DD297770A5

DD297770A5 - PROCESS FOR PRODUCING VIRUS-FREE NATURAL MATERIALS

Info

Publication number: DD297770A5
Application number: DD90336893A
Authority: DD
Inventors: Bernd Disse; Eberhard Weller
Original assignee: ��K@��@��@��@��@��@��k��
Priority date: 1989-01-07
Filing date: 1990-01-03
Publication date: 1992-01-23
Also published as: EP0378107A3; IE63015B1; HU208258B; ATE98131T1; PT92788B; DE59003723D1; CA2007236A1; HU900051D0; DE3900350A1; DK0378107T3; HUT52705A; EP0378107B1; IE900045L; CA2007236C; EP0378107A2; PT92788A; JP2868263B2; JPH02289253A

Abstract

Method for preparing virus-free natural materials uses a mixture of a halogenated, aliphatic hydrocarbon, a lower alcohol and optionally water for killing or deactivating coated and uncoated viruses, for example during the treatment of organ preparations.

Description

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von virusfreien Naturstoffen, gleichgültig ob die Viren behüllt oder nicht behüllt sind.The invention relates to a process for the preparation of virus-free natural products, regardless of whether the viruses are enveloped or not covered.

Characteristic of the known state of the art

Lipidextraktlonen mit halogenieren Kohlenwasserstoffen, wie Chloroform, Freon, führen bekanntlicherweise zu einer Inaktivierung von behüllten Viren durch Zerstörung der Hülle (vgl. EP-f) 1-0111549). Nicht behüllte Viren gelten bis heute als resistent gegenüber vielen organischen Lösungsmitteln und bilden damit möglicherweise eine Quelle zur Kontamination von Stoffen biologischer Herkunft, beispielsweise von Naturstoffen zur parenteralen Anwendung beim Menschen, wie Organextrakte, Hormonpräparationen.Lipid extractions with halogenated hydrocarbons, such as chloroform, freon, are known to result in inactivation of enveloped viruses by disruption of the envelope (see EP-f) 1-0111549). Non-enveloped viruses are still considered to be resistant to many organic solvents and may thus be a source of contamination of biological substances, such as natural products for parenteral use in humans, such as organ extracts, hormone preparations.

Von E.G. Bligh und W. J. Dyer wurde eine Methode zur Lipidextraktion mit Hilfe von Chloroform-Methanol-Wasser-Gemischen beschrieben (vgl. Can. J. Biochem. Physiol. Vol. 37 (1959], 911-917). Eine optimale Lipidextraktion erzielt man dann, wenn acz Gewebe mit einer Mischung aus Chloroform und Methanol homogenisiert wird, das mit dem im Gewebe enthaltenen Wasser eine monophasische Mischung ergibt. Anschließend kann das Homogenat mit Wasser und/oder Chloroform unter Bildung eines biphasischen Systems verdünnt werden, wobei die Chloroformphase die Lipide enthält und die Methanol-Wasser-Phase die nichtlipide. Von einer Inaktivierung von Viren, insbesondere von nichtumhüllten Viren, ist in dieser Arbeit nichts ausgesagt.A method for lipid extraction using chloroform-methanol-water mixtures was described by EC Bligh and WJ Dyer (see Can J. Biochem Physiol Vol 37 (1959), 911-917). Optimal lipid extraction is achieved then, when acz tissue is homogenized with a mixture of chloroform and methanol which yields a monophasic mixture with the water contained in the tissue, then the homogenate may be diluted with water and / or chloroform to form a biphasic system, the chloroform phase being the lipids The inactivation of viruses, in particular of non-enveloped viruses, is silent in this work.

Object of the invention

Durch die Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung virusfreier Naturstoffe bereitgestellt, das für die Aufarbeitung aller natürlichen Rohstoffe, die für eine Anwendung beim Menschen ode' bei Tieren in Frage kommen, geeignet ist.The invention provides a method for producing virus-free natural substances which is suitable for the processing of all natural raw materials which are suitable for use in humans or animals.

Explanation of the essence of the invention

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabezugrunde, ein Verfahren zur Abtötung bzw. Inaktivierung von Viren zur Verfugung zu stellen.The object of the present invention is to provide a method for killing or inactivating viruses.

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß nicht behüllte Viren, die gegenüber halogenhaltigen aliphatischen Kohlenwasserstoffen, wie Chloroform und Alkoholen, wie Methanol, allein jeweils resistent sind, mit einem Gemisch, bestehend aus einem halogenhaltigen aliphatischen Kohlenwasserstoff und einem Alkohol bis zu 6 Kohlenstoffatomen, abgetötet bzw. inaktiviert werden. Zu diesem Zwecke haben sich Gemische aus vorzugsweise Chloroform und Äthanol und/oder Propanol und/oder Butanol mit oder ohne Wasserzusatz als geeignet erwiesen, besonders aber Gemische aus Chloroform und Methanol. Besonders gute Resultate liefert ein Methanol-Chloroform-Wasser-Gemisch, vorzugsweise in Form seiner ternären Phase. Als halogenhaltigealiphatische Kohlenwasserstoffe kommen z.B. 1,2-Dichlorethan, 1,1-Dichlorbutan, 1,1,1-Trichlorethan, Trichlorethylen, insbesondere aber Chloroform, als Alkohole z. B. Ethanol, Propanol, Isopropanol, n-Butanol, n-Hexanol, insbesondere aber Methanol, in Frage. Ein Wass6rzusatz kommt besonders dann in Frage, wenn sich damit ternäre Phasen erzielen lassen.Surprisingly, it has now been found that non-enveloped viruses that are resistant to halogen-containing aliphatic hydrocarbons, such as chloroform and alcohols, such as methanol, each alone, with a mixture consisting of a halogen-containing aliphatic hydrocarbon and an alcohol up to 6 carbon atoms, killed or be inactivated. For this purpose, mixtures of preferably chloroform and ethanol and / or propanol and / or butanol with or without addition of water have proven to be suitable, but especially mixtures of chloroform and methanol. Particularly good results are provided by a methanol-chloroform-water mixture, preferably in the form of its ternary phase. As the halogen-containing aliphatic hydrocarbons, e.g. 1,2-dichloroethane, 1,1-dichlorobutane, 1,1,1-trichloroethane, trichlorethylene, but especially chloroform, as alcohols z. As ethanol, propanol, isopropanol, n-butanol, n-hexanol, but especially methanol, in question. A water additive is particularly suitable if ternary phases can be achieved with it.

Die Inaktivierung bzw. Abtötung gelingt im allgemeinen durch Homogenisierung oder Auflösen oder bloße Behandlung des entsprechenden Substrats b*w. Materials in bzw. mit einem Gemisch, bestehend aus dem jeweiligen halogenhaltigen aliphatischen Lösungsmittel und einem Alkohol und, gegebenenfalls Wasser, beispielsweise bestehend aus Wasser bzw. physiologischer Kochsalzlösung, Chloroform und Methanol, wobei das Gemisch oder Gemenge für etwa 1 bis 3 Stunden bei niederenTemperaturen, beispielsweise bei -20 bis 10°C, gelagert wird. Besonders vorteilhaft istdie Behandlung oder Auflösung des Materials in einer homogenen Phase, bestehend aus einem Volumenteil physiologischer Kochsalzlösung, 1,1 Volumenteilen Chloroform und 2,2 Volumente ilen Methanol, wobei nach einer Einwirkzeit von z. B. 2 Stunden ein weiterer Volumenteil Kochsalzlösung und 1,1 Volumenteile Chloroform zugefügt werden.Inactivation or killing is generally accomplished by homogenization or dissolution or mere treatment of the corresponding substrate b * w. Material in or with a mixture consisting of the respective halogen-containing aliphatic solvent and an alcohol and optionally water, for example consisting of water or physiological saline solution, chloroform and methanol, the mixture or mixture being heated at low temperatures for about 1 to 3 hours, for example, at -20 to 10 ° C, is stored. Particularly advantageous is the treatment or dissolution of the material in a homogeneous phase consisting of one part by volume of physiological saline, 1.1 parts by volume of chloroform and 2.2 parts by volume of methanol, which after an exposure time of e.g. B. 2 hours, another volume of saline and 1.1 parts by volume of chloroform are added.

Es tritt eine Trennung in zwei Phasen ein. Sowohl in der wäßrigen als auch in der organischen Phase ist keine Virusaktivität mehr nachweisbar, gleichgültig ob behüllte oder auch nicht behüllte Viren vorhanden waren.There is a separation into two phases. Both in the aqueous and in the organic phase, no virus activity is detectable, regardless of whether enveloped or not enveloped viruses were present.

Das gefundene Verfahren zur Herstellung virusfreier Naturstoffe läßt sich für die Aufarbeitung aller natürlicher Rohstoffe, die für eine Anwendung beim Menschen oder bei Tieren in Frage kommen, verwenden. Das Verfahren kommt nicht nur für lipidextrahierbare Materialien, sondern auch für lediglich lösemittelresistente Stoffe in Betracht, da auch z. B. die wäßrige Phase keine Virusaktivität mehr aufweist.The process found for the production of virus-free natural products can be used for the processing of all natural raw materials that are suitable for use in humans or animals. The method is not only for lipid-extractable materials, but also for only solvent-resistant substances into consideration, as well as z. B. the aqueous phase has no virus activity more.

AusfOhrungsbeispiel

Die Durchführbarkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens soll anhand eines Beispiels demonstriert werden. Dieses Beispiel bezieht sich auf das Surfactant SF-R11, das aus der Lavage von gesunden, tierärztlich freigegebenen Rinderlungen durch Auswaschen der Alveolen mit physiologischer Kochsalzlösung in Anwesenheit organischer Lösungsmittel, z. B. Chloroform, hergestellt wird. SF-R11 ist ein Gemisch aus Phospholipiden (ca. 90Gew.-%), Cholesterol (ca. 3Gew.-%), Glyceriden (ca. 4Gew.-%), Fettsäuren (ca. 0,3Gew.-%) und Surfactant-assoziierten Proteinen des Typs B und C (ca. 1 Gew.-%). Im illgemelnen besteht keine Kontamination der Lunge mit rinderspezifischen Viren, eine Kontamination ist aber trotzdem nicht Vt lig auszuschließen. Um aber das erfindungsgemäße Verfahren auf seine Wirksamkeit testen zu können, wurde dem aus Lavage durch Zentrifugation gewonnenen Rohsurfactant in getrennten Studien jeweils ein behülltes (hier Bovines Herpesvirus Typ I, abgekürzt BHV1) und ein unbehülltes Testvirus (hier ECBO-Virus, Stamm LCR-4 der Universität Gießen, Institut für Virologie der Vet. Med. Fakultät) zugesetzt.The feasibility of the method according to the invention will be demonstrated by way of example. This example relates to the surfactant SF-R11, which results from the lavage of healthy, veterinarily released bovine lungs by washing out the alveoli with saline in the presence of organic solvents, e.g. As chloroform is produced. SF-R11 is a mixture of phospholipids (about 90% by weight), cholesterol (about 3Gew%), glycerides (about 4% by weight), fatty acids (about 0.3% by weight) and surfactant -associated proteins of the type B and C (about 1 wt .-%). In the illgemelnen there is no contamination of the lungs with cattle-specific viruses, but contamination is still not vt lig exclude. However, in order to be able to test the effectiveness of the method according to the invention, the crude surfactant obtained from lavage by centrifugation was in separate studies each an enveloped (here bovine herpesvirus type I, abbreviated BHV1) and an unbacked test virus (here ECBO virus, strain LCR-4 the University of Giessen, Institute of Virology of the Vet. Med. Faculty) added.

Diese Testviren sind repräsentativ für in Rinderbeständen vorkommende behüllte Viren und für die bei Rindern relativ selten vorkommenden unbehüllten Viren.These test viruses are representative of enveloped viruses found in cattle herds and of the relatively rare non-enveloped viruses found in cattle.

Rinderbestände können z.B. von bovinem respiratorischen-. Syncytialvirus (Paramyxovirus), von infektiöser boviner Rhinotracheitis (Herpesvirus), von Parainfluenza (Paramyxovirus), aber auch von boviner Leukämie (Retrovirus), Maul- und Klauenseuche (Picoma-Virus) oder Tollwut (Rhabdovirus) befallen sein. Zur Prüfung eines Surfactants auf Kontamination müßte auf jedes eventuell in Frage kommende Virus getestet werden. Da dies kaum möglich ist, wurden dem zu untersuchenden Material vor der Aufarbeitung exemplarisch ausgesuchte Testviren zugefügt und dieses Material nach der erfindungsgemäßen Inaktivierung wiederum auf die Virenaktivität hin untersuchtCattle stocks may e.g. of bovine respiratory. Syncytial virus (paramyxovirus), from infectious bovine rhinotracheitis (herpesvirus), from parainfluenza (paramyxovirus), but also from bovine leukemia (retrovirus), foot-and-mouth disease (picoma virus) or rabies (rhabdovirus). To test a surfactant for contamination, it would be necessary to test for any virus that may be present. Since this is hardly possible, exemplarily selected test viruses were added to the material to be investigated prior to work-up, and this material was again tested for viral activity after inactivation according to the invention

Als Testviren wurden As test viruses were

a) ein in Rinderbeständen vorkommendes behülltes DNS-Virus unda) an enveloped DNA virus found in bovine herds and

b) ein nicht behülltes RNS-Virus eingesetzt.b) an uncovered RNA virus is used.

As mentioned above, the DNA virus used was the BHV1 (or IBR-IPV) virus which has a lipoprotein envelope. Chloroform and ether-labile and of strictly bovine origin is widely distributed in calf populations. The diameter of the Virions is 150 to 180nm; it is not removable by sterile filtration. The RNA virus used was the above-mentioned ECBO virus, which is the official test strain of DVG (Deutsche Veterinary Society) was selected in the context of testing chemical disinfectants; Genus: Enterovirus, family: picornaviridae; single-stranded RNA virus, unfilled, cubic capsid, stable to chloroform, Diameter 24-30nm. The test viruses were obtained as culture supernatants with 10 ^s KIDso / ml (BHV-1) and 10 ⁶ ' ⁸ KID _w / ml, respectively. The filters were before use

autoklaviert (KIDe₀ bedeutet kultur-infektiöse Dosis an Viren, bei der 50% der Zellen mit Viren infiziert sind).autoclaved (KIDe ₀ means culture-infectious dose of virus in which 50% of the cells are infected with viruses).

A validation study (Scheme 2) was carried out in parallel to the manufacturing process with both test viruses separately. The Scheme of the manufacturing process, the addition of the test virus and the removal of the samples are shown in Scheme 1 on the basis of Work-up of crude surfactant from the lavage of bovine lungs recorded:

Schemel:Stool:

Als Positivkontrolle wurde Viruskulturüberstand 1 + 1 mit 9g/l Kochsalzlösung vermischt (Probe 1). Nach Filtration durch ein 0,22-m-Filter wurde die Probe 1 a gezogen. Diese Probe ersetzt das eigentlich zu prüfende kontaminierte Ausgangsmaterial, weil natives Surfactant nicht sterilfiltriert werden kann, da seine Teilchen größer als die Bakterien sind und damit das Filter verstopfen. Aus Lavage von Rinderlungen wird das Rohsurfactant durch Zentrifugation gewonnen. Das erhaltene feuchte Pellet enthält neben Surfactant Zelltrümmer und Bakterien. An dieser Stelle wurden aus dem Produktionsprozeß 23 ml feuchtes Surfactant-Pellett entnommen und in 23ml des virushaltigen Kulturüberstands suspendiert.As a positive control, virus culture supernatant 1 + 1 was mixed with 9 g / L saline (sample 1). After filtration through a 0.22-m filter, sample 1 a was drawn. This sample replaces the contaminated starting material that is actually to be tested, because native surfactant can not be sterilized by filtration because its particles are larger than the bacteria and thus clog the filter. From lavage of cattle lung the Rohsurfactant is obtained by centrifugation. The moist pellet obtained contains, besides surfactant, cell debris and bacteria. At this point, 23 ml of moist surfactant pellet were removed from the production process and suspended in 23 ml of the virus-containing culture supernatant.

Diese kontaminierte Surfactantaufschwemmung wurde nach Bligh und Dyer extrahiert. Hierzu wurden 50,6ml Chloroform und 101,2ml Methanol hinzugegeben und die entstehende homogene organisch-wäßrige Mischphase für 2 Stunden gekühlt gelagert, zweckmäßigerweise bei -10⁰C bis -2O⁰C. Die aufgetretene Proteinfällung wurde abzentrifugiert. Durch Zusatz von 46ml dg/l Kochsalzlösung und 50,6ml Chloroform wurde eine Phasentrennung herbeigeführt. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt und durch ein 0,22-m-Membranfilter sterilfiltriert (Probe 2). Die organische Phase wurde ebenfalls durch ein 0,22-m-Filter sterilfiltriert. Das Lösemittel wurde im Vakuum bei 10°C abdestilliert und das Lipid bei Raumtemperatur getrocknet. Pro 50mg trockenes Lipid wurden 0,95ml destilliertes Wasser zugesetzt. Durch ca. lOminütiges Schütteln erhielt man Schüttelliposomen mit einer Vesikelgröße von ca. 10OOnm (Probe 3). Ein Teil der Schüttelliposomen wurde für 4 Minuten mit Ultraschall von 20 Watt Leistung beschallt (Branson Sonifier, Mikrospitze). Hierbei entstanden Vesikel von 200ηm (Probe 4).This contaminated surfactant slurry was extracted according to Bligh and Dyer. For this purpose, 50.6 ml of chloroform and 101.2 ml of methanol were added and the resulting homogeneous organic-aqueous mixed phase for 2 hours cooled, expediently at -10 ⁰ C to -2O ⁰ C. The occurred protein precipitation was removed by centrifugation. By addition of 46 ml dg / l saline and 50.6 ml of chloroform, a phase separation was brought about. The aqueous phase was separated and sterile filtered through a 0.22 m membrane filter (Sample 2). The organic phase was also sterile filtered through a 0.22-m filter. The solvent was distilled off in vacuo at 10 ° C and the lipid was dried at room temperature. Per 50 mg of dry lipid, 0.95 ml of distilled water was added. About 10 minutes shaking gave shaking liposomes with a vesicle size of about 10OOnm (sample 3). Part of the shaking liposomes were sonicated for 4 minutes with ultrasound of 20 watts of power (Branson sonifier, microtip). This resulted in vesicles of 200ηm (sample 4).

Schema 2:Scheme 2:

In order to safeguard the virucidal principle found, the influence of individual process steps was examined in more detail. For this purpose, 4 ml of virus-containing culture supernatant (ECBO virus) were mixed with 4 ml of 9 g / l saline solution and sterile-filtered

(Probe 1).(Sample 1).

5ml Virussuspension (ECBO-Virus) wurden mit 1 ml Chloroform geschüttelt. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt und sterilfiltriert (Probe 2).5 ml of virus suspension (ECBO virus) were shaken with 1 ml of chloroform. The aqueous phase was separated and sterile filtered (Sample 2).

5 ml Virussuspension (ECBO-Virus) wurden mit 0,5ml Methanol vermischt und sterilfiltriert (Probe 3).5 ml of virus suspension (ECBO virus) were mixed with 0.5 ml of methanol and sterile filtered (sample 3).

5 ml Virussuspension (ECBO-Virus) wuiden mit 11 ml Methanol und 5,5ml Chloroform zu einer homogenen Phase vermischt. Durch Zugabe von 5ml 9g/l Kochsalzlösung und 5,5ml Chloroform wurde die Phasentrennung bewirkt. Die wäßrige Phase wurde sterilfiltriert (Probe 4).5 ml of virus suspension (ECBO virus) were mixed with 11 ml of methanol and 5.5 ml of chloroform to form a homogeneous phase. By adding 5 ml of 9 g / L saline and 5.5 ml of chloroform, the phase separation was effected. The aqueous phase was sterile filtered (Sample 4).

1 g SF-RI 1-Lipid wurde in einer Mischung aus 5ml Virussuspension (ECBO-Virus) mit 11 ml Methanol und 5,5ml Chloroform gelöst. Nach Zugabe von 5ml 9g/l Kochsalzlösung und 5,5ml Chloroform erfolgte die Phasentrennung. Die wäßrige Phase wurde abgetrennt und sterilfiltriert (Probe 5).1 g of SF-RI 1-lipid was dissolved in a mixture of 5 ml of virus suspension (ECBO virus) with 11 ml of methanol and 5.5 ml of chloroform. After addition of 5 ml of 9 g / l saline and 5.5 ml of chloroform, the phase separation was carried out. The aqueous phase was separated and sterile filtered (Sample 5).

Alle Proben wurden auf MDBK-Zellkulturen (Nadin und Darby, Bovine Kidney: ATCC CCL22) im Adsorptionsverfahren und per Inokulation in das Kulturmedium untersucht. Alle Proben außer 1 (1 a) wurden wegen zelltoxischer Eigenschaften erst nach mehreren Subpassagen auf BHV1- bzw. ECBO-Virus-spezifische Veränderungen untersucht.All samples were analyzed for MDBK cell cultures (Nadin and Darby, Bovine Kidney: ATCC CCL22) in the adsorption process and by inoculation into the culture medium. All samples except 1 (1 a) were tested for BHV1- or ECBO virus-specific changes only after several sub-passes because of cytotoxic properties.

Durch Vermischung des Surfactant-Rohmaterials im Verhältnis 1 + 1 mit Kulturüberstand (10* und 10⁶·⁸ KID₆₀ZmI) wurde eine hohe Kontamination des Ausgangsmaterials simuliert. Die Nachweisgrenze für die benutzten Testviren beträgt ca. 10KID₆₀ZmI. Nur in den Proben 1 und 1 a nach Schema 1 konnte das behüllte BHV-1-Virus bzw. das unbehüll'e FCBO-Virus nachgewiesen werden. In den Proben 3 und 4 (Schema 1), die jeweils Entnahme aus dem Produktionsprozeß zu verschiedenen Zeitpunkten simulieren, konnten die Testviren nicht nachgewiesen werden. Die Studien nach Schema 1 zeigen, daß bereits beim Extraktionsverfahren nach Bligh und Dyer die zugesetzten Testviren inaktiviert oder abgetrennt wurden. Sowohl in der wäßrigen Phase (Probe 2) als auch in der Trockenmasse aus der organischen Phase (Proben 3 und 4) konnten die Testviren nicht mehr nachgewiesen werden.By mixing the surfactant raw material in the ratio 1 + 1 with culture supernatant (10 * and 10 ⁶ x ⁸ KID ₆₀ ZmI) a high contamination of the starting material was simulated. The detection limit for the test viruses used is approx. 10KID ₆₀ ZmI. Only in samples 1 and 1a according to Scheme 1 was it possible to detect the enveloped BHV-1 virus or the unbacked FCBO virus. In Samples 3 and 4 (Scheme 1), which each simulate removal from the production process at different times, the test viruses could not be detected. The studies according to Scheme 1 show that already in the extraction method according to Bligh and Dyer the added test viruses were inactivated or separated. Both in the aqueous phase (sample 2) and in the dry matter from the organic phase (samples 3 and 4), the test viruses could no longer be detected.

Dieser Befund war für das behüllte und Chloroform-empfindliche BHV-1-Virus zu erwarten, er war jedoch für das unbehüllte ECBO-Virus nicht vorhersehbar.This finding was expected for the enveloped and chloroform-sensitive BHV-1 virus, but was unpredictable for the uncoated ECBO virus.

Zur näheren Eingrenzung und weiteren Absicherung des Virus-inaktivierenden Teilschritts wurden nach Schema 2 ECBO-Viren mit Chloroform, Methanol, Methanol-Chloroform-Kochsalzlösung, sowie mit Chloroform-Methanol-Kochsalzlösung-SF-R11 versetzt. In der Positivkontrolle und den Proben mit Chloroform oder Methanol (Proben 1 bis 3) konnten die cytopathogenen Effekte des ECBO-Virus nachgewiesen werden. Die Proben 4 und 5 zeigten hingegen keine virusspezifischen Effekte auf MDBK-Zellkulturen.To further delineate and further protect the virus-inactivating substep, chloroform, methanol, methanol-chloroform-saline, and chloroform-methanol-saline-SF-R11 were added according to Scheme 2 ECBO viruses. In the positive control and the samples with chloroform or methanol (Samples 1 to 3), the cytopathogenic effects of the ECBO virus could be detected. By contrast, samples 4 and 5 showed no virus-specific effects on MDBK cell cultures.

Dieses Ergebnis zeigt, daß die organischen Lösemittel Chloroform oder Methanol allein ECBO-Viren nicht inaktivieren und auch das Testergebnis nicht beeinträchtigen. Erst die Einwirkung von Chloroform und Methanol (hier in homogener organischwäßriger Mischphase) inaktivierte auch das nicht umhüllte Testvirus.This result shows that the organic solvents chloroform or methanol alone do not inactivate ECBO viruses and also do not affect the test result. Only the action of chloroform and methanol (here in a homogeneous organic-aqueous mixed phase) also inactivated the non-enveloped test virus.

Wie dieses Testmodell aufzeigt, eignet sich das erfindungsgemäße Verfahren ganz allgemein zur Abtötung bzw. Inaktivierung von Viren, insbesondere aber von nicht umhüllten Viren, in organischen Präparaten bzw. Präparationen.As this test model shows, the method according to the invention is quite generally suitable for killing or inactivating viruses, in particular, but not enveloped viruses, in organic preparations or preparations.

Claims

1. Verfahrer: for the production of virus-free natural products, which in particular uncovered viruses contained, characterized in that they are treated with a mixture of halogen-containing aliphatic hydrocarbons and alcohols up to 6 carbon atoms.

2. The method according to claim 1, characterized in that a mixture of chloroform and methanol and / or ethanol and / or propanol and / or butanol is used.

3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that a methanol-chloroform mixture is used.

4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that the mixture used is still added water.

5. The method according to claim 4, characterized in that a ternary phase of chloroform, methanol and water is used.

6. The method according to claim 4 and 5, characterized in that instead of water, a physiological KochseMösung is used.