DE10004801A1 - Device for carrying out immunocytochemical protocols and in situ hybridization on microscope slide has narrow gap between cover plate with liquid inlet and outlet and slide, allowing liquid to be fed over sample on slide - Google Patents

Device for carrying out immunocytochemical protocols and in situ hybridization on microscope slide has narrow gap between cover plate with liquid inlet and outlet and slide, allowing liquid to be fed over sample on slide

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DE10004801A1 DE2000104801 DE10004801A DE10004801A1 DE 10004801 A1 DE10004801 A1 DE 10004801A1 DE 2000104801 DE2000104801 DE 2000104801 DE 10004801 A DE10004801 A DE 10004801A DE 10004801 A1 DE10004801 A1 DE 10004801A1
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Abstract

Device for carrying out immunocytochemical protocols, in situ hybridization and related processes on biological material on a microscope slide has a narrow gap (5) between a cover plate (1) with liquid inlet and outlet (3, 4) and the slide, which is optionally fitted with a seal (6). This allows liquid to be fed over a sample on the slide.

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Durchführung komplexer Protokolle in der Immuncytochemie und in situ Hybridisierung an biologischen Proben auf Objektträ­ gern oder vergleichbaren Halterungen. Hauptzweck der Erfindung ist es, eine Vor­ richtung zur Verfügung zu stellen, mit deren Hilfe derartige Protokolle in einem dafür geeigneten Automaten durchgeführt werden können. Gelöst wird das durch eine Vor­ richtung, in die der Träger, z. B. ein Objektträger mit einem Gewebsschnitt, so einge­ spannt werden kann, daß ein Flüssigkeitsaustausch ohne Öffnen der Vorrichtung erfolgen kann. Die Flüssigkeit wird dabei in einem schmalen Spalt zwischen der Vor­ richtung und dem Objektträger so gehalten, daß eine nennenswerte Verdunstung auch bei erhöhter Temperatur vermieden wird.The invention relates to a device for carrying out complex protocols in the Immunocytochemistry and in situ hybridization on biological specimens on slides like or comparable mounts. The main purpose of the invention is to provide a front to make available, with the help of such protocols in one suitable machines can be carried out. This is solved by a pre direction in which the carrier, e.g. B. a slide with a tissue section, so turned can be tensioned that a liquid exchange without opening the device can be done. The liquid is in a narrow gap between the front direction and the slide so that a significant evaporation is avoided even at elevated temperatures.

Die Analyse von Genexpressionsmustern oder der Verteilung immunreaktiver Mole­ küle ist eine gängige Methode in der modernen Biologie und Medizin. Während die meisten solcher Untersuchungen zur Zeit an Gewebsschnitten durchgeführt werden, wächst ein neues Anwendungsfeld rasch heran. Dabei werden Expressionsmuster an Bibliotheken mechanisch auf einen Träger aufgebrachter biologischer Moleküle analysiert. Die Technik ist unter den Namen "Biochips", "Mikroarrays" oder "DNA Chips" bekannt. Alle diese Protokolle sind arbeitsintensiv und erfordern eine Reihe von Inkubationen mit verschiedenen Waschflüssigkeiten und Reagenzien. Einige der Schritte müssen bei definierter Temperatur durchgeführt, und in vielen der Schritte muß eine Kontamination mit ubiquitären Enzymen verhindert werden. Der zentrale Schritt ist immer eine Inkubation über oft mehrere Stunden mit einer zu untersuchen­ den Probe, deren zur Verfügung stehendes Volumen limitiert sein kann. Die Vielzahl der Schritte macht eine Automatisierung der Protokolle wünschenswert.Analysis of gene expression patterns or the distribution of immunoreactive moles küle is a common method in modern biology and medicine. While the most such examinations are currently being performed on tissue sections, a new field of application is growing rapidly. Expression patterns on libraries of biological molecules mechanically attached to a support analyzed. The technique is called "biochips", "microarrays" or "DNA Chips ". All of these protocols are labor intensive and require a number of incubations with various washing liquids and reagents. Some of the Steps must be performed at a defined temperature, and in many of the steps contamination with ubiquitous enzymes must be prevented. The central one The step is always to examine an incubation, often over several hours, with one the sample, the available volume of which may be limited. The multitude of the steps makes automation of the protocols desirable.

In der Literatur sind Geräte und Verfahren zur Automatisierung vor allem im Bereich der Immuncytochemie beschrieben [z. B. Wilkinson: In situ Hybridization, Oxford IRL Press 1992]. Zur Durchführung einfacher Färbereaktionen [z. B. Gerät von DAKO] und auch komplexerer Protokolle sind Automaten im Markt bekannt [Gerät von Bio­ genex, Gerät von Ventana]. Alle Automaten haben aber Defizite, wenn für jeden Ob­ jektträger eine im Volumen limitierte Menge an Probenmaterial zur Verfügung steht. Darüber hinaus werden in keiner der bekannten Vorrichtungen geschlossene Kam­ mern zur Durchführung der eigentlichen Hybridisierung eingesetzt. Die in der Patho­ logie verwendeten Färbeautomaten sind per se nicht zur Hybridisierung bei erhöhter Temperatur nutzbar.The literature describes devices and processes for automation, especially in the field of immunocytochemistry [e.g. B. Wilkinson: In situ Hybridization, Oxford IRL Press 1992 ]. To perform simple staining reactions [e.g. Machines from DAKO] and also more complex protocols are machines known on the market [device from Bio genex, device from Ventana]. However, all machines have deficits if there is a limited amount of sample material available for each slide. In addition, closed chambers are not used in any of the known devices to carry out the actual hybridization. The automatic stainers used in pathology cannot be used per se for hybridization at elevated temperatures.

Kammern zur manuellen Durchführung der Protokolle sind bekannt und z. B. bei der Firma Sigma-Aldrich erhältlich. Hier wird auf den Objektträger mit Hilfe einer Silikon­ maske eine Plastikmembran mit zwei Öffnungen aufgeklebt. Über die Öffnungen sind Flüssigkeiten manuell einfüllbar und während der Hybridisierung werden die Öffnun­ gen verschlossen. Ein automatisierter Flüssigkeitsaustausch ist nicht vorgesehen und nicht realisierbar.Chambers for manual implementation of the protocols are known and z. B. at the Sigma-Aldrich available. Here is on the slide with the help of a silicone mask a plastic membrane with two openings glued on. Over the openings are Liquids can be filled manually and during the hybridization the openings are opened closed. An automated fluid exchange is not intended and not feasible.

Die zur Bearbeitung nötigen Schritte und die verwendeten Reagenzien sind sehr ähnlich zu den in der Patentschrift DE 196 50 880 C1 vom 07.12.96 beschriebenen. Die dort beschriebene Vorrichtung bezieht sich aber auf Hybridisierungen an ganzen, d. h., nicht geschnittenen Objekten. The steps required for processing and the reagents used are very high similar to that described in patent specification DE 196 50 880 C1 from December 7, 1996. However, the device described there relates to hybridizations on whole, d. i.e., uncut objects.  

Aufgabe der Erfindung ist es nun, eine Vorrichtung zur Verfügung zu stellen, die die folgenden Bedingungen erfüllt:
The object of the invention is now to provide a device which fulfills the following conditions:

  • - Einschluß des Objektträgers mit dem biologischen Material in der Art, daß über dem Gewebsschnitt oder der Bibliothek von Sonden eine dünne, abgeschlossene Kammer entsteht- Inclusion of the slide with the biological material in such a way that over a thin, closed section of the tissue section or library of probes Chamber arises
  • - Zugang zu der Kammer über Öffnungen zur Zu- und Abfuhr von Reagenzien- Access to the chamber via openings for the supply and removal of reagents
  • - Zugänglichkeit für automatischen Flüssigkeitstransfer;- Accessibility for automatic fluid transfer;
  • - Reduktion der Verdunstung während längerer Inkubationsschritte bei erhöhter Temperatur- Reduction of evaporation during longer incubation steps with increased temperature
  • - inerte Materialien- inert materials
  • - Sterilisierbarkeit- Sterilizability

Gelöst wird die Aufgabe durch die in der Zeichnungen 1 beschriebene Vorrichtung und die Merkmale der Patentansprüche. Die erfindungsgemäße Vorrichtung erlaubt die automatisierte Durchführung von Protokollen zur in situ Hybridisierung in dafür vorgesehenen Automaten. Dadurch wird eine erhebliche Arbeitserleichterung erreicht und die Durchführung der Experimente wird reproduzierbarer.The object is achieved by the device described in the drawings 1 and the features of the claims. The device according to the invention allows the automated implementation of protocols for in situ hybridization for this provided machines. This makes work considerably easier and the conduct of the experiments becomes more reproducible.

Zur Durchführung der Experimente wird zunächst auf die Deckplatte nach Zeichnung 1 mit eine flache Dichtung mit einem zentralen Ausschnitt in der Form des Fensters der Deckplatte aufgelegt. Auf diese Dichtung wird der Objektträger mit dem biologi­ schen Material so aufgelegt, daß das zu untersuchende Material im Bereich des fen­ sters liegt und zur Deckplatte weist.To carry out the experiments, first draw on the cover plate according to the drawing 1 with a flat gasket with a central cutout in the shape of the window the cover plate. The slide with the biologi is placed on this seal the material placed so that the material to be examined in the area of the fen sters and faces the cover plate.

Dieser Aufbau wird gegebenenfalls durch eine geeignete Klemmvorrichtung zusam­ mengedrückt. Objektträger, Dichtung und Deckplatte bilden nun eine flache Kammer aus, die über zwei Bohrungen in der Deckplatte mit der Außenwelt verbunden ist. In solchen Anordnungen können nun eine Vielzahl von Objektträgern ohne Kontamina­ tionsgefahr bearbeitet oder gelagert werden.This structure is possibly together by a suitable clamping device crowd pressed. The slide, seal and cover plate now form a flat chamber which is connected to the outside world via two holes in the cover plate. In Such arrangements can now be used for a large number of slides without contaminants danger of being processed or stored.

Zur automatisierten Bearbeitung wird nun eine Vielzahl solcher Anordnungen in eine geeignete Klemmhalterung in einen Automaten eingebracht, der Flüssigkeitswechsel vornehmen kann. Falls eine Temperierung erforderlich ist, muß die Aufnahmevor­ richtung des Automaten eine solche Temperierung vorsehen.For automated processing, a variety of such arrangements are now in one A suitable clamp holder is inserted into a machine, the fluid change can make. If tempering is required, the intake must provide such a temperature control in the direction of the machine.

Die Deckplatten mit den Objektträgern werden so in den Automaten eingesetzt, daß die außen zugängliche Öffnung des Zuführungsstutzens nach oben weist. In der in den Zeichnungen beschriebenen Ausführung liegt dabei die Anordnung flach waage­ recht auf, es ist aber auch eine Variante mit vertikaler Ausrichtung der Objektträger realisierbar.The cover plates with the slides are used in the machine so that the externally accessible opening of the feed connector points upwards. In the in The design described in the drawings, the arrangement is flat right, but it is also a variant with a vertical alignment of the slides realizable.

Nun wird über eine der Zuführungsbohrungen die erste Waschflüssigkeit einge­ bracht. Welche der Bohrungen zur Zufuhr bzw. Abführung von Flüssigkeiten dient, hängt von der jeweiligen Ausführungsform ab. Es ist auch denkbar, daß beide Boh­ rungen wechselweise benutzt werden können. Die Patentansprüche decken mehrere sehr ähnliche Varianten ab, die sich vor allem in der Form (Querschnitt) der Bohrun­ gen unterscheiden. In der Zeichnung sind gerade Bohrungen mit identischen Durchmesser dargestellt, denkbar und vorteilhaft sind aber auch kegelförmig zu­ laufende Bohrungen und verschiedene Durchmesser. Now the first washing liquid is introduced through one of the feed bores brings. Which of the holes is used for the supply or discharge of liquids depends on the particular embodiment. It is also conceivable that both Boh can be used alternately. The claims cover several very similar variants, mainly in the shape (cross section) of the hole differ. In the drawing there are straight holes with identical ones Diameters shown, conceivable and advantageous are also conical running holes and different diameters.  

Die Flüssigkeit dringt nun über die Zuführungsbohrung in die Kammer ein und be­ netzt die innerhalb der Dichtung liegende Fläche des Objektträgers. Je nach Ausfüh­ rung erfolgt das Eindringen der Flüssigkeit durch Kapillarkräfte, hydrostatischen Druck oder Überdruck beim Einbringen der Flüssigkeit. Zur vollständigen Benetzung und Entfernung aller Luftblasen kann es notwendig werden, die Kammer mit einem mehrfachen ihres Volumens zu überspülen. Die Flüssigkeit läuft durch den Spalt in die gegenüberliegende Bohrung und wird dort aktiv abgesaugt. ds Überspülen des Spalts und die Abnahme der Flüssigkeit aus der zweiten Bohrung kann gegebe­ nenfalls durch Schrägstellen der Anordnung unterstützt werden.The liquid now penetrates into the chamber via the feed bore and be wets the surface of the slide inside the seal. Depending on the version The liquid penetrates through capillary, hydrostatic forces Pressure or overpressure when introducing the liquid. For complete wetting and removing all air bubbles it may be necessary to use a chamber to flush multiple times their volume. The liquid runs in through the gap the opposite hole and is actively extracted there. rinsing the Gaps and the removal of the liquid from the second hole can occur can be supported by inclining the arrangement.

Im weiteren Verlauf des Experiments werden nun der Reihe nach in alle Kammern Reagenzien eingebracht. Nach der für jedes Reagenz definierten Reaktionszeit wird das im Protokoll vorgesehene nächste Reagenz eingebracht. Da der Spalt einen en­ gen Querschnitt im Vergleich zur Bohrung aufweist und die Bohrung an ihrem unte­ ren Ende trifft, dringen hier typischerweise keine Luftblasen ein.In the further course of the experiment, we will now move to all the chambers in order Reagents introduced. After the reaction time defined for each reagent introduced the next reagent provided in the protocol. Since the gap en cross-section compared to the bore and the bore at its bottom hitting the end, no air bubbles typically penetrate here.

Für die Hybridisierung wird die Probe auf dem gleichen Weg eingebracht. Wenn das Volumen limitiert ist, kann die Zuführungsbohrung anschließend mit einer inerten Waschflüssigkeit gefüllt werden. Falls es das Protokoll erfordert, werden Reagenzien aus vorgewärmten Vorratslösungen eingebracht. Alternativ läßt sich die gesamte Klemmhalterung zur Aufnahme der einzelnen Anordnungen ebenfalls temperieren.The sample is introduced in the same way for hybridization. If that Volume is limited, the feed hole can then be filled with an inert one Wash liquid to be filled. If the protocol so requires, reagents will be provided introduced from preheated stock solutions. Alternatively, the entire Also temper the clamp bracket to accommodate the individual arrangements.

Die Verdunstung von Probenflüssigkeit während der oft über bis zu 30 Stunden er­ folgenden Hybridisierung bei 40-70°C wird durch einzelne oder mehrere der folgende Maßnahmen verhindert:
The evaporation of sample liquid during the hybridization at 40-70 ° C, which often takes up to 30 hours, is prevented by one or more of the following measures:

  • - Verschluß der Zuführungsbohrungen mit einem Septum oder einem Deckel mit sehr enger zentrischer Öffnung- Closing the feed holes with a septum or a lid very narrow centric opening
  • - Überschichtung der Flüssigkeit in der Zuführungsbohrungen mit einer schwer verdampfbaren zweiten Flüssigkeit, wie z. B. Glyzerin, Polyethylenglykol oder Öl- Overlaying the liquid in the feed holes with a heavy vaporizable second liquid, such as. As glycerin, polyethylene glycol or oil
  • - Umbau der gesamten Halterung mit einer befeuchtbaren Kammer- Modification of the entire bracket with a humidifiable chamber
  • - Ersatz verdunsteter Lösung während der Inkubation.- Replacement of evaporated solution during the incubation.

Nach der Hybridisierung erfolgen typischerweise Waschschritte mit salzhaltigen Lö­ sungen bei definierter Temperatur, die genau so durchgeführt werden wie oben be­ schrieben. Je nach Protokoll können sich weitere Inkubationen mit einem oder meh­ reren Nachweisreagenzien anschließen, die im wesentlichen nach dem gleichen Ablauf erfolgen. Zum Schluß wird die Probe salzfrei gespült und steht dann für die Auswertung zur Verfügung. Je nach Protokoll kann die Probe in der Halterung bis zur unmittelbaren Auswertung bearbeitet werden. Falls eine visuelle Kontrolle der letzten Reaktionsschritte notwendig ist, ist sollte die Deckplatte aus Glas gefertigt sein. Der Vorteil der Handhabung in einer geschlossenen Halterung bleibt also bis zum Ab­ schluß des Protokolls erhalten.After hybridization, washing steps with saline solution are typically carried out solutions at a defined temperature, which are carried out exactly as described above wrote. Depending on the protocol, further incubations with one or more connect other detection reagents, which are essentially the same Process. Finally, the sample is rinsed salt-free and then stands for the Evaluation available. Depending on the protocol, the sample can be held in the holder up to immediate evaluation can be processed. If a visual check of the last one Reaction steps is necessary, the cover plate should be made of glass. The The advantage of handling in a closed holder remains until the end received at the end of the protocol.

Der Objektträger wird dann mit der Deckplatte aus der Klemmhalterung herausge­ nommen und steht nun wie bei manuellen Protokollen zur weiteren Analyse, Bear­ beitung oder Lagerung zur Verfügung. Die Deckplatte und Dichtung werden nun durch chemische oder thermische Desinfektion nach gängigen Verfahren gereinigt und stehen dann für weitere Experimente zur Verfügung. Die Klemmhalterung kommt mit dem biologischen Material nicht in Berührung und unterliegt damit weniger strin­ genten Reinigungsvorschriften. The slide is then removed from the clamp with the cover plate and is now available for further analysis, as with manual protocols, Bear processing or storage available. The cover plate and gasket are now cleaned by chemical or thermal disinfection using standard methods and are then available for further experiments. The clamp bracket comes does not come into contact with the biological material and is therefore less subject to strine cleaning instructions.  

Legende der ZeichnungLegend of the drawing

11

Grundkörper, Deckplatte
Basic body, cover plate

22

Hybridisierungsbereich, Bereich der Kammer
Hybridization area, area of the chamber

33rd

Zulaufbohrung bzw. Ablaufbohrung
Inlet hole or outlet hole

44

Zulaufbohrung bzw. Ablaufbohrung
Inlet hole or outlet hole

55

Spalt, Hybridisierungskammer
Gap, hybridization chamber

66

optionale Maske, Dichtung
optional mask, seal

Claims (22)

1. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß zwischen einer Deckplatte (1) mit Bohrungen (3, 4) für die Zu- und Abfuhr von Flüssigkeiten, dem Objektträger und gegebenenfalls einer Dichtung (6) ein schmaler Spalt (5) zum Überspülen der am Objektträger fixierten Probe besteht.1. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that between a cover plate ( 1 ) with holes ( 3 , 4 ) for the supply and discharge of Liquids, the slide and possibly a seal ( 6 ) there is a narrow gap ( 5 ) for rinsing the sample fixed to the slide. 2. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Objektträger und Deckplatte (1) und gegebenenfalls eine Dichtung (6) durch eine Klemmvorrichtung (nicht dargestellt) zusammengedrückt werden.2. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the slide and cover plate ( 1 ) and optionally a seal ( 6 ) by a clamping device (not shown) be squeezed together. 3. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Objektträger mit Deckplatte (1) und ggf Dichtung (6) horizontal oder mit einem Winkel von nicht mehr als 20° gegen eine temperierbare Platte ge­ drückt wird.3. Device for performing protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the slide with cover plate ( 1 ) and possibly seal ( 6 ) horizontally or at an angle of not is pressed more than 20 ° against a temperature-controlled plate. 4. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Bohrungen so ausgeführt werden, daß ihr Volumen das des Spalts übersteigt und die Bohrung somit als Reservoir dient.4. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the holes are made so that their volume that of the gap exceeds and the hole thus serves as a reservoir. 5. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Bohrungen gerade ausgeführt sind.5. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the holes are straight. 6. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, oder daß die Bohrungen kegelig ausgeführt sind.6. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, or that the holes are tapered. 7. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Flüssigkeiten, die in eine der Bohrungen (3, 4) eingebracht werden, unter Ausnutzung von Kapillarkräften durch den Spalt bis zur gegenüber liegenden Bohrung fließen.7. Device for performing protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that liquids which are introduced into one of the holes ( 3 , 4 ) by using capillary forces flow the gap to the opposite hole. 8. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (5) gegenüber dem Durchmesser der Bohrungen (3, 4) so gering ist, daß Luftblasen nicht eindringen.8. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 5 ) compared to the diameter of the holes ( 3 , 4 ) is so small that Air bubbles do not penetrate. 9. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (5) 0,05 bis 2 mm beträgt.9. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 5 ) is 0.05 to 2 mm. 10. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (5) gegebenenfalls nicht über die gesamte Fläche konstant ist sondern erhöhte Flächen zum Auschluß von Luftblasen, zur Reduzierung des Reagenzvolumens oder zum Einschluß nicht völlig fixierter Objekte auf­ weist.10. Apparatus for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 5 ) may not be constant over the entire area but rather increased areas to exclude air bubbles , to reduce the reagent volume or to include objects that are not completely fixed. 11. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (5) durch ein in die Deckplatte eingefrästes Fenster be­ stimmt wird.11. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 5 ) is determined by a milled into the cover plate window be. 12. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Deckplatte gegebenenfalls zusätzlich eine um das Fenster herum lau­ fende Nut zur Aufnahme einer Dichtung aufweist.12. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the cover plate may additionally be lukewarm around the window fende groove for receiving a seal. 13. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (5) zusätzlich zu Anspruch 11 durch eine als Maske ausge­ formte Dichtplatte mitbestimmt wird.13. A device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 5 ) is determined in addition to claim 11 by a sealing plate formed as a mask. 14. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, oder daß die Deckplatte (1) kein Fester nach Anspruch 11 aufweist und der Spalt ausschließlich durch eine als Maske ausgeformte Dichtplatte bestimmt wird. 14. A device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that or that the cover plate ( 1 ) has no window according to claim 11 and the gap exclusively by a mask molded sealing plate is determined. 15. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Dichtplatte aus einem gegen die verwendeten Reagenzien inerten Ma­ terial wie Polyolefin, Teflon, Silikon, PVC oder Gummi besteht.15. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the sealing plate from an inert to the reagents used Ma material such as polyolefin, Teflon, silicone, PVC or rubber. 16. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Deckplatte (1) nach Anspruch 1-15 aus einem gegen die verwendeten Reagenzien inerten Material, wie z. B. Glas, Keramik, Teflon, Polyolefin, Poly­ sulfon oder Silikon besteht.16. A device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the cover plate ( 1 ) according to claims 1-15 of an inert material against the reagents used, such as e.g. B. glass, ceramic, Teflon, polyolefin, poly sulfone or silicone. 17. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Deckplatte (1) nach Anspruch 1-16 aus Glas besteht und außerhalb des Fensters eine glatte, plane Oberfläche aufweist.17. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the cover plate ( 1 ) according to claims 1-16 consists of glass and a smooth outside of the window, has a flat surface. 18. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Deckplatte aus Glas oder Silikon ohne weitere Hilfsmittel oder nur mit einem hochviskosen Dichtmittel wie Fett, Öl, Glycerin oder Polyethylenglykol gegen den Objektträger dichtet.18. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the cover plate made of glass or silicone without further aids or only with a highly viscous sealant such as grease, oil, glycerin or polyethylene glycol seals against the slide. 19. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Öffnungen (3, 4) in der Deckplatte (1) mit einem Septum oder einem Stopfen mit einem kleinen, zentralen Loch verschlossen werden können.19. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the openings ( 3 , 4 ) in the cover plate ( 1 ) with a septum or a stopper a small, central hole can be closed. 20. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Flüssigkeiten durch einen Pipettierroboter in die als Reservoir dienenden und gegebenenfalls mit Septum oder Stopfen verschlossenen Bohrungen (3, 4) eingebracht werden können.20. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on specimen slides or similar holders, characterized in that liquids are pipetted by a robot into the bores ( 3 , optionally sealed with a septum or stopper ) 4 ) can be introduced. 21. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß zum Einbringen der Flüssigkeiten eine Kanüle benutzt wird, die über einen Teil ihrer Länge das Loch in dem Stopfen nach Anspruch 15 und 16 abdichtet und einen weiteren, nicht abdichtenden Abschnitt aufweist.21. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that a cannula is used to introduce the liquids, which over a Part of its length seals the hole in the plug according to claim 15 and 16 and has a further, non-sealing section. 22. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridi­ sierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die zum Einbringen der Flüssigkeit benutzte Kanüle nach Anspruch 21 so positioniert wird, daß die Flüssigkeit wahlweise unter Überdruck oder drucklos eingebracht werden kann.22. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridi and related processes on biological material on slides or similar brackets, characterized, that the cannula used for introducing the liquid according to claim 21 so is positioned that the liquid either under pressure or without pressure can be introduced.
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