DD244760A1

DD244760A1 - METHOD FOR PRODUCING AN EGRICE HYDROLYZATE

Info

Publication number: DD244760A1
Application number: DD28528885A
Authority: DD
Inventors: Karl-Heinz Kludas; Renate Kamieth; Baerbel Stache
Original assignee: Dessau Tornau Impfstoffwerk
Priority date: 1985-12-23
Filing date: 1985-12-23
Publication date: 1987-04-15

Abstract

Das Verfahren zur Herstellung eines Eiweisshydrolysates ist anwendbar in bakteriologischen Laboratorien und Impfstoffwerken, in denen Bakterien fuer diagnostische Zwecke oder zur Gewinnung spezifischer Immunogene gezuechtet werden. Bei diesem Verfahren wird durch die Vorspaltung mit Pankreas die anschliessende Hydrolysezeit wesentlich verkuerzt. Die Entfernung der Schwefelsaeure wird umgangen, indem ein Anteil Konzentrattrypton mit Salzsaeure und ein anderer gleicher Teil mit Kalilauge hydrolysiert wird. Nach der Hydrolyse erfolgt die Neutralisation durch Mischen beider Anteile. Bei hoher Caseinkonzentration kann das entstandene Kaliumchlorid im Caseinhydrolysat verbleiben, da der Anteil die uebliche Konzentration im Naehrboden nicht uebersteigt. Das entstandene Caseinhydrolysat ist von hohem Naehrwert, da alle Aminosaeuren in ihm enthalten sind.The method of producing a protein hydrolyzate is applicable in bacteriological laboratories and vaccine plants in which bacteria are grown for diagnostic purposes or for obtaining specific immunogens. In this method, the pre-cleavage with pancreas significantly shortens the subsequent hydrolysis time. The removal of the sulfuric acid is bypassed by hydrolyzing one portion of concentrate tryptone with hydrochloric acid and another equal portion of potassium hydroxide solution. After hydrolysis, neutralization is achieved by mixing both parts. At high casein concentration, the resulting potassium chloride can remain in the casein hydrolyzate, since the proportion does not exceed the usual concentration in the nutrient medium. The resulting casein hydrolyzate is of high nutritional value, since all amino acids are contained in it.

Description

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Eiweißhydrolysates, das in bakteriologischen Nährböden, in Verbindung mit anderen N-haltigen Komplexlösungen, als Aminosäurequelle dient. Die Erfindung ist anwendbar in bakteriologischen Laboratorien und Impfstoffwerken, in denen Bakterien für diagnostische Zwecke oder zur Gewinnung spezifischer Immunogene gezüchtet werden.The invention relates to a method for producing a protein hydrolyzate, which serves in bacteriological culture media, in conjunction with other N-containing complex solutions, as an amino acid source. The invention is applicable to bacteriological laboratories and vaccine plants in which bacteria are grown for diagnostic purposes or to obtain specific immunogens.

Characteristic of the known technical solutions

Zur Anreicherung der Nährmedien mit Aminosäuren werden Eiweißhydrolysate verwendet. Im Medium nach DE GRAAF et al. 1980 ist es zum Beispiel enthalten. RElSSBRODTetai. DD 159844 verwendeten durch schwefelsaure Druckhydrolyse aus Casein gewonnene Aminosäuregemische in Kombination mit anderen Eiweißkomplexen in bakteriologischen Nährmedien. Totalhydrolysate haben gegenüber enzymatischen Hydrolysaten den Nachteil, daß sie allein den Bakterien nicht ausreichend Bedingungen zur Vermehrung bieten. Säurehydrolysate enthalten kein Tryptophan, während basische Hydrolysate kein Arginin und keine Vitamine mehr enthalten. Außerdem liegen auf Grund der langen Einwirkungszeit alle Aminosäuren als DL-Verbindungen vor, die für Bakterien wenig geeignet sind. Durch die lange Einwirkungszeit von Basen oder Säuren auf Proteine zurtotalen Spaltung (bis 24 Stunden) steigen die Produktionskosten durch den hohen Energiebedarf stärker als bei enzymatischen Hydrolysen (REISSBRODT u. RISCHE, ZbI. Pharm. 123: 351-356 [1984]).To enrich the nutrient media with amino acids, protein hydrolysates are used. In the medium according to DE GRAAF et al. For example, in 1980 it is included. RElSSBRODTetai. DD 159844 used amino acid mixtures obtained from casein by sulfuric acid pressure hydrolysis in combination with other protein complexes in bacteriological nutrient media. Total hydrolyzates have the disadvantage over enzymatic hydrolysates that they alone do not provide enough conditions for the bacteria to multiply. Acid hydrolysates contain no tryptophan, while basic hydrolysates contain no arginine and no vitamins. In addition, due to the long exposure time, all amino acids are present as DL compounds that are not very suitable for bacteria. Due to the long exposure time of bases or acids to proteins for total cleavage (up to 24 hours), the production costs increase more than the enzymatic hydrolyses due to the high energy requirement (REISSBRODT and RISCHE, ZbI. Pharm. 123: 351-356 [1984]).

Object of the invention

Die Erfindung dient der Herstellung eines Totalhydrolysates mit geringen Produktionskosten unter Verwendung von Laugen und/oder Säuren zur Spaltung der Proteine mit weitgehender Erhaltung der natürlichen L-Verbindung.'The invention serves to produce a total hydrolyzate with low production costs using lyes and / or acids for cleaving the proteins with substantial preservation of the natural L compound.

Explanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung eines Eiweißhydrolysates mit geringem technischem Aufwand zu schaffen, das Hydrolysate mit hohem Nährwert liefert. Die so hergestellten Eiweißhydrolysate sollen die für die Bakterienernährung nötigen Substanzen in ausreichenden Mengen enthalten. Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß das Protein, vorzugsweise Casein, Gluten und/oder Keratin erst nach bekannten Verfahren mit den Enzymen der Pankreasdrüse oder anderen Proteasen gespalten wird und anschließend die Totalhydrolyse mit Säuren bzw. Laugen in den bekannten Konzentrationen erfolgt. Damit durch die Totalhydrolyse der Verlust an Aminosäuren möglichst klein gehalten wird, wird ein Teil mit Lauge und ein andererTeil mit Säure gespalten. Die Spaltung mit Säure erfolgt durch Salzsäure und mit Lauge durch Kalilauge. Nach der Hydrolyse werden beide Ansätze so gemischt, daß sie neutral reagieren. Durch Verwendung von Kalilauge zur Hydrolyse entsteht durch Neutralisation ein Kaliumsalz. Das Kaliumsalz, z. B. Kaliumchlorid braucht aus dem Hydrolysat nicht entfernt zu werden, da KCI ohnehin den Nährböden zugesetzt wird. Um den Gehalt an KCI im Verhältnis zum Eiweißhydrolysat gering zu halten, wird eine 30%ige Tryptonkonzentratlösung zur Hydrolyse verwendet.The invention has for its object to provide a method for producing a protein hydrolyzate with little technical effort that provides hydrolyzates with high nutritional value. The protein hydrolysates thus prepared should contain the necessary substances for the bacterial nutrition in sufficient quantities. According to the invention the object is achieved in that the protein, preferably casein, gluten and / or keratin is cleaved only by known methods with the enzymes of the pancreatic gland or other proteases and then the total hydrolysis with acids or alkalis in the known concentrations. In order to keep the loss of amino acids as small as possible by total hydrolysis, one part is cleaved with caustic and another part with acid. The cleavage with acid is carried out by hydrochloric acid and with caustic potash solution. After hydrolysis, both batches are mixed so that they react neutral. By using potassium hydroxide for hydrolysis, a potassium salt is formed by neutralization. The potassium salt, z. B. Potassium chloride does not need to be removed from the hydrolyzate, since KCI is anyway added to the nutrient media. In order to keep the content of KCI in relation to the protein hydrolyzate low, a 30% Tryptonkonzentratlösung for hydrolysis is used.

embodiment

1. Basische Hydrolyse1. Basic hydrolysis

Eiweißtryptonlösung mit300gTrockensubstanz/l —1000ml KOH — 200 g kProtein yardpton solution with 300g dry substance / l -1000ml KOH - 200g k

^asJ<OHjn_der_Eiweißtryptonlösung lösen und 60 Min. bei 110^cC erhitzen.^ ASJ solve <OHjn_der_Eiweißtryptonlösung and heat 60 min. at 110 ^c C.

2. Saure Hydrolyse"2. Acid hydrolysis "

Eiweißtryptonlösung mit300g Trockensubstanz/l —1 000 mlProtein tryptone solution with 300 g dry substance / l - 1000 ml

Salzsäure, konzentriert 1000 mlHydrochloric acid, concentrated 1000 ml

Beide Lösungen gut mischen und 60 Min. bei 11O⁰C erhitzen.Mix both solutions well and heat at 11O ⁰ C for 60 min.

3. Neutralisation der Hydrolysate3. Neutralization of the hydrolysates

Die Hydrolysate der sauren und basischen Hydrolyse werden im Verhältnis 1:1 zur Neutralisation gemischt. Das neutralisierteThe hydrolysates of the acidic and basic hydrolysis are mixed in a ratio of 1: 1 for neutralization. That neutralized

Eiweißhydrolysat enthält pro g *Protein hydrolyzate contains per g *

662 mg freie Aminosäuren662 mg free amino acids

810 mg Gesamtaminosäuren810 mg of total amino acids

190 mg KCI und damit einen Abbaugrad von 81 %.190 mg KCl and thus a degree of degradation of 81%.

Claims

Invention claim:

1. A process for the preparation of a protein hydrolyzate, characterized in that one splits the protein by known methods of enzymatic hydrolysis, this partial hydrolyzate separately with alkali and acid cleaves and combined after hydrolysis, both hydrolysates for neutralization.
2. Method according to item 1, characterized in that casein, gluten and / or keratin are enzymatically cleaved.

3. The method according to item 1, characterized in that potassium hydroxide solution is used as the alkali.

4. The method according to item 1, characterized in that hydrochloric acid is used as the acid.