DE102019120667A1 - Dosierungsschema für BCMAxCD3 Antikörperkonstrukte - Google Patents

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Antikörperkonstrukt, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Verwendung bei der Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer bestimmten Dosis in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen bestimmten Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts umfasst. Darüber hinaus betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Behandlung eines BCMA-positiven Neoplasmas, umfassend die Verabreichung einer bestimmten Menge eines solchen Antikörperkonstrukts und die Verwendung eines solchen Antikörperkonstrukts zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines BCMA-positiven Neoplasmas.

Description

• Die vorliegende Erfindung betrifft ein Antikörperkonstrukt, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Verwendung bei der Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer bestimmten Dosis in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen bestimmten Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts umfasst. Darüber hinaus betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Behandlung eines BCMA-positiven Neoplasmas, umfassend die Verabreichung einer bestimmten Menge eines solchen Antikörperkonstrukts und die Verwendung eines solchen Antikörperkonstrukts zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines BCMA-positiven Neoplasmas.
• Hintergrund der Erfindung
• Das Multiple Myelom (MM) ist ein bösartiger Tumor von Plasmazellen, die sich im Knochenmark vermehren und para-Protein freisetzen. Die resultierenden klinischen Laborbilder schließen Infektion, Knochenzerstörung, Knochenmarkversagen, Nierenversagen und Hyperkalzämie ein. Die altersbereinigte jährliche Inzidenz steigt mit ungefähr 6 neuen Fällen pro 100.000. Die Inzidenz ist in der schwarzen US-Bevölkerung doppelt so hoch wie bei Kaukasiern. Die 5-Jahres-Überlebensrate für MM hat sich von ~ 25 % für neu diagnostizierte Patienten im Jahr 1975 auf ~ 45 % im Jahr 2006 erhöht. Diese Verbesserung ist hauptsächlich auf neue Medikamente wie Proteasom-Inhibitoren und Immunmodulatoren zurückzuführen. MM wird jedoch mit derzeitigen Ansätzen nicht als heilbar angesehen. Patienten, die auf Proteasom-Inhibitoren und Immunmodulatoren nicht ansprechen, zeigen ein ungünstiges Ergebnis mit einem mittleren Gesamtüberleben von 9 Monaten.
• Das Ergebnis ist besonders schlecht bei Risikopopulationen wie der Untergruppe mit de117p13-positivem MM. Obwohl viele Medikamente für MM in der klinischen Entwicklung sind, werden immer noch neue Behandlungsoptionen benötigt. Patienten mit symptomatischer Erkrankung werden zunächst mit einer primären Induktionstherapie gefolgt von einer hochdosierten Chemotherapie mit autologer Stammzellunterstützung bei in Frage kommenden Patienten behandelt. Patienten, die für eine intensive Behandlung in Frage kommen, werden nach Alter (65 bis 75 Jahre als Obergrenze), ohne Komorbiditäten und mit intakter Nierenfunktion bestimmt. Wenngleich dieses Schema das Überleben jüngerer und fitterer Patienten verbessert hat, überschreitet die mittlere Ansprechdauer 3 Jahre nicht, und nur wenige Patienten bleiben länger als 10 Jahre krankheitsfrei.
• Konsolidierungs- und Erhaltungsansätze wurden getestet, um die Tiefe und Dauer der Remission zu erhöhen. Da eine Erhaltungstherapie aufgrund fehlender Wirksamkeit oder Verträglichkeit eine Herausforderung darstellt, besteht immer noch die Möglichkeit, das Überlebensergebnis in der Transplantattherapie zu verbessern, indem neuartige Behandlungen zu Induktions-, Konsolidierungs- oder Erhaltungsschemata hinzugefügt werden. Patienten, die für eine Hochdosistherapie nicht in Frage kommen, erhalten gewöhnlich ähnliche Induktionsschemata wie die Transplantatkandidaten. Diese Therapien schließen den Proteasom-Inhibitor Bortezomib oder eine Kombination auf Melphalan-Basis mit Thalidomid ein. Das mittlere Gesamtüberleben (Overall Survival = OS) von Melphalan-Thalidomid-Prednison (MPT) bei älteren Patienten beträgt 40 Monate. Lenalidomid in Kombination mit Dexamethason ist das Standardschema für rezidiviertes/refraktäres MM, es kann jedoch vorkommen, dass bei für eine Transplantation nicht in Frage kommenden Patienten die Erstlinientherapie gewählt wird.
• Andere etablierte Schemata in der Rezidivsituation sind Wiederholungsinduktionsschemata oder auf Bortezomib oder Immunmodulator basierende Salvage-Kombinationen mit Alkylierungsmitteln. Eine Verbesserung des Ergebnisses (progressionsfreies Überleben (PFS) und OS) ist bei Patienten mit rezidivierter Krankheit erforderlich. Patienten, die auf etablierte Behandlungen und Fortschreiten der Behandlung nicht ansprechen, haben ein bedrückendes Ergebnis von 9 Monaten OS mit Behandlung und 3 Monaten ohne Behandlung. Der unerfüllte Bedarf ist bei diesen Patienten am höchsten.
• Bispezifische Moleküle wie BiTE^® (bispezifischer T-Zell-Engager) -Antikörperkonstrukte sind rekombinante Proteinkonstrukte mit einer Bindungsdomäne, die für ein ausgewähltes tumorassoziiertes Oberflächenantigen auf Zielzellen spezifisch ist, und einer zweiten Bindungsdomäne, die für CD3, eine Untereinheit des T-Zell-Rezeptorkomplexes auf T-Zellen spezifisch ist. BiTE^®-Antikörperkonstrukte sind auf einzigartige Weise geeignet, T-Zellen vorübergehend mit Zielzellen zu verbinden und gleichzeitig das inhärente zytolytische Potential von T-Zellen gegenüber Zielzellen wirksam zu aktivieren. Die erste Generation von BiTE^®-Antikörperkonstrukten (siehe WO 99/54440 und WO 2005/040220 ) wurde als AMG 103 (Blinatumomab, Anti-CD19 × Anti-CD3) und AMG 110 (Solitomab, Anti-EpCAM x Anti-CD3) in die Klinik gebracht. Blinatumomab, das für Patienten mit ALL zugelassen ist, wird über eine kontinuierliche intravenöse Infusion mit einer niedrigeren Anfangsdosis im ersten Verabreichungszeitraum und einer höheren Dosis in der verbleibenden Behandlung während des ersten Zyklus und in allen nachfolgenden Zyklen verabreicht. Bei einem Vergleich der Stufendosierung mit der konstanten (flachen) Dosierung als Mittel zum Erreichen der Zieldosis von Blinatumomab erwies sich die Stufendosierung als wirksamer bei der Abschwächung unerwünschter Ereignisse. In Anbetracht des positiven Wirksamkeitssignals und des günstigen Sicherheitsprofils wurde daher ein ähnliches Verabreichungsschema für Solitomab angewendet, das auch mit zunehmenden Dosen in jedem Zyklus verabreicht wurde. Eine wichtige Weiterentwicklung der ersten Generation von BiTE^®-Antikörperkonstrukten war die Bereitstellung von bispezifischen Antikörperkonstrukten, die an ein kontextunabhängiges Epitop am N-Terminus der CD3-epsilon-Kette von Mensch und Callithrix jacchus, Saguinus oedipus oder Saimiri sciureus ( WO 2008/119567 ) binden. Das erste BiTE^®-Molekül, das diese neue klinisch getestete CD3-Epsilon-Bindungsdomäne umfasste, war AMG 330. In Übereinstimmung mit den zuvor angewendeten Verabreichungsschemata, bei denen der Behandlungsbeginn mit einer niedrigeren Dosis vor der Eskalation auf die Zieldosis die Höhe der Zytokin-Erhöhung verringerte, wurde AMG 330 auch mit einem schrittweisen Dosierungsschema verabreicht. Unter der Verabreichung einer geringeren Dosis eines Anti-Ziel-x-Anti-CD3-Antikörperkonstrukts im ersten Dosierungsschritt wird als eine Einlaufphase oder Anpassungsphase verstanden, die Nebenwirkungen vermeiden oder begrenzen soll, die sich aus dem ersten Kontakt des Patienten mit dem Antikörperkonstrukt ergeben.
• Das B-Zell-Reifungs-Antigen (BCMA, TNFRSF17, CD269) ist ein Transmembranprotein, das zur TNF-Rezeptor-Superfamilie gehört. Die BCMA-Expression wird während der Plasmazelldifferenzierung im späten Stadium selektiv induziert und fehlt an naiven und Gedächtnis-B-Zellen. Wenn BCMA an seine Liganden, den B-Zell-Aktivierungsfaktor (BAFF) und einen die Proliferation induzierenden Liganden (APRIL) bindet, wird das Überleben der Knochenmark-Plasmazellen und Plasmablasten gefördert. BCMA behält keine normale B-Zell-Homöostase bei, ist jedoch für das Überleben langlebiger Plasmazellen erforderlich. Studien an BCMA-/-Mäusen zeigten, dass das Überleben langlebiger Knochenmarksplasmazellen beeinträchtigt war, die Entwicklung von B-Zellen und frühe humorale Immunantworten waren jedoch nicht von Wildtypmäusen zu unterscheiden. Die mRNA-Expression von BCMA ist bei malignen Plasmazellstörungen stark erhöht. Im Gegensatz dazu ist die mRNA-Expression in normalen Geweben sehr gering und auf lymphoide Gewebe beschränkt, in denen sich normale langlebige Plasmazellen befinden. Es wird berichtet, dass die BCMA-Proteinexpression nur auf Plasmazellen beschränkt ist. Die Expression von BCMA ist auf Plasmablasten und langlebige Plasmazellen beschränkt und kann an anderen normalen menschlichen Geweben nicht nachgewiesen werden. BCMA wird allgemein auf der Zelloberfläche von MM-Zellen und in relativ höheren Mengen auf malignen Plasmazellen als der in normalen Plasmazellen beobachteten Menge exprimiert. Es besteht keine Korrelation zwischen der BCMA-Expression und dem Stadium der MM-Erkrankung, dem Ansprechen auf die letzte Behandlung und dem Zeitpunkt ab Diagnose. Weder T-Zellen noch myeloide Zellen oder hämatopoetische CD34+-Stammzellen exprimieren BCMA. Die selektive Expression von BCMA macht es zu einem sehr attraktiven Ziel für Therapien auf der Basis von Antikörpern und chimären Antigenrezeptoren (CAR).
• Ausführliche Beschreibung der Erfindung
• AMG 420 (ehemals BI 836909) ist ein bispezifischer T-Zell-Engager, der sowohl an BCMA auf Zielzellen als auch an CD3-epsilon auf T-Zellen bindet. Es fungiert als Brücke zwischen MM-Zellen und zytotoxischen T-Lymphozyten (CTLs), indem es die zytolytische Aktivität von CTLs auf MM-Zellen richtet. AMG 420 besteht aus zwei variablen Einzelkettenfragmenten (scFv), von denen eines auf BCMA und das andere auf CD3 gerichtet ist. Jedes der scFv-Fragmente besteht aus einer VH- und einer VL-Domäne, die mit einem Glycin/Serin-Linker verbunden sind. Die zwei scFv-Fragmente sind auch mit einem Glycin/Serin-Linker verbunden.
• Die Erfinder stellten überraschenderweise fest, dass es für einen MM-Patienten im Fall des anti-BCMA-x-anti-CD3-Antikörperkonstrukts am vorteilhaftesten ist, dass die Zieldosis im Patientenserum ohne Verzögerung erreicht wird. Es wird angenommen, dass je schneller die Zieldosis beim Patienten erreicht wird, desto schneller das Ansprechen einsetzt. Dies kann durch das schnelle Einsetzen von CR in ALL, einem Tumor im Knochenmark, gezeigt werden, der von den T-Zellen leicht erreicht werden kann (Stackelberg et al. JCO 2016). Wenn es andererseits länger dauert, bis das Antikörperkonstrukt seine therapeutisch wirksame Dosis im Körper eines Patienten erreicht (z. B. aufgrund der schrittweisen Dosierung), scheint das Antikörperkonstrukt weniger effizient zu sein. Ohne an die Theorie gebunden sein zu wollen, glauben die Erfinder, dass dieses Phänomen mit der Expansion von T-Zellen und der Umverteilung von T-Zellen zusammenhängt.
• Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verabreichungsschema für ein Anti-BCMA-x-Anti-CD3-Antikörperkonstrukt bereitzustellen, das ein günstiges Sicherheits- und Verträglichkeitsprofil bereitstellt, während es zu einem positiven Wirksamkeitssignal führt.
• Die vorliegende Erfindung betrifft daher ein Antikörperkonstrukt, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Verwendung bei der Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen umfasst.
• Darüber hinaus betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas, umfassend das Verabreichen eines Antikörperkonstrukts, umfassend eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, an ein behandlungsbedürftiges Subjekt, wobei das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen umfasst.
• Die Erfindung betrifft ferner die Verwendung eines Antikörperkonstrukts, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen umfasst.
• Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines Antikörperkonstrukts, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen umfasst.
• Ein „Neoplasma“ ist ein abnormales Gewebewachstum, das üblicherweise, jedoch nicht immer, eine Masse bildet. Wenn es auch eine Masse bildet, wird es allgemein als „Tumor“ bezeichnet. Bei Hirntumoren führt die unkontrollierte Teilung von Zellen dazu, dass die Masse eines Neoplasmas an Größe zunimmt, was in einem begrenzten Raum wie der intrakraniellen Höhle schnell problematisch wird, da die Masse in den Raum des Gehirns eindringt und dieses zur Seite drückt, was zu einer Kompression des Gehirngewebes und erhöhtem Hirndruck und Zerstörung des Parenchyms führt. Erfindungsgemäß bezieht sich der Begriff „Neoplasma“ oder „Tumor“ auch auf einen Zustand, der von der Behandlung mit dem hier beschriebenen Antikörperkonstrukt profitieren würde. Dies schließt chronische und akute Störungen oder Erkrankungen ein, einschließlich jener pathologischen Zustände, die ein Säugetier für den fraglichen Zustand (Neoplasma oder Tumor) prädisponieren.
• Neoplasmen oder Tumoren können gutartig, potenziell bösartig (präkanzerös) oder bösartig (kanzerös) sein. Bösartige Neoplasmen/Tumoren werden häufig als Krebs bezeichnet. Sie dringen normalerweise in das umliegende Gewebe ein und zerstören es und können Metastasen bilden, d. h. sie breiten sich auf andere Teile, Gewebe oder Organe des Körpers aus. Ein „Primärtumor“ ist ein Tumor, der an der anatomischen Stelle wächst, an der das Fortschreiten des Tumors begann und sich fortsetzte, um eine Krebsmasse zu ergeben. Beispielsweise tritt ein Hirntumor auf, wenn sich abnormale Zellen im Gehirn bilden. Die meisten Krebsarten entwickeln sich an ihrer primären Stelle, bilden dann aber Metastasen oder breiten sich auf andere Körperteile (z. B. Gewebe und Organe) aus. Diese weiteren Tumoren sind Sekundärtumoren. Die meisten Krebsarten werden weiterhin nach ihrer primären Stelle benannt, auch nachdem sie sich auf andere Körperteile ausgebreitet haben.
• Lymphome und Leukämien sind hämatopoetische oder lymphoide Neoplasmen. Unter den Begriffen „Tumor“, „Krebs“ oder „Neoplasma“ im Sinne der vorliegenden Erfindung sind auch Lymphome und Leukämien zu verstehen. Das Lymphom ist eine Gruppe von Blutkrebsarten, die sich aus Lymphozyten (einer Art weißer Blutkörperchen) entwickeln. Leukämie ist eine Gruppe von Krebsarten, die normalerweise im Knochenmark beginnen und zu einer hohen Anzahl an abnormalen weißen Blutkörperchen führen. Diese weißen Blutkörperchen sind nicht vollständig entwickelt und werden als Blasten- oder Leukämiezellen bezeichnet. Lymphome und Leukämien gehören zu der breiteren Gruppe von Tumoren des hämatopoetischen und lymphoiden Gewebes.
• Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung können die Begriffe „Neoplasma“, „Tumor“ und „Krebs“ austauschbar verwendet werden und umfassen sowohl Primärtumoren/Krebsarten als auch Sekundärtumoren/Krebsarten (oder „Metastasen“) sowie Masse bildende Neoplasmen (Tumoren) und lymphoide Neoplasmen (wie Lymphome und Leukämien) sowie MRD.
• Der Begriff „minimale Resterkrankung“ (MRD) bezieht sich auf den Nachweis einer geringen Anzahl von Restkrebszellen, die nach der Krebsbehandlung im Patienten verbleiben, z. B. wenn sich der Patient in Remission befindet (der Patient keine Symptome oder Anzeichen einer Krankheit hat). Eine sehr kleine Anzahl verbleibender Krebszellen kann üblicherweise nicht routinemäßig nachgewiesen werden, da die Standardtests zur Beurteilung oder Erkennung von Krebs nicht empfindlich genug sind, um MRD zu erkennen. Heutzutage sind sehr empfindliche molekularbiologische Tests für MRD verfügbar, wie Durchflusszytometrie, PCR und Sequenzierung der nächsten Generation. Diese Tests können minimale Mengen an Krebszellen in Gewebeproben messen, die manchmal nur eine Krebszelle in einer Million normaler Zellen betragen. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung sollen die Begriffe „Vorbeugung“, „Behandlung“ oder „Besserung“ eines Neoplasmas auch „Vorbeugung, Behandlung oder Besserung einer MRD“ umfassen, unabhängig davon, ob die MRD nachgewiesen wurde oder nicht.
• Es ist vorgesehen, dass das BCMA-positive Neoplasma ein B-Zell-Neoplasma oder ein Plasma-Zell-Neoplasma ist. B-Zellen, auch als B-Lymphozyten bekannt, sind eine Art weißer Blutkörperchen des Lymphozyten-Subtyps. Sie wirken in der humoralen Immunitätskomponente des adaptiven Immunsystems durch die Sekretion von Antikörpern. Außerdem präsentieren B-Zellen Antigen (sie sind auch als professionelle Antigen-präsentierende Zellen klassifiziert) und sezernieren Zytokine. Bei Säugetieren reifen B-Zellen im Knochenmark, dem Kern der meisten Knochen. B-Zellen exprimieren im Gegensatz zu den beiden anderen Klassen von Lymphozyten - T-Zellen und natürliche Killerzellen (NK-Zellen) - B-Zell-Rezeptoren (BCRs) auf ihrer Zellmembran. BCRs ermöglichen der B-Zelle, an ein bestimmtes Antigen zu binden, gegen das sie eine Antikörperantwort initiiert. Plasmazellen, auch Plasma-B-Zellen, Plasmozyten oder Effektor-B-Zellen genannt, sind weiße Blutkörperchen, die große Mengen an Antikörpern ausscheiden. Sie werden normalerweise durch das Blutplasma und das Lymphsystem transportiert. Plasmazellen stammen aus dem Knochenmark. B-Zellen differenzieren in Plasmazellen, die Antikörpermoleküle produzieren, die den Rezeptoren der Vorläufer-B-Zelle eng nachempfunden sind. Sobald sie in das Blut und die Lymphe freigesetzt werden, binden diese Antikörpermoleküle an das Zielantigen und initiieren dessen Neutralisierung oder Zerstörung.
• Das Expressionsniveau von BCMA auf der Zelloberfläche kann z. B. durch Durchflusszytometrieanalyse bestimmt werden. Die für die Analyse der BCMA-Expression ausgewählte Subpopulation von Zellen (z. B. B-Zellen, Plasmazellen, MM-Zellen, CD138+-Zellen) kann z. B. mit einem Anti-BCMA-Antikörper gefolgt von einem sekundären Antikörper gefärbt und dann in einem FACS-Assay analysiert werden. Eine BCMA-negative Zelllinie (wie K562, A549, TC71, CCRF-CEM) kann als Kontrolle verwendet werden. Eine Verschiebung im FACS-Assay (wobei die BCMA-negative Zelllinie 0 % BCMA-Expression definiert) zeigt an, dass die zu analysierenden Zellen BCMA-positiv sind. Auf den Oberflächenzellen können verschiedene BCMA-Expressionsniveaus vorhanden sein, wie niedrige, mittlere oder hohe Expression. Siehe auch Quinn et al., Blood (2011) 117:890-901 und Sanchez et al., Br. J. Heamatol., 18. Juli. 2012.
• Das „BCMA-positive Neoplasma“ oder das „(BCMA-positive) B-Zell-Neoplasma oder Plasmazell-Neoplasma“ kann ausgewählt sein aus der Gruppe, die einschließt, jedoch nicht beschränkt ist auf multiples Myelom, rezidiviertes und/oder refraktäres multiples Myelom, schwerkettiges multiples Myelom, leichtkettiges multiples Myelom, extramedulläres Myelom (extramedulläres Plasmozytom, extramedulläres multiples Myelom), Plasmozytom, Plasmazell-Leukämie, Waldenström-Makroglobulinämie (lymphoplasmazytisches Lymphom) und schwelendes Myelom (schwelendes multiples Myelom). Die vorliegende Offenbarung betrifft daher auch ein Antikörperkonstrukt zur Verwendung bei der Behandlung oder Besserung von multiplem Myelom (MM), Plasmozytom, Plasmazellenleukämie und Waldenström-Makroglobulinämie, wie hierin beschrieben. Das MM kann ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus oder umfassend rezidiviertes und/oder refraktäres multiples Myelom, schwerkettiges multiples Myelom, leichtkettiges multiples Myelom, extramedulläres multiples Myelom und schwelendes multiples Myelom.
• Das Antikörperkonstrukt der Erfindung (und die pharmazeutische Zusammensetzung, die ein solches Antikörperkonstrukt umfasst) ist/sind nützlich bei der Behandlung, Besserung und/oder Vorbeugung des BCMA-positiven Neoplasmas, wie hierin beschrieben, bei einem behandlungsbedürftigen Subjekt. Der Begriff „Behandlung“ bezieht sich sowohl auf eine therapeutische Behandlung als auch auf prophylaktische oder vorbeugende Maßnahmen. Die Behandlung schließt die Verabreichung des Antikörperkonstrukts (oder der pharmazeutischen Zusammensetzung, die ein solches Antikörperkonstrukt umfasst) an den Körper des Patienten, an ein isoliertes Gewebe oder an eine Zelle von einem Patienten oder einem behandlungsbedürftigen Subjekt, das ein BCMA-positives Neoplasma wie hierin beschrieben, ein Symptom für ein solches Neoplasma oder eine Veranlagung für ein solches Neoplasma hat, mit dem Ziel, das BCMA-positive Neoplasma, ein oder mehrere Symptome des BCMA-positiven Neoplasmas oder die Veranlagung zur Krankheit zu heilen, wiederherzustellen, zu lindern, abzuschwächen, zu verändern, zu beheben, zu bessern, zu verbessern oder zu beeinflussen.
• Die Begriffe „behandlungsbedürftiges Subjekt“, „Patient“ oder „behandlungsbedürftig“ schließen solche ein, die bereits ein BCMA-positives Neoplasma haben, sowie solche, die sich in einer MRD-Situation befinden, und solche, bei denen das Neoplasma verhindert werden soll. Die Begriffe schließen auch Menschen und andere Säugetiere ein, die entweder prophylaktisch oder therapeutisch behandelt werden.
• Der Begriff „Besserung“, wie hier verwendet, bezieht sich auf eine beliebige Verbesserung des Krankheitszustands (wobei die Krankheit ein BCMA-positives Neoplasma ist) eines Patienten durch Verabreichung eines erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts an einen solchen Patienten oder ein behandlungsbedürftiges Subjekt. Eine solche Verbesserung kann als Verlangsamung oder Stoppen des Fortschreitens der Krankheit des Patienten und/oder als Abnahme der Schwere der Krankheitssymptome, Zunahme der Häufigkeit oder Dauer von krankheitssymptomfreien Perioden oder als Vorbeugung einer Beeinträchtigung oder Behinderung aufgrund der Krankheit betrachtet werden.
• Der Begriff „Prävention“, wie hier verwendet, bedeutet die Vermeidung des Auftretens oder des Wiederauftretens einer Krankheit, wie hierin spezifiziert, durch die Verabreichung eines erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts an ein behandlungsbedürftiges Subjekt.
• Beim Multiplen Myelom sind die Symptome und Zeichen sehr unterschiedlich, da viele Organe von der Krankheit betroffen sein können. Die häufigsten Symptome des multiplen Myeloms sind erhöhte Calciumspiegel, Nierenversagen, Anämie und Knochenläsion (zusammen als „CRAB“-Merkmale bezeichnet). Bei fortgeschrittenem MM können Knochenschmerzen, Blutungen und häufige Infektionen auftreten. Komplikationen können auch Amyloidose sein. Die Internationale Myelom-Arbeitsgruppe (IMWG) hat Kriterien für die Diagnose von MM festgelegt, die zusätzlich zu den klassischen CRAB-Merkmalen drei „myelomdefinierende Ereignisse"(MDEs) vermitteln:
• • 60 % oder mehr klonale Plasmazellen bei Knochenmarksuntersuchung
• • Verhältnis von an Serum beteiligter/nicht beteiligter freier leichter Kette von 100 oder mehr, mit der Maßgabe, dass der absolute Wert der beteiligten leichten Kette mindestens 100 mg/l beträgt (die „beteiligte“ freie leichte Kette eines Patienten - entweder kappa oder lambda - ist diejenige, die über dem normalen Referenzbereich liegt; die „nicht beteiligte“ freie leichte Kette ist diejenige, die typischerweise im oder unterhalb des normalen Bereichs liegt)
• • Mehr als eine fokale Läsion in der MRT, die mindestens 5 mm oder größer ist
Das Vorhandensein mindestens eines dieser Marker wird als ausreichend für die Diagnose eines multiplen Myeloms betrachtet, unabhängig vom Vorhandensein oder Fehlen von Symptomen oder CRAB-Merkmalen. Siehe auch Palumbo A. J Clin Oncol. 2014 Feb 20; 32(6): 587-600.
• Knochenschmerzen betreffen fast 70 % der Patienten und sind das häufigste Symptom. Es betrifft üblicherweise die Wirbelsäule und die Rippen. Die Beteiligung der Wirbel kann zu einer Kompression des Rückenmarks oder einer Kyphose führen. Die Myelomknochenerkrankung beruht auf der Überexpression des Rezeptoraktivators für den Kernfaktor κB-Liganden (RANKL) durch das Knochenmarksstroma. RANKL aktiviert Osteoklasten, die Knochen resorbieren. Die resultierenden Knochenläsionen sind in der Natur lytisch (d. h. sie verursachen einen Abbau) und sind am besten in einfachen Röntgenaufnahmen zu sehen. Der Abbau von Knochen führt auch zur Freisetzung von Calcium in das Blut, was zu einer Hyperkalzämie und den damit verbundenen Symptomen führt.
• Die bei Myelomen festgestellte Anämie ist üblicherweise normozytisch und normochrom. Sie resultiert aus dem Ersatz von normalem Knochenmark durch infiltrierende Tumorzellen und der Hemmung der normalen Produktion roter Blutkörperchen (Hämatopoese) durch Zytokine.
• Eine Knochenmarkbiopsie kann durchgeführt werden, um den Prozentsatz des von Plasmazellen eingenommenen Knochenmarks abzuschätzen. Dieser Prozentsatz wird in den Diagnosekriterien für MM verwendet. Normalerweise haben MM-Patienten ≥ 10 % klonale Knochenmarksplasmazellen. Die Immunhistochemie (Färben bestimmter Zelltypen unter Verwendung von Antikörpern gegen Oberflächenproteine) kann Plasmazellen nachweisen, die Immunglobulin im Zytoplasma und gelegentlich auf der Zelloberfläche exprimieren. Beispielsweise sind Myelomzellen typischerweise positiv für die Marker CD56, CD38, CD138, CD319, es können jedoch auch andere Marker enthalten sein, um MM zu definieren oder zu identifizieren.
• Das sogenannte „Paraprotein“ (auch als Myelomprotein, monoklonales Protein oder M-Protein bezeichnet) ist ein abnormales Immunglobulinfragment, das im Überschuss durch eine abnormale monoklonale Proliferation von Plasmazellen, typischerweise in MM, produziert wird. Theoretisch können MM-Patienten alle Klassen von Immunglobulin produzieren, wobei IgG-Paraproteine am häufigsten vorkommen, gefolgt von IgA und IgM, während IgD- und IgE-Myelome sehr selten sind. Außerdem können Antikörper-Leichtketten und/oder Schwerketten isoliert sezerniert werden: kappa- oder lambda-Leichtketten oder eine der fünf Arten von Schwerketten (alpha, gamma, delta, epsilon oder my (µ) - Schwerketten). Diese Proliferation des Paraproteins hat mehrere schädliche Auswirkungen auf den Körper, einschließlich beeinträchtigter Immunfunktion, ungewöhnlich hoher Blutviskosität und Nierenschäden. Patienten ohne Nachweis von Paraprotein haben möglicherweise ein „nichtsekretorisches“ Myelom (das keine Immunglobuline produziert); sie machen etwa 3 % aller MM-Patienten aus. Das Vorhandensein von Serum und/oder Urin-Paraprotein ist ein Indikator für MM, außer bei Patienten mit echtem nicht-sekretorischem MM. Quantitative Messungen des Paraproteins in Urin und/oder Serum eines Patienten können verwendet werden, um eine Diagnose zu erstellen und/oder die Krankheit zu überwachen.
• Nierenversagen kann sich sowohl akut als auch chronisch entwickeln. Die häufigste Ursache für Nierenversagen bei MM sind Proteine, die von bösartigen Zellen sezerniert werden. Myelomzellen produzieren monoklonale Proteine verschiedener Typen, am häufigsten Immunglobuline (Antikörper) und freie leichte Ketten, was zu abnormal hohen Spiegeln dieser Proteine (Paraproteine) im Blut führt. Abhängig von der Größe dieser Proteine können sie über die Nieren ausgeschieden werden, aber die Nieren können durch ihre Wirkung auch geschädigt werden. Darüber hinaus führt eine erhöhte Knochenresorption zu einer Hyperkalzämie und verursacht eine Nephrokalzinose, was zum Nierenversagen beiträgt.
• Die häufigsten Infektionen bei MM sind Lungenentzündung und Pyelonephritis. Das erhöhte Infektionsrisiko ist auf eine Immunschwäche zurückzuführen. Wenngleich der Gesamt-Immunglobulinspiegel in MM typischerweise erhöht ist, handelt es sich bei der Mehrzahl der Antikörper um unwirksame monoklonale Antikörper aus der klonalen Plasmazelle.
• Es ist vorgesehen, dass die Verabreichung des Antikörperkonstrukts bei der Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas gemäß der Erfindung
• • den Spiegel von Paraprotein oder freier leichter Kette im Urin und/oder Serum um mindestens ungefähr 20 %, mindestens ungefähr 30 %, mindestens ungefähr 40 %, mindestens ungefähr 50 %, mindestens ungefähr 60 %, mindestens ungefähr 70 %, mindestens ungefähr 80 % oder mindestens ungefähr 90 % relativ zum Spiegel von Paraprotein oder der freien leichten Kette im Urin bzw. im Serum vor Beginn der Behandlung, d. h. vor der ersten Verabreichung des Antikörperkonstrukts reduziert („vor“ bedeutet in diesem speziellen Zusammenhang innerhalb von 1, 2, 4, 6, 8 oder 12 Stunden vorher, innerhalb von 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 Tagen vorher, innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Wochen vorher oder innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Monaten vorher);
• • den Prozentsatz der Plasmazellen im Knochenmark um mindestens ungefähr 20 %, mindestens ungefähr 30 %, mindestens ungefähr 40 %, mindestens ungefähr 50 %, mindestens ungefähr 60 %, mindestens ungefähr 70 %, mindestens ungefähr 80 % oder mindestens ungefähr 90 % relativ zum Prozentsatz der Plasmazellen im Knochenmark vor Beginn der Behandlung, d. h. vor der ersten Verabreichung des Antikörperkonstrukts reduziert („vor“ bedeutet in diesem speziellen Zusammenhang innerhalb von 1, 2, 4, 6, 8 oder 12 Stunden vorher, innerhalb von 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 Tagen vorher, innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Wochen vorher oder innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Monaten vorher);
• • eine Verringerung eines der oben beschriebenen Symptome um mindestens ungefähr 20 %, mindestens ungefähr 30 %, mindestens ungefähr 40 %, mindestens ungefähr 50 %, mindestens ungefähr 60 %, mindestens ungefähr 70 %, mindestens ungefähr 80 % oder mindestens etwa 90 % relativ zu den Symptomen vor Beginn der Behandlung, d. h. vor der ersten Verabreichung des Antikörperkonstrukts induziert („vor“ bedeutet in diesem speziellen Zusammenhang innerhalb von 1, 2, 4, 6 , 8 oder 12 Stunden vorher, innerhalb von 1, 2, 3, 4, 5 oder 6 Tagen vorher, innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Wochen vorher oder innerhalb von 1, 2, 3 oder 4 Monaten vorher, je nach Symptom);
• • das Tumorwachstum oder die Proliferation von Tumorzellen um mindestens ungefähr 20 %, mindestens ungefähr 30 %, mindestens ungefähr 40 %, mindestens ungefähr 50 %, mindestens ungefähr 60 %, mindestens ungefähr 70 %, mindestens ungefähr 80 % oder mindestens ungefähr 90 % relativ zu unbehandelten Patienten oder relativ zu unbehandelten Zellen hemmt; und/oder
• • die Lyse der Zellen des BCMA-positiven Neoplasmas von mindestens ungefähr 20 %, mindestens ungefähr 30 %, mindestens ungefähr 40 %, mindestens ungefähr 50 %, mindestens ungefähr 60 %, mindestens ungefähr 70 %, mindestens ungefähr 80 % oder mindestens ungefähr 90 % relativ bei unbehandelten Patienten oder im Verhältnis zu unbehandelten Zellen induziert.
• Die Fähigkeit eines Antikörperkonstrukts der Erfindung, das Tumorwachstum/die Tumorzellproliferation zu hemmen oder die Zelllyse zu induzieren, kann in einem Tiermodell bewertet werden, das die Wirksamkeit bei menschlichen Tumoren vorhersagt, oder in einer In-vitro- oder Ex-vivo-Studie (z. B. Abreicherung BCMA-positiver Zellen durch autologe T-Zellen aus einem BM-Aspirat eines Patienten mit multiplem Myelom, das durch das Antikörperkonstrukt induziert wird). Wirksamkeitsbeurteilungen des Antikörperkonstrukts können ferner wie folgt durchgeführt werden: Die Beurteilung des Tumors kann durch Analyse der prozentualen Myelombeteiligung, durch FISH (Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung) sowie durch Karyotypisierung im Knochenmark (BM) erfolgen. Daten für die BM-Karyotypisierung und FISH können aus einer BM-Probe erhalten werden. Serumproteinelektrophorese (SPEP) und die Urinproteinelektrophorese (UPEP) ermöglichen eine Messung von Serum/Urin-M-Protein. Die Immunfixierung ist ein weiteres Mittel zum Nachweis von Serum- und/oder Urin-M-Protein. Es ist auch vorgesehen, dass ein serumfreier Leichtketten-Assay und eine Verhältnisanalyse durchgeführt werden können. Im Falle eines multiplen Myeloms mit freier leichter Kette (FLC) kann FLC in Serum und Urin (sFLC und uFLC) analysiert werden. Spiegel von beteiligter/unbeteiligter FLC, das Verhältnis von monoklonaler Lambda-FLC/Kappa-FLC und das Verhältnis von monoklonaler Kappa-FLC/Lambda-FLC können bestimmt werden. Darüber hinaus können auch quantitatives und qualitatives Immunglobulin (Ig) analysiert und Beta-2-Mikroglobulin im Serum beurteilt werden. Es ist auch vorgesehen, dass Skelettuntersuchungen und Plasmazytombeurteilungen durchgeführt werden können. Es kann ein Screening zur Bewertung eines extramedullären Rückfalls mittels Ganzkörper-MRT oder PET/CT durchgeführt werden. Die für die Beurteilung von Knochenläsionen geeignete Bildgebung schließt ein, ohne darauf beschränkt zu sein, CT-Scan, MRT, PET, PET-CT oder andere Standard-Behandlungsverfahren. Es ist auch vorgesehen, dass die minimale Resterkrankung durch einen auf Next Generation Sequencing (NGS) basierenden Assay gemessen wird. Zu diesem Zweck können Knochenmarkaspirate von Subjekten gesammelt werden, bei denen der Verdacht besteht, dass sie vollständig ansprechen. Außerdem können Plasmaproben zu den gleichen Zeitpunkten wie BM-MRD-Proben von einem Subjekt entnommen werden, um die Durchführbarkeit eines MRD-Nachweises auf ctDNA (zirkulierende Tumor-DNA) zu beurteilen. Die MRD-Antwort kann als <1 Tumorzelle / 10⁴ normale Zellen im Knochenmark per FACS unter Verwendung von Antikörpern gegen, je nach Bedarf, cytIgλ, cytIgκ, CD19, CD56 oder CD138, CD38 und CD45 definiert werden. In einer Ausführungsform der Erfindung sind diese Marker eine ausreichende Bedingung, um eine Tumorzelle im Kontext der vorliegenden Erfindung zu definieren.
• Es ist vorgesehen, dass die Reaktion eines Patienten oder Subjekts auf die Verabreichung des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts auf eine der folgenden Arten gemessen wird:
• • quantitative Messung des Paraproteins (M-Proteins) oder der freien leichten Kette im Urin und/oder Serum;
• • Bestimmung des Prozentsatzes der Plasmazellen im Knochenmark; und/oder
• • Bildgebung (CT, MRT) extramedullärer Manifestationen
• Das Antikörperkonstrukt der Erfindung wird für mindestens einen Zyklus verabreicht, es sind jedoch auch mehr Verabreichungszyklen wie 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 oder 10 Zyklen vorgesehen. Zum Beispiel wird eine Verabreichung von 1 bis 5 Zyklen als vorteilhaft für einen behandlungsbedürftigen Patienten betrachtet.
• Erfindungsgemäß umfasst „ein Zyklus“ einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche). Es ist ferner vorgesehen, dass ein Zyklus einen Zeitraum der Verabreichung des Antikörperkonstrukts umfasst, gefolgt von einem Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts („Behandlungsurlaub“, „Pause“ oder „Unterbrechung“). Wenn ein Patient nur einen einzigen Zyklus erhält, endet dieser Zyklus mit dem letzten Tag der Verabreichung des Antikörperkonstrukts. Wenn andererseits ein Patient mehr als einen Zyklus erhält, umfasst jeder Zyklus einen Verabreichungszeitraum, gefolgt von einem Zeitraum ohne Verabreichung. Der Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts („Pause“) ist durch seine Länge definiert, siehe unten. Es ist vorgesehen, dass, falls ein Patient mehr als einen Zyklus erhält (z. B. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 oder 10 Zyklen), der letzte Verabreichungszyklus keinen Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts umfasst (d. h. der letzte Zyklus endet mit dem letzten Tag der Verabreichung).
• Der Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts beträgt mindestens sieben aufeinanderfolgende Tage (eine Woche). Es ist vorgesehen, dass dieser Zeitraum bis zu acht Wochen beträgt. Es ist auch eine Dauer zwischen einer Woche und acht Wochen vorgesehen, beispielsweise zwei Wochen, drei Wochen, vier Wochen, fünf Wochen, sechs Wochen oder sieben Wochen, oder ein anderer Zeitraum zwischen einer Woche und acht Wochen, der sich aus einer bestimmten Anzahl von Wochen und einer bestimmten Anzahl von Tagen (z. B. ein, zwei, drei, vier, fünf oder sechs Tagen) zusammensetzt. Der Verabreichungszeitraum kann somit auch 7, 10, 14, 15, 20, 21, 25, 28, 30, 35, 40, 42, 45, 48 50, 55 oder 56 aufeinanderfolgende Tage betragen. Der Verabreichungszeitraum kann beispielsweise von 1 bis 8 Wochen, von 1 bis 7 Wochen, von 2 bis 6 Wochen, von 3 bis 5 Wochen oder von 25 bis 30 Tage betragen. Zum Beispiel wird eine Verabreichung von vier Wochen (d. h. 28 aufeinanderfolgenden Tagen) innerhalb eines Zyklus als vorteilhaft für einen behandlungsbedürftigen Patienten betrachtet. Unabhängig von seiner spezifischen Dauer ist vorgesehen, dass der Verabreichungszeitraum durch eine tägliche Verabreichung des Antikörperkonstrukts gekennzeichnet ist.
• Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung beträgt der Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts mindestens sieben aufeinanderfolgende Tage (eine Woche) und kann bis zu drei Monate betragen. Es ist auch eine beliebige Dauer zwischen einer Woche und drei Monaten vorgesehen, wie zwei Wochen, drei Wochen, vier Wochen, ein Monat, fünf Wochen, sechs Wochen, sieben Wochen, acht Wochen, zwei Monate, neun Wochen, zehn Wochen, elf Wochen, zwölf Wochen oder dreizehn Wochen oder ein beliebiger anderer Zeitraum zwischen einer Woche und drei Monaten, der sich aus einer bestimmten Anzahl von Monaten und/oder einer bestimmten Anzahl von Wochen und/oder einer bestimmten Anzahl von Tagen (z. B. eins, zwei, drei, vier, fünf oder sechs Tagen) zusammensetzt. Der Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts kann beispielsweise von 1 Woche bis 3 Monate, von 1 Woche bis 2 Monate, von 1 Woche bis 1 Monat, von 1 Woche bis 4 Wochen, von 1 Woche bis 3 Wochen, von 10 Tagen bis 20 Tage oder von 10 Tagen bis 15 Tage betragen. Zum Beispiel werden zwei oder drei Wochen ohne Verabreichung innerhalb eines Zyklus als besonders vorteilhaft für einen behandlungsbedürftigen Patienten betrachtet. Ab dem vierten Zyklus kann ein längerer Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts implementiert werden, beispielsweise ein Zeitraum von drei bis fünf Wochen oder vier Wochen.
• Gemäß einer Ausführungsform wird das Antikörperkonstrukt in einem bis fünf Zyklen, vorzugsweise vier oder fünf Zyklen verabreicht, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von zwei bis fünf Wochen (d. h. 14 bis 35 aufeinanderfolgende Tage), vorzugsweise vier Wochen (d. h. 28 aufeinanderfolgende Tage), gefolgt von einem Zeitraum ohne Verabreichung von ein bis vier Wochen, vorzugsweise zwei oder drei Wochen umfasst oder daraus besteht.
• Die verschiedenen Verabreichungszyklen, die ein Patient erhalten kann, müssen hinsichtlich der Länge des Verabreichungszeitraums des Antikörperkonstrukts und der Länge des Zeitraums ohne dessen Verabreichung nicht vollständig identisch sein. Infolgedessen ist auch die gesamte Länge der verschiedenen Zyklen nicht unbedingt identisch. Zum Beispiel kann die Länge des Verabreichungszeitraums zwischen den verschiedenen Zyklen variieren; er kann z. B. mit jedem Zyklus oder von einem Zyklus zum nächsten länger oder kürzer werden. Alternativ oder zusätzlich kann die Länge des Zeitraums ohne Verabreichung zwischen den verschiedenen Zyklen variieren; er kann z. B. mit jedem Zyklus oder von einem Zyklus zum nächsten länger oder kürzer werden. Dasselbe gilt für die Dosis des Antikörperkonstrukts, wie hierin nachstehend erläutert.
• Erfindungsgemäß wird das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/ Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche) umfasst. Dies bedeutet, dass das Antikörperkonstrukt für mindestens 7 aufeinanderfolgende Tage in einer Dosis zwischen und einschließlich 6,5 µg/Tag und 650 µg/Tag verabreicht wird. Die Dosis des Antikörperkonstrukts kann 6,5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600 oder 650 µg/Tag betragen. Gemäß einer Ausführungsform beträgt die Dosis ungefähr 400 µg/Tag. Eine bevorzugte Dosis oder ein bevorzugter Dosisbereich des Antikörperkonstrukts der Erfindung kann auch 6,5 bis 650 µg/Tag, 10 bis 600 µg/Tag, 20 bis 600 µg/Tag, 30 bis 600 µg/Tag, 40 bis 600 µg/Tag, 50 bis 600 µg/Tag, 60 bis 600 µg/Tag, 70 bis 600 µg/Tag, 80 bis 600 µg/Tag, 90 bis 600 µg/Tag, 100 bis 600 µg/Tag, 150 bis 650 µg/Tag, 200 bis 600 µg/Tag, 300 bis 600 µg/Tag, 250 bis 550 µg/Tag, 300 bis 550 µg/Tag, 300 bis 500 µg/Tag, 350 bis 450 µg/Tag, 350 bis 650 µg/Tag oder 400 bis 600 µg/Tag betragen. Es ist vorgesehen, dass diese Dosen für ein Antikörperkonstrukt mit einem Molekulargewicht von ungefähr 20 bis ungefähr 90 kDa, ungefähr 30 bis ungefähr 80 kDa, ungefähr 40 bis ungefähr 70 kDa, ungefähr 50 bis ungefähr 60 kDa, ungefähr 52 bis ungefähr 58 kDa und vorzugsweise etwa 54 bis etwa 56 kDa gelten können. Falls das Antikörperkonstrukt ein anderes (niedrigeres oder höheres) Molekulargewicht aufweist, können entsprechende äquimolare Dosen leicht bestimmt werden. Unter der Annahme, dass ein bevorzugtes erfindungsgemäßes Antikörperkonstrukt ein Molekulargewicht von 55 kDa aufweist, entsprechen beispielsweise 650 µg dieses Antikörperkonstrukts 1,18 × 10^-8 Mol. Gleichermaßen entsprechen 6,5 µg dieses Antikörperkonstrukts 1,18 × 10^-10 Mol.
• Es ist vorgesehen, dass das erfindungsgemäße Antikörperkonstrukt ein Molekulargewicht von ungefähr 20 bis ungefähr 90 kDa, ungefähr 30 bis ungefähr 80 kDa, ungefähr 40 bis ungefähr 70 kDa, ungefähr 50 bis ungefähr 60 kDa, ungefähr 52 bis ungefähr 58 kDa und vorzugsweise etwa 54 bis etwa 56 kDa hat. Es ist weiterhin vorgesehen, dass das erfindungsgemäße Antikörperkonstrukt eine terminale Eliminationshalbwertszeit oder eine Eliminationshalbwertszeit (T_1/2) von ungefähr 3 bis 36 h, ungefähr 6 bis 30 h oder ungefähr 12 bis 24 h aufweist. „Halbwertszeit“ ist die Zeit, die eine Menge benötigt, um ihren Anfangswert auf die Hälfte zu reduzieren. Die medizinischen Wissenschaften beziehen sich auf die Halbwertszeit von Stoffen oder Arzneimitteln im menschlichen Körper. In einem medizinischen Kontext kann sich die Halbwertszeit auf die Zeit beziehen, die ein Stoff/Arzneimittel benötigt, um die Hälfte seiner Aktivität, z. B. pharmakologischen, physiologischen oder radiologischen Aktivität zu verlieren. Die Halbwertszeit kann auch die Zeit beschreiben, die es dauert, bis die Konzentration eines Arzneimittels oder eines Stoffes im Blutplasma die Hälfte ihres stationären Werts erreicht („Eliminationshalbwertszeit“). Typischerweise bezieht sich die Eliminierung oder Entfernung eines verabreichten Stoffs/Arzneimittels auf die Reinigung des Körpers durch biologische Prozesse wie Metabolismus, Ausscheidung, die auch die Funktion der Nieren und der Leber betreffen. Der „First-Pass-Metabolismus“ ist ein Phänomen des Arzneimittelmetabolismus, bei dem die Konzentration eines Arzneimittels verringert wird, bevor es in den Kreislauf gelangt. Dies ist der Anteil des Arzneimittels, der während des Absorptionsprozesses verloren geht. Dementsprechend ist mit „Leber-First-Pass-Metabolismus“ die Neigung eines Arzneimittels gemeint, beim ersten Kontakt mit der Leber, d. h. während seines ersten Durchgangs durch die Leber, metabolisiert zu werden.
• Es ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/ Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche) umfasst und wobei die Dosis während jedes Zyklus konstant ist. Eine „konstante“ Dosis bedeutet, dass während des Verabreichungszeitraums innerhalb eines Zyklus dem Patienten jeden Tag die gleiche Dosis verabreicht wird. Es ist ferner vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mehr als einem Zyklus (z. B. von 1 bis zu 10 Zyklen) verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche) umfasst, wobei die Dosis während jedes Zyklus und von einem Zyklus zum nächsten Zyklus konstant ist. Dies könnte z. B. bedeuten, dass das Antikörperkonstrukt in den Zyklen 1 und 2, in den Zyklen 2 und 3, in den Zyklen 3 und 4, in den Zyklen 4 und 5, in den Zyklen 1 bis 3, in den Zyklen 2 bis 4, in den Zyklen 3 bis 5, in den Zyklen 1 bis 4, in den Zyklen 2 bis 5 oder in den Zyklen 1 bis 5 usw. in der gleichen Dosis verabreicht wird. Es ist ferner vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mehr als einem Zyklus (z. B. von 1 bis zu 10 Zyklen) verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche) umfasst und wobei die Dosis während jedes Zyklus konstant ist, jedoch zwischen den Zyklen verschieden ist. Beispielsweise kann die Dosis des Antikörperkonstrukts von einem Zyklus zum nächsten Zyklus zunehmen oder von einem Zyklus zum nächsten Zyklus abnehmen. Das Antikörperkonstrukt kann beispielsweise in einer Dosis von 400 µg/Tag während eines oder mehrerer Zyklen (wie dem ersten Zyklus oder dem ersten und zweiten Zyklus) und in einer Dosis von 500 µg/Tag oder 600 µg/Tag während eines oder mehrerer nachfolgender Zyklen (wie dem zweiten, dritten, vierten oder fünften Zyklus) verabreicht werden. Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen (einer Woche) umfasst und wobei die Dosis während mindestens eines Zyklus erhöht wird. Die Dosiserhöhung kann während des ersten Zyklus oder während des ersten und des zweiten Zyklus, aber auch während mehr als der ersten beiden Zyklen erfolgen. Die niedrigere Dosis kann über einen Zeitraum von 1 bis 7 Tagen, 1 bis 5 Tagen, 2 bis 4 Tagen oder 3 Tagen verabreicht werden, gefolgt von einer höheren Dosis, die bis zum Ende des Zyklus verabreicht wird. Beispielsweise kann die niedrigere Dosis 100 bis 300 µg/Tag oder 200 µg/Tag betragen, gefolgt von einer höheren Dosis von 350 bis 450 µg/Tag oder 400 µg/Tag; oder die niedrigere Dosis kann z. B. 300 bis 500 µg/Tag oder 400 µg/Tag betragen, gefolgt von einer höheren Dosis von 550 bis 650 µg/Tag oder 600 µg/Tag; oder die niedrigere Dosis kann 200 µg/Tag betragen, zum Beispiel während eines Zeitraums von 3 Tagen, zum Beispiel während des ersten Zyklus, gefolgt von einer höheren Dosis von 400 oder 600 oder 650 µg/Tag, die bis zum Ende des ersten Zyklus verabreicht wird. Im letzteren Fall ist vorgesehen, dass ab dem zweiten Zyklus die jeweils höhere Dosis verabreicht wird. Es ist vorgesehen, dass die höhere Dosis 650 µg/Tag nicht überschreitet.
• Das Antikörperkonstrukt der Erfindung ist im Allgemeinen für spezifische Verabreichungswege und - verfahren konzipiert. Ein Verabreichungsweg in der Pharmakologie ist der Weg, auf dem ein Stoff in den Körper aufgenommen wird. Verabreichungswege werden im Allgemeinen nach dem Ort klassifiziert, an dem der Stoff angewendet wird, wobei diese topisch (lokal), enteral (systemweite Wirkung des Stoffs, jedoch über den Magen-Darm-Trakt abgegeben) oder parenteral (systemische Wirkung des Stoffs, jedoch auf anderen Wegen als dem Magen-Darm-Trakt abgegeben) sein können. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung schließen die Verabreichungswege topische, enterale und parenterale Wege ein. Der Grund für die Wahl des Verabreichungsweges eines Arzneimittels wird von verschiedenen Faktoren bestimmt, wie:
• • Physikalische und chemische Eigenschaften des Arzneimittels. Die physikalischen Eigenschaften sind fest, flüssig und gasförmig. Die chemischen Eigenschaften sind Löslichkeit, Stabilität, pH-Wert, Reizwirkung usw.
• • Ort der gewünschten Wirkung: Die Wirkung kann lokalisiert und zugänglich oder generalisiert und nicht zugänglich sein.
• • Resorptionsrate des Arzneimittels auf verschiedenen Wegen.
• • Zustand des Patienten.
• Das Antikörperkonstrukt dieser Erfindung (und eine pharmazeutische Zusammensetzung, die dieses Antikörperkonstrukt umfasst) ist besonders nützlich für die parenterale Verabreichung. Die parenterale Verabreichung erfolgt im Allgemeinen schneller als die topische oder enterale Verabreichung und geht häufig mit einer sehr hohen Bioverfügbarkeit von bis zu 100 % einher (insbesondere bei intravenöser Verabreichung). Im Allgemeinen schließt die parenterale Verabreichung die intravenöse, intrazerebrale, intraarterielle, intraperitoneale, intraossäre und intravesikale Verabreichung ein, ist jedoch nicht darauf beschränkt.
• Die Verabreichung gemäß der vorliegenden Erfindung erfolgt vorzugsweise intravenös. Die parenterale oder intravenöse Verabreichung kann durch Injektion (z. B. mit einer Nadel und einer Spritze) oder durch Infusion (z. B. über einen Katheter und ein Pumpensystem) erfolgen. Es ist daher vorgesehen, dass die Verabreichung gemäß der vorliegenden Erfindung durch intravenöse Injektion oder durch intravenöse Infusion erfolgt. Üblicherweise wird eine IV-Infusion über eine Leitung, einen Port oder einen Katheter (kleiner, flexibler Schlauch), z. B. einen zentralvenösen Zugang oder einen zentralvenösen Katheter (CVC), bei dem es sich um einen in eine große Vene eingebrachten Katheter handelt, oder einen periphervenösen Katheter (PVC) verabreicht, bei dem es sich um einen Katheter handelt, der in eine periphere Vene eingeführt wird. Im Allgemeinen können Katheter oder Leitungen in Venen im Nacken (Vena jugularis interna), in der Brust (Vena subclavia oder Vena axillaris), in der Leiste (Vena femoralis) oder durch Venen in den Armen (auch als PICC-Leitung oder peripher eingesetzte Zentralkatheter bezeichnet) platziert werden. Bei zentralen IV-Leitungen werden die Katheter durch eine Vene vorgeschoben und münden in eine große zentrale Vene, normalerweise die obere Hohlvene, die untere Hohlvene oder sogar den rechten Herzvorhof. Eine periphere intravenöse (PIV) Leitung wird an peripheren Venen (den Venen in Armen, Händen, Beinen und Füßen) verwendet. Ein Port ist eine zentralvenöse Leitung ohne externen Anschluss. Stattdessen hat er einen kleinen Behälter, der mit Silikonkautschuk bedeckt ist und unter die Haut implantiert wird. Das Arzneimittel wird intermittierend verabreicht, indem eine kleine Nadel durch die Haut, das Silikon durchstechend, in den Behälter gestochen wird. Wenn die Nadel zurückgezogen wird, verschließt sich die Behälterabdeckung erneut von selbst. Die Abdeckung kann während ihrer Lebensdauer Hunderte von Nadelstichen aufnehmen.
• Die vorliegende Erfindung stellt eine Bolusverabreichung des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts bereit. Ein Bolus ist die Verabreichung einer diskreten Menge eines Medikaments, Arzneimittels oder einer anderen Verbindung innerhalb einer bestimmten vernachlässigbaren Zeit, im Allgemeinen innerhalb von 1 bis 30 Minuten. In den meisten Fällen wird der Bolus intravenös verabreicht. Ein Bolus wird üblicherweise durch Injektion verabreicht (z. B. eine intravenöse Bolusinjektion), jedoch ist eine Bolusinfusion (z. B. eine intravenöse Bolusinfusion) auch möglich. Eine Kurzinfusion ist eine Infusion (üblicherweise eine IV-Infusion) mit einem kleinen Volumen (beispielsweise 20 ml bis 100 ml), die über einen Zeitraum von höchstens drei Stunden, üblicherweise 30 bis 60 Minuten, verabreicht wird.
• Eine intravenöse „intermittierende Infusion“ ist eine Infusion eines Medikamentenvolumens über einen festgelegten Zeitraum, beispielsweise 20 bis 120 Minuten oder 30 bis 60 Minuten, in vorgeschriebenen Intervallen, wie alle 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 oder 24 Stunden. Der Zweck ist es, in regelmäßigen Abständen kleine Mengen von Medikamenten zu verabreichen. Ein intermittierendes Medikament kann - wie jede andere Form der Infusion - durch Schwerkraft oder über eine elektronische Infusionsvorrichtung (EID), auch Infusionspumpe genannt, verabreicht werden.
• Im Falle einer Infusion kann eine Infusionspumpe verwendet werden, um das Medikament (Antikörperkonstrukt) in das Kreislaufsystem eines Patienten zu infundieren. Die Pumpe wird im Allgemeinen intravenös verwendet, obwohl auch arterielle und epidurale Infusionen mit Pumpen möglich sind. Die Infusionslösung kann in Beuteln für die intravenöse Infusion hergestellt und über Infusionsleitungen abgegeben werden. Infusionspumpen können Flüssigkeiten auf eine Weise verabreichen, die bei manueller Ausführung unzuverlässig wäre. Zum Beispiel können sie Injektionen von nur 0,1 ml pro Stunde, Injektionen jede Minute, Injektionen mit wiederholten Boli bis zu einer maximalen Anzahl pro Stunde oder Flüssigkeiten, deren Volumen von der Tageszeit abhängt, verabreichen. Es ist auch möglich, dass Infusionen nur mit dem durch die Schwerkraft erzeugten Druck verabreicht werden. Verschiedene Arten von Infusionen gemäß der vorliegenden Erfindung schließen kontinuierliche Infusion, Bolusinfusion, Kurzinfusion und intermittierende Infusion ein, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein. Eine kontinuierliche intravenöse (cIV) Verabreichung oder Infusion ist eine bevorzugte Ausführungsform der Verabreichung des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts. Es ist beispielsweise vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt als cIV-Infusion mit einer konstanten Durchflussrate verabreicht wird.
• Die vorliegende Erfindung stellt eine kontinuierliche Verabreichung bereit, d. h. eine ununterbrochene oder im Wesentlichen ununterbrochene Verabreichung des Antikörperkonstrukts/der Zusammensetzung, die das Antikörperkonstrukt der Erfindung umfasst. Als nicht einschränkendes Beispiel kann dies durch ein kleines Pumpensystem realisiert werden, das vom Patienten getragen wird, um den Zufluss des Therapeutikums in den Körper des Patienten zu messen. Das Antikörperkonstrukt der Erfindung (oder eine pharmazeutische Zusammensetzung, die das Antikörperkonstrukt umfasst) kann unter Verwendung des Pumpensystems verabreicht werden. Solche Pumpensysteme sind im Stand der Technik allgemein bekannt und beruhen üblicherweise auf einem periodischen Austausch von Patronen, die das zu infundierende Therapeutikum enthalten. Beim Austausch der Kartusche in einem solchen Pumpensystem kann es zu einer vorübergehenden Unterbrechung des ansonsten ununterbrochenen Flusses des Therapeutikums in den Körper des Patienten kommen. In einem solchen Fall würden die Phase der Verabreichung vor dem Patronenwechsel und die Phase der Verabreichung nach dem Patronenwechsel immer noch als innerhalb der Bedeutung der pharmazeutischen Mittel und Verfahren der Erfindung betrachtet und würden zusammen eine „ununterbrochene Verabreichung“ eines solchen Therapeutikums ergeben. Gleiches gilt für Beutelwechsel, d. h. in Fällen, in denen die kontinuierliche Verabreichung mittels eines Beutels (anstelle kleiner Patronen) realisiert wird, der die Antikörperkonstruktlösung enthält, oder für eine beliebige andere Aufnahme oder Behälter, der das Antikörperkonstrukt der Erfindung zur kontinuierlichen Verabreichung enthält. Es ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der Erfindung in Infusionsbeuteln bereitgestellt wird. Diese Beutel werden gemäß den länderspezifischen Bestimmungen und den örtlichen Apothekenstandards für die Infusion von zusammengesetzten sterilen Produkten gewechselt, normalerweise bis zu 48 Stunden in den USA und bis zu 96 Stunden in Australien und Europa.
• Eine kontinuierliche oder ununterbrochene Verabreichung des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts kann mittels einer Flüssigkeitsabgabevorrichtung oder eines kleinen Pumpensystems mit einem Flüssigkeitsmechanismus zum Ausstoßen von Flüssigkeit aus einem Behälter und einem Betätigungsmechanismus zum Betätigen des Antriebsmechanismus durchgeführt werden. Pumpensysteme für eine solche Verabreichung können eine Nadel oder eine Kanüle zum Eindringen in die Haut eines Patienten und zum Abgeben der geeigneten Zusammensetzung in den Körper des Patienten einschließen. Das Pumpensystem kann für 24 Stunden bis zu mehreren Tagen auf der Haut des Patienten angebracht werden. Das Pumpensystem kann klein sein und einen Behälter für kleine Volumina aufweisen. Als nicht einschränkendes Beispiel kann das Volumen des Behälters für die geeignete zu verabreichende pharmazeutische Zusammensetzung zwischen 0,1 und 50 ml liegen.
• Die (tägliche) Dosis des Antikörperkonstrukts kann z. B. als Bolusgabe (Bolusinjektion oder Bolusinfusion), als Injektion, als kontinuierliche Verabreichung, als kontinuierliche Infusion oder als Kurzinfusion verabreicht werden. Eine kontinuierliche Verabreichung ist bevorzugt und eine kontinuierliche IV (cIV) -Verabreichung/kontinuierliche IV-Infusion ist am meisten bevorzugt.
• Pharmazeutische Zusammensetzungen können unter Verwendung einer medizinischen Vorrichtung verabreicht werden. Beispiele für medizinische Vorrichtungen zur Verabreichung von pharmazeutischen Zusammensetzungen sind in den US-Patenten Nr. 4,475,196 ; 4,439,196 ; 4,447,224 ; 4,447 , 233 ; 4,486,194 ; 4,487,603 ; 4,596,556 ; 4,790,824 ; 4,941,880 ; 5,064,413 ; 5,312,335 ; 5,312,335 ; 5,383,851 und 5,399,163 beschrieben.
• Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist vorgesehen, dass eine Prämedikation vor dem Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts im ersten Zyklus und wahlweise auch vor dem Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts in einem oder mehreren der folgenden Zyklen, wie dem zweiten, dritten, vierten und/oder fünften Zyklus verabreicht wird. Es ist vorgesehen, dass „vor“ in diesem speziellen Zusammenhang innerhalb von 24 Stunden, 18 Stunden, zwölf Stunden, sechs Stunden, fünf Stunden, vier Stunden oder drei Stunden und vorzugsweise innerhalb von 120, 90, 60 oder 30 Minuten vor Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts bedeutet. Die Prämedikation kann z. B. 30 bis 120 oder 30 bis 60 Minuten vor Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts verabreicht werden. Es ist auch vorgesehen, dass eine Begleitmedikation gleichzeitig mit oder nach Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts im ersten Zyklus und wahlweise auch gleichzeitig mit oder nach Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts in einem oder mehreren der folgenden Zyklen, wie dem zweiten, dritten, vierten und/oder fünften Zyklus verabreicht wird. Es ist vorgesehen, dass „nach“ in diesem speziellen Zusammenhang innerhalb von 24 Stunden, 18 Stunden, zwölf Stunden, sechs Stunden, fünf Stunden, vier Stunden oder drei Stunden und vorzugsweise innerhalb von 120, 90, 60, 30, 20, 15 oder 10 Minuten nach Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts bedeutet. Die Begleitmedikation kann z. B. 10 bis 120, 10 bis 60, 10 bis 30 oder 15 bis 20 Minuten nach Beginn der Verabreichung des Antikörperkonstrukts verabreicht werden. Der Zweck der Prämedikation oder der Begleitmedikation kann z. B. darin bestehen, die Schwere infusionsbedingter Reaktionen zu verhindern oder zu verringern. Die Prämedikation wird der Begleitmedikation vorgezogen.
• Die Prämedikation oder Begleitmedikation kann eine oder eine Kombination der folgenden einschließen:
• • Paracetamol (Acetaminophen, APAP) oder ein Äquivalent; vorzugsweise oral (p.o.) oder intravenös zu verabreichen; und vorzugsweise in einer Dosis von 100 bis 4000 mg, vorzugsweise 200 bis 3000 mg oder 300 bis 2500 mg oder 400 bis 2000 mg oder 500 bis 1500 mg, vorzugsweise 600 bis 1400 mg, 700 bis 1300 mg, 800 bis 1200 mg, 900 bis 1100 mg oder etwa 1000 mg p.o. Paracetamol (oder eine äquivalente Dosis für ein äquivalentes Medikament und/oder einen anderen Verabreichungsweg) zu verabreichen. Der Fachmann kann Paracetamol-Äquivalente identifizieren. Sie schließen ein, ohne beschränkt zu sein auf: Ibuprofen (zu verabreichen z. B. in einer Dosis von 100 bis 3200 mg, vorzugsweise 200 bis 3000 mg oder 300 bis 2500 mg oder 400 bis 2000 mg, vorzugsweise 500 bis 1500 mg, 600 bis 1200 mg, 700 bis 1000 mg, 750 bis 900 mg oder ungefähr 800 mg) und Metamizol (zu verabreichen z. B. in einer Dosis von 100 bis 4000 mg, vorzugsweise 200 bis 3000 mg oder 300 bis 2500 mg oder 400 bis 2000 mg oder ungefähr 500 mg bis 1000 mg)
• • Ein oder mehrere Analgetika, ausgewählt aus Meperidin, Dipyron, Hydromorphon, Fentanyl und Tramadol
• • Antihistaminikum, vorzugsweise oral oder intravenös zu verabreichen und vorzugsweise in einer Dosis zu verabreichen, die Diphenhydramin 50 mg i.v. entspricht Der Fachmann kann Antihistaminika identifizieren. Sie schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf: Antihistaminika auf oralem, parenteralem oder rektalem Weg wie: Azatadin (Maximaldosis z. B. 4 mg/Tag), Brompheniramin (Maximaldosis z. B. 30 mg/Tag), Cetirizin (Maximaldosis z. B. 15 mg/Tag), Chlorpheniramin (Maximaldosis z. B. 30 mg/Tag), Clemastin (Maximaldosis z. B. 10 mg/Tag), Cyproheptadin (Maximaldosis z. B. 15 mg/Tag), Desloratadin (Maximaldosis z. B. 7 mg/Tag), Dexchlorpheniramin (Maximaldosis z. B. 15 mg/Tag, Diphenhydramin (Maximaldosis z. B. 350 mg/Tag), Doxylamin (Maximaldosis z. B. 180 mg/Tag), Fexofenadin (Maximaldosis z. B. 200 mg/Tag), Loratadin (Maximaldosis z. B. 15 mg/Tag), Phenindamin (Maximaldosis z. B. 180 mg/Tag)
• • Glucocorticoid, vorzugsweise oral oder intravenös zu verabreichen und vorzugsweise in einer Dosis zu verabreichen, die 4 bis 20 mg oder 6 bis 18 mg or 8 bis 16 mg or 16 mg Dexamethasone i.v. entspricht (die Äquivalenz bezieht sich auf die Glucocorticoid-Wirkungsstärke)
• Alle vier oben aufgeführten Stoffe oder Stoffgruppen können als Prämedikation oder Begleitmedikation oder als Kombination von nur zwei oder drei Stoffen oder nur einer der vier Stoffe verabreicht werden. Es ist vorgesehen, dass die vor Beginn des zweiten Zyklus verabreichte Glucocorticoid (GC) -Dosis mit der vor Beginn des ersten Zyklus verabreichten GC-Dosis identisch oder auf etwa 50 % der vor Beginn des ersten Zyklus verabreichten Dosis reduziert sein kann oder für den zweiten (und möglicherweise nachfolgenden) Zyklus weggelassen werden kann. Eine Reduzierung der GC-Dosierung kann z. B. dann erfolgen, wenn das erfindungsgemäße Antikörperkonstrukt im ersten Zyklus ohne signifikante Anzeichen von infusionsbedingten Reaktionen gut verträglich ist. Es ist ferner vorgesehen, dass die Dosis vor Beginn des dritten und jedes nachfolgenden Zyklus weiter reduziert werden kann. Während GC als Prämedikation (und möglicherweise als Begleitmedikation) vor Beginn des ersten Zyklus verabreicht wird, wird alternativ keine GC-Prämedikation oder Begleitmedikation im zweiten, dritten, vierten und/oder fünften Zyklus verabreicht. Im Allgemeinen hängt die Dosis der Prämedikation oder Begleitmedikation, die gemäß den Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung verwendet werden soll, von den Umständen des einzelnen Patienten ab.
• Glucocortocoide sind eine Klasse von Corticosteroiden, die eine Klasse von Steroidhormonen sind. Glucocorticoide sind Corticosteroide, die an den Glucocorticoidrezeptor binden. Ein selteneres Synonym ist Glucocorticosteroid. Cortisol (bekannt als Hydrocortison, wenn es als Medikament verwendet wird) ist das wichtigste menschliche Glucocorticoid. Eine Vielzahl synthetischer Glucocorticoide, von denen einige weitaus wirksamer als Cortisol sind, wurden für therapeutische Zwecke entwickelt. Sie unterscheiden sich sowohl in der Pharmakokinetik (z. B. Absorptionsfaktor, Halbwertszeit, Verteilungsvolumen, Clearance) als auch in der Pharmakodynamik (z. B. Glucocorticoid- oder Mineralokortikoid-Wirkungsstärke). Cortisol ist der Vergleichsstandard für die Glucocorticoid-Wirkungsstärke. Ein Beispiel für häufig verschriebene Ersatzsteroidäquivalente kann Prednison (5 mg) = Cortison (25 mg) = Dexamethason (0,75 mg) = Hydrocortison (20 mg) = Methylprednisolon (4 mg) sein. Diese Dosen geben die äquivalente pharmakologische Dosis von systemischen Glucocorticoiden an. Eine weitere Corticosteroid-Vergleichstabelle, die die Halbwertszeiten der verschiedenen Stoffe angibt, sind unter www.nadf.us/downloads/adrenalhormone.pdf zu finden.
• Beispiele für GCs, die in der vorliegenden Ausführungsform als Prämedikation oder Begleitmedikation verwendet werden sollen, schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf: Cortison, Hydrocortison, Prednison, Prednisolon, Methylprednisolon, Dexamethason, Betamethason, Beclomethason, Budesonid, Triamcinolon, Cloprednol, Deflazacort, Fluocortolon, Cortivazol, Paramethason, Fluticason, Fluticasonpropionat, Triamcinolonacetonid sowie Kombinationen und/oder pharmazeutisch verträgliche Derivate davon. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung können die verschiedenen GCs allein oder in Kombination verwendet werden. Dexamethason, Prednison und Prednisolon sind bevorzugte Ausführungsformen von GCs.
• Es ist vorgesehen, dass alle Stoffe, die bereits als „Glucocorticoid“ klassifiziert sind oder werden, auch im Rahmen der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden können. Solche zukünftigen Glucocorticoide schließen Verbindungen ein, die spezifisch an den Glucocorticoidrezeptor binden und diesen aktivieren. Der Begriff „bindet spezifisch an den GC-Rezeptor“ bedeutet in Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung, dass das GC (oder eine Verbindung, von der angenommen wird, dass sie wie ein GC wirkt) mit dem GC-Rezeptor (auch bekannt als NR3C1) in einem statistisch signifikanten Ausmaß im Vergleich zur Assoziation mit Proteinen/Rezeptoren im Allgemeinen (d. h. unspezifische Bindung) assoziiert (z. B. interagiert). Wenn der GC-Rezeptor an Glucocorticoide bindet, ist sein Hauptwirkungsmechanismus die Regulierung der Gentranskription. In Abwesenheit von GC befindet sich der Glucocorticoidrezeptor (GR) im Cytosol, das mit einer Vielzahl von Proteinen, einschließlich Hitzeschockprotein 90 (hsp90), Hitzeschockprotein 70 (hsp70) und dem Protein FKBP52 (FK506-bindendes Protein 52) komplexiert ist. Die Bindung des GC an den Glucocorticoidrezeptor führt zur Freisetzung der Hitzeschockproteine. Es ist daher vorgesehen, dass ein zukünftiges GC oder ein pharmazeutisch verträgliches Derivat oder Salz eines GC in der Lage ist, an den GC-Rezeptor zu binden und die oben erwähnten Hitzeschockproteine freizusetzen. Der aktivierte GR-Komplex reguliert dann die Expression entzündungshemmender Proteine im Zellkern hoch oder unterdrückt die Expression entzündungsfördernder Proteine im Zytosol, indem er die Translokation anderer Transkriptionsfaktoren vom Zytosol in den Zellkern verhindert.
• Das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung umfasst eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet.
• Der Begriff „Antikörperkonstrukt“ bezieht sich auf ein Molekül, bei dem die Struktur und/oder Funktion auf der Struktur und/oder Funktion eines Antikörpers, z. B. eines Immunglobulinmoleküls voller Länge basiert/basieren. Ein Antikörperkonstrukt bindet daher immunspezifisch an sein Ziel oder Antigen und/oder umfasst Domänen, die von der variablen Region der schweren Kette (VH) und/oder der variablen Region der leichten Kette (VL) eines Antikörpers abgeleitet sind oder diese sind. Weiterhin umfasst ein erfindungsgemäßes Antikörperkonstrukt die minimalen strukturellen Anforderungen eines Antikörpers, die eine immunspezifische Zielbindung ermöglichen. Diese Mindestanforderung kann z. B. definiert sein durch das Vorhandensein von mindestens drei Leichtketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VL-Region) und/oder drei Schwerketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VH-Region), vorzugsweise von allen sechs CDRs.
• Unter die Definition von „Antikörper“ fallen erfindungsgemäß Antikörper voller Länge, einschließlich Kamelidantikörpern und anderer Immunglobuline, die durch biotechnologische oder Protein-Engineering-Verfahren oder -Prozesse erzeugt werden. Diese Antikörper in voller Länge können beispielsweise monoklonale, rekombinante, chimäre, deimmunisierte, humanisierte und menschliche Antikörper sowie Antikörper von anderen Spezies wie Maus, Hamster, Kaninchen, Ratte, Ziege oder nicht-menschliche Primaten sein.
• „Antikörperkonstrukte“ der vorliegenden Erfindung können die allgemeine Struktur eines Immunglobulins voller Länge aufweisen, wie es natürlich vorkommt. Beispielsweise können sie (mindestens) zwei schwere Antikörperketten voller Länge und zwei leichte Antikörperketten voller Länge umfassen. Da die erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukte jedoch eine Domäne, die an BCMA bindet, und eine andere Domäne, die an CD3 bindet, umfassen, kommen sie nicht natürlich vor und unterscheiden sich in ihrer Funktion deutlich von natürlich vorkommenden Produkten. Ein Antikörperkonstrukt der Erfindung ist daher ein künstliches „Hybrid“-Molekül, das mindestens zwei unterschiedliche Bindungsdomänen mit unterschiedlichen Spezifitäten umfasst.
• „Antikörperkonstrukte“ der vorliegenden Erfindung können auch Fragmente von Antikörpern voller Länge umfassen, wie VH, VHH, VL, (s)dAb, Fv, leichte Kette (VL-CL), Fd (VH-CH1), schwere Kette, Fab, Fab', F(ab')₂ oder „r IgG“ („halber Antikörper“, bestehend aus einer schweren Kette und einer leichten Kette). Erfindungsgemäße Antikörperkonstrukte können auch modifizierte Fragmente von Antikörpern, auch Antikörpervarianten oder Antikörperderivate genannt, umfassen. Beispiele schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf: scFv, di-scFv oder bi(s)-scFv, scFv-Fc, scFv-Reißverschluss, scFab, Fab₂, Fab₃, Diabodies, Einzelkettendiabodies, Tandemdiabodies (Tandab's), Tandem-di-scFv, Tandem-tri-scFv, „Minibodies“, die durch eine Struktur veranschaulicht werden, die wie folgt lautet: (VH-VL-CH3)₂, (scFv-CH3)₂, ((scFv)₂-CH3 + CH3), ((scFv)₂-CH3) oder (scFv-CH3-scFv)₂, Multibodies wie Triabodies oder Tetrabodies und Einzeldomänen-Antikörper wie Nanobodies oder Einzel-Variabel-Domänen-Antikörper, die lediglich eine variable Region umfassen, die VHH, VH oder VL sein kann und die unabhängig von anderen variablen Regionen oder Domänen spezifisch an ein Antigen oder Ziel bindet. Weitere mögliche Formate der erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukte sind Crossbodies, Maxibodies, Hetero-Fc-Konstrukte, Mono-Fc-Konstrukte und scFc-Konstrukte.
• Ferner schließt die Definition des Begriffs „Antikörperkonstrukt“ zweiwertige und polyvalente/mehrwertige Konstrukte ein, die spezifisch an zwei, drei oder mehr antigene Strukturen durch unterschiedliche Bindungsdomänen binden. Ein Antikörperkonstrukt kann daher mehr Bindungsvalenzen als Spezifitäten aufweisen, z. B. in einem Fall, in dem es zwei Bindungsdomänen für das erste Ziel (BCMA) und eine Bindungsdomäne für das zweite Ziel (CD3) aufweist - oder umgekehrt - in welchem Fall das Konstrukt dreiwertig und bispezifisch ist. Darüber hinaus schließt die Definition des Begriffs „Antikörperkonstrukt“ Moleküle ein, die nur aus einer Polypeptidkette bestehen, sowie Moleküle, die aus zwei, drei, vier oder mehr Polypeptidketten bestehen, wobei diese Ketten entweder identisch sein können (Homodimere, Homotrimere oder Homooligomere) oder verschieden (Heterodimer, Heterotrimer oder Heterooligomer). Beispiele für die oben identifizierten Antikörper und deren Fragmente, Varianten, Derivate und davon abgeleitete Antikörperkonstrukte sind unter anderem beschrieben in Harlow and Lane, Antibodies: A laboratory manual, CSHL Press (1988); Kontermann und Dübel, Antibody Engineering, Springer, 2. Ausgabe 2010; und Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy, Cambridge University Press 2009. Es ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt ein Einzelketten-Antikörperkonstrukt/ein Einzelketten-Polypeptid ist.
• Der Begriff „Bindungsdomäne“ oder „Domäne, die an ... bindet“ kennzeichnet im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung eine Domäne des Antikörperkonstrukts, die an ein bestimmtes Epitop auf dem Ziel oder Antigen immunspezifisch bindet/mit diesem interagiert/ dieses erkennt (hier: BCMA bei der ersten Domäne und CD3 bei der zweiten Domäne). Die Struktur und Funktion der ersten Domäne (Bindung an BCMA) und vorzugsweise auch die Struktur und/oder Funktion der zweiten Domäne (Bindung an CD3) basiert auf der Struktur und/oder Funktion eines Antikörpers, z. B. ein Immunglobulinmolekül voller Länge. Die „Bindungsdomäne“ oder „Domäne, die an ... bindet“ kann somit die minimalen strukturellen Anforderungen eines Antikörpers umfassen, die eine immunspezifische Zielbindung ermöglichen. Diese minimale Anforderung der ersten Domäne kann z. B. definiert sein durch das Vorhandensein von mindestens drei Leichtketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VL-Region) und/oder drei Schwerketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VH-Region), vorzugsweise von allen sechs CDRs. Es ist vorgesehen, dass die zweite Domäne auch diese strukturelle minimale Anforderung eines Antikörpers umfasst, die die immunspezifische Zielbindung ermöglicht. Vorzugsweise umfasst die zweite Domäne auch mindestens drei Leichtketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VL-Region) und/oder drei Schwerketten-CDRs (d. h. CDR1, CDR2 und CDR3 der VH-Region), vorzugsweise alle sechs CDRs. Eine „Domäne, die an ... bindet“ (oder eine „Bindungsdomäne“), kann typischerweise eine variable Region der leichten Kette (VL) und eine variable Region der schweren Kette (VH) des Antikörpers umfassen; sie muss jedoch nicht beide umfassen, sondern kann nur eines von VH oder VL umfassen. Beispielsweise behalten Fd-Fragmente häufig eine Antigen-Bindungsfunktion der intakten Antigen-Bindungsdomäne bei.
• Beispiele für das Format einer „Domäne, die an ...bindet“, (oder einer „Bindungsdomäne“) schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf Antikörper von voller Länge, Fragmente von Antikörpern von voller Länge (wie VH, VHH, VL), (s)dAb, Fv, leichte Kette (VL-CL), Fd (VH-CH1), schwere Kette, Fab, Fab', F(ab')₂ oder „r IgG“ („halber Antikörper“), Antikörpervarianten oder -derivate wie scFv, di-scFv oder bi(s)-scFv, scFv-Fc, scFv-Zipper, scFab, Fab₂, Fab₃, Diabodies, Einketten-Diabodies, Tandem-Diabodies (Tandab's), Tandem-di-scFv, tandem-tri-scFV, „Minibodies“ (ausgewählt aus Formaten wie (VH-VL-CH3)₂, (scFv-CH3)₂, ((scFv)₂-CH3 + CH3)), ((scFv)₂-CH3) oder (scFv-CH3-scFv)₂, Multibodies wie Triabodies oder Tetrabodies und Einzeldomänen-Antikörper wie Nanobodies oder Einzel-Variable-Domänen-Antikörper, die lediglich eine variable Region umfassen, die VHH, VH oder VL sein kann. Weitere Beispiele für das Format einer „Domäne, die an ...bindet“, (oder einer „Bindungsdomäne“) schließen ein: (1) ein Antikörperfragment oder eine Variante, umfassend VL, VH, CL und CH1 (wie Fab); (2) ein Antikörperfragment oder eine Variante, umfassend zwei verknüpfte Fab-Fragmente (wie ein F(ab')₂); (3) ein Antikörperfragment oder eine Variante, umfassend VH und CH₁ (wie Fd); (4) ein Antikörperfragment oder eine Variante, umfassend VL und CL (wie die leichte Kette); (5) ein Antikörperfragment oder eine Variante, umfassend VL und VH (wie Fv); (5) ein dAb-Fragment (Ward et al., (1989) Nature 341 :544-546), das eine VH-Domäne aufweist; (6) eine Antikörpervariante, umfassend mindestens drei isolierte CDRs der schweren und/oder der leichten Kette; und (7) ein Einzelketten-Fv (scFv). Beispiele für Ausführungsformen von erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukten oder Bindungsdomänen sind z. B. in WO 00/006605 , WO 2005/040220 , WO 2008/119567 , WO 2010/037838 , WO 2013/026837 , WO 2013/026833 , US 2014/0308285 , US 2014/0302037 , W O2014/144722, WO 2014/151910 und WO 2015/048272 beschrieben.
• Es ist vorgesehen, dass das erfindungsgemäße Antikörperkonstrukt ein Molekulargewicht von ungefähr 20 bis ungefähr 90 kDa, ungefähr 30 bis ungefähr 80 kDa, ungefähr 40 bis ungefähr 70 kDa, ungefähr 50 bis ungefähr 60 kDa, ungefähr 52 bis ungefähr 58 kDa und vorzugsweise etwa 54 bis etwa 56 kDa aufweisen kann.
• Die Begriffe „bindet (spezifisch oder immunspezifisch) an“, „erkennt (spezifisch oder immunspezifisch)“ oder „reagiert (spezifisch oder immunspezifisch) mit“ bedeuten erfindungsgemäß, dass ein Antikörperkonstrukt oder eine Bindungsdomäne mit einem bestimmten Epitop auf dem Zielmolekül (Antigen) interagiert oder (immun-)spezifisch damit interagiert, hier: BCMA bzw. CD3. Diese Interaktion oder Assoziation tritt häufiger, schneller, mit größerer Dauer, mit größerer Affinität oder mit einer beliebigen Kombination der zuvor genannten zu einem Epitop auf dem spezifischen Ziel auf als zu alternativen Stoffen (Nicht-Zielmolekülen). Aufgrund der Sequenzähnlichkeit zwischen homologen Proteinen in verschiedenen Spezies kann ein Antikörperkonstrukt oder eine Bindungsdomäne, die immunspezifisch an ihr Ziel (wie ein menschliches Ziel) bindet, jedoch mit homologen Zielmolekülen aus verschiedenen Spezies (wie von nicht-menschlichen Primaten, z. B. Makaken) kreuzreagieren. Der Begriff „spezifische/immunspezifische Bindung“ kann daher die Bindung eines Antikörperkonstrukts oder einer Bindungsdomäne an Epitope oder strukturell verwandte Epitope in mehr als einer Art einschließen.
• Im Kontext der vorliegenden Erfindung bezieht sich der Begriff „Epitop“ auf den Teil oder die Region des Antigens, der/die von der Bindungsdomäne erkannt/immunspezifisch erkannt wird. Ein „Epitop“ ist antigen und daher wird der Begriff „Epitop“ manchmal auch als „antigene Struktur“ oder „antigene Determinante“ bezeichnet. Der Teil der Bindungsdomäne, der an das Epitop bindet, wird als Paratop bezeichnet. Es wird angenommen, dass eine spezifische Bindung durch spezifische Motive in der Aminosäuresequenz der Bindungsdomäne und des Antigens erreicht wird. Somit wird eine Bindung aufgrund ihrer primären, sekundären und/oder tertiären Struktur sowie aufgrund möglicher sekundärer Modifikationen dieser Strukturen erreicht. Die spezifische Wechselwirkung des Paratops mit seiner antigenen Determinante kann zu einer einfachen Bindung dieser Stelle an das Antigen führen. In einigen Fällen kann die spezifische Interaktion alternativ oder zusätzlich zur Auslösung eines Signals führen, z. B. aufgrund der Induktion einer Änderung der Konformation des Antigens, einer Oligomerisierung des Antigens usw.
• Die Epitope von Proteinantigenen werden basierend auf ihrer Struktur und Interaktion mit dem Paratop in zwei Kategorien unterteilt, nämlich in Konformationsepitope und lineare Epitope. Ein Konformationsepitop ist aus diskontinuierlichen Abschnitten der Aminosäuresequenz des Antigens zusammengesetzt. Diese Epitope interagieren mit dem Paratop basierend auf den dreidimensionalen Oberflächenmerkmalen und der Form oder Tertiärstruktur (Faltung) des Antigens. Verfahren zur Bestimmung der Konformation von Epitopen schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf Röntgenkristallographie, zweidimensionale Kernspinresonanzspektroskopie (2D-NMR) und ortsgerichtete Spinmarkierung und elektronenparamagnetische Resonanzspektroskopie (EPR). Im Gegensatz dazu interagieren lineare Epitope aufgrund ihrer Primärstruktur mit dem Paratop. Ein lineares Epitop wird durch eine kontinuierliche Sequenz von Aminosäuren aus dem Antigen gebildet und schließt typischerweise mindestens 3 oder mindestens 4 und üblicher mindestens 5 oder mindestens 6 oder mindestens 7, beispielsweise ungefähr 8 bis ungefähr 10 Aminosäuren in einer einzigartigen Sequenz ein.
• Die Interaktion zwischen der Bindungsdomäne und dem Epitop des Zielantigens impliziert, dass eine Bindungsdomäne eine nennenswerte oder signifikante Affinität für das Epitop/das Zielantigen aufweist (hier: BCMA bzw. CD3). Im Allgemeinen zeigt sie außerdem keine signifikante Affinität für andere Proteine oder Antigene als das Zielantigen (hier: BCMA / CD3) - ungeachtet der oben erläuterten Kreuzreaktivität mit homologen Zielen, z. B. von anderen Spezies. „Signifikante Affinität“ schließt die Bindung mit einer Affinität (Dissoziationskonstante, KD) von ≤10^-6 M ein. Die Bindung wird vorzugsweise als spezifisch betrachtet, wenn die Bindungsaffinität ≤10^-7 M, ≤10^-8 M, ≤10^-9 M, ≤10^-10 M oder sogar ≤10^-11 M oder ≤10^-12 M ist. Ob eine Bindungsdomäne (immun)spezifisch mit einem Ziel reagiert oder daran bindet, kann leicht getestet werden z. B. durch Vergleichen der Affinität der Bindungsdomäne zu ihrem gewünschten Zielprotein oder -antigen mit der Affinität der Bindungsdomäne zu Nicht-Zielproteinen oder -antigenen (hier: andere Proteine als BCMA bzw. CD3). Vorzugsweise bindet ein Antikörperkonstrukt der Erfindung nicht signifikant an andere Proteine oder Antigene als BCMA bzw. CD3 (d. h., die erste Domäne bindet nicht an andere Proteine als BCMA und die zweite Domäne bindet nicht an andere Proteine als CD3). Beispielsweise ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der Erfindung (und insbesondere seine erste Domäne) nicht signifikant an menschliches BAFF-R und/oder menschliches TACI bindet, damit interagiert, es erkennt oder mit ihm kreuzreagiert.
• Die Gleichgewichtsdissoziationskonstante (KD) eines erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts gegen BCMA kann durch Scatchard- oder durch Biacore-Analyse bestimmt werden, wie z. B. in WO 2013/072406 beschrieben. Die KD-Werte für CD3 können z. B. durch Oberflächenplasmonresonanzanalyse bestimmt werden, wie z. B. in WO 2013/072406 beschrieben. Es ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung einen KD-Wert für BCMA und/oder für CD3 im zweistelligen oder einstelligen nanomolaren Bereich oder im dreistelligen oder sogar zweistelligen picomolaren Bereich aufweist.
• Der Begriff „bindet nicht signifikant“ bedeutet, dass ein Antikörperkonstrukt oder eine Bindungsdomäne der vorliegenden Erfindung kein anderes Protein oder Antigen als BCMA oder CD3 bindet, d.h. eine Reaktivität von ≤30 %, vorzugsweise ≤20 %, mehr bevorzugt ≤10 %, besonders bevorzugt ≤9 %, 8 %, 7 %, 6 % oder 5 % mit anderen Proteinen oder Antigenen als BCMA oder CD3 zeigt, wodurch eine Bindung an BCMA bzw. CD3 auf 100 % eingestellt wird.
• Gemäß einer Ausführungsform des Antikörperkonstrukts der vorliegenden Erfindung liegen die erste und/oder die zweite Domäne im Format eines scFv vor. In einem scFv sind die VH-Region und die VL-Region in der Reihenfolge VH-VL oder VL-VH (vom N- zum C-Terminus) angeordnet. Es ist vorgesehen, dass die VH- und die VL-Regionen der ersten und/oder der zweiten Bindungsdomäne über einen Linker, vorzugsweise einen Peptidlinker, verbunden sind. Gemäß einer Ausführungsform der ersten und/oder der zweiten Domäne ist die VH-Region N-terminal zum Linker und die VL-Region C-terminal zum Linker positioniert. Es ist weiterhin vorgesehen, dass die erste Domäne und die zweite Domäne des Antikörperkonstrukts über einen Linker, vorzugsweise einen Peptidlinker, verbunden sind. Die Linker sind vorzugsweise Peptidlinker, mehr bevorzugt kurze Peptidlinker. Beispiele sind dargestellt in SEQ ID NO: 686-699. Im vorliegenden Zusammenhang hat ein „kurzer“ Linker zwischen 2 und 50 Aminosäuren, vorzugsweise zwischen 3 und 35, zwischen 4 und 30, zwischen 5 und 25, zwischen 6 und 20 oder zwischen 6 und 17 Aminosäuren. Der Linker zwischen zwei variablen Regionen einer Bindungsdomäne kann eine andere Länge haben (z. B. länger sein) als der Linker zwischen den zwei Bindungsdomänen. Beispielsweise kann der Linker zwischen zwei variablen Regionen einer Bindungsdomäne eine Länge zwischen 7 und 15 Aminosäuren aufweisen, vorzugsweise zwischen 9 und 13, und der Linker zwischen den zwei Bindungsdomänen kann eine Länge zwischen 3 und 10 Aminosäuren, vorzugsweise zwischen 4 und 8 aufweisen. Es ist ferner vorgesehen, dass die Peptidlinker Glycin-/Serinlinker sind, wie diejenigen, die in den SEQ ID NO: 687, 689-699 dargestellt sind.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist vorgesehen, dass
1. a) das Antikörperkonstrukt ein einkettiges Polypeptid ist,
2. b) die erste Domäne im Format eines scFv vorliegt,
3. c) die zweite Domäne im Format eines scFv vorliegt und/oder
4. d) die erste und die zweite Domäne über einen Linker, vorzugsweise einen Peptidlinker, mehr bevorzugt einen Glycin/Serinlinker verbunden sind.
• Die erste Domäne des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts bindet an BCMA (B-Zellreifungsantigen, TNFRSF17, CD269). Mehr bevorzugt bindet sie an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle. Die „Zielzelle“ kann eine beliebige prokaryotische oder eukaryotische Zelle sein, die BCMA auf ihrer Oberfläche exprimiert; vorzugsweise ist die Zielzelle eine Zelle, die Teil des menschlichen oder tierischen Körpers ist, wie eine spezifische BCMA-exprimierende Krebs- oder Tumorzelle oder eine Zelle eines BCMA-positiven Neoplasmas. Es ist ferner vorgesehen, dass die erste Domäne an menschliches BCMA, vorzugsweise an menschliches BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle, bindet. Es ist auch vorgesehen, dass die erste Domäne an Makaken-BCMA, vorzugsweise an Makaken-BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle, bindet. Eine bevorzugte Aminosäuresequenz für menschliches BCMA ist in SEQ ID NO: 647, für Makaken-BMCA in SEQ ID NO: 648, für die extrazelluläre Domäne von menschlichem BCMA in SEQ ID NO: 649, für die extrazelluläre Domäne von Makaken-BCMA in SEQ ID NO: 650 dargestellt.
• In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung bindet die erste Domäne des Antikörperkonstrukts an das Epitopcluster 3 von BCMA. Mehr bevorzugt bindet sie an das Epitopcluster 3 von menschlichem BCMA. Eine bevorzugte Aminosäuresequenz für Epitopcluster 3 von menschlichem BCMA ist in SEQ ID NO: 651 dargestellt. Antikörperkonstrukte mit Domänen, die an das Epitopcluster 3 von BCMA binden, sind ausführlich in WO 2013/072406 beschrieben, deren Inhalt hiermit ausdrücklich durch Bezugnahme aufgenommen wird. In WO 2013/072406 wird gezeigt, dass diese Antikörperkonstrukte eine sehr vorteilhafte Beziehung zwischen Epitop und Aktivität aufweisen.
• Ein Verfahren zur BCMA-Epitop-Mapping wird in WO 2013/072406 verwendet und im Folgenden beschrieben: Eine oder mehrere vordefinierte Regionen (jeweils in Form einer zusammenhängenden Aminosäurestreckung) innerhalb der extrazellulären Domäne von menschlichem BCMA werden durch die entsprechende Region eines BCMA-Moleküls von Nagetieren (wie etwa murinem BCMA, aber auch andere Nagetierspezies sind denkbar, solange die Bindungsdomäne gegenüber der verwendeten Nagetierart nicht kreuzreaktiv ist) ausgetauscht. Diese Chimären von menschlichem BCMA/Nagetier-BCMA (Mäusen) werden auf der Oberfläche von Wirtszellen (wie CHO-Zellen) exprimiert. Die Bindung des Antikörpers oder Antikörperkonstrukts kann mittels FACS-Analyse getestet werden. Wenn die Bindung des Antikörpers oder Antikörperkonstrukts an das chimäre Molekül vollständig aufgehoben ist oder wenn eine signifikante Abnahme der Bindung beobachtet wird, kann gefolgert werden, dass die Region von menschlichem BCMA, der von diesem chimären Molekül entfernt wurde, für die immunspezifische Epitop-Paratopen-Erkennung relevant ist. Die Abnahme der Bindung beträgt vorzugsweise mindestens 10 %, 20 %, 30 %, 40 % oder 50 %; mehr bevorzugt mindestens 60 %, 70 % oder 80 % und am meisten bevorzugt 90 %, 95 % oder sogar 100 % im Vergleich zur Bindung an menschlichen (Wildtyp) BCMA, wobei die Bindung an menschlichen BCMA auf 100 % eingestellt ist. Alternativ oder zusätzlich kann die oben beschriebene Epitop-Mapping-Analyse durch Einführen einer oder mehrerer Punktmutationen in die Sequenz der extrazellulären Domäne von BCMA modifiziert werden.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist ferner vorgesehen, dass die erste Domäne, die an BCMA bindet, eine VH-Region umfasst, die CDR-H1, CDR-H2 und CDR-H3 umfasst, und eine VL-Region, die CDR-L1, CDR-L2 und CDR-L3 umfasst, ausgewählt aus:
1. (1) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 1, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 2, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 3, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 4, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 5, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 6;
2. (2) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 11, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 12, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 13, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 14, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 15, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 16;
3. (3) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 21, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 22, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 23, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 24, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 25, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 26;
4. (4) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 31, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 32, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 33, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 34, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 35, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 36;
5. (5) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 41, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 42, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 43, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 44, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 45, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 46;
6. (6) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 51, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 52, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 53, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 54, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 55, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 56;
7. (7) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 61, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 62, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 63, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 64, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 65, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 66;
8. (8) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 71, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 72, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 73, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 74, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 75, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 76;
9. (9) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 81, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 82, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 83, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 84, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 85, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 86;
10. (10) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 91, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 92, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 93, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 94, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 95, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 96;
11. (11) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 101, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 102, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 103, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 104, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 105, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 106;
12. (12) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 111, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 112, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 113, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 114, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 115, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 116;
13. (13) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 121, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 122, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 123, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 124, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 125, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 126;
14. (14) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 131, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 132, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 133, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 134, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 135, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 136;
15. (15) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 141, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 142, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 143, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 144, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 145, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 146;
16. (16) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 151, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 152, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 153, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 154, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 155, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 156;
17. (17) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 161, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 162, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 163, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 164, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 165, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 166;
18. (18) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 171, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 172, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 173, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 174, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 175, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 176;
19. (19) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 181, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 182, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 183, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 184, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 185, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 186;
20. (20) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 191, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 192, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 193, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 194, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 195, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 196;
21. (21) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 201, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 202, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 203, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 204, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 205, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 206;
22. (22) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 211, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 212, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 213, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 214, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 215, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 216;
23. (23) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 221, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 222, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 223, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 224, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 225, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 226;
24. (24) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 231, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 232, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 233, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 234, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 235, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 236;
25. (25) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 241, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 242, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 243, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 244, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 245, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 246;
26. (26) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 251, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 252, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 253, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 254, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 255, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 256;
27. (27) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 261, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 262, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 263, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 264, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 265, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 266;
28. (28) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 271, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 272, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 273, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 274, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 275, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 276;
29. (29) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 281, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 282, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 283, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 284, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 285, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 286;
30. (30) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 291, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 292, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 293, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 294, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 295, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 296;
31. (31) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 301, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 302, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 303, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 304, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 305, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 306;
32. (32) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 311, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 312, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 313, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 314, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 315, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 316;
33. (33) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 321, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 322, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 323, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 324, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 325, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 326;
34. (34) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 331, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 332, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 333, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 334, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 335, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 336;
35. (35) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 341, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 342, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 343, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 344, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 345, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 346;
36. (36) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 351, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 352, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 353, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 354, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 355, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 356;
37. (37) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 361, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 362, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 363, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 364, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 365, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 366;
38. (38) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 371, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 372, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 373, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 374, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 375, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 376;
39. (39) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 381, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 382, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 383, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 384, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 385, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 386;
40. (40) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 391, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 392, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 393, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 394, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 395, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 396;
41. (41) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 401, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 402, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 403, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 404, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 405, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 406;
42. (42) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 411, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 412, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 413, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 414, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 415, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 416;
43. (43) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 421, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 422, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 423, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 424, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 425, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 426;
44. (44) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 431, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 432, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 433, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 434, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 435, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 436;
45. (45) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 441, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 442, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 443, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 444, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 445, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 446;
46. (46) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 451, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 452, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 453, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 454, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 455, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 456;
47. (47) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 461, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 462, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 463, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 464, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 465, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 466;
48. (48) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 471, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 472, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 473, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 474, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 475, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 476;
49. (49) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 481, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 482, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 483, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 484, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 485, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 486;
50. (50) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 491, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 492, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 493, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 494, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 495, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 496;
51. (51) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 501, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 502, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 503, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 504, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 505, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 506;
52. (52) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 511, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 512, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 513, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 514, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 515, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 516; und
53. (53) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 521, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 522, CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 523, CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 524, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 525, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 526.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die erste Domäne, die an BCMA bindet, eine VL-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NO: 8, 18, 28, 38, 48, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138, 148, 158, 168, 178, 188, 198, 208, 218, 228, 238, 248, 258, 268, 278, 288, 298, 308, 318, 328, 338, 348, 358, 368, 378, 388, 398, 408, 418, 428, 438, 448, 458, 468, 478, 488, 498, 508, 518 und 528. Es ist vorgesehen, dass die erste Domäne eine VL-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 178.
• Es ist ferner vorgesehen, dass die erste Domäne, die an BCMA bindet, eine VH-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NO: 7, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 217, 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 307, 317, 327, 337, 347, 357, 367, 377, 387, 397, 407, 417, 427, 437, 447, 457, 467, 477, 487, 497, 507, 517 und 527. Es ist vorgesehen, dass die erste Domäne eine VL-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 177.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die erste Domäne, die an BCMA bindet, eine VH-Region und eine VL-Region umfasst, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus:
1. (1) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 7 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 8;
2. (2) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 17 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 18;
3. (3) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 27 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 28;
4. (4) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 37 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 38;
5. (5) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 47 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 48;
6. (6) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 57 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 58;
7. (7) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 67 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 68;
8. (8) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 77 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 78;
9. (9) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 87 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 88;
10. (10) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 97 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 98;
11. (11) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 107 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 108;
12. (12) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 117 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 118;
13. (13) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 127 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 128;
14. (14) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 137 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 138;
15. (15) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 147 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 148;
16. (16) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 157 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 158;
17. (17) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 167 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 168;
18. (18) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 177 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 178;
19. (19) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 187 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 188;
20. (20) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 197 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 198;
21. (21) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 207 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 208;
22. (22) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 217 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 218;
23. (23) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 227 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 228;
24. (24) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 237 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 238;
25. (25) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 247 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 248;
26. (26) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 257 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 258;
27. (27) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 267 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 268;
28. (28) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 277 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 278;
29. (29) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 287 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 288;
30. (30) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 297 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 298;
31. (31) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 307 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 308;
32. (32) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 317 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 318;
33. (33) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 327 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 328;
34. (34) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 337 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 338;
35. (35) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 347 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 348;
36. (36) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 357 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 358;
37. (37) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 367 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 368;
38. (38) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 377 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 378;
39. (39) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 387 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 388;
40. (40) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 397 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 398;
41. (41) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 407 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 408;
42. (42) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 417 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 418;
43. (43) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 427 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 428;
44. (44) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 437 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 438;
45. (45) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 447 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 448;
46. (46) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 457 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 458;
47. (47) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 467 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 468;
48. (48) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 477 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 478;
49. (49) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 487 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 488;
50. (50) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 497 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 498;
51. (51) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 507 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 508;
52. (52) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 517 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 518; und
53. (53) eine VH-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 527 und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 528.
• Es ist vorgesehen, dass die erste Domäne eine VH-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 177, und eine VL-Region mit einer Aminosäuresequenz, wie dargestellt in SEQ ID NO: 178.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die erste Domäne, die an BCMA bindet, ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz umfasst oder daraus besteht, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOs: 9, 19, 29, 39, 49, 59, 69, 79, 89, 109, 129, 139, 149, 159, 169, 179, 189, 199, 209, 219, 229, 239, 249, 259, 269, 279, 289, 299, 309, 319, 329, 339, 349, 359, 369, 379, 389, 399, 409, 419, 429, 439, 449, 459, 469, 479, 489, 499, 519, und 529. Es ist vorgesehen, dass die erste Domäne ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz umfasst oder daraus besteht, wie in SEQ ID NO: 179 dargestellt.
• „T-Zellen“ oder T-Lymphozyten sind eine Art Lymphozyten (selbst eine Art weiße Blutkörperchen), die eine zentrale Rolle bei der zellvermittelten Immunität spielen. Es gibt mehrere Untergruppen von T-Zellen, von denen jede eine unterschiedliche Funktion hat. T-Zellen können von anderen Lymphozyten, wie B-Zellen und NK-Zellen, durch die Gegenwart eines T-Zell-Rezeptors (TCR) auf der Zelloberfläche unterschieden werden. Der TCR ist für die Erkennung von Antigenen verantwortlich, die an MHC-Moleküle (Major Histocompatibility Complex) gebunden sind, und ist aus zwei verschiedenen Proteinketten zusammengesetzt. In 95 % der T-Zellen besteht der TCR aus einer alpha (α) und beta (β) - Kette. Wenn der TCR mit antigenem Peptid und MHC (Peptid/MHC-Komplex) in Kontakt tritt, wird der T-Lymphozyt durch eine Reihe von biochemischen Ereignissen aktiviert, die durch assoziierte Enzyme, Co-Rezeptoren, spezialisierte Adaptermoleküle und aktivierte oder freigesetzte Transkriptionsfaktoren vermittelt werden.
• „CD3“ (Differenzierungscluster 3) ist ein T-Zell-Co-Rezeptor, der aus vier Ketten zusammengesetzt ist. Bei Säugetieren enthält der CD3-Proteinkomplex eine CD3γ(gamma)-Kette, eine CD3δ(delta)-Kette und zwei CD3ε(epsilon)-Ketten. Diese vier Ketten assoziieren mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und der sogenannten ζ (zeta) -Kette zum „T-Zell-Rezeptor-Komplex“ und erzeugen ein Aktivierungssignal in T-Lymphozyten. Die Ketten CD3γ (gamma), CD3δ (delta) und CD3ε (epsilon) sind stark verwandte Zelloberflächenproteine der Immunglobulin-Superfamilie und enthalten jeweils eine einzige extrazelluläre Immunglobulindomäne. Die intrazellulären Schwänze der CD3-Moleküle enthalten ein einziges konserviertes Motiv, das als Immunorezeptor-Tyrosin-basierendes Aktivierungsmotiv (immunoreceptor tyrosine-based activation motif - ITAM) bekannt ist und für die Signalisierungskapazität des TCR wesentlich ist. Das CD3-epsilon-Molekül ist ein Polypeptid, das beim Menschen durch das CD3E-Gen codiert ist, das sich auf Chromosom 11 befindet.
• Die umgeleitete Lyse von Zielzellen über die Rekrutierung von T-Zellen durch ein Antikörperkonstrukt, das an CD3 auf der T-Zelle und an ein Zielprotein auf der Zielzelle bindet, beinhaltet im Allgemeinen die Bildung einer zytolytischen Synapse und die Abgabe von Perforin und Granzymen. Die beteiligten T-Zellen sind in der Lage, serielle Zielzellen zu lysieren, und werden nicht durch Immunfluchtmechanismen beeinflusst, die die Verarbeitung und Präsentation von Peptidantigenen oder die Differenzierung klonaler T-Zellen stören, siehe zum Beispiel WO 2007/042261 .
• Die durch BCMAxCD3-Antikörperkonstrukte vermittelte Zytotoxizität kann auf verschiedene Arten gemessen werden. Die „halbmaximale wirksame Konzentration“ (EG₅₀) wird üblicherweise als Maß für die Wirksamkeit eines biologisch aktiven Moleküls wie eines Antikörperkonstrukts der vorliegenden Erfindung verwendet. Sie wird in molaren Einheiten ausgedrückt. Im vorliegenden Fall der Messung der Zytotoxizität bezieht sich der EG₅₀-Wert auf die Konzentration eines Antikörperkonstrukts, die eine zytotoxische Reaktion (Lyse von Zielzellen) auf halbem Weg zwischen der Basislinie und dem Maximum induziert. Effektorzellen in einem Zytotoxizitäts-Assay können z. B. stimulierte angereicherte (menschliche) CD8-positive T-Zellen oder nicht stimulierte (menschliche) mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMC) sein. Die Zielzellen sollten BCMA auf der Zelloberfläche exprimieren. Vorzugsweise exprimieren die Zielzellen (mindestens) die extrazelluläre Domäne von BCMA auf der Zelloberfläche. Zielzellen können eine Zelllinie (wie CHO) sein, die stabil oder transient mit BCMA transfiziert ist, z. B. menschliches BCMA. Alternativ können die Zielzellen eine BCMA-positive natürliche Expressorzelllinie sein, wie die menschliche multiple Myelomzelllinie L363 oder NCI-H929.
• Das Verhältnis von Effektor zu Zielzelle (E:T) in einem Zytotoxizitäts-Assay beträgt normalerweise etwa 10:1, kann aber auch variieren. Die zytotoxische Aktivität von BCMAxCD3-Antikörperkonstrukten kann in einem 51-Chrom-Freisetzungstest gemessen werden (z. B. mit einer Inkubationszeit von etwa 18 Stunden) oder in einem FACS-basierten Zytotoxizitäts-Assay (z. B. mit einer Inkubationszeit von etwa 48 Stunden). Modifikationen der Inkubationszeit (zytotoxische Reaktion) sind ebenfalls vorgesehen. Andere Verfahren zur Messung der Zytotoxizität sind bekannt und umfassen MTT- oder MTS-Assays, ATPbasierte Assays einschließlich Biolumineszenz-Assays, den Sulforhodamin-B-(SRB)-Assay, den WST-Assay, den klonogenen Assay und die ECIS-Technologie.
• Gemäß einer Ausführungsform wird die zytotoxische Aktivität, die durch BCMAxCD3-Antikörperkonstrukte der vorliegenden Erfindung vermittelt wird, in einem FACS-basierten Zytotoxizitäts-Assay gemessen. Es ist vorgesehen, dass der EG₅₀-Wert der BCMAxCD3-Antikörperkonstrukte ≤5000 pM oder ≤4000 pM, mehr bevorzugt ≤3000 pM oder ≤2000 pM, noch mehr bevorzugt ≤1000 pM oder ≤500 pM, noch mehr bevorzugt ≤400 pM oder ≤300 pM, noch mehr bevorzugt ≤ 200 pM, noch mehr bevorzugt ≤ 100 pM, noch mehr bevorzugt ≤ 50 pM, noch mehr bevorzugt ≤ 20 pM oder ≤ 10 pM und am meisten bevorzugt ≤5 pM beträgt. Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung einen EG50-Wert im 3-stelligen, 2-stelligen oder 1-stelligen pg/ml-Bereich aufweist, wie in einem FACS-basierten Zytotoxizitäts-Assay bestimmt. Der Assay kann mit der L363- oder NCI-H929-Zelllinie oder mit BCMA-transfizierten CHO-Zellen als Zielzellen und stimulierten angereicherten (menschlichen) CD8-positiven T-Zellen oder nicht stimulierten (menschlichen) PBMC als Effektorzellen durchgeführt werden. Siehe auch WO 2013/072406 .
• Die zweite Domäne des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts bindet an CD3. Mehr bevorzugt bindet sie an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle. Es ist ferner vorgesehen, dass die zweite Domäne an menschliches CD3, vorzugsweise an menschliches CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet. Es ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne an CD3-epsilon bindet. Mehr bevorzugt bindet sie an menschliches CD3-Epsilon, z. B. an menschliches CD3-Epsilon auf der Oberfläche einer T-Zelle. Eine bevorzugte Aminosäuresequenz für die extrazelluläre Domäne von menschlichem CD3-epsilon ist in SEQ ID NO: 653 dargestellt.
• In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung bindet die zweite Domäne des Antikörperkonstrukts an menschliches CD3-epsilon (oder menschliches CD3-epsilon auf der Oberfläche einer T-Zelle) und an CD3-epsilon von Callithrix jacchus oder Saimiri sciureus. Es ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne an ein extrazelluläres Epitop von CD3-epsilon, vorzugsweise an ein extrazelluläres Epitop von menschlichem CD3-epsilon, bindet. Es ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne an ein extrazelluläres Epitop des Menschen und an die Macaca-CD3-epsilon-Kette bindet. Ein bevorzugtes Epitop von CD3-epsilon ist in den Aminosäureresten 1 bis 27 der extrazellulären Domäne von menschlichem CD3-epsilon enthalten (siehe SEQ ID NO: 654). Insbesondere umfasst das Epitop mindestens die Aminosäuresequenz Gln-Asp-Gly-Asn-Glu. Callithrixjacchus ist ein Neuweltaffe, der zur Familie Callitrichidae gehört, während Saimiri sciureus ein Neuweltaffe ist, der zur Familie Cebidae gehört. Bindemittel mit solchen Eigenschaften sind ausführlich in WO 2008/119567 beschrieben.
• Antikörper oder bispezifische Antikörperkonstrukte, die gegen (menschliches) CD3 oder spezifisch gegen CD3-epsilon gerichtet sind, sind im Stand der Technik bekannt, wobei ihre CDRs, VH- und VL-Sequenzen als Basis für die zweite Bindungsdomäne des erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukts dienen können. Zum Beispiel haben Kung et al. 1979 über die Entwicklung von OKT3 (Ortho Kung T3), dem ersten mAb berichtet, der CD3 (insbesondere die epsilon-Kette von CD3) auf menschlichen T-Zellen erkennt. OKT3 (Muromonab) war der erste monoklonale Antikörper murinen Ursprungs, der für die Therapie beim Menschen zur Verfügung stand. Neuere monoklonale Anti-CD3-Antikörper schließen Otelixizumab (TRX4), Teplizumab (MGA031), Foralumab und Visilizumab ein, die alle auf die epsilon-Kette von CD3 abzielen. Bispezifische Antikörperkonstrukte, die gegen ein (Krebs-)Ziel und CD3 gerichtet sind, werden ebenfalls entwickelt und (vor)klinisch getestet, wobei ihre CD3-Bindungsdomäne (CDRs, VH, VL) als Basis für die zweite Bindungsdomäne des Antikörperkonstrukts der Erfindung dienen kann. Beispiele schliessen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf Blinatumomab, Solitomab (MT110, AMG 110), Catumaxomab, Duvortuxizumab, Ertumaxomab, Mosunetuzumab, FBTA05 (Bi20, TPBs05), CEA-TCB (RG7802, RO6958688), AFM11 und MGD006 (S80880). Andere Beispiele für CD3-Bindungsdomänen sind beispielsweise in US 7,994,289 B2 , US 7,728,114 B2 , US 7,381,803 B1 , US 6,706,265 B1 offenbart.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VL-Region umfasst, die CDR-L1, CDR-L2 und CDR-L3 umfasst, ausgewählt aus:
1. (a) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 542, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 543, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 544;
2. (b) CDR-Llwie dargestellt in SEQ ID NO: 599, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 600, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 601; und
3. (c) CDR-Llwie dargestellt in SEQ ID NO: 621, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 622, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 623.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VH-Region umfasst, die CDR-H1, CDR-H2 und CDR-H3 umfasst, ausgewählt aus:
1. (a) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 534, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 535, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 536;
2. (b) CDR-H1wie dargestellt in SEQ ID NO: 545, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 546, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 547;
3. (c) CDR-H1wie dargestellt in SEQ ID NO: 557, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 558, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 559;
4. (d) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 568, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 569, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 570;
5. (e) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 579, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 580, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 581;
6. (f) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 591, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 592, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 593;
7. (g) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 602, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 603, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 604;
8. (h) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 613, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 614, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 615;
9. (i) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 624, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 625, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 626; und
10. (j) CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 636, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 637, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 638 dargestellt.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist ferner vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VL-Region umfasst, die CDR-L1, CDR-L2 und CDR-L3 umfasst, und eine VH-Region, die CDR-H1, CDR-H2 und CDR-H3 umfasst, ausgewählt aus:
1. (a) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 531, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 532, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 533, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 534, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 535, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 536;
2. (b) CDR-Llwie dargestellt in SEQ ID NO: 542, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 543, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 544, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 545, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 546, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 547;
3. (c) CDR-Llwie dargestellt in SEQ ID NO: 554, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 555, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 556, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 557, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 558, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 559;
4. (d) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 565, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 566, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 567, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 568, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 569, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 570;
5. (e) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 576, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 577, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 578, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 579, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 580, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 581;
6. (f) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 588, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 589, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 590, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 591, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 592, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 593;
7. (g) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 599, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 600, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 601, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 602, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 603, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 604;
8. (h) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 610, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 611, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 612, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 613, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 614, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 615;
9. (i) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 621, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 622, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 623, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 624, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 625, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 626; und
10. (j) CDR-L1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 633, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 634, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 635, CDR-H1 wie dargestellt in SEQ ID NO: 636, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 637, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 638.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VL-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NO: 550, SEQ ID NO: 551, SEQ ID NO: 584, SEQ ID NO: 585, SEQ ID NO: 629 und SEQ ID NO: 630.
• Es ist ferner vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VH-Region mit einer Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NO: 537, SEQ ID NO: 538, SEQ ID NO: 548, SEQ ID NO: 549, SEQ ID NO: 560, SEQ ID NO: 561, SEQ ID NO: 571, SEQ ID NO: 572, SEQ ID NO: 582, SEQ ID NO: 583, SEQ ID NO: 594, SEQ ID NO: 595, SEQ ID NO: 605, SEQ ID NO: 606, SEQ ID NO: 616, SEQ ID NO: 617, SEQ ID NO: 627, SEQ ID NO: 628, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 640, und SEQ ID NO: 644.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine VL-Region und eine VL-Region und eine VH-Region umfasst, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus:
1. (a) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 539 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 537 oder 538;
2. (b) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 550 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 548 oder 549;
3. (c) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 562 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 560 oder 561;
4. (d) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 573 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 571 oder 572;
5. (e) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 584 oder 585 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 582 oder 583;
6. (f) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 596 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 594 oder 595;
7. (g) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 607 oder 585 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 605 oder 606;
8. (h) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 618 oder 521 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 616 oder 617;
9. (i) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 629 oder 630 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 627 oder 628;
10. (j) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 641 oder 630 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 639 oder 640; und
11. (k) einer VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 645 und einer VH-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 644.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist auch vorgesehen, dass die zweite Domäne, die an CD3 bindet, eine ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NOs: 540, 541, 552, 553, 563, 564, 574, 575, 586, 587, 597, 598, 608, 609, 619, 620, 631, 632, 642, 643, und 646, umfasst oder daraus besteht.
• Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung um die Bindung an CD3 konkurriert mit:
1. a) einem Antikörper oder einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, die CDR-H1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 636, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 637, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 638, und eine VL-Region, die CDR-L1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 633, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 634, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 635;
2. b) einem Antikörper oder einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 639, und eine VL-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 641;
3. c) einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne die Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 642; oder
4. d) einem Antikörperkonstrukt mit der Aminosäuresequenz, wie dargestellt in SEQ ID NO: 661.
• Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung an das gleiche Epitop von CD3 bindet wie:
1. a) ein Antikörper oder ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, die CDR-H1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 636, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 637, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 638, und eine VL-Region, die CDR-L1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 633, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 634, CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 635;
2. b) ein Antikörper oder ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 639, und eine VL-Region, wie dargestellt in SEQ ID NO: 641;
3. c) ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an CD3 auf der Oberfläche einer T-Zelle bindet, wobei die Domäne die Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 642; oder
4. d) ein Antikörperkonstrukt mit der Aminosäuresequenz, wie dargestellt in SEQ ID NO: 661.
• Für das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ist darüber hinaus vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOs: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, und 530. Es ist vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz umfasst, wie in SEQ ID NO: 180 dargestellt.
• Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung ein Polypeptid umfasst oder daraus besteht, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NOs: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, und 530, und das an seinem N-Terminus oder an seinem C-Terminus mit einem Proteinreinigungs-Tag verbunden ist, vorzugsweise über eine Peptidbindung (Amidbindung). Die Verknüpfung des Proteinreinigungs-Tags am C-Terminus des Polypeptids ist bevorzugt. Es ist vorgesehen, dass das Proteinreinigungs-Tag ein kurzes Peptid ist. Beispielsweise kann die Länge des kurzen Peptids 2 bis 30 Aminosäuren, 4 bis 25 Aminosäuren, 5 bis 20 Aminosäuren oder 6 bis 19 Aminosäuren betragen. Beispiele für Proteinreinigungs-Tags schließen ein, sind jedoch nicht beschränkt auf AU1-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 666), AU5-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 667), T7-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 668), V5-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 669), B-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 670), E2-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 671), FLAG-Epitop / FLAG-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 672), Glu-Glu-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 673 oder 674), HA-Tag, Histidinaffinitäts-Tag (z. B.wie dargestellt in SEQ ID NO: 675), HSV-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 676), KT3-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 677), Myc-Epitop (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 678), Polyarginin-Tag (5-6 Arg-Reste), Polyaspartat-Tag (5-16 Asp-Reste), Polyhistidin-Tag (2-10 His-Reste, üblicherweise 6 His-Reste, siehe z. B. SEQ ID NO: 662-665), Polyphenylalanin-Tag (normalerweise 11 Phe-Reste), S1-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 679), S-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 680), Strep-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 681 oder 682), Universal-Tag (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 683), VSV-G (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 684), Protein C (z. B. wie dargestellt in SEQ ID NO: 685), und Protein A. Ein Histidin-Tag ist bevorzugt, insbesondere ein 6x His-Tag (SEQ ID NO: 663). Ist es daher weiterhin vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung aus einem Polypeptid besteht, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die dargestellt sind in SEQ ID NOs: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, und 530, und das an seinem C-Terminus über eine Peptidbindung mit einem 6xHis-Tag verbunden ist. Eine Ausführungsform des Antikörperkonstrukts der vorliegenden Erfindung weist eine Aminosäuresequenz auf, wie in SEQ ID NO: 661 dargestellt.
• Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung an das gleiche Epitop von BCMA bindet wie:
1. a) ein Antikörper oder ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, die CDR-H1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 171, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 172, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 173, und eine VL-Region, die CDR-L1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 174, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 175, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 176;
2. b) ein Antikörper oder ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 177, und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 178;
3. c) ein Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne die Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 179; oder
4. d) ein Antikörperkonstrukt mit der Aminosäuresequenz, wie dargestellt in SEQ ID NO: 661.
• Ob ein Antikörper, ein Antikörperkonstrukt oder eine Bindungsdomäne an dasselbe Epitop von BCMA/BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle wie ein anderer gegebener Antikörper, ein Antikörperkonstrukt oder eine Bindungsdomäne bindet oder nicht, kann durch verschiedene Analysen gemessen werden, z. B. durch Epitop-Mapping mit chimären oder mutierten BCMA-Molekülen, wie in WO 2013/072406 beschrieben. Eine andere Möglichkeit, das Epitop innerhalb eines Ziels zu identifizieren, ist ein Alanin-Scanning-Assay (siehe z. B. Morrison KL & Weiss GA. Curr Opin Chem Biol. 2001 Jun;5(3):302-7), wobei jeder Rest innerhalb des zu analysierenden Ziels (hier: BCMA) durch Alanin ersetzt wird, z. B. durch ortsgerichtete Mutagenese. Alanin wird wegen seiner nicht-voluminösen, chemisch inerten methylfunktionellen Gruppe verwendet, die dennoch die Sekundärstrukturreferenzen nachahmt, die viele der anderen Aminosäuren besitzen. Manchmal können voluminöse Aminosäuren wie Valin oder Leucin in Fällen verwendet werden, wenn eine Erhaltung der Größe der mutierten Reste erwünscht ist. Das Alanin-Scanning wird üblicherweise durch ortsgerichtete Mutagenese oder zufällig durch Erstellen einer PCR-Bibliothek durchgeführt. Darüber hinaus wurden Berechnungsverfahren entwickelt, um thermodynamische Parameter basierend auf theoretischen Alaninsubstitutionen abzuschätzen. Die Daten können durch IR, NMR-Spektroskopie, mathematische Verfahren, Bioassays usw. getestet werden. Die gleiche Analyse kann natürlich auch für andere Ziele wie CD3 angewendet werden.
• Es ist auch vorgesehen, dass das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung um die Bindung an BCMA konkurriert mit:
1. a) einem Antikörper oder einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, die CDR-H1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 171, CDR-H2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 172, und CDR-H3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 173, und eine VL-Region, die CDR-L1 umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 174, CDR-L2 wie dargestellt in SEQ ID NO: 175, und CDR-L3 wie dargestellt in SEQ ID NO: 176;
2. b) einem Antikörper oder einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne eine VH-Region umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 177, und eine VL-Region wie dargestellt in SEQ ID NO: 178;
3. c) einem Antikörperkonstrukt, das eine Domäne umfasst, die an BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle bindet, wobei die Domäne die Aminosäuresequenz umfasst, wie dargestellt in SEQ ID NO: 179; oder
4. d) einem Antikörperkonstrukt mit der Aminosäuresequenz, wie dargestellt in SEQ ID NO: 661.
• Ob ein Antikörper oder Antikörperkonstrukt mit einem anderen gegebenen Antikörper oder Antikörperkonstrukt um die Bindung an BCMA/BCMA auf der Oberfläche einer Zielzelle konkurriert oder nicht, kann in einem Kompetitionsassay wie einem kompetitiven ELISA oder einem zellbasierten Kompetitionsassay (unter Verwendung von entweder Zellen, die natürlicherweise BCMA exprimieren, oder Zellen, die stabil oder transient mit BCMA transformiert wurden) gemessen werden. Avidingekoppelte Mikropartikel (Kügelchen) können ebenfalls verwendet werden. Ähnlich wie bei einer avidinbbeschichteten ELISA-Platte kann bei Reaktion mit einem biotinylierten Protein jedes dieser Kügelchen als Substrat verwendet werden, auf dem ein Assay durchgeführt werden kann. Das Antigen wird auf ein Kügelchen beschichtet und dann mit dem ersten Antikörper vorbeschichtet. Der zweite Antikörper wird zugegeben und jede zusätzliche Bindung wird bestimmt. Das Auslesen erfolgt durch Durchflusszytometrie. Der Begriff „konkurriert um die Bindung“ bedeutet im vorliegenden Zusammenhang, dass zwischen den beiden getesteten Antikörpern eine Konkurrenz von mindestens 20 %, mindestens 30 %, mindestens 40 %, mindestens 50 %, mindestens 60 %, mindestens 70 %, mindestens 80 % oder mindestens 90 % auftritt, wie durch einen der oben offenbarten Assays bestimmt. Die gleiche Analyse kann natürlich auch für andere Ziele wie CD3 angewendet werden.
• Das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung oder eine oder beide seiner Bindungsdomänen können „humanisiert“ oder „menschlich“ sein. „Humanisierte“ Antikörper, Varianten oder Fragmente davon, Antikörperkonstrukte und Bindungsdomänen basieren auf Immunglobulinen meist menschlicher Sequenzen, die (eine) minimale Sequenz(en) enthalten, die von nicht-menschlichem Immunglobulin abgeleitet sind. Humanisierte Antikörper, Varianten oder Fragmente davon, Antikörperkonstrukte und Bindungsdomänen basieren größtenteils auf humanen Immunglobulinen (Empfängerantikörpern), in denen Reste aus einer hypervariablen Region oder CDR durch Reste aus einer hypervariablen Region oder CDR einer nicht-menschlichen Spezies (Spenderantikörper) wie eines Nagetiers (z. B. Maus, Hamster, Ratte oder Kaninchen) mit der gewünschten Spezifität, Affinität, Kapazität und/oder biologischen Aktivität ersetzt werden. In einigen Fällen werden Fv-Gerüstregion (FR) -Reste des menschlichen Immunglobulins durch entsprechende nicht-menschliche Reste ersetzt. Ferner können „humanisierte“ Antikörper, Varianten oder Fragmente davon, Antikörperkonstrukte und Bindungsdomänen, wie sie hier verwendet werden, auch Reste umfassen, die weder im Empfängerantikörper noch im Spenderantikörper gefunden werden. Diese Modifikationen werden vorgenommen, um die Antikörperleistung weiter zu verfeinern und zu optimieren. Die humanisierten Antikörper, Varianten oder Fragmente davon, Antikörperkonstrukte und Bindungsdomänen können auch mindestens einen Teil einer konstanten Immunglobulinregion (wie Fc) umfassen, typischerweise die eines menschlichen Immunglobulins. Weitere Details siehe Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); und Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992).
• Human-Anti-Maus-Antikörper (HAMA) -Reaktionen haben die Industrie veranlasst, chimäre oder auf andere Weise humanisierte Antikörper/Antikörper-Konstrukte herzustellen. Es wird jedoch erwartet, dass bestimmte Reaktionen des menschlichen anti-chimären Antikörpers (HACA) beobachtet werden, insbesondere bei chronischen oder Mehrfachdosis-Anwendungen eines Antikörpers oder Antikörperkonstrukts. Es wäre daher wünschenswert, Antikörperkonstrukte bereitzustellen, die eine menschliche Bindungsdomäne gegen BCMA und/oder eine menschliche Bindungsdomäne gegen CD3 umfassen, um Bedenken und/oder Auswirkungen der HAMA- oder HACA-Reaktion zu beseitigen.
• Daher sind gemäß einer Ausführungsform das Antikörperkonstrukt, die erste Bindungsdomäne und/oder die zweite Bindungsdomäne „menschlich“. Der Begriff „menschlicher Antikörper“, „menschliches Antikörperkonstrukt“ und „menschliche Bindungsdomäne“ schließt Antikörper, Antikörperkonstrukte bzw. Bindungsdomänen mit von Antikörpern abgeleiteten Regionen, wie variablen und konstanten Regionen oder Domänen ein, die im Wesentlichen menschlichen Keimbahn-Immunglobulinsequenzen entsprechen, die im Stand der Technik bekannt sind, einschließlich beispielsweise der von Kabat et al. (1991) (loc. Cit.)) beschriebenen. Die menschlichen Antikörperkonstrukte oder Bindungsdomänen der Erfindung können Aminosäurereste einschließen, die nicht durch menschliche Keimbahn-Immunglobulinsequenzen codiert sind (z. B. Mutationen, die durch zufällige oder ortsspezifische Mutagenese in vitro oder durch somatische Mutation in vivo), zum Beispiel in den CDRs und insbesondere in CDR3 eingeführt wurden. Die humanen Antikörperkonstrukte oder Bindungsdomänen können mindestens eine, zwei, drei, vier, fünf oder mehr Positionen aufweisen, die durch einen Aminosäurerest ersetzt sind, der nicht durch die menschliche Keimbahn-Immunglobulinsequenz codiert wird. Die Definition von menschlichen Antikörpern, Antikörperkonstrukten und Bindungsdomänen, wie hier verwendet, zieht auch vollständig menschliche Antikörper, Antikörperkonstrukte und Bindungsdomänen in Betracht, die nur nicht-künstlich und/oder genetisch veränderte menschliche Sequenzen von Antikörpern enthalten, wie sie unter Verwendung von Technologien oder Systemen wie Xenomouse abgeleitet werden können.
• Antikörperkonstrukte, die mindestens eine humane Bindungsdomäne umfassen, vermeiden einige der Probleme, die mit Antikörpern oder Antikörperkonstrukten verbunden sind, die variable und/oder konstante nicht-menschliche Regionen wie Nagetier-Regionen (z. B. Regionen von Mäusen, Ratten, Hamstern oder Kaninchen) besitzen. Das Vorhandensein solcher von Nagetieren abgeleiteten Proteine kann zur schnellen Clearance der Antikörper oder Antikörperkonstrukte führen oder kann zur Erzeugung einer Immunantwort gegen den Antikörper oder das Antikörperkonstrukt durch einen Patienten führen. Um die Verwendung von von Nagetieren abgeleiteten Antikörperkonstrukten zu vermeiden, können humanisierte oder vollständig menschliche Antikörperkonstrukte durch Einführung der menschlichen Antikörperfunktion in ein Nagetier erzeugt werden, so dass das Nagetier vollständig menschliche Antikörper erzeugt.
• In einigen Ausführungsformen ist das Antikörperkonstrukt der Erfindung ein „isoliertes“ oder „im Wesentlichen reines“ Antikörperkonstrukt. „Isoliert“ oder „im Wesentlichen rein“ bedeutet, wenn es zur Beschreibung der hierin offenbarten Antikörperkonstrukte verwendet wird, ein Antikörperkonstrukt, das aus einer Komponente seiner Produktionsumgebung identifiziert, abgetrennt und/oder gewonnen wurde. Vorzugsweise ist das Antikörperkonstrukt frei oder im Wesentlichen frei von Assoziationen mit allen anderen Komponenten aus seiner Produktionsumgebung. Kontaminantenbestandteile seiner Produktionsumgebung, wie diejenigen, die aus rekombinanten transfizierten Zellen resultieren, sind Materialien, die die diagnostische oder therapeutische Verwendung des Antikörperkonstrukts beeinträchtigen könnten und Enzyme, Hormone und andere proteinhaltige oder nicht-proteinhaltige Verbindungen aufweisen können. Es versteht sich, dass das isolierte oder im Wesentlichen reine Antikörperkonstrukt in Abhängigkeit von den Umständen 5 bis 99,9 Gew.-% des Gesamtproteingehalts/Polypeptidgehalts in einer gegebenen Probe ausmachen kann. Das gewünschte Antikörperkonstrukt kann durch Verwendung eines induzierbaren Promotors oder eines Promotors mit hoher Expression in einer signifikant höheren Konzentration hergestellt werden. Die Definition schließt die Herstellung eines Antikörperkonstrukts in einer Vielzahl von Organismen und/oder Wirtszellen ein, die im Stand der Technik bekannt sind. In bestimmten Ausführungsformen wird das Antikörperkonstrukt (1) in einem Ausmaß gereinigt, das ausreicht, um mindestens 15 Reste einer N-terminalen oder internen Aminosäuresequenz unter Verwendung eines Drehbechersequenzierers zu erhalten, oder (2) bis zur Homogenität durch SDS-PAGE unter nichtreduzierenden oder reduzierenden Bedingungen unter Verwendung von Coomassie-Blau oder vorzugsweise Silberfärbung. Gewöhnlich wird jedoch ein isoliertes Antikörperkonstrukt durch mindestens einen Reinigungsschritt hergestellt.
• Gemäß einer Ausführungsform liegen das gesamte Antikörperkonstrukt und/oder die Bindungsdomänen in Form eines oder mehrerer Polypeptide oder in Form von Proteinen vor. Zusätzlich zu proteinhaltigen Teilen können solche Polypeptide oder Proteine nicht-proteinhaltige Teile enthalten (z. B. chemische Linker oder chemische Vernetzungsmittel wie Glutaraldehyd).
• Peptide sind kurze Ketten von Aminosäuremonomeren, die durch kovalente Peptidbindungen (Amidbindungen) verbunden sind. Daher fallen Peptide unter die breiten chemischen Klassen von biologischen Oligomeren und Polymeren. Aminosäuren, die Teil einer Peptid- oder Polypeptidkette sind, werden als „Reste“ bezeichnet und können fortlaufend nummeriert werden. Alle Peptide mit Ausnahme von cyclischen Peptiden haben einen N-terminalen Rest an einem Ende und einen C-terminalen Rest am anderen Ende des Peptids. Ein Oligopeptid besteht nur aus wenigen Aminosäuren (üblicherweise zwischen zwei und zwanzig). Ein Polypeptid ist eine längere, kontinuierliche und unverzweigte Peptidkette. Peptide unterscheiden sich von Proteinen aufgrund ihrer Größe und als willkürlicher Maßstab kann verstanden werden, dass sie ungefähr 50 oder weniger Aminosäuren enthalten. Proteine bestehen aus einem oder mehreren Polypeptiden, die normalerweise auf biologisch funktionelle Weise angeordnet sind. Während sich Aspekte der Labortechniken für Peptide im Vergleich zu Polypeptiden und Proteinen unterscheiden (z. B. die Besonderheiten der Elektrophorese, Chromatographie usw.), sind die Größengrenzen, die Peptide von Polypeptiden und Proteinen unterscheiden, nicht absolut. Daher können im Kontext der vorliegenden Erfindung die Begriffe „Peptid“, „Polypeptid“ und „Protein“ austauschbar verwendet werden, und der Begriff „Polypeptid“ wird oft bevorzugt.
• Polypeptide können ferner Multimere wie Dimere, Trimere und höhere Oligomere bilden, die aus mehr als einem Polypeptidmolekül bestehen. Polypeptidmoleküle, die solche Dimere, Trimere usw. bilden, können identisch oder nicht identisch sein. Die entsprechenden Strukturen höherer Ordnung solcher Multimere werden folglich als Homo- oder Heterodimere, Homo- oder Heterotrimere usw. bezeichnet. Ein Beispiel für ein Hereteromultimer ist ein Antikörper oder ein Immunglobulinmolekül, das in seiner natürlich vorkommenden Form aus zwei identischen leichten Polypeptidketten und zwei identischen schweren Polypeptidketten besteht. Die Begriffe „Peptid“, „Polypeptid“ und „Protein“ beziehen sich auch auf natürlich modifizierte Peptide / Polypeptide / Proteine, wobei die Modifikation z. B. durch posttranslationale Modifikationen wie Glykosylierung, Acetylierung, Phosphorylierung und dergleichen erreicht wird. Ein „Peptid“, „Polypeptid“ oder „Protein“, auf das hier Bezug genommen wird, kann auch chemisch modifiziert sein, wie beispielsweise pegyliert. Solche Modifikationen sind auf dem Fachgebiet gut bekannt.
• Das Antikörperkonstrukt der vorliegenden Erfindung wird typischerweise in einer pharmazeutischen Zusammensetzung oder einer Formulierung formuliert. Materialien einer pharmazeutischen Zusammensetzung werden üblicherweise in Konzentrationen formuliert, die für den Verabreichungsort akzeptabel sind. Formulierungen und Zusammensetzungen können somit erfindungsgemäß zur Abgabe auf jedem geeigneten Verabreichungsweg gestaltet werden.
• Der Begriff „pharmazeutische Zusammensetzung“, wie hier verwendet, bezieht sich auf eine Zusammensetzung, die zur Verabreichung an einen Patienten, vorzugsweise einen menschlichen Patienten, geeignet ist. Die besonders bevorzugte pharmazeutische Zusammensetzung dieser Erfindung umfasst ein oder eine Vielzahl der erfindungsgemäßen Antikörperkonstrukt(e), üblicherweise in einer therapeutisch wirksamen Menge. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann ferner geeignete Formulierungen von einem oder mehreren (pharmazeutisch wirksamen) Trägern, Stabilisatoren, Exzipienten, Verdünnungsmitteln, Lösungsvermittlern, Tensiden, Emulgatoren, Konservierungsmitteln und/oder Adjuvantien umfassen. Akzeptable Bestandteile der Zusammensetzung sind bei den verwendeten Dosierungen und Konzentrationen für die Empfänger typischerweise nicht toxisch. Erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzungen schließen flüssige, gefrorene und lyophilisierte Zusammensetzungen ein, sind aber nicht darauf beschränkt. Wenn die pharmazeutische Zusammensetzung lyophilisiert worden ist, wird das lyophilisierte Material vor der Verabreichung in einer geeigneten Flüssigkeit rekonstituiert. Das lyophilisierte Material kann z. B. in bakteriostatischem Wasser zur Injektion (BWFI), physiologischer Kochsalzlösung, phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) oder derselben Formulierung, in der das Protein vor der Lyophilisierung war, rekonstituiert werden.
• Die Zusammensetzungen können einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfassen. Im Allgemeinen bedeutet „pharmazeutisch verträglicher Träger“, wie hierin verwendet, jede und alle wässrigen und nichtwässrigen Lösungen, sterilen Lösungen, Lösungsmittel, Puffer, z. B. phosphatgepufferten Salzlösungen (PBS), Wasser, Suspensionen, Emulsionen, wie Öl/Wasser-Emulsionen, verschiedenen Arten von Netzmitteln, Liposomen, Dispersionsmedien und Beschichtungen, die mit der pharmazeutischen Verabreichung, insbesondere mit der parenteralen Verabreichung verträglich sind. Die Verwendung solcher Medien und Mittel in pharmazeutischen Zusammensetzungen ist auf dem Fachgebiet wohlbekannt, und die Zusammensetzungen, die solche Träger umfassen, können durch wohlbekannte herkömmliche Verfahren formuliert werden.
• Bestimmte Ausführungsformen stellen pharmazeutische Zusammensetzungen bereit, die das Antikörperkonstrukt der Erfindung und ferner einen oder mehrere Hilfsstoffe umfassen. Hilfsstoffe können für eine Vielzahl von Zwecken verwendet werden, wie zum Beispiel zum Einstellen der physikalischen, chemischen oder biologischen Eigenschaften von Formulierungen, wie zum Einstellen der Viskosität, und/oder von Verfahren der Erfindung, um die Wirksamkeit zu verbessern und/oder solche Formulierungen und Verfahren gegen Abbau und Verderb, z. B. aufgrund von Beanspruchungen zu stabilisieren, die während der Herstellung, des Versands, der Lagerung, der Vorbereitung vor der Verwendung, der Verabreichung und danach auftreten. Hilfsstoffe sollten im Allgemeinen in den niedrigsten wirksamen Konzentrationen verwendet werden.
• In bestimmten Ausführungsformen kann die pharmazeutische Zusammensetzung auch Formulierungsmaterialien/Stoffe enthalten, um bestimmte Eigenschaften der Zusammensetzung zu modifizieren, beizubehalten oder zu bewahren, wie z. B. den pH-Wert, die Osmolarität, die Viskosität, die Klarheit, die Farbe, die Isotonizität, den Geruch, die Sterilität, die Stabilität und die Auflösungs- oder Freisetzungs-, Adsorptions- oder Penetrationsrate (siehe Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe, 1990, Mack Publishing Company).
• Wie hierin verwendet, schließen die Singularformen „ein“, „einer“, „eine“ und „der“, „die“, „das“ Verweise auf den Plural ein, sofern der Kontext nicht eindeutig etwas anderes angibt. Demnach schließt zum Beispiel ein Verweis auf „ein Reagens“ eine oder mehrere derartiger Reagenzien ein und ein Verweis auf „das Verfahren“ schließt einen Verweis auf äquivalente Schritte und Verfahren ein, die einem durchschnittlichen Fachmann bekannt sind und für die hier beschriebenen Verfahren modifiziert oder ausgetauscht werden können.
• Sofern nicht anderweitig angegeben, bezieht sich der Begriff „mindestens“ vor einer Reihe von Elementen auf jedes Element in der Reihe. Fachkreise werden viele Äquivalente für die spezifischen hier beschriebenen erfindungsgemäßen Ausführungsformen erkennen oder in der Lage sein, diese unter Verwendung lediglich von Routineversuchen zu ermitteln. Derartige Äquivalente sollen durch die vorliegende Erfindung eingeschlossen werden.
• Der Begriff „und/oder“, wo immer er hierin verwendet wird, schließt die Bedeutung von „und“, „oder“ und „alle oder eine beliebige andere Kombination der durch den Begriff verbundenen Elemente“ ein.
• Der Begriff „ungefähr“ oder „etwa“, wie er hier verwendet wird, bedeutet innerhalb von ±20 %, vorzugsweise innerhalb von ±15 %, mehr bevorzugt innerhalb von ±10 % und am meisten bevorzugt innerhalb von ±5 % eines gegebenen Wertes oder Bereichs. Er schließt auch den konkreten Wert ein, z. B. schließt „ungefähr 50“ den Wert „50“ ein.
• In dieser Beschreibung und den Ansprüchen sind, sofern der Kontext nichts anderes erfordert, das Wort „umfassen“ und Variationen wie „umfasst“ und „umfassend“ so zu verstehen, dass eine angegebene ganze Zahl oder ein Schritt oder eine Gruppe von ganzen Zahlen oder Schritten eingeschlossen ist, jedoch eine beliebige andere ganze Zahl oder ein anderer Schritt oder eine andere Gruppe von ganzen Zahlen oder Schritten nicht ausgeschlossen ist. Wenn hier verwendet, kann der Begriff „umfassend“ durch den Begriff „enthaltend“ oder „einschließend“ oder manchmal, wenn hier verwendet, durch den Begriff „aufweisend“ ersetzt werden.
• Wenn hier verwendet, schließt „bestehend aus“ jedes Element, jeden Schritt oder jeden Bestandteil aus, der nicht im Anspruchselement angegeben ist. Wenn es hier verwendet wird, schließt „bestehend im Wesentlichen aus“ keine Materialien oder Schritte aus, welche die grundlegenden und neuen Merkmale des Anspruchs nicht erheblich beeinflussen.
• In jedem Fall kann hier jeder der Begriffe „umfassend“, „im Wesentlichen bestehend aus“ und „bestehend aus“ durch einen der beiden anderen Begriffe ersetzt werden.
• Es versteht sich, dass die obige Beschreibung und die folgenden Beispiele beispielhafte Anordnungen darstellen, die vorliegende Erfindung jedoch nicht auf die bestimmten hier beschriebenen Verfahren, Techniken, Protokolle, Materialien, Reagenzien, Substanzen usw. beschränkt ist und als solche variieren kann. Die hierin verwendete Terminologie dient nur dem Zweck der Beschreibung bestimmter Ausführungsformen und soll den Schutzumfang der vorliegenden Erfindung, der ausschließlich durch die Ansprüche definiert ist, nicht einschränken. Aspekte der Erfindung sind in den unabhängigen Ansprüchen angegeben. Einige optionale Merkmale der Erfindung sind in den abhängigen Ansprüchen angegeben.
• Alle Veröffentlichungen und Patente, die im gesamten Text dieser Spezifikation zitiert werden (einschließlich aller Patente, Patentanmeldungen, wissenschaftlichen Veröffentlichungen, Herstellerspezifikationen, Anweisungen usw.), unabhängig davon, ob oben oder unten erwähnt, werden hiermit in ihrer Gesamtheit durch Bezugnahme aufgenommen. Nichts hierin ist als ein Eingeständnis zu verstehen, dass die Erfindung nicht berechtigt ist, eine solche Offenbarung aufgrund einer früheren Erfindung vorzuziehen. In dem Maße, in dem das durch Bezugnahme aufgenommene Material dieser Spezifikation widerspricht oder mit dieser nicht übereinstimmt, wird die Spezifikation ein solches Material aufheben.
• Ein besseres Verständnis der vorliegenden Erfindung und ihrer Vorteile ergibt sich aus den folgenden Beispielen, die nur zur Veranschaulichung dienen. Die Beispiele sind nicht so auszulegen und zu verstehen, dass sie den Umfang der vorliegenden Erfindung in irgendeiner Weise einschränken.
• BEISPIELE
• Studienprotokoll für klinische Studien
• AMG 420 wurde vier Wochen lang als kontinuierliche IV (cIV) -Infusion verabreicht, gefolgt von einer Behandlungspause von zwei Wochen, wobei die Dosiswerte von 0,2 µg/Tag bis 800 µg/Tag anstiegen. Auf Kohorten von Einzelpatienten (0,2 µg/Tag - 0,4 µg/Tag - 0,8 µg/Tag - 1,6 µg/Tag) folgten Kohorten von 3-6 Patienten (3,2 µg/Tag - 6,5 µg/Tag - 13 µg/Tag - 25 µg/Tag - 50 µg/Tag - 100 µg/Tag - 200 µg/Tag - 400 µg/Tag - 800 µg/Tag). Insgesamt wurden 13 Dosiskohorten abgeschlossen. Die Behandlung dauerte bis zu fünf 4-wöchige Ein-/2-wöchige Aus-Zyklen, wobei 5 weitere Zyklen im Falle eines wahrgenommenen klinischen Nutzens gegeben wurden. In Frage kommende Patienten waren ≥ 18 Jahre alt und hatten ein rezidiviertes/refraktäres MM und ein Fortschreiten nach mehr als zwei vorangegangenen Behandlungslinien (einschließlich ≥ 1 Proteasominhibitor und ≥ 1 immunmodulatorischem Arzneimittel = IMiD). Die MRD-Antwort wurde für diese Studie definiert als <1 Tumorzelle / 10⁴ normale Zellen im Knochenmark per FACS unter Verwendung von Antikörpern gegen cytIgλ, cytIgκ, CD19, CD56 oder CD138, CD38 und CD45.
• Ergebnisse
• 35 Patienten erhielten AMG 420 (0,2-800 µg/Tag). Das mittlere Alter (SD) betrug 63,8 (8,7) Jahre, das Durchschnittsalter 65 Jahre und das Mindestalter 39-79 Jahre. 22 (63 %) der Patienten waren männlich. Zwei Patienten absolvierten 10 Zyklen. Die 35 Patienten wurden für einen Mittelwert (SD) von 2,3 (2,3) Zyklen und einen Median (min-max) von 1 (1-10) Zyklen behandelt. Die Behandlungsteilnehmer (n = 8) wurden für einen Mittelwert (SD) von 6,8 (4,5) Zyklen und einen Median (min-max) von 3,5 (2-10) Zyklen behandelt.
• Bis einschließlich 800 µg/Tag wurden keine Anti-AMG 420-Antikörper nachgewiesen, und bis zu 400 µg/Tag wurden keine dosislimitierenden Toxizitäten (DLTs) beobachtet. Bei zwei von drei Patienten, die 800 µg/Tag AMG 420 erhalten hatten, traten DLTs auf: Ein Patient, der innerhalb eines Tages nach Beginn der Behandlung mit Fieber, Bluthochdruck, Tachykardie und retrograder Amnesie ein Zytokinfreisetzungssyndrom 3. Grades (CRS) hatte (die Symptome verschwanden nach Absetzen des Arzneimittels); und ein Patient mit einer Polyneuropathie 3. Grades (PPN), die einen Krankenhausaufenthalt mit anschließender vollständiger Genesung erforderte. Im letzteren Fall nahm das M-Protein nach 15 Tagen Behandlung um 60 % ab.
• Sechs Patienten hatten ein vollständiges Ansprechen (CR), das anhand der IMWG-Ansprechkriterien bewertet wurde: je ein Patient mit 6,5 µg/Tag, 100 µg/Tag und 200 µg/Tag und Baumpatienten mit 400 µg/Tag; das Ansprechen für diese letzten drei Patienten war noch nicht abgeschlossen (≥4,6 Monate). Es gab auch zwei partielle Remissionen: ein partielles Ansprechen (PR) bei 50 µg/Tag und ein sehr gutes partielles Ansprechen (VGPR) bei 800 µg/Tag. Die Ansprechdauer betrug bis zu 8 Zyklen; 1 Patient hatte während der Zyklen 3-10 ein partielles Ansprechen. Vier der sechs Patienten mit CR waren MRDnegativ: ein Patient mit 200 µg/Tag und alle drei Patienten mit 400 µg/Tag. In einer zusätzlichen Dosisbestätigungskohorte (400 µg/Tag) hatten zwei von drei Patienten PRs ab Zyklus 1. Somit betrug bei einer Dosis von 400 µg/Tag die objektive Ansprechrate (ORR) 5/6; und alle 5 Patienten sprachen während eines Zeitraums von mindestens zwei Monaten (Behandlung läuft) und bis zu 7 Monaten oder länger (Behandlung läuft) auf die Behandlung an.
• Nach cIV-Infusion von AMG 420 wurden in etwa 2 Tagen freie Steady-State-Konzentrationen (Css) erreicht und blieben über die Infusionsdauer stabil. Die mittleren freien AMG 420 Css-Werte nahmen im Allgemeinen mit zunehmender AMG 420-Dosis zu.
• Aktualisierte Ergebnisse
• Die folgende Ergebnisaktualisierung schließt die oben beschriebenen Ergebnisse (Punkt 2) ein und fügt Informationen zu weiteren mit AMG 420 behandelten Patienten hinzu, wie im Studienprotokoll der klinischen Studie (Punkt 1) beschrieben. 42 Patienten erhielten AMG 420 mit 0,2-800 µg/Tag. Das Durchschnittsalter betrug 65 Jahre und die durchschnittliche Krankheitsdauer 5,2 Jahre. 64 % der Patienten waren männlich. Die Patienten wurden für einen durschnittlichen (Bereich) von 1 (1-10) Zyklen behandelt; die Responder wurden für einen durchschnittlichen (Bereich) von 7 (1-10) Zyklen behandelt. Acht Patienten absolvierten 5 Zyklen und anschließend entweder 10 Zyklen (n = 3), unterbrachen (n = 3) oder sind noch in Behandlung (n = 2). Bei keinem Patienten wurden Anti-AMG 420-Antikörper nachgewiesen.
• CR, PR und VGPR wurden anhand von IMWG-Ansprechkriterien beurteilt. Während der Dosissteigerung zeigten sich Reaktionen ab 6,5 µg/Tag (ein CR bei dieser Dosis). Es gab ein PR bei 50 µg/Tag, ein CR bei 100 µg/Tag und ein MRD-negatives CR bei 200 µg/Tag. Bei 400 µg/Tag betrug die Rücklaufquote 70 % (7/10), einschließlich fünf MRD-negative CRs (50 %), einem VGPR und einem PR. Somit betrug bei einer Dosis von 400 µg/Tag die objektive Ansprechrate (ORR) 7/10 (70 %). Alle sieben Patienten sprachen im ersten Zyklus an, einige sprachen länger als 1 Jahr an. Das Ansprechen bei dieser Dosis dauerte mindestens durchschnittlich 9,0 Monate (Bereich 5,8-13,6 + Monate), wobei zwei Patienten weiterbehandelt wurden. Insgesamt hatten sechs Patienten zum Zeitpunkt der Datenunterbrechung MRD-negative CRs (eine bei 200 µg/Tag, fünf bei 400 µg/Tag), zusätzlich drei CRs (bei 6,5, 100 und 800 µg/Tag), zwei VGPRs (bei 400 und 800 µg/Tag) und zwei PRs (bei 50 und 400 µg/Tag). Die durschnittliche Zeit bis zu einem Ansprechen betrug 1 Monat, wobei 11 von 13 ansprechenden Patienten (d. h. alle ansprechenden Personen, die ≥100 µg/Tag erhielten) im ersten Zyklus ansprachen. Das beste Ansprechen trat während Zyklus 1 (n = 4), Zyklus 2 (n = 2), Zyklus 3 (n = 5) oder im Follow-up (n = 2) auf. Das Ansprechen dauerte mindestens durchschnittlich 8,4 Monate (Bereich: 2,5-15,5 Monate) und lag bei drei Patienten über einem Jahr. Bei 7/13 Patienten war das Ansprechen bei der letzten Beobachtung noch nicht abgeschlossen. Bei den drei Patienten mit Nachbehandlungsdaten dauerte das Ansprechen nach der letzten Beobachtung bis zu 11 Monate nach der Behandlung. In einem Fall hatte ein Patient, der die Behandlung wegen Polyneuropathie nach 2 Wochen abbrach, fast 9 Monate später ein CR. MRD-negative Antworten dauerten durchschnittlich 9,6 Monate (Bereich 2,8-12,8 Monate). Die Reaktionen wurden bei Patienten mit allen zytogenetischen Risikokategorien beobachtet, einschließlich 5/13 Respondern mit Hochrisiko-Zytogenetik.
• In dieser Studie wurden 800 µg/Tag aufgrund von Grad-3-Zytokin-Freisetzungssyndrom und Grad-3-Polyneuropathie, die beide gelöst wurden, als nicht tolerierbar betrachtet. Diese DLTs wurden bei zwei von drei Patienten mit 800 µg/Tag beobachtet.
• Die Untersuchung der BCMA-Expression an der Basiszelloberfläche ergab, dass BCMA bei allen Patienten auf Myelomzellen exprimiert wurde, ohne dass sich die Expressionsniveaus nach dem Ansprechstatus unterschieden. Es gab auch keinen Unterschied zwischen Respondern und Non-Respondern für den Prozentsatz der Plasmazellen im Knochenmark, die BCMA-positiv waren, oder für den Prozentsatz der Myelomzellen im Knochenmark zu Studienbeginn.
• Die IMWG-Ansprechkriterien für ein vollständiges Ansprechen (siehe auch http://imwg.myeloma.org/international-myeloma-working-group-imwg-uniform-response-criteria-formultiple-myeloma/) sind:
• • Negative M-Protein-Immunfixierung auf Serum und Urin,
• • Verschwinden von Weichteilplasmozytomen und
• • <5 % Plasmazellen im Knochenmark
• Die IMWG-Ansprechkriterien für ein partielles Ansprechen sind:
• • M-Protein-Elektrophorese: ≥ 50% Reduzierung des Serum-M-Proteins und Reduzierung des M-Proteins im Urin in 24 Stunden ≥90 % oder bis <200 mg/24 h
• • Freie leichte Ketten (FLC): Wenn das Serum- und das Urin-M-Protein nicht messbar sind, ist anstelle der M-Protein-Kriterien eine Verringerung des Unterschieds zwischen beteiligten und nicht beteiligten FLC-Spiegeln um ≥ 50 % erforderlich
• • Wenn Serum und Urin-M-Protein nicht messbar sind und der serumfreie Lichttest auch nicht messbar ist: Anstelle von M-Protein ist eine Reduzierung der Plasmazellen um ≥ 50 % erforderlich, vorausgesetzt, der Prozentsatz der Knochenmark-Plasmazellen zu Studienbeginn war ≥ 30 %
• • Zusätzlich zu den oben aufgeführten Kriterien, falls zu Beginn vorhanden, ist auch eine Verringerung der Größe von Weichgewebeplasmozytomen um ≥ 50 % erforderlich
• Die IMWG-Ansprechkriterien für ein sehr gutes partielles Ansprechen sind:
• • Serum- und Urin-M-Protein durch Immunfixierung nachweisbar, jedoch nicht durch Elektrophorese oder ≥ 90 %-ige Reduzierung des Serum-M-Protein-Spiegels plus Urin-M-Protein-Spiegels < 100 mg/24 h
• ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
• Diese Liste der vom Anmelder aufgeführten Dokumente wurde automatisiert erzeugt und ist ausschließlich zur besseren Information des Lesers aufgenommen. Die Liste ist nicht Bestandteil der deutschen Patent- bzw. Gebrauchsmusteranmeldung. Das DPMA übernimmt keinerlei Haftung für etwaige Fehler oder Auslassungen.
• Zitierte Patentliteratur
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• Palumbo A. J Clin Oncol. 2014 Feb 20; 32(6): 587-600 [0027]

Claims (10)

1. Antikörperkonstrukt, das eine erste Domäne, die an BCMA bindet, und eine zweite Domäne, die an CD3 bindet, zur Verwendung bei der Behandlung oder Besserung eines BCMA-positiven Neoplasmas umfasst, wobei das Antikörperkonstrukt in einer Dosis von 6,5 µg/Tag bis zu 650 µg/Tag in mindestens einem Zyklus verabreicht wird, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von mindestens sieben aufeinanderfolgenden Tagen umfasst.
2. Antikörperkonstrukt nach Anspruch 1, das für 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 oder 10 Zyklen verabreicht wird.
3. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei ein Zyklus einen Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts gefolgt von einem Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts umfasst.
4. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei der Verabreichungszeitraum des Antikörperkonstrukts von einer bis acht Wochen, vorzugsweise von zwei bis sechs Wochen und mehr bevorzugt von 25 bis 30 Tagen beträgt.
5. Antikörperkonstrukt nach Anspruch 3 oder 4, wobei der Zeitraum ohne Verabreichung des Antikörperkonstrukts von einer Woche bis drei Monaten, vorzugsweise von einer Woche bis zwei Monaten und mehr bevorzugt von einer Woche bis einem Monat beträgt.
6. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei die Dosis des Antikörperkonstrukts während jedes Zyklus konstant ist.
7. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, das parenteral, vorzugsweise intravenös und mehr bevorzugt durch kontinuierliche intravenöse Verabreichung verabreicht wird.
8. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das BCMA-positive Neoplasma ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus multiplem Myelom, rezidiviertem und/oder refraktärem multiplem Myelom, schwerkettigem multiplem Myelom, leichtkettigem multiplem Myelom, extramedullärem Myelom, Plasmazytom, Plasmazell-Leukämie, Waldenström-Makroglobulinämie und schwelendem Myelom.
9. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei a) das Antikörperkonstrukt ein einkettiges Polypeptid ist, b) die erste Domäne im Format eines scFv vorliegt, c) die zweite Domäne im Format eines scFv vorliegt und/oder d) die erste Domäne und die zweite Domäne über einen Linker, vorzugsweise einen Peptidlinker, mehr bevorzugt einen Glycin/Serinlinker verbunden sind.
10. Antikörperkonstrukt nach einem der vorstehenden Ansprüche, das ein Polypeptid mit einer Aminosäuresequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus denjenigen, die in SEQ ID NOs: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530 und 661 dargestellt sind.