DE10004802A1 - Device for carrying out immunocytochemical protocols or in situ hybridization comprises a sample holder with liquid inlet and outlet mounted on slide with narrow gap between them, allowing liquid to be fed over sample - Google Patents

Device for carrying out immunocytochemical protocols or in situ hybridization comprises a sample holder with liquid inlet and outlet mounted on slide with narrow gap between them, allowing liquid to be fed over sample

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Abstract

Immunocytochemical device which carries out in situ hybridization on a biological material on a microscope slide comprising a sample holder with a liquid inlet and outlet, mounted on a slide, is new. Device for carrying out immunocytochemical protocols, in situ hybridization and related processes on biological material on a microscope slide comprises a sample holder (1) with liquid inlet and outlet (4, 5) mounted on the slide, which is optionally fitted with a seal (12). There is a narrow gap (3) between the holder and the slide which allows liquid to be fed over a sample on it.

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie und in situ Hybridisierung an biologischen Proben auf Objektträgern oder vergleichbaren Halterungen. Die Analyse von Genexpressionsmustern oder der Verteilung immunreaktiver Moleküle ist eine gängige Methode in der modernen Biologie und Medizin. Während die meisten solcher Untersuchungen zur Zeit an Gewebsschnitten durchgeführt werden, wächst ein neues Anwendungsfeld rasch heran. Dabei werden Expressionsmuster an Bibliotheken mechanisch auf einen Träger aufgebrachter biologischer Moleküle analysiert. Die Technik ist unter den Namen "Biochips", "Mikroarrays" oder "DNA Chips" bekannt. Alle diese Protokolle sind arbeitsintensiv und erfordern eine Reihe von Inkubationen mit verschiedenen Waschflüssigkeiten und Reagenzien. Einige der Schritte müssen bei definierter Temperatur durchgeführt, und in vielen der Schritte muß eine Kontamination mit ubiquitären Enzymen verhindert werden. Der zentrale Schritt ist immer eine Inkubation über oft mehrere Stunden mit einer zu untersuchenden Probe, deren zur Verfü­ gung stehendes Volumen limitiert sein kann. Die Vielzahl der Schritte die in der Regel an mehreren Proben parallel durchgeführt werden müssen macht eine Automatisierung der Protokolle wünschenswert.The invention relates to a device for carrying out protocols immunocytochemistry and in situ hybridization on biological samples on slides or comparable holders. The analysis of Gene expression patterns or the distribution of immunoreactive molecules a common method in modern biology and medicine. While most such examinations are currently performed on tissue sections a new field of application is growing rapidly. Expression patterns in libraries are mechanically linked to one Carried biological molecules analyzed. The technology is known as "biochips", "microarrays" or "DNA chips". All of these protocols are labor intensive and require a number of Incubations with various washing liquids and reagents. Some of the steps must be carried out at a defined temperature, and contamination with ubiquitous enzymes must occur in many of the steps be prevented. The central step is always an incubation over and over several hours with a sample to be examined, the available standing volume may be limited. The multitude of steps the usually have to be performed on several samples in parallel makes automation of the protocols desirable.

In der Literatur sind Geräte und Verfahren zur Automatisierung vor allem im Bereich der Immuncytochemie beschrieben [z. B. Wilkinson: In situ Hybridization, Oxford IRL Press 1992]. Zur Durchführung einfacher Fär­ bereaktionen [z. B. Gerät von DAKO] und auch komplexerer Protokolle sind Automaten im Markt bekannt [Gerät von Biogenex, Gerät von Ven­ tana]. Alle Automaten haben aber Defizite, wenn für jeden Objektträger eine im Volumen limitierte Menge an Probenmaterial zur Verfügung steht. Darüber hinaus werden in keiner der bekannten Vorrichtungen ge­ schlossene Kammern zur Durchführung der eigentlichen Hybridisierung eingesetzt. Die in der Pathologie verwendeten Färbeautomaten sind per se nicht zur Hybridisierung bei erhöhter Temperatur nutzbar.The literature describes devices and processes for automation, especially in the field of immunocytochemistry [e.g. B. Wilkinson: In situ Hybridization, Oxford IRL Press 1992 ]. To carry out simple dyeing reactions [e.g. Machines from DAKO] and also more complex protocols, machines are known on the market [device from Biogenex, device from Ven tana]. However, all machines have deficits if there is a limited amount of sample material available for each slide. In addition, in any of the known devices ge closed chambers are used to carry out the actual hybridization. The automatic stainers used in pathology cannot be used per se for hybridization at elevated temperatures.

Kammern zur manuellen Durchführung der Protokolle sind bekannt und z. B. bei der Firma Sigma-Aldrich erhältlich. Hier wird auf den Objektträ­ ger mit Hilfe einer Silikonmaske eine Plastikmembran mit zwei Öffnun­ gen aufgeklebt. Über die Öffnungen sind Flüssigkeiten manuell einfüllbar und während der Hybridisierung werden die Öffnungen verschlossen. Ein automatisierter Flüssigkeitsaustausch ist nicht vorgesehen und nicht realisierbar. Chambers for the manual execution of the protocols are known and e.g. B. available from Sigma-Aldrich. Here is on the contract With the help of a silicone mask, a plastic membrane with two openings glued on. Liquids can be filled manually via the openings and the openings are closed during hybridization. An automated fluid exchange is not intended and not realizable.  

Die zur Bearbeitung nötigen Schritte und die verwendeten Reagenzien sind sehr ähnlich zu den in der Patentschrift DE 196 50 880 C1 vom 07.12.96 beschriebenen. Die dort beschriebene Vorrichtung bezieht sich aber auf Hybridisierungen an ganzen, d. h., nicht geschnittenen Objek­ ten.The steps required for processing and the reagents used are very similar to those in DE 196 50 880 C1 07.12.96 described. The device described there relates but on hybridizations on whole, i.e. i.e., not cut object ten.

Aufgabe der Erfindung ist es nun, eine Vorrichtung zur Verfügung zu stellen, die die folgenden Bedingungen erfüllt:
The object of the invention is now to provide a device which fulfills the following conditions:

  • - Einschluß des Objektträgers mit dem biologischen Material in der Art, daß über dem Gewebsschnitt oder der Bibliothek von Sonden eine dünne, abgeschlossene Kammer entsteht- inclusion of the slide with the biological material in the manner, that over the tissue section or library of probes thin, closed chamber is created
  • - Zugang zu der Kammer über Öffnungen zur Zu- und Abfuhr von Rea­ genzien- Access to the chamber via openings for the supply and removal of Rea genzien
  • - Zugänglichkeit für automatischen Flüssigkeitstransfer;- Accessibility for automatic fluid transfer;
  • - Reduktion der Verdunstung während längerer Inkubationsschritte bei erhöhter Temperatur- Reduction of evaporation during longer incubation steps elevated temperature
  • - Verwendung inerter Materialien- Use of inert materials
  • - Sterilisierbarkeit- Sterilizability

Gelöst wird die Aufgabe durch die in den Zeichnungen 1-3 beschriebe­ ne Vorrichtung und die Merkmale der Patentansprüche. Die erfindungs­ gemäße Vorrichtung erlaubt die automatisierte Durchführung von Proto­ kollen zur in situ Hybridisierung in dafür vorgesehenen Automaten. Da­ durch wird eine erhebliche Arbeitserleichterung erreicht und die Durch­ führung der Experimente wird reproduzierbarer.The task is solved by the one described in the drawings 1-3 ne device and the features of the claims. The fiction device allows the automated execution of proto kollen for in situ hybridization in designated machines. There through makes work considerably easier and through experimentation becomes more reproducible.

Zur Durchführung der Experimente wird zunächst die Halterung nach Zeichnung 1 mit einer ovalen Ringdichtung (2) versehen. Auf diese Hal­ terung wird der Objektträger mit dem biologischen Material so aufgelegt, daß das zu untersuchende Material im Bereich der Ringdichtung liegt und zur Halterung weist. Dieser Bereich bildet zwischen Halterung, Ob­ jektträger und Dichtung den Hybridisierungsspalt (9), bzw. die Hybridisie­ rungskammer aus. Anschlagkanten (9) erleichtern die Positionierung des Objekträgers und die Handhabung.To carry out the experiments, the holder according to drawing 1 is first provided with an oval ring seal ( 2 ). On this Hal tion the slide with the biological material is placed so that the material to be examined lies in the area of the ring seal and points to the holder. This area forms the hybridization gap ( 9 ) or the hybridization chamber between the holder, the slide and the seal. Stop edges ( 9 ) facilitate positioning of the slide and handling.

Dieser Aufbau wird in das Klemmblech (14) nach Zeichnung 2 einge­ schoben. Objektträger, Dichtung (12) und Halterung (1) bilden nun eine flache Kammer, die über zwei Kanäle (4, 5) in der Halterung mit der Au­ ßenwelt verbunden ist. In solchen Klemmhalterungen (14) können nun eine Vielzahl von Objektträgern ohne Kontaminationsgefahr bearbeitet oder gelagert werden. This structure is inserted into the clamping plate ( 14 ) according to drawing 2. Slide, seal ( 12 ) and holder ( 1 ) now form a flat chamber which is connected to the outside world via two channels ( 4 , 5 ) in the holder. A large number of specimen slides can now be processed or stored in such clamp holders ( 14 ) without risk of contamination.

Zur automatisierten Bearbeitung wird nun eine Vielzahl von Proben in Klemmhalterungen in einen Automaten eingebracht, der Flüssigkeits­ wechsel vornehmen kann. Falls eine Temperierung erforderlich ist, muß die Aufnahmevorrichtung des Automaten eine solche Temperierung vor­ sehen.A large number of samples are now used for automated processing Clamping brackets placed in a machine, the liquid can make change. If temperature control is required, must the receiving device of the machine before such tempering see.

Die Halterungen werden so in den Automaten eingesetzt, daß die außen zugängliche Öffnung des Zuführungsstutzens (4) nach oben weist. In der in den Zeichnungen beschriebenen Ausführung steht d bei die Halte­ rung aus Platzgründen hochkant, es ist aber auch eine Variante mit ver­ tikaler Ausrichtung der Objektträger realisierbar.The brackets are inserted into the machine so that the externally accessible opening of the feed connector ( 4 ) points upwards. In the embodiment described in the drawings, d stands upright for holding purposes, but a variant with vertical alignment of the specimen slides is also feasible.

Nun wird über einen der Zuführungskanäle (4) die erste Waschflüssigkeit eingebracht. Welcher der Kanäle zur Zufuhr bzw. Abführung von flüs­ sigkeiten dient, hängt von der jeweiligen Ausführungsform ab. Es ist auch denkbar, daß beide Kanäle wechselweise benutzt werden können. Die Patentansprüche decken mehrere sehr ähnliche Varianten ab, die in den Zeichnungen dargestellt sind.Now the first washing liquid is introduced via one of the feed channels ( 4 ). Which of the channels is used to supply or discharge liquids depends on the particular embodiment. It is also conceivable that both channels can be used alternately. The claims cover several very similar variants, which are shown in the drawings.

Die Flüssigkeit dringt nun über den Zuführungskanal durch eine enge Bohrung (5) in die Kammer ein und benetzt die innerhalb der Dichtung liegende Fläche (3) des Objektträgers. Zur vollständigen Benetzung und Entfernung alter Luftblasen kann es notwendig werden, die Kammer mit einem mehrfachen ihres Volumens zu überspülen. Je nach Ausführung der Kammer läuft die Flüssigkeit auf der anderen Seite aus einem Über­ lauf ab (5) oder sie wird auf der anderen Seite aktiv abgesaugt [Zeich­ nung 3, (5)].The liquid now penetrates into the chamber via the feed channel through a narrow bore ( 5 ) and wets the surface ( 3 ) of the slide lying within the seal. For complete wetting and removal of old air bubbles, it may be necessary to flush the chamber with a multiple of its volume. Depending on the design of the chamber, the liquid runs out of an overflow on the other side ( 5 ) or it is actively suctioned off on the other side [drawing 3 , ( 5 )].

Im weiteren Verlauf des Experiments werden nun der Reihe nach in alle Kammern Reagenzien eingebracht. Nach der für jedes Reagenz defi­ nierten Reaktionszeit wird das im Protokoll vorgesehene nächste Rea­ genz eingebracht. Dabei sollen keine Luftblasen eingetragen werden und das Volumen wird jeweils so gewählt, daß ein vollständiger Austausch erfolgt. Um den Eintrag von Luftblasen zu verhindern kann es erforder­ lich sein, neu eingebrachte Reagenzien unter dem Flüssigkeitsspiegel im Zulaufstutzen (4) einzubringen.In the further course of the experiment, reagents are introduced one after the other into all chambers. After the reaction time defined for each reagent, the next reagent provided in the protocol is introduced. No air bubbles should be entered and the volume is selected so that a complete exchange takes place. To prevent the entry of air bubbles, it may be necessary to introduce newly introduced reagents under the liquid level in the inlet connection ( 4 ).

Für die Hybridisierung wird die Probe auf dem gleichen Weg einge­ bracht. Wenn das Volumen limitiert ist, kann der Zuführungskanal an­ schließend mit einer inerten Waschflüssigkeit gefüllt werden. Falls es das Protokoll erfordert, werden Reagenzien aus vorgewärmten Vorrats­ lösungen eingebracht. Alternativ läßt sich die gesamte Halterung zur Aufnahme der einzelnen Klemmhalter ebenfalls temperieren. For hybridization, the sample is inserted in the same way brings. If the volume is limited, the feed channel can be on finally be filled with an inert washing liquid. if it The protocol requires reagents from preheated stocks solutions introduced. Alternatively, the entire bracket can Also temper the holder of the individual clamp holders.  

Die Verdunstung von Probenflüssigkeit während der oft über bis zu 30 Stunden erfolgenden Hybridisierung bei 40-70°C wird durch einzelne oder mehrere der folgende Maßnahmen verhindert:
The evaporation of sample liquid during the hybridization at 40-70 ° C, which often takes up to 30 hours, is prevented by one or more of the following measures:

  • - Verschluß der Zuführungsöffnung (4) mit einem Septum oder einem Deckel mit sehr enger Öffnung (nicht dargestellt)- Closing the feed opening ( 4 ) with a septum or a lid with a very narrow opening (not shown)
  • - Überschichtung der Flüssigkeit im Zuführungsstutzen (4) mit einer schwer verdampfbaren zweiten Flüssigkeit, wie z. B. Glyzerin, Poly­ ethylenglykol oder Öl- Overlaying the liquid in the feed pipe ( 4 ) with a difficult to evaporate second liquid, such as. As glycerin, poly ethylene glycol or oil
  • - Umbau der gesamten Halterung mit einer befeuchtbaren Kammer- Modification of the entire bracket with a humidifiable chamber
  • - Ersatz verdunsteter Lösung während der Inkubation.- Replacement of evaporated solution during the incubation.

Nach der Hybridisierung erfolgen typischerweise Waschschritte mit salz­ haltigen Lösungen bei definierter Temperatur, die genau so durchgeführt werden wie oben beschrieben. Je nach Protokoll können sich weitere Inkubationen mit einem oder mehreren Nachweisreagenzien anschlie­ ßen, die im wesentlichen nach dem gleichen Ablauf erfolgen. Zum Schluß wird die Probe salzfrei gespült und steht dann für die Auswertung zur Verfügung. Je nach Protokoll kann die Probe in der Halterung bis zur unmittelbaren Auswertung bearbeitet werden. Falls eine visuelle Kon­ trolle der letzten Reaktionsschritte notwendig ist, ist die Beobachtung durch die offene Seite der Klemmhalterung (14) problemlos möglich. Der Vorteil der Handhabung in einer geschlossenen Halterung bleibt also bis zum Abschluß des Protokolls erhalten.After hybridization, washing steps are typically carried out with saline solutions at a defined temperature, which are carried out exactly as described above. Depending on the protocol, further incubations with one or more detection reagents can follow, which essentially follow the same procedure. Finally, the sample is rinsed salt-free and is then available for evaluation. Depending on the protocol, the sample can be processed in the holder until it is immediately evaluated. If a visual check of the last reaction steps is necessary, observation through the open side of the clamp ( 14 ) is possible without any problems. The advantage of handling in a closed holder therefore remains until the protocol is completed.

Der Objektträger wird dann aus der Klemmhalterung herausgeschoben und steht nun wie bei manuellen Protokollen zur weiteren Analyse, Be­ arbeitung oder Lagerung zur Verfügung. Die Halterung (1) und Dichtung (12) werden nun durch chemische oder thermische Desinfektion nach gängigen Verfahren gereinigt und stehen dann für weitere Experimente zur Verfügung. Die Klemmhalterung (14) kommt mit dem biologischen Material nicht in Berührung und unterliegt damit weniger stringenten Rei­ nigungsvorschriften. The slide is then pushed out of the clamp and is now available for further analysis, processing or storage, as with manual protocols. The holder ( 1 ) and seal ( 12 ) are now cleaned by chemical or thermal disinfection using standard methods and are then available for further experiments. The clamp ( 14 ) does not come into contact with the biological material and is therefore subject to less stringent cleaning regulations.

Legende der ZeichnungenLegend of the drawings

11

Grundkörper der Halterung
Basic body of the bracket

22

Nut zur Aufnahme der Dichtung
Groove to accommodate the seal

33rd

Hybridisierungsbereich, Bereich der Kammer
Hybridization area, area of the chamber

44

Zulaufstutzen
Inlet nozzle

55

Ablaufstutzen
Drain connector

66

Zulaufbohrung mit engem Querschnitt
Inlet bore with a narrow cross-section

77

Ablaufbohrung mit engem Querschnitt
Drain hole with a narrow cross-section

88th

Belüftungsbohrung
Ventilation hole

99

Anschlagkanten
Stop edges

1010th

Stufe für den Spalt
Step for the gap

1111

optionale Maske
optional mask

1212th

Dichtung (nur keilförmige Version dargestellt)
Seal (only wedge-shaped version shown)

1313

erweiterter Bereich des Zulaustutzens
extended area of the additional nozzle

1414

Klemmvorrichtung
Clamping device

Claims (30)

1. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß zwischen einer Halterung (1) mit Kanälen für die Zu- und Abfuhr von Flüssigkeiten (4, 5), dem Objektträger und gegebenenfalls einer Dichtung (12) ein schmaler Spalt (3) zum Überspülen der am Ob­ jektträger fixierten Probe besteht.1. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that between a holder ( 1 ) with channels for the supply and removal of liquids ( 4 , 5 ) , the slide and possibly a seal ( 12 ) there is a narrow gap ( 3 ) for rinsing the sample fixed on the slide. 2. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Objektträger und Halterung in eine Klemmvorrichtung (14) ein­ gespannt werden, die den Objektträger dicht auf die Halterung oder eine darin liegende umlaufende Dichtung drückt.2. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the slide and holder are clamped in a clamping device ( 14 ), the slides tightly on the holder or a circumferential seal in it presses. 3. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Spülflüssigkeiten und Reagenzien über einen Zufuhrkanal (4) eingebracht werden und für weitgehend frei definierbaren Zeiträume den Spalt über dem Objektträger füllen.3. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that rinsing liquids and reagents are introduced via a feed channel ( 4 ) and the gap above the for largely freely definable periods Fill slides. 4. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß Spülflüssigkeiten und Reagenzien gegebenenfalls durch einen Pipettierroboter eingebracht werden können in dem die montierten halterungen mit den nach oben weisenden Zuführungsöffnungen angeordnet werden.4. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that rinsing liquids and reagents, if necessary, by a Pipetting robots can be inserted in the assembled Holders with the feed openings pointing upwards to be ordered. 5. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Öffnungen der Zu- und Abführungskanäle nach außen und zum Spalt hin Querschnittsverengungen (6, 7) aufweisen, die Ver­ dunstung und Diffusion von Flüssigkeiten reduzieren.5. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the openings of the supply and discharge channels have cross-sectional constrictions ( 6 , 7 ) towards the outside and towards the gap, reduce the evaporation and diffusion of liquids. 6. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Zuführungskanal gegenenenfalls eine erweiterte Stelle (13) aufweist, die als Reservoir fungiert.6. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the supply channel optionally has an expanded location ( 13 ) which acts as a reservoir. 7. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Ablaufkanal aus einem Überlauf (5, 6) besteht.7. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the drain channel consists of an overflow ( 5 , 6 ). 8. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Ablaufkanal mit einer Entlüftungsöffnung (8) versehen ist, die das unkontrollierte Leerlaufen durch hydrostatische Effekte ver­ hindert.8. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the drain channel is provided with a ventilation opening ( 8 ) which prevents the uncontrolled idling by hydrostatic effects. 9. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Objektträger in der Halterung hochkant oder quer aufgestellt wird.9. Device for performing protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the slide is placed upright or across in the holder becomes. 10. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Zulauf an der unteren Seite des Spaltes (6) und der Ablauf (7) oben liegt.10. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the inlet is on the lower side of the gap ( 6 ) and the outlet ( 7 ) above. 11. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Überlauf (7) bei vertikaler Anordnung der montierten Vor­ richtung oberhalb des benetzten Spalts (3) liegt. 11. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the overflow ( 7 ) with vertical arrangement of the assembled device is above the wetted gap ( 3 ). 12. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Zulaufstutzen (4) nach oben mit einem Septum aus elasti­ schem Material wie Gummi oder Silikon abgeschlossen werden kann.12. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the inlet connection ( 4 ) can be closed at the top with a septum made of elastic material such as rubber or silicone . 13. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, oder daß der Zulaufstutzen (4) nach oben mit einem Stopfen abge­ schlossen werden kann, der eine kleine zentrale Bohrung aufweist.13. A device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the inlet connection ( 4 ) can be closed upwards with a stopper which has a small central bore having. 14. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuführung von Reagenzien durch eine Kanüle erfolgt, die in dem Loch des Stopfens nach Anspruch 13 abdichtet oder das Sep­ tum nach Anspruch 12 durchdringt und Reagenzien so unter Über­ druck eingebracht werden können.14. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the supply of reagents takes place through a cannula, which in seals the hole of the plug according to claim 13 or the Sep penetrates tum according to claim 12 and reagents so under pressure can be introduced. 15. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuführung von Reagenzien durch eine Kanüle erfolgt, die über ihre Länge eine Stelle aufweist, die in dem Loch des -Stopfens nach Anspruch 13 nicht abdichtet und so die wahlweise Dosierung ohne Überdruck erlaubt.15. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the supply of reagents is through a cannula that has a point along its length in the hole of the plug according to claim 13 does not seal and so the optional dosage allowed without overpressure. 16. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Zuführung von Reagenzien in den erweiterten Bereich (13) des Zulaufstutzens (4) so erfolgt, daß keine Luftblasen eingetragen werden.16. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the supply of reagents in the expanded area ( 13 ) of the inlet nozzle ( 4 ) takes place so that none Air bubbles are entered. 17. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Ablauf in ein Reservoir mündet, das aktiv geleert werden muß.17. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the drain ends in a reservoir that is actively emptied got to. 18. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß das Ablaufreservoir nach Anspruch 17 mit einem Septum oder Stopfen nach Anspruch 12-15 verschlossen wird.18. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the drain reservoir according to claim 17 with a septum or Plug is closed according to claim 12-15. 19. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß der Zulaufstutzen einen festen Anschluß an ein Spülsystem hat und darüber hinaus die Zugabe der Probe durch ein Septum erlaubt.19. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the inlet connection has a fixed connection to a flushing system and also allows the addition of the sample through a septum. 20. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Halterung (1) und die Klemmvorrichtung (14) aus inertem Material bestehen.20. Device for performing protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the holder ( 1 ) and the clamping device ( 14 ) consist of inert material. 21. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Halterung (1) aus Teflon, Polyolefin, Polyoxymethylen, Po­ lysulfon, Glas oder Keramik besteht und die Klemmvorrichtung (14) aus Edelstahl oder Titan.21. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the holder ( 1 ) consists of Teflon, polyolefin, polyoxymethylene, polysulfone, glass or ceramic and the Clamping device ( 14 ) made of stainless steel or titanium. 22. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß eine Dichtung (12) aus einem gegenüber den verwendeten Puffern inerten Material benutzt wird.22. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that a seal ( 12 ) made of a material which is inert towards the buffers used is used. 23. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß als Dichtungsmaterial Silikon, Silikonschaum, Gummi, Neopren oder Viton benutzt wird. 23. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that as sealing material silicone, silicone foam, rubber, neoprene or Viton is used.   24. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Dichtung (12) einen ringförmigen, keilförmigen oder recht­ eckigen Querschnitt aufweist.24. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the seal ( 12 ) has an annular, wedge-shaped or rectangular cross-section. 25. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite durch eine Stufe (10) in der Halterung zwischen dem äußeren Auflagerand und dem Bereich des Spalts bestimmt wird.25. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width is determined by a step ( 10 ) in the holder between the outer support edge and the area of the gap becomes. 26. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, oder daß die Spaltbreite (10) durch die Gestaltung der Dichtung (12) bestimmt wird.26. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 10 ) is determined by the design of the seal ( 12 ). 27. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Spaltbreite (10) durch eine fixierte oder austauschbare Di­ stanzplatte (11) außerhalb des durch die Dichtung bestimmten Fen­ sters (3) bestimmt wird.27. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the gap width ( 10 ) by a fixed or interchangeable di punch plate ( 11 ) outside the determined by the seal Fen sters ( 3 ) is determined. 28. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß eine Distanzplatte (11) benutzt wird, die gleichzeitig des über­ spülte Fenster (3) und die Spaltbreite (10) definiert.28. Device for carrying out protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that a spacer plate ( 11 ) is used, which simultaneously the flushed window ( 3 ) and the gap width ( 10 ) defined. 29. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Distanzplatte (11) nach Anspruch 27 und 28 mit einem hochviskosen Dichtungsmaterial bestrichen die Dichtungsfunktion übernimmt.29. Device for performing protocols of immunocytochemistry, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that the spacer plate ( 11 ) coated with a highly viscous sealing material takes over the sealing function according to claim 27. 30. Vorrichtung zur Durchführung von Protokollen der Immuncytochemie, in situ Hybridisierung und verwandten Verfahren an biologischem Material auf Objektträgern oder ähnlichen Halterungen, dadurch gekennzeichnet, daß die Distanzplatte nach Anspruch 27-29 aus Edelstahl, Polyole­ finfolie, Teflonfolie, Silikonfolie oder Gummifolie besteht.30. Device for carrying out immunocytochemistry protocols, in situ hybridization and related methods on biological material on slides or similar holders, characterized in that that the spacer plate according to claim 27-29 made of stainless steel, polyols fin film, Teflon film, silicone film or rubber film.
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