DE102015208655A1

DE102015208655A1 - enzyme stabilizers

Info

Publication number: DE102015208655A1
Application number: DE102015208655.0A
Authority: DE
Inventors: Timothy O'Connell; Nina Mußmann; Daniela Herbst; Inken Prüser
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2015-05-11
Filing date: 2015-05-11
Publication date: 2016-11-17
Also published as: WO2016180659A1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend mindestens eine Protease und mindestens eine Verbindung der Formel (I), die als Proteaseinhibitor wirkt und somit ein geeigneter Enzymstabilisator ist, sowie die Verwendung dieser Verbindungen als Enzymstabilisator in protease-haltigen Wasch- und Reinigungsmitteln. Ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind die entsprechenden Wasch- und Reinigungsverfahren und die Verwendung der hierin beschriebenen Mittel.The present invention relates to detergents or cleaners containing at least one protease and at least one compound of formula (I), which acts as a protease inhibitor and thus is a suitable enzyme stabilizer, and the use of these compounds as enzyme stabilizer in protease-containing detergents and cleaners. Also part of the invention are the corresponding washing and cleaning processes and the use of the agents described herein.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend mindestens ein Enzym und mindestens eine Verbindung, die als Proteaseinhibitor wirkt und somit ein geeigneter Enzymstabilisator ist, sowie die Verwendung dieser Verbindungen als Enzymstabilisator in Enzymhaltigen Wasch- und Reinigungsmitteln. The present invention relates to detergents and cleaners containing at least one enzyme and at least one compound which acts as a protease inhibitor and is thus a suitable enzyme stabilizer, and to the use of these compounds as enzyme stabilizers in enzyme-containing detergents and cleaners.

Der Einsatz von Enzymen in Wasch- und Reinigungsmitteln ist seit Jahrzehnten im Stand der Technik etabliert. Sie dienen dazu, das Leistungsspektrum der betreffenden Mittel entsprechend ihren speziellen Aktivitäten zu erweitern. Hierzu gehören insbesondere hydrolytische Enzyme wie Proteasen, Amylasen, Lipasen und Cellulasen. Die ersten drei genannten hydrolysieren Proteine, Stärke und Fette und tragen somit unmittelbar zur Schmutzentfernung bei. Cellulasen werden insbesondere wegen ihrer Gewebewirkung eingesetzt. Eine weitere Gruppe von Wasch- und Reinigungsmittelenzymen sind oxidative Enzyme, insbesondere Oxidasen, die ggf. im Zusammenspiel mit anderen Komponenten vorzugsweise dazu dienen, Anschmutzungen zu bleichen oder die bleichenden Agentien in situ zu erzeugen. Neben diesen Enzymen, die einer fortwährenden Optimierung unterworfen werden, werden laufend weitere Enzyme für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln bereitgestellt, um insbesondere spezielle Anschmutzungen optimal angehen zu können, wie beispielsweise Pektinasen, β-Glucanasen, Mannanasen oder weitere Hemicellulasen (Glykosidasen) zur Hydrolyse insbesondere spezieller pflanzlicher Polymere. The use of enzymes in detergents and cleaners has been established in the art for decades. They serve to extend the range of services of the funds concerned according to their specific activities. These include in particular hydrolytic enzymes such as proteases, amylases, lipases and cellulases. The first three hydrolyze proteins, starches and fats and thus contribute directly to soil removal. Cellulases are used in particular because of their tissue effect. Another group of washing and cleaning agent enzymes are oxidative enzymes, in particular oxidases, which, if appropriate, in combination with other components, are preferably used to bleach soiling or to produce the bleaching agents in situ. In addition to these enzymes, which are subjected to constant optimization, further enzymes are constantly being made available for use in detergents and cleaners in order to be able to optimally address particular soiling, such as pectinases, β-glucanases, mannanases or other hemicellulases (glycosidases) Hydrolysis in particular of special vegetable polymers.

Die am längsten etablierten und in praktisch allen modernen, leistungsfähigen Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme sind Proteasen und hierunter insbesondere Serin- Proteasen, zu denen erfindungsgemäß auch die Subtilasen gerechnet werden. Sie dienen dem Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Allerdings hydrolysieren sie auch sich selbst (Autoproteolyse) und alle anderen in den betreffenden Mitteln enthaltenen Proteine, d.h. insbesondere Enzyme. Dies geschieht besonders während des Reinigungsvorgangs, d.h. in der wässrigen Waschflotte, wenn vergleichsweise günstige Reaktionsbedingungen vorliegen. Dies geschieht in geringerem Ausmaße aber auch während der Lagerung der betreffenden Mittel, weshalb mit einer langen Lagerung immer auch ein gewisser Verlust der Proteaseaktivität sowie der Aktivitäten der anderen Enzyme einhergeht. Besonders problematisch ist dies in gelförmigen oder flüssigen und insbesondere in wasserhaltigen Rezepturen, weil in diesem mit dem enthaltenen Wasser sowohl das Reaktionsmedium als auch das Hydrolyse-Reagenz zur Verfügung stellen. The enzymes which are the longest-established and are contained in virtually all modern, powerful detergents and cleaners are proteases and, in particular, serine proteases, to which the subtilases according to the invention are also calculated. They serve the degradation of protein-containing stains on the cleaning material. However, they also hydrolyze themselves (autoproteolysis) and all other proteins contained in the agents concerned, i. especially enzymes. This happens especially during the cleaning process, i. in the aqueous wash liquor, if comparatively favorable reaction conditions are present. This occurs to a lesser extent but also during storage of the agents concerned, which is why a long storage always accompanied by a certain loss of protease activity and the activities of other enzymes. This is particularly problematic in gel or liquid and especially in water-containing formulations, because in this with the water contained both the reaction medium and the hydrolysis reagent available.

Ein Ziel bei der Entwicklung von Wasch- und Reinigungsmittelrezepturen besteht darin, die enthaltenen Enzyme besonders während der Lagerung zu stabilisieren. Darunter wird der Schutz gegen verschiedene ungünstige Einflüsse verstanden, wie beispielsweise gegen Denaturierung oder Zerfall durch physikalische Einflüsse oder Oxidation. Ein Schwerpunkt dieser Entwicklungen besteht im Schutz der enthaltenen Proteine und/oder Enzyme gegen proteolytische Spaltung. Diese kann durch den Aufbau physikalischer Barrieren erfolgen, etwa durch Verkapselung der Enzyme in speziellen Enzymgranulaten oder durch Konfektionierung der Mittel in Zwei- oder Mehrkammersystemen. Der andere vielfach beschrittene Weg besteht darin, chemische Verbindungen zuzusetzen, die die Proteasen inhibieren und somit insgesamt als Stabilisatoren für Proteasen und die anderen enthaltenen Proteine und Enzyme wirken. Es muss sich dabei um reversible Proteaseinhibitoren handeln, da die Proteaseaktivität nur vorübergehend, insbesondere während der Lagerung, nicht aber mehr während des Reinigungsprozesses unterbunden werden soll. One goal in the development of detergent formulations is to stabilize the enzymes contained, especially during storage. This is understood as protection against various unfavorable influences, such as denaturation or decay by physical influences or oxidation. One focus of these developments is the protection of the contained proteins and / or enzymes against proteolytic cleavage. This can be done by the construction of physical barriers, such as by encapsulation of the enzymes in special enzyme granules or by packaging the means in two- or multi-chamber systems. The other many pathway is to add chemical compounds that inhibit the proteases and thus act collectively as stabilizers for proteases and the other proteins and enzymes contained. It must be reversible protease inhibitors, since the protease activity is only temporarily, especially during storage, but not be suppressed during the cleaning process.

Als reversible Proteaseinhibitoren sind im Stand der Technik Polyole, insbesondere Glycerin und 1,2-Propylenglycol, Benzamidin-Hydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester etabliert. Darunter sind vor allem Derivate mit aromatischen Gruppen, etwa ortho-, meta- oder para-substituierte Phenylboronsäuren zu erwähnen, insbesondere 4-Formylphenyl-Boronsäure, beziehungsweise die Salze oder Ester der genannten Verbindungen. Ein besonders guter Schutz ergibt sich, wenn Borsäurederivate zusammen mit Polyolen eingesetzt werden, da diese dann einen das Enzym stabilisierenden Komplex bilden können. Auch Peptidaldehyde, das heißt Oligopeptide mit reduziertem C-Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren sind zu diesem Zweck beschrieben. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin. Auch spezifische, reversible Peptid-Inhibitoren sowie Fusionsproteine aus Proteasen und spezifischen Peptid-Inhibitoren werden hierfür eingesetzt. Polyols, in particular glycerol and 1,2-propylene glycol, benzamidine hydrochloride, borax, boric acids, boronic acids or their salts or esters are established as reversible protease inhibitors in the prior art. These include, in particular, derivatives with aromatic groups, for example ortho, meta or para-substituted phenylboronic acids, in particular 4-formylphenylboronic acid, or the salts or esters of the compounds mentioned. A particularly good protection results when boric acid derivatives are used together with polyols, since these can then form a complex stabilizing the enzyme. Also peptide aldehydes, that is, oligopeptides with reduced C-terminus, especially those of 2 to 50 monomers are described for this purpose. Among the peptidic reversible protease inhibitors include ovomucoid and leupeptin. Also, specific, reversible peptide inhibitors and fusion proteins from proteases and specific peptide inhibitors are used for this purpose.

Weitere etablierte Enzymstabilisatoren sind Aminoalkohole wie Mono-, Di-, Triethanol- und -propanolamin und deren Mischungen, aliphatische Carbonsäuren bis zu C₁₂, wie beispielsweise Bernsteinsäure, andere Dicarbonsäuren oder Salze der genannten Säuren. Auch endgruppenverschlossene Fettsäureamidalkoxylate sind für diesen Zweck etabliert. Bestimmte als Builder eingesetzte organische Säuren vermögen, wie in WO 97/18287 offenbart, zusätzlich zu ihrer Builder-Funktion auch ein Enzym zu stabilisieren. Other established enzyme stabilizers are amino alcohols such as mono-, di-, triethanol- and -propanolamine and mixtures thereof, aliphatic carboxylic acids up to C ₁₂ , such as succinic acid, other dicarboxylic acids or salts of said acids. End-capped fatty acid amide alkoxylates are also established for this purpose. Certain organic acids used as builders are capable of, as in WO 97/18287 discloses, in addition to its builder function, also to stabilize an enzyme.

Als Wasch- und Reinigungsmittelproteasen sind verschiedene Protease-Klassen etabliert, beispielsweise Metalloproteasen. Unter den Wasch- und Reinigungsmittelproteasen nehmen Proteasen vom Subtilisin-Typ (Subtilasen, Subtilopeptidasen, EC 3.4.21.62) aufgrund ihrer günstigen enzymatischen Eigenschaften wie Stabilität oder pH-Optimum allerdings eine herausragende Stellung ein. Sie werden aufgrund der katalytisch wirksamen Aminosäuren den Serin-Proteasen zugerechnet. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich. Einen Überblick über diese Familie bietet beispielsweise der Artikel „Subtilases: Subtilisin-like Proteases" von R. Siezen, Seite 75–95 in „Subtilisin enzymes", herausgegegeben von R. Bott und C. Betzel, New York, 1996 . Subtilasen werden natürlicherweise von Mikroorganismen gebildet; hierunter sind insbesondere die von Bacillus-Spezies gebildeten und sekretierten Subtilisine als bedeutendste Gruppe innerhalb der Subtilasen zu erwähnen. As detergency and detergent proteases various protease classes are established, for example metalloproteases. However, among the detergent and detergent proteases, subtilisin-type proteases (subtilases, subtilopeptidases, EC 3.4.21.62) occupy an outstanding position due to their favorable enzymatic properties such as stability or pH optimum. They are attributed to the serine proteases due to the catalytically active amino acids. They act as nonspecific endopeptidases, that is, they hydrolyze any acid amide linkages that are internal to peptides or proteins. Their pH optimum is usually in the clearly alkaline range. An overview of this family offers for example the Article "Subtilases: Subtilisin-like Proteases" by R. Siezen, pages 75-95 in "Subtilisin enzymes", edited by R. Bott and C. Betzel, New York, 1996 , Subtilases are naturally produced by microorganisms; Of these, in particular, the subtilisins formed and secreted by Bacillus species are to be mentioned as the most important group within the subtilases.

Es wird deshalb besonders daran gearbeitet, reversible Inhibitoren gerade dieser Enzymklasse zur Verfügung zu stellen. Dabei haben sich Polyole wie Glycerin und 1,2-Propylenglycol aufgrund ihrer hohen notwendigen Einsatzkonzentrationen als unvorteilhaft erwiesen, weil die übrigen Wirkstoffe der betreffenden Mittel damit nur noch in entsprechend geringeren Anteilen enthalten sein können. It is therefore particularly worked to provide reversible inhibitors just this class of enzymes available. In this case, polyols such as glycerol and 1,2-propylene glycol have proved to be unfavorable due to their high necessary use concentrations, because the other active ingredients of the respective agents can thus be contained only in proportionally smaller proportions.

Unter den bereits in vergleichsweise niedriger Konzentration wirksamen Serin-Protease-Inhibitoren nehmen Borsäurederivate eine herausragende Stellung ein. Unabhängig von ihrer stabilisierenden Wirkung weisen die Borsäurederivate jedoch einen entscheidenden Nachteil auf: Viele davon, wie beispielsweise Borat, bilden mit einigen anderen Wasch- bzw. Reinigungsmittelinhaltsstoffen unerwünschte Nebenprodukte, so dass diese in den betreffenden Mitteln nicht mehr für den erwünschten Reinigungszweck zur Verfügung stehen oder sogar als Verunreinigung auf dem Waschgut zurückbleiben. Boric acid derivatives occupy an outstanding position among the serine protease inhibitors, which are effective at comparatively low concentrations. However, regardless of their stabilizing effect, the boric acid derivatives have a significant disadvantage: many of them, such as borate, form undesirable by-products with some other detergent ingredients, so that they are no longer available in the agents concerned for the desired cleaning purpose, or even remain as an impurity on the laundry.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es daher, bor-freie Verbindungen zu identifizieren, die als Proteaseinhibitoren wirken und für den Einsatz als Enzymstabilisatoren in Wasch- und Reinigungsmitteln geeignet sind. Hierbei war der Einsatz in insgesamt flüssigen, gelförmigen oder pastösen Wasch- und Reinigungsmitteln von besonderem Interesse, und darunter insbesondere in solchen, die Wasser enthalten. The object of the present invention was therefore to identify boron-free compounds which act as protease inhibitors and are suitable for use as enzyme stabilizers in detergents and cleaners. Here, the use in total liquid, gel or pasty detergents and cleaning agents of particular interest, and including in particular those containing water.

Diese Aufgabe wird durch Wasch- oder Reinigungsmittel gelöst, die mindestens eine Protease und mindestens einen Enzymstabilisator enthalten, wobei der mindestens eine Enzymstabilisator ausgewählt wird aus Verbindungen der allgemeinen Strukturformel (I) Z-A-NH-CH(R)-C(O)-X (I), wobei A ein Aminosäurerest ist (bevorzugte Aminosäurereste A sind ausgewählt aus Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe, Lys); X Wasserstoff oder CF₃ ist; Z ein N-Verkappungsrest ausgewählt aus Phosphoramidat [(R'O)₂(O)P-], Sulfenamid [(SR')₂-], Sulfonamid [(R'(O)₂S-], Sulfonsäure [SO₃H], Phosphinamid [(R')₂(O)P-], Sulfamoyl Derivaten [R'O(O)₂S-], Thioharnstoff [(R')₂N(O)C-], Thiocarbamat [R'O(S)C-], Phosphonat [R'-P(O)OH], Amidophosphat [R'O(OH)(O)P-], Carbamat (R'O(O)C-) und Harnstoff (R'NH(O)C-) ist, wobei jedes R' unabhängig ausgewählt wird aus geradkettigen oder verzweigten C1-C6 unsubstituierten Alkyl-, Phenyl-, C7-C9 Alkylaryl- und Cycloalkyl-Resten, wobei der Cycloalkylring ein C4-C8 Cycloalkylring sein kann und ein oder mehrere Heteroatome enthalten kann, die ausgewählt werden aus O, N, und S; und R ausgewählt wird aus geradkettigen oder verzweigten C1-C6 unsubstituierten Alkyl-, Phenyl und C7-C9 Alkylarylresten. This object is achieved by washing or cleaning agents which comprise at least one protease and at least one enzyme stabilizer, the at least one enzyme stabilizer being selected from compounds of the general structural formula (I) ZA-NH-CH (R) -C (O) -X (I), wherein A is an amino acid residue (preferred amino acid residues A are selected from Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe, Lys); X is hydrogen or CF ₃ ; Z is an N-capping moiety selected from phosphoramidate [(R'O) ₂ (O) P-], sulfenamide [(SR ') ₂ -], sulfonamide [(R' (O) ₂ S-], sulfonic acid [SO ₃ H ], Phosphinamide [(R ') ₂ (O) P-], sulfamoyl derivatives [R'O (O) ₂ S-], thiourea [(R') ₂ N (O) C-], thiocarbamate [R'O (S) C-], phosphonate [R'-P (O) OH], amidophosphate [R'O (OH) (O) P-], carbamate (R'O (O) C-) and urea (R ') NH (O) C-), wherein each R 'is independently selected from C1 -C6 straight or branched unsubstituted alkyl, phenyl, C7-C9 alkylaryl and cycloalkyl radicals wherein the cycloalkyl ring may be a C4-C8 cycloalkyl ring and one or more heteroatoms selected from O, N, and S; and R is selected from C1 to C6 straight or branched unsubstituted alkyl, phenyl, and C7 to C9 alkylaryl radicals.

Bevorzugte Reste R werden ausgewählt aus Methyl, iso-Propyl, sec-Butyl, iso-Butyl, -C₆H₅, -CH₂-C₆H₅, und -CH₂-CH₂-C₆H₅, so dass der Teil -NH-CH(R)-C(O)-X der Verbindung der Formel (I) von den Aminosäuren Ala, Val, Ile, Leu, PGly (Phenylglycin), Phe und HPhe (Homophenylalanine) abgeleitet ist, indem die Carboxylgruppe in eine Aldehyd- oder Trifluoromethylketongruppe umgewandelt wird. Obwohl solche Reste daher keine Aminosäuren sind (obwohl sie aus einem Aminosäurevorläufer synthetisiert sein können), wird hierin bei den beispielhaft aufgelisteten Enzymstabilisatoren der Einfachheit halber der Aldehydteil der Inhibitoren, der von der entsprechenden Aminosäuren abgeleitet ist, durch den Zusatz "H" nach der analogen Aminosäure bezeichnet (z.B., steht "-AlaH" für den Rest "-NHCH(CH₃)C(O)H"). Trifluoromethylketone werden in gleicher Weise durch den Zusatz "CF₃" nach der analogen Aminosäure gekennzeichnet (z.B., steht "-AlaCF₃" für den Rest "-NHCH(CH₃)C(O)CF₃"). Preferred radicals R are selected from methyl, iso-propyl, sec-butyl, iso-butyl, -C ₆ H ₅ , -CH ₂ -C ₆ H ₅ , and -CH ₂ -CH ₂ -C ₆ H ₅ , so that the part -NH-CH (R) -C (O) -X of the compound of formula (I) is derived from the amino acids Ala, Val, Ile, Leu, PGly (phenylglycine), Phe and HPhe (homophenylalanines) by the Carboxyl group is converted into an aldehyde or Trifluoromethylketongruppe. Therefore, although such residues are not amino acids (although they may be synthesized from an amino acid precursor), for the sake of simplicity, the aldehyde portion of the inhibitors derived from the corresponding amino acids in the exemplified enzyme stabilizers will be identified by the suffix "H" after the analogous Denotes amino acid (eg, "-AlaH" represents the radical "-NHCH (CH ₃ ) C (O) H"). Trifluoromethyl ketones are identified in the same way by the addition "CF ₃ " after the analogous amino acid (eg, "-AlaCF ₃ " is the radical "-NHCH (CH ₃ ) C (O) CF ₃ ").

Die Aldehyde der vorliegenden Erfidnung können aus den entsprechenden Aminosäuren hergestellt werden, wobei die C-terminal Carboxylgruppe der Aminosäure in eine Aldehydgruppe umgewandelt wird. Derartige Aldehyde können mittels bekannter Verfahren hergestellt werden, wie z.B. in U.S. Pat. Nr. 5015627 , EP 0 185 930 , EP 0 583 534 und DE 3200812 beschrieben. The aldehydes of the present invention can be prepared from the corresponding amino acids, whereby the C-terminal carboxyl group of the amino acid is converted into an aldehyde group. Such aldehydes can be prepared by known methods, such as in US Pat. No. 5015627 . EP 0 185 930 . EP 0 583 534 and DE 3200812 described.

Die Trifluoromethylketone können ebenfalls aus den korrespondierenden Aminosäuren hergestellt werden, indem die C-terminal Carboxylgruppe in eine Trifluoromethylketongruppe umgewandelt wird. Solche Trifluoromethylketone können mittels bekannter Verfahren, wie beispielsweise in der EP 0 583 535 beschrieben, hergestellt werden. The trifluoromethyl ketones can also be prepared from the corresponding amino acids by converting the C-terminal carboxyl group into a trifluoromethyl ketone group. Such trifluoromethyl ketones can be synthesized by known methods, such as those described in U.S. Pat EP 0 583 535 described, are produced.

Das N-terminale Ende der Enzymstabilisatoren wird durch eine Schutzgruppe, die den N-Terminus verkappt geschützt, wobei die Gruppe ausgewählt wird aus Carbamaten, Harnstoffen, Sulfonamiden, Phosphonamiden, Thioharnstoffen, Sulfenamiden, Sulfonsäuren, Phosphinamiden, Thiocarbamaten, Amidophosphaten und Phosphonamiden. In einer bevorzugten Ausführungsform wird das N-terminale Ende jedoch durch eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylcarbamatgruppe [CH₃O-(O)C-; CH₃CH₂O-(O)C-; oder C₆H₅CH₂O-(O)C-], eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylharnstoffgruppe [CH₃NH-(O)C-; CH₃CH₂NH-(O)C-; or C₆H₅CH₂NH-(O)C-], eine Methyl-, Ethyl- oder Benzylsulfonamidgruppe [CH₃SO₂-; CH₃CH₂SO₂-; or C₆H₅CH₂SO₂-], oder eine Methyl-, Ethyl oder Benzylamidophosphatgruppe [CH₃O(OH)(O)P-; CH₃CH₂O(OH)(O)P-; or C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-] geschützt. The N-terminal end of the enzyme stabilizers is protected by a protecting group capping the N-terminus, the group being selected from carbamates, ureas, sulfonamides, phosphonamides, thioureas, sulfenamides, sulfonic acids, phosphinamides, thiocarbamates, amidophosphates and phosphonamides. However, in a preferred embodiment, the N-terminal end is replaced by a methyl, ethyl or benzyl carbamate group [CH ₃ O- (O) C-; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-; or C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-], a methyl, ethyl or benzyl urea group [CH ₃ NH- (O) C-; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-; or C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-], a methyl, ethyl or benzylsulfonamide group [CH ₃ SO ₂ -; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -; or C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -], or a methyl, ethyl or benzylamidophosphate group [CH ₃ O (OH) (O) P-; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-; or C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-].

Die Synthese der N-Verkappungsgruppen kann beispielsweise den folgenden Dokumenten entnommen werden: Protective Groups in Organic Chemistry, Greene, T., Wuts, P., John Wiley & Sons, New York, 1991, pp 309–405 ; March, J, Advanced Organic Chemistry, Wiley Interscience, 1985, pp. 445, 469 , Carey, F. Sundberg, R., Advanced Organic Chemistry, Part B, Plenum Press, New York, 1990, pp. 686–89 ; Atherton, E., Sheppard, R., Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical, 1989, pp. 3–4 ; Grant, G., Synthetic Peptides, W. H. Freeman & Co. 1992, pp. 77–103 ; Stewart, J., Young, J., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, IRL Press, 1984, pp. 3, 5, 11, 14–18, 28–29 . Bodansky, M., Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1988, pp. 62, 203, 59–69 ; Bodansky, M., Peptide Chemistry, Springer-Verlag, 1988, pp. 74–81 , Bodansky, M., Bodansky, A., The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1984, pp. 9–32 . The synthesis of the N-capping groups can be found, for example, in the following documents: Protective Groups in Organic Chemistry, Greene, T., Wuts, P., John Wiley & Sons, New York, 1991, pp 309-405 ; March, J, Advanced Organic Chemistry, Wiley Interscience, 1985, pp. 445, 469 . Carey, F. Sundberg, R., Advanced Organic Chemistry, Part B, Plenum Press, New York, 1990, p. 686-89 ; Atherton, E., Sheppard, R., Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical, 1989, pp. 3-4 ; Grant, G., Synthetic Peptides, WH Freeman & Co. 1992, pp. 77-103 ; Stewart, J., Young, J., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, IRL Press, 1984, pp. 3, 5, 11, 14-18, 28-29 , Bodansky, M., Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1988, pp. 62, 203, 59-69 ; Bodansky, M., Peptide Chemistry, Springer-Verlag, 1988, pp. 74-81 . Bodansky, M., Bodansky, A., The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1984, pp. 9-32 ,

Beispielhafte Enzymstabilisatoren, die erfindungsgemäß eingesetzt werden können, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf: CH₃O-(O)C-Leu-LeuH; CH₃O-(O)C-Ala-LeuH; CH₃CH₂O-(O)C-Ala-LeuH; C₆H₅CH₂O-(O)C-Ala-LeuH; CH₃O-(O)C-Ala-LeuCF₃; CH₃CH₂O-(O)C-Ala-LeuCF₃; C₆H₅CH₂O-(O)C-Ala-LeuCF₃; CH₃O-(O)C-Ala-IleH; CH₃CH₂O-(O)C-Ala-IleH; C₆H₅CH₂O-(O)C-Ala-IleH; CH₃O-(O)C-Ala-IleCF₃; CH₃CH₂O-(O)C-Ala-IleCF₃; C₆H₅CH₂O-(O)C-Ala-IleCF₃; CH₃O-(O)C-Gly-LeuH; CH₃CH₂O-(O)C-Gly-LeuH; C₆H₅CH₂O-(O)C-Gly-LeuH; CH₃O-(O)C-Gly-LeuCF₃; CH₃CH₂O-(O)C-Gly-LeuCF₃; C₆H₅CH₂O-(O)C-Gly-LeuCF₃; CH₃O-(O)C-Gly-IleH; CH₃CH₂O-(O)C-Gly-IleH; C₆H₅CH₂O-(O)C-Gly-IleH; CH₃O-(O)C-Gly-IleCF₃; CH₃CH₂O-(O)C-Gly-IleCF₃; C₆H₅CH₂O-(O)C-Gly-IleCF₃; CH₃NH-(O)C-Ala-LeuH; CH₃CH₂NH-(O)C-Ala-LeuH; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Ala-LeuH; CH₃NH-(O)C-Ala-LeuCF₃; CH₃CH₂NH-(O)C-Ala-LeuCF₃; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Ala-LeuCF₃; CH₃NH-(O)C-Ala-IleH; CH₃CH₂NH-(O)C-Ala-IleH; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Ala-IleH; CH₃NH-(O)C-Ala-IleCF₃; CH₃CH₂NH-(O)C-Ala-IleCF₃; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Ala-IleCF₃; CH₃NH-(O)C-Gly-LeuH; CH₃CH₂NH-(O)C-Gly-LeuH; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Gly-LeuH; CH₃NH-(O)C-Gly-LeuCF₃; CH₃CH₂NH-(O)C-Gly-LeuCF₃; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Gly-LeuCF₃; CH₃NH-(O)C-Gly-IleH; CH₃CH₂NH-(O)C-Gly-IleH; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Gly-IleH; CH₃NH-(O)C-Gly-IleCF₃; CH₃CH₂NH-(O)C-Gly-IleCF₃; C₆H₅CH₂NH-(O)C-Gly-IleCF₃; CH₃SO₂-Ala-LeuH; CH₃CH₂SO₂-Ala-LeuH; C₆H₅CH₂SO₂-Ala-LeuH; CH₃SO₂-Ala-LeuCF₃; CH₃CH₂SO₂-Ala-LeuCF₃; C₆H₅CH₂S₂-Ala-LeuCF₃; CH₃SO₂-Ala-IleH; CH₃CH₂SO₂-Ala-IleH; C₆H₅CH₂SO₂-Ala-IleH; CH₃SO₂-Ala-IleCF₃; CH₃CH₂SO₂-Ala-IleCF₃; C₆H₅CH₂SO₂-Ala-IleCF₃; CH₃SO₂-Gly-LeuH; CH₃CH₂SO₂-Gly-LeuH; C₆H₅CH₂SO₂-Gly-LeuH; CH₃SO₂-Gly-LeuCF₃; CH₃CH₂SO₂-Gly-LeuCF₃; C₆H₅CH₂SO₂-Gly-LeuCF₃; CH₃SO₂-Gly-IleH; CH₃CH₂SO₂-Gly-IleH; C₆H₅CH₂SO₂-Gly-IleH; CH₃SO₂-Gly-IleCF₃; CH₃CH₂SO₂-Gly-IleCF₃; C₆H₅CH₂SO₂-Gly-IleCF₃; CH₃O(OH)(O)P-Ala-LeuH; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Ala-LeuH; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Ala-LeuH; CH₃O(OH)(O)P-Ala-LeuCF₃; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Ala-LeuCF₃; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Ala-LeuCF₃; CH₃O(OH)(O)P-Ala-IleH; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Ala-IleH; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Ala-IleH; CH₃O(OH)(O)P-Ala-IleCF₃; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Ala-IleCF₃; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Ala-IleCF₃; CH₃O(OH)(O)P-Gly-LeuH; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Gly-LeuH; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Gly-LeuH; CH₃O(OH)(O)P-Gly-LeuCF₃; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Gly-LeuCF₃; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Gly-LeuCF₃; CH₃O(OH)(O)P-Gly-IleH; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Gly-IleH; C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Gly-IleH; CH₃O(OH)(O)P-Gly-IleCF₃; CH₃CH₂O(OH)(O)P-Gly-IleCF₃; und C₆H₅CH₂O(OH)(O)P-Gly-IleCF₃. In den vorstehenden Verbindungen wird die oben beschriebene Terminologie zur Kenntlichmachung der Aldehyd- bzw. Trifluoromethylketongruppen verwenden. Exemplary enzyme stabilizers that can be used in the present invention include, but are not limited to: CH ₃ O- (O) C-Leu-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Ala-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-Leu CF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Gly-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ NH- (O) C-Ala-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ NH- (O) C-Ala-IleCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ NH- (O) C-Gly-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuH; CH ₃ SO ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ S ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleH; CH ₃ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuH; CH ₃ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleH; CH ₃ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-Leu CF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuCF _3; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleH; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuCF _3; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleH; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ ; and C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ . In the above compounds, the terminology described above will be used to identify the aldehyde or trifluoromethyl ketone groups, respectively.

In verschiedenen Ausführungsformen umfasst die Erfindung auch alle Stereoisomere, insbesondere Enantiomere und Diastereomere, Tautomere und Salze der vorstehend beschriebenen Verbindungen. In various embodiments, the invention also includes all stereoisomers, in particular enantiomers and diastereomers, tautomers and salts of the compounds described above.

Unter einem Wasch- oder Reinigungsmittel sind erfindungsgemäß alle Mittel zu verstehen, die sich zum Waschen oder Reinigen von insbesondere Textilien und/oder festen Oberflächen eignen. Weitere geeignete Inhaltsstoffe werden weiter unten detailliert beschrieben. Under a detergent or cleaning agent according to the invention are all means that are suitable for washing or cleaning of particular textiles and / or solid surfaces. Other suitable ingredients are described in detail below.

Unter einer Protease sind erfindungsgemäß alle Enzyme zu verstehen, die in der Lage sind, Säureamidverknüpfungen von Proteinen zu hydrolysieren. Auch die Proteasen werden weiter unten detailliert beschrieben. According to the invention, a protease is to be understood as meaning all enzymes which are capable of hydrolyzing acid amide linkages of proteins. The proteases are also described in detail below.

Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung beschreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist. Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichts-%. Numerische Bereiche, die in dem Format „von x bis y“ angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden. These and other aspects, features, and advantages of the invention will become apparent to those skilled in the art from a study of the following detailed description and claims. Any feature of one aspect of the invention may be employed in any other aspect of the invention. Further, it is to be understood that the examples contained herein are intended to describe and illustrate the invention, but not to limit it, and in particular that the invention is not limited to these examples. All percentages are by weight unless otherwise specified. Numeric ranges indicated in the format "from x to y" include the above values. If multiple preferred numeric ranges are specified in this format, it is understood that all ranges resulting from the combination of the various endpoints are also captured.

Ohne an eine Theorie gebunden sein zu wollen, wird erfindungsgemäß davon ausgegangen, dass die erfindungsrelevanten Verbindungen mit der erfindungsgemäß zu inhibierenden/stabilisierenden Protease einen Komplex ausbilden. Dieser sieht wahrscheinlich so aus, dass sich die erfindungsrelevante Verbindung in die Substratbindungstasche der Protease einlagert und dort nicht-kovalent gebunden wird. Auf diese Weise wird das aktive Zentrum der Protease durch die, durch dieses Enzym nicht hydrolysierbare, Verbindung blockiert und steht nicht für eine Hydrolyse anderer zugegebener Proteine zur Verfügung. Hierbei handelt es sich um eine reversible Bindung, d.h. um ein Gleichgewicht zwischen Assoziation und Dissoziation. Der Gleichgewichtskoeffizient dieser Reaktion wird als Inhibitionskonstante oder K bezeichnet. Without wishing to be bound by theory, it is assumed according to the invention that the compounds relevant to the invention form a complex with the protease to be inhibited / stabilized according to the invention. This probably looks like that the invention-relevant compound is incorporated in the substrate binding pocket of the protease and is non-covalently bound there. In this way, the active site of the protease is blocked by the compound which is not hydrolyzable by this enzyme and is not available for hydrolysis of other added proteins. This is a reversible bond, i. for a balance between association and dissociation. The equilibrium coefficient of this reaction is called the inhibition constant or K.

Der erste Vorteil der erfindungsrelevanten Verbindungen gegenüber dem Stand der Technik besteht darin, dass sie günstige Inhibitionskonstanten bezüglich der in Wasch- und Reinigungsmitteln einsetzbaren Proteasen aufweisen. Die Inhibitoren binden somit reversibel, d.h. sie gehen nicht zu feste und nicht zu lose vorübergehende Wechselwirkungen mit dem Enzym ein. Vorteilhafterweise liegt damit während der Lagerung der Großteil der erfindungsrelevanten Protease in Form eines Protease-Inhibitor-Komplexes vor. Die Protease und ggf. weitere enthaltene Proteine, insbesondere weitere Enzyme werden auf diese Weise gegenüber einer Proteolyse durch dieses Enzym geschützt (gegen Proteolyse stabilisiert) und sind so auch nach einer Lagerung uneingeschränkt leistungsfähig. Andererseits wird im Augenblick der Verdünnung des erfindungsgemäßen Mittels mit Wasser zur Herstellung einer wässrigen Wasch- bzw. Reinigungsflotte das Bindungsgleichgewicht in Richtung Dissoziation verschoben, so dass sich der Komplex auflöst und der Großteil der erfindungsrelevanten Protease proteolytisch aktiv werden kann. The first advantage of the compounds relevant to the invention over the prior art is that they have favorable inhibition constants with respect to the proteases which can be used in detergents and cleaners. The inhibitors thus bind reversibly, i. they do not interfere with solid and not too loose transient interactions with the enzyme. Advantageously, the majority of the protease relevant to the invention is thus present during storage in the form of a protease-inhibitor complex. The protease and optionally other proteins contained, in particular other enzymes are protected in this way against proteolysis by this enzyme (stabilized against proteolysis) and are thus fully efficient even after storage. On the other hand, at the moment of dilution of the agent according to the invention with water to prepare an aqueous washing or cleaning liquor, the binding equilibrium is shifted in the direction of dissociation so that the complex dissolves and most of the protease relevant protease can become proteolytically active.

Der zweite Vorteil der erfindungsrelevanten Verbindungen gegenüber dem Stand der Technik besteht darin, dass sie als Elemente lediglich C, H, N und O aufweisen und insbesondere frei von Bor sind. Sie bilden somit nicht die unerwünschten, auf Bor zurückzuführenden Nebenprodukte mit anderen Wasch- oder Reinigungsmittelinhaltsstoffen. The second advantage of the invention relevant connections over the prior art is that they have as elements only C, H, N and O and in particular are free of boron. Thus, they do not form the undesirable boron-derived by-products with other detergent or cleaning ingredients.

Ferner verfügen sie insbesondere aufgrund der enthaltenen Carboxyl- oder Sulfonylgruppen über eine gute Wasserlöslichkeit, so dass sie in entsprechende Mittel einfach eingearbeitet werden können und ein Ausfallen während der Lagerung vermieden wird. Furthermore, they have a good solubility in water, in particular due to the carboxyl or sulfonyl groups contained, so that they can be easily incorporated into appropriate means and precipitation during storage is avoided.

Grundsätzlich wirken die genannten Verbindungen vermutlich deshalb als reversible Inhibitoren, weil sie ähnlich dem Substrat der Proteasen, strukturell an die Bedingungen der Bindungstasche angepasst sind. Dies gilt insbesondere für Serin-Proteasen, wie anhand der Beispiele zur vorliegenden Anmeldung mit der positiven Wirkung der dort experimentell beschriebenen Verbindungen anhand von Serin-Proteasen, konkret Subtilasen, noch spezieller Subtilisinen gezeigt worden ist. In principle, the compounds mentioned probably act as reversible inhibitors because, similar to the substrate of the proteases, they are structurally adapted to the conditions of the binding pocket. This applies in particular to serine proteases, as has been shown on the basis of the examples of the present application with the positive effect of the compounds experimentally described there on the basis of serine proteases, specifically subtilases, even more specific subtilisins.

Weitere Gegenstände der vorliegenden Erfindung betreffen:

– die Verwendung einer oben beschriebenen Verbindung als reversibler Inhibitor und/oder Stabilisator einer Protease, im Rahmen einer Wasch- oder Reinigungsmittelrezeptur;
– Wasch- oder Reinigungsverfahren, in dem eine Protease zur Wirkung kommt, die mit einer oben beschriebenen Verbindung inhibiert und/oder stabilisiert ist;
– die Verwendung eines erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittels zum Waschen und/oder Reinigen von Textilien und/oder harten Oberflächen; sowie
– die Verwendung einer Protease und einer oben beschriebenen Verbindung zur Herstellung eines Wasch- oder Reinigungsmittels.

Further objects of the present invention relate to:

The use of a compound described above as a reversible inhibitor and / or stabilizer of a protease, in the context of a detergent or cleaning agent formulation;
A washing or cleaning process in which a protease is inhibited which is inhibited and / or stabilized with a compound described above;
The use of a washing or cleaning agent according to the invention for washing and / or cleaning textiles and / or hard surfaces; such as
The use of a protease and a compound described above for the preparation of a detergent or cleaner.

In erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln, die in einer Ausführungsform in überwiegend fester Form vorliegen und in einer anderen Ausführungsform in überwiegend flüssiger, pastöser oder Gelform vorliegen, ist das Enzym, d.h. die Protease, in einer Menge von 0,05–5 Gew.-%, vorzugsweise 0,05–2 Gew.-%, und der Enzymstabilisator in einer Menge von 0,05–15 Gew.-%, vorzugsweise 0,05–5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- oder Reinigungsmittels in diesem enthalten. In detergents or cleaners according to the invention, which in one embodiment are in predominantly solid form and in another embodiment are in predominantly liquid, pasty or gel form, the enzyme, ie the protease, is present in an amount of 0.05-5% by weight. %, preferably 0.05-2 wt .-%, and the enzyme stabilizer in an amount of 0.05-15 wt .-%, preferably 0.05-5 wt .-%, based on the total weight of the washing or cleaning agent included in this.

In verschiedenen Ausführungsformen können das Enzym und der Enzymstabilisator in einer Enzymzusammensetzung vorformuliert vorliegen. Wie aus der vorherigen Ausführungen ersichtlich, bildet das Enzym-Protein nur einen Bruchteil des Gesamtgewichts üblicher Enzym-Zubereitungen. Bevorzugt eingesetzte Protease-Zubereitungen enthalten zwischen 0,1 und 40 Gew.-%, bevorzugt zwischen 0,2 und 30 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,4 und 20 Gew.-% und insbesondere zwischen 0,8 und 10 Gew.-% des Enzymproteins. In solchen Zusammensetzungen kann der Enzymstabilisator in einer Menge von 0,05–35 Gew.-%, vorzugsweise 0,05–10 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht in der Enzymzusammensetzung enthalten sein. Diese Enzymzusammensetzung, die ebenfalls ein Bestandteil der vorliegenden Erfindung ist, kann dann in erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln eingesetzt werden und zwar in Mengen, die zu den oben angegeben Endkonzentrationen im Wasch- oder Reinigungsmittel führen. In various embodiments, the enzyme and the enzyme stabilizer may be pre-formulated in an enzyme composition. As can be seen from the previous comments, the enzyme protein forms only a fraction of the total weight of conventional enzyme preparations. Preferably used protease preparations contain between 0.1 and 40 wt .-%, preferably between 0.2 and 30 wt .-%, particularly preferably between 0.4 and 20 wt .-% and in particular between 0.8 and 10 wt .-% of the enzyme protein. In such compositions, the enzyme stabilizer may be contained in an amount of 0.05-35% by weight, preferably 0.05-10% by weight, based on the total weight in the enzyme composition. This enzyme composition, which is also a constituent of the present invention, can then be used in detergents or cleaners according to the invention in amounts which lead to the above-mentioned final concentrations in the washing or cleaning agent.

Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2'-Bichinolyl-4,4'-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration erfolgt diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors (für Proteasen beispielsweise Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)) und Bestimmung der Restaktivität (vgl. M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), S. 5890–5913 ). The protein concentration can be determined by known methods, for example the BCA method (bicinchoninic acid, 2,2'-biquinolyl-4,4'-dicarboxylic acid) or the biuret method. The determination of the active protein concentration takes place in this respect via a titration of the active sites using a suitable irreversible inhibitor (for proteases, for example, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)) and determination of the residual activity (see. Bender, M., et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), p. 5890-5913 ).

Neben dem Enzymstabilisator gemäß der oben angegebenen allgemeinen Formel kann ein erfindungsgemäßes Mittel mindestens einen weiteren Stabilisator, insbesondere ein Polyol, wie Glycerin oder 1,2-Ethylenglycol, und/oder ein Antioxidans, enthalten. In addition to the enzyme stabilizer according to the general formula given above, an agent according to the invention may contain at least one further stabilizer, in particular a polyol, such as glycerol or 1,2-ethylene glycol, and / or an antioxidant.

Die eingesetzten Proteasen sind alkalische Serin-Proteasen. Sie wirken als unspezifische Endopeptidasen, das heißt, sie hydrolysieren beliebige Säureamidbindungen, die im Inneren von Peptiden oder Proteinen liegen und bewirken dadurch den Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Ihr pH-Optimum liegt meist im deutlich alkalischen Bereich. The proteases used are alkaline serine proteases. They act as nonspecific endopeptidases, that is, they hydrolyze any acid amide linkages that are located inside peptides or proteins and thereby cause degradation of proteinaceous soils on the items to be cleaned. Their pH optimum is usually in the clearly alkaline range.

Bei der erfindungsgemäß stabilisierten, bzw. reversibel inhibierten Protease handelt es sich daher vorzugsweise um eine Serin-Protease, insbesondere um eine Subtilase, besonders bevorzugt um ein Subtilisin. Das Subtilisin kann dabei ein Wildtypenzym oder eine Subtilisin-Variante sein, wobei das Wildtypenzym bzw. das Ausgangsenzym der Variante vorzugsweise aus einer der folgenden ausgewählt ist:

– der Alkalischen Protease aus Bacillus amyloliquefaciens (BPN‘),
– der Alkalischen Protease aus Bacillus licheniformis (Subtilisin Carlsberg),
– der Alkalischen Protease PB92,
– Subtilisin 147 und/oder 309 (Savinase)
– der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus, vorzugsweise aus Bacillus lentus (DSM 5483),
– der Alkalischen Protease aus Bacillus alcalophilus (DSM 11233),
– der Alkalischen Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) oder einer hierzu mindestens zu 70% identischen Alkalischen Protease,
– der Alkalischen Protease aus Bacillus sp. (DSM 14390) oder einer hierzu mindestens zu 98,5% identischen Alkalischen Protease, und
– der Alkalischen Protease aus Bacillus sp. (DSM 14392) oder einer hierzu mindestens zu 98,1 % identischen Alkalischen Protease.

The protease stabilized or reversibly inhibited according to the invention is therefore preferably a serine protease, in particular a subtilase, more preferably a subtilisin. The subtilisin may be a wild-type enzyme or a subtilisin variant, wherein the wild-type enzyme or the starting enzyme of the variant is preferably selected from one of the following:

The alkaline protease from Bacillus amyloliquefaciens (BPN '),
The alkaline protease from Bacillus licheniformis (subtilisin Carlsberg),
The alkaline protease PB92,
Subtilisin 147 and / or 309 (Savinase)
The alkaline protease from Bacillus lentus, preferably from Bacillus lentus (DSM 5483),
The alkaline protease from Bacillus alcalophilus (DSM 11233),
The alkaline protease from Bacillus gibsonii (DSM 14391) or an at least 70% identical alkaline protease,
The alkaline protease from Bacillus sp. (DSM 14390) or an at least 98.5% identical alkaline protease, and
The alkaline protease from Bacillus sp. (DSM 14392) or an at least 98.1% identical alkaline protease.

Beispiele für die in den hierin beschriebenen Mitteln eingesetzten Proteasen sind Subtilisin 309 oder funktionale Fragmente/Varianten davon und Varianten der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus. Subtilisin 309 wird unter dem Handelsnamen Savinase^® von der Firma Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dänemark vertrieben. Von dem Subtilisin 309 aus Bacillus lentus sind unter den Handelsnamen Blaze^® und Ovozyme^® von der Firma Novozymes optimierte Enzymvarianten erhältlich, die eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung darstellen. Von der Alkalischen Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 leiten sich beispielsweise die unter der Bezeichnung BLAP^® geführten Protease-Varianten ab. Eine weitere in den hierin beschriebenen Mitteln eingesetzte Protease ist die als BPN` bezeichnete Protease aus Bacillus amyloliquefaciens und Varianten davon. Examples of the proteases used in the agents described herein are subtilisin 309 or functional fragments / variants thereof and variants of the Bacillus lentus alkaline protease. Subtilisin 309 is sold under the tradename Savinase ^® from Novozymes A / S, Bagsvaerd, Denmark. Of the subtilisin 309 from Bacillus lentus enzyme variants are optimized under the trade names Blaze ^® and Ovozyme ^® available from Novozymes, which illustrate a preferred embodiment of the invention. Of the alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483, for example, listed under the name BLAP ^® protease variants are derived from. Another protease used in the agents described herein is the Bacillus amyloliquefaciens protease designated BPN` and variants thereof.

In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen ist die Protease eine Alkalischen Protease aus Bacillus lentus, insbesondere aus Bacillus lentus (DSM 5483), bzw. ein funktionales Fragment oder eine Variante davon. Obwohl im Folgenden immer auf eine Protease Bezug genommen wird, ist es selbstverständlich auch möglich eine Kombination von zwei oder mehr Proteasen einzusetzen. In various preferred embodiments, the protease is an alkaline protease from Bacillus lentus, in particular from Bacillus lentus (DSM 5483), or a functional fragment or a variant thereof. Although reference will always be made hereinafter to a protease, it is of course also possible to use a combination of two or more proteases.

Die Sequenzen der reifen (maturen) Protease Subtilisin 309 aus Bacillus lentus bzw. der reifen (maturen) alkalischen Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 sind in SEQ ID NO: 1 bzw. SEQ ID NO: 2 angegeben. Die Sequenz der reifen (maturen) Protease BPN` aus Bacillus amyloliquefaciens ist in SEQ ID NO: 7 angegeben. The sequences of the mature (mature) protease subtilisin 309 from Bacillus lentus and the mature (mature) alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483 are given in SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, respectively. The sequence of the mature (mature) protease BPN 'from Bacillus amyloliquefaciens is given in SEQ ID NO: 7.

„Variante“, wie hierin in Zusammenhang mit Proteasen verwendet, bezieht sich auf natürliche oder artifiziell erzeugte Variationen einer nativen Protease, die eine gegenüber der Referenzform abgewandelte Aminosäuresequenz aufweisen. Eine solche Variante kann einzelne oder mehrere Punktmutationen, d.h. Substitutionen einer natürlicherweise an der entsprechenden Position vorkommenden Aminosäure durch eine andere, Insertionen (Einfügen von einer oder mehreren Aminosäuren) und/oder Deletionen (Entfernen von einer oder mehreren Aminosäuren) aufweisen, insbesondere eine oder mehrere Punktmutationen. Derartige Varianten haben vorzugsweise mindestens 50, vorzugsweise 60 oder mehr, noch bevorzugter 70, 80, 90, 100 % oder mehr der Enzymaktivität der Referenzform. In verschiedenen Ausführungsformen hat eine derartige Variante eine Aminosäuresequenz, die zu der als Referenz dienenden Sequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70, vorzugsweise 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, oder 99 % identisch ist. Die Varianten haben vorzugsweise dieselbe Länge wie die Referenzsequenz. Varianten können sich gegenüber der Referenzform durch verbesserte Eigenschaften auszeichnen, wie beispielsweise höhere Enzymaktivität, höhere Stabilität, geänderte Substratspezifität, etc. "Variant" as used herein in the context of proteases refers to naturally or artificially produced variations of a native protease that have an amino acid sequence that is modified from the reference form. Such a variant may involve single or multiple point mutations, i. Substitutions of a naturally occurring at the corresponding position amino acid by another, have insertions (insertion of one or more amino acids) and / or deletions (removal of one or more amino acids), in particular one or more point mutations. Such variants preferably have at least 50, preferably 60 or more, more preferably 70, 80, 90, 100% or more of the enzyme activity of the reference form. In various embodiments, such a variant has an amino acid sequence identical to the reference sequence over its total length of at least 70, preferably 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, or 99%. The variants preferably have the same length as the reference sequence. Variants may be distinguished from the reference form by improved properties, such as, for example, higher enzyme activity, higher stability, altered substrate specificity, etc.

Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. beispielsweise Altschul, S. F. Gish, W., Miller, W., Myers, E. W. & Lipman, D. J. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215: 403–410 , und Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, S.3389–3402 ) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. The identity of nucleic acid or amino acid sequences is determined by a sequence comparison. This sequence comparison is based on the BLAST algorithm established in the prior art and commonly used (cf., for example, Altschul, SF Gish, W., Miller, W., Myers, EW & Lipman, DJ (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215: 403-410 , and Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs "; Nucleic Acids Res., 25, pp.3389-3402 ) and in principle occurs in that similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or amino acid sequences are assigned to each other. A tabular assignment of the respective positions is referred to as alignment. Another algorithm available in the prior art is the FASTA algorithm.

Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essentielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, gegebenenfalls kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz. Such a comparison also allows a statement about the similarity of the compared sequences to each other. It is usually given in percent identity, that is, the proportion of identical nucleotides or amino acid residues at the same or in an alignment corresponding positions. The broader concept of homology involves conserved amino acid substitutions in the consideration of amino acid sequences, that is, amino acids with similar chemical activity, as these usually perform similar chemical activities within the protein. Therefore, the similarity of the sequences compared may also be stated as percent homology or percent similarity. Identity and / or homology information can be made about whole polypeptides or genes or only over individual regions. Homologous or identical regions of different nucleic acid or amino acid sequences are therefore defined by matches in the sequences. Such areas often have identical functions. They can be small and comprise only a few nucleotides or amino acids. Often, such small regions exert essential functions for the overall activity of the protein. It may therefore be useful to relate sequence matches only to individual, possibly small areas. Unless otherwise indicated, identity or homology information in the present application, however, refers to the total length of the particular nucleic acid or amino acid sequence indicated.

„Funktionale Fragmente“, wie hierin verwendet, bezieht sich auf enzymatisch aktive Polypeptide, die im Vergleich zu der als Referenz dienenden Sequenz N- und/oder C-terminal um mindestens eine, vorzugsweise zwei oder mehr Aminosäuren verkürzt sind. Die Aktivität solcher Fragmente beträgt mindestens 50 %, vorzugsweise mindestens 60, 70, 80, 90, 95 oder 100 % der Aktivität des Referenzenzyms. "Functional fragments" as used herein refers to enzymatically active polypeptides that are truncated N- and / or C-terminally by at least one, preferably two or more, amino acids as compared to the reference sequence. The activity of such fragments is at least 50%, preferably at least 60, 70, 80, 90, 95 or 100% of the activity of the reference enzyme.

Als Protease im Sinne der vorliegenden Erfindung kann beispielsweise die alkalischen Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 (SEQ ID NO: 2) oder eine Variante davon verwendet werden. Einsetzbare Varianten sind solche, die eine Aminosäuresequenz besitzen, die zu der in SEQ ID NO: 2 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, oder 99,5% identisch ist. Bevorzugte Varianten sind solche, die eine Substitution an der Position, die Position 99 in SEQ ID NO: 2 entspricht, vorzugsweise R99E oder R99D aufweisen. Zusätzlich kann die Protease mindestens eine oder zwei, vorzugsweise alle drei der Aminosäuresubstitutionen S3T, V4I und V199I jeweils bezogen auf SEQ ID NO: 2 aufweisen. Besonders bevorzugte Varianten haben die in SEQ ID NO: 4 oder 5 angegebene Sequenz. Weitere einsetzbare Varianten sind solche, die eine Aminosäuresequenz besitzen, die zu der in SEQ ID NO: 4 oder 5 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist, wobei die Position 99 und ggf. auch die Positionen 3, 4 und 199 invariabel sind, d.h. die Aminosäure an diesen Positionen der entsprechenden Aminosäure in SEQ ID NO: 4 oder 5 entspricht. As protease according to the present invention, for example, the alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483 (SEQ ID NO: 2) or a variant thereof can be used. Usable variants are those which have an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 2 at least 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% , 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, or 99.5%. Preferred variants are those having a substitution at the position corresponding to position 99 in SEQ ID NO: 2, preferably R99E or R99D. In addition, the protease may have at least one or two, preferably all three of the amino acid substitutions S3T, V4I and V199I, each based on SEQ ID NO: 2. Particularly preferred variants have the sequence given in SEQ ID NO: 4 or 5. Further usable variants are those which have an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 4 or 5 at least to 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% , 95%, 96%, 97%, 98% or 99%, wherein the position 99 and possibly also the positions 3, 4 and 199 are invariable, ie the amino acid at these positions of the corresponding amino acid in SEQ ID NO: 4 or 5 corresponds.

Alternativ oder zusätzlich kann als Protease in Sinne der vorliegenden Erfindung beispielsweise Subtilisin 309 aus Bacillus lentus mit der in SEQ ID NO: 1 angegebenen Aminosäuresequenz oder eine Variante davon eingesetzt werden. Bevorzugt verwendet wird eine Variante mit den Aminosäuresubstitutionen S9R, A15T, V66A, N212D und Q239R bezogen auf SEQ ID NO: 1. Eine solche Variante hat die in SEQ ID NO: 3 angegebene Aminosäuresequenz. Eine weitere bevorzugt eingesetzte Variante weist die Aminosäuresubstitution S97A und die Insertion S97_G98InsD (=Insertion von D zwischen den Aminosäuren an Positionen 97 und 98) bezogen auf SEQ ID NO: 1 auf. Eine solche Variante hat die in SEQ ID NO: 6 angegebene Sequenz. Weitere einsetzbare Varianten sind solche, die eine Aminosäuresequenz besitzen, die zu der in SEQ ID NO: 3 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist, wobei die Positionen 9, 15, 66, 212 und 239 invariabel sind, d.h. die Aminosäure an diesen Positionen der entsprechenden Aminosäure in SEQ ID NO: 3 entspricht. Noch weitere einsetzbare Varianten sind solche, die eine Aminosäuresequenz besitzen, die zu der in SEQ ID NO: 1 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist, wobei die Position 97 und die Insertion von D zwischen den Positionen 97 und 98 invariabel sind, d.h. die Aminosäure an diesen Positionen der entsprechenden Aminosäure in SEQ ID NO: 6 entspricht. Alternatively or additionally, as a protease according to the present invention, for example, subtilisin 309 from Bacillus lentus having the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 1 or a variant thereof can be used. A variant with the amino acid substitutions S9R, A15T, V66A, N212D and Q239R based on SEQ ID NO: 1 is preferably used. Such a variant has the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 3. Another preferred variant has the amino acid substitution S97A and the insertion S97_G98InsD (= insertion of D between the amino acids at positions 97 and 98) with respect to SEQ ID NO: 1. Such a variant has the sequence given in SEQ ID NO: 6. Further usable variants are those which have an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 3 at least to 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%. , 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98% or 99%, where positions 9, 15, 66, 212 and 239 are invariable, ie the amino acid at these positions corresponds to the corresponding amino acid in SEQ ID NO: 3. Still further usable variants are those which have an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 1 at least to 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78 %, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99%, with the position 97 and the insertion of D between positions 97 and 98 being invariable, ie the amino acid at these positions corresponds to the corresponding amino acid in SEQ ID NO: 6.

Weitere einsetzbare Varianten sind solche, die eine Aminosäuresequenz besitzen, die zu der in SEQ ID NO: 7 angegebenen Aminosäuresequenz mindestens zu 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist, wobei bevorzugt eine Variante mit dem Aminosäureaustausch Y217L bezogen auf SEQ ID NO: 7 eingesetzt wird. Further usable variants are those which have an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 7 at least to 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%. , 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98% or 99% is identical, wherein preferably a variant with the amino acid exchange Y217L based on SEQ ID NO: 7 is used.

In den hierin beschriebenen Mitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt. In the agents described herein, the enzymes to be used may also be formulated together with adjuncts, such as from fermentation. In liquid formulations, the enzymes are preferably used as enzyme liquid formulation (s).

Die Proteasen werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt. The proteases are generally not provided in the form of the pure protein but rather in the form of stabilized, storage and transportable preparations. Such prefabricated preparations include, for example, the solid preparations obtained by granulation, extrusion or lyophilization or, especially in the case of liquid or gel-form detergents, solutions of the enzymes, advantageously as concentrated as possible, low in water and / or added with stabilizers or further auxiliaries.

Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern-Schale-Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalienundurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil. Alternatively, the enzymes may be encapsulated for both the solid and liquid dosage forms, for example by spray-drying or extruding the enzyme solution together with a preferably natural polymer or in the form of capsules, for example those in which the enzymes are entrapped as in a solidified gel or in those of the core-shell type, in which an enzyme-containing core is coated with a water, air and / or chemical impermeable protective layer. In deposited layers, further active ingredients, for example stabilizers, emulsifiers, pigments, bleaches or dyes, may additionally be applied. Such capsules are applied by methods known per se, for example by shaking or rolling granulation or in fluid-bed processes. Advantageously, such granules, for example by applying polymeric film-forming agent, low in dust and storage stable due to the coating.

Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist. Furthermore, it is possible to assemble two or more enzymes together so that a single granule has several enzyme activities.

Erfindungsgemäße Mittel können neben der Protease ein oder mehrere weitere Enzyme enthalten, insbesondere aus folgender Gruppe: Amylasen, Hemicellulasen, Cellulasen, Lipasen und Oxidoreduktasen. Agents according to the invention may contain, in addition to the protease, one or more further enzymes, in particular from the following group: amylases, hemicellulases, cellulases, lipases and oxidoreductases.

Bei der/den Amylase(n) handelt es sich vorzugsweise um eine α-Amylase. Bei der Hemicellulase handelt es sich vorzugsweise um eine β-Glucanase, eine Pektinase, eine Pullulanase und/oder eine Mannanase. Bei der Cellulase handelt es sich vorzugsweise um ein Cellulase-Gemisch oder eine Einkomponenten-Cellulase, vorzugsweise bzw. überwiegend um eine Endoglucanase und/oder eine Cellobiohydrolase. Bei der Oxidoreduktase handelt es sich vorzugsweise um eine Oxidase, insbesondere eine Cholin-Oxidase, oder um eine Perhydrolase. The amylase (s) is preferably an α-amylase. The hemicellulase is preferably a β-glucanase, a pectinase, a pullulanase and / or a mannanase. The cellulase is preferably a cellulase mixture or a one-component cellulase, preferably or predominantly an endoglucanase and / or a cellobiohydrolase. The oxidoreductase is preferably an oxidase, in particular a choline oxidase, or a perhydrolase.

Die hierin beschriebenen Mittel umfassen alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsmittelarten, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Handwäsche beziehungsweise -reinigung. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Dazu gehören beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder, für die die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet wird, also neben manuellen und maschinellen Geschirrspülmitteln beispielsweise auch Scheuermittel, Glasreiniger, WC-Duftspüler, usw. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet. The compositions described herein include all conceivable types of detergents or cleaners, both concentrates and neat agents, for use on a commercial scale, in the washing machine or in hand washing or cleaning. These include detergents for textiles, carpets, or natural fibers, for which the term detergent is used. These include, for example, dishwashing detergents for dishwashers or manual dishwashing detergents or cleaners for hard surfaces such as metal, glass, porcelain, ceramics, tiles, stone, painted surfaces, plastics, wood or leather, for which the term detergent is used, ie in addition to manual and machine Dishwashing agents, for example, scouring agents, glass cleaners, toilet scenters, etc. The washing and cleaning agents in the invention also include washing aids which are added to the actual detergent in the manual or machine textile laundry to achieve a further effect. Furthermore, laundry detergents and cleaners in the context of the invention also include textile pre-treatment and post-treatment agents, ie those agents with which the laundry item is brought into contact before the actual laundry, for example to dissolve stubborn soiling, and also agents which are in one of the actual Textile laundry downstream step to give the laundry further desirable properties such as comfortable grip, crease resistance or low static charge. Among the latter, i.a. calculated the fabric softener.

Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle festen, pulverförmigen, flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen hierin beschriebener Mittel, die gegebenenfalls auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwasch- oder -geschirrspülmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwasch- oder -geschirrspülmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt. Embodiments of the present invention include all solid, powdered, liquid, gelatinous or pasty administration forms of agents described herein, which if appropriate can also consist of several phases and can be present in compressed or uncompressed form. The agent can be present as a free-flowing powder, in particular with a bulk density of 300 g / l to 1200 g / l, in particular 500 g / l to 900 g / l or 600 g / l to 850 g / l. The solid dosage forms of the composition also include extrudates, granules, tablets or pouches. Alternatively, the agent can also be liquid, gelatinous or pasty, for example in the form of a non-aqueous liquid washing or dishwashing detergent or a non-aqueous paste or in the form of an aqueous liquid washing or dishwashing detergent or a water-containing paste. Furthermore, the agent may be present as a one-component system. Such funds consist of one phase. Alternatively, an agent can also consist of several phases. Such an agent is therefore divided into several components.

Die hierin beschriebenen Wasch- oder Reinigungsmittel, die als pulverförmige Feststoffe, in nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können ferner zusätzlich alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die hierin beschriebenen Mittel können insbesondere Tenside, Builder (Gerüststoffe), Bleichmittel oder Bleichaktivatoren enthalten. Ferner können sie wassermischbare organische Lösungsmittel, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Farb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten. The detergents or cleaners described herein, which may be in the form of powdered solids, in densified particulate form, as homogeneous solutions or suspensions, may further additionally contain all known ingredients customary in such compositions, preferably at least one further ingredient being present in the composition. In particular, the agents described herein may contain surfactants, builders, bleaches or bleach activators. Furthermore, they may contain water-miscible organic solvents, sequestering agents, electrolytes, pH regulators and / or further auxiliaries, such as optical brighteners, grayness inhibitors, foam regulators, as well as dyes and fragrances, and combinations thereof.

Vorteilhafte Inhaltsstoffe hierin beschriebener Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO2009/121725 , dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen. Advantageous ingredients of the agents described herein are disclosed in the international patent application WO2009 / 121725 starting there on page 5, penultimate paragraph, and ending on page 13 after the second paragraph. This disclosure is incorporated herein by reference and the disclosure is incorporated herein by reference.

Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen, das dadurch gekennzeichnet ist, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein hierin beschriebenes Mittel angewendet wird. A further subject of the invention is a method for the cleaning of textiles or hard surfaces, which is characterized in that in at least one method step a means described herein is used.

Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren bevorzugt sind. Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird. Entsprechendes gilt für Verfahren zur Reinigung von allen anderen Materialien als Textilien, insbesondere von harten Oberflächen. Alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsverfahren können in wenigstens einem der Verfahrensschritte um die Anwendung eines hierin beschriebenen Wasch- oder Reinigungsmittels bereichert werden und stellen dann Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung dar. These include both manual and mechanical processes, with mechanical processes being preferred. Processes for the cleaning of textiles are generally distinguished by the fact that various cleaning-active substances are applied to the cleaning material in several process steps and after be washed off the exposure time, or that the cleaning material is treated in any other way with a detergent or a solution or dilution of this agent. The same applies to processes for cleaning all other materials than textiles, especially hard surfaces. All conceivable washing or cleaning methods can be enriched in at least one of the method steps by the use of a washing or cleaning agent described herein and then represent embodiments of the present invention.

Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung eines hierin beschriebenen Mittels zur Reinigung oder zum Waschen von Textilien oder zur Reinigung von harten Oberflächen. Another subject of the invention is the use of an agent described herein for cleaning or washing textiles or for cleaning hard surfaces.

Noch ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung der hierin beschriebenen Verbindungen zur Stabilisierung eines Enzyms in einem protease-haltigen Wasch- oder Reinigungsmittel. Yet another subject of the invention is the use of the compounds described herein for stabilizing an enzyme in a protease-containing detergent or cleaner.

Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für hierin beschriebene Mittel beschrieben sind, sind auch auf die vorstehend genannten Verfahren und Verwendungen anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehenden beschriebenen Verfahren und Verwendungen gilt. Beispiele Tabelle 1: Restaktivität Formulierung Protease Restaktivität [%] Handelsübliche westeuropäische Premiumwaschmittelformulierung (PWM) 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 4 63,5 PWM 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 5 95,8 PWM 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 1 46,1 PWM/Testformulierung 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 4 38,9 PWM/Testformulierung 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 5 87,2 PWM/Testformulierung 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 1 14,5 Testformulierung 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO:5 50,4 Testformulierung 0,7 % Protease gemäß SEQ ID NO: 1 0 All aspects, objects, and embodiments described for means described herein are also applicable to the aforementioned methods and uses. Therefore, reference is made at this point expressly to the disclosure in the appropriate place with the statement that this disclosure also applies to the above described methods and uses. Examples Table 1: Residual activity formulation protease Residual activity [%] Commercial Western European Premium Detergent Formulation (PWM) 0.7% protease according to SEQ ID NO: 4 63.5 PWM 0.7% protease according to SEQ ID NO: 5 95.8 PWM 0.7% protease according to SEQ ID NO: 1 46.1 PWM / test formulation 0.7% protease according to SEQ ID NO: 4 38.9 PWM / test formulation 0.7% protease according to SEQ ID NO: 5 87.2 PWM / test formulation 0.7% protease according to SEQ ID NO: 1 14.5 test formulation 0.7% protease according to SEQ ID NO: 5 50.4 test formulation 0.7% protease according to SEQ ID NO: 1 0

Der jeweiligen Formulierung bzw. Formulierungskombination wurde eine Enzymzubereitung enthaltend eine jeweilige Protease in der angegebenen Menge zugesetzt. Die verwendete handelsübliche Premiumformulierung enthielt 0,00025–0,0025 Gew.-% des aldehydischen Inhibitors Moc-Leu-LeuH (Moc = Methoxycarbonyl). Die Restaktivität der Proteasen wurde relativ zu ihrer Aktivität zu Beginn der Lagerung bestimmt. Tabelle 2: Zusammensetzung Testformulierung Inhaltsstoff Menge [Gew.-%] Verdicker 0,3–0,5 Anti-Schaummittel 0,2–0,4 Glycerin 1–7 Ethanol 1–7 Anionische Tenside 1–10 Nichtionische Tenside 0–20 Fettsäuren 0–10 Natriumcitrat (Dihydrat) 0,5–4 Soda 0,5–4 HEDP 0,5–4 PVP 0,5–4 Optische Aufheller 0–2 Farbstoff 0–0,001 Wasser Rest The respective formulation or formulation combination was added to an enzyme preparation containing a respective protease in the stated amount. The commercial premium formulation used contained 0.00025-0.0025% by weight of the aldehydic inhibitor Moc-Leu-LeuH (Moc = methoxycarbonyl). The residual activity of the proteases was determined relative to their activity at the beginning of storage. Table 2: Composition Test Formulation ingredient Amount [wt%] thickener 0.3-0.5 Anti-foaming agents 0.2-0.4 glycerin 1-7 ethanol 1-7 Anionic surfactants 1-10 Nonionic surfactants 0-20 fatty acids 0-10 Sodium citrate (dihydrate) 0.5-4 soda 0.5-4 HEDP 0.5-4 PVP 0.5-4 Optical brighteners 0-2 dye 0 to 0.001 water rest

Die in Tabelle 1 zusammengefassten Ergebnisse zeigen, dass alle verwendeten Proteasen durch den aldehydischen Inhibitor aus der handelsüblichen Premiumformulierung stabilisiert werden. Eine besonders hohe Stabilisierung wurde für die modifizierte alkalische Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 5 erreicht. The results summarized in Table 1 show that all proteases used are stabilized by the aldehydic inhibitor from the commercially available premium formulation. A particularly high stabilization was achieved for the modified alkaline protease from Bacillus lentus DSM 5483 with the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 5.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Claims

Detergents or cleaning compositions containing at least one protease and at least one enzyme stabilizer, wherein the at least one enzyme stabilizer is selected from compounds of general structural formula (I)

ZA-NH-CH (R) -C (O) -X (I),

wherein A is an amino acid residue; X is hydrogen or CF ₃ ; Z is an N-capping moiety selected from phosphoramidate [(R'O) ₂ (O) P-], sulfenamide [(SR ') ₂ -], sulfonamide [(R' (O) ₂ S-], sulfonic acid [SO ₃ H ], Phosphinamide [(R ') ₂ (O) P-], sulfamoyl derivatives [R'O (O) ₂ S-], thiourea [(R') ₂ N (O) C-], thiocarbamate [R'O (S) C-], phosphonate [R'-P (O) OH], amidophosphate [R'O (OH) (O) P-], carbamate (R'O (O) C-) and urea (R ') NH (O) C-), wherein each R 'is independently selected from C1 -C6 straight or branched unsubstituted alkyl, phenyl, C7-C9 alkylaryl and cycloalkyl radicals wherein the cycloalkyl ring may be a C4-C8 cycloalkyl ring and one or more heteroatoms selected from O, N, and S; and R is selected from C1 to C6 straight or branched unsubstituted alkyl, phenyl, and C7 to C9 alkylaryl radicals, and stereoisomers, tautomers, and salts thereof.

Detergent or cleaner according to claim 1, characterized in that A is selected from Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Phe and Lys.

Washing or cleaning agent according to claim 1 or 2, characterized in that R are selected from methyl, iso-propyl, sec-butyl, iso-butyl, -C ₆ H ₅ , -CH ₂ -C ₆ H ₅ , and - CH ₂ -CH ₂ -C ₆ H ₅ .

Detergents or cleaners according to claim 1, characterized in that Z is selected from methyl, ethyl or benzyl carbamate groups [CH ₃ O- (O) C-; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-; or C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-], methyl, ethyl or benzyl urea groups [CH ₃ NH- (O) C-; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-; or C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-], methyl, ethyl or benzylsulfonamide groups [CH ₃ SO ₂ -; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -; or C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -], and a methyl, ethyl or benzylamidophosphate groups [CH ₃ O (OH) (O) P-; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-; or C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-].

Washing or cleaning agent according to one of claims 1 to 4, characterized in that the at least one enzyme stabilizer is selected from CH ₃ O- (O) C-Leu-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Ala-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-Leu CF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ O- (O) C-Gly-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ O- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuH; CH ₃ NH- (O) C-Ala-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleH; CH ₃ NH- (O) C-Ala-IleCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuH; CH ₃ NH- (O) C-Gly-LeuCF _3; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ NH- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleH; CH ₃ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ NH- (O) C-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuH; CH ₃ SO ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ S ₂ -Ala-LeuCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleH; CH ₃ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuH; CH ₃ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-LeuCF ₃ ; CH ₃ SO ₂ -Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleH; CH ₃ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ SO ₂ -Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuH; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-Leu CF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-LeuCF _3; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-IleH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleH; CH ₃ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Ala-IleCF ₃ ; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuH; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-Leu CF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuCF _3; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-LeuCF _3; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-IleH; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleH; C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleH; CH ₃ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ ; CH ₃ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ ; and C ₆ H ₅ CH ₂ O (OH) (O) P-Gly-IleCF ₃ .

Washing or cleaning agent according to one of claims 1 to 5, characterized in that the at least one protease is a protease having an amino acid sequence which corresponds to that in SEQ ID NO: 2 at least 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75 of the indicated amino acid sequence %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, or 99.5%.

Washing or cleaning agent according to one of claims 1 to 6, characterized in that the at least one protease has an amino acid sequence which is selected from the amino acid sequences given in SEQ ID NOs: 1-7.

Washing or cleaning agent according to one of claims 1 to 7, characterized in that the at least one protease in an amount of 0.05-5 wt .-%, preferably 0.05-2 wt .-%, and the at least one enzyme stabilizer in an amount of 0.05-15 wt .-%, preferably to 0.05-5 wt .-%, based on the total weight of the detergent or cleaning agent in this are included.

Use of a washing or cleaning agent according to any one of claims 1-7 for washing textiles or cleaning solid surfaces.

Process for the cleaning of textiles or hard surfaces, characterized in that in at least one process step, a washing or cleaning agent according to any one of claims 1-7 is applied.