DE10128980A1 - Gen-modifizierte T-Zellen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung - Google Patents
Gen-modifizierte T-Zellen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre VerwendungInfo
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Abstract
Die Erfindung betrifft in vitro gen-modifizierte T-Zellen zur Verhinderung der allogenen Transplantatrejektion in vivo, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Hierbei werden T-Zellen des Transplantatempfängers in vitro durch Zellen des Transplantatspenders oder durch Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren, stimuliert und gleichzeitig mittels Gentransfer mit immunmodulierenden Genen transduziert. Nach dem Gentransfer beginnen die transduzierten T-Zellen die immunmodulatorischen Gene zu exprimieren. Der Gentransfer kann mit Hilfe von Retroviren, anderen viralen Vektorsystemen oder Liposomen erfolgen. Aufgrund der gewählten Versuchsbedingungen, die zur Generierung und Expansion von allo-spezifischen T-Zellen führt, wandern die T-Zellen nach der in vivo Applikation spezifisch sowohl in das allogene Transplantat als auch in die drainierenden Lymphknoten ein und können dort die immunmodulierenden Gene exprimieren. Die Erfindung erlaubt es, die Abstoßung allogener Transplantate (Zellen, Gewebe, Organe) effektiv zu verhindern und stellt damit ein wirksames Mittel sowohl zur Toleranzinduktion als auch zur Erhaltung von Toleranz gegenüber allogenen Transplantaten (Zellen, Gewebe, Organe) in der Transplantationsmedizin dar.
Description
Die Erfindung betrifft in vitro gen-modifizierte T-Zellen zur Verhinderung der allogenen
Transplantatrejektion in vivo, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Hierbei
werden T-Zellen des Transplantatempfängers in vitro durch Zellen des Transplantatspenders
oder durch Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren, stimuliert und gleichzeitig mit
Gentransfermethoden mit immunmodulierenden Genen transduziert. Nach dem Gentransfer
beginnen die transduzierten T-Zellen, die immunmodulatorischen Gene zu exprimieren. Der
Gentransfer kann mit Hilfe von Retroviren oder anderen, nicht-viralen Gentransfertechniken,
z. B. Liposomenformulationen erfolgen. Aufgrund der gewählten Versuchsbedingungen, die
zur Generierung und Expansion von allo-spezifischen T-Zellen führt, wandern die T-Zellen
nach der in vivo Applikation spezifisch sowohl in das allogene Transplantat als auch in die
drainierenden Lymphknoten ein und können dort die immunmodulierenden Gene exprimieren.
Die Erfindung erlaubt es, die Abstoßung allogener Transplantate (Zellen, Gewebe, Organe)
effektiv zu verhindern und stellt damit ein wirksames Mittel sowohl zur Toleranzinduktion als
auch zur Erhaltung von Toleranz gegenüber allogenen Transplantaten (Zellen, Gewebe, Orga
ne) in der Transplantationsmedizin dar.
Trotz der Erfolge der konventionellen Immunsuppression mit Cyclosporin A, FK506, Gluko
kortikoiden oder OKT3 (monoklonaler Antikörper (mAk) gegen CD3) ist das Problem der
Transplantatabstoßung noch lange nicht zufriedenstellend gelöst. Eine lebenslange medika
mentöse Immunsuppression führt fast immer zu gravierenden Nebenwirkungen und kann die
chronische Rejektion nur selten komplett inhibieren. Ziel der Transplantationsforschung ist es,
mit einer Kurzzeittherapie die lebenslange Akzeptanz eines fremden Organs zu erreichen. In
Tiermodellen gibt es bereits einige Ansätze, die dieser Forderung nahe kommen. Die Basis
zum Verständnis dieser Ansätze stellt die genaue Analyse des abgestoßenen oder tolerierten
Gewebes dar. Sie zeigt während der akuten Rejektion immer eine massive Infiltration des
Gewebes mit Granulozyten, Monozyten und Lymphozyten. Die Tatsache, dass die Depletion
der CD3-positiven Zellen durch OKT3 das Transplantat vor Abstoßung schützt, zeigt die kri
tische Rolle der T-Lymphozyten (Ode-Hakim et al., 1996). Ebenso sind immundefiziente
SCID-Mäuse (ohne B- und T-Zellen) nicht in der Lage, ein fremdes Organ abzustoßen. Inner
halb der T-Zellpopulation scheinen Th-Zellen die Initiatoren der Rejektion zu sein. Dies wur
de in CD4 bzw. CD8 T-Zell-depletierten Mäusen gezeigt. Während die CD8 depletierten
Mäuse das Transplantat abstoßen können, ist dies den CD4 depletierten nicht möglich (Cam
pos et al., 1995). Geht man vom Th1/Th2 Paradigma aus (Mosmann et al., 1989), sind in der
frühen Phase der akuten Abstoßung hauptsächlich Th1-Zellen beteiligt. Auch in Rattenmodel
len konnte mit semiquantitativer PCR ein Anstieg charakteristischer Th1-Zytokine (IFN-γ, IL-
2) im Transplantat gezeigt werden (Siegling et al., 1994a). Die aus dem Organ gewonnen
CD4-Zellen produzieren nach in vitro Restimulation ebenfalls vorwiegend Th1-Zytokine.
Allen Behandlungsprotokollen gemeinsam ist das Ziel, die potentiell schädigenden Th1-
Zellen in ihrer Entstehung oder Funktion zu hemmen. Während die konventionellen Metho
den dies mit einer globalen Depletion oder Inhibition der Lymphozyten versuchen, greifen
neuere Ansätze in den T-Zellaktivierungsprozess ein. Monoklonale Antikörper gegen den
CD4-Rezeptor modifizieren das TCR-Signal (Lehmann et al., 1992; Siegling et al., 1994b).
CTLA4-Ig bindet an die B7-Moleküle der antigen-präsentierenden Zellen (APC's) und blockt
somit kostimulatorische Signale (Sayegh et al., 1995). Am Ende dieser kurzen Behandlung
(ca. 2 Wochen) entsteht in vielen Modellen eine stabile Toleranz (Cobbold & Waldmann,
1998). Vermittler dieser Toleranz sind wahrscheinlich regulatorische CD4-Zellen. Es konnte
gezeigt werden, dass eine Übertragung dieser Zellen auf syngene Tiere ebenfalls eine Toleranz
erzeugt. Dieses Phänomen wurde erstmals 1993 als "infektiöse Toleranz" beschrieben (Qin et
al., 1993). Allerdings gelang der Versuch nur in einem schwachen "Abstoßungsmodell". Mit
Hilfe eines nicht-depletierenden Ak gegen CD4 (RIB 5/2) gelang es, dieses auch in einem
starken Rejektionsmodell zu zeigen (Onodera et al., 1996a). Mit Hilfe der semiquantitativen
PCR konnte ein stark erhöhter Interleukin-4 (IL-4) mRNA-Spiegel in den transplantierten
Organen (auch nach mehreren Übertragungen) nachgewiesen werden. Dies weist auf die Be
deutung von Th-2 Zytokinen, vor allem Interleukin-4, hin.
Neben IL-4 sind eine Reihe von Zytokinen in der Lage, Th1-vermittelte Immunreaktionen zu
modulieren. IL-4 induziert die Differenzierung von naiven CD4+ T-Zellen in Th2-Zellen, wird
von diesen gebildet und hemmt in hohem Maße die Sekretion von IFN-γ. Damit wird die
Entwicklung einer Th1-Antwort supprimiert (Banchereau, 1991). IL-10, welches vor allem
von Monozyten/Makrophagen und T-Zellen gebildet wird, hat eine ganze Reihe von anti-
inflammatorischen Eigenschaften. So wurde unter anderem gezeigt, dass i) IL-10 die MHC-
Klasse II Expression auf Monozyten inhibiert, ii) die Produktion inflammatorischer Zytokine
wie IFN-γ, IL-1 und IL-8 und TNF-α hemmt und iii) die Proliferation allogen aktivierter
Lymphozyten unterdrückt (de Waal Malefyt et al., 1991a; de Waal Malefyt et al., 1991b;
Ralph et al., 1992; Cassatella et al., 1993; Qin et al., 1997). Als ein zusätzlicher, T-
zellunabhängiger Differenzierungsfaktor für Th1 Zellen wurde IL-12 beschrieben. Dieses Zy
tokin wird von Makrophagen und B-Zellen sezerniert, führt zur Erhöhung der IFN-γ Produkti
on von NK-Zellen, CD4+ T-Zellen und CD8+ T-Zellen und induziert damit die Differenzie
rung naiver CD4+ T-Zellen zu Th1-Zellen (Hsieh et al., 1993: Germann et al., 1993; Kennedy
et al 1994). IL-12 ist ein heterodimeres Glykoprotein, das aus einer 40kDa (p40) und einer
35kDa (p35) Untereinheit besteht. Die IL-12p40 Untereinheit ist in der Lage, die Effekte des
Heterodimers spezifisch zu inhibieren. Nach Mattem et al. (1993) hemmen Überstände von
mit Maus IL-12 p40 transfizierten COS Zellen in vitro verschiedene IL-12 Effekte. IL-12p40
inhibiert die Proliferation von PHA und IL-12 aktivierten Splenozyten.
Bei experimentellen und klinischen Untersuchungen konnte bei Allotransplantationen gezeigt
werden, dass, in der Phase der akuten Abstoßung, die Expression unterschiedlichster Zytokine
erfolgt, deren zelluläre Herkunft Th1-Zellen, Th2-Zellen, zytotoxische CD8+ T-Zellen, aber
auch nicht-lymphozytäre Zellen (Makrophagen, Endothelzellen, Mastzellen) zuzuordnen ist
(Dallman et al., 1991). Es liegen Hinweise vor, dass Th1-Zytokine eine Schlüsselrolle in der
Pathogenese der akuten Transplantatabstoßung spielen. Dies beruht auf Untersuchungen der
Zytokingenexpressionsmuster in Transplantaten von toleranten Tieren. Hinweise hierfür bie
ten Untersuchungen zur wirkungsvollen Toleranzinduktion mit anti-CD4 monoklonalen Anti
körpern (Benjamin and Waldmann, 1988; Takeuchi, 1992; Siegling et al., 1994a). Der Me
chanismus ist nicht völlig klar, zumal eine Depletion von CD4+ T-Zellen für die Toleranzin
duktion nicht notwendig ist. Eine Toleranzinduktion durch anti-CD4 Behandlung ist mit einer
deutlichen Suppression der Th1-Zytokinexpression im Transplantat assoziiert. Dies führte zu
der Schlussfolgerung, dass Th1-Zytokine eine wesentliche Rolle bei der Allograftabstoßung
einnehmen (Siegling et al., 1994a, Lehmann et al., 1997).
Die Bedeutung von Th2-Zytokinen ist dagegen weniger klar. Bei toleranten Tieren
führte die alleinige Th2-Antwort nicht zur Transplantatabstoßung. Die Persistenz von Th2-
Zytokinen in Transplantaten der Tiere könnte als Epiphänomen gewertet werden, jedoch auch
entscheidend für eine Hemmung der Th1-Antwort sein und damit für die Transplantatreaktion
ein entscheidendes Kriterium bedeuten. Bestätigt wird diese Vermutung durch Beobachtun
gen, dass eine temporäre Th1/Th2-Zytokinimbalance der T-Zellantwort unmittelbar nach An
tigenkontakt zur dauerhaften Prägung der Immunantwort führen kann (Scott, 1991). Erste
Untersuchungen in vitro zeigen im Transplantationsmodell, dass sich auch die Funktion von
Transplantat-infliltrierenden Zellen beeinflussen lässt. Die Frequenz von IFN-γ produzieren
den Zellen konnte unter dem Einfluss von rekombinantem IL-4 um 50-70% gesenkt werden
(Merville et al., 1993). Daraus kann die Hypothese abgeleitet werden, dass eine temporäre
Überexpression von IL-4 am Ort der Alloantwort zur Transplantatakzeptanz führen kann. Die
Überexpression von IL-4 nach ex-vivo Gentransfer mit Hilfe von rekombinanten Adenoviren
führte zu einer deutlichen Verlängerung der Transplantatakzeptanz im allogenen Nierentrans
plantationsmodell der Ratte im Vergleich zu unbehandelten oder mit einem Reporterkonstrukt
behandelten Transplantaten (Kato et al., 1999a). Die Rolle von IL-4 in der Induktion von To
leranz gegenüber allogenen Transplantaten wird jedoch in der Literatur kontrovers diskutiert.
So wurde gezeigt, dass die lokale Überproduktion von IL-4 entweder durch adenoviral trans
fizierte oder IL-4 Transiten Transplantate nicht zu einer Verlängerung der Transplantatakzep
tanz führt (Smith et al., 1997; Mueller et al., 1997). Auf der anderen Seite ist gezeigt worden,
dass transgene, IL-4 produzierende Transplantate oder die systemische Applikation von IL-4
in Kombination mit Cyclosporin A die Überlebenszeit allogener Transplantate verlängern
kann (Takeuchi et al., 1997; Rabinovitch et al., 1997). Dabei muss bemerkt werden, dass die
Arbeiten methodisch oft unzulänglich dargestellt sind, so dass nicht entschieden werden kann,
ob methodische Probleme einen Einfluss auf das Ergebnis haben.
Im Gegensatz zu IL-4 ist die Bedeutung von IL-10 für die Verlängerung der Transplantatak
zeptanz weniger umstritten. So konnte gezeigt werden, dass die Überexpression von TGF-β1
und vIL-10, einem Epstein-Barr-Virus kodierten Homolog zu humanem oder murinem IL-10,
zur Verlängerung der Transplantatakzeptanz in verschiedenen allogenen Herztransplantations-
Modellen führt (Qin et al., 1995; Josien et al., 1998). Kato et al. konnten zeigen, dass die Ko
applikation von IL-4 und vIL-10 mit Hilfe von rekombinanten Adenoviren das Überleben
allogener Nierentransplantate in einem starken Abstoßungsmodell signifikant verlängerte (Ka
to et al., 1999b). Interessanterweise hat die alleinige Applikation von IL-4 in diesem Modell
keinen Einfluss auf eine Verlängerung der Transplantatakzeptanz.
Auch die Überexpression von IL-12p40 scheint positive Effekte auf das Transplantatüberle
ben zu haben. So konnte gezeigt werden, dass die lokale Applikation von IL-12p40 die Th1
vermittelte Immunantwort inhibierte und die Abstoßung von allogenen Myoblasten, die mit
der cDNA für IL-12p40 transfiziert waren, verhinderte (Kato et al., 1997). Ähnliche Ergebnis
se wurden im Modell der Inselzell-Transplantation in diabetische Mäuse erhalten, wo die
Überexpression von IL-12p40 die Th1-vermittelte Autoaggression verhinderte (Rothe et al.,
1997; Kato et al., 1998). Die Koapplikation von IL-4 und IL-12p40 mit Hilfe von rekombi
nanten Adenoviren das verlängerte Überleben allogener Nierentransplantate in einem starken
Abstoßungsmodell signifikant (Kato et al., 1999b).
Das Problem vieler Arbeiten zum Zytokingen-Transfer ist immer noch die Applikation des
Zytokins. Die systemische Gabe eines Zytokins kann niemals ein lokales Milieu schaffen,
welches der physiologischen Situation entspricht. Außerdem haben Zytokine im Serum eine
sehr kurze Halbwertszeit, so dass das therapeutische Protein ständig nachgeliefert werden
müsste, um einen gewünschten Serumspiegel zu erreichen (H.-D. Volk, pers. Mitteilung).
Durch adenovirus-vermittelten Gentransfer des Spenderorgans kann die Zytokinexpression im
Transplantat gesteigert werden, sie ist aber meistens nur kurzzeitig und keinesfalls aktivie
rungsabhängig.
Retroviral transfizierte T-Zellen sind jedoch in der Lage, stabil und dauerhaft ein Protein zu
exprimieren (Blaese et al., 1995). Besonders aktivierte T-Zellen exprimieren vermehrt ihr
Transgen (Quinn et al., 1998; Hammer et al., 2000).
Bromberg et al. beschreiben in Transplantation, Vol. 59, 6, 809-816, 1995 eine Methode zum
retroviralen bzw. adenoviralen Gentransfer direkt in das Transplantat. Eine Belastung des Pa
tienten mit Viren kann dabei allerdings nicht vermieden werden.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Möglichkeiten zur Verhinderung der alloge
nen Transplantatrejektion bereitzustellen, welche die Nachteile der bekannten Mittel und Me
thoden beseitigt. Die Aufgabe wurde durch die Bereitstellung in vitro gen-modifizierter, allo-
reaktiver T-Zellen, die ein therapeutisches Gen exprimieren, gelöst.
Die Aufgabe, eine neue Möglichkeit zur Verhinderung der allogenen Transplantatrejektion zu
eröffnen, wurde im einzelnen dadurch gelöst, dass T-Zellen des Transplantatempfängers in
vitro durch Zellen des Transplantatspenders oder durch Zellen, die dominante MHC-Moleküle
exprimieren, stimuliert und gleichzeitig oder später mittels Gentransfer von immunmodulie
renden (therapeutischen, z. B. virales IL-10, z. B. aus EBV oder CMV, IL-4, IL-12p40) Genen
transduziert werden. Nach dem Gentransfer beginnen die transduzierten T-Zellen, die im
munmodulatorischen Gene zu exprimieren. Der Gentransfer kann entweder mit Hilfe von Ret
roviren oder mit nicht-viralen Methoden (Liposomen, Genkanonen) erfolgen. Die gewählten
Versuchsbedingungen führen zur Generierung und Expansion der allo-spezifischen, transdu
zierten T-Zellen in vitro. Aufgrund ihrer Allo-Spezifität besitzen die modifizierten T-Zellen
die Eigenschaft, nach der in vivo Applikation der Zellen zum Zeitpunkt einer allogenen Or
gantransplantation spezifisch sowohl in das allogene Transplantat als auch in die drainieren
den Lymphknoten einzuwandern und dort die immunmodulierenden (therapeutischen) Gene
zu exprimieren.
Die Erfindung erlaubt es, die Abstoßung allogener Transplantate (Zellen, Gewebe, Organe)
effektiv zu verhindern.
Die erfindungsgemäßen modifizierten Zellen wandern also auf Grund ihrer Allo-Spezifität in
das Transplantat ein. Es hat sich herausgestellt, dass durch die Produktion von IL-4, IL-10 und
IL-12p40 in Abhängigkeit des Aktivierungsgrads der erfindungsgemäßen Zellen, direkt am
Ort des Ag-Kontaktes ein lokales Milieu von Th2-Zytokinen bzw. Th1-Antagonisten geschaf
fen wird. Damit ist es gelungen, IL-4, IL-10 oder IL-12p40 produzierende, alloreaktive T-
Zellen durch retroviralen Gentransfer in vitro zu generieren.
Dabei wird auf die Expression des Transgens im transplantierten Gewebe selbst fokussiert.
Bisher sind solche (generierte T-Zellen) Zellen hauptsächlich zur Tumorbekämpfung einge
setzt worden. Hierbei wurden ex vivo generierte tumorspezifische T-Zellen mit proinflamma
torischen Zytokinen (wie beispielsweise TNF-alpha) transfiziert, die bei späterer Infiltration
den Tumor und seine Metastasen "bekämpfen".
Durch Ischämie/Reperfusion, Infektion oder Rejektionskrisen gestresste Transplantate expri
mieren auch autologe Stressproteine, gegen die eine Immunantwort generiert werden kann
(z. B. Hitzeschockprotein-HSP 70, spezifische autoreaktive T-Zellen). Diese Zellen können
ebenfalls in vitro generiert werden und als biologisches "drug delivery" System benutzt wer
den. Auch können anstelle der direkt alloreaktiven T-Zellen (gegen Spender-MHC Moleküle)
auch indirekt alloreaktive (gegen Spender-MHC Peptide, die von Empfänger-MHC präsentiert
werden) generiert und eingesetzt werden. Beide Ansätze haben den Vorteil einer geringeren
Reaktivität gegen das Transplantat im Vergleich zu direkt alloreaktiven T-Zellen.
Die erfindungsgemäßen in vitro transduzierten, gen-modifizierten T-Zellen werden durch die
Kokultur bzw. durch Koinkubation mit Zellkulturüberständen von sog. amphotrophen Zell-
Linien gewonnen, welche z. B. die rekombinanten Retroviren mit den therapeutischen Trans
genen produzieren. Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung der in vitro transduzier
ten, gen-modifizierten T-Zellen besteht aus folgenden Schritten:
- - Herstellung der entsprechenden Verpackungs-Zellinien, welche die zum Gentransfer fä higen rekombinanten Retroviren die für therapeutischen Transgene kodieren, produzieren (durch Transfektion).
- - Generierung der alloreaktiven T-Zellen in vitro. Dabei wird die Zellinie, welche das zum Gentransfer fähige Retrovirus mit dem therapeutischen Transgen produziert, in Kultur genommen. Außerdem werden die Lymphozyten (Spender T-Zellen oder Zellen, die do minante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen) aus dem Vollblut isoliert. Die Spender T-Zellen bzw. die Zellinien, die dominante MHC-Moleküle exprimieren, müssen bestrahlt werden, um eine Proliferation dieser Zellen zu verhindern). Danach wird eine Kokultivierung, bestehend aus der gemischten Lymphozytenkultur (Primär-MLC) und der retrovirus-produzierenden Verpackungs-Zellinie durchgeführt. Der retrovirale Gentransfer kann auch dadurch erfolgen, dass ausschließlich der Virusüberstand der Ver packungszellinie zu der Kultur der Lymphozyten (Spender T-Zellen oder Zellen, die do minante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen) gegeben wird, so dass auf eine Kokultivierung mit der Verpackungszellinie verzichtet werden kann.
- - Im Falle der Anwendung nicht-viraler Gentransfermethoden entfällt ebenfalls die Kokul tur der gemischten Lymphozytenkultur (Spender T-Zellen oder Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen) mit der Verpackungszellinie. Die entstehenden oder entstandenen alloreaktiven T-Zellen werden direkt mit nicht-viralen Gentransfermethoden mit Plasmiden, die für die therapeutischen Gene kodieren, in vitro transduziert.
Die alloreaktiven T-Zellen dienen als "universeller" Träger von therapeutischen Genen. Dabei
handelt es sich vor allem um:
- - Genprodukte, die aus der Zelle ausgeschleust werden und ihren immuno regulatorischen Einfluss auf andere Zellen, z. B. alloreaktive oder Transplantat infiltrierende Zellen, ausüben (z. B. Zytokine (IL-13, Zytokine, die homolog zum IL-10 Gen, z. B. das CMV IL-10, sind)
- - Genprodukte, die an der Zelloberfläche der regulatorischen T-Zellen exprimiert wer den und durch die Wechselwirkung mit anderen Zellen (alloreaktive oder Transplan tat-infiltrierende Zellen) ihre immuno-regulatorische Wirkung entfalten (z. B. CTLA-4 oder Gene, die zur Familie der Notch-Liganden/Rezeptoren gehören, wie hSerrate-1, hDelta1 bzw. Notch1-4)
- - Genprodukte, die intrazellulär exprimiert werden und durch ihre zellprotektive Wir kung den regulatorischen T-Zellen eine verlängerte Überlebenszeit vermitteln (z. B. an tiapoptotische Gene wie bcl-2, bcl-xl, bag-1)
- - Zellprotektive Gene (z. B. antiapoptotische Gene, Hitzeschockgene)
Vorzugsweise werden als therapeutische Gene (Transgene) IL-4, IL-10, vIL-10 und IL-2p40
eingesetzt. Es kann auch Hämoxygenase-1 eingesetzt werden.
Die transduzierten, gen-modifizierten T-Zellen können in verschiedenen Applikationen (iv,
ip), verschiedenen Kombinationen davon und/oder verschiedenen Dosierungen zu verschiede
nen Zeitpunkten eingesetzt werden.
Die erfindungsgemäßen in vitro transduzierten, gen-modifizierten T-Zellen eignen sich zur
Verhinderung der allogenen Transplantatrejektion in vivo und können bei der Transplantation
von allogenen Zellen, Geweben und Organen verwendet werden. Als Beispiele seien die
Transplantation von Stammzellen, Knochenmark, Haut, Niere, Herz, Leber, Lunge, Zellen des
zentralen Nervensystems, oder Langerhanssche Inseln genannt. Hierbei werden T-Zellen des
Transplantatempfängers in vitro durch Zellen des Transplantatspenders oder durch Zellen, die
dominante MHC-Moleküle exprimieren, stimuliert und gleichzeitig mittels Gentransfer, wo
bei immunmodulierende Gene transferiert werden, transduziert. Das Ergebnis ist die Generie
rung von T-Zellen, die eine Toleranzinduktion bzw. eine Toleranzerhaltung gegenüber alloge
nen Transplantaten induzieren können.
Das Wesen der Erfindung besteht in einer Kombination bekannter - amphotrophe Zell-Linien,
retrovirale Vektoren, gemischte Lymphozytenkultur - und neuen Elementen - Kokultur aus
der gemischten Lymphozytenkultur (Primär-MLC) und der den therapeutischen Retrovirus
produzierenden Zell-Linie - was dazu führt, dass gen-modifizierte T-Zellen entstehen, die the
rapeutische Gene exprimieren können und aufgrund der allo-Spezifität sowohl in das Allo-
Transplantat als auch in die drainierenden Lymphknoten einwandern können. Der Erfolg der
Methode liegt darin, dass die Abstoßung allogener Transplantate (Zellen, Gewebe, Organe)
effektiv verhindert wird und somit ein wirksames Mittel in der Transplantationsmedizin zur
Verfügung gestellt wird.
Die erfindungsgemäße Verwendung von therapeutischen T-Zellen besteht in der Verhinde
rung der allogenen Transplantatrejektion. Die (in vitro) transduzierten, gen-modifizierten T-
Zellen finden als Mittel zur Toleranzinduktion und zur Erhaltung von Toleranz gegenüber
allogenen Transplantaten (Zellen, Gewebe, Organe) und zur Stimulierung der T-Zellen des
Transplantatempfängers Verwendung.
Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden, ohne auf diese
Beispiele begrenzt zu sein.
Zunächst werden die entsprechenden Zell-Linien, welche die rekombinanten Retroviren mit
den therapeutischen Transgenen produzieren hergestellt. Als Ausgangspunkt für die Produkti
on von infektiösem, replikations-inkompetenten Retrovirus dient die von NIH/3T3 abgeleitete
Zell-Linie PT67 (Retropack™, Clontech). PT 67 enthält die Gene gag, pol und env (10A1-
Stamm) des Moloney Murine Leukemia Virus (MoMuLV). Die Zellen werden in DMEM
10%FKS, 4mM L-Glutamin, 100U/ml Penicillin und 104 µg/ml Streptomycin bei 37°C in 5%
CO2-Atmosphäre gezüchtet. Die Transfektion dieser Zell-Linie mit einem retroviralem Vek
tor, der nicht die o. g. Gene, jedoch ein therapeutisches Gen und ein Verpackungssignal bein
haltet, erlaubt die Produktion von replikations-defizientem Retrovirus (d. h. das Virus kann
seine Zielzellen infizieren, aber nicht in diesen replizieren und weitere Zellen infizieren) (Cof
fin et al., 1996; Ausubel et al., 1996). Die Transfektion der PT67-Zellen erfolgt mittels Calci
umphosphat-Transfektion nach Standardprotokollen (Maniatis). Durch Selektion mit G 418
(0,5 mg/ml) werden Klone und davon abgeleitet wiederum Zell-Linien etabliert, die sowohl
das replikations-defiziente Retrovirus als auch das therapeutische Gen produzieren. Im Falle
von IL-4 und IL-10 können ELISA-Teste dazu herangezogen werden, die Zell-Linien mit der
höchsten Produktion des therapeutischen Gens bestimmen, die dann in allen weiteren Experi
menten verwendet wird. Im Falle von IL-12p40 ist kein ELISA-Test zur Verfügung. Hier wird
direkt die biologische Aktivität im Bioassay bestimmt (Hemmung der IFN-γ Produktion durch
aktivierte Milzzellen).
Ein bis zwei Tage, bevor die gemischte Lymphozytenkultur (bestrahlte Spender T-Zellen mit
Empfänger T-Zellen kultivieren) angesetzt wird, wird die Zell-Linie, die das rekombinante
Retrovirus mit dem therapeutischen Transgen produziert, in Kultur genommen
(DMEM+10%FKS + Selektionsantibiotikum G 418 0,5 mg/ml Endkonzentration).
Am Tag 1 wird die Kokultur, bestehend aus der gemischten Lymphozytenkultur (Primär-
MLC) und der retrovirus-produzierenden Zell-Linie durchgeführt: Dazu werden die Zellen der
Zell-Linie trypsiniert, für 5 Minuten bei 1.200 U/min zentrifugiert und in T-Zell Medium
(TCM) ohne FKS aufgenommen. Danach werden die Zellen gezählt und auf einen Dichte von
2 × 105 - 2 × 106 Zellenpro 96er Platte ausgesät. Zunächst lässt man die Zellen für 3-4 Stunden in
CO2-Inkubator (5%CO2) bei 37°C anwachsen, bevor die T-Zellen zugegeben werden.
Die T-Zellen des Transplantatempfängers werden zuvor aus dem peripheren Blut mit Hilfe
eines Fikollgradienten nach Standardprotokollen isoliert. Zur Antigenpräsentation werden die
Zellen des Transplantatspenders (T-Zellen) ebenfalls nach Standardprotokoll isoliert. Im Falle
der Verwendung von Zell-Linien, die dominante MHC-Epitope exprimieren, werden diese 1-2
Tage vorher aufgetaut und im CO2-Inkubator bis zur Verwendung kultiviert.
Die Zellen, die zur Antigen-Präsentation dienen (als Stimulatorzellen für die T-Zellen des
Transplantatempfängers), müssen vor der Zugabe zur gemischten Lymphozytenkultur für 10
Minuten bei 30 gy bestrahlt werden, um diese an der unerwünschten Proliferation zu hemmen.
Nach der Bestrahlung der antigen-präsentierenden Zellen werden diese zentrifugiert und in
20 ml TCM ohne FKS aufgenommen. Danach wird die Zellzahl bestimmt und 50 µl TCM mit je
3,5 × 105 - 4 × 105 Zellen des Transplantatempfängers und der antigen-präsentierenden Zellen
in 3% autologem Serum und 4 µg/ml Polybren in 96well Rundbodenplatten ausplattiert (Ge
samtvolumen 100 µl) und bei 37°C im CO2-Inkubator bei völliger Ruhe inkubiert.
Am Tag fünf erfolgt die Umsetzung der MLC aus Rundbodenplatten in Flachbodenplatten.
Hierzu werden ca. 50 µl des Kulturüberstandes abpipettiert (wird verworfen) und die T-Zellen
werden durch 2-3maliges Resuspendieren ohne Luftblasen in eine 96well Flachbodenplatte
überführt. Außerdem werden 100 µl Medium (+hrIL-2, 25U/ml), welches frisch angesetzt
werden sollte, hinzugegeben werden. Die Zellen werden für weitere 48 Stunden bei 37°C un
ter CO2-Atmosphäre (5%) kultiviert.
Am Tag 6 erfolgt die G 418 Selektion, d. h. alle Zellen, im die Zuge des retroviralen Gentrans
fers nicht transduziert wurden, gehen im Rahmen der G 418-Selektion zugrunde. Umgekehrt
überleben nur die Zellen die G 418-Selektion, die durch das Retrovirus transduziert wurden.
Von dieser Stufe an sind die Zellen immer unter G 418 zu kultivieren (0,4 mg/ml G-418 End
konzentration). In diesem Medium werden die Zellen für weitere 48 Stunden kultiviert.
Am Tag acht nach der ersten Stimulation erfolgt die Restimulation der Zellen. Hierfür werden,
wie schon für die erste Stimulation beschrieben, entweder PBMC des Transplantatspenders
oder Zell-Linien, die dominante MHC-Epitope exprimieren, eingesetzt. Die Zellen werden
wiederum bestrahlt (10 min. 30 Gy), danach zentrifugiert (1.200 Upm, 5 min) und danach in
20 ml TCM ohne FKS aufgenommen und die Zellzahl bestimmt. Für die Restimulation wer
den zunächst 100 µl aus der 96well Mikrotiterplatte, welche die MLC-Zellen enthält, entnom
men und mit 6 × 105 Stimulatorzellen versetzt. Außerdem wird auf 3% autologem Serum und
einer G 418 Konzentration von 0.4 mg/ml eingestellt. Danach werden die Zellen für weitere
zwei Tage inkubiert.
Am Tag 10 erfolgt die Zugabe von frischem TCM-Medium (+hrIL-2, 25U/ml) (100 µl abzie
hen und Zugabe von 100 µl TCM-Medium (+hrIL-2, 25U/ml) + G 418, 0.4 mg/ml). Danach
werden die Zellen für weitere zwei Tage inkubiert.
In den Zellkulturplatten sollten sich proliferierende Zellen (Blasten) befinden, die durch wei
tere Restimulationsschritte vermehrt werden können, um eine genügend große Anzahl an Zel
len für die Applikation in der Klinik verfügbar zu haben. Am Tag 14 besteht zusätzlich die
Möglichkeit, die generierten Blasten über einen Fikollgradienten zu reinigen und zu isolieren
(Ficoll 3000). 24 Stunden nach dem Gradienten erfolgt die nächste Restimulation (3").
Zur Stimulation können PBMC-Zellen des Transplantatspenders oder Zell-Linien, die domi
nante MHC-Moleküle exprimieren oder Zell-Linien, die mit den Genen für diese Moleküle
transfiziert sind und diese konstitutiv exprimieren (K. Wood) eingesetzt werden.
Anstelle der Kokultur mit der amphotrophen Zell-Linie soll nur der retrovirus-haltige Zellkul
turüberstand der amphotrophen Zellinie zur Transduktion der T-Zellen herangezogen werden.
Nachweis des therapeutischen Gens im Überstand kann erfolgen
durch:
IL-4, ELISA, MHC-II Hochregulation auf Milzzellen
vIL-10, ELISA, Inhibition der TNF-α Produktion durch Makrophagen, Verringerung der MHC-II Expression auf Monozyten
IL-12p40, kein ELISA, Inhibition der Produktion von IFN-γ nach Stimulation von Milzzellen.
IL-4, ELISA, MHC-II Hochregulation auf Milzzellen
vIL-10, ELISA, Inhibition der TNF-α Produktion durch Makrophagen, Verringerung der MHC-II Expression auf Monozyten
IL-12p40, kein ELISA, Inhibition der Produktion von IFN-γ nach Stimulation von Milzzellen.
Die Proliferationshemmung naiver T-Zellen durch für vIL-10 transgene Lymphozyten konnte
zunächst in vitro in der gemischten Lymphozytenkultur (MLC) nachgewiesen werden. Dieses
in vitro System soll die Situation der T-Zellreaktivität nach einer allogenen Organtransplanta
tion imitieren. Hierzu wurden die naiven Empfängerzellen (sollen die T-Zellen des Transplan
tatempfängers imitieren) mit dem Farbstoff SNARF™ am Tag 0 angefärbt. Dieser Farbstoff
hat die Eigenschaft, dass er bei einer Zellteilung zu gleichen Teilen an die beiden Tochterzel
len weitergegeben wird, so dass die Fluoreszenzintensität abnimmt. Anschließend wurden die
angefärbten Empfängerzellen mit bestrahlten Stimulatorzellen (sollen die transplantat
spezifischen Zellen imitieren) im Verhältnis 1 : 1 (je 3,5 × 105 Zellen) in 96well Flachboden
ausgesät. Um den Einfluss der therapeutischen TvIl-10 T-Zellen auf die antigen-induzierte Pro
liferation der naiven Lymphozyten zu untersuchen, wurden diese im Verhältnis 1 : 20 (5%) zu
den Ansätzen dazugegeben. Als Kontrollansatz diente eine syngene Kontrolle und weiterhin
allospezifische TEGFP Lymphozyten (mit einem irrelevanten Kontrollgen, Enhanced Green
Fluorescent Protein, als sog. therapeutisches Gen), die im selben Verhältnis eingesetzt wur
den. Die Messung der Fluoreszenzintensität und -abnahme erfolgte mittels Fluoreszenz
durchflusszytometrie (FACS) an den Tagen 1-4. Im Vergleich zur allogenen Kontrolle ohne
therapeutische T-Zellen konnte in den Ansätzen mit TvIL-10 Lymphozyten eine Inhibierung der
Proliferation auf ca. 70-80% am Tag 3 und 4 nachgewiesen werden (Fig. 1 und 2).
Die Inhibierung der Interferon-γ Produktion in naiven T-Lymphozyten durch TvIL-10 Zellen
wurde ebenfalls in der MLC nachgewiesen. Es wurde derselbe Versuchsansatz verwendet. Als
Membranfarbstoff wurde in diesen Fall ein anderes Agens (CFSE) verwendet, welches im
Fluoreszenzkanal 1 des Durchflusszytometers leuchtet. Die Detektion von IFN-γ erfolgte mit
tels eines PE markierten monoklonalen intrazellulären Antikörpers gegen IFN-γ im FACS am
Tag 4. Die Abnahme der IFN-γ Produktion in naiven T-Lymphozyten nach Kultivierung mit
allospezifischen TvIL-10 Lymphozyten beträgt 50% am Tag 4 (Fig. 3).
Ein Vergleich der transgenen TvIL-10 Zellen mlt TEGFP Zellen und nicht transgenen allospezifi
schen Lymphozyten auf Protein- und RNA-Ebene gibt Aufschluss darüber, ob sich die thera
peutischen Zellen in ihren Zytokinexpressionsmustern (rIL-2, rIFN-γ, rIL-10 usw.) von den
anderen Zellen unterscheiden. Des weiteren werden auch Aktivierungsmarker (rCD25), apop
totische (FasL) und antiapoptotische (Bag-1) Genexpressionsmuster analysiert. Diese Versu
che tragen dazu bei, die therapeutischen Zellen eindeutig zu charakterisieren und mögliche
Wirkungsmechanismen dieser Lymphozyten zu analysieren.
Neben dem viralen Gentransfer soll auch der nicht-virale Gentransfer zur Generierung der
alloreaktiven, gen-modifizierten T-Zellen untersucht werden. Hierfür werden die mit Hilfe der
gemischten Lymphozytenkultur hergestellten allospezifischen T-Zellen z. B. mit bestimmten
Liposomenformulationen, die das Plasmid mit dem therapeutischen Gen enthält, inkubiert
oder mit einer Genkanone beschossen. Die Kokultur mit der virus-produzierenden Verpa
ckungszellinie ist für diesen Ansatz nicht notwendig.
Neben dem retroviralen Gentransfer auf der Basis des murinen Moloney Leukemia Virus
(MoMuLV) soll auch die Herstellung der alloreaktiven, gen-modifizierten T-Zellen mit Hilfe
anderer viralen Vektorsysteme geschützt werden. Das soll den Gentransfer mit lentiviralen
Konstrukten (dabei handelt es sich auch um Retroviren, aber auf der Basis des Humanen Im
mundefizienz Virus (HIV), mit Konstrukten auf der Basis von adeno-assoziierten Viren
(AAV) und Konstrukten auf der Basis von Cytomegalieviren (CMV) beinhalten.
Bagley, J., Aboody-Guterman, K., Breakefield, X., Iacomini, J. Long-term expression of the
gene encoding green fluorescent protein in murine hematopoetic cells using retroviral gene
transfer. Transplantation 1998, 65, 1233-1240.
Blaese, R. M., Culver, K. W., Miller, D., Carter, C., Fleisher, T., Clerici, M., Shearer G., Chang, L., Chiang, Y., Tolsthev, P., Grennblatt, J. J., Rosenberg, S. A., Klein, H., Berger, M., Mullen, C. A., Ramsey, W. J., Muul, L., Morgan, R. A., Anderson, W. F., T-Lymphocyte- Directed Gene Therapie for ADA- SCID: Initial Trial Results After 4 Years. Science 1995, 270 : 475-477
Cobbold, S. & Waldmann, H., How do monoclonal antibodies induce tolerance? A role for Infectious Tolerance? Annual Reviews Immunology 1998,16 : 619-644
Campos, L., Naji, A., Deli, B. C., Kern, J. H., Kim, J. I., Barker, C. F., Markmann J. F., Survival of MHC-Deficient Mouse Heterotropic Cardiac Allografts. Transplantation 1995, 59 : 187-191
Flügel, A., Willem, M., Berkowicz, T., Wekerle, H. Gene transfer into CD4+ T lymphocytes:
Green fluorescent protein-engineered, encephalitogenic T cells illuminate brain autoimmune responses. Nature Med. 1999,7 : 843-847
Hammer, M., Flügel, A., Seifert, M., Lehmann, M., Brandt, C., Volk, H.-D., Ritter, T. Poten tial of allspecific gene-engineered T cells in transplantation gene therapy: specific T-cell acti vation determines transgene expression in vitro and in vivo. 1999. Human Gene Therapy, submitted
Lehmann, M., F. Sternkopf, F. Metz, J. Brock, W.-D. Döcke, A. Plantikow, B. Kuttler, H. J. Hahn, B. Ringel, H.-D. Volk. A novel high-efficient anti-CD4 monoclonal antibody indu ces long-term survival of rat skin allografis. Transplantation 1992, 54 : 959-962
Lehmann, M., Kuttler, B., Siegling, A., Fordalla, A., Riedel, H., Lacha, J., Hahn, H.-J., Brock, J., Volk, H.-D. Characterization of the anti-CD4-induced permanent acceptance of rat renal allografis. Transplantation Proc. 1993, 25 : 2859.
Lehmann M, Graser E, Risch K, Hancock WW, Muller A, Kuttler B, Hahn HJ, Kupiec- Weglinski JW, Brock J, Volk HD. Anti-CD4 monoclonal antibody-induced allograft tolerance in rats despite persistence of donor-reactive T cells. Transplantation 1997 Oct 27; 64(8):1181-7
Mosmann, T. R. & Coffmann, R. L., Th1 and Th2 cells: different patterns of lymphokine secre tion lead to a diffrent functional properties. Annual Reviews Immunology 1989,7 : 145-173
Ode-Hakim, S., Döcke, W. D., Kern, F., Volk, H. D., Reinke, P. DTH-like mechanisms in late acute rejection - role of CD 4+ T lymphocytes. Transplantation 1996, 61 : 1233-1340
Onodera, K., Lehmann, M., Akalin, E., Volk, H.-D., Sayegh, M. H., Kupiec-Weglinski, J. W. Induction of "infectious" tolerance to MHC-incompatible cardiac allografts in CD4 monoclo nal antibody-treated sensitized rat recipients. J. Immunol. 1996a, 157 : 1944-1950
Onodera, K., Hanckock, W. W., Graser, E., Lehmann, M., Volk, H.-D. Sayegh, M. H., Strom, T. B., Kupiec-Weglinski, J. W. Th2-cytokines and the development of "infectious" tolerance in rat cardiac allograft recipients. J. Immunol., 1997, 159 : 1572-1581
Qin, 5., Cobbold., S. P., Pope, H., Elliott, J., Kioussis, D., Davies, J., Waldmann, H. "Infecti ous" transplantation tolerance. Science, 1993, 259 : 974-977
Qin, L., Chavin, K., Ding, Y., Favaro, J. P., Woodward, J. E., Lin, J., Tahara, H., Robbins, P., Shaked, A., Ho, D. Y., Sapolsky, R. M.,Lotze, M. T., Bromberg, J. S. Multiple vectors effec tively achieve gene transfer in a murine cardiac transplantation model. Transplantation 1995, 59 : 809-816
Quinn, E. R., Lum, L. G., Trevor, K. T., T cell activation modulates retrovirus-mediated gene expression. Human Gene Therapie 1998, 9 : 1457-1467
Ritter, T., Risch, K., Schroeder, G., Kolls, J., Siegling, A., Graser, E., Reinke, P., Brock, J., Lehmann, M., Volk, H. D. Intragraft overexpression of TL-4 neither sufficient nor essential for tolerance induction to cardiac allografts in high-reponder strain combinations. Transplantation 1999, 15 : 1427-1430.
Sayegh, M. H., Akalin, E., Hanckock, W. W., Russel, M. E., Carpenter, C. B., Turka, L. A. CD28/B7 blockade after alloantigenic challenge in vivo inhibits Th1 cytokines but spares Th2. 1995. J. Exp. Med. 178 : 1801-06
Siegling, A., M. Lehmann, H. Riedel, C. Platzer, J. Brock, F. Emmrich, H.-D. Volk. A non depleting anti-rat monoclonal antibody which suppresses T helper 1-like but not T helper 2- like intragraft lymphokine secretion induces long-term survival of renal allografts. Transplan tation 1994a, 57 : 464-467
Siegling, A., M. Lehmann, C. Platzer, F. Emmrich, H.-D. Volk. A novel multispecific compe titor fragment for quantitative PCR analysis of cytokine gene expression in rats. 1994b. J. Immunol. Meth. 177 : 23-28
Suzuki, T., Taghara, H., Narula, 5., Moore, K. W., Robbins, P. D., Lotze, M. T. Viral Interleu kin 10 (IL-10), the Human Herpes Virus 4 Cellular IL-10 Homologue, Induces Local Anergy to Allogenic and Syngenic Tumors. J. Exp.Med. 1995, 182 : 477-486
Takeuchi T., Ueki, T., Sunaga S., Ikuta K, Sasaki Y., Li B., Moriyama N., Miyazaki J., Kawa be K. Murine interleukin 4 transgenic heart allograft survival prolonged with down-regulation ofthe Th1 cytokine mRNA in grafis. Transplantation 1997 Jul 15; 64(1):152-7
VanBuskirk, A. M., Wakely, M. E., Orosz, C. G. Transfusion of polarized TH2
Blaese, R. M., Culver, K. W., Miller, D., Carter, C., Fleisher, T., Clerici, M., Shearer G., Chang, L., Chiang, Y., Tolsthev, P., Grennblatt, J. J., Rosenberg, S. A., Klein, H., Berger, M., Mullen, C. A., Ramsey, W. J., Muul, L., Morgan, R. A., Anderson, W. F., T-Lymphocyte- Directed Gene Therapie for ADA- SCID: Initial Trial Results After 4 Years. Science 1995, 270 : 475-477
Cobbold, S. & Waldmann, H., How do monoclonal antibodies induce tolerance? A role for Infectious Tolerance? Annual Reviews Immunology 1998,16 : 619-644
Campos, L., Naji, A., Deli, B. C., Kern, J. H., Kim, J. I., Barker, C. F., Markmann J. F., Survival of MHC-Deficient Mouse Heterotropic Cardiac Allografts. Transplantation 1995, 59 : 187-191
Flügel, A., Willem, M., Berkowicz, T., Wekerle, H. Gene transfer into CD4+ T lymphocytes:
Green fluorescent protein-engineered, encephalitogenic T cells illuminate brain autoimmune responses. Nature Med. 1999,7 : 843-847
Hammer, M., Flügel, A., Seifert, M., Lehmann, M., Brandt, C., Volk, H.-D., Ritter, T. Poten tial of allspecific gene-engineered T cells in transplantation gene therapy: specific T-cell acti vation determines transgene expression in vitro and in vivo. 1999. Human Gene Therapy, submitted
Lehmann, M., F. Sternkopf, F. Metz, J. Brock, W.-D. Döcke, A. Plantikow, B. Kuttler, H. J. Hahn, B. Ringel, H.-D. Volk. A novel high-efficient anti-CD4 monoclonal antibody indu ces long-term survival of rat skin allografis. Transplantation 1992, 54 : 959-962
Lehmann, M., Kuttler, B., Siegling, A., Fordalla, A., Riedel, H., Lacha, J., Hahn, H.-J., Brock, J., Volk, H.-D. Characterization of the anti-CD4-induced permanent acceptance of rat renal allografis. Transplantation Proc. 1993, 25 : 2859.
Lehmann M, Graser E, Risch K, Hancock WW, Muller A, Kuttler B, Hahn HJ, Kupiec- Weglinski JW, Brock J, Volk HD. Anti-CD4 monoclonal antibody-induced allograft tolerance in rats despite persistence of donor-reactive T cells. Transplantation 1997 Oct 27; 64(8):1181-7
Mosmann, T. R. & Coffmann, R. L., Th1 and Th2 cells: different patterns of lymphokine secre tion lead to a diffrent functional properties. Annual Reviews Immunology 1989,7 : 145-173
Ode-Hakim, S., Döcke, W. D., Kern, F., Volk, H. D., Reinke, P. DTH-like mechanisms in late acute rejection - role of CD 4+ T lymphocytes. Transplantation 1996, 61 : 1233-1340
Onodera, K., Lehmann, M., Akalin, E., Volk, H.-D., Sayegh, M. H., Kupiec-Weglinski, J. W. Induction of "infectious" tolerance to MHC-incompatible cardiac allografts in CD4 monoclo nal antibody-treated sensitized rat recipients. J. Immunol. 1996a, 157 : 1944-1950
Onodera, K., Hanckock, W. W., Graser, E., Lehmann, M., Volk, H.-D. Sayegh, M. H., Strom, T. B., Kupiec-Weglinski, J. W. Th2-cytokines and the development of "infectious" tolerance in rat cardiac allograft recipients. J. Immunol., 1997, 159 : 1572-1581
Qin, 5., Cobbold., S. P., Pope, H., Elliott, J., Kioussis, D., Davies, J., Waldmann, H. "Infecti ous" transplantation tolerance. Science, 1993, 259 : 974-977
Qin, L., Chavin, K., Ding, Y., Favaro, J. P., Woodward, J. E., Lin, J., Tahara, H., Robbins, P., Shaked, A., Ho, D. Y., Sapolsky, R. M.,Lotze, M. T., Bromberg, J. S. Multiple vectors effec tively achieve gene transfer in a murine cardiac transplantation model. Transplantation 1995, 59 : 809-816
Quinn, E. R., Lum, L. G., Trevor, K. T., T cell activation modulates retrovirus-mediated gene expression. Human Gene Therapie 1998, 9 : 1457-1467
Ritter, T., Risch, K., Schroeder, G., Kolls, J., Siegling, A., Graser, E., Reinke, P., Brock, J., Lehmann, M., Volk, H. D. Intragraft overexpression of TL-4 neither sufficient nor essential for tolerance induction to cardiac allografts in high-reponder strain combinations. Transplantation 1999, 15 : 1427-1430.
Sayegh, M. H., Akalin, E., Hanckock, W. W., Russel, M. E., Carpenter, C. B., Turka, L. A. CD28/B7 blockade after alloantigenic challenge in vivo inhibits Th1 cytokines but spares Th2. 1995. J. Exp. Med. 178 : 1801-06
Siegling, A., M. Lehmann, H. Riedel, C. Platzer, J. Brock, F. Emmrich, H.-D. Volk. A non depleting anti-rat monoclonal antibody which suppresses T helper 1-like but not T helper 2- like intragraft lymphokine secretion induces long-term survival of renal allografts. Transplan tation 1994a, 57 : 464-467
Siegling, A., M. Lehmann, C. Platzer, F. Emmrich, H.-D. Volk. A novel multispecific compe titor fragment for quantitative PCR analysis of cytokine gene expression in rats. 1994b. J. Immunol. Meth. 177 : 23-28
Suzuki, T., Taghara, H., Narula, 5., Moore, K. W., Robbins, P. D., Lotze, M. T. Viral Interleu kin 10 (IL-10), the Human Herpes Virus 4 Cellular IL-10 Homologue, Induces Local Anergy to Allogenic and Syngenic Tumors. J. Exp.Med. 1995, 182 : 477-486
Takeuchi T., Ueki, T., Sunaga S., Ikuta K, Sasaki Y., Li B., Moriyama N., Miyazaki J., Kawa be K. Murine interleukin 4 transgenic heart allograft survival prolonged with down-regulation ofthe Th1 cytokine mRNA in grafis. Transplantation 1997 Jul 15; 64(1):152-7
VanBuskirk, A. M., Wakely, M. E., Orosz, C. G. Transfusion of polarized TH2
-like cell popula
tions into SCID mouse cardiac allograft recipients results in acute allograft rejection. Trans
plantation 1996 Jul 27; 62(2):229-38
AAV: Adeno-Assoziiertes Virus
Ag: Antigen
Ak: Antikörper
APC: Antigen-präsentierende Zellen
B-Zellen: B-Zellen
B7-Moleküle: Oberflächenmarker auf APC, wichtig für die Aktivierung von T-Zellen
bag-1: Bcl-2 associated athanogene, Antiapoptose-Gen, interagiert mit Bcl-2
bcl-2: B cell leukemia-2, Antiapoptose-Gen
bcl-xl: Bcl-2 Homolog, Antiapoptose-Gen
cDNA: complementary DNA, copy DNA
CD: cluster of differentiation, Nomenklatur für Oberflächenmoleküle
CD4: spezifischer Oberflächenmarker aud T-Helfer-Zellen
CMV: Cytomegalievirus
(RIB 5/2): Bezeichung für einen gegen das CD4-Molekül gerichteten monokl. An tikörper
CD8 T-: spezifischer Oberflächenmarker auf zytotoxischen T-Zellen
CMV IL-10: Cytomegalovirus IL-10, homolog zum humanen IL-10 bzw. vIL-10
CTLA-4: cytotoxic T-cell late antigen
CTLA4-Ig: Fusionsprotein, bestehend aus CTLA-4 (cytotoxic T-cell late antigen) und dem Fc-Teil des IgG-Antikörpers
DMEM: Dulbeccos' modifiziertes Eagle's Medium
DNA: desoxyribonucleic acid (Desoxyribonucleinsäure)
EBV: Epstein-Barr Virus
EGFP: Enhanced Green Fluorescent Protein, grün leuchtendes Reportergen
ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay gy: Gray (Gy)
hDelta1: Homo sapiens delta (Drosophila)-like 1 (aus der Familie der Notch- Liganden)
hSerrate-1: Homo sapiens serrate 1 (aus der Familie der Notch-Liganden)
FKS: Fetales Kälberserum
IFN: Interferon
Ig: Immunglobulin
IL: Interleukin
kDa: Kilo-Dalton
mAk: monoklonale(r) Antikörper
MHC: Major Histocompatibility Complex
MLC: Mixed Lymphocyte Culture
mRNA: Messenger-Ribonucleinsäure
NIH/3T3: Maus-Fibroblasten
NK-Zellen: Natürliche Killerzellen
Notchl-4: Homo sapiens Notch (Drosophila) homolog 1-4 (Notch-Rezeptor) OKT3: mAk gegen CD3
PBMC: peripheral blood mononuclear cells
PCR: polymerase chain reaction (Polymerase Kettenreaktion)
PHA: Phytohämagglutinin
SCID-Mäuse: immundefiziente Mäuse, die keine B- und T-Zellen besitzen
TCM: T-Zell Medium
TCR-Signal: T-Zell-Rezeptor
TGF: transforming growth factor
T-Lymphozyten: Thymusabhängige oder -stämmige Lymphozyten
T-Zellen: dem Thymus entstammende T-Lymphozyten
Th1-Zellen: T-Zellen mit T-helfer1-Phänotyp
Th2: T-Zellen mit T-helfer2-Phänotyp
TNF: Tumornekrosefaktor
vIL-10: virales Interleukin-10, entstammt aus Epstein-Barr-Virus, hat hohe AS- Homologie zum humanen IL-10
Ag: Antigen
Ak: Antikörper
APC: Antigen-präsentierende Zellen
B-Zellen: B-Zellen
B7-Moleküle: Oberflächenmarker auf APC, wichtig für die Aktivierung von T-Zellen
bag-1: Bcl-2 associated athanogene, Antiapoptose-Gen, interagiert mit Bcl-2
bcl-2: B cell leukemia-2, Antiapoptose-Gen
bcl-xl: Bcl-2 Homolog, Antiapoptose-Gen
cDNA: complementary DNA, copy DNA
CD: cluster of differentiation, Nomenklatur für Oberflächenmoleküle
CD4: spezifischer Oberflächenmarker aud T-Helfer-Zellen
CMV: Cytomegalievirus
(RIB 5/2): Bezeichung für einen gegen das CD4-Molekül gerichteten monokl. An tikörper
CD8 T-: spezifischer Oberflächenmarker auf zytotoxischen T-Zellen
CMV IL-10: Cytomegalovirus IL-10, homolog zum humanen IL-10 bzw. vIL-10
CTLA-4: cytotoxic T-cell late antigen
CTLA4-Ig: Fusionsprotein, bestehend aus CTLA-4 (cytotoxic T-cell late antigen) und dem Fc-Teil des IgG-Antikörpers
DMEM: Dulbeccos' modifiziertes Eagle's Medium
DNA: desoxyribonucleic acid (Desoxyribonucleinsäure)
EBV: Epstein-Barr Virus
EGFP: Enhanced Green Fluorescent Protein, grün leuchtendes Reportergen
ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay gy: Gray (Gy)
hDelta1: Homo sapiens delta (Drosophila)-like 1 (aus der Familie der Notch- Liganden)
hSerrate-1: Homo sapiens serrate 1 (aus der Familie der Notch-Liganden)
FKS: Fetales Kälberserum
IFN: Interferon
Ig: Immunglobulin
IL: Interleukin
kDa: Kilo-Dalton
mAk: monoklonale(r) Antikörper
MHC: Major Histocompatibility Complex
MLC: Mixed Lymphocyte Culture
mRNA: Messenger-Ribonucleinsäure
NIH/3T3: Maus-Fibroblasten
NK-Zellen: Natürliche Killerzellen
Notchl-4: Homo sapiens Notch (Drosophila) homolog 1-4 (Notch-Rezeptor) OKT3: mAk gegen CD3
PBMC: peripheral blood mononuclear cells
PCR: polymerase chain reaction (Polymerase Kettenreaktion)
PHA: Phytohämagglutinin
SCID-Mäuse: immundefiziente Mäuse, die keine B- und T-Zellen besitzen
TCM: T-Zell Medium
TCR-Signal: T-Zell-Rezeptor
TGF: transforming growth factor
T-Lymphozyten: Thymusabhängige oder -stämmige Lymphozyten
T-Zellen: dem Thymus entstammende T-Lymphozyten
Th1-Zellen: T-Zellen mit T-helfer1-Phänotyp
Th2: T-Zellen mit T-helfer2-Phänotyp
TNF: Tumornekrosefaktor
vIL-10: virales Interleukin-10, entstammt aus Epstein-Barr-Virus, hat hohe AS- Homologie zum humanen IL-10
Claims (18)
1. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen, erhalten dadurch, dass T-Zellen eines Transplantat
empfängers in vitro durch Zellen eines Transplantatspenders oder durch Zellen, die dominante
MHC-Moleküle exprimieren, stimuliert und gleichzeitig oder später mittels Gentransfer von
immunmodulierenden therapeutischen Genen transduziert werden.
2. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich
um alloreaktive T-Zellen handelt.
3. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen nach Anspruch 1 und 2, erhalten dadurch, dass:
- a) Eine Zell-Linie, die ein zum Gentransfer fähiges Retrovirus mit einem therapeutischen Gen produziert, in Kultur genommen wird (Verpackungszellinie) und
- b) Lymphozyten aus dem Vollblut bzw. Milz oder Lymphknoten isoliert werden (bestrahlte Spender T-Zellen oder bestrahlte Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen) und
- c) entweder eine Kokultivierung, bestehend aus der gemischten Lymphozytenkultur (Primär- MLC) und der Verpackungszellinie, durchgeführt wird oder ausschließlich retrovirus- haltiger Zellkulturüberstand für die Transduktion verwendet wird, so dass auf eine Kokul tivierung mir der Verpackungszellinie verzichtet werden kann.
4. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass als
Retrovirus ein Moloney Murine Leukemia Virus oder ein Lentivirus eingesetzt wird.
5. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen nach Anspruch 1 und 2, erhalten dadurch, dass
Lymphozyten aus dem Vollblut bzw. Milz oder Lymphknoten isoliert werden (bestrahlte
Spender T-Zellen oder bestrahlte Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren und
Empfänger T-Zellen) und die mit Hilfe dieser gemischten Lymphozytenkultur hergestellten
allospezifischen T-Zellen mit Liposomenformulationen, die das Plasmid mit dem therapeuti
schen Gen enthält, inkubiert oder mit einer Genkanone beschossen werden.
6. (In vitro) gen-modifizierte T-Zellen nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass
es sich bei den therapeutischen Genen um
- a) Zytokine
- b) Interleukine
- c) Notch-Liganden/Rezeptoren
- d) Zellprotektive Gene (z. B. antiapoptotische Gene, Hitzeschockgene)
7. (In vitro) transduzierte T-Zellen nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei
den therapeutischen Genen um
- a) IL-4 oder
- b) IL-10 oder virales IL-10 (z. B. aus EBV oder CMV)
- c) IL-12p40 oder
- d) IL-13 oder
- e) Hämoxygenase-1
- f) CTLA-4 oder
- g) hSerrate-1 oder
- h) hDelta-1 oder
- i) Notch 1-4 oder
- j) bcl-2 oder
- k) bcl-xl oder
- l) bag-1
8. Verfahren zur Herstellung gen-modifizierter T-Zellen, dadurch gekennzeichnet, dass T-
Zellen eines Transplantatempfängers in vitro durch Zellen eines Transplantatspenders oder
durch Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren, stimuliert und gleichzeitig oder
später mittels Gentransfer von immunmodulierenden therapeutischen Genen transduziert wer
den.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass es sich um alloreaktive T-Zellen
handelt.
10. Verfahren nach Anspruch 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, dass:
- a) eine Zeltlinie, die ein zum Gentransfer fähiges Retrovirus mit einem therapeutischen Gen produziert, in Kultur genommen wird (Verpackungszellinie) und
- b) Lymphozyten aus dem Vollblut isoliert werden (bestrahlte Spender T-Zellen oder be strahlte Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen und
- c) entweder eine Kokultivierung, bestehend aus der gemischten Lymphozytenkultur (Pri mär-MLC) und der Verpackungszellinie, durchgeführt wird oder ausschließlich retrovi rus-haltiger Zellkulturüberstand für die Transduktion verwendet wird, so dass auf eine Kokultivierung mir der Verpackungszellinie verzichtet werden kann.
11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass als Retrovirus ein Moloney
Murine Leukemia Virus oder ein Lentivirus eingesetzt wird.
12. Verfahren nach Anspruch 8 und 9, dadurch gekennzeichnet, dass Lymphozyten aus dem
Vollblut bzw. Milz oder Lymphknoten isoliert werden (bestrahlte Spender T-Zellen oder be
strahlte Zellen, die dominante MHC-Moleküle exprimieren und Empfänger T-Zellen) und die
mit Hilfe dieser gemischten Lymphozytenkultur hergestellten allospezifischen T-Zellen mit
Liposomenformulationen, die das Plasmid mit dem therapeutischen Gen enthält, inkubiert
oder mit einer Genkanone beschossen werden.
13. Verfahren nach Anspruch 8 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den therapeu
tischen Genen um
- a) Zytokine
- b) Interleukine
- c) Notch-Liganden / Rezeptoren
- d) Zellprotektive Gene (z. B. antiapoptotische Gene, Hitzeschockgene)
14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den therapeuti
schen Genen um
- a) IL-4 oder
- b) IL-10 oder virales IL-10 (z. B. aus EBV oder CMV)
- c) IL-12p40 oder
- d) IL- I 3 oder
- e) Hämoxygenase-1
- f) CTLA-4 oder
- g) hSerrate-1 oder
- h) hDelta-1 oder
- i) Notch 1-4 oder
- j) bcl-2 oder
- k) bcl-xl oder
- l) bag- 1
15. Verwendung der (in vitro) gen-modifizierten T-Zellen nach Anspruch 1 bis 7 in der
Transplantationsmedizin.
16. Verwendung nach Anspruch 15 zur Verhinderung der allogenen Transplantatrejektion in
vivo.
17. Verwendung nach Anspruch 15 und 16 als Mittel zur Toleranzinduktion und zur Erhal
tung von Toleranz gegenüber allogenen Transplantaten (Zellen, Gewebe, Organe).
18. Verwendung nach Anspruch 15 bis 17 zur Stimulierung der T-Zellen des Transplantat
empfängers.
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| US20040175373A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-09-09 | Xcyte Therapies, Inc. | Compositions and methods for eliminating undesired subpopulations of T cells in patients with immunological defects related to autoimmunity and organ or hematopoietic stem cell transplantation |
| US7381405B2 (en) * | 2002-10-15 | 2008-06-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods of preparing lymphocytes that express interleukin-2 and their use in the treatment of cancer |
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Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE338813T1 (de) * | 1995-03-17 | 2006-09-15 | Univ California | Methode zur tumorbehandlung mit alloaktivierten humanen lymphozyen |
| EP0822977A1 (de) * | 1995-04-20 | 1998-02-11 | Diacrin, Inc. | Modifizierte zellen und verfahren zur inhibierung einer xenotransplantatabstossung |
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-
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- 2001-06-08 JP JP2002502094A patent/JP2004523202A/ja active Pending
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