DE102006011277A1 - Laser scanning microscope for detecting fluorescent radiation, has detection module with detection unit that detects linear sections in such a manner that linear probe radiation bundle is produced for each section - Google Patents
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft ein Laser-Scanning-Mikroskop sowie ein Laser-Scanning-Mikroskopierverfahren, die insbesondere zur Detektion von Fluoreszenzstrahlung geeignet sind.The The invention relates to a laser scanning microscope and to a laser scanning microscopy method, in particular suitable for the detection of fluorescence radiation are.
Für die fluoreszenzmikroskopische Vermessung sind verschiedene Detektionsprinzipien bekannt. So kann beispielsweise ein Laserstrahl punktförmig auf die Probe fokussiert und das von der Probe emittierte Fluoreszenzlicht durch eine Pinhole-Blende örtlich gefiltert und mit einem nachgeordneten, nicht ortsauflösenden Detektor registriert werden. Nachteilig ist hierbei jedoch, daß zum einen viele bewegliche Teile (zwei Scanner zur Ablenkung des fokussierten Laserstrahls über die gesamte Probe) verwendet werden müssen, was die Standzeit begrenzt. Ferner wird die Farbstoffanregung durch die sehr hohe Spitzenintensitäten im Fokus leicht gesättigt, so daß dies eine obere Grenze der maximalen Geschwindigkeit zur Erfassung eines örtlich aufgelösten Fluoreszenzbildes der Probe setzt. Des weiteren tritt auch die Schwierigkeit auf, daß eine starke Ausbleichung der Farbstoffe auftritt.For the fluorescence microscopy Surveying various detection principles are known. So can For example, a laser beam focused punctiform on the sample and locally filtering the fluorescent light emitted by the sample through a pinhole aperture and registered with a downstream, non-spatially resolving detector become. The disadvantage here, however, that on the one hand many moving Parts (two scanners to deflect the focused laser beam over the entire sample), which limits the service life. Furthermore, the dye excitation is in focus due to the very high peak intensities slightly saturated, so that this an upper limit of the maximum speed for detecting a spatially resolved fluorescence image the sample sets. Furthermore, the difficulty arises that one strong fading of the dyes occurs.
Die Probe kann mit einer linienförmig fokussierten Laserstrahlung beleuchtet werden, wobei diese Beleuchtungslinie dann über die Probe gescannt wird, um ein Bild der gesamten Probe zu erhalten. Die Detektion erfolgt beispielsweise mit einem CCD- oder CMOS-Zeilendetektor. Licht aus anderen Ebenen wird bei diesem Verfahren bevorzugt konfokal unterdrückt. Wenn man jedoch mehrere Farbstoffe in der Probe hat, die mit verschiedenen Laserwellenlängen angeregt werden müssen, so muß die Probe entweder mehrfach mit jeweils einer der Anregungswellenlängen vermessen werden, oder man regt die Fluoreszenz gleichzeitig mit allen Anregungslaserlinien an und detektiert das von allen Linien angeregte Licht spektral. Bei der ersten Alternative führt dies zu einer höheren Meßzeit. Bei der zweiten Alternative kann man nicht unterscheiden, welche Fluoreszenzstrahlung von welcher Laserstrahlung erzeugt wurde.The Sample may be with a line focused laser radiation are illuminated, this illumination line then over the sample is scanned to obtain an image of the entire sample. The Detection takes place, for example, with a CCD or CMOS line detector. Light from other planes is preferably confocally suppressed in this method. If However, one has several dyes in the sample with different Laser wavelengths need to be stimulated so must the Measure the sample either several times with one of the excitation wavelengths or stimulate fluorescence simultaneously with all excitation laser lines and spectrally detects the light excited by all lines. at the first alternative leads this to a higher one Measuring time. In the second alternative one can not distinguish which ones Fluorescence radiation from which laser radiation was generated.
Es ist auch möglich, die Probe flächig zu beleuchten und mit einem ortsauflösenden Detektor zu vermessen. Spektrale Informationen können aber nur seriell gewonnen werden. Um eine konfokale Unterdrückung zu erreichen, müssen weitere aufwendige Maßnahmen ergriffen werden, so daß dieses Verfahren insgesamt nur für Proben mit wenigen Farbstoffen geeignet ist.It is possible, too, the sample flat to illuminate and to measure with a spatially resolving detector. Spectral information can but only be won serially. To a confocal suppression too reach, must further elaborate measures be taken so that this Total procedure only for Samples with a few dyes is suitable.
Ausgehend hiervon ist es Aufgabe der Erfindung, ein Laser-Scanning-Mikroskop sowie ein Laser-Scanning-Mikroskopierverfahren bereitzustellen, das einen möglichst einfachen Aufbau aufweist und hohe Meßgeschwindigkeiten ermöglicht.outgoing It is the object of the invention to provide a laser scanning microscope and to provide a laser scanning microscopy method, the one possible has a simple structure and allows high measuring speeds.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe gelöst durch ein Laser-Scanning-Mikroskop mit einem Beleuchtungsmodul, das einen ersten linienförmigen und einen davon beabstandeten zweiten linienförmigen Abschnitte einer zu untersuchenden Probe mit Laserstrahlung unterschiedlicher Wellenlängen beleuchtet, wobei in jedem Abschnitt aufgrund einer Wechselwirkung der Laserstrahlung mit der Probe Probenstrahlung erzeugt wird, mit einem Scanmodul, das eine Relativbewegung zwischen der Laserstrahlung zur Beleuchtung der Abschnitte und der Probe quer zu den linienförmigen Abschnitten bewirkt, und mit einem Detektionsmodul, das eine erste Detektionseinheit sowie einen ortsauflösenden Detektor umfaßt, wobei die erste Detektionseinheit die linienförmigen Abschnitte derart örtlich getrennt konfokal erfaßt, daß für jeden Abschnitt ein linienförmiges Probenstrahlenbündel erzeugt wird, das jeweils mittels des Detektors örtlich aufgelöst detektiert wird.According to the invention Task solved by a laser scanning microscope with a lighting module that has a first line-shaped and one of them spaced apart second line-shaped sections to one examining sample with laser radiation of different wavelengths, being in each section due to an interaction of the laser radiation With the sample sample radiation is generated, with a scan module, the a relative movement between the laser radiation for illumination the sections and the sample transversely to the linear sections causes and with a detection module, which is a first detection unit as well as a spatially resolving Detector comprises, wherein the first detection unit spatially separated the line-shaped sections detected confocally, that for everyone Section a line-shaped Samples ray beam is generated, which detects each spatially resolved by means of the detector becomes.
Da das Laser-Scanning-Mikroskop (bevorzugt gleichzeitig) zwei linienförmige Abschnitte beleuchtet und diese (bevorzugt gleichzeitig) örtlich getrennt konfokal erfassen kann, ist es möglich, die Probenstrahlung sowohl nach Emissionswellenlängen als auch nach Anregungswellenlängen (bevorzugt gleichzeitig) getrennt zu detektieren. Dies ist insbesondere vorteilhaft, wenn Fluoreszenzstrahlung von mehreren Farbstoffen, die in die Probe eingebracht sind, detektiert werden sollen. So ist es insbesondere möglich, zwei bis acht verschiedene Farbstoffe in der Probe zu separieren und deren Mengenverhältnisse zu bestimmen. Es müssen nur die entsprechende Anzahl von linienförmigen Abschnitten, die voneinander beabstandet sind, mit Laserstrahlung unterschiedlicher Wellenlänge beleuchtet und entsprechend konfokal detektiert werden.There the laser scanning microscope (preferably at the same time) two line-shaped sections illuminated and these (preferably simultaneously) seize confocal detected locally can, it is possible the sample radiation both after emission wavelengths and after excitation wavelengths (preferably simultaneously) Detect separately. This is particularly advantageous when Fluorescent radiation of several dyes in the sample are introduced, to be detected. So it is possible in particular, two to separate eight different dyes in the sample and their proportions too determine. To have to only the appropriate number of line-shaped sections, from each other are spaced, illuminated with laser radiation of different wavelengths and accordingly detected confocally.
Um ein örtlich aufgelöstes Bild der detektierten Probenstrahlung zu erhalten, kann mittels des Scanmoduls lediglich die Probe relativ zu der Laserstrahlung bewegt werden. Dies kann beispielsweise mit einem herkömmlichen x-y-Probentisch eines Mikroskops realisiert werden. Es muß also nur ein bewegliches Teil vorgesehen werden, um das gewünschte Bild zu erhalten. Dies vereinfacht den Aufbau, senkt die Herstellungskosten und führt zu hohen Standzeiten.Around a local resolved To obtain image of the detected sample radiation, can by means of the scan module only the sample relative to the laser radiation to be moved. This can be done, for example, with a conventional one x-y stage of a microscope can be realized. So it just has to a moving part can be provided to the desired image to obtain. This simplifies the construction, lowers the manufacturing costs and leads too long service life.
Die Probenstrahlung der linienförmigen Abschnitte kann mittels des Detektors gleichzeitig detektiert werden, so daß die Detektionsgeschwindigkeit erhöht werden kann.The Sample radiation of the linear Sections can be detected simultaneously by means of the detector, So that the Detection speed increased can be.
Das Detektionsmodul kann eine zweite Detektionseinheit aufweisen, die die von der ersten Detektionseinheit kommenden Probenstrahlenbündel jeweils quer zur linienförmigen Ausdehnung spektral aufspaltet, wobei der Detektor bei der Detektion der Probenstrahlenbündel jeweils zumindest eine spektral aufgespaltene Wellenlänge örtlich ausgelöst detektiert. Damit kann man eine sehr hohe spektrale Auflösung bei der Detektion erreichen.The detection module may have a second detection unit, which spectrally splits the sample bundles of rays coming from the first detection unit transversely to the linear expansion, the detector each detecting at least one spek in the detection of the sample beams tral split wavelength detected triggered locally. This can achieve a very high spectral resolution during detection.
Das Beleuchtungsmodul kann mehr als zwei voneinander beabstandete, linienförmige Abschnitte mit Laserstrahlung unterschiedlicher Wellenlängen befeuchtet. Insbesondere können beispielsweise drei bis zehn Abschnitte gleichzeitig beleuchtet und auch detektiert werden.The Lighting module can more than two spaced-apart, line-shaped sections with Laser radiation of different wavelengths moistened. Especially can For example, illuminated three to ten sections simultaneously and also detected.
Die erste Detektionseinheit kann zur örtlich getrennten konfokalen Erfassung eine Spaltblende aufweisen, die für jeden Abschnitt einen linienförmigen Spalt enthält. Mit einer solchen Spaltblende kann man in einfacher Art und Weise die gewünschte konfokale Detektion realisieren.The first detection unit may be for locally segregated confocal Detecting a slit, which for each section a line-shaped gap contains. With such a slit aperture you can in a simple manner the desired realize confocal detection.
Das Beleuchtungsmodul kann zur Beleuchtung jedes Abschnitts die jeweilige Laserstrahlung linienförmig auf oder in die Probe fokussieren. Bevorzugt liegt quer zur Erstreckungsrichtung eine beugungsbegrenzte Fokussierung vor, um eine möglichst gute konfokale Detektion zu erzielen.The Lighting module can illuminate each section of the respective Laser radiation linear Focus on or in the sample. Preferably lies transversely to the direction of extension a diffraction-limited focusing in order to a possible to achieve good confocal detection.
Das Beleuchtungsmodul kann insbesondere noch so ausgebildet sein, daß die Fokustiefe in der Probe veränderbar ist. Dadurch ist es möglich, verschiedene optische Schnitte in unterschiedlichen Probentiefen durchzuführen.The Lighting module may in particular still be designed so that the depth of focus changeable in the sample is. This makes it possible different optical sections in different sample depths perform.
Die linienförmigen Abschnitte verlaufen bevorzugt parallel zueinander. Dies erleichtert den Aufbau des Beleuchtungs- sowie des Detektionsmoduls.The linear Sections preferably run parallel to each other. This facilitates the structure of the illumination and the detection module.
Das Detektionsmodul kann als Probenstrahlung insbesondere die durch die Laserstrahlung angeregte Fluoreszenzstrahlung detektieren.The Detection module can as sample radiation in particular by detect the laser radiation excited fluorescence radiation.
Das Scanmodul kann mindestens einen Scanner-Spiegel (z.B. drehbarer Ablenkspiegel) aufweisen, der die Laserstrahlung für die Abschnitte simultan über die Probe lenkt. Mittels des bzw. der Scanner-Spiegel wird die Relativbewegung teilweise oder vollständig bewirkt. Wenn die Laserstrahlung linienförmig fokussiert wird, erfolgt die Ablenkung bevorzugt quer (insbesondere senkrecht) zur linienförmigen Ausdehnung der linienförmig fokussierten Laserstrahlung.The Scanning module may include at least one scanner mirror (e.g. Ablenkspiegel), the laser radiation for the sections simultaneously over the sample steers. By means of the scanner mirror or the relative movement partially or completely causes. When the laser radiation is focused linear, takes place the deflection preferably transversely (in particular perpendicular) to the linear expansion the linear focused laser radiation.
Das Detektionsmodul kann einen Filter enthalten, der aus der Probenstrahlung (also vor der konfokalen Erfassung) und/oder aus den Probenstrahlenbündeln (also nach der konfokalen Erfassung) die Wellenlängen der Laserstrahlung herausfiltert. Damit können z.B. bei der Detektion von Fluoreszenzstrahlung als Probenstrahlung die häufig unerwünschten Anregungswellenlängen herausgefiltert werden.The Detection module may contain a filter that is out of the sample radiation (ie before the confocal detection) and / or from the sample beams (ie after confocal detection) filters out the wavelengths of the laser radiation. With that you can e.g. in the detection of fluorescence radiation as sample radiation the common undesirable Excitation wavelengths be filtered out.
Der ortsauflösende Detektor ist insbesondere ein flächiger, ortsauflösender Detektor. Er kann beispielsweise als CMOS- oder als CCD-Detektor ausgebildet sein.Of the spatially resolving Detector is in particular a flat, spatially Resolved Detector. It can be designed, for example, as a CMOS or CCD detector be.
Ferner kann der Detektor als linienförmiger, ortsauflösender Detektor ausgebildet sein, wobei in diesem Fall die zweite Detektionseinheit bevorzugt eine dem Detektor vorgeschaltete Ablenkeinheit enthält, die den gewünschten Teil des spektral aufgespaltenen Probenstrahlenbündels auf den Detektor lenkt. Die Ablenkeinheit kann beispielsweise ein drehbar gelagerter Ablenkspiegel sein.Further the detector can be used as a linear, spatially resolving detector be formed, in which case the second detection unit preferably contains a deflection unit upstream of the detector, the the wished Part of the spectrally split sample beam directs to the detector. The deflection unit may, for example, a rotatably mounted deflection mirror be.
Zur spektralen Aufspaltung der Probenstrahlenbündel kann die zweite Detektionseinheit beispielsweise ein Ablenkprisma, ein Gitter oder auch ein sonstiges optisches bzw. dispersives Element enthalten, das die gewünschte spektrale Aufspaltung durchführt.to spectral splitting of the sample beam, the second detection unit For example, a deflection prism, a grid or any other contain optical or dispersive element, the desired spectral Splitting up.
Das Beleuchtungsmodul kann eine Laserquelle zur Erzeugung der Laserstrahlung mit den unterschiedlichen Wellenlängen enthalten.The Illumination module can be a laser source for generating the laser radiation containing the different wavelengths.
Ferner kann das Beleuchtungsmodul eine Abbildungseinheit umfassen, die die Abschnitte mit linienförmig fokussierten Laserstrahlenbündel beleuchtet. Die Abbildungseinheit ist insbesondere so ausgebildet, daß die Fokustiefe in der Probe verstellbar und einstellbar ist.Further For example, the lighting module may include an imaging unit that the sections are linear focused laser beam illuminated. The imaging unit is designed in particular that the Focus depth in the sample is adjustable and adjustable.
Ferner kann das Beleuchtungsmodul zur Erzeugung der Laserstrahlenbündel die Laserstrahlung durch eine Spaltblende transmittieren, die für jeden zu beleuchtenden Abschnitt einen transmissiven Spalt aufweist, wobei die einzelnen Spalte voneinander beabstandet sind.Further For example, the illumination module for generating the laser beams can Transmitting laser radiation through a slit diaphragm, which is for everyone illuminating portion has a transmissive gap, wherein the individual columns are spaced from each other.
Das Mikroskop kann ferner noch eine Steuereinheit umfassen, die zur Steuerung des Mikroskops dient. Die Steuereinheit ist insbesondere so ausgebildet, daß die beschriebenen Funktionen des Laser-Scanning-Mikroskops realisiert werden können.The Microscope may further comprise a control unit, the Control of the microscope is used. The control unit is in particular designed so that the realized functions of the laser scanning microscope can be.
Ferner kann das Mikroskop noch ein Auswertemodul umfassen, dem die Daten des Detektors zugeführt sind. Das Auswertemodul erzeugt aus diesen Daten dann die gewünschten (bevorzugt ortsaufgelösten) Bilder der Probenstrahlung.Further the microscope may also comprise an evaluation module to which the data fed to the detector are. The evaluation module then generates the desired data from this data (preferably spatially resolved) Images of the sample radiation.
Das Scanmodul kann bewirken, daß die Probe in einem Flüssigkeitsstrom so geführt wird, daß sie zumindest einen Beitrag zur Relativbewegung liefert. Ein weiterer Beitrag zur Relativbewegung kann beispielsweise mittels eines bewegbaren Probentisches oder eines Ablenkspiegels in dem Scanmodul erfolgen. Natürlich kann die Relativbewegung auch vollständig mittels des Flüssigkeitsstroms erzielt werden.The scanning module may cause the sample to be guided in a fluid stream to provide at least a contribution to the relative movement. A further contribution to the relative movement can be made, for example, by means of a movable sample table or a deflection mirror in the scan module. Of course, the relative movement can be achieved completely by means of the liquid flow who the.
Das Laser-Scanning-Mikroskop kann somit als bildgebendes Zytometer bzw. bildgebendes Flow-Zytometer weitergebildet werden.The Laser scanning microscope can thus be used as an imaging cytometer or imaging flow cytometer.
Wenn die Laserstrahlung linienförmig fokussiert wird, kann das Scanmodul so ausgebildet werden, daß der Flüssigkeitsstrom in einer Objektebene des Mikroskops senkrecht zur linienförmigen Ausdehnung der linienförmig fokussierten Laserstrahlung fließt.If the laser radiation linear is focused, the scan module can be formed so that the liquid flow in an object plane of the microscope perpendicular to the linear extension the linear focused laser radiation flows.
Die Aufgabe wird ferner gelöst durch ein Laser-Scanning-Mikroskopierverfahren, bei dem ein erster linienförmiger und ein davon beabstandeter zweiter linienförmiger Abschnitt einer zu untersuchenden Probe (bevorzugt gleichzeitig) mit Laserstrahlung unterschiedlicher Wellenlänge beleuchtet wird, wobei in jedem Abschnitt aufgrund einer Wechselwirkung der Laserstrahlung mit der Probe Probenstrahlung erzeugt wird, und bei dem die linienförmigen Abschnitte (bevorzugt gleichzeitig) derart örtlich getrennt konfokal erfaßt werden, daß für jeden Abschnitt ein linienförmiges Probenstrahlenbündel erzeugt wird, das jeweils in linienförmiger Ausdehnung örtlich aufgelöst detektiert wird.The Task is further solved by a laser scanning microscopy method in which a first line-shaped and a second line-shaped portion of a sample to be examined, spaced therefrom Sample (preferably simultaneously) with laser radiation different wavelength is lit, being in each section due to an interaction the laser radiation is generated with the sample sample radiation, and in which the linear Sections (preferably simultaneously) are confocal detected locally segregated, that for everyone Section a line-shaped Samples ray beam is generated, which detects spatially resolved in each case in a linear expansion becomes.
Mit diesem Verfahren ist es möglich, die Probenstrahlung spektral selektiv und selektiv nach Anregungswellenlängen zu detektieren.With this method it is possible spectrally selective and selective excitation wavelengths to the sample radiation detect.
Bei dem Verfahren können die Probenstrahlenbündel vor der Detektion jeweils quer zur linienförmigen Ausdehnung spektral aufgespalten werden und kann jeweils zumindest eine spektral augespaltene Wellenlänge örtlich aufgelöst detektiert werden.at the method can the sample beams before the detection in each case transversely to the linear expansion spectral can be split and can each have at least one spectral augmented Wavelength detected locally resolved become.
Insbesondere bei der Detektion von Fluoreszenzstrahlung führt dies zu dem Vorteil, daß mehrere Farbstoffe spektral aufgelöst sowie spektral selektiv nach Anregungswellenlänge gleichzeitig detektiert werden können.Especially in the detection of fluorescence radiation, this leads to the advantage that several dyes spectrally resolved and spectrally selectively detected by excitation wavelength simultaneously can.
Bei dem Verfahren kann zur Beleuchtung jedes Abschnitts die jeweilige Laserstrahlung linienförmig auf oder in die Probe fokussiert werden. Dies führt zu einer besseren konfokalen Unterdrückung.at The method may be used to illuminate each section Laser radiation linear be focused on or in the sample. This leads to a better confocal Suppression.
Insbesondere werden zueinander parallel verlaufende linienförmige Abschnitte beleuchtet. Dies erleichtert die Detektion der Probenstrahlung.Especially are illuminated parallel to each other extending linear sections. This facilitates the detection of the sample radiation.
Insbesondere wird als Probenstrahlung durch die Laserstrahlung angeregte Fluoreszenzstrahlung detektiert.Especially becomes as sample radiation by the laser radiation excited fluorescence radiation detected.
Die örtlich aufgelöste Detektion kann linienförmig oder auch flächig durchgeführt werden. Wenn sie linienförmig durchgeführt wird, kann insbesondere ein linienförmiger, ortsauflösender Detektor vorgesehen werden, dem eine Ablenkeinheit vorgeschaltet ist, die den gewünschten Teil des spektral aufgespaltenen Probenstrahlenbündels auf den Detektor lenkt.The locally resolved detection can be linear or even flat carried out become. If they are linear carried out In particular, a line-shaped, spatially resolving detector can be used be provided, which is preceded by a deflection, the the wished Part of the spectrally split sample beam directs to the detector.
Für örtlich getrennte konfokale Erfassung kann insbesondere eine Spaltblende eingesetzt werden, die für jeden Abschnitte einen linienförmigen Spalt enthält. Dies führt zu einer ausgezeichneten konfokalen Unterdrückung der Probenstrahlung.For locally separated Confocal detection can be used in particular a slit diaphragm be that for each section has a linear gap contains. this leads to to an excellent confocal suppression of the sample radiation.
Ferner kann auch zur Beleuchtung der Abschnitte eine Spaltblende eingesetzt werden, die für jeden zu beleuchtenden Abschnitt einen transmissiven Spalt aufweist, wobei die einzelnen Spalte voneinander örtlich beabstandet sind.Further Can also be used to illuminate the sections of a slit that will be for everyone to be illuminated portion has a transmissive gap, wherein the individual gaps are spatially spaced from each other.
Bei dem Verfahren kann eine Relativbewegung zwischen der Laserstrahlung zur Beleuchtung der Abschnitte und der Probe quer zur Erstreckungsrichtung der linienförmigen Abschnitte durchgeführt werden.at The method can be a relative movement between the laser radiation for illuminating the sections and the sample transversely to the extension direction the linear Sections are carried out.
Die Erfindung wird nachfolgend unter Bezugnahme auf die Zeichnung beispielhalber noch näher erläutert. Es zeigen:The Invention will now be described by way of example with reference to the drawings explained in more detail. It demonstrate:
Bei
der in
Den
Lichtleitfasern
Die
Blende
Um
eine konvergente Kugelwelle (hier die aus den Fasern
Die
durch die Blende
Der
Probentisch
Das
so erzeugte Fluoreszenzlicht wird mittels des Objektivs
Somit
trifft das vom UV-Laserstrahlenbündel
Die
durch die Blende
Der
CMOS-Sensor
In
Der
CMOS-Sensor
Ferner können vorteilhaft einzelne Spalten zusammengeschaltet und zusammen ausgelesen werden, was auch als Hardwarebinning bezeichnet wird. Damit kann die spektrale Auflösung der Detektion verändert und eingestellt werden.Further can Advantageously, individual columns are interconnected and read out together, which is also referred to as hardware binning. This allows the spectral resolution the detection changed and be adjusted.
Alternativ
ist es möglich,
das Prisma
Bei
der beschriebenen Ausführungsform
des Laser-Scanning-Mikroskops wird vorteilhaft nur ein Minimum an
bewegten Teilen benötigt,
hier nur der Probentisch
Wenn
man dreidimensionale Probenbilder erzeugen will, wird die Probe
In
In
Statt
des Prismas
Die
Filter
In
einer Abwandlung der Ausführungsformen von
In
diesem Fall ist es bevorzugt, daß zumindest der Filter
In
Der
Scannerspiegel
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