DE102012017516A1

DE102012017516A1 - Heteroarylsubstituierte Acetonderivate geeignet zur Behandlung von Entzündungen und Krebs

Info

Publication number: DE102012017516A1
Application number: DE201210017516
Authority: DE
Inventors: Prof. Dr. Lehr Matthias; Martina Arnsmann
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-09-05
Filing date: 2012-09-05
Publication date: 2014-03-06

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue heteroarylsubstituierte Acetonderivate, die das Enzym Phospholipase A2 hemmen, sowie pharmazeutische Mittel umfassend diese Verbindungen.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue heteroarylsubstituierte Acetonderivate, welche das Enzym cytosolische Phospholipase A₂ hemmen. Diese Verbindungen sind geeignet als Arzneimittel zur Prävention und zur Behandlung von Erkrankungen, die durch eine erhöhte Aktivität dieses Enzyms verursacht bzw. mitverursacht werden, wie Entzündungen, Schmerz, Fieber, Allergien, Asthma, Psoriasis, Endotoxinschock und Krebs (Murakami, M.; Taketomi, Y.; Miki, Y.; Sato, H.; Hirabayashi, T.; Yamamoto, K. Recent progress in phospholipase research: From cells to animals to humans. Progress in Lipid Research 2011, 50, 152–192).
Unter der Bezeichnung ”Phospholipase A₂” fasst man die große und diverse Gruppe von Enzymen zusammen, die Phospholipide an der sn-2-Position unter Bildung von freien Fettsäuren und Lysophospholipiden spalten. Eine besondere Bedeutung hat hierbei die so genannte cytosolische Phospholipase A₂. Sie spaltet selektiv Phospholipide, die an der sn-2-Position Arachidonsäure tragen.
Freigesetzte Arachidonsäure kann über den Cyclooxygenase-Weg zu den Prostaglandinen und Thromboxanen sowie über die Lipoxygenase-Wege zu den Leukotrienen und anderen hydroxylierten Fettsäuren metabolisiert werden. Die Prostaglandine sind an der Entstehung des Schmerzes und des Fiebers sowie an entzündlichen Reaktionen wesentlich beteiligt. Leukotriene sind wichtige Mediatoren bei Entzündungsprozessen und bei anaphylaktischen und allergischen Vorgängen. Das durch die cytosolische Phospholipase A₂ gebildete Lysophosphatidylserin führt zur Freisetzung des an allergischen Prozessen beteiligten Histamins. Lysophosphatidylcholin wird zum plättchenaktivierenden Faktor (PAF) metabolisiert, der ebenfalls ein wichtiger Mediator z. B. bei Entzündungsprozessen ist.
Die cytosolische Phospholipase A₂ spielt auch eine wichtige Rolle bei der Progression von Tumoren. Eine vermehrte Expression von cytosolischer Phospholipase A₂ wurde in zahlreichen Tumoren beobachtet. Die über den cytosolische Phospholipase A₂-Signalweg gebildeten Mediatoren Prostaglandin E₂ und Lysophosphatidylcholin stellen pro-angiogenetische Faktoren dar, die das Wachstum von Tumor-Blutgefäßen und damit von Tumoren fördern. Das von der cytosolischen Phospholipase A₂ gebildete Lysophosphatidylcholin führt zusätzlich zu einer Resistenz von Tumoren gegenüber einer Strahlentherapie, indem es die Viabilität der Krebszellen bei Bestrahlung erhöht (Linkous A., Yazlovitskaya, E. Cytosolic phospholipase A2 as a mediator of disease pathogenesis. Cellular Microbiology 2010, 12, 1369–1377).
Eine übermäßige Stimulation der cytosolischen Phospholipase A₂ kann daher zu einer Reihe von akuten und chronischen Erkrankungen führen.
Im Stand der Technik sind Hemmstoffe der cytosolischen Phospholipase A₂ bekannt. Beispielsweise offenbaren die Schriften WO 2004/069797 und WO 2009/040314 , auf die in vollem Umfang Bezug genommen wird, heteroarylsubstituierte Acetonderivate, welche das Enzym Phospholipase A₂ hemmen.
Es besteht ein Bedarf an neuen Hemmstoffen der Phospholipase A₂, insbesondere der cytosolischen Phospholipase A₂.
Es bestand daher die Aufgabe, neue Verbindungen, die das Enzym cytosolische Phospholipase A₂ hemmen, zur Verfügung zu stellen.
Diese Aufgabe wird gelöst durch Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wie nachstehend angegeben:
worin
R¹ für COR² steht;
R² ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend D–E;
D ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend C₁-C₈-Alkyl, C₂-C₈-Alkenyl, C₂-C₈-Alkinyl, Aryl, T-Aryl, T-Aryl-G und/oder Aryl-G;
T, G gleich oder unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe umfassend C₁-C₈-Alkyl, C₂-C₈-Alkenyl und/oder C₂-C₈-Alkinyl;
E ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend OR³ und/oder CN;
R³ für H oder C_1-6-Alkyl steht;
R⁴ und R⁵

a) unabhängig voneinander für H, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, C_2-6-Alkinyl oder R⁶-COOH stehen, oder
b) zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, für einen 5- oder 6-gliedrigen aromatischen oder heteroaromatischen Ring stehen, der mit 1 oder 2 Substituenten R⁷ substituiert sein kann;

⁶

_1-6

_2-6

⁷

_1-6

₃

⁸

⁹

_1-16

_2-16

⁹

_1-6

⁹

_1-6

⁶

₃

Vorteilhafterweise verwendbar sind weiter pharmazeutisch verträgliche Additionssalze der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Die pharmazeutisch verträglichen Salze können Basenadditionssalze sein. Dazu zählen Salze der Verbindungen mit anorganischen Basen, wie Alkalihydroxiden, Erdalkalihydroxiden oder mit organischen Basen, wie Mono-, Di- oder Triethanolamin. Auch Säureadditionssalze sind umfasst.
Verwendbare pharmazeutisch verträgliche Ester der Verbindungen sind insbesondere physiologisch leicht hydrolisierbare Ester, beispielsweise Alkyl-, Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Phthalidyl-, Indanyl- und Methoxymethylenester.
Der Begriff ”Alkyl” umfasst, wenn nicht anders angegeben, geradkettige, verzweigte oder cyclische Alkylgruppen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl, Neopentyl, Undecyl, Dodecyl, Pentadecyl, Hexadecyl, Heptadecyl, Octadecyl, Cyclohexyl etc.
Der Begriff ”Alkenyl” umfasst geradkettige, verzweigte oder cyclische Alkenylgruppen, wie Ethenyl, Propenyl, Butenyl, Decenyl, Heptadecenyl, Cyclohexenyl etc.
Der Begriff ”Alkinyl” umfasst geradkettige oder verzweigte Alkinylgruppen, wie Ethinyl, Propinyl, Butinyl, Decinyl, Heptadecinyl etc.
Der Begriff ”Aryl” umfasst Phenyl, Naphthyl, Biphenyl sowie 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Ringe, die 1 bis 3 Atome ausgewählt aus O, N oder S enthalten und gegebenenfalls mit einem Benzolring anelliert sind. Bevorzugt wird insbesondere Phenyl.
Der Begriff ”Halogen” umfasst ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom, wobei insbesondere Fluor- oder Chloratom bevorzugt sind.
Wenn in einer Verbindung Reste wie R⁶, R⁷ oder R⁹ mehrfach auftreten, können diese jeweils unabhängig voneinander gewählt werden.
Der geradkettige C_1-16-Alkyl- oder C_2-16-Alkenyl- oder -Alkinylrest, für den in der Formel (I), R⁸ steht, kann mit 1 oder 2 Resten, unabhängig ausgewählt aus O, S und Aryl unterbrochen sein. Unter ”unterbrochen” wird vorliegend verstanden, dass der Rest zusätzlich zu den Kohlenstoffatomen seiner Kette an einer beliebigen Stelle innerhalb der Kette einen solchen Rest enthalten kann. Die zusätzlich gegebenenfalls vorhandenen Substituenten in Form von 1 bis 2 C_1-6-Alkylresten können mit jedem beliebigen Kohlenstoffatom der Kette verbunden sein.
In vorteilhaften Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindungen steht
R¹ für CO-(CH₂)_r-OR³,
worin
r ist 1, 2, 3, 4 oder 5.
Besonders bevorzugt ist r 3, 4 oder 5. Vorzugsweise ist R³ ausgewählt aus der Gruppe umfassend H, Methyl und Ethyl.
In weiter vorteilhaften Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindungen steht D für Aryl.
In bevorzugten Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindungen steht Q für C₅-C₁₂-Alkyl, vorzugsweise C₇-C₁₀-Alkyl. Ganz besonders bevorzugt steht Q für C₈-Alkyl.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindungen steht Q für OR⁸, worin R⁸ für einen Arylrest steht, der mit einem Substituenten R⁹ substituiert sein kann, wobei R⁹ bevorzugt für F oder Cl steht. Der Substituent R⁹ ist vorzugsweise in para-Stellung verbunden.
In den erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) steht Ar für einen Arylrest und vorzugsweise für einen wie vorstehend definierten Arylrest. Besonders bevorzugt steht Ar für einen Phenylrest, der vorzugsweise die benachbarten Gruppen Q und O in para-Stellung miteinander verbindet.
Vorzugsweise bilden R⁴ und R⁵ zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen 6-gliedrigen aromatischen Ring aus, vorzugsweise einen Benzo-Ring. Dieser 6-gliedrige aromatische Ring kann mit 1 oder 2 Substituenten R⁷ substituiert sein. Bevorzugt ist der Substituent R⁷ gleich COOH.
In bevorzugten Ausführungsformen weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Struktur gemäß der allgemeinen Formeln (II) wie nachstehend angegeben auf:
worin:
R¹⁰ ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend COCH₂OCH₃, CO(CH₂)₃OCH₃, CO(CH₂)₅OCH₃, CO(CH₂)₃OH, CO(CH₂)₅OH, CO(CH₂)₅CN, CO(4-Methoxyphenyl) und/oder CO(3-Methoxyphenyl);
In weiteren bevorzugten Ausführungsformen weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine Struktur gemäß der allgemeinen Formel (III) wie nachstehend angegeben auf:
worin:
R¹⁰ ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend COCH₂OCH₃, CO(CH₂)₃OCH₃, CO(CH₂)₅OCH₃, CO(CH₂)₃OH, CO(CH₂)₅OH, CO(CH₂)₅CN, CO(4-Methoxyphenyl) und/oder CO(3-Methoxyphenyl);
R¹¹ ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Phenyl, 4-Fluorphenyl und/oder 4-Chlorphenyl;
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung unterscheiden sich Verbindungen, die arabisch nummeriert sind, von römischen nummerierten Verbindungen, d. h. es handelt sich jeweils um unterschiedliche Verbindungen.
Eine besonders bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (1) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiterhin besonders bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (2) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine auch bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (3) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiterhin besonders bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (4) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine auch besonders bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (5) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine auch bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (6) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiter bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (7) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiter bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (8) auf und/oder sind deren pharmazeutisch vertragliche Ester oder Salze:
Eine weiter bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (9) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiter bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (10) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Eine weiter bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Verbindungen weist die nachstehende Formel (11) auf und/oder sind deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze:
Es wurde überraschend gefunden, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen zumindest teilweise eine gute Löslichkeit in Wasser aufweisen. Insbesondere die Verbindungen gemäß der Formeln (2), (4), (5), (8), (9) und (10) zeichnen sich durch eine besonders gute Wasserlöslichkeit aus.
In bevorzugten Ausführungsformen liegt die Löslichkeit der Verbindungen in wässrigem Phosphatpuffer (pH 7,4) im Bereich von 10 μg/ml bis 500 μg/ml, vorzugsweise im Bereich von 80 μg/ml bis 450 μg/ml, besonders bevorzugt im Bereich von 80 μg/ml bis 420 μg/ml.
Die Wasserlöslichkeit der Verbindungen wurde bestimmt, indem zu der jeweiligen Verbindung wässriger Phosphatpuffer (pH 7,4) gegeben wurde und der gelöste Anteil nach Schütteln und Zentrifugation bestimmt wurde, wie in Beispiel 12 beschrieben.
Eine schlechte Wasserlöslichkeit von Arzneistoffen stellt ein großes Hindernis für eine ausreichende Bioverfügbarkeit dar. Eine ausreichende Bioverfügbarkeit eines Arzneistoffes ist wesentliche Voraussetzung für seine Wirksamkeit. Eine gute Wasserlöslichkeit kann deshalb bei einer Verwendung eines Stoffes als Arzneistoff von besonderem Vorteil sein.
Insbesondere kann eine verbesserte Wasserlöslichkeit den Vorteil zur Verfügung stellen, dass sich die erfindungsgemäßen Verbindungen beispielsweise bei einer peroralen Verabreichung im Magen/Darm-Trakt in erhöhtem Umfang lösen können.
Ein besonderer Vorteil bei der Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen ergibt sich auch daraus, dass zur Erzielung einer ausreichenden Bioverfügbarkeit von schlecht wasserlöslichen Arzneistoffen diesen vor der Verabreichung Lösemittel wie Dimethylsulfoxid (DMSO) oder lösungsvermittelnde Tenside zugesetzt werden müssen. Da diese Lösungsvermittler zelltoxische Wirkungen zeigen, kann durch ausreichend wasserlösliche Arzneistoffe, bei denen die Verwendung von Lösungsvermittlern nicht notwendig ist, eine deutliche Verbesserung der Verträglichkeit zur Verfügung gestellt werden.
Ein besonderer Vorteil der erfindungsgemäßen Verbindungen ergibt sich hierbei daraus, dass diese eine gute Hemmung der Phospholipase A₂ zur Verfügung stellen können. Insbesondere die Verbindungen gemäß der Formeln (1), (2), (3), (4), (5), (8), (9) und (10) können eine besonders gute Hemmung zur Verfügung stellen.
Die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen ist anhand der Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ wie in Beispiel 13 beschrieben bestimmbar. Hierzu wurde aus humanen Thrombocyten isolierte cytosolische Phospholipase A₂ verwendet. Zur Messung der Enzymaktivität bzw. der Enzymhemmung wurde die durch das Enzym aus 1-Stearoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholin freigesetzte Arachidonsäure bestimmt, beispielsweise durch reversed phase-HPLC mit UV-Detektion bei 200 nm nach Reinigung mittels Festphasenextraktion. Die Hemmung des Enzyms durch eine erfindungsgemäße Verbindung ergibt sich aus dem Verhältnis von der in Anwesenheit bzw. in Abwesenheit der Verbindung gebildeten Arachidonsäuremengen.
In bevorzugten Ausführungsformen weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen für die Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ IC₅₀-Werte im Bereich von 0,005 μM bis 0,50 μM, besonders bevorzugt im Bereich von 0,010 μM bis 0,30 μM, ganz besonders bevorzugt im Bereich von 0,015 μM bis 0,20 μM, auf.
Der IC₅₀-Wert der Verbindungen für die Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ entspricht der Konzentration der Verbindungen, die nötig ist, um die Aktivität des Enzyms auf die Hälfte zu reduzieren.
Die IC₅₀-Werte wurden rechnerisch aus den bei unterschiedlichen Konzentrationen erhaltenen Werten der Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ mit Hilfe des Probit-Verfahrens (s. Hartke, Mutschler, DAB 9 Kommentar Band 1 S. 733–734, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart 1978) bestimmt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen in vorteilhafter Weise eine wirksame Hemmung der Phospholipase A₂.
In bevorzugten Ausführungsformen zeigen die erfindungsgemäßen. Verbindungen eine wirksame Hemmung der Phospholipase A₂ und eine gute Löslichkeit in Wasser. Insbesondere die Verbindungen gemäß der Formeln (2), (4), (5), (8), (9) und (10) zeichnen sich durch eine wirksame Hemmung der Phospholipase A₂ und eine gute Löslichkeit in Wasser aus.
Beispielsweise sind die Verbindungen verwendbar als Arzneimittel zur Prävention und zur Behandlung von Erkrankungen, die durch Produkte bzw. Folgeprodukte dieses Enzyms verursacht bzw. mitverursacht werden, beispielsweise zur Behandlung von Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises und zur Prävention und Behandlung von allergisch induzierten Erkrankungen sowie von Tumorerkrankungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können somit wirksame Analgetika, Antiphlogistika, Antipyretika, Antiallergika und Broncholytika sein und sind zur Thromboseprophylaxe und zur Prophylaxe des anaphylaktischen Schocks, zur Behandlung dermatologischer Erkrankungen, wie Psoriasis, Urtikaria, akute und chronische Exantheme allergischer und nicht-allergischer Genese, sowie von Tumorerkrankungen verwendbar.
In vorteilhafter Weise können die erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere eine entzündungshemmende Wirkung aufweisen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können daher insbesondere wirksame Antiphlogistika sein.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegende Erfindung betrifft daher pharmazeutische Mittel oder Arzneimittels, die eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), insbesondere Verbindungen gemäß der Formeln (1) bis (11), und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze oder Ester umfassen.
Die Verbindungen gemäß der Formel (I) insbesondere Verbindungen gemäß der Formeln (1) bis (11) eignen sich insbesondere zur Herstellung eines pharmazeutischen Mittels oder Arzneimittels zur Prävention oder Behandlung von Erkrankungen, die durch eine erhöhte Aktivität der Phospholipase A₂, vorzugsweise der cytosolischen Phospholipase A₂, verursacht oder mitverursacht werden.
Die Erfindung betrifft daher insbesondere die Verwendung von erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) insbesondere Verbindungen gemäß der Formeln (1) bis (11) und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträglichen Salzen und/oder Estern zur Herstellung eines pharmazeutischen Mittels oder Arzneimittels zur prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung von Erkrankungen, die durch eine erhöhte Aktivität der Phospholipase A₂ verursacht oder mitverursacht werden.
Unter dem Begriff ”prophylaktische Behandlung” wird im Sinne der vorliegenden Erfindung insbesondere verstanden, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen prophylaktisch verabreicht werden können, bevor Symptome einer Erkrankung auftreten oder die Gefahr einer Erkrankung besteht. Insbesondere wird unter einer ”prophylaktischen Behandlung” eine medikamentöse Vorbeugung verstanden.
Erkrankungen, die durch eine erhöhte Aktivität der Phospholipase A₂ verursacht oder mitverursacht werden, sind vorzugsweise ausgewählt aus der Gruppe umfassend Entzündungen, Schmerz, Fieber, Allergien, Asthma, Psoriasis, cerebrale Ischämie, Alzheimersche Erkrankung, chronische Hauterkrankungen, Schädigung der Haut durch UV-Strahlen, rheumatische Erkrankungen, Thrombose, anaphylaktischer Schock, Urtikuria, akute und chronische Exantheme und/oder Endotoxinschock sowie Tumorerkrankungen.
Die Erfindung betrifft daher insbesondere die Verwendung von erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) insbesondere Verbindungen gemäß der Formeln (1) bis (11) und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträglichen Salzen und/oder Estern zur Herstellung eines pharmazeutischen Mittels oder Arzneimittels zur prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung von Erkrankungen ausgewählt aus der Gruppe umfassend Entzündungen, Schmerz, Fieber, Allergien, Asthma, Psoriasis, cerebrale Ischämie, Alzheimersche Erkrankung, chronische Hauterkrankungen, Schädigung der Haut durch UV-Strahlen, rheumatische Erkrankungen, Thrombose, anaphylaktischer Schock, Urtikuria, akute und chronische Exantheme und/oder Endotoxinschock sowie Tumorerkrankungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind insbesondere geeignet zur Behandlung von Entzündungen, vorzugsweise zur Behandlung von entzündlichen Hauterkrankungen oder entzündlichen Erkrankungen des Gastrointestinaltraktes.
Bevorzugte entzündliche Hauterkrankungen, auch Dermatitis genannt, sind ausgewählt aus der Gruppe umfassend Kontaktdermatits, atopische Dermatitis, Dermatitis solaris, Schuppenflechte (Psoriasis), Urtikaria, akute und chronische Exantheme allergischer und nicht-allergischer Genese und/oder Ekzeme.
Unter dem Begriff ”Ekzem” wird im Sinne der vorliegenden Erfindung eine Hauterkrankung, die sich in einer nicht-infektiösen Entzündungsreaktion der Haut äußert, verstanden. Unter dem Begriff ”Exanthem” sind im Sinne der vorliegenden Erfindung entzündliche Hautveränderungen, die sich häufig auf größere Bereiche der Haut auswirken, zu verstehen.
Bevorzugte Ekzeme sind insbesondere ausgewählt aus der Gruppe umfassend allergisches Kontaktekzem, chronisches Handekzem, atopisches Ekzem und/oder seborrhoisches Ekzem. Bevorzugte Exantheme allergischer Genese sind beispielsweise Arzneimittelexantheme. Bevorzugte entzündliche Erkrankungen des Gastrointestinaltraktes sind insbesondere entzündliche Darmerkrankungen wie Morbus Crohn und/oder Colitis ulcerosa.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind insbesondere geeignet zur Behandlung von Tumoren insbesondere in Verbindung mit einer Strahlentherapie.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind als einzelne therapeutische Wirkstoffe oder als Mischungen mit anderen therapeutischen Wirkstoffen verabreichbar. Sie können alleine verabreicht werden, vorzugsweise werden sie in Form pharmazeutischer Mittel verabreicht, d. h. als Mischungen der Wirkstoffe mit geeigneten pharmazeutischen Trägern und/oder Verdünnungsmitteln.
Die Verbindungen oder pharmazeutischen Mittel sind oral, parenteral, transmucosal, pulmonal, enteral, durch Inhalation, rektal oder topisch, insbesondere dermal, transdermal, buccal oder sublingual, verabreichbar.
Die Art des pharmazeutischen Mittels und des pharmazeutischen Trägers bzw. Verdünnungsmittels hängt von der gewünschten Verabreichungsart ab. Orale Mittel können beispielsweise als Tabletten oder Kapseln, auch in retardierter Form, vorliegen und können übliche Exzipienzien enthalten, wie Bindemittel, beispielsweise Sirup Akazia, Gelatine, Sorbit, Tragant oder Polyvinylpyrrolidon; Füllstoffe, beispielsweise Lactose, Zucker, Maisstärke, Calciumphosphat, Sorbit oder Glycin; Gleitmittel, beispielsweise Magnesiumstearat, Talkum, Polyethylenglykol oder Siliciumdioxid; desintegrierende Mittel wie Stärke oder Netzmittel, beispielsweise Natriumlaurylsulfat. Orale flüssige Präparate können in Form wässriger oder öliger Suspensionen, Lösungen, Emulsionen, Sirupen, Elixieren oder Sprays usw. vorliegen oder können als Trockenpulver zur Rekonstitution mit Wasser oder einem anderen geeigneten Träger vorliegen. Derartige flüssige Präparate können übliche Additive, beispielsweise Suspendiermittel, Geschmacksstoffe, Verdünnungsmittel oder Emulgatoren enthalten. Für die parenterale Verabreichung kann man Lösungen oder Suspensionen mit üblichen pharmazeutischen Trägern einsetzen. Für die Verabreichung durch Inhalation können die Verbindungen in pulverförmiger, wässriger oder teilweise wässriger Lösung vorliegen, die in Form eines Aerosols angewendet werden kann. Mittel für die topische Anwendung können z. B. als pharmazeutisch verträgliche Puder, Lotionen, Salben, Cremes, Gele oder als therapeutische Systeme vorliegen, die therapeutisch wirksame Mengen der erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten.
Bevorzugt sind beispielsweise transdermale therapeutische Systeme wie wirkstoffhaltige Pflaster.
Besonders bevorzugt ist es, das Mittel in zur topischen Verabreichung geeigneten Formulierungen auszubilden. Insbesondere bevorzugt sind flüssige oder halbflüssige Mittel insbesondere wässrige Darreichungsformen zur topischen Anwendung, beispielsweise in Form von Lösungen oder Suspensionen, die als Tropfen appliziert werden können. Weiter bevorzugt sind Lotionen, Salben, Gele oder Cremes.
Die erforderliche Dosierung ist beispielsweise abhängig von der Form des angewendeten pharmazeutischen Mittels, von der Art der Anwendung, der Schwere der Symptome und dem speziellen Subjekt, insbesondere Mensch oder Tier, das behandelt wird. Die Behandlung wird üblicherweise mit einer Dosis begonnen, die unterhalb der optimalen Dosis liegt. Danach wird die Dosis erhöht, bis der für die gegebenen Bedingungen optimale Effekt erzielt wird.
Vorzugsweise werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Konzentrationen verabreicht, mit welchen sich effektive Wirkungen erzielen lassen, ohne dass schädliche oder nachteilige Wirkungen auftreten.
Der Wirkstoff kann beispielsweise für eine topische Verabreichung im Bereich von ≥ 0,001 Gew.-% bis ≤ 10 Gew.-%, vorzugsweise im Bereich von ≥ 0,1 Gew.-% bis ≤ 5 Gew.-%, bevorzugt im Bereich von ≥ 1 Gew.-% bis ≤ 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung, formuliert sein.
Bevorzugte Dosierungen der erfindungsgemäßen Verbindungen liegen für die topische Verabreichung im Bereich von ≥ 0,001 mg/cm², bis ≤ 2 mg/cm² Auftragsfläche, insbesondere Haut, bevorzugt im Bereich von ≥ 0,01 mg/cm² bis ≤ 1 mg/cm², vorzugsweise im Bereich von ≥ 0,1 mg/cm² bis ≤ 0,5 mg/cm².
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in einer Einzeldosis oder in mehreren Dosen verabreicht werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß der allgemeinen Formel (I) sind vorzugsweise herstellbar gemäß den in den Schriften WO 2004/069797 und WO 2009/040314 , auf die in vollem Umfang Bezug genommen wird, offenbarten Verfahren, mit der Ausnahme, dass zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen entsprechend geeignete Edukte verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß der allgemeinen Formel (I) sind besonders bevorzugt herstellbar durch Umsetzung einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (IV)
mit Epichlorhydrin zu einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (V)
und weiterer Umsetzung der Verbindung der Formel (V) mit einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (VI) Q-Ar-OH (VI) zu einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (VII)
und oxidieren der Verbindung (VII) zum Keton, wobei für die Gruppen R¹, R⁴, R⁵, Q und Ar in vollem Umfang auf die vorstehenden Beschreibungen Bezug genommen wird.
Im Falle der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I), die COOH Gruppen enthalten, können die COOH Gruppen als Ester, bevorzugt als Methyl-, tert-Butyl-, Benzyl- und/oder Allylester geschützt werden. Die Abspaltung der Esterschutzgruppen erfolgt nach der Oxidation zum Keton mit bekannten Methoden. Gegebenenfalls wird hierbei die Ketogruppe als Acetal geschützt.
Beispiele, die der Veranschaulichung der vorliegenden Erfindung dienen, sind nachstehend angegeben.
Zur säulenchromatographischen Reinigung wurde Kieselgel 60 der Fa. Macherey und Nagel, Partikelgröße 40–63 μm (= Flash-Chromatographie) verwendet. Beispiel 1 3-(2-Methoxyacetyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(2-bromacetyl)indol-5-carboxylat
Zu 20 ml absol. Dichlormethan und 2.24 g (16.8 mmol) wasserfreiem Aluminiumchlorid wurden 11.9 g (59.1 mmol) Bromacetylbromid gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde eine Lösung von 1.03 g (5.91 mmol) Methylindol-5-carboxylat in 10 ml absol. Dichlormethan zugetropft. Nach weiteren 3 h Rühren bei Raumtemperatur wurde ein Teil des Lösungsmittels abdestilliert und die restliche Lösung vorsichtig auf Eiswasser gegeben. Der entstandene Niederschlag wurde abgesaugt und mit Wasser gewaschen. Die Substanz wurde in 30 ml siedendem Dioxan gelöst, die Lösung anschließend schnell wieder abgekühlt und noch 1 h bei Raumtemperatur gerührt, wobei das Produkt ausfiel. Dieses wurde erst mit kaltem Dioxan, dann mit Diethylether gewaschen und anschließend getrocknet.
Ausbeute: 1.74 g, 99%; C₁₂H₁₀BrNO₃ (296.1); Schmp.: 255°C (Zers.);
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 3.86 (s, 3H), 4.68 (s, 2H), 7.59 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.85 (dd, 1H, J = 8.4 Hz und 1.8 Hz), 8.60 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 8.81-8.82 (m, 1H), 12.45 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 297 (9) [M]⁺, 202 (100).
B. Methyl-3-(2-methoxyacetyl)indol-5-carboxylat
437 mg (1.47 mmol) Natrium wurden in 20 ml absol. Methanol gelöst und mit 351 mg (15.3 mmol) Methyl-3-(2-bromacetyl)indol-5-carboxylat versetzt. Die entstandene Suspension wurde 4 h unter Rückfluss erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurde der Reaktionsansatz vorsichtig in Wasser gegeben und mehrmals mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Tetrahydrofuran/Hexan 6:4) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 337 mg, 92%; C₁₃H₁₃NO₄ (247.3); Schmp.: 220–221°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 3.37 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 4.54 (s, 2H), 7.57 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.84 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 8.46-8.48 (m, 1H), 8.86-8.87 (m, 1H), 12.29 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 247 (6) [M]⁺, 202 (100).
C. Methyl-3-(2-methoxyacetyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Eine Mischung aus 314 mg (1.27 mmol) Methyl-3-(2-methoxyacetyl)indol-5-carboxylat, 144 mg (2.25 mmol) pulverisiertem 88%igem Kaliumhydroxid sowie 42 mg (0.13 mmol) Tetrabutylammoniumbromid wurde mit 4.0 ml Epichlorhydrin versetzt. Nach 3 h Rühren bei Raumtemperatur wurde der Reaktionsansatz ohne weitere Aufarbeitung direkt auf eine Kieselgelsäule gegeben. Säulenchromatographische Reinigung (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 1:1 d) 3:7) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 75 mg, 20%; C₁₆H₁₇NO₅ (303.3); Schmp.: 154–155°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 2.48-2.51 (m, 1H), 2.87-2.90 (m, 1H), 3.33-3.38 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 4.18 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 5.8 Hz), 4.47 (s, 2H) 4.60 (dd, 1H, J = 15.2 Hz und 2.5 Hz), 7.44 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 8.05 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 8.18 (s, 1H), 9.09-9.10 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 303 (13) [M]⁺, 258 (100).
D. Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(2-methoxyacetyl)indol-5-carboxylat
Eine Mischung aus 63 mg (0.21 mmol) Methyl-3-(2-methoxyacetyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 53 mg (0.25 mmol) 4-Octylphenol und 10 mg (0.08 mmol) 4-Dimethylaminopyridin wurde unter Rühren 30 min bei 120°C erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Ansatz in wenig Dichlormethan gelöst und ohne Aufarbeitung direkt auf eine Kieselgelsäule gegeben. Das Produkt wurde säulenchromatographisch (Hexan/Ethylacetat 1:1) gereinigt und nach Entfernen des Lösungsmittels als Öl erhalten.
Ausbeute: 25 mg, 24%; C₃₀H₃₉NO₆ (509.6)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.7 Hz), 1.21-1.28 (m, 10H), 1.51-1.63 (m, 2H), 2.51-2.59 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.96-4.00 (m, 2H), 4.29 (s, 2H), 4.32-4.39 (m, 1H), 4.40-4.48 (m, 1H), 4.53 (dd, 1H, J = 13.7 Hz und 3.7 Hz), 6.84 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.45 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.99 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 8.15 (s, 1H), 9.00-9.01 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 509 (34) [M]⁺, 464 (100).
E. Methyl-3-(2-methoxyacetyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Zu einer Lösung von 25 mg (0.05 mmol) Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(2-methoxyacetyl)indol-5-carboxylat in 5 ml absol. Dichlormethan wurden portionsweise 36 mg (0.08 mmol) Dess-Martin-Periodinan-Reagenz gegeben. Die entstandene Suspension wurde 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Im Anschluss daran wurde der Reaktionsansatz in eine Mischung aus halbgesättigter Natriumthiosulfat- und gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung (1:1) pipettiert. Nach dreimaliger Extraktion der wässrigen Phase mit Ethylacetat, Trocknen der vereinigten organischen Phasen über Natriumsulfat sowie Filtrieren wurde das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und das Rohprodukt säulenchromatographisch an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3) gereinigt. Das Produkt fiel in Form eines Öls an.
Ausbeute: 13 mg, 53%; C₃₀H₃₇NO₆ (507.6)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.7 Hz), 1.24-1.34 (m, 10H), 1.53-1.66 (m, 2H), 2.55-2.62 (m, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 4.46 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 5.32 (s, 2H), 6.85-6.90 (m, 2H), 7.10 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.18 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.99 (dd, 1H, J = 8.7 Hz and 1.7 Hz), 8.11 (s, 1H), 9.09-9.10 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 507 (47) [M]⁺, 462 (100).
F. 3-(2-Methoxyacetyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
13 mg (0.03 mmol) Methyl-3-(2-methoxyacetyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat wurden in 3 ml Ethanol gelöst und mit 1 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung versetzt. Die Reaktionsmischung wurde 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde der Reaktionsansatz mit 1M HCl angesäuert und dreimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 1:1 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Feststoff erhalten.
Ausbeute: 7 mg, 59%; C₂₉H₃₅NO₆ (493.6); Schmp.: 220–221°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.84 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.16-1.30 (m, 10H), 1.46-1.57 (m, 2H), 2.49-2.53 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 4.48 (s, 2H), 5.03 (s, 2H), 5.55 (s, 2H), 6.90 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.57 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.83 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 8.41 (s, 1H), 8.84-8.86 (m, 1H), 12.70 (s_breit, 1H); HRMS (ESI): m/z = 492.2406 [M-H]^– (theoretisch 492.2381) Beispiel 2 3-(4-Methoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carboxylat
1.76 g (14.9 mmol) 4-Methoxybuttersäure wurden in 10 ml absol. Toluol gelöst und tropfenweise zu einer eisgekühlten Lösung von 2.08 g (16.4 mmol) Oxalylchlorid in 10 ml absol. Toluol gegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Anschließend wurde das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer entfernt. Das entstandene Säurechlorid wurde in 30 ml absol. Dichlormethan aufgenommen und mit 801 mg (4.57 mmol) Methylindol-5-carboxylat versetzt. Anschließend wurden unter Eiskühlung 1.72 g (12.9 mmol) wasserfreies Aluminiumchlorid zugegeben. Der Ansatz wurde 15 min bei 0°C gerührt, vorsichtig mit Wasser versetzt und mehrmals mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Umkristallisation aus Ethylacetat lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 588 mg, 47%; C₁₅H₁₇NO₄ (275.3); Schmp.: 167–168°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.83-1.90 (m, 2H), 2.90 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.21 (s, 3H), 3.37 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.85 (s, 3H), 7.53 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 8.44 (s, 1H), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.22 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 275 (4) [M]⁺, 217 (100).
B. Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte aus 566 mg (2.05 mmol) Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe C von Beispiel 1. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 1:1) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 568 mg, 83%; C₁₈H₂₁NO₅ (331.4); Schmp.: 77–78°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 2.02-2.08 (m, 2H), 2.46-2.50 (m, 1H), 2.88 (t, 1H, J = 4.1 Hz), 2.98 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.33-3.37 (m, 4H), 3.49 (t, 2H), 3.94 (s, 3H), 4.08-4.19 (m, 1H), 4.55-4.63 (m, 1H), 7.42 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.90 (s, 1H), 8.03 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 9.11-9.13 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 331 (4) [M]⁺, 273 (100).
C. Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carboxylat
Eine Mischung aus 381 mg (1.15 mmol) Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 238 mg (1.15 mmol) 4-Octylphenol und 38 mg (0.31 mmol) 4-Dimethylaminopyridin wurde unter Rühren 45 min bei 120°C erhitzt. Danach wurde die noch warme Mischung in Toluol aufgenommen und ohne Aufarbeitung direkt auf die Kieselgelsäule gegeben. Das Produkt wurde nach säulenchromatographischer Reinigung (Hexan/Ethylacetat a) 7:3 b) 1:1) als Feststoff erhalten.
Ausbeute: 226 mg, 37%; C₃₂H₄₃NO₆ (537.7); Schmp.: 111–112°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz), 1.22-1.34 (m, 10H), 1.53-1.62 (m, 2H), 1.97-2.06 (m, 2H), 2.52-2.58 (m, 2H), 2.89 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.33 (s, 3H), 3.45 (t, 2H, J = 6.1 Hz), 3.88-3.95 (m, 4H), 4.00 (dd, 1H, J = 9.5 Hz und 4.8 Hz), 4.31-4.44 (m, 2H), 4.50 (dd, 1H, J = 13.8 Hz und 3.7 Hz), 6.82 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.42 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.94 (s, 1H), 7.98 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 9.08-9.09 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 537 (9) [M]⁺, 479 (100).
D. Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte aus 209 mg (0.39 mmol) Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe E von Beispiel 1. Die Reaktionszeit betrug 5 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 6:4) lieferte das Produkt als Öl.
Ausbeute: 192 mg, 93%; C₃₂H₄₁NO₆ (535.7)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.22-1.36 (m, 10H), 1.55-1.64 (m, 2H), 2.01-2.10 (m, 2H), 2.55-2.63 (m, 2H), 2.97 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.34 (s, 3H), 3.46-3.51 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 4.71 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 6.87 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.07-7.11 (m, 1H), 7.18 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.79 (s, 1H), 7.98 (dd, 1H, J = 8.7 Hz, J = 1.6 Hz), 9.12-9.13 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 535 (4) [M]⁺, 107 (100).
E. 3-(4-Methoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte aus 171 mg (0.32 mmol) Methyl-3-(4-methoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe F von Beispiel 1 unter Verwendung von 12 ml Ethanol und 4 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung. Die Reaktionszeit betrug 16 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3 + 1% Essigsäure) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 80 mg, 48%; C₃₁H₃₉NO₆ (521.6); Schmp.: 119–120°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.84 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.19-1.29 (m, 10H), 1.46-1.57 (m, 2H), 1.83-1.92 (m, 2H), 2.49-2.54 (m, 2H), 2.88 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 3.22 (s, 3H), 3.37 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 5.03 (s, 2H), 5.52 (s, 2H), 6.90 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.55 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.5 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.86-8.87 (m, 1H), 12.63 (s_breit, 1H). MS (EI): m/z (%) = 521 (2) [M]⁺, 107 (100). Beispiel 3 3-(6-Methoxyhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(6-bromhexanoyl)indol-5-carboxylat
Zu 20 ml absol. Dichlormethan und 2.24 g (16.8 mmol) wasserfreiem Aluminiumchlorid wurden 2.39 g (11.2 mmol) 6-Bromhexansäurechlorid zugetropft. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde eine Lösung von 1.05 g (5.97 mmol) Methylindol-5-carboxylat in 10 ml absol. Dichlormethan zugetropft. Nach weiteren 3 h Rühren bei Raumtemperatur wurde wie bei der Stufe A von Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet. Das Produkt fiel als Feststoff an.
Ausbeute: 1.23 g, 58%; C₁₆H₁₈BrNO₃ (352.2); Schmp.: 216–217°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.50-1.57 (m, 2H), 1.61-1.70 (m, 2H), 1.79-1.87 (m, 2H), 2.87 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.52 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 3.85 (s, 3H), 7.54 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.4 Hz und 1.8 Hz), 8.47 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.23 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 353 (5) [M]⁺, 202 (100).
B. Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)indol-5-carboxylat
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung von Stufe B von Beispiel 1 aus 366 mg (15.9 mmol) Natrium in 30 ml absol. Methanol und 611 mg (1.73 mmol) Methyl-3-(6-bromhexanoyl)indol-5-carboxylat. Die Reaktionszeit betrug 4.5 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Tetrahydrofuran/Hexan 1:1) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 483 mg, 92%; C₁₇H₂₁NO₄ (303.4); Schmp.: 171–172°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.31-1.39 (m, 2H), 1.47-1.56 (m, 2H), 1.60-1.69 (m, 2H), 2.85 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.19 (s, 3H), 3.26-3.31 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 7.53 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 8.46 (s, 1H), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.22 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 303 (35) [M]⁺, 217 (100).
C. Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte analog der Synthesevorschrift für Stufe C von Beispiel 1. Eingesetzt wurden 469 mg (1.55 mmol) Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)indol-5-carboxylat, 184 mg (2.87 mmol) pulverisiertes 88%iges Kaliumhydroxid, 59 mg (0.18 mmol) Tetrabutylammoniumbromid und 4.0 ml Epichlorhydrin. Die Reaktionszeit betrug 2 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 1:1) lieferte das Produkt als gelben Feststoff.
Ausbeute: 307 mg, 55%; C₂₀H₂₅NO₅ (359.4); Schmp.: 88–89°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 1.42-1.52 (m, 2H), 1.58-1.70 (m, 2H), 1.77-1.86 (m, 2H), 2.47-2.50 (m, 1H), 2.85-2.92 (m, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.33-3.36 (m, 1H), 3.37-3.42 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 4.16 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 5.8 Hz), 4.56-4.63 (m, 1H), 7.42 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.85 (s, 1H), 8.03 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 9.11-9.13 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 359 (24) [M]⁺, 273 (100).
D. Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(6-methoxyhexanoyl)indol-5-carboxylat
Die Synthese wurde analog der Stufe D von Beispiel 1 unter Einsatz von 274 mg (0.76 mmol) Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 161 mg (0.78 mmol) 4-Octylphenol und 33 mg (0.27 mmol) 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt. Die Reaktionszeit betrug 60 min bei 120°C. Das Produkt wurde nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3) als Feststoff isoliert.
Ausbeute: 175 mg, 41%; C₃₄H₄₇NO₆ (565.7; Schmp.: 113–114°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz), 1.23-1.34 (m, 10H), 1.37-1.47 (m, 2H), 1.53-1.65 (m, 4H), 1.71-1.81 (m, 2H), 2.52-2.58 (m, 2H), 2.72 (s_breit, 1H), 2.75-2.81 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.37 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.89-3.94 (m, 4H), 3.99 (dd, 1H, J = 9.5 Hz und 4.8 Hz), 4.31-4.43 (m, 2H), 4.51 (dd, 1H, J = 13.7 Hz und 3.5 Hz), 6.82 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.42 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.89 (s, 1H), 7.99 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7), 9.08-9.09 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 565 (59) [M]⁺, 479 (100).
E. Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung der Stufe E von Beispiel 1 unter Verwendung von 167 mg (0.30 mmol) Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(6-methoxyhexanoyl)indol-5-carboxylat, 5 ml absol. Dichlormethan und 187 mg (0.44 mmol) Dess-Martin-Periodinan-Reagenz. Die Reaktionszeit betrug 4 h. Das Produkt fiel nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3) als Öl an.
Ausbeute: 155 mg, 93%; C₃₄H₄₅NO₆ (563.7);
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz), 1.23-1.36 (m, 10H), 1.42-1.51 (m, 2H), 1.55-1.68 (m, 4H), 1.77-1.85 (m, 2H), 2.56-2.61 (m, 2H), 2.87 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.33 (s, 3H), 3.39 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.93 (m, 3H), 4.71 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 6.87 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 7.10 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.18 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.74 (s, 1H), 7.98 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 9.11-9.12 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 563 (38) [M]⁺, 272 (96), 258 (100).
F. 3-(6-Methoxyhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung der Stufe F von Beispiel 1 unter Verwendung von 141 mg (0.25 mmol) Methyl-3-(6-methoxyhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat, 12 ml Ethanol und 4 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 8:2 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Feststoff erhalten.
Ausbeute: 71 mg, 52%; C₃₃H₄₃NO₆ (549.7); Schmp.: 122–123°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.84 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.20-1.28 (m, 10H), 1.30-1.40 (m, 2H), 1.48-1.57 (m, 4H), 1.61-1.70 (m, 2H), 2.49-2.53 (m, 2H), 2.81 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 3.19 (s, 3H), 3.27-3.33 (m, 2H), 5.03 (s, 2H), 5.52 (s, 2H), 6.90 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.55 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.85-8.86 (m, 1H), 12.67 (s_breit, 1H); MS (ESI): m/z (%) = 548.4 [M-H]^–. Beispiel 4 3-(4-Hydroxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(4-brombutanoyl)indol-5-carboxylat
Zu 20 ml absol. Dichlormethan und 2.24 g (16.8 mmol) wasserfreiem Aluminiumchlorid wurden 1.60 g (8.64 mmol) 4-Brombuttersäurechlorid zugetropft. Die Reaktionsmischung wurde 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde eine Lösung von 1.00 g (5.71 mmol) Methylindol-5-carboxylat in 10 ml absol. Dichlormethan zugetropft. Nach weiteren 3 h Rühren bei Raumtemperatur wurde wie bei der Stufe A von Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet. Das Produkt fiel als Feststoff an.
Ausbeute: 1.81 g, 98%; C₁₄H₁₄BrNO₃ (324.2); Schmp.: 132–133°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.79 (quin, 2H, J = 7.2 Hz), 2.89 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 3.45 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.90 (s, 3H), 7.54 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 2.0 Hz), 8.43 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.22 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 324 (3) [M]⁺, 202 (100).
B. Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)indol-5-carboxylat
Eine Lösung von 1.81 g (5.58 mmol) Methyl-3-(4-brombutanoyl)indol-5-carboxylat in 25 ml Essigsäure wurde mit 1.41 g (8.45 mmol) Silberacetat und 3.26 g (39.7 mmol) Natriumacetat versetzt und für 2 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktionsmischung in Wasser gegossen und der Niederschlag abfiltriert. Das Filtrat wurde mit Chloroform und Ethylacetat extrahiert, der Niederschlag mit Ethylacetat ausgekocht. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Das Produkt fiel nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 2:8; Hexan/Tetrahydrofuran 4:6) als Feststoff an.
Ausbeute: 678 mg, 40%; C₁₆H₁₇NO₅ (303.3); Schmp.: 202–203°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.93-1.98 (m, 5H), 2.95 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.85 (s, 3H), 4.06 (t, 2H, J = 6.7 Hz), 7.54 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.6 Hz), 8.46 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.25 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 303 (12) [M]⁺, 202 (100).
C. Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte analog der Synthesevorschrift für Stufe C von Beispiel 1. Eingesetzt wurden 405 mg (1.33 mmol) Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)indol-5-carboxylat, 153 mg (2.39 mmol) pulverisiertes 88%iges Kaliumhydroxid, 52 mg (0.16 mmol) Tetrabutylammoniumbromid und 4.0 ml Epichlorhydrin. Die Reaktionszeit betrug 2 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 1:1 d) 2:8) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 184 mg, 39%; C₁₉H₂₁NO₆ (359.4); Schmp.: 132–133°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 2.04 (s, 3H), 2.13 (quint, 2H, J = 6.8 Hz), 2.47-2.49 (m, 1H), 2.88 (t, 1H, J = 4.1 Hz), 2.97 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 4.12-4.20 (m, 3H), 4.61 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 2.4 Hz), 7.42 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.87 (s, 1H), 8.04 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.6 Hz), 9.08-9.09 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 359 (17) [M]⁺, 273 (100).
D. Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]indol-5-carboxylat
Die Synthese wurde analog der Stufe D von Beispiel 1 unter Einsatz von 154 mg (0.43 mmol) Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 95 mg (0.46 mmol) 4-Octylphenol und 12 mg (0.10 mmol) 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt. Die Reaktionszeit betrug 90 min. Das Produkt wurde nach Lösen in Toluol direkt auf eine Kieselgelsäule gegeben und mit Hexan/Ethylacetat (2:1) eluiert.
Ausbeute: 78 mg, 32%; C₃₃H₄₃NO₇ (565.7); Schmp.: 110–111°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 7.0 Hz), 1.25-1.30 (m, 10H), 1.54-1.56 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 2.07-2.13 (m, 2H), 2.53-2.57 (m, 1H), 2.87-2.90 (m, 2H), 3.90-3.93 (m, 4H), 3.97-4.00 (m, 1H), 4.15 (t, 2H, J = 6.7 Hz), 4.32-4.42 (m, 2H), 4.48-4.52 (m, 1H), 6.81 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.10 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.42 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 7.91 (s, 1H), 8.00 (dd, 1H, J = 8.8 Hz und 1.8 Hz), 9.08-9.09 (m, 1H); MS (EI): m/z (%) = 565 (47) [M]⁺, 505 (100).
E. Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte aus 135 mg (0.24 mmol) Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe E von Beispiel 1. Das Produkt fiel nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 2:1 b) 1:1 c) 2:8) als Feststoff an.
Ausbeute: 122 mg, 91%; C₃₃H₄₁NO₇ (563.7); Schmp.: 112–113°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.86-0.89 (m, 3H), 1.25-1.32 (m, 10H), 1.55-1.61 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.14 (quint, 2H, J = 7.0 Hz), 2.55-2.60 (m, 2H), 2.96 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.93 (s, 3H), 4.19 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 4.72 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 6.87 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.09 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.18 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.76 (s, 1H), 7.97-8.00 (m, 1H), 9.09-9.10 (m, 1H) MS (EI): m/z (%) = 563 (14) [M]⁺, 299 (100).
F. 3-(4-Hydroxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung der Stufe F von Beispiel 1 unter Verwendung von 62 mg (0.11 mmol) Methyl-3-(4-acetoxybutanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat, 6 ml Ethanol und 2 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung. Die Reaktionszeit betrug 12 h. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 3:7 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Öl erhalten.
Ausbeute: 21 mg, 37%: C₃₀H₃₇NO₆ (507.6)
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.81-0.86 (m, 3H), 1.19-1.28 (m, 10H), 1.47-1.55 (m, 2H), 1.76-1.84 (m, 2H), 2.49-2.52 (m, 2H), 2.87 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 3.46 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 4.48-4.52 (s_breit, 1H), 5.03 (s, 2H), 5.52 (s, 2H), 6.88-6.91 (m, 2H), 7.11 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 7.55 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.81 (d, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 8.34 (s, 1H), 8.86-8.87 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z = 506.2575 [M-H]^– (theoretisch 506.2537) Beispiel 5 3-(6-Hydroxyhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte ausgehend von Methyl-3-(6-bromhexanoyl)indol-5-carboxylat (Stufe A von Beispiel 3) analog der Synthese von Beispiel 4.
C₃₂H₄₁NO₆ (535.7); Schmp.: 99–100°C
¹H-NMR (DMSO-d₆): d (ppm) = 0.83 (t, 3H, J = 6.6 Hz), 1.17-1.29 (m, 10H), 1.30-1.40 (m, 2H), 1.40-1.48 (m, 2H), 1.48-1.56 (m, 2H), 1.61-1.70 (m, 2H), 2.50-2.53 (m, 2H), 2.81 (t, 2H, J = 7.3 Hz), 3.35-3.41 (m, 2H), 4.30-4.36 (s_breit, 1H), 5.03 (s, 2H), 5.52 (s, 2H), 6.90 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.11 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.55 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.4 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.86-8.87 (m, 1H); MS (ESI): m/z = 534.6 [M-H]^–. Beispiel 6 3-(4-Methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat
639 mg (3.65 mmol) Methylindol-5-carboxylat und 747 mg (4.38 mmol) 4-Methoxybenzoylchlorid wurden in 25 ml absol. Dichlormethan gelöst. Anschließend wurden unter Eiskühlung 977 mg (7.33 mmol) wasserfreies Aluminiumchlorid hinzugegeben. Der Reaktionsansatz wurde 30 min bei 0°C gerührt. Danach wurde die Mischung vorsichtig mit Wasser versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Diethylether gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 1.01 g, 90%; C₁₈H₁₅NO₄ (309.3); Schmp.: 249–250°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 183-3.90 (m, 6H), 7.06-7.12 (m, 2H), 7.57-7.63 (m, 1H), 7.80-7.91 (m, 3H), 8.08-8.11 (m, 1H), 8.91-8.92 (m), 12.34 (s_breit, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 310.1069 [M+H]⁺ (theoretisch: 310.1074)
B. Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte analog der Synthesevorschrift für Stufe C von Beispiel 1. Eingesetzt wurden 1.01 g (3.26 mmol) Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat, 396 mg (7.06 mmol) pulverisiertes 88%iges Kaliumhydroxid, 116 mg (3.59 mmol) Tetrabutylammoniumbromid und 7.0 ml Epichlorhydrin. Die Reaktionszeit betrug 2 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 7:3 d) 1:1) lieferte das Produkt als Feststoff.
Ausbeute: 777 mg, 65%; C₂₁H₁₉NO₅ (365.4); Schmp.: 148–149°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 2.44-2.50 (m, 1H), 2.84-2.89 (m, 1H), 3.32-3.38 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.19 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 5.7 Hz), 4.60 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 2.4 Hz), 6.97-7.04 (m, 2H), 7.46 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.69 (s, 1H), 7.84-7.91 (m, 2H), 8.06 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 9.10-9.11 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 388.1161 [M+Na]⁺ (theoretisch: 388.1155).
C. Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(4-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat
Die Synthese wurde analog der Stufe D von Beispiel 1 unter Einsatz von 759 mg (2.08 mmol) Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 447 mg (2.16 mmol) 4-Octylphenol und 28 mg (0.23 mmol) 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt. Die Reaktionszeit betrug 45 min bei 120°C.
Ausbeute: 511 mg, 43%; C₃₅H₄₁NO₆ (571.7); Schmp.: 123–125°C;
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.87 (t, 3H, J = 6.7 Hz), 1.22-1.34 (m, 10H), 1.52-1.62 (m, 2H), 2.51-2.58 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.88-3.95 (m, 4H), 4.00 (dd, 1H, J = 9.5 Hz und J = 4.7 Hz), 4.38-4.45 (m, 2H), 4.50-4.56 (m, 1H), 6.78-6.90 (m, 4H), 7.11 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.45 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.71-7.80 (m, 3H), 8.00 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und J = 1.7 Hz), 9.05-9.06 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 594.2821 [M+Na]⁺ (theoretisch: 594.2826).
D. Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte aus 482 mg (0.84 mmol) Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(4-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe E von Beispiel 1. Das Produkt fiel als Öl an.
Ausbeute: 420 mg, 87%; C₃₅H₃₉NO₆ (569.7)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.21-1.35 (m, 10H), 1.54-1.66 (m, 2H), 2.55-2.61 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 6.86 (d, 2H, J = 8.7 Hz), 6.98 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 7.10-7.19 (m, 3H), 7.59 (s, 1H), 7.86 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 8.01 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 9.09-9.10 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 592.2658 [M+Na]⁺ (theoretisch: 592.2670)
E. 3-(4-Methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung der Stufe F von Beispiel 1 unter Verwendung von 215 mg (0.17 mmol) Methyl-3-(4-methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat, 12 ml Ethanol und 4 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Feststoff erhalten.
Ausbeute: 80 mg, 38%; C₃₄H₃₇NO₆ (555.7); Schmp.: 148°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.83 (t, 3H, J = 6.7 Hz), 1.18-1.31 (m, 10H), 1.43-1.60 (m, 2H), 2.45-2.52 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 5.00 (s, 2H), 5.56 (s, 2H), 6.89 (d, 2H, J = 8.67 Hz), 7.05-7.13 (m, 4H), 7.61 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.78-7.90 (m, 3H), 8.09 (s, 1H), 8.89-8.91 (m, 1H), 12.72 (s_breit, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 554.2561 [M-H]^– (theoretisch: 554.2548). Beispiel 7 3-(3-Methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte ausgehend von 681 mg (3.88 mmol) Methylindol-5-carboxylat und 822 mg (4.82 mmol) 3-Methoxybenzoylchlorid analog der Synthesevorschrift für Stufe A von Beispiel 6.
Ausbeute: 1.01 g, 84%; C₁₈H₁₅NO₄ (309.3); Schmp.: 230°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 3.83 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 7.18 (ddd, 1H, J = 8.1 Hz, 2.6 Hz und 1.1 Hz), 7.29-7.32 (m, 1H), 7.37 (dt, J = 7.5 Hz und 1.2 Hz, 1H), 7.46 (t, 1H, J = 7.8 Hz), 7.60 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 0.6 Hz), 7.88 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 3 Hz), 8.95 (d. 1H, J = 1.6 Hz), 12.38 (s, 1H). HRMS (ESI): m/z (%) = 332.0898 [M+Na]⁺ (theoretisch: 332.0893).
B. Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte analog der Synthesevorschrift für Stufe C von Beispiel 1. Eingesetzt wurden 986 mg (3.19 mmol) Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat, 380 mg (6.77 mmol) pulverisiertes 88%iges Kaliumhydroxid, 108 mg (0.34 mmol) Tetrabutylammoniumbromid und 7.0 ml Epichlorhydrin. Die Reaktionszeit betrug 2 h. Säulenchromatographische Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat a) 9:1 b) 8:2 c) 7:3 d) 1:1) lieferte das Produkt als Öl.
Ausbeute: 935 mg, 80%; C₂₁H₁₉NO₅ (365.4)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 2.43-2.49 (m, 1H), 2.83-2.89 (m, 1H), 3.30-3.38 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.16-4.23 (m, 1H), 4.60 (dd, 1H, J = 15.3 Hz und 2.4 Hz), 7.07-7.16 (m, 1H), 7.36-7.43 (m, 3H), 7.47 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.71 (s, 1H), 8.07 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 9.14-9.17 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z (%) = 388.1158 [M+Na]⁺ (theoretisch: 388.1155).
C. Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(3-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat
Die Synthese wurde analog der Stufe D von Beispiel 1 unter Einsatz von 911 mg (2.49 mmol) Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)-1-(oxiranylmethyl)indol-5-carboxylat, 21 mg (2.53 mmol) 4-Octylphenol und 62 mg (0.50 mmol) 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt. Die Reaktionszeit betrug 45 min. Das Produkt wurde nach säulenchromatographischer Reinigung (Hexan/Ethylacetat 7:3) als farbloser Feststoff erhalten.
Ausbeute: 680 mg, 48%; C₃₅H₄₁NO₆ (571.7); Schmp.: 83–84°C
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.9 Hz), 1.24-1.34 (m, 10H), 1.53–1.62 (m, 2H), 2.52-2.58 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.89-3.95 (m, 4H), 4.00 (dd, 1H, J = 9.5 Hz und 4.7 Hz), 4.32-4.44 (m, 2H), 4.51 (dd, 1H, J = 13.6 Hz und 3.5 Hz), 6.80 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 7.06-7.12 (m, 3H), 7.27-7.36 (m, 3H), 7.45 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.77 (m, 1H), 8.01 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.7 Hz), 9.10-9.12 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z = 594.2835 [M+Na]⁺ (theoretisch: 594.2826).
D. Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat
Die Darstellung erfolgte aus 612 mg (1.07 mmol) Methyl-1-[2-hydroxy-3-(4-octylphenoxy)propyl]-3-(3-methoxybenzoyl)indol-5-carboxylat analog der Synthese der Stufe E von Beispiel 1. Das Produkt fiel als Öl an.
Ausbeute: 502 mg, 82%; C₃₅H₃₉NO₆ (569.7)
¹H-NMR (CDCl₃): δ (ppm) = 0.88 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.22-1.35 (m, 10H), 1.54-1.63 (m, 2H), 2.55-2.60 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 5.31 (s, 2H), 6.83-6.88 (m, 2H), 7.08-7.19 (m, 3H), 7.35-7.42 (m, 3H), 7.61 (s, 1H), 8.02 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 9.15-9.17 (m, 1H); HRMS (ESI): m/z = 592.2663 [M+Na]⁺ (theoretisch: 592.2670).
E. 3-(3-Methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Synthese erfolgte analog der Darstellung der Stufe F von Beispiel 1 unter Verwendung von 220 mg (0.39 mmol) Methyl-3-(3-methoxybenzoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carboxylat, 12 ml Ethanol und 4 ml 10%iger wässriger Kaliumhydroxid-Lösung. Die Reaktionszeit betrug 14 h. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 7:3 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Feststoff erhalten.
Ausbeute: 60 mg, 28%; C₃₄H₃₇NO₆ (555.7); Schmp.: 156°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 0.83 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.17-1.30 (m, 10H), 1.45-1.55 (m, 2H), 2.46-2.52 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 4.98 (s, 2H), 5.55 (s, 2H), 6.88 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.09 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 7.16-7,20 (m, 1H), 7.26-7.30 (m, 1H), 7.34 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 7.46 (t, 1H, J = 7.7 Hz), 7.62 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.87 (dd, 1H, J = 8.8 Hz und 1.8 Hz), 8.10 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 12.66 (s_breit, 1H); HRMS (APCI): m/z = 556.2759 [M+H]⁺ (theoretisch: 556.2694). Beispiel 8 3-(4-Methoxybutanoyl)-1-[3-(4-phenoxyphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte ausgehend von Stufe B von Beispiel 2 analog der Synthese von Beispiel 2 unter Verwendung von 4-Phenoxyphenol anstelle von 4-Octylphenol. Die Reinigung erfolgte mittels Säulenchromatographie an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 1:1 + 1% Essigsäure).
Schmp.: 165–167°C; C₂₉H₂₇NO₇ (501.5)
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.87 (quint, 2H, J = 7.0 Hz), 2.87 (t, 2H, J = 72 Hz), 3.21 (s, 3H), 3.36 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 5.07 (s, 2H), 5.53 (s, 2H), 6.91 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 6.99-7.08 (m, 5H), 7.32-7.36 (m, 2H), 7.57 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.5 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.85-8.86 (m, 1H). HRMS (APCI): m/z = 502.1882 [M+H]⁺ (theoretisch: 502.1860). Beispiel 9 1-{3-[4-(4-Fluorphenoxy)phenoxy]-2-oxopropyl}-3-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte ausgehend von Stufe B von Beispiel 2 analog der Synthese von Beispiel 2 unter Verwendung von 4-(4-Fluorphenoxy)phenol anstelle von 4-Octylphenol. Die Reinigung erfolgte mittels Säulenchromatographie an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 1:1 + 1% Essigsäure).
Schmp.: 165–167°C; C₂₉H₂₆FNO₇ (519.5)
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.87 (quint, 2H, J = 6.8 Hz), 2.87 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.21 (s, 3H), 3.36 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 5.06 (s, 2H), 5.53 (s, 2H), 6.95-7.05 (m, 6H), 7.17 (t, 2H, J = 8.6 Hz), 7.57 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 12.64 (s_breit, 1H). HRMS (APCI): m/z = 520.1780 [M+H]⁺ (theoretisch: 520.1766). Beispiel 10 1-{3-[4-(4-Chlorphenoxy)phenoxy]-2-oxopropyl}-(4-methoxybutanoyl)indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte ausgehend von Stufe B von Beispiel 2 analog der Synthese von Beispiel 2 unter Verwendung von 4-(4-Chlorphenoxy)phenol anstelle von 4-Octylphenol. Die Reinigung erfolgte mittels Säulenchromatographie an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 1:1 + 1% Essigsäure).
Schmp.: 145–147°C; C₂₉H₂₆ClNO₇ (536.0)
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.87 (quint, 2H, J = 6.7 Hz), 2.87 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 3.21 (s, 3H), 3.36 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 5.08 (s, 2H), 5.53 (s, 2H), 6.93 (d, 2H, J = 6.9 Hz), 7.00-7.05 (m, 4H), 7.38 (d, 2H, J = 6.7 Hz), 7.58 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.6 Hz), 8.36 (s, 1H), 8.86 (d, 1H, J = 1.2 Hz), 12.48 (s_breit, 1H). HRMS (APCI): m/z = 536.1515 [M+H]⁺ (theoretisch: 536.1471). Beispiel 11 3-(6-Cyanhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
A. Methyl-3-(6-cyanhexanoyl)indol-5-carboxylat
Zu 615 mg (1.75 mmol) Methyl-3-(6-bromhexanoyl)indol-5-carboxylat (Stufe A von Beispiel 3) gelöst in 20 ml absol. Dimethylsulfoxid wurden 173 mg (3.52 mmol) Natriumcyanid sowie 51 mg (0.34 mmol) Natriumiodid zugegeben. Die Mischung wurde 2 h auf 90°C erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde dreimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Tetrahydrofuran/Hexan 4:6) wurde das Produkt als farbloser Feststoff erhalten.
Ausbeute: 473 mg, 91%; C₁₇H₁₈N₂O₃ (298.3); Schmp.: 197–198°C;
¹H-NMR (DMSO-d₆): δ (ppm) = 1.39-1.47 (m, 2H), 1.55-1.62 (m, 2H), 1.63-1.71 (m, 2H), 2.45-2.50 (m, 2H), 2.86-2.91 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 7.54 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.81 (dd, 1H, J = 8.6 Hz und 1.7 Hz), 8.47 (s, 1H), 8.87-8.88 (m, 1H), 12.23 (s_breit, 1H); MS (EI): m/z (%) = 298 (20) [M]⁺, 217 (100).
B. 3-(6-Cyanhexanoyl)-1-[3-(4-octylphenoxy)-2-oxopropyl]indol-5-carbonsäure
Die Darstellung erfolgte ausgehend von Methyl-3-(6-cyanhexanoyl)indol-5-carboxylat mit den in Beispiel 1 (Stufen C bis F) beschriebenen Reaktionen. Nach säulenchromatographischer Reinigung an Kieselgel (Hexan/Ethylacetat 8:2 + 1% Essigsäure) wurde das Produkt als Öl erhalten.
C₃₃H₄₀N₂O₅ (5447)
¹H-NMR (THF-d₈): δ (ppm) = 0.89 (t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.25-1.38 (m, 10H), 1.49-69 (m, 6H), 1.76-1.84 (m, 2H), 2.36-2.42 (m, 2H), 2.54-2.61 (m, 2H), 2.87 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 4.78 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 6.93 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.15 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 7.28 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.90 (dd, 1H, J = 8.7 Hz und 1.6 Hz), 8.03 (s, 1H), 9.07-9.09 (m, 1H); MS (ESI): m/z = 543.4 [M-H]^–.
Beispiel 12
Bestimmung der Wasserlöslichkeit
Die Bestimmung der Wasserlöslichkeit der Verbindungen erfolgte, wenn im Folgenden nicht abweichend beschrieben, in Anlehnung an die von Kim et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 3621–3629 publizierte Methode.
Jeweils 1 mg der Verbindungen wurden mit 2 ml Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS-Puffer, pH = 7.4, 0.01 M KH₂PO₄/K₂HPO₄, 0.0027 M KCl, 0.137 M NaCl bei 25°C, hergestellt durch Lösen einer Phosphate Buffered Saline Tablet, Fa. Sigma (Katalog-Nr: P4417) in 200 ml deionisiertem Wasser) versetzt. Die Mischung wurde 10 Minuten in ein Ultraschallbad (Sonorex TK52, Bandelin) gestellt und dann 20 Stunden im Schüttelwasserbad (GFL 1083) bei Raumtemperatur (20°C–23°C) leicht geschüttelt. Im Anschluss wurde 10 Minuten bei 4000 × g und Raumtemperatur zentrifugiert. Vom Überstand wurde etwa 1 ml klare Lösung abgenommen. 200 μl der klaren Lösung wurden mit 250 μl Acetonitril (VWR) und 50 μl 0.1 M Phosphorsäure versetzt. Von dieser Lösung wurde ein Volumen zwischen 5 μl und 100 μl in eine HPLC-Anlage (Fa. Waters, Waters Autosampler 717plus, Waters Pumpe 515 und Waters UV-Detektor 2487) injiziert.
Der Gehalt an gelöster Verbindung wurde mit Hilfe einer Standardgeraden bestimmt, die durch Injektion unterschiedlicher Mengen im Bereich von 5 μl bis 100 μl an Referenzlösung 1 und 2 erstellt wurde. Für Referenzlösung 1 wurden 2 μl einer 5 mM Lösung der jeweiligen Verbindung in Dimethylsulfoxid (DMSO) mit 198 μl PBS-Puffer, 250 μl Acetonitril und 50 μl 0.1 M Phosphorsäure versetzt. Für Referenzlösung 2 wurden 2 μl einer 5 mM Lösung der jeweiligen Verbindung in DMSO mit 398 μl PBS-Puffer, 500 μl Acetonitril sowie 100 μl 0.1 M Phosphorsäure versetzt.
Als stationäre Phase wurden C₁₈ Aqua^®-Säulen der Firma Phenomenex (Aqua^®, RP18, 75 × 4.6 mm, 3 μm) verwendet. Die Detektionswellenlänge betrug 240 nm, die Flussrate betrug 0.7 ml/min. Als mobile Phase wurde ein Gemisch aus Acetonitril/Wasser/Phosphorsäure (85%) verwendet.
Beispiel 13
Bestimmung der Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂
Die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde anhand der Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ bestimmt. Die Bestimmung erfolgte, wenn im Folgenden nicht abweichend beschrieben, wie in Schmitt, M.; Lehr, M. HPLC assay with UV spectrometric detection for the evaluation of inhibitors of cytosolic phospholipase A2. J. Pharm. Biomed. Anal. 2004, 35, 135–142 beschrieben.
Als Enzymquelle wurde aus humanen Thrombozyten isolierte cytosolische Phospholipase A₂ verwendet. Die Hemmung der Enzymaktivität wurde durch Messung der bei der Spaltung von 1-Stearoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholin freigesetzten Arachidonsäure in An- und Abwesenheit der jeweiligen untersuchten Verbindung erfasst.
Zur Herstellung einer Lösung von Covesikeln aus dem Substrat 1-Stearoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholin (SAPC) (Cayman) und 1,2-Dioleoyl-sn-glycerol (DOG) (Cayman) wurden entsprechende Mengen einer Ethanollösung von SAPC (10 mg/ml) und einer Acetonitrillösung von DOG (10 mg/ml) gemischt und dann die Lösungsmittel im Stickstoffstrom abgedampft. Der Rückstand wurde mit so viel Tris Puffer (50 mM Tris, 1 mM Dithiothreitol, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, pH 8 bei 20°C) versetzt, so dass eine Konzentration an SAPC von 0.26 mM und an DOG von 0.13 mM vorlag. Die Mischung wurde 10 Minuten im Ultraschallbad bei 35°C zur Bildung von Covesikeln homogenisiert.
In Eppendorf-Gefäßen wurden 2 μl der Lösung der jeweiligen Verbindung in DMSO (hergestellt aus einer 5 mM Stammlösung in DMSO) bzw. im Falle der Kontrollwerte 2 μl DMSO mit je 78 μl der Substratmischung versetzt.
Nach 10 Minuten Vorinkubation im Wasserbad bei 37°C wurden je 20 μl der Lösung der aus humanen Thrombozyten gewonnenen cytosolischen Phospholipase A₂ zugegeben und für weitere 60 Minuten bei 37°C inkubiert. Die Inkubationsansätze von je 100 μl enthielten 0.20 mM SAPC und 0.10 mM DOG. Danach wurde die Enzymreaktion gestoppt durch Zugabe von 400 μl einer Lösung aus Acetonitril/Methanol/0.1 M wässriger EDTA-Lösung im Verhältnis 16:15:1 (v/v/v), wobei diese Lösung 3 μg/ml Nordihydroguaiaretsäure (NDGA) (Sigma) als Antioxidans und 1.55 μg/ml 4-Undecyloxybenzoesäure als internen Standard enthielt. Anschließend wurden die Proben 10 bis 15 Minuten in Eis gestellt und dann bis zur Festphasenextraktion bei –20°C gelagert.
Die Octadecyl-Festphasenextraktionssäulen mit einem Bettvolumen von 200 mg und einem Fassungsvermögen von 3 ml (Fa. Baker) wurden zunächst mit 6 ml Methanol und dann mit 6 ml Wasser gewaschen. Die Proben wurden mit 2 ml 0.005 M wässriger NaOH verdünnt und dann auf die Festphasensäule aufgegeben. Nach Waschen mit 1 ml Wasser wurde die gebundene Arachidonsäure mit 3 × 200 μl Methanol eluiert. Das Eluat wurde mit 600 μl Wasser versetzt und gemischt. 100 μl dieser Lösung wurde in die HPLC-Apparatur (Fa. Waters, Waters Autosampler 717plus, Waters Pumpe 515 und Waters UV-Detektor 2487) eingespritzt. Die Datenauswertung erfolgte mit dem Softwareprogramm Millenium. Als Trennsäule wurde eine Nucleosil 100 – 3 C18 Trennsäule (125 × 3 mm) mit einer Nucleosil 100 – 3 C18 Vorsäule (20 × 3 mm) (Fa. CS-Chromatographie-Service, Langerwehe) verwendet. Die Fließgeschwindigkeit betrug 0.4 ml/min, die Detektionswellenlänge 200 nm. Als Fließmittel wurde ein Gemisch aus Acetonitril/Wasser/Phosphorsäure (85%) im Verhältnis 770:230:1 (v/v/v) verwendet. Die Laufzeit der Chromatogramme betrug 30 Minuten. Vor der nächsten Einspritzung wurde jeweils 15 Minuten equilibriert.
Die IC₅₀-Werte wurden rechnerisch aus den bei unterschiedlichen Konzentrationen erhaltenen Werten der Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ mit Hilfe des Probit-Verfahrens (s. Hartke, Mutschler, DAB 9 Kommentar Band 1 S. 733–734, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart 1978) bestimmt.
Der IC₅₀-Wert der Verbindungen für die Hemmung der cytosolischen Phospholipase A₂ entspricht der Konzentration, die nötig ist, die Aktivität des Enzyms auf die Hälfte zu reduzieren. Je niedriger der IC₅₀-Wert ist, je stärker hemmt die Verbindung die cytosolische Phospholipase A₂.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

WO 2004/069797 [0006, 0078]
WO 2009/040314 [0006, 0078]

Zitierte Nicht-Patentliteratur

Murakami, M.; Taketomi, Y.; Miki, Y.; Sato, H.; Hirabayashi, T.; Yamamoto, K. Recent progress in phospholipase research: From cells to animals to humans. Progress in Lipid Research 2011, 50, 152–192 [0001]
Linkous A., Yazlovitskaya, E. Cytosolic phospholipase A2 as a mediator of disease pathogenesis. Cellular Microbiology 2010, 12, 1369–1377 [0004]
s. Hartke, Mutschler, DAB 9 Kommentar Band 1 S. 733–734, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart 1978 [0051]
Kim et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 3621–3629 [0122]
Schmitt, M.; Lehr, M. HPLC assay with UV spectrometric detection for the evaluation of inhibitors of cytosolic phospholipase A2. J. Pharm. Biomed. Anal. 2004, 35, 135–142 [0126]
s. Hartke, Mutschler, DAB 9 Kommentar Band 1 S. 733–734, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart 1978 [0132]

Claims

Verbindungen der allgemeinen Formel (I) wie nachstehend angegeben:
worin R¹ für COR² steht; R² ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend D–E; D ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend C₁-C₈-Alkyl, C₂-C₈-Alkenyl, C₂-C₈-Alkinyl, Aryl, T-Aryl, T-Aryl-G und/oder Aryl-G; T, G gleich oder unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe umfassend C₁-C₈-Alkyl, C₂-C₈-Alkenyl und/oder C₂-C₈-Alkinyl; E ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend OR³ und/oder CN; R³ für H oder C_1-6-Alkyl steht; R⁴ und R⁵ a) unabhängig voneinander für H, C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl, C_2-6-Alkinyl oder R⁶-COOH stehen, oder c) zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, für einen 5- oder 6-gliedrigen aromatischen oder heteroaromatischen Ring stehen, der mit 1 oder 2 Substituenten R⁷ substituiert sein kann; R⁶ für C_1-6-Alkyl, C_2-6-Alkenyl oder C_2-6-Alkinyl steht; R⁷ für C_1-6-Alkyl, Halogen, CF₃, CN oder COOH steht; Q für R⁸, OR⁸ und SR⁸ R⁸ für H, einen Arylrest, der mit 1 oder 2 Substituenten R⁹ substituiert sein kann, oder einen geradkettigen C_1-16-Alkyl- oder C_2-16-Alkenyl- oder -Alkinylrest, der mit 1 oder 2 Resten, unabhängig ausgewählt aus O, S und Aryl, das mit 1 oder 2 Substituenten R⁹ substituiert sein kann, unterbrochen sein kann, und der mit 1 bis 2 C_1-6-Alkylresten substituiert sein kann, steht; Ar für einen Arylrest steht, der mit 1 oder 2 Substituenten R⁹ substituiert sein kann; R⁹ für C_1-6-Alkyl, Halogen, OR⁶, SR⁶ oder CF₃ steht; und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze und/oder Ester.
Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für CO-(CH₂)_r-OR³, worin r ist 1, 2, 3, 4 oder 5.
Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass Q für Octyl, O-Phenyl, O-(4-Fluorphenyl) oder O-(4-Chlorphenyl) steht.
Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung die nachstehende Formel (2) aufweist:
Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung die nachstehende Formel (4) aufweist:
Verbindung nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung die nachstehende Formel (9) aufweist:
Pharmazeutisches Mittel umfassend eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) nach einem der vorherigen Ansprüche und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze oder Ester.
Verwendung einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) nach einem der vorherigen Ansprüche und/oder deren Enantiomere, Diastereomere sowie deren pharmazeutisch verträglichen Salzen und/oder Estern zur Herstellung eines pharmazeutischen Mittels zur prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung von Erkrankungen, die durch eine erhöhte Aktivität der Phospholipase A₂ verursacht oder mitverursacht werden.
Verwendung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Erkrankung ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Entzündungen, Schmerz, Fieber, Allergien, Asthma, Psoriasis, cerebrale Ischämie, Alzheimersche Erkrankung, chronische Hauterkrankungen, Schädigung der Haut durch UV-Strahlen, rheumatische Erkrankungen, Thrombose, anaphylaktischer Schock, Urtikaria, akute und chronische Exantheme und/oder Endotoxinschock sowie Tumorerkrankungen.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß der allgemeinen Formel (I) nach einem der vorherigen Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (IV)
mit Epichlorhydrin zu einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (V)
umsetzt und die Verbindung der Formel (V) weiter mit einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (VI) Q-Ar-OH (VI) zu einer Verbindung gemäß der nachstehenden allgemeinen Formel (VII)
umsetzt und Verbindung (VII) zum Keton oxidiert.