren Bakterienstämmen. Mit diesen Modellbiofilmen lag nun erstmals ein zuverlässiges Testsystem vor, welches zur Überprüfung der Wirksamkeit von Reinigungsmitteln mit oder ohne Biozide gegenüber Biofilmen auf harten Oberflächen im Haushalt geeignet ist.Therefore, characterization experiments were carried out first of toilet biofilms. Based on the results obtained then model biofilms grown from several microorganisms that the actual conditions on household surfaces reflect more precisely than the most examined biofilms so far from individual ones available in the laboratory Bacterial strains. With these model biofilms, a reliable test system was now available for the first time before which to check the Effectiveness of cleaning agents with or without biocides against biofilms on hard surfaces is suitable in the household.

Diese Modellbiofilme wurden dann der Wirkung verschiedener Enzyme ausgesetzt, um den Abbau zu untersuchen; dabei wurde überraschend festgestellt, daß bereits die Wirkung der Polysaccharidasen und/oder der Proteasen ausreicht, um den Biofilm aufzubrechen und die Zellen abzulösen. Diese können dann einfach abgespült werden, so daß es im Gegensatz zu den im Stand der Technik beschriebenen Methoden zur Entfernung von Biofilmen keiner bakterientötenden Oxidoreductasen oder stärkeren Biozide bedarf. Es ist daher eine umweltschonende Methode zur Reinigung und Desinfektion vor allem feuchter, wasserumspülter Oberflächen im Haushalt zugänglich geworden.These model biofilms were then exposed to the action of various enzymes to study degradation; it was surprising found that already the action of the polysaccharidases and / or the proteases is sufficient, to break up the biofilm and detach the cells. These can then just rinsed off be so that it in contrast to the methods described in the prior art for the removal of biofilms no bactericidal oxidoreductases or stronger Biocides are needed. It is therefore an environmentally friendly method of cleaning and disinfection, especially of damp, water-washed surfaces in the household.

Wie geschildert, wurde überraschend festgestellt, daß ein oder mehrere Enzyme aus der Gruppe Polysaccharidase (β-Glucanase, Cellulase, Xylanase, Amylase, Dextranase, Glucosidase, Galactosidase, Pectinase, Chitinase, Lysozym, Alginat-Lyase) und/oder Protease (Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, Carboxypeptidase, Saure Protease) bereits die bak terielle Schleimmatrix in Biofilmen auf WCs und anderen zeitweise benetzten Haushaltsoberflächen zerstören, so daß die Bakterien aus ihrem Verband herausgelöst und in die planktonische Form überführt werden, wodurch ein einfaches Fortspülen ausreicht, um die Mikroben zu entfernen, ohne daß zusätzlich Biozide vonnöten wären.As described, it was surprising found that a or several enzymes from the group polysaccharidase (β-glucanase, Cellulase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, Pectinase, chitinase, lysozyme, alginate lyase) and / or protease (Subtilisin, thermolysin, pepsin, carboxypeptidase, acid protease) already the bacterial slime matrix in biofilms on toilets and others temporarily destroy wetted household surfaces, so that the bacteria from their dressing leached and be converted into the planktonic form making it easy to rinse off is sufficient to remove the microbes without the need for additional biocides.

Gegenstand dieser Anmeldung ist daher eine Enzymzubereitung, die auch in Abwesenheit von Bioziden, welche zur Tötung von Biofilm-verursachenden Mikroorganismen verwendet werden, zur Entfernung von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen eingesetzt werden kann.The subject of this application is therefore an enzyme preparation that, even in the absence of biocides, which for killing of biofilm-causing microorganisms are used to Removal of biofilms on household surfaces can be used.

Bei der erfindungsgemäßen Enzymzubereitung handelt es sich um ein System aus einem oder mehreren Enzymen aus der Gruppe Polysaccharidase (β-Glucanase, Cellulase, Xylanase, Amylase, Dextranase, Glucosidase, Galactosidase, Pectinase, Chitinase, Lysozym, Alginat-Lyase) und/ oder Protease (Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, Carboxypeptidase, Saure Protease).In the enzyme preparation according to the invention is a system made up of one or more enzymes the group polysaccharidase (β-glucanase, Cellulase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, Pectinase, chitinase, lysozyme, alginate lyase) and / or protease (Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, Carboxypeptidase, Acid Protease).

Wie kürzlich beschrieben wurde (C.B. Whitchurch et al, 2002, Science 295, S. 1487), bestehen bakterielle Biofilme auch aus Nukleinsäuren und sind insbesondere in frühen Stadien auch durch Nukleinsäure-abbauende Enzyme, z.B. durch DNAsen hydrolysierbar. Derartige Enzyme (Nucleasen) sind somit ebenfalls geeignet, in einer erfindungsgemäßen Zubereitung eingesetzt zu werden.As recently described (C.B. Whitchurch et al, 2002, Science 295, p. 1487), are bacterial Biofilms also from nucleic acids and are especially early Stages also through nucleic acid degrading Enzymes, e.g. hydrolyzable by DNAsen. Enzymes of this type (nucleases) are therefore also suitable in a preparation according to the invention to be used.

Diese Zubereitung kann bereits als solche zur Zerstörung und Entfernung von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen eingesetzt werden. Sie kann aber auch einem Reinigungsmittel für harte Oberflächen zugesetzt werden, welches somit neben der Entfernung weiterer Anschmutzungen auch in der Lage ist, Biofilme wirksam zu entfernen.This preparation can already be used as those for destruction and removal of biofilms on household surfaces. she can also be added to a cleaning agent for hard surfaces which, in addition to removing further soiling is also able to effectively remove biofilms.

Gegenstand der Erfindung ist daher in einer weiteren Ausführungsform ein Reinigungsmittel für harte Oberflächen, welches eine Zubereitung aus einem oder mehreren Enzymen aus der Gruppe Polysaccharidase (β-Glucanase, Cellulase, Xylanase, Amylase, Dextranase, Glucosidase, Galactosidase, Pectinase, Chitinase, Lysozym, Alginat-Lyase) und/oder Protease (Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, Carboxypeptidase, Saure Protease) sowie gegebenenfalls eine oder mehrere Nucleasen (DNAse, RNAse) enthält.The object of the invention is therefore in a further embodiment a detergent for hard surfaces, which is a preparation of one or more enzymes from the Group polysaccharidase (β-glucanase, Cellulase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, Pectinase, chitinase, lysozyme, alginate lyase) and / or protease (Subtilisin, thermolysin, pepsin, carboxypeptidase, acid protease) and optionally one or more nucleases (DNAse, RNAse) contains.

Neben der Enzymzubereitung kann das Reinigungsmittel auch Tenside, Builder, Säuren, Alkalien, Hydrotrope, Lösungsmittel, Verdickungsmittel, Farbstoffe, Parfums, Konosionsinhibitoren, Hautschutzmittel und weitere in Reinigungsmitteln übliche Inhaltsstoffe enthalten. Soll das Reinigungsmittel versprüht werden, kann gegebenenfalls auch ein Treib mittel enthalten sein. Das Reinigungsmittel ist vorzugsweise ein flüssiges wäßriges Mittel, daneben kann es aber auch als Gel, als Paste oder als Pulver vorliegen.In addition to the enzyme preparation, this can Detergents also surfactants, builders, acids, alkalis, hydrotropes, Solvent, Thickeners, dyes, perfumes, corrosion inhibitors, skin protection agents and contain other ingredients common in cleaning agents. Should the detergent spray are, if necessary, a blowing agent may also be included. The cleaning agent is preferably a liquid aqueous agent, in addition can but it can also be in the form of a gel, paste or powder.

Stoffe, die auch als Inhaltsstoffe von kosmetischen Mitteln dienen, werden nachfolgend ggf. gemäß der International Nomenclature Cosmetic Ingredient (INCI)-Nomenklatur bezeichnet. Chemische Verbindungen tragen eine INCI-Bezeichnung in englischer Sprache, pflanzliche Inhaltsstoffe werden ausschließlich nach Linne in lateinischer Sprache aufgeführt, sogenannte Trivialnamen wie "Wasser", "Honig" oder "Meersalz" werden ebenfalls in lateinischer Sprache angegeben. Die INCI-Bezeichnungen sind dem Intemational Cosmetic Ingredient Dictionan and Handbook-Seventh Edition (1997) zu entnehmen, das von The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association (CTFA), 1101 17th Street, NW, Suite 300, Washington, DC 20036, USA, herausgegeben wird und mehr als 9.000 INCI-Bezeichnungen sowie Verweise auf mehr als 37.000 Handelsnamen und technische Bezeichnungen einschließlich der zugehörigen Distributoren aus über 31 Ländern enthält. Das International Cosmetic Ingredient Dictionan and Handbook ordnet den Inhaltsstoffen eine oder mehrere chemische Klassen (Chemical Classes), beispielsweise Polymeric Ethers, und eine oder mehrere Funktionen (Functions), beispielsweise Surfactants-Cleansing Agents, zu, die es wiederum näher erläutert und auf die nachfolgend ggf. ebenfalls bezug genommen wird.Substances, also called ingredients of cosmetic products are subsequently used according to the International Nomenclature Cosmetic Ingredient (INCI) nomenclature. Chemical compounds have an INCI name in English Language, herbal ingredients are used exclusively according to Linne performed in Latin, so-called trivial names such as "water", "honey" or "sea salt" are also used given in Latin. The INCI names are that International Cosmetic Ingredient Dictionan and Handbook-Seventh Edition (1997), published by The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association (CTFA), 1101 17th Street, NW, Suite 300, Washington, DC 20036, USA, and more than 9,000 INCI names as well as references to more than 37,000 trade names and technical names including the associated Distributors from over 31 countries contains. The International Cosmetic Ingredient Dictionan and Handbook organizes the ingredients one or more chemical classes (Chemical Classes), for example Polymeric Ethers, and one or more Functions, such as surfactants-cleaning agents, to who in turn get closer explained and to which reference may also be made below.

Die Angabe CAS bedeutet, daß es sich bei der nachfolgenden Zahlenfolge um eine Bezeichnung des Chemical Absfracts Service handelt.The statement CAS means that it is in the following sequence of numbers by a name of the Chemical Absfracts Service acts.

Enzymzubereitungenzyme preparation

Die erfindungsgemäße Enzymzubereitung ist ein System aus einer oder mehreren Polysaccharidasen und/ oder einer oder mehreren Proteasen sowie ggf. einem oder mehreren Nukleinsäure-abbauenden Enzymen.The enzyme preparation according to the invention is a System of one or more polysaccharidases and / or one or more proteases and possibly one or more nucleic acid-degrading Enzymes.

Als Polysaccharidasen bezeichnet man dabei solche Enzyme, die die hydrolytische Spaltung von Polysacchariden katalysieren. So wird durch die Cellulase beispielsweise Cellulose abgebaut, während die Glucosidase aus dem Oligo- oder Polysaccharidmolekül vom Ende her einzelne Glucoseeinheiten abspaltet. Die extrazelluläre Polysaccharidmatrix des Biofilms besteht aus Homo- und Heteropolysacchariden, die vor allem aus Glucose, Fucose, Mannose, Galactose, Fructose, Pyruvat, Mannuronsäure und Glucuronsäure aufgebaut sind. Dementsprechend handelt es sich bei den Polysacchariden beispielsweise um Levane, Polymannane, Dextrane, Cellulose, Amylopektin, Glykogen oder um Alginat.Called polysaccharidases such enzymes are responsible for the hydrolytic cleavage of polysaccharides catalyze. For example, cellulose becomes cellulose mined while the glucosidase from the oligo or polysaccharide molecule from the end cleaves individual glucose units. The extracellular polysaccharide matrix of the biofilm consists of homo- and heteropolysaccharides, which before all from glucose, fucose, mannose, galactose, fructose, pyruvate, mannuronic and glucuronic acid are built up. Accordingly, the polysaccharides for example levane, polymannane, dextrans, cellulose, amylopectin, Glycogen or around alginate.

Im Sinne dieser Erfindung sind sämtliche Polysaccharidasen zur Hydrolyse von Biofilmen einsetzbar. Bevorzugt enthält die Enzymzubereitung jedoch mindestens ein Enzym aus der Gruppe β-Glucanase, Cellulase, Xylanase, Amylase, Dextranase, Glucosidase, Galactosidase, Pectinase, Chitinase, Lysozym und Alginat-Lyase. Diese Enzyme können jeweils mehrere Familienmitglieder umfassen. So kennt man beispielsweise sowohl eine α -1,4-Glucosidase, die früher auch als Maltase bezeichnet wurde, als auch eine β-1,4-G1ucosidase. Im Sinne dieser Erfindung sind alle diese Untergruppen umfaßt. Es können auch bereits im Handel erhältliche Gemische aus Polysaccharidasen eingesetzt werden. So eignet sich beispielsweise Viscozyme, eine flüssige Enzymzubereitung aus Aspergillus sp., die aus verschiedenen Polysaccharidasen zusammengesetzt ist, u.a. aus Arabanase, Cellulase, β-Glucanase, Hemicellulase und Xylanase, zum Einsatz im Sinne dieser Erfindung.For the purposes of this invention, all polysaccharidases can be used for the hydrolysis of biofilms. However, the enzyme preparation preferably contains at least one enzyme from the group β-glucanase, cellulase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, pectinase, chitinase, lysozyme and alginate lyase. These enzymes can include several family members. For example, one knows both an α -1,4-glucosidase, formerly also called maltase, as well as a β-1,4-glucosidase. For the purposes of this invention, all of these subgroups are included. Commercially available mixtures of polysaccharidases can also be used. For example, Viscozyme, a liquid enzyme preparation from Aspergillus sp., Which is composed of various polysaccharidases, including arabanase, cellulase, β-glucanase, hemicellulase and xylanase, is suitable for use in the context of this invention.

Proteasen sind Enzyme, welche die hydrolytische Spaltung der Peptidbindung von Proteinen und Peptiden katalysieren. Sie können daher ebenfalls zum Abbau von Biofilmen genutzt werden, da diese neben Polysacchariden auch von den filmbildenden Organismen sekretierte Eiweißstoffe enthalten können. Proteasen können systematisch zum einen nach dem pH-Optimum ihrer Wirkung in saure, neutrale und alkalische Proteasen eingeteilt werden, zum anderen klassifiziert man sie aber nach der katalytisch wirksamen Gruppe im aktiven Zentrum. Dabei unterscheidet man Serin-, Cystein-, Aspartat- und Metallproteasen.Proteases are enzymes that hydrolytic cleavage of the peptide bond of proteins and peptides catalyze. You can therefore also be used for the degradation of biofilms, since these in addition to polysaccharides also secreted by the film-forming organisms proteins can contain. Proteases can systematically on the one hand according to the pH optimum of their action in acidic, neutral and alkaline proteases are classified, on the other but they are classified according to the catalytically active group in the active center. A distinction is made between serine, cysteine and aspartate and metal proteases.

Sämtliche bekannte Proteasen können im Sinne dieser Erfindung zum Abbau von Biofilmen eingesetzt werden, vorzugsweise wird jedoch mindestens eine Protease ausgewählt aus der Gruppe Subtilisin, Thermolysin, Pepsin, Carboxypeptidase, Saure Protease.All known proteases can are used for the degradation of biofilms in the sense of this invention, however, at least one protease is preferably selected from the group subtilisin, thermolysin, pepsin, carboxypeptidase, acid Protease.

Bei den Nucleasen handelt es sich um Nukleinsäuren abbauende Enzyme. Je nach Hydrolysestelle unterscheidet man Endonucleasen, die innerhalb des Nucleinsäurestranges spalten (z.B. DNAse I aus Pankreas) und Exonucleasen, die Nucleotide vom Ende her freisetzen (z.B. Exonuclease III aus E. coli). Dabei können DNA-Einzelstränge (S1-Nuclease aus Aspergillus oryzae) oder -Doppelstränge (Exonuclease III) als Substrat dienen und recht unspezifisch zu kürzeren Strängen oder einzelnen Nucleotiden abgebaut werden. Auch gemischte Spezifitäten sind möglich und treten in Abhängigkeit z.B. von Enzymkonzentration und Gegenwart bestimmter Ionen auf. Analog ist auch die Spaltung von RNA-Molekülen möglich. Hochspezifische Endonucleasen erfordern bestimmte Nucleotidsequenzen (typischerweise 4–8 Basenpaare) und werden teilweise auch als Restrik tionsenzyme oder Restriktionsendonucleasen bezeichnet. Da Biofilme auch aus Nukleinsäuren bestehen können, sind auch sämtliche Nucleasen zum erfindungsgemäßen Einsatz in biofilmabbauenden Mitteln geeignet. Vorzugsweise werden jedoch unspezifische DNAsen oder RNAsen eingesetzt.The nucleases are around nucleic acids degrading enzymes. Depending on the hydrolysis site, a distinction is made between endonucleases, those within the nucleic acid strand cleave (e.g. DNAse I from pancreas) and exonucleases, the nucleotides Release from the end (e.g. exonuclease III from E. coli). there can DNA single strands (S1 nuclease from Aspergillus oryzae) or double strands (exonuclease III) serve as a substrate and quite unspecific to shorter strands or individual nucleotides are degraded. There are also mixed specificities possible and become dependent e.g. of enzyme concentration and presence of certain ions. Analogously, the cleavage of RNA molecules is also possible. Highly specific endonucleases require certain nucleotide sequences (typically 4-8 base pairs) and are sometimes used as restriction enzymes or restriction endonucleases designated. Because biofilms can also consist of nucleic acids also all Nucleases for use according to the invention suitable in biofilm degrading agents. However, preferably unspecific DNAsen or RNAsen used.

Die im Sinne dieser Erfindung einsetzbaren Enzyme können durch übliche biochemische Methoden aus den entsprechenden Organismen gewonnen werden. Sie sind aber auch kommerziell erhältlich, beispielsweise von den Firmen Novozymes, Genencor International, Sigma, AB Enzymes oder ASA Enzyme. Dabei können die Enzympräparationen auch von technischer Qualität sein und aus mehreren verschiedenen Enzymaktivitäten bestehen. Die Gegenwart von teilweise nicht näher charakterisierten Nebenaktivitäten kann auf die Hydrolyse der komplex zusammengesetzten Biofilm-Polymere ebenfalls einen günstigen Einfluß haben.The usable in the sense of this invention Enzymes can through usual biochemical methods obtained from the corresponding organisms become. However, they are also commercially available, for example from the companies Novozymes, Genencor International, Sigma, AB Enzymes or ASA enzymes. You can the enzyme preparations also of technical quality be and consist of several different enzyme activities. The presence from partially not closer characterized secondary activities can rely on the hydrolysis of the complex biofilm polymers also a cheap one Have influence.

Sollen Proteasen mit anderen Enzymen, beispielsweise Polysaccharidasen, kombiniert werden, so ist zu beachten, daß diese in flüssigen Mitteln durch im Reiniger enthaltene Komponenten wie Tenside oder organische Säuren oder aber auch durch die recht unspezifisch agierenden Proteasen angegriffen werden könnten, wodurch sich die Wirksamkeit der Mittel gegenüber nicht-Protein-Biofilmbestandteilen verringern würde. Um die Aktivität und Stabilität solcher Reinigungsmittel über einen längeren Zeitraum zu gewährleisten, ist es daher sinnvoll, empfindliche Enzyme von denaturierenden Komponenten und insbesondere auch Proteasen von anderen Enzymen getrennt zu halten, so daß diese Komponenten erst unmittelbar vor oder während des Reinigungsvorgangs aufeinander treffen.Should proteases with other enzymes For example, polysaccharidases can be combined, so please note that these in liquid Agents through components contained in the cleaner such as surfactants or organic acids or also through the rather unspecific proteases could be attacked thereby increasing the effectiveness of the agents against non-protein biofilm components would decrease. Around the activity and stability of such cleaning agents a longer one Period to ensure it is therefore useful to remove sensitive enzymes from denaturing components and in particular also proteases separated from other enzymes hold so this Components only immediately before or during the cleaning process meet each other.

Diese Trennung der verschiedenen Enzyme kann auf verschiedenen Wegen erfolgen. Eine Möglichkeit ist es, die Enzyme in Mikrokapseln einzubringen, die erst unmittelbar vor oder während des Reinigungsvorgangs, beispielsweise durch mechanische Einwirkung beim Putzvorgang, durch plötzliche Veränderung der osmotischen Verhältnisse z.B. beim Verdünnen mit Wasser oder durch ein Zerschneiden der Kapseln beim Dosieren aus der Vorratsflasche, geöffnet werden und ihren Inhalt freisetzen. Hierbei ist jedoch zu beachten, daß die Kapselwand ihrerseits nicht durch die Enzyme angegriffen werden darf. Kapselmaterialien auf der Basis von Proteinen oder Polysacchariden sind daher auszuschließen. Alternativ können die Enzyme auch jeweils auf einem festen Träger immobilisiert werden, der im Reinigungsmittel suspendiert wird und bei der Anwendung des Mittels zusätzlich als Abrasivstoff dienen kann. Die Immobilisierung erfolgt auf dem Fachmann bekanntem Wege; als Trägermaterialien können neben anorganischen Stoffen, beispielsweise Silicaten oder porösem Glas, auch Polymere eingesetzt werden.The different enzymes can be separated in different ways. One possible It is important to introduce the enzymes into microcapsules that open only immediately before or during the cleaning process, for example due to mechanical effects during the cleaning process, due to sudden changes in the osmotic conditions, e.g. when diluting with water, or by cutting the capsules when dosing from the storage bottle and release their content. It should be noted, however, that the capsule wall itself must not be attacked by the enzymes. Capsule materials based on proteins or polysaccharides must therefore be excluded. Alternatively, the enzymes can also be immobilized in each case on a solid carrier which is suspended in the cleaning agent and can additionally serve as an abrasive when the agent is used. The immobilization takes place in a manner known to the person skilled in the art; In addition to inorganic substances, for example silicates or porous glass, polymers can also be used as carrier materials.

Eine weitere denkbare Möglichkeit könnte auch das Einarbeiten in ein mehrphasiges Mittel sein, so daß die Protease vorwiegend in einer Phase angesiedelt wäre und die übrigen Enzyme vorwiegend in einer weiteren Phase vorlägen. Ein solches Mittel würde kurz vor der Verwendung aufgeschüttelt und die entstehende Emulsion auf die zu reinigende Fläche aufgetragen; das in der Vorratsflasche verbleibende Mittel würde anschließend eine rasche Phasentrennung erfahren, so daß die Enzyme nur für kurze Zeit sowie ggf. an der Phasengrenzfläche in Kontakt kämen. Ähnlich wäre der Fall gelagert, wenn ein Enzym in eine Phase eingearbeitet würde, die in Form von Tröpfchen in der zweiten, das andere Enzym enthaltenden Phase stabil dispergiert wäre; hierbei würde das Mittel nicht geschüttelt, sondern direkt aus der Vorratsflasche dosiert, gegebenenfalls auch versprüht. Ein solches mehrphasiges Mittel wäre jedoch eine technisch aufwendige und schwierig zu realisierende Lösung. Zudem wäre die Verbraucherakzeptanz voraussichtlich gering.Another conceivable option could also be incorporated into a multi-phase agent so that the protease would be predominantly in one phase and the remaining enzymes predominantly in another phase. Such a means would shaken just before use and the resulting emulsion is applied to the surface to be cleaned; the agent remaining in the storage bottle would then become one experienced rapid phase separation, so that the enzymes only for short Contact time and possibly at the phase interface. The case would be similar stored if an enzyme were incorporated into a phase that in the form of droplets dispersed stably in the second phase containing the other enzyme would; in this connection would Means not shaken, but dosed directly from the storage bottle, if necessary also sprayed. Such a multi-phase means would be a technically complex one and difficult to implement solution. It would also be consumer acceptance is expected to be low.

Sinnvoller ist es daher, die beiden Enzyme in räumlich getrennten Lösungen aufzubewahren. Dabei ist die Lagerung in zwei völlig getrennten Flaschen die weniger bevorzugte Lösung, da dies für den Verbraucher einen größeren Aufwand bedeutet. Besonders bevorzugt ist daher die Bereitstellung in einer Zweikammerflasche, aus der dann gleichzeitig beide Reinigungslösungen dosiert werden können. Solche Zweikammerflaschen sind bereits aus dem Stand der Technik bekannt. Neben der Möglichkeit der getrennten Lagerung miteinander nicht kompatibler Enzyme bietet eine Zwei- oder Mehrkammerflasche weitere Vorteile. So ist es möglich, in einer Kammer unter anderem ein Enzym in einer Lösung mit optimalem pH bezüglich der Lagerstabilität aufzubewahren und in einer weiteren Kammer eine Lösung zu bevorraten, deren pH-Wert dazu führt, daß beim Mischen dieser mit der Enzymaufbewahrungslösung eine Reinigungslösung entsteht, deren pH-Wert ein Optimum an Enzymaktivität bewirkt. Beispielsweise sind viele Polysaccharidasen bei neutralem pH-Wert besonders stabil, entfalten ihre höchste Aktivität aber bei pH 4 bis 5.It makes more sense, therefore, the two Enzymes in spatial separate solutions store. The storage in two completely separate bottles is the less preferred solution, since this is for the consumer a greater effort means. The provision in one is therefore particularly preferred Two-chamber bottle, from which both cleaning solutions are then dosed at the same time can be. Such two-chamber bottles are already from the prior art known. Besides the possibility the separate storage of mutually incompatible enzymes a two- or multi-chamber bottle further advantages. So it is possible in one chamber, among other things, an enzyme in a solution with an optimal pH with respect to the Storage stability and to store a solution in another chamber, its pH value leads to that when mixing this creates a cleaning solution with the enzyme storage solution, whose pH value ensures optimum enzyme activity. For example many polysaccharidases are particularly stable at neutral pH, unfold their highest activity but at pH 4 to 5.

Reinigungsmittelcleaning supplies

Die Enzymzubereitung kann im Sinne dieser Erfindung auch in einem biozidfreien Reinigungsmittel für harte Oberflächen eingesetzt werden. Das Reinigungsmittel kann die Enzymzubereitung in Mengen von 0,1 bis 10,0 Gew.-% enthalten, vorzugsweise 0,5 bis 3 Gew.-%.The enzyme preparation can be used in the sense this invention also in a biocide-free detergent for hard surfaces be used. The detergent can be the enzyme preparation Contained in amounts of 0.1 to 10.0 wt .-%, preferably 0.5 to 3% by weight.

Neben der Enzymzubereitung kann ein biozidfreies flüssiges, gelförmiges oder pastöses wäßriges Reinigungsmittel für harte Oberflächen erfindungsgemäß auch übliche Reinigungsmittelbestandteile enthalten. Zu diesen Inhaltsstoffen zählen beispielsweise Tenside, aber auch Builder, Säuren, Alkalien, Hydrotrope, Lösungsmittel, Verdickungsmittel, Abrasivstoffe sowie weitere Hilfs- und Zusatzstoffe wie Farbstoffe, Parfums, Korrosionsinhibitoren oder auch Hautpflegemittel.In addition to the enzyme preparation, a biocide-free liquid, gel-like or pasty aqueous detergent for hard surfaces according to the invention also common detergent components contain. These ingredients include, for example, surfactants, but also builders, acids, Alkalis, hydrotropes, solvents, Thickeners, abrasives and other auxiliaries and additives such as dyes, perfumes, corrosion inhibitors or skin care products.

Die gegebenenfalls eingesetzten Tenside werden vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe anionische Tenside, nichtionische Tenside und/oder amphotere Tenside. Bevorzugt werden dabei anionische und/ oder nichtionische Tenside eingesetzt. Sofern sie eingesetzt werden, kommen anionische Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 15 Gew.-%, nichtionische Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-% und amphotere Tenside vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 4 Gew.-% zur Anwendung, jeweils bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. In einer weniger bevorzugten Ausführungsform können daneben auch noch kationische Tenside in Mengen von bis zu 2 Gew.-% eingesetzt werden, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. Vorzugsweise ist das Reinigungsmittel aufgrund der von ihnen ausgehenden bioziden Wirkung jedoch frei von Kationtensiden.Any surfactants used are preferably selected from the group anionic surfactants, nonionic surfactants and / or amphoteric surfactants. Anionic and / or nonionic are preferred Surfactants used. If they are used, they are anionic Surfactants preferably in amounts of 0.1 to 15% by weight, nonionic Surfactants preferably in amounts of 0.1 to 10 wt .-% and amphoteric Surfactants preferably used in amounts of 0.1 to 4% by weight, each based on the total composition. In one less preferred embodiment can also cationic surfactants in amounts of up to 2% by weight are used, based on the total composition. Preferably is the detergent due to the biocides they emit Effect, however, free from cationic surfactants.

Zu den erfindungsgemäß einsetzbaren Aniontensiden zählen aliphatische Sulfate wie Fettalkoholsulfate, Fettalkoholethersulfate, Dialkylethersulfate, Monoglyceridsulfate und aliphatische Sulfonate wie Alkansulfonate, α-Olefinsulfonate, Ethersulfonate, n-Alkylethersulfonate, sulfonierte Fettsäuren, Estersulfonate und Ligninsulfonate. Ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendbar sind Alkylbenzolsulfonate, Fettsäuresalze (Seifen), Fettsäurecyanamide, Sulfosuccinate (Sulfobernsteinsäuremono- und -dialkylester), Sulfosuccinamate, Sulfosuccinamide, Carbonsäureamidethersulfate, Alkylpolyglykolethercarboxylate, Fettsäureisethionate, Acylaminoalkansulfonate (Fettsäuretauride, N-Acyltauride), Fettsäuresarcosinate, Ethercarbonsäuren und Alkyl(ether)phosphate sowie α-Sulfofettsäuresalze, Acylglutamate, Monoglyceriddisulfate und Alkylether des Glycerindisulfats, und schließlich deren Mischungen.Among the usable according to the invention Anionic surfactants count aliphatic sulfates such as fatty alcohol sulfates, fatty alcohol ether sulfates, Dialkyl ether sulfates, monoglyceride sulfates and aliphatic sulfonates such as alkane sulfonates, α-olefin sulfonates, Ether sulfonates, n-alkyl ether sulfonates, sulfonated fatty acids, ester sulfonates and lignin sulfonates. Also within the scope of the present invention alkylbenzenesulfonates, fatty acid salts (soaps), fatty acid cyanamides, Sulfosuccinates (sulfosuccinic acid mono- and dialkyl esters), sulfosuccinamates, sulfosuccinamides, carboxamide ether sulfates, Alkyl polyglycol ether carboxylates, fatty acid isethionates, acylaminoalkanesulfonates (Taurides, N-acyl taurides), fatty acid sarcosinates, ether and alkyl (ether) phosphates and α-sulfofatty acid salts, Acylglutamates, monoglyceride disulfates and alkyl ethers of glycerol disulfate, and finally their mixtures.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung stehen Fettsäuren bzw. Fettalkohole bzw. deren Derivate – soweit nicht anders angegeben – stellvertretend für verzweigte oder unverzweigte Carbonsäuren bzw. Alkohole bzw. deren Derivate mit vorzugsweise 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, insbesondere 8 bis 20 Kohlenstoffatomen, besonders bevorzugt 10 bis 18 Kohlenstoffatomen, äußerst bevorzugt 12 bis 16 Kohlenstoffatomen, beispielsweise 12 bis 14 Kohlenstoffatomen. Die Fettsäuren/-akohole bzw. ihre Derivate mit gerader Anzahl Kohlenstoffatome sind insbesondere wegen ihrer pflanzlicher Basis als auf nachwachsenden Rohstoffen basierend aus ökologischen Gründen bevorzugt, ohne jedoch die erfindungsgemäße Lehre auf sie zu beschränken. Insbesondere sind auch die beispielsweise nach der ROELENschen Oxo-Synthese erhältlichen Oxo-Alkohole bzw. deren Derivate mit vorzugsweise 7 bis 19 Kohlenstoffatomen, insbesondere 9 bis 19 Kohlenstoffatomen, besonders bevorzugt 9 bis 17 Kohlenstoffatomen, äußerst bevorzugt 11 bis 15 Kohlenstoffatomen, beispielsweise 9 bis 11, 12 bis 15 oder 13 bis 15 Kohlenstoffatomen, entsprechend einsetzbar.Within the scope of the present invention are fatty acids or fatty alcohols or their derivatives - unless otherwise stated - representative for branched or unbranched carboxylic acids or alcohols or their derivatives with preferably 6 to 22 carbon atoms, in particular 8 to 20 carbon atoms, particularly preferably 10 to 18 carbon atoms, most preferred 12 to 16 carbon atoms, for example 12 to 14 carbon atoms. The fatty acids / alcohols or their derivatives with an even number of carbon atoms are in particular because of their vegetable base than on renewable raw materials based on ecological establish preferred, but without restricting the teaching of the invention to them. In particular are also available, for example, after ROELEN's oxo synthesis Oxo alcohols or their derivatives with preferably 7 to 19 carbon atoms, in particular 9 to 19 carbon atoms, particularly preferably 9 to 17 carbon atoms, most preferred 11 to 15 carbon atoms, for example 9 to 11, 12 to 15 or 13 to 15 carbon atoms, can be used accordingly.

Sie werden in Form ihrer Alkalimetall- und Erdalkalimetallsalze, insbesondere Natrium-, Kalium- und Magnesiumsalze, wie auch Ammonium- und Mono-, Di-, Tri- bzw. Tetraalkylammoniumsalze sowie im Falle der Sulfonate auch in Form ihrer konespondierenden Säure, z.B. Dodecylbenzolsulfonsäure, eingesetzt. Die Alkylethersulfate enthalten herstellungsbedingt vor allem bei niederen Ethoxylierungsgraden immer auch Restgehalte nichtalkoxylierter Fettalkoholsulfate. Weiterhin können die erfindungsgemäßen Mittel auch Seifen, d.h. Alkali- oder Ammoniumsalze gesättigter oder ungesättigter C₆-C₂₂-Fettsäuren, enthalten.They are in the form of their alkali metal and alkaline earth metal salts, in particular sodium, potassium and magnesium salts, and also ammonium and mono-, di-, tri- or tetraalkylammonium salts, and in the case of the sulfonates also in the form of their corresponding acid, for example dodecylbenzenesulfonic acid, used. Due to the manufacturing process, the alkyl ether sulfates always contain residual contents of non-alkoxylated fatty alcohol sulfates, especially at low degrees of ethoxylation. Furthermore, the agents according to the invention can also contain soaps, ie alkali or ammonium salts of saturated or unsaturated C ₆ -C ₂₂ fatty acids.

Bevorzugt werden die Aniontenside ausgewählt aus der Gruppe umfassend Fettalkoholsulfate in Mengen von bis zu 5 Gew.-%, Alkylbenzolsulfonate in Mengen von bis zu 7,5 Gew.-% und Seifen in Mengen von bis zu 2 Gew. %, jeweils bezogen auf die Gesamtzusammensetzung, sowie Gemische derselben.The anionic surfactants are preferred selected from the group comprising fatty alcohol sulfates in amounts of up to 5 wt .-%, alkylbenzenesulfonates in amounts of up to 7.5 wt .-% and Soaps in amounts of up to 2% by weight, each based on the total composition, as well as mixtures thereof.

Geeignete nichtionische Tenside sind beispielsweise C₈-C₁₈-Alkylalkoholpolyglykolether, Alkylpolyglykoside sowie stickstoffhaltige Tenside bzw. Mischungen davon, insbesondere der ersten beiden.Suitable nonionic surfactants are, for example, C ₈ -C ₁₈ alkyl alcohol polyglycol ethers, alkyl polyglycosides and nitrogen-containing surfactants or mixtures thereof, in particular the first two.

C₈-C₁₈-Alkylalkoholpolypropylenglykol/polyethylenglykolether können durch die Formel R¹O-(CH₂CH(CH₃)O)_P(CH₂CH₂O)_e-H beschrieben werden, in der R' für einen linearen oder verzweigten, aliphatischen Alkyl- und/oder Alkenylrest mit 8 bis 18 Kohlenstoffatomen, p für 0 oder Zahlen von 1 bis 3 und e für Zahlen von 1 bis 20 steht. Sie werden durch Anlagerung von Propylenoxid und/oder Ethylenoxid an Alkylalkohole, vorzugsweise an Fettalkohole, erhalten. Weiterhin können auch endgruppenverschlossene C₈-C₁₈-Alkylalkoholpolyglykolether eingesetzt werden, d.h. Alkylalkoholpolyalkylenglykolether gemäß obiger Formel, in denen die freie OH-Gruppe verethert ist.C ₈ -C ₁₈ alkyl alcohol polypropylene glycol / polyethylene glycol ether can by the formula R ¹ O- (CH ₂ CH (CH ₃ ) O) _P (CH ₂ CH ₂ O) _e -H are described in which R 'is a linear or branched, aliphatic alkyl and / or alkenyl radical having 8 to 18 carbon atoms, p is 0 or numbers from 1 to 3 and e is numbers from 1 to 20. They are obtained by the addition of propylene oxide and / or ethylene oxide to alkyl alcohols, preferably to fatty alcohols. End-capped C ₈ -C ₁₈ -alkyl alcohol polyglycol ethers can also be used, ie alkyl alcohol polyalkylene glycol ethers according to the above formula, in which the free OH group is etherified.

Erfindungsgemäße Reiniger können Alkylalkoholpolyglykolether in Mengen von 0,1 bis 4 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtrusammensetrung.Cleaners according to the invention can be alkyl alcohol polyglycol ethers contained in amounts of 0.1 to 4 wt .-%, based on the total composition.

Bevorzugte nichtionische Tenside sind weiterhin Alkylpolyglykoside (APG) der Formel R²O[G]_x, in der R² für einen linearen oder verzweigten, gesättigten oder ungesättigten Alkylrest mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen, [G] für einen glykosidisch verknüpften Zuckerrest und x für eine Zahl von 1 bis 10 stehen. Die Indexzahl x gibt den Oligomerisierungsgrad (DP-Grad) an, d.h. die Verteilung von Mono- und Oligoglykosiden. Während x in einer gegebenen Verbindung stets ganzzahlig sein muß und hier vor allem die Werte x = 1 bis 6 annehmen kann, ist der Wert x für ein bestimmtes Alkylglykosid eine analytisch ermittelte rechnerische Größe, die meistens eine gebrochene Zahl darstellt. Vorzugsweise werden Alkylglykoside mit einem mittleren Oligomerisierungsgrad x von 1,1 bis 3,0 eingesetzt. Aus anwendungstechnischer Sicht sind solche Alkylglykoside bevorzugt, deren Oligomerisierungsgrad kleiner als 1,7 ist und insbesondere zwischen 1,2 und 1,6 liegt. Als glykosidischer Zucker wird vorzugsweise Xylose, insbesondere aber Glucose verwendet. Der Alkyl- bzw. Alkenylrest R² kann sich von primären Alkoholen mit 8 bis 18, vorzugsweise 8 bis 14 Kohlenstoffatomen ableiten. Typische Beispiele sind Capronalkohol, Caprylalkohol, Caprinalkohol und Undecylalkohol sowie deren technische Gemische, wie sie beispielsweise im Verlauf der Hydrierung von technischen Fettsäuremethylestern oder im Verlauf der Hydrierung von Aldehyden aus der ROELENschen Oxosynthese anfallen. Vorzugsweise leitet sich der Alkyl- bzw. Alkenylrest R² aber von Laurylalkohol, Myristylalkohol, Cetylalkohol, Palmoleylalkohol, Stearylalkohol, Isostearylalkohol oder Oleylalkohol ab. Weiterhin sind Elaidylalkohol, Petroselinylalkohol, Arachidylalkohol, Gadoleylalkohol, Behenylalkohol, Erucylalkohol sowie deren technische Gemische zu nennen.Preferred nonionic surfactants are furthermore alkyl polyglycosides (APG) of the formula R ² O [G] _x , in which R ^{2 is} a linear or branched, saturated or unsaturated alkyl radical having 8 to 22 carbon atoms, [G] is a glycosidically linked sugar radical and x is a number from 1 to 10. The index number x indicates the degree of oligomerization (DP degree), ie the distribution of mono- and oligoglycosides. While x must always be an integer in a given compound and can in particular assume the values x = 1 to 6, the value x is an analytically determined arithmetic quantity for a specific alkyl glycoside, which usually represents a fractional number. Alkyl glycosides with an average degree of oligomerization x of 1.1 to 3.0 are preferably used. From an application point of view, those alkyl glycosides are preferred whose degree of oligomerization is less than 1.7 and in particular between 1.2 and 1.6. Xylose, but especially glucose, is preferably used as the glycosidic sugar. The alkyl or alkenyl radical R ² can be derived from primary alcohols having 8 to 18, preferably 8 to 14, carbon atoms. Typical examples are capronic alcohol, caprylic alcohol, capric alcohol and undecyl alcohol and their technical mixtures, such as those obtained in the course of the hydrogenation of technical fatty acid methyl esters or in the course of the hydrogenation of aldehydes from ROELEN's oxosynthesis. However, the alkyl or alkenyl radical R ² is preferably derived from lauryl alcohol, myristyl alcohol, cetyl alcohol, palmoleyl alcohol, stearyl alcohol, isostearyl alcohol or oleyl alcohol. Elaidyl alcohol, petroselinyl alcohol, arachidyl alcohol, gadoleyl alcohol, behenyl alcohol, erucyl alcohol and their technical mixtures are also to be mentioned.

Alkylpolyglykoside können in erfindungsgemäßen Reinigern in Mengen von 0,1 bis 6 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.Alkyl polyglycosides can be found in cleaners according to the invention be contained in amounts of 0.1 to 6 wt .-%, based on the total composition.

Als weitere nichtionische Tenside können stickstoffenthaltende Tenside enthalten sein, z.B. Fettsäurepolyhydroxyamide, beispielsweise Glucamide, und Ethoxylate von Alkylaminen, vicinalen Diolen und/oder Carbonsäureamiden, die Alkylgruppen mit 10 bis 22 C-Atomen, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen, besitzen. Der Ethoxylierungsgrad dieser Verbindungen liegt dabei in der Regel zwischen 1 und 20, vorzugsweise zwischen 3 und 10. Bevorzugt sind Ethanolamid-Derivate von Alkansäuren mit 8 bis 22 C-Atomen, vorzugsweise 12 bis 16 C-Atomen. Zu den besonders geeigneten Verbindungen gehören die Laurinsäure-, Myristinsäure- und Palmitinsäuremonoethanolamide.Nitrogen-containing surfactants, for example fatty acid polyhydroxyamides, for example glucamides, and ethoxylates of alkylamines, vicinal diols and / or carboxamides which have alkyl groups with 10 to 22 C atoms, preferably 12 to 18 C atoms, can be present as further nonionic surfactants. The degree of ethoxylation of these compounds is generally between 1 and 20, preferably between 3 and 10. Preferred are ethanolamide derivatives of alkanoic acids with 8 to 22 carbon atoms, preferably 12 to 16 carbon atoms. The particularly suitable compounds include lauric acid, myristic acid and palmitic acid monoethanolamides.

Zu den Amphotensiden (amphoteren Tensiden, zwitterionischen Tensiden), die erfindungsgemäß eingesetzt werden können, zählen u.a. Betaine, Aminoxide, Alkylamidoalkylamine, alkylsubstituierte Aminosäuren sowie acylierte Aminosäuren. Bevorzugte Amphotenside sind dabei beispielsweise Betaine der Formel (R³)(R⁴)(R⁵)N⁺CH₂COO^–, in der R³ einen gegebenenfalls durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und R⁴ sowie R⁵ gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere C₁₀-C₁₈-Alkyl-dimethylcarboxymethylbetain und C₁₁-C₁₇-Alkyamidopropyl-dimethylcarboxymethylbetain.The amphoteric surfactants (amphoteric surfactants, zwitterionic surfactants) which can be used according to the invention include betaines, amine oxides, alkylamidoalkylamines, alkyl-substituted amino acids and acylated amino acids. Preferred amphoteric surfactants are, for example, betaines of the formula (R ³ ) (R ⁴ ) (R ⁵ ) N ⁺ CH ₂ COO ^- , in which R ^{3 is} an alkyl radical with 8 to 25, preferably 10 to 21 carbon atoms, which is optionally interrupted by heteroatoms or heteroatom groups, and R ⁴ and R ^{5 are} identical or different alkyl radicals with 1 to 3 carbon atoms, in particular C ₁₀ -C ₁₈ -alkyl-dimethylcarboxymethylbetaine and C ₁₁ -C ₁₇ alkyamidopropyldimethylcarboxymethylbetaine.

Sollten Kationtenside in der Zusammensetzung enthalten sein, so sind dies bevorzugt die quartären Ammoniumverbindungen der Formel (R⁶)(R⁷)(R⁸)(R⁹)N⁺X^–, in der R⁶ bis R⁹ für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X^– für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, beispielsweise Didecyl-dimethyl-ammoniumchlorid, Alkyl-benzyl-didecyl-ammoniumchlorid und deren Mischungen. Vorzugsweise ist die Reinigungsmittelzusammensetzung jedoch frei von kationischen Tensiden.If cationic surfactants are present in the composition, these are preferably the quaternary ammonium compounds of the formula (R ⁶ ) (R ⁷ ) (R ⁸ ) (R ⁹ ) N ⁺ X ^- , in which R ⁶ to R ^{9 represent} four identical or different types, in particular two long and two short-chain, alkyl radicals and X ^- an anion, in particular a halide ion, for example didecyl-dimethyl-ammonium chloride, alkyl-benzyl-didecyl-ammonium chloride and their mixtures. However, the detergent composition is preferably free of cationic surfactants.

Bei der Wahl der geeigneten Tenside ist darauf zu achten, daß sie mit den eingesetzten Enzymen kompatibel sind. Bevorzugt wird die Enzymaktivität während einer typischen mittleren Einwirkzeit von 15 Minuten um nicht mehr als 50% gesenkt, insbesondere um nicht mehr als 30%. So haben Versuche ergeben, daß das als denaturierend bekannte Natriumdodecylsulfat (SDS) die Aktivität der Corolase bereits in einer Konzentration von 1 % innerhalb von 15 Minuten auf unter 30% absenkt, während die Aktivität der Xylanase schon mit nur 0,1 % SDS auf weniger als 40% sinkt, so daß dieses Tensid für den Einsatz in erfindungsgemäßen Reinigungsmittel nicht bevorzugt ist. Soll dieses oder ein ähnlich wirkendes Tensid dennoch eingesetzt werden, so ist vorzugsweise auf eine räumliche Trennung während der Lagerung zu achten, beispielsweise durch Verkapselung der Enzyme oder durch den Einsatz einer Mehrkammerflasche, so daß Enzyme und Tenside erst unmittelbar vor bzw. während der Anwendung miteinander in Kontakt kommen. Alkylpolyglykoside sind dagegen gut für den Einsatz in enzymhaltigen Mitteln gemäß dieser Erfindung geeignet. So bleibt die Aktivität der Corolase auch mit 3% APG 600 noch deutlich über 50%, die Xylanase erfährt durch den Zusatz von APG 600 sogar zunächst eine Aktivitätssteigerung (über 150% Aktivität mit 0,1% Tensid) und weist mit 3% APG immer noch über 80% Aktivität auf.When choosing the suitable surfactants care must be taken that they are compatible with the enzymes used. The is preferred enzyme activity while a typical average exposure time of 15 minutes lowered than 50%, especially not more than 30%. So have attempts reveal that as denaturing known sodium dodecyl sulfate (SDS) the activity of corolase in a concentration of 1% within 15 minutes lowered to below 30% while the activity the xylanase drops to less than 40% with just 0.1% SDS, so this Surfactant for use in cleaning agents according to the invention is not preferred. Should this or a similarly acting surfactant nonetheless are used, it is preferable to a spatial separation while storage, for example by encapsulating the enzymes or by using a multi-chamber bottle so that enzymes and surfactants with one another only immediately before or during use get in touch. In contrast, alkyl polyglycosides are good for use in enzyme-containing agents according to this Invention suitable. So the activity of the Corolase remains with 3% APG 600 still significantly above 50% experiencing xylanase by adding APG 600 even an increase in activity (over 150% activity with 0.1% surfactant) and still shows over 80% with 3% APG activity on.

Weiterhin können die erfindungsgemäßen Mittel Builder enthalten. Geeignete Builder sind beispielsweise Alkalimetallgluconate, -citrate, -nitrilotriacetate, -carbonate und -bicarbonate, insbesondere Natriumgluconat, -citrat und -nitrilotriacetat sowie Natrium- und Kaliumcarbonat und -bicarbonat, sowie Alkalimetall- und Erdalkalimetallhydroxide, insbesondere Natrium- und Kaliumhydroxid, Ammoniak und Amine, insbesondere Mono- und Triethanolamin, bzw. deren Mischungen. Hierzu zählen auch die Salze der Glutarsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Weinsäure und Benzolhexacarbonsäure sowie Phosphonate und Phosphate. Die Mittel können Builder in Mengen, bezogen auf die Zusammensetzung, von 0,1 bis 5 Gew.-% enthalten.Furthermore, the agents according to the invention Builder included. Suitable builders are, for example, alkali metal gluconates, citrates, nitrilotriacetates, carbonates and bicarbonates, in particular Sodium gluconate, citrate and nitrilotriacetate as well as sodium and Potassium carbonate and bicarbonate, as well as alkali metal and alkaline earth metal hydroxides, especially sodium and potassium hydroxide, ammonia and amines, especially mono- and triethanolamine, or mixtures thereof. This also includes the salts of glutaric acid, Succinic acid, adipic acid, tartaric acid and benzene hexacarboxylic acid as well as phosphonates and phosphates. The agents can be purchased in quantities on the composition, from 0.1 to 5 wt .-% included.

Des weiteren können die erfindungsgemäßen Mittel Säuren und/ oder Alkalien enthalten. Diese dienen einerseits als pH-Regulatoren, andererseits können die Säuren aber auch zur Entfernung von Kalkflecken von den zu reinigenden Oberflächen beitragen. Bei den erfindungsgemäß einsetzbaren Säuren kann es sich um anorganische Mineralsäuren, beispielsweise Salzsäure, und/oder um C_1–6-Mono-, Di-, Tri- oder Polycarbonsäuren oder -hydroxycarbonsäuren wie beispielsweise Ameisensäure, Essigsäure, Milchsäure, Citronensäure, Gluconsäure, Glutarsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Weinsäure oder auch Äpfelsäure sowie um weitere organische Säuren wie etwa Salicylsäure oder Amidosulfonsäure handeln. Besonders bevorzugt wird jedoch die Citronensäure eingesetzt; auch Mischungen aus mehreren Säuren können verwendet werden. Säuren können im erfindungsgemäßen Reinigungsmittel in Mengen von bis zu 6 Gew.-% enthalten sein, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.The agents according to the invention can furthermore contain acids and / or alkalis. On the one hand, these serve as pH regulators, on the other hand, the acids can also help to remove limescale from the surfaces to be cleaned. The acids that can be used according to the invention can be inorganic mineral acids, for example hydrochloric acid, and / or C _1-6 mono-, di-, tri- or polycarboxylic acids or hydroxycarboxylic acids such as, for example, formic acid, acetic acid, lactic acid, citric acid, gluconic acid, glutaric acid , Succinic acid, adipic acid, tartaric acid or malic acid as well as other organic acids such as salicylic acid or amidosulfonic acid. However, citric acid is particularly preferably used; Mixtures of several acids can also be used. Acids can be present in the cleaning agent according to the invention in amounts of up to 6% by weight, based on the total composition.

Zu den gegebenenfalls einsetzbaren Basen zählen Alkanolamine, beispielsweise Mono- oder Diethanolamin, sowie Ammonium- oder Alkalimetallhydroxide, vor allem Natriumhydroxid. Das erfindungsgemäße Reinigungsmittel kann Basen in Mengen von bis zu 2,5 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.To those that may be used Count bases Alkanolamines, for example mono- or diethanolamine, and ammonium or alkali metal hydroxides, especially sodium hydroxide. The cleaning agent according to the invention can contain bases in amounts of up to 2.5% by weight, based on the overall composition.

Das erfindungsgemäße Mittel kann weiterhin zur Viskositätsregulierung einen oder mehrere Verdicker enthalten. Als Verdickungsmittel geeignet sind dabei natürliche und synthetische Polymere sowie anorganische Verdickungsmittel. Zu den einsetzbaren Polymeren zählen Polysacchande bzw. Heteropolysaccharide und andere organische natürliche Verdickungsmittel, darunter die Polysaccharidgummen wie Gummi arabicum, Agar, Alginate, Canageene und ihre Salze, Guar, Guaran, Tragant, Gellan, Ramsan, Dextran oder Xanthan und ihre Derivate, z.B. propoxyliertes Guar, sowie ihre Mischungen, weiterhin auch Pektine, Polyosen, Johannisbrotbaumkernmehl, Stärke, Dextrine, Gelatine, Casein. Weiterhin können organische abgewandelte Naturstoffe wie Carboxymethylcellulose und -Celluloseether, Hydroxyethyl- und -propylcellulose und dgl. oder Celluloseacetat sowie Kernmehlether eingesetzt werden. Als organische vollsynthetische Verdickungsmittel können homo- und copolymere Polycarboxylate, vor allem Polyacryl- und Polymethacryl-Verbindungen sowie Vinylpolymere, Polycarbonsäuren, Polyether, Polyimine oder auch Polyamide dienen. Zu den einsetzbaren anorganischen Verdickungsmitteln zählen Polykieselsäuren, Tonmineralien wie Montmorillonite, Zeolithe, Kieselsäure sowie verschiedene nanopartikuläre anorganische Verbindungen wie nanopartikuläre Metalloxide, -oxidhydrate, -hydroxide, -carbonate und -phosphate sowie Silicate mit einer mittleren Teilchengröße von 1 bis 200 nm, bezogen auf den Teilchendurchmesser in der Längsrichtung, d.h. in der Richtung der größten Ausdehnung der Teilchen. Diese nanopartikulären Stoffen können optional in einer weiteren Ausführungsform der Erfindung mit einem oder mehreren Oberflächenmodifikationsmitteln behandelt sein. Die Oberflächenmodifikation erfolgt in dem Fachmann bekannter Weise mit ein- und mehrbasischen C_2–8-Carbonsäuren oder -Hydroxycarbonsäuren, funktionellen Silanen des Typs (OR)_4–nSiR_n (R = org. Reste mit funktionellen Gruppen wie Hydroxy, Carboxy, Ester, Amin, Epoxy, etc.), quartären Ammoniumverbindungen oder Aminosäuren sowie weiteren hierzu einsetzbaren Stoffen.The agent according to the invention can furthermore contain one or more thickeners for viscosity regulation. Natural and synthetic polymers and inorganic thickeners are suitable as thickeners. The polymers that can be used include polysaccharides or heteropolysaccharides and other organic natural thickeners, including the polysaccharide gums such as gum arabic cum, agar, alginates, canageene and their salts, guar, guaran, tragacanth, gellan, ramsan, dextran or xanthan and their derivatives, e.g. propoxylated guar, as well as their mixtures, also pectins, polyoses, locust bean gum, starch, dextrins, gelatin, casein. Organic modified natural substances such as carboxymethyl cellulose and cellulose ether, hydroxyethyl and propyl cellulose and the like, or cellulose acetate and core meal ether can also be used. Homo- and copolymeric polycarboxylates, especially polyacrylic and polymethacrylic compounds, as well as vinyl polymers, polycarboxylic acids, polyethers, polyimines or polyamides can be used as fully synthetic synthetic thickeners. The inorganic thickeners that can be used include polysilicic acids, clay minerals such as montmorillonites, zeolites, silicic acid and various nanoparticulate inorganic compounds such as nanoparticulate metal oxides, oxide hydrates, hydroxides, carbonates and phosphates as well as silicates with an average particle size of 1 to 200 nm, based on the Particle diameter in the longitudinal direction, ie in the direction of the greatest expansion of the particles. In a further embodiment of the invention, these nanoparticulate substances can optionally be treated with one or more surface modification agents. The surface modification is carried out in a manner known to the person skilled in the art with mono- and polybasic C _2-8 carboxylic acids or hydroxycarboxylic acids, functional silanes of the type (OR) _4-n SiR _n (R = organic residues with functional groups such as hydroxyl, carboxy, ester , Amine, epoxy, etc.), quaternary ammonium compounds or amino acids and other substances that can be used for this purpose.

Neben den bisher genannten Verdickungsmitteln kann das erfindungsgemäße Reinigungsmittel Elektrolytsalze enthalten. Diese können ebenfalls zu einer Viskositätserhöhung beitragen. Elektrolytsalze im Sinne der vorliegenden Erfindung sind Salze, die in dem erfindungsgemäßen wäßrigen Mittel in ihre ionischen Bestandteile zerfallen. Bevorzugt sind die Salze, insbesondere Alkalimetall- und/oder Erdalkalimetallsalze, einer anorganischen Säure, vorzugsweise einer anorganischen Säure aus der Gruppe, umfassend die Halogenwasserstoffsäuren, Salpetersäure und Schwefelsäure, insbesondere die Chloride und Sulfate. Im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre kann ein Elektrolytsalz auch in Form seines korrespondierenden Säure/Base-Paares eingesetzt werden, beispielsweise Salzsäure und Natriumhydroxid anstatt Natriumchlorid.In addition to the previously mentioned thickeners can the cleaning agent according to the invention Contain electrolyte salts. These can also contribute to an increase in viscosity. For the purposes of the present invention, electrolyte salts are salts those in the aqueous composition according to the invention disintegrate into their ionic components. Preferred are the salts in particular alkali metal and / or alkaline earth metal salts, an inorganic Acid, preferably an inorganic acid from the group comprising the hydrohalic acids, nitric acid and sulfuric acid, especially the chlorides and sulfates. Within the framework of the teaching according to the invention an electrolyte salt can also be used in the form of its corresponding acid / base pair be, for example hydrochloric acid and sodium hydroxide instead of sodium chloride.

Im erfindungsgemäßen Mittel können organische und/oder anorganische Verdicker in Mengen von insgesamt bis zu 2 Gew.-%, eingesetzt werden, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.Organic agents can be used in the agent according to the invention and / or inorganic thickeners in amounts of up to 2 in total % By weight, are used, based on the total composition.

Das erfindungsgemäße Mittel kann vorteilhafterweise zusätzlich ein oder mehrere wasserlösliche organische Lösungsmittel enthalten, üblicherweise in einer Menge von bis zu 6 Gew.-%, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung. Das Lösungsmittel wird im Rahmen der erfindungsgemäßen Lehre nach Bedarf insbesondere als Hydrotropikum, Viskositätsregulator und/oder Kältestabilisator eingesetzt. Es wirkt lösungsvermittelnd insbesondere für Tenside und Elektrolyt sowie Parfüm und Farbstoff und trägt so zu deren Einarbeitung bei, verhindert die Ausbildung flüssigkristalliner Phasen und hat Anteil an der Bildung klarer Produkte. Die Viskosität des erfindungsgemäßen Mittels verringert sich mit zunehmender Lösungsmittelmenge. Zuviel Lösungsmittel kann jedoch einen zu starken Viskositätsabfall bewirken. Schließlich sinkt mit zunehmender Lösungsmittelmenge der Kältetrübungs- und Klarpunkt des erfindungsgemäßen Mittels.The agent according to the invention can advantageously additionally one or more water-soluble organic solvents included, usually in an amount of up to 6% by weight, based on the total composition. The solvent is part of the teaching of the invention as required, especially as a hydrotrope, viscosity regulator and / or cold stabilizer used. It acts as a solution mediator especially for Surfactants and electrolyte as well as perfume and dye and thus contributes their incorporation prevents the formation of liquid crystalline Phases and contributes to the formation of clear products. The viscosity of the agent according to the invention decreases with increasing amount of solvent. Too much solvent However, the viscosity may drop too much. Finally sinks with increasing amount of solvent the cold haze and Clear point of the agent according to the invention.

Geeignete Lösungsmittel sind beispielsweise gesättigte oder ungesättigte, vorzugsweise gesättigte, verzweigte oder unverzweigte C_1–20-Kohlenwasserstoffe, bevorzugt C_2–15-Kohlenwasserstoffe, mit mindestens einer Hydroxygruppe und gegebenenfalls einer oder mehreren Ethertunktionen C-O-C, d.h. die Kohlenstoffatomkette unterbrechenden Sauerstoffatomen. Bevorzugte Lösungsmittel sind jedoch die – gegebenenfalls einseitig mit einem C_1–6-Alkanol veretherten – C_2–6-Alkylenglykole und Poly-C_2–3-alkylenglykolether mit durchschnittlich 1 bis 9 gleichen oder verschiedenen, vorzugsweise gleichen, Alkylenglykolgruppen pro Molekül, z.B. Ethylenglykol, Propylenglykol, Butylenglycol, Diethylenglycol, Dimethoxydiglycol, Dipropylenglycol, Propylenglycolbutylether, Propylenglycolpropylether, Dipropylenglykolmonomethylether sowie PEG. Weitere bevorzugte Lösungsmittel sind die C_1–6-Alkohole, wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, t-Butanol usw., besonders bevorzugt wird Ethanol und/oder Isopropanol eingesetzt.Suitable solvents are, for example, saturated or unsaturated, preferably saturated, branched or unbranched C _1-20 hydrocarbons, preferably C _2-15 hydrocarbons, with at least one hydroxyl group and optionally one or more ether functions COC, ie oxygen atoms interrupting the carbon atom chain. However, preferred solvents are the C _2-6 alkylene glycols and poly-C _2-3 alkylene glycol ethers, optionally etherified on one side with a C _1-6 alkanol, with an average of 1 to 9 identical or different, preferably identical, alkylene glycol groups per molecule, for example Ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, diethylene glycol, dimethoxy diglycol, dipropylene glycol, propylene glycol butyl ether, propylene glycol propyl ether, dipropylene glycol monomethyl ether and PEG. Further preferred solvents are the C _1-6 alcohols, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, t-butanol, etc., ethanol and / or isopropanol are particularly preferably used.

Als Lösungsvermittler können außer den zuvor beschriebenen Lösungsmitteln beispielsweise auch Alkanolamine sowie Alkylbenzolsulfonate mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, z.B. Xylol- oder Cumolsulfonat eingesetzt werden. Weitere einsetzbare Hydrotrope sind z.B. Octylsulfat oder Butylglucosid. Das erfindungsgemäße Mittel kann diese Hydrotrope in Mengen von, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung, bis zu 4 Gew.-% enthalten.In addition to the solvents previously described for example also alkanolamines and alkylbenzenesulfonates 1 to 3 carbon atoms in the alkyl radical, e.g. Xylene or cumene sulfonate be used. Other usable hydrotropes are e.g. octyl or butyl glucoside. The agent according to the invention can do this hydrotrope in amounts of up to 4% by weight, based on the total composition contain.

In einer Ausführungsform können die erfindungsgemäßen Mittel Abrasivstoffe enthalten. Als Abrasivkomponente können hierbei feste wasserlösliche und wasserunlösliche, vor zugsweise anorganische Verbindungen und Gemische derselben dienen. Hierzu gehören beispielsweise Alkalicarbonate, Alkalibicarbonate und Alkalisulfate, Alkaliborate, Alkaliphosphate, Siliciumdioxid, kristalline oder amorphe Alkalisilikate und Schichtsilikate, feinkristalline Natriumaluminiumsilikate und Calciumcarbonat. Der Vorteil wasserlöslicher Abrasivkomponenten besteht in einer praktisch rückstandsfreien Abspülbarkeit des Mittels. Neben diesen anorganischen Stoffen können auch aus der belebten Natur gewonnene Abrasiva, beispielsweise zerkleinerte Nußschalen oder Hölzer, sowie abriebfeste Kunststoffe, beispielsweise Polyethylenperlen, oder auch Keramik- oder Glaskügelchen Verwendung finden. Das erfindungsgemäße Reinigungsmittel kann Abrasivstoffe in Mengen von bis zu 2 Gew.-% enthalten, bezogen auf die Gesamtzusammensetzung.In one embodiment, the agents according to the invention can contain abrasives. Solid water-soluble and water-insoluble, preferably inorganic compounds and mixtures thereof can serve as the abrasive component. These include, for example, alkali carbonates, alkali bicarbonates and alkali sulfates, alkali borates, alkali phosphates, silicon dioxide, crystalline or amorphous alkali silicates and layered silicates, finely crystalline sodium aluminum silicates and calcium carbonate. The advantage of water-soluble abrasive components is that the agent can be rinsed off practically without residue. In addition to these inorganic substances, abrasives obtained from living nature, for example crushed nut shells or woods, and abrasion-resistant plastics, for example polyethylene beads, or ceramic or glass beads can also be used. The cleaning agent according to the invention can abrasives in Men contain up to 2 wt .-%, based on the total composition.

Neben den genannten Komponenten können die erfindungsgemäßen Mittel einen oder mehrere weitere Hilfs- und Zusatzstoffe enthalten, wie sie vor allem in Reinigungsmitteln für harte Oberflächen üblich sind. Hierzu zählen insbesondere UV-Stabilisatoren, Konosionsinhibitoren, Reinigungsverstärker, Antistatika, Konservierungsmittel (z.B. 2-Brom-2-nitropropan-1,3-diol oder eine Isothiazolinon-Bromnitropropandiol-Zubereitung), Parfüm, Farbstoffe, Perlglanzmittel (beispielsweise Glykoldistearat) sowie Trübungsmittel oder auch Hautschutzmittel, wie sie beispielsweise in EP 522 506 beschrieben sind. Die Menge an derartigen Zusätzen liegt üblicherweise nicht über 12 Gew.-% im Reinigungsmittel. Die Untergrenze des Einsatzes hängt von der Art des Zusatzstoffes ab und kann beispielsweise bei Farbstoffen bis zu 0,001 Gew.-% und darunter betragen. Vorzugsweise liegt die Menge an Hilfsstoffen zwischen 0,01 und 7 Gew.-%, insbesondere 0,1 und 4 Gew.-%.In addition to the components mentioned, the agents according to the invention can contain one or more further auxiliaries and additives, as are customary above all in cleaning agents for hard surfaces. These include in particular UV stabilizers, corrosion inhibitors, cleaning enhancers, antistatic agents, preservatives (for example 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol or an isothiazolinone-bromonitropropanediol preparation), perfume, dyes, pearlescent agents (for example glycol distearate) and opacifiers or also skin protection agents, such as those in EP 522 506 are described. The amount of such additives is usually not more than 12% by weight in the cleaning agent. The lower limit of use depends on the type of additive and can be up to 0.001% by weight and below, for example, for dyes. The amount of auxiliaries is preferably between 0.01 and 7% by weight, in particular 0.1 and 4% by weight.

Als Farbstoffe können sämtliche in Haushaltsreinigungsmitteln üblicherweise eingesetzten Farbstoffe verwendet werden. Auch bei den Duftstoffen können sämtliche übliche Parfums zum Einsatz kommen. Bevorzugt sind dabei fruchtige Düfte, beispielsweise Citrus, ferner Pine (Fichte) und Minze sowie blumige Düfte. Konservierungsmittel besitzen eine biozide Wirkung, so daß es wünschenswert ist, in erfindungsgemäßen Reinigungsmitteln nur geringe Konzentrationen, vorzugsweise aber gar keine Konservierungsmittel einzusetzen.All of them can usually be used as dyes in household cleaning agents used dyes are used. Even with the fragrances can all common perfumes are used. Fruity fragrances are preferred, for example Citrus, pine (spruce) and mint as well as floral fragrances. preservative have a biocidal action, so that it is desirable in cleaning agents according to the invention only low concentrations, but preferably no preservatives at all use.

Es ist von Vorteil, wenn das Mittel keine Komplexbildner enthält; der Zusatz eines Bleichmittels zum erfindungsgemäßen Reinigungsmittel ist nicht erforderlich.It is beneficial if the remedy contains no complexing agents; the addition of a bleaching agent to the cleaning agent according to the invention is not required.

Der pH-Wert der erfindungsgemäßen Mittel liegt vorzugsweise zwischen 1 und 7,5, besonders bevorzugt zwischen 2 und 5, insbesondere zwischen 2,5 und 4,5. Dabei ist bei mehrphasigen Mitteln unter dem pH-Wert des Mittels der pH-Wert der nach dem Aufschütteln entstandenen temporären Emulsion zu verstehen, bei Mitteln, die in Mehrkammerflaschen angeboten werden, ist der pH-Wert des Mittels der pH-Wert der aus der gemeinsamen bestimmungsgemäßen Dosierung der in den verschiedenen Kammern gelagerten Komponenten erhaltenen Lösung. Es ist also jeweils der pH-Wert der gebrauchsfertigen Reinigungslösung gemeint.The pH of the agents according to the invention is preferably between 1 and 7.5, particularly preferably between 2 and 5, especially between 2.5 and 4.5. It is multi-phase Average below the pH of the average of the pH of the resulting after shaking temporary Emulsion to be understood with agents that are offered in multi-chamber bottles be, the pH of the agent is the pH of the common proper dosage of the components stored in the various chambers Solution. It means the pH value of the ready-to-use cleaning solution.

Sofern es sich um ein flüssiges Mittel handelt, besitzt dieses vorzugsweise eine Viskosität von bis zu 1000 mPas. Gelförmige oder pastöse Reinigungsmittel können demgegenüber Viskositäten von bis zu 150000 mPas haben. Die Viskositätsmessungen erfolgen bei 20°C im Brookfield-Viskosimeter LVDV II mit einer Rotorfrequenz von 20 U/min (Spindel Nr. 31, Konz. 100%).Unless it is a liquid is, this preferably has a viscosity of up to to 1000 mPas. Gel-like or pasty Detergents can In contrast, viscosities of up to 150,000 mPas. The viscosity measurements are carried out at 20 ° C in a Brookfield viscometer LVDV II with a rotor frequency of 20 rpm (spindle no.31, conc. 100%).

Das Reinigungsmittel kann ein oder mehrere Treibmittel (INCI Propellants), üblicherweise in einer Menge von 1 bis 80 Gew.-%, vorzugsweise 1,5 bis 30 Gew.-%, insbesondere 2 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt 2,5 bis 8 Gew.-%, äußerst bevorzugt 3 bis 6 Gew.%, enthalten.The detergent can be a or several propellants, usually in one quantity from 1 to 80% by weight, preferably 1.5 to 30% by weight, in particular 2 to 10% by weight, particularly preferably 2.5 to 8% by weight, extremely preferred 3 to 6% by weight.

Treibmittel sind erfindungsgemäß üblicherweise Treibgase, insbesondere verflüssigte oder komprimierte Gase. Die Wahl richtet sich nach dem zu versprühenden Produkt und dem Einsatzgebiet. Bei der Verwendung von komprimierten Gasen wie Stickstoff, Kohlendioxid oder Distickstoffoxid, die im allgemeinen in dem flüssigen Reinigungsmittel unlöslich sind, sinkt der Betriebsdruck mit jeder Ventilbetätigung. Im Reinigungsmittel lösliche oder selbst als Lösungsmittel wirkende verflüssigte Gase (Flüssiggase) als Treibmittel bieten den Vorteil gleichbleibenden Betriebsdrucks und gleichmäßiger Verteilung, denn an der Luft verdampft das Treibmittel und nimmt dabei ein mehrhundertfaches Volumen ein. Geeignet sind demgemäß folgende gemäß INCI bezeichnete Treibmittel: Butane, Carbon Dioxide, Dimethyl Carbonate, Dimethyl Ether, Ethane, Hydrochlorofluorocarbon 22, Hydrochlorofluorocarbon 142b, Hydrofluorocarbon 152a, Hydrofluorocarbon 134a, Hydrofluorocarbon 227ea, Isobutane, Isopentane, Nitrogen, Nitrous Oxide, Pentane, Propane. Auf Chlorfluorkohlenstofte (Fluorchlorkohlenwasserstoffe, FCKW) als Treibmittel wird jedoch wegen ihrer schädlichen Wirkung auf den – vor harter UV-Strahlung schützenden – Ozon-Schild der Atmosphäre, die sogenannte Ozon-Schicht, vorzugsweise weitgehend und insbesondere vollständig verzichtet.According to the invention, blowing agents are customary Propellants, especially liquefied or compressed gases. The choice depends on the product to be sprayed and the area of application. When using compressed gases such as nitrogen, carbon dioxide or nitrous oxide, which in general in the liquid Detergent insoluble the operating pressure drops with each valve actuation. Soluble in the detergent or even as a solvent acting liquefied Gases (liquid gases) as a propellant offer the advantage of constant operating pressure and even distribution, because the blowing agent evaporates in the air and takes several hundredfold Volume. The following are accordingly suitable and are designated according to INCI Blowing agents: butanes, carbon dioxides, dimethyl carbonates, dimethyl Ethers, ethanes, hydrochlorofluorocarbon 22, hydrochlorofluorocarbon 142b, hydrofluorocarbon 152a, hydrofluorocarbon 134a, hydrofluorocarbon 227ea, isobutane, isopentane, nitrogen, nitrous oxide, pentane, Propane. Chlorofluorocarbons (chlorofluorocarbons, CFCs) as a propellant, however, because of their harmful Effect on the - before hard UV radiation protective - ozone shield the atmosphere, the so-called ozone layer, preferably largely and in particular Completely waived.

Bevorzugte Treibmittel sind Flüssiggase. Flüssiggase sind Gase, die bei meist schon geringen Drücken und 20°C vom gasförmigen in den flüssigen Zustand übergeführt werden können. Insbesondere werden unter Flüssiggasen jedoch die – in Ölraffinerien als Nebenprodukte bei Destillation und Kracken von Erdöl sowie in der Erdgas-Aufbereitung bei der Benzinabscheidung anfallenden – Kohlenwasserstoffe Propan, Propen, Butan, Buten, Isobutan (2-Methylpropan), Isobuten (2-Methylpropen, Isobutylen) und deren Gemische verstanden.Preferred blowing agents are liquid gases. Liquid are gases that are converted from gaseous to liquid at mostly low pressures and 20 ° C can. In particular, liquid gases however, the - in oil refineries as by-products in distillation and cracking of petroleum as well in natural gas processing during gasoline separation - hydrocarbons Propane, propene, butane, butene, isobutane (2-methylpropane), isobutene (2-methyl propene, isobutylene) and their mixtures understood.

Besonders bevorzugt enthält das Reinigungsmittel als ein oder mehrere Treibmittel Propan, Butan und/oder Isobutan, insbesondere Propan und Butan, äußerst bevorzugt Propan, Butan und Isobutan.The detergent particularly preferably contains as one or more propellants, butane and / or isobutane, especially propane and butane, extremely preferred Propane, butane and isobutane.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Erzeugnis, enthaltend eine erfindungsgemäße Enzymzubereitung oder ein erfindungsgemäßes Reinigungsmittel und einen Sprühspender.Another object of the invention is a product containing an enzyme preparation according to the invention or a cleaning agent according to the invention and a spray dispenser.

Bevorzugt ist der Sprühspender ein manuell aktivierter Sprühspender, insbesondere ausgewählt aus der Gruppe, umfassend Aerosolsprühspender (Druckgasbehälter; auch u.a. als Spraydose bezeichnet), selbst Druck aufbauende Sprühspender, Pumpsprühspender und Triggersprühspender, insbesondere Pumpsprühspender und Triggersprühspender mit einem Behälter aus transparentem Polyethylen oder Polyethylenterephthalat. Sprühspender werden ausführlicher in der WO 96/04940 (Procter & Gamble) und den darin zu Sprühspendern zitierten US-Patenten, auf die in dieser Hinsicht sämtlich Bezug genommen und deren Inhalt hiermit in diese Anmeldung aufgenommen wird, beschrieben. Triggersprühspender und Pumpzerstäuber besitzen gegenüber Druckgasbehältern den Vorteil, daß kein Treibmittel eingesetzt werden muß.The spray dispenser is preferably a manually activated spray dispenser, in particular selected from the group comprising aerosol spray dispensers (pressurized gas containers; also referred to as a spray can), self-building spray dispensers, pump spray dispensers and trigger spray dispensers, in particular pump spray dispensers and trigger spray dispensers with a container made of transparent polyethylene or polyethylene terephthalate. Spray dispensers are described in greater detail in WO 96/04940 (Procter & Gamble) and the US patents cited therein for spray dispensers, all of which are referred to in this regard and the contents of which are hereby incorporated into this application. Trigger spray dispensers and pump atomizers have ge Compared to pressurized gas containers, the advantage that no blowing agent has to be used.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird das die Enzymzubereitung enthaltende Mittel jedoch nicht als Aerosol zerstäubt, da hierbei gegebenenfalls geringe Mengen der Enzymzubereitung in die Atemwege geraten können und unter Umständen dort allergische Reaktionen auslösen könnten. Durch geeignete, partikelgängige Aufsätze, Düsen etc. (sog. „nozzle-Ventile") auf dem Sprühspender kann das Enzym in auf Partikeln immobilisierter Form dem Mittel beigefügt werden und als Reinigungsschaum dosiert werden. Bei der Erzeugung dieser kompakten Schäume entstehen keine lungengängigen Teilchen, so daß die Gefahr der Inhalation von Allergenen im wesentlichen gebannt wird.In a further preferred embodiment However, the agent containing the enzyme preparation is not considered Atomized aerosol, since small amounts of the enzyme preparation in can get into the airways and possibly trigger allergic reactions there could. Through suitable, particle-compatible Essays, Nozzles etc. (so-called "nozzle valves") on the spray dispenser the enzyme can be immobilized on particles enclosed and are dosed as cleaning foam. When generating of these compact foams there are no respiratory diseases Particles so the Risk of inhaling allergens is essentially eliminated.

Noch ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Hydrolyse von Biofilmen auf harten Oberflächen im Haushalt, bei dem die Vitalität der mikrobiellen Zellen nicht ge schädigt wird. Hierzu wird die erfindungsgemäße Enzymzubereitung oder das erfindungsgemäße Reinigungsmittel, gegebenenfalls unter Benutzung eines erfindungsgemäßen Erzeugnisses, auf die mit Biofilm überzogene Fläche aufgebracht und gegebenenfalls nach einer Einwirkzeit von 1 bis 30 Minuten, bei stärkerem Befall auch einige Stunden oder über Nacht, mit klarem Wasser abgespült. Die Zubereitung oder das Mittel kann auch vor dem Abspülen mit einem Tuch, einem Schwamm, einer Bürste oder einem sonstigen zur Reinigung geeigneten Utensil auf der von Biofilm befallenen Oberfläche verwischt oder verrieben werden, was z.B. bei Anwesenheit von Abrasivstoffen im Reinigungsmittel die Reinigungsleistung verbessert. Schließlich wird die Oberfläche mit einem trockenen Tuch abgetrocknet. Bei sehr starkem Befall der Oberfläche mit Biofilm kann der Reinigungsvorgang anschließend wiederholt werden.Yet another object of the invention is a process for the hydrolysis of biofilms on hard surfaces in the Household where the vitality the microbial cells are not damaged. For this purpose, the enzyme preparation according to the invention or the cleaning agent according to the invention, optionally using a product according to the invention, to the one covered with biofilm area applied and if necessary after an exposure time of 1 to 30 minutes, with stronger Affect for a few hours or more Night, rinsed with clear water. The preparation or agent can also be rinsed with a Cloth, a sponge, a brush or any other utensil suitable for cleaning on the by Biofilm infested surface blurred or rubbed, which e.g. in the presence of abrasives improves cleaning performance in the detergent. Eventually the surface dried with a dry cloth. If the infestation is very severe surface the cleaning process can then be repeated with biofilm.

Zur Überprüfung der Wirksamkeit der Mittel gegenüber Biofilmen wurden nach einer detaillierten Untersuchung von WC-Biofilmen entsprechende Testsysteme aufgebaut. Bislang war im Gegensatz zu industriellen Systemen die Struktur von Biofilmen auf Haushaltsoberflächen wenig erforscht. Während Finch et al. (J. Appl. Bacteriology, 45, 357–364, 1978) überwiegend gram-positive Micrococci und Bacilli im und am WC fanden, wurden von Scott et al. (J. Hygiene, 89, 279–293, 1982) überwiegend gram-negative Enterobacterien, daneben vereinzelt Pseudomonaden und Staphylococcen, bei ihrer Untersuchung des Hygienestatus von 250 Haushalten gefunden. Beide Untersuchungen bezogen sich jedoch weder thematisch noch durch die Art der Probenahme speziell auf die Haushaltsbiofilmen zugrundeliegenden Mikroorganismen. Mit einem anderen Probenahmesystem konnten Pitts et al. (Biofouling, 13, 19–30, 1998) in 3 Haushalten 50 verschiedene mikrobielle Isolate nachweisen, von denen einige gram-negativ waren (hierbei handelte es sich vor allem um Pseudomonaden), andere gram-positiv, einige konnten zudem nicht charakterisiert werden.To check the effectiveness of the funds across from Biofilms were made after a detailed study of toilet biofilms appropriate test systems set up. So far was contrary to industrial systems the structure of biofilms on household surfaces little explored. While Finch et al. (J. Appl. Bacteriology, 45, 357-364, 1978) predominantly Gram-positive Micrococci and Bacilli were found in and at the toilet by Scott et al. (J. Hygiene, 89, 279-293, 1982) predominantly gram-negative enterobacteria, besides isolated pseudomonas and staphylococci, in their study of the hygiene status of 250 households found. However, both studies related neither thematically nor by the type of sampling specifically microorganisms on which household biofilms are based. With a Pitts et al. (Biofouling, 13, 19-30, 1998) detect 50 different microbial isolates in 3 households, some of which were gram negative (this was before all about pseudomonas), others gram-positive, some could also cannot be characterized.

Da also die Zusammensetzung bakterieller Biofilme auf Haushaltsoberflächen bislang wenig erforscht war und die wenigen Forschungsergebnisse auch keine Aussage über etwaige Unterschiede zwischen Biofilmen auf Flächen in der Industrie und in Privathaushalten erlaubten, wurden zunächst Versuche zur Charakterisierung von WC-Biofilmen unternommen. Anhand der erhaltenen Ergebnisse wurden dann Modellbiofilme aus mehreren Mikroorganismen gezüchtet, die die tatsächlichen Verhältnisse auf Haushaltsoberflächen genauer widerspiegeln als die bislang meist untersuchten Biofilme aus einzelnen im Labor verfügbaren Bakterienstämmen. Diese Modellbiofilme wurden dann der Wirkung verschiedener Enzyme ausgesetzt.So since the composition is bacterial Biofilms on household surfaces Little research has been done so far and the few research results also no statement about any differences between biofilms on areas in industry and in Initially, attempts were made to characterize private households of toilet biofilms. Based on the results obtained then model biofilms grown from several microorganisms that the actual conditions on household surfaces reflect more precisely than the most examined biofilms so far from individual ones available in the laboratory Bacterial strains. These model biofilms were then subjected to the action of various enzymes exposed.

Charakterisierung von WC-Biofilmencharacterization of WC biofilms

Die Probenahme erfolgte durch mechanische Entfernung des Belags, der sich unter dem Toilettenrand befand, an verschiedenen WC-Standorten. Aus der Biomasse wurde die DNA direkt nach einer Standardmethode extrahiert (DNA Tissue Kit der Firma Qiagen, Hilden). Die vorliegenden 16 S-RNA-Genfragmente wurden mittels PCR-Methoden unter Einsatz zweier spezifischer Primer (mt12S/1: GTG GAT CCA GGA TTA GAT ACC C; SSU2: ACT GGT ACC TTG TTA CGA CTT) amplifiziert und in den Vektor pGEM-Teasy (Firma Promega) kloniert. Die Sequenziening der Fragmente einzelner Klone erfolgte nach Standardmethoden.Sampling was done by mechanical Removal of the covering that was under the edge of the toilet at different toilet locations. The DNA became direct from the biomass extracted by a standard method (DNA tissue kit from the company Qiagen, Hilden). The present 16 S-RNA gene fragments were analyzed using PCR methods using two specific primers (mt12S / 1: GTG GAT CCA GGA TTA GAT ACC C; SSU2: ACT GGT ACC TTG TTA CGA CTT) amplified and cloned into the vector pGEM-Teasy (Promega). The fragments of individual clones were sequenced using standard methods.

Die Identifizierung der Keime erfolgte nach Abgleich mit der Sequenzdatenbank BLAST N2.2.1. Die gefundenen Isolate sind in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1: Keime aus Haushaltstoiletten

The germs were identified after comparison with the sequence database BLAST N2.2.1. The isolates found are shown in Table 1. Table 1: Germs from household toilets

Aus dieser Tabelle geht hervor, daß die Diversität sehr groß war. Es wurden an beiden Standorten Vertreter aus fast allen taxonomischen Gruppen nachgewiesen.This table shows that the diversity was very large. It representatives from almost all taxonomic groups were represented at both locations Groups demonstrated.

Dabei wurden lediglich zwei Isolate doppelt gefunden. Die taxonomische Zuordnung der Isolate ergab sich wie folgt:
α-Proteobacterien: 9
β-Proteobacterien: 2
γ-Proteobacterien: 6
CFB-Gruppe: 3
Actinobakterien (Gram-positive): 7Only two isolates were found twice. The taxonomic classification of the isolates was as follows:
α-Proteobacteria: 9
β-proteobacteria: 2
γ-Proteobacteria: 6
CFB group: 3
Actinobacteria (Gram-positive): 7

Aufbau des TestsystemsStructure of the test system

Basierend auf der Erkenntnis, daß Haushalts- und WC-Biofilme offenbar nicht überwiegend aus Enterobakterien bestehen, sondern vielmehr eine breite Diversität bezüglich der Mikroorganismen aufweisen, wurde ein Biofilmtestsystem aufgebaut, das Vertreter aller taxonomisch relevanten Gruppen enthalten sollte. Dabei wurden möglichst Organismen verwendet, die als gute Biofilmbildner auftreten und zudem in definierter Form von Stammsammlungen bezogen werden können. So wurden Modellbiofilme mit einer Mischpopulation angezogen, bestehend aus:

Based on the knowledge that household and toilet biofilms do not appear to consist predominantly of enterobacteria, but rather have a broad diversity in terms of microorganisms, a biofilm test system was set up that should contain representatives of all taxonomically relevant groups. Where possible, organisms were used that appear as good biofilm formers and can also be obtained in a defined form from stem collections. Model biofilms with a mixed population, consisting of:

Anzucht der Stämme:
D. nishinomiyaensis, B. japonicum und X. campestris wurden in 50 ml Flüssigkultur (pro Liter 10 g Trypton, 5 g Hefeextrakt, 5 g NaCl) bei 30°C und 150 rpm für 16 h inkubiert. Angeimpft wurde mit einer Einzelkolonie von einer Agarplatte (pro Liter 10 g Trypton, 5 g Hefeextrakt, 5 g NaCl, 10 g Agarose).
A. commune wächst in 50 ml CASO-Medium (Merck) (pro Liter 17 g Pepton aus Casein, 3 g Pepton aus Soja, 5 g NaCl, 2,5 g D(+)-Glucose, 2,5 g di-Kaliumhydrogenphosphat), das 1:10 mit DGHM-Wasser (Deutsche Gesellschaft für Hygiene und Mikrobiologie, DIN 10511 (5,3 ml 6,71% CaCl₂·2H₂O-Lösung, 1,52 ml 10% MgSO₄·7H₂O-Lösung, 1000 ml H2O_bidest)) verdünnt wurde (Inkubation 2 Tage bei 28°C, 100 rpm). Angeimpft wurde mit einer Einzelkolonie von Plate Count-Agar.Cultivation of the strains:
D. nishinomiyaensis, B. japonicum and X. campestris were incubated in 50 ml liquid culture (10 g tryptone, 5 g yeast extract, 5 g NaCl per liter) at 30 ° C and 150 rpm for 16 h. Inoculation was carried out with a single colony from an agar plate (10 g tryptone, 5 g yeast extract, 5 g NaCl, 10 g agarose per liter).
A. commune grows in 50 ml CASO medium (Merck) (per liter 17 g peptone from casein, 3 g peptone from soybeans, 5 g NaCl, 2.5 g D (+) - glucose, 2.5 g di-potassium hydrogen phosphate ), the 1:10 with DGHM water (German Society for Hygiene and Microbiology, DIN 10511 (5.3 ml 6.71% CaCl ₂ .2H ₂ O solution, 1.52 ml 10% MgSO ₄ .7H ₂ O Solution, 1000 ml H2O _bidest )) was diluted (incubation for 2 days at 28 ° C, 100 rpm). The vaccination was carried out with a single colony of plate count agar.

Die optische Dichte (600 nm) der Kulturen nach 16 h betrug:
Dermacoccus nishinomiyaensis 7,2
Bradyrhizobium japonicum 6,6
Aquabacterium commune 0,33
Xanthomonas campestris 2,5The optical density (600 nm) of the cultures after 16 h was:
Dermacoccus nishinomiyaensis 7.2
Bradyrhizobium japonicum 6.6
Aquabacterium commune 0.33
Xanthomonas campestris 2.5

Anschließend wurden die Kulturen zusammengegeben, gemischt und mit 50% sterilem Glycerin versetzt, so daß die Endkonzentration 10% Glycerin betrug. Der Kultur-Mix wurde portioniert und bei –20°C eingefroren.Then the cultures were put together mixed and mixed with 50% sterile glycerol, so that the final concentration Was 10% glycerin. The culture mix was portioned and frozen at -20 ° C.

Die Anzucht des Biofilms erfolgte in 48 well- Mikrotiterplatten.The biofilm was grown in 48 well microtiter plates.

Je 750 μl TBY-Medium wurden mit je 75 μl der wie oben zubereiteten Mischung aus Biofilm produzierenden Kulturen pro well versetzt, die Platten wurden mit Airpore-Sheets (Qiagen) und Kunststoffdeckel verschlossen. Anschließend wurde bei 30°C und 60 rpm für 66 h inkubiert, der Überstand vorsichtig abgesaugt und die Platten bei Raumtemperatur mindestens 24h getrocknet.750 μl of TBY medium each with 75 μl of the like prepared mixture of biofilm producing cultures per well offset, the plates were covered with Airpore sheets (Qiagen) and Plastic lid closed. Then at 30 ° C and 60 rpm for Incubated for 66 h, the supernatant carefully vacuumed and the plates at room temperature at least 24h dried.

Diese Platten dienten als Substrat für die Untersuchung der enzymatischen Hydrolyse.These plates served as the substrate for the Investigation of enzymatic hydrolysis.

Hydrolyse von Biofilmen Nach der Trocknung wurde der Biofilm mit der enzymhaltigen Lösung inkubiert. Es wurden je 1 ml pro well bei einer Konzentration von 2,5 mg/ml bzw. 50 μl/ml bei Flüssigenzymen eingesetzt. Die Inkubation erfolgte bei 30°C und 450 rpm für 16 h entweder bei pH 4 (62 ml 0,1 M Citronensäure, 38 ml 0,2 M Na₂HPO₄·2H₂O, 0,02 % NaN₃) oder bei pH 7,4 (1 × PBS (Phosphate Buffered Saline, Gibco))(pro Liter 0,21 g KH₂PO₄, 9,00 g NaCl, 0,726 g Na₂HPO₄·7H₂O, 0,02 % NaN₃). Danach wurde der Überstand abgesaugt und einmal mit PBS pH 7,4 gewaschen. Nach dem Anfärben mit einer 0,01%igen Lösung von Safranin O (15 Minuten bei Raumtemperatur) wurde der Überstand erneut abgesaugt. Der Farbstoff wurde daraufhin 30 Minuten bei Raumtemperatur unter Schütteln (6C0 rpm) in Dimethylsulfoxid extrahiert; eine Extinktionsmessung erfolgte in der Mikrotiterplatte bei 492 nm.Hydrolysis of biofilms After drying, the biofilm was incubated with the enzyme-containing solution. 1 ml per well was used at a concentration of 2.5 mg / ml and 50 μl / ml for liquid enzymes. Incubation was carried out at 30 ° C. and 450 rpm for 16 h either at pH 4 (62 ml 0.1 M citric acid, 38 ml 0.2 M Na ₂ HPO ₄ .2H ₂ O, 0.02% NaN ₃ ) or at pH 7.4 (1 × PBS (Phosphate Buffered Saline, Gibco)) (per liter 0.21 g KH ₂ PO ₄ , 9.00 g NaCl, 0.726 g Na ₂ HPO ₄ .7H ₂ O, 0.02% NaN ₃ ). The supernatant was then suctioned off and washed once with PBS pH 7.4. After staining with a 0.01% solution of Safranin O (15 minutes at room temperature), the supernatant was suctioned off again. The dye was then extracted for 30 minutes at room temperature with shaking (6C0 rpm) in dimethyl sulfoxide; an absorbance measurement was carried out in the microtiter plate at 492 nm.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Angegeben sind die Extinktion E nach Inkubation eines Biofilms mit einem Enzym (E_lnk), die Extinktion bei einer Referenzplatte ohne Enzymbehandlung (E_Ref) und die prozentuale Entfernung des Biofilms bei den verschiedenen Enzymen. Bei pH 4 wurden Biofilmablösungen im Bereich von 9 bis 70% beobachtet, bei pH 7,4 wurden 11 bis 62% der Biofilme entfernt.The results are shown in Table 2. The extinction E after incubation of a biofilm with an enzyme (E _lnk ), the extinction for a reference plate without enzyme treatment (E _Ref ) and the percentage removal of the biofilm for the various enzymes are given. At pH 4, biofilm detachments in the range of 9 to 70% were observed, at pH 7.4, 11 to 62% of the biofilms were removed.

Bei den eingesetzten Enzymen handelte es sich um die folgenden: (Angegeben sind die Einsatzmengen pro ml Inkubationslösung. Die Angabe der Units bezieht sich auf die jeweiligen Herstellerangaben.)
Corolase^® PN-L (saure Protease, AB Enzymes, vormals Röhm Enzyme; E.C. 3.4.21.63) Einsatz je ml:15 Uhb
Dextranase 3F (ASA Enzyme; E.C. 3.2.1.11), Einsatz je ml: 1500 Units
Cellulase aus A. niger (Sigma C1184, E.C. 3.2.1.4) Einsatz je ml: 1.25 Units
Acid Xylanase P (AB Enzymes, E.C. 3.2.1.8) Einsatz je ml: 304 kUnits
Econase BG 300 (β-Glucanase, AB Enzymes, E.C. 3.2.1.6.) Einsatz je ml: 15 kUnits Tabelle 2: Entfernung von Biofilmen durch Enzyme

The enzymes used were the following: (The amounts used are per ml of incubation solution. The specification of the units relates to the respective manufacturer's information.)
Corolase ^® PN-L (acidic protease, AB Enzymes, formerly Röhm Enzyme; EC 3.4.21.63) Use per ml: 15 Uhb
Dextranase 3F (ASA Enzyme; EC 3.2.1.11), use per ml: 1500 units
Cellulase from A. niger (Sigma C1184, EC 3.2.1.4) Use per ml: 1.25 units
Acid Xylanase P (AB Enzymes, EC 3.2.1.8) Use per ml: 304 kUnits
Econase BG 300 (β-glucanase, AB Enzymes, EC 3.2.1.6.) Use per ml: 15 kUnits Table 2: Removal of biofilms by enzymes

Als besonders vorteilhaft erwiesen sich die Xylanase und die Glucanase bei pH 4 sowie die Corolase und wiederum die Glucanase bei pH 7,4Proved to be particularly advantageous the xylanase and the glucanase at pH 4 as well as the corolase and again the glucanase at pH 7.4

Eine weitere Steigerung läßt sich durch eine Kombination aus verschiedenen Enzymaktivitäten erzielen. Dabei können einerseits einzelne Enzyme gezielt miteinander gemischt werden, wodurch sich teilweise deutliche Leistungssteigerungen erzielen lassen, anderer seits sind aber auch kommerziell erhältliche Enzymgemische für den erfindungsgemäßen Einsatr geeignet. Beispielhaft sei hier das von der Firma Novozyme angebotene Viscozyme^® genannt, eine flüssige Enzymzubereitung aus Aspergillus sp., die aus verschiedenen Polysaccharidasen zusammengesetzt ist, u.a. aus Arabanase, Cellulase, β-Glucanase, Hemicellulase und Xylanase.A further increase can be achieved by a combination of different enzyme activities. On the one hand, individual enzymes can be mixed with one another in a targeted manner, which in some cases leads to significant increases in performance, but on the other hand, commercially available enzyme mixtures are also suitable for use according to the invention. An example is the Viscozyme ^® offered by Novozyme, a liquid enzyme preparation from Aspergillus sp., Which is composed of various polysaccharidases, including arabanase, cellulase, β-glucanase, hemicellulase and xylanase.

Untersuchung zur Stabilität in WC-ReinigerformulierungenInvestigation of the stability in toilet cleaner formulations

Es wurden verschiedene Reinigungsmittel hergestellt, die Enzyme zur Biofilmentfernung enthielten. (Angabe in % (w/v), Ausnahme gekennzeichnet)

Various cleaning agents were produced which contained enzymes for biofilm removal. (In% (w / v), exception marked)

Dabei handelte es sich bei E1 und E2 um flüssige WC-Reiniger, bei E3 um einen WC-Reiniger in Aerosolform, bei E4 um ein Badreiniger-Konzentrat und bei E5 um einen Badreiniger zur Dosierung mit einer Schaumpistole. Alle zeigten eine gute Reinigungsleistung und insbesondere eine gute Biofilmablösung.These were E1 and E2 for liquid Toilet cleaner, at E3 a toilet cleaner in aerosol form, with E4 a bath cleaner concentrate and with E5 a bath cleaner for dosing with a foam gun. All showed good cleaning performance and especially good Biofilm detachment.

Die Stabilität des Enzyms in der Reinigerformulierung wurde folgendermaßen bestimmt:
Zur Kontrolle wurde das Enzym einem 100mM Na-Phosphatpuffer (pH-Wert 7,0) in einer Konzentration von 2,5 % zugesetzt. Die Reinigerformulierungen bzw. Kontrolllösung wurden für jeweils 10 bzw. 30 Minuten bei 40°C inkubiert. Je 1 μl der Proben wurden an schließend im Aktivitätstest nach Del Mar et al. (Del Mar et al, 1979, Anal. Biochem. 99, 316-320) unter Verwendung des synthetischen Substrates AAPF (Ala-Ala-Pro-Phe-Nitroanilid) eingesetzt und die Aktivität gemessen in μmol/ml·min bestimmt.The stability of the enzyme in the detergent formulation was determined as follows:
As a control, the enzyme was added to a 100 mM Na phosphate buffer (pH 7.0) in a concentration of 2.5%. The cleaner formulations and control solution were incubated at 40 ° C. for 10 and 30 minutes, respectively. 1 μl each of the samples were then tested in the activity test according to Del Mar et al. (Del Mar et al, 1979, Anal. Biochem. 99, 316-320) using the synthetic substrate AAPF (Ala-Ala-Pro-Phe-nitroanilide) and the activity measured in μmol / ml · min.

Tabelle 3: Stabilität von Corolase in Reinigern (Angaben in μmol/ml·min)

Table 3: Stability of Corolase in cleaners (data in μmol / mlmin)

Claims

Enzyme preparation, characterized in that, in the absence of biocides, which are used to kill microorganisms causing biofilms, they can be used to remove biofilms from household surfaces.

Enzyme preparation according to claim 1, characterized in that she a system of one or more enzymes from the group polysaccharidase (Β-glucanase, Cellulase, xylanase, amylase, dextranase, glucosidase, galactosidase, Pectinase, chitinase, lysozyme, alginate lyase) and / or protease (Subtilisin, thermolysin, pepsin, carboxypeptidase, acid protease) and / or nuclease (DNAse, RNAse).

Biocide-free cleaning agent for hard surfaces characterized it for destruction and Removal of an enzyme preparation according to a biofilm of claims 1 and 2 contains.

Biocide-free cleaning agent, according to claim 3, characterized in that it contains the enzyme preparation in amounts of 0.1 to 10% by weight, preferably in amounts of 0.5 to 3% by weight.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 and 4, characterized in that the enzyme preparation consists of at least two enzymes.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 5, characterized in that it contains one or more surfactants.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 6, characterized in that it contains one or more surfactants, the selected are from the group of inorganic surfactants, non-ionic surfactants and ampholytic surfactants.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 7, characterized in that it contains one or more builders.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 8, characterized in that it is a or more acids and / or contains one or more alkalis.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 9, characterized in that there are one or more thickeners contains.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 10, characterized in that it is one or more solvents and / or solubilizers contains. 12. Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 11, characterized in that it contains one or more abrasives.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 12, characterized in that there are one or more others Contains auxiliaries and additives, preferably those selected are UV stabilizers, corrosion inhibitors, Cleaning boosters, Antistatic agents, perfumes, dyes, Pearlescent agents, opacifiers, Skin protection products and mixtures.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 13, characterized in that there is a pH between 1 and 6.5, particularly preferably between 2 and 4.5, in particular between 2.5 and 4.0.

Biocide-free cleaning agent according to one of claims 4 to 14, characterized in that it is at least two enzymes preferably around two polysaccharidases or one polysaccharidase a protease or a polysaccharidase with a nuclease.

liquid Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 15, characterized in that its viscosity up to 1000 mPas (20 ° C, Brookfield LVDV II, 20 rpm, spindle no.31).

gel-like or pasty Biocide-free cleaning agent according to one of claims 3 to 15, characterized in that its viscosity up to 150,000 mPas (20 ° C, Brookfield LVDV II, 20 rpm, spindle no.31).

Product containing an enzyme preparation according to the invention or a cleaning agent according to the invention and a spray dispenser, for dosing the cleaning agent according to the invention as an aerosol and / or as a foam.

Process for the hydrolysis of biofilms on hard surfaces in the household by incubation with an enzyme preparation according to a of claims 1 and 2 or treatment with a cleaning agent according to a of claims 3 to 17, optionally using a product according to claim 18, characterized in that the vitality the microbial cells are not sustainably damaged.

Process for the hydrolysis of biofilms on hard surfaces in the household, characterized in that the enzyme preparation according to the invention or the cleaning agent according to the invention, optionally using a product according to the invention, is applied to the surface covered with biofilm, optionally with a cloth, a sponge, a brush or another utensil suitable for cleaning is blurred or rubbed on the surface affected by biofilm and, if necessary after an exposure time of 1 to 30 minutes, a few hours or overnight, rinsed with clear water, after which the surface is dried with a dry cloth.

Use of an enzyme preparation according to a of claims 1 and 2 for destruction and removal of biofilms on household surfaces.

Use of an enzyme preparation according to a of claims 1 and 2 in a hard surface cleaner.

Use of a cleaning agent according to a of claims 3 to 17 or a product according to claim 18 for destruction and Removal of biofilms on household surfaces.

Product from a detergent according to a of claims 3 to 17 and a multi-chamber bottle.

Test system for the investigation of biofilm hydrolysis, characterized in that with a mixed population of representative Microorganisms that occur in household biofilms, a biofilm is grown incubated with the enzyme preparation to be examined and then with biochemical and optical methods on where appropriate hydrolysis is investigated.

Test system according to claim 25, characterized in that it one or more organisms of the genera Demiacoccus, Bradyrhizobium, Aquabacterium and Xanthomonas, especially the species Dermacoccus nishinomiyaensis, Bradyrhizobium japonicum, Aquabacterium commune and Xanthomonas campestris contains.