CZ847488A3 - Process for preparing cyclosporin a - Google Patents

Description

Oblast techniky — -— _

Vynález se týká způsobu výroby cyklosporinu A v orthorhombické (P2₁2₁2₁) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 A, rozměr b je roven 22,9 A, rozměr c je roven 28,4 A _a objem na asymetrickou «--j jednotku je roven 2027 A ·

Sloučenina, která je zde označována jako cyklosporin A, je také známa pod názvem ciclosporin.

Dosavadní stav techniky

Cyklosporin A je známý metabolit z hub, který má široké farmaceutické použití. Jde o cyklický poly-N-methylovaný endekapeptid vzorce

-MeBmt-aAbu-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal 1 234567 89 10 11 ve kterém

-MeBmt- znamená N-methyl-(4R)-4-but-2E-en-l-yl-4-methyl-(L)threonylový zbytek.

Cyklosporin A a způsoby jeho výroby již byly popsány například v US patentovém spisu č. 4 117 118. Primární oblast klinických výzkumu této látky byla při potlačování imunolologické odpovědi organismu, zvláště v případech, kdy bylo zapotřebí předběžně ošetřit příjemce transplantovaných orgánů, například srdce, plic, jak srdce, tak plic, jater, ledvin, slinivky břišní, kostní dřeně, kůže a rohovky, zvláště v případě transplantace allogenních orgánů. V této oblasti bylo možno dosáhnout při použití svrchu uvedené látky značných úspěchů, takže cyklosporin A (Ciclosporin) je nyní široce klinicky užíván a je běžně dodáván pod

R R obchodní značkou Sandimmun nebo Sandimmune, , například ve formě koncentrátu pro použití v infuzích, ve formě roztoku* pro perorální podání nebo ve formě roz- ^v toku, uloženého do želatinových kapslí, poslední dvě lékové formy byly popsány v US patentovém spisu č .

388 307.

Současně byly vyvíjeny snahy zjistit další možnosti použiti uvedené látky u dalších onemocrění autoimunologická povahy a u zánětlivých stavů,, zejména těch, při jejichž původu hraje určitou úlohu autoimunologická složka, jako jsou záněty kloubů, například rheumatidní arthritis, arthritis chronica Progressive a erthritis deformans, další rheumatidní onemocnění, v těchto případech byla podána celá řada zpráv o výsledcích, které byly získány in vitro, na zvířeti i při klinických pokusech. Specifická autoimuňologická onemocnění, při nichž je vhodná léčba cyklosporinem A zahrnují například autoimunologická heaatologické poruchy jako hemolytickou aneraii, spastickou anemii, čistou erythrocytární anemii a idioatickou thrombocytopenii, systemický lupus erythvematosus, poíychondritis, scleiOderma, Wegenerová granulomatosis, dermatomyositis, ..bronická aktivní hepatitis myasthenia gravis, lupenka, Steven-Jonsonův syndrom, idiopathická sprue, sutoime. 'nlogická v-eštiivl orveccnění tlustého střeva včetně například ulcerativní colitis a Crohnovy choroby, pemphigus, endokrinní ophthalmopathie, Gravesova nemoc, sarcoidosis, roztroušená skleróza, primární biliární cirhosa, primární diabetes mladistvých (diabetes mellitus typ I), Bechcetova nemoc, uveitis anterior a posterior, jarní záněty spojivek, keratoconjuctivits sicca, intersticiální fibrosa plic, psoriatická arthritis a glomerulonephritis (s nebo bez neurotického synchromu, například včetně idiopathického neurotického syndromu nebo nefropathie s minimálními změnami).

Další obory výzkumů zahrnovaly potenciální možnost podání uvedené látky proti parasiřům, zejména proti prvokům, výzkumy se týkaly zejména použití při malárii, coccidiomykosa a schistosomiáza, jakož i pokusů zvrátit odolnost nádorů proti čhemotherapeutickým látkám, například cytostatikům, byla zkoumána také možnost využití této látky k podpoře růstu vlasů, například při léčbě alopecia.

V pevném stavu existuje cyklosporin A jako amorfní nebo jako krystalická forma. Pokud jde o krystalickou formu, může jít o tetragonální nebo o orthorombickou modifikaci.

f ..

Tetragonální modifikace (P4^), která se rovněž uvádí jako Cy-A/X-I je popsána spolu se způsobem svá výroby například v rakouském patento-'vém spisu č. 353 961. Tato modifikace má mřížku a - b = 13,8 S, c = 41,2 S, objem na asymetrickou jednotku je 1974 teplota tání je přibližně 140 až 150 °C, tato modifikace obsahuje přibližně dvě molekuly vody v jedné molekule cyklosporinu A.

První orthrnombickou modifikaci. (P2^2^2^) je možno získat překrystalováním z diisopropyletheru, jak je uvedeno v publikaci Total synthesis - change in molecular structure - biological effect: Ciclosporin as exataple, R. Wenger v Sandorama 1984/III. Tato zvláštní modifikace zahrnuje solvát s diisopropyletherem v poměru přibližně 1 : 2 s krystalovou mřížkou a = 12,R $, b = 22,9 δ, c = 28,4 & objem na asymetrickou jednotku = 2027 teplota tání je přibližně 150 °C. Orthorhombické krystaly solvátu je možno získat překrystalovÁním z přesycených roztoků v příslušném prostředí v dalším časovém období. Orthorhombické modifikace solvátu cyklosporinu A s diisopropyletherem, připravený Wengerem byly získány přidáním koncentrovaného r-r-'-h-í.-:u cyklosporinu h v· methylenchloridu, v němž je látka snadno rozpustná, c-i· k diisopropyletheru, v němž je sloučenina poměrně méně rozpustná s následným.odpařením methylenchloridu. Krystalizace ze zbývajícího diisopropyletheru pak může probíhat po dobu přibližně 7 dnů při teplotě místnosti. Orthorhombické krystalické formy s obsahem uvedených sulfátů se obvykle uvádějí pod označením CY-A/X-II.

Nyní byly identifikovány další orthorhombické modifikace (^2^2^2^), které jsou charakterizovány tím, že v podstatě téměř chybí složka jakéhokoliv rozpouštědla, to znamená, že tyto modifikace sestávají v podstatě ňebo pouze z volného cyklo- sporinu A.

Rozměry krystalové mřížky pro modifikace orthorhombického typu, které jsou prosté rozpouštědla a nemají formu sólvátů jsou a = 12,7 b = 15,7 X, c κ 36,3 objem na asymetrickou jednotku je 1804 R Teplota tání je přibližné 180 až 190 °C až 195 °C, například závisí také na stupni čistoty a na zdroji, z něhož byly krystalky získány, jak bude dále uvedeno v příkladech 1 a 2, v nichž jsou popsány specifické postupy, umožňující získat tuto modifikaci. Cyklosporin A bez rozpouštědla v nesolvatované x'ormě i .

orthorhombických krystalů se také uvádí pod^ označením CY-A/X-III. Další charakteristiky, například difrakce v rtg záření-pro formu CY-A/X-III jsou dále uvedeny v tabulce III a na obr. IV spolu s odpovídajícími údaji pro svrchu uvedené formy CY-A/X-I a CY-A/X-II.

Přes podstatný pokrok, kterého bylo možno dosáhnout při použití cyklosporinu A a přes velké využití v lékařství, zejména při transplantaci orgánů, není využití uvedené látky ještě bez problémů. Potíže se vyskytují zvláště při výrobě galenických forem, které by dovolovaly pohodlné a plně uspokojivé podávání v případě některých specifických onemccnění nebo stavů, u nichž se cyklosporin A prokázal jako účinné léčivo.

Vzniklé obtíže jsou způsobeny částečně fyzikálními vlastnostmi uvedené látky, například poměrně omezená rozpustností nebo kompatibilitou s běžně užívanými farmaceutickými nosiči nebo prostředími. Tyto obtíže jsou spojeny také s povahou některých chorobných stavů, u nichž je cyklosporin A prvním a hlavním léčebný>a prostředkem, u nichž dochází k nežádoucím vedlejší..; účinkům při perorálnim podání. Například při léčbě lupenky by bylo nejvýhod nější podávat účinnou látku perorálně. Lupénka je široce rozšířené onemocnění, které nepříznivě ovlivňuv \

je i psychický stav nemocného, přičemž v současné době dosud neexistuje obecně uznávaná účinná léčba. »

Bylo by tedy žádoucí podobnou léčbu navrhnout. Je zřejmé, že cyklosporin A by mohl splnit tyto požadavky, avšak prozatím není možno zajistit účinné perorální podávání v tomto případě. Podobné poměry existují například při léčbě některých očních onemocnění, jako je uveitis posterior a keratoconjunctivitis sicca.

Pro podávání cyklosporinu A byly až dosud navrženy různé systémy včetně galenických forem pro místní, kožní nebo oční podání, a to zejména pro použití v očním lékařství, při léčbě lupenky nebo jiných dermakologických onemocnění a stavů, jako je například atopická dermatitís a alopecia a pro léčbu uveitis. Při použití těchto systémů však až dosud nebylo dosaženo žádoucího zlepšení, nebo nebylo jejich použití plně uspokojivé.

Ve zprávách o pokusech léčit lupenku podáním známých perorálních roztoků přímo povrchově na psbríatické afekce se uvádí, že nebylo dosaženo žádného úspěchu nebo bylo dosaženo pouze minimálního úspěchu a v případě atopické dermatitidy bylo

použití silně omezeno. Obdobný stav je možpo popsat také v případě očního použití, kde bylo užití této látky pokládáno za žádnucí při prevenci například odmítnutí transplantátu rohovky nebo při léčbě některých onemocnění předního očního segmentu, avšak prozatím nebyly podány zprávy o žádném prostředku pro toto místní použití, který by umožňoval snadnou, bezpečnou nebo účinnou léčbu uvedených onemocnění nebo stavů, pokud zasahují hlouběji do oka, například v případě uveitis včetně uveitis posterior.

Srovnatelné obtíže se vyskytly také pří vývoji dalších systémů pro podání uvedené účinné látky, například v případě nitrokloubních injekcí pro místní léčbu arthritických onemocnění, například tak, jak byly uvedeny svrchu nebo v případě, že účinná látka měla být podávána přímo do chorobných ložisek, jako je tomu v případě těžkých poškození kůže lupenkou, nebo i v případě různých systémů pro perorální podání, například těch, u nichž mělo být dosaženo modifikované biologické dostupnosti nebo modifikovaného uvolňování účinné látky.

.Pokusy zpracovat cyklosporin A na lékovou formu byly až dosud prováchuiy při využiti uvedené sloučeniny v roztoku, méně často ^ři použití amorfní formy Cy-A/X-I, krystalické formy byly identifikovány převážně například pro účely registrace i

účinné látky. Přes velké úsilí, které bylo vynaloženo na hledání nových nebo zlepšených alternativ, byly až dosud podávány v případě perorálních roztoků a infuzních koncentrátů pouze zprávy o široce užívaných systémech.

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že využití orthohrombické krystalické formy, například formy Cy-A/X-ΙΪ a zejména Cy-A/X-III poskytuje zvláštní výhodu při přípravě galenických lékových forem různého typu s obsahem cyklosporinu A.

Zvláště bylo zjištěno, že uvedené krystalické modifikace je možno použít k přípravě tr galenických lékových forem, které obsahují cyklosporin A ve stálé, v jemně částicové formě a/nebo mají zvýšenou stálost nebo zvláštní vlastnosti při uvolňování účinné látky. Tímto zjištěním se otevírá cesta pro výrobu nových a zlepšených systémů pro podávání této účinné látky, například s prodlouženým nebo zpožděným uvolňováním a/nebo s vlastnostmi, které jsou vhodné pro léčbu cneraocnění nebo stavů, které až dosud nebylo tímto způsobem možno léčit nebo pro něž je léčba běžnými prostředky s obsahem cyklosporinu

A méně vhodná. Bylo zvláště prokázáno, že při použití uvedených krystalických modifikací je možno získat

V \

galenické formy, vhodné pro místní nebo dermální podání nebo pro místní podání v očním lékařství k léčbě onemocnění kůže nebo oka, například tak, jak byly tyto choroby svrchu uvedeny, zejména jde o léčbu lupenky, atopické dermatitidy, kontaktní dermatitidy, oční příznaky Behchetovy nemoci, uveitidy a keratoconjuctivity sieca. Použití krystalických modifikací rovněž umožňuje přípravu injekčních forem se zpožděním nebo prodloužením uvolňování, toto použití je zvláště vhodné například při léčbě onemocnění nebo stavů, u nichž by časté podávání snižovalo využitelnost lékové formy, například při léčbě kloubních zánětů nebo jiných kloubních onemocnění, při nichž je zapotřebí vstřikovat léčiva přímo do kloubu nebo při léčbě lupenky a podobných onemocnění kůže, při nichž se účinná látka vstřikuje přímo do poškozených oblastí kůže.

Pro všechna tato použití bylo prokázáno, že orthorhombické krystalické formy, zejména forma CY-A/X-III jsou daleko vhodnější než další dostupné formy, zejména amorfní forma nebo forma CY-A/X-1, například zejména pokud jde o fyzik·.· •.ně-chemické vlastnosti, zejména stálost, rychlost a

(. ...

průběh uvolňování z krystalické mřížky a možnost zpracování na galenické lékové formy. Forma CY-A/X-III je nová a výhodná orthorhombická krystalická forma pro léčebné použití.

Způsobem podle vynálezu tedy možno získat _v

A CY-A/X-III, tj. cyklosporin A v nesolvatované orthorhombickě krystalické formě, zvláště

A³ CY-A/X-III s krystalickou mřížkou a dalšími svrchu uvedenými fyzikálními vlastnosti a/nebo .

A CY-A/X-III s difrakcnimi vlastnostmi v rtg-záření tak, že odpovídají vlastnostem, uvedeným v tabulce III nebo na výkrese IV.

Vynález se rovněž týká

B způsobu výroby formy CY-A/X-III, který spočívá v tom, že se nechá krystalizovat cyklosporin A z prostředí, které formu CY-A/X-III obsahuje s následnou izolací uvedené formy.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby cyklosporinu A v orthorhombické (P2₁2₁2₁) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 A , rozměr * O b je roven 22,9 Λ, rozměr c je roven 28,4 A a objem na asymetrickou jednotku je roven 2027 Λ , který spočívá v tom, že se cyklosporin A rozpustí v rozpouštécím prostředí, tvořeném polymerním etherem s molekulovou hmotností alespoň 200, za teploty, alespoň 40 C na roztok obsahující od 5 do 60 % hmotnostních cyklosporinu A, vztaženo na celkovou hmotnost roztoku a cyklosporin A se krystaluje z tohoto rozpouštědla za vzniku orthorhombické krystalické formy

12a vymezené výše.

Při výhodném provedení tohoto vynálezu rozpouštěcí prostředí obsahuje polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.

Při zvláště výhodném výhodném provedení rozpouštěcí prostředí obsahuje glycerolpolyethylenglykolester, ester polyoxyethylensorbitanu, polyoxyethylenester nebo produkt trans-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpolyolů.

Dále se uvádí podrobnější popis vynálezu v širších souvislostech.

Prostředím, vhodným pro použití při provádění způsobu podle vynálezu, zvláště prostředím, vhodným k rozpuštění cyklosporinu A je zejména prostředí, které obsahuje rozpouštědla s vyšší molekulovou hmotností, například s molekulovou hmotností

vyšší než 200. Zvláště vhodným prostředím je prostředí s obsahem vysokomolekulérních etherů, zvláště polymerních etherů, například polyalkyletherů, jako polyethylenglykolů a polypropylenglykolů. Příkladem polymerních etherů, kterých je možno použít, jsou polyethylenglykol a polypropylenglykol, například s molekulovou hmotností vyšší než 200. Estery glycerolu a polyethylenglykolu, například glycorolpolyethylenglykolricinoleáty a glyrolpolyethylenglykoloxystearáty, tak, jak se dodávají například pod obchodním názvem Cremophor EL” a Cremophor RH”, tyto látky byly popsány v publikaci Fiedler, Lexikon der Hilfstoffe”,

2. vydání, sv. 1, str. 257 a 258, dále je možno použít estery polyoxyethylensorbitanu, které se dodávají například pod obchodním názvem Tween (Fiedler, tamtéž, sv. 2, str. 972 - 975), dále estery polyoxyethylenu, například polyoxyethylenu 3 kyselinou stearovn , dodávané například pod obchodním názvem Myrj (Fiedler, sv. 2, str. 636) a produkty trans-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpolyolů, včetně transesterifiksčních produktů kukuřič ného oleje, jádrového oleje, mandlového oleje, podzomnicového oleje, olivového oleje, palmového oleje nebo směsi těchto olejů s polyethylenglykoly, zejména

- 14 s polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 200 až 800, které jsou dodávány například pod obchodním názvem Labráfil (Fiedler, str. 539), Zvláště vhodná jsaa prostředí, která obsahují polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 200 až 600, s výhodou 300 aŽ 400.

Prostředí, které obsahuje formu CY-A/X-III může obsahovat jednu nebo větší počet složek i navíc ke svrchu uvedeným složkám, například je možno použít také alkoholy s nízkou molekulovou hmotností a/nebo vody jako prostředí, které modifikuje vztah mezi rozpouštědly a účinnou látkou a napomáhá krystalizací. Zvláště vhodné prostředí pro použiti jako nosné prostředí pro formu CY-A/X-III je prostředí, které obsahuje 0,5 objemových dílů ethanolu, 8,0 objemových dílů polyethylenglykolu (300) a 1,0 objemového dílu vody.

Způsob podle vynálezu spočívá v tom, že se nejprve rozpustí cyklosporin A například v amorfní nebo tetragonální formě ve zvoleném prostředí při vyšší teplotě. Teplota při rozpouštění bude záviset na s-voleném prostředí, avšak obvykle bude vyšší než 77. zvláště vyšší než °C. V případě prostředí na bázi polyethylenglykolu se bude teplota

C.._:

- 15 rozpouštění pohybovat obvykle nad 70 °C, například v rozmezí 75 až 130 °C. Získaný roztok bude obsahovat více než 5 s výhodou více než 10 například 40 \ až 60 %, s výhodou 20 % hmotnostních cyklosporinu A, vztaženo na hmotnost celého roztoku. Pak se zahájí krystalizace cyklosporinu A za současného chlazení, obvykle po poměrně delší období, například. 10 až 35 minut nebo více v závislosti na požadovaném růstu krystalů.

V případě potřeby je možno zahájit krystalizaci například působením ultrazvuku nebo použitím očkovacího materiálu. V případě, že se použité prostředí skládá z ethanolu, polyethylenglykolu a vody, tak, jak bylo svrchu popsáno, bylo zjištěno, že tvorbu krystalů je možno snadno zahájit v teplotním rozmezí 60 až 90, například 65 až 85 °C působením ultrazvuku při přibližně^20 000 cyklů/sek. Jak bude dále uvedeno v příkladu 2, je možno kontinuálním působením ultrazvuku v průběhu krystalizace získat aikro krystalky s velmi malou a poměrně velmi stálou velikostí.

Rychlost růstu krystalů a jejich řejaě záviset na zvoleném ore.? iředí při nichž krystalizace probíhá, narozměr bude samcz a na podmínkách, příklad na tom, zda se použije nebo nepoužije ultrazvuku a s jako frekvencí. Při použití pro přípravu galenických forem, tak, jak bude dále popsáno, se užívá výsledná forma CY-A/X-III s výhodou ve formě velmi jemných částic, například se středním průměrem nižší než 200/Um, například 0,5 sž 200/Um. V případě, že původně získané krystalky mají větší průměr, je možno získat materiál s požadovanou velikostí částic běžnými postupy, například mletím, drcením, práškováním, mikronizací nebo jinou fragmentací na požadovaný rozměr. Takto získané prostředky s obsahem menších částic mohou být vhodné pro některé účely, například v lékových formách pro místní podání pro použití na kůži, avšak v mnoha případech není mletí, drcení nebo podobné zpracování výhodné. Nevýhoda spočívá v tom, že výsledný materiál má poměrně široké rozmezí distri buče velikosti částic a částice jsou poměrně ostré v důsledku rozdrcení krystalků. Mimoto toto drcení většinou rozlišuje fyzikální vlastnosti přírodního povrchu krystalů a mimoto je nákladné při zachování sterilních podmínek, například při výrobě galenických lékových forem, které jsou určeny pro nitroklcubní podání. Ze vr chu uvedených cv· vů ss obvykle Cvk přednost provádění způsobu podle vynálezu tak, aby byly získány krystalky, například mikrokrystalky, které již mají požadované konečné rozměry částic. Například při použití prostředků pro nitrokloubní ' nebo parenterální podání je výhodné použít formu CY-A/X-III v nerozdrceném mikrokrystalickém stavu, tj. mikrokrystalky, které nebyly podrobeny drcení, mletí, mikronizaci ani žádnému dalšímu postupu pro zmenšení částic.

Aby bylo možno získat mikrokrystalky formy CY-A/X-III, které je možno použít přímo v nerozdrceném stavu svrchu uvedeným způsobem, provádí se způsob podle vynálezu s výhodou za míchání, například v rozmezí 200 až 300 až například 700 otáček za minutu v průběhu krystalizace a zvláště za působení ultrazvuku, například'v rozmezí 10 000 až 30 000 cyklů/sek., obvykle 20 000 cyklů/sek.

Změnami prostředí pro tvorbu formy CY-A/X-III a úpravou rychlostí chlazení a rychlosti míchání v průběhu překrystalování známým způsobem a tak, jak bude dále uvedeno v jednotlivých příkladech je možno získat mikrokrystalickou formu CY-A/X-III s různým středním průměrem částic, například ve svrchu uvedeném rozmezí nebo tak, jak bude dále uvedeno v souvislosti s různými lékovými formami.

Jakřjiž bylo uvedeno, je obvykle zapotřebí provádět krystalizaci způsobem podle vynálezu za sterilních podmínek. Čištění takto získané formy CY-A/X-III je možno provádět běžným způsobem, například proplachování směsí polyethylenglykolu (300) a vody, například v hmotnostním poměru 3-4 : 1 s následným promytím teplou vodou, jak bude dále po drobněji uvedeno v příkladech. Takto získaná forma CY-A/X-III bude obvykle pro sta ne00 v pocistatě prose cyklosporinu A v jakékoliv jiné formě, s výhodou v čisté nebo v podstatě čisté formě. Při proplachování svrchu uvedeným způsobem se současně brání tvorbě amorfního cyklosporinu A.

Způsobem podle vynálezu je tedy možno získat svrchu uvedené formy cyklosporinu A a mimoto ještě následující forma:

2 A CY-A/X-III podle svrchu uvedených bodů A až A , tento materiál je prostý nebo v podstatě prostý jakékoliv jiné formy, například amorfní formy, fo my CY-A/X-I nebo CY-A/X-II,

3

A CY-A/X-III podle svrchu uvedených bodů A až A'^J v čisté nebo v podstatě čisté formě,

A^ CY-A/X-III podle svrchu uvedených bodů a až Α^/γ například se ve formě jemných částic, svrchu uve

- 19 děnými rozměry nebo tak, jak budou dále_v uvedeny například v souvislosti s výrobou galenických forem s obsahem CY-A/X-III,

A^ CY-A/X-III podle svrchu uvedených bodů A až A³, sestávající převážně nebo úplně nebo v podstatě úplně z nerozdrceného krystalického materiálu, například CY-A/X-III podle bodu A , v němž jsou částice tvořeny převážně, úplně nebo v podstatě úplně z nerozdrcených mikroxrystalků a

6

A' CY-A/X-III podle svrchu uvedených bodů A až A ve sterilním nebo v podstatě sterilním stavu, například vhodném pro farmaceutické použití, zvláště vhodné pro parenterální použití, například pro injekční, například nitrokloubní podání.

Takto usiíar.e mikrokrystalky je možno zpracovat na

C farmaceutický prostředek, který obsahuje

a) cyklosporin A v orthoxúiombické krystalické formě jako účinnou složku, spolu s

b) ředidlem nebo nosičem, přijatelným z farmaceutického hlediska.

Cyklosporin A může být ve fsrraacantickém pros oi’ thorhombi cké ředku obsažen v jakékoliv vhodné krystalické formě, například ve fo.

CY-A/X-III nebo ve formě CY-A/X-II. Použiti formy CY-A/X-II je však obecně méně výhodné vzhledem k fyzikálně-chemickým vlastnostem této formy, které je méně vhodná pro toto použití jak z hlediska zpracovatelnosti na farmaceutické produkty, tak z hlediska snášenlivosti. Nejvýhodnější formou je forma

CY-A/X-III, například podle kteréhokoliv z bodů A 7 až A , tak, jak byly svrchu uvedeny.

Přestože je cyklosporin A ve farmaceutickém prostředku přítomen v pevné (krystalické) formě, může mít farmaceutický prostředek sám o sobě jakoukoliv příslušnou formu. Může tedy jít o pevné formy, například kapsle, tablety, dražé, prášky a granuláty, polotuhé formy, jsko mazání, gely, krémy a pasty a o kapalné formy, například obsahující úěinnou látku ve formě jemných částic, například mikro nizovaných částic nebo mikročástic ve formě suspenze nebo disperze v kapalném farmaceutickém ředidle nebo nosiči, v němž může být účinná látka udržena ve svolené krystalické formě.

Farmaceutické prostředky s hom eyklosporinu A ve svrchu uvedené formě zři?, systémy, které obsahují účinnou látku v jediné obsanu j í fázi, například krémy, gely, mazání a podobně nebp jednoduché kapsle nebo ampule, například z tvrdé nebo

- \ měkké želatiny, nebo ampule pro uchovávání injekčních ^x roztoků nebo formy, které obsahují účinnou látku ve větším počtu fází. Jde tedy jak o farmaceutické prostředky s obsahem účinné látky v jedné fázi spolu s jednou nebo větším počtem fází, které účinnou látku neobsahují, jako jsou povlaky, nosiče, fáze, zajištující zpožděné uvolňování nebo fáze obrubující jinou účinnou látku nebo pomocné materiály. Může tedy například jít o povlékané tablety, jejichž jádrem je cyklosporin A v orthorhombické krystalické formě, jádro je obklopeno například povlakem bez účinné látky a podobně, může také jít o povlečené tablety, které mohou obsahovat účinnou látku v jádru nebo povlaku, dále může jít o granuláty, které obsahují první fázi granulátu, tvořenou účinnou látkou v orthorhombické krystalické formě a druhou fázi granulátu, která účinnou látku neobsahuje, může také jít o kapsle, rozdělené na dva nebo větší počet prostorů, například vnitřními stěnami, přičemž jeden z těchto prostorů obsahuje účinnou látku v orthorhombické formě a další prostory účinnou látku neobsahují. Další v /bifihace jsou zřejmé každému odborníkovi.

Cyklosporin A je v prostředcích s obsahem této účinné látky přítomen převážné nebo s výhodou výlučně nebo alespoň v podstatě výlučně ve formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III.

Farmaceutické prostředky obvykle obsahují alespoň jednu fázi nebo oddíl s obsahem cyklosporin A v orthorhombické krystalické formě, například ve formě CY-A/X-III, přičemž krystalická forma je v této fázi nebo v tomto oddílu rovnoměrně rozptýlena. Těmito systémy mohou být například homogenní krémy, mazání, gely a podobně a také kapalné systémy, v nichž je krystalický cyklosporin A homogenně rozptýlen nebo může být snadno homogenně rozptýlen, například ručním mícháním.

Tyto farmaceutické prostředky zahrnují například formy, vhodné pro místní podání, například na kůži. nebo do oka, nebo pro parenterální podání, například ve formě 'infuze nebo injekcí včetně podkožních nebo nitrosvalových injekcí, zejména však nitrokloubních injekcí a injekcí přímo do chorobného ložiska, zahrnuty jsou také enterální formy, například čípky, pesary a perorální formy. Tyto formy jsou však obvykle méně výhodné,

- 23 Cyklosporin A nacházející se ve výhodné formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III je ve farmaceutických prostředcích obsažen ve formě jemných částic, například v mikronisované formě, ve formě mikročástic nebo ve formě nerozdrcených malých mikrokrystalků tak, jak bylo popsáno svrchu. Příslušná velikost částic bude záviset na jejich povaze, na použití a na způsobu podání. Obvykle se však střední průměr cnsuxc bude pohybovat v rozmezí 0,5 až 200^um. Speciální rozmezí, týkající se například forem pro perorální, místní nebo injekční podání budou dále uvedena.

Prostředky pro místní podání, například pro podání ne kůži nebo do oka například při léčbě lupenky nebo atopických dermatóz nebo očních onemocnění, při nichž je nutno dosáhnout potlačení imunologické odpovědi, jako jsou uveitís, conjuctivitis, včetně keratoconjuctivitis sicca nebo vernalis nebo rohovkové transplantáty,

Gely, krémy, mazání a jiné prostředky pro místní nebo kožní podání je i/osno připravit známým způsobem a také běžným způsoebm podávat t

Je například možno postupovat tak, že se smísí cyklosporin A ve formě orthorhombických krystalů s příslušným základem, například gelem s obsahem vody, jako gelem na bázi etherů celulózy ve vodě za současného přidání smáčedel, zahuštovadel a podobně včetně například aerosilů.

Cyklosporin A je v těchto lékových formách obvykle přítomen ve formě jemných částic, například se středním průměrem 0,5 - 200/Um. Výhodné rozmezí středního průměru částic je nižší než 60 až 80, s výhodou nižší než 40, zejména nižší než 30 a nejvýhodněji nižší než 20/Um. S výhodou ja rozmezí středního průměru částic úzké a distribuce průměru částic co nejužší. S výhodou mají všechny částice střední průměr nižší než 60 - 80/Umx

Prostředky pro místní podání do oka mohou sestávat například ze suspenze nebo disperze, zahuštěné vhodným způsobem, například do formy viskózních očních kapek, krémů nebo gelů pro oční podání. V tomto případě má střední průměr částic krys talické účinné látky být nižší než 25/Ura. Střední pro měr částic .v případě očních kapek tedy může být přibližně 0,1, s výhodou 0,5 až přibližně 20, s výhodou až 10/Ura.

- 25 Obsah hydrofilních a lipofilních složek nosného systému pro použití při podání na kůži nebo do oka se může měnit například v závislosti na místě podání, zejména na oblasti kůže, na níž má být prostředek nanesen.

Prostředky pro místní, zejména kožní podání obsahují obvykle nosné prostředí, v němž je účinná složka jen málo rozpustná. Rozpustnost účinné látky, například ve formě CY-A/X-j.k.1 v těchto prostředcích je nižší než 10 s výhodou nižší než 1 % hmotnostní. Ještě výhodněji je rozpustnost nižší než 0,1 a nejvýhodněji nižší než 0,001 % hmotnostních.

Vhodná nosná prostředí zahrnují hydrofilní, s vodou mísitelné nosiče a také nosiče hydx-Ofobní povahy.

Hydrořilní, s vodou mísitelné složky nosiče jsou s výhodou poměrně málo těkavé. Příkladem vhodných složek tohoto typu mohou být například kapalné polyalkylenglykoly, propylenglykol, glycerol a ethylenglykol. Vhodnými polyalkylonglykoly jsou například kapalné polyethylenglykoly, například se střední molekulovou nmotností výhodou 250 až 450 a zvláště 300.

Prostředek s obsahem cyklosporinu A, například pro místní podání může tedy obsahovat následující složky:

a) Cyklosporin A v orthorhombické, s výhodou nesolvatisované krystalické formě, například ve formě CY-A/X-III, například tak, jak byl defi7 nován svrchu v odstavcích A až A ,

b) hydrofilní, s vodou mísitelný nosič, například některý ze svrchu popsaných nosičů a

c) vodu, vhodnou pro farmaceutické použití.

Množství složky a) se může pohybovat v rozmezí 0,1 až 30, s výhodou 0,5 nebo 1,0 až 20 %, například 1,0, 2,0, 5,0 nebo 10,0 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Složky b) a

c) jsou s výhodou obsaženy v poměru 1 : 0 až 1 : 20 hmotnostních dílů. Tyto složky jsou s výhodou přítomny v poměru 1 : 0,5 sž 1;5, například 1 : 1 až 1 : 3, zvláště 1 : 1,5 až 1 : 2,5 hmotnostních dílů.

Prostředky tohoto typu s výhodou obsahují ještě

d) smáčedlo.

Vhodnou složkou d) mohou být například následující sloučeniny:

d¹· Transesterifikační produkty přírodních triglyceridů a polyalkylenpolyolů z rostlinných olejů.

Tyto produkty transesterifikace jsou v oboru ^x známy a je možno je získat například způsobem, který byl popsán v US patentovém spisu č.

288 824. Tyto produkty zahrnují transesterifikační produkty různých přírodních, například nehydrogenovaných rostlinných olejů, jako jsou kukuřičný olej, jádrový olej, mandlový olej, podzemnicový olej, olivový olej a palmový olej a směsi těchto produktů s polyethylenglykoly, zejména s polyethylenglykoly se střední molekulovou hmotností v rozmezí 200 až 800. Výhodné jsou produkty, získané transesterifikací svou molárních podílů přírodního rostlinného oleje, zejména triglyceridů tohoto oleje s jedním molárním podílem polyethylenglykolu, například se střední molekulovou hmotností 200 sž 800. Různé typy transesteriřiksčních produktů této skupiny jsou známé a běžně se dodávají pod obchodním názvem Labrafil, byly popsány v publikaci Fiedle

Lsxikcaňder Hilfstořfe, druhé opravené a rozšířené·' vydání, 1581, sv. 2, str. 339· Zvláště vhodné pro použití jsou následující produkty:

Labrafil Μ 1944 CS, transesterifikační produkt jádrového oleje a polyethylenglykolu s kyselinovým číslem přibližně 2, saponifikačnísm číslem ' 145 až 175 a jodovým číslem 60 až 90 a Labrafil M 2130 CS, transesterifikační produkt glyceriau s 12 až 18 atomy uhlíku a polyethylenglykolu s teplotou tání 35 až 40 °C, s kyselinovým čísle.,i nižším než 2, saponifikačním číslem 185 až wOO a jodovým čís léta nižším než 3.

d² Reakční produkt přírodního nebo hydrogenovaného ricinového oleje a ethylenoxidu.

Tyto produkty je možno získat známým způsobem, například reakcí přírodního nebo hydrogenovaného ricinového oleje s ethylenoxidem, například v molárním poměru 1 : 35 až 1 : 60, za případného odstranění polyethylenglykolové složky z produktu například způsobem, který byl popsán v PAS č. 1 182 383 a 1 518 319- Zvláště vhodné jscu látky, dodávané pod obchodním názvem Cremophor. Zvláště vhodné jsou zejména výrobky Creraophor RH 40 se saponifikačním číslem 50 až 60, kyselinovým číslem nižším než 1, jodovým číslem nižším ne2 i, obsahem vody (Fischer) nižším než 2 % a n|° přibližně 1,453 - 1,4578 a

HLB přibližně 14 až 16, dále Cremofor RH6O se

ί.··?/'···..·' V saponifikačním číslem 40 až 50, kyselinovým číslem nižším než 1, jodovým číslem nižším než 1\, obsahem vody (Fischer) 4,5 - 5,5 % a n^ přibližně 1,453 až 1,57 a HLB přibližně 15 - 17 a Cremophor EL s molekulovou hmotností (osmometrie ve formě par) přibližně 1630, saponifikačním číslem 65 až 70, kyselinovým číslem přibližně 2, jodovým číslem přibližné 28 a z 32 a přibližně 1,471. Pro toto použití jsou vhodné také různá smáčedla, dodávaná pod obchodním názvem Nikkol, například Kikkol HC0-60, jde o reakční produkt hydrogenovaného ricinového oleje a ethylenoxidu s následujícími vlastnostmi: kyselinové číslo 0,3, saponifikační číslá 47,4, hydroxyskupina 42,5, 5% roztoku 4,6, barva APHA - 40, teplota tání 36,0 °C, teplota tuhnutí 32,4 °C, obsah vody /%, KE/ = 0,03

Estery polyoxyethylensorbitanu s alifatickými kyselinami nebo polysorbáty například běžně známého typu, dodávaného například pod obchodními značkami Tween nebo Armotan, tak, jak byly popsány v publikaci Fiedlsr, 2„j /43 - 7>6 a

972 - 975, včetně následujících produktů obchodní z n a č k y Tv/ e e n:

[polyoxyethylen(20)sorbitanmonolaurát), [polyoxyethylen(20 )sorbitanmonopalmitát], [polyoxyethylen(20)sorbitanaonostearát], [polyoxyethylen( 20)sorbitantristearát], [polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleát], rpolyoxyethylen(20)sorbitanti'ioleát], (ρ o Xy oxyetby1en(4)3or bi tanmoηo1au rát], [polyoxyethylen(4)sorbitanmonostearát], [polyoxyethylen(5)sorbitanmonooleát].

Estery polyoxyethylenu s alifatickými kyselinami, například estery polyoxyethylenu s kyselinou stearovcu, tak jak jsou známé a běžně dodávané pod obchodním názvem Myrj (Fiedler, 2, str. 636), stejně jako estery polyoxyethylenu s alifatickými kyselinami, známé a dodávané pod obchodním názvem Cetiol HE (Fiedler 1, str. 228) a ethery polyoxyethylenu s alifatickými alkoholy, například stearylether, oleylether nebo cetylether polyoxyethylenu, známé a dodávané pod obchodním názvem Brij (Fiedler 1, 184 - 186),například Brij 78 a 96 a Cetomacroga2 1000 (Fiedler, 1, 229).

Kopolymery polyoxyethylenu a polyoxypropylenu, například typu, běžně známého a dodávaného pod obchodními názvy Pluronic a Emkalyx (Fiedler 2, \ str. 720 - 722.

d Estery sorbitanu s alifatickými kyselinami, například běžně známého a dodávaného typu pod obchodním názvem Spán, jde například o mcnolauryl estery, monopalmitylestery, monostoarylsstcry, tristearylestery, monooleylestei’y a trioleylestery sorbitanu (Fiedler 2, str. 850 - 851).

Parciální glyceridy, například produkty, které obsahují monoglyceridové a/nebo diglyceridcvé složky, například smáčedla na bázi směsi aonoglycericů, diglyceridů, triglyceridů a volného glycerolu, stejně jako například glycerolaonostearáty a glycerolmonooleáty. Příklady těchto látek mohou být například známé a obchodně běžně dodávané prostředky s názvem Imwitor (Fiedler,

1, 491), například Imwitor 191 a Imwitor 7SO a Softigen (Fiedler, 2, 833), například Softigen 701.

Smáčedla a emuigáwry iontového type jaro laury. síran sodný nebo cetostearyl síraii sodný.

Složky d) jsou v případě své přítomnosti obsažena v množství až 30 %, s výhodou nejvýše 15 % celkové hmotnosti prostředku. Výhdhé rozmezí je ' například 0,5 až 10 %, například 1 % hmotnostní, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Prostředky tohoto typu mohou obsahovat ještě

e) zahuštovadlo.

Vhodnými složkami e) mohou být například- následující látky:

polymethylakrylátotové pryskyřice, tak jak jsou běžně známé a dodávané pod obchodním názvem Eudispert (Giedler, 1, 371 - 372).

e Deriváty celulózy, například ethylceluloza, propylcelulóza, methylcelulóza, hydroxycelulóza, propylmethylcelulóza a karboxymethylcelulíza.

Polyvinylové pryskyřice, například včetně polyvinylalkoholu a polyvinylpyrrolidonu, stejně jako další polymerní materiály včetně želatiny, alginátů, pektinů, tragacanthové pryže, arabské gumy, xantanové pryže a polyakrylových.kyselin, tak jak j.scu běžně :-m^zry a dodávají so cod obchodním názvem Carbopol (Fiedler, jL, 206 - 207).

Další materiály, například silikagel, bentonit a křemičitan hořečnato-hlinitý.

\

Složky e) jsou v případě své přítomnosti obsaženy v množství až 20 s výhodou až 10 %, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Tyto složky jsou s výhodou obsaženy v množství 0,5 až 15 %·, například 1,0 až 3,0 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Mimoto mohou tyto prostředky tagé obsahovat antimikrobiální látky, například methylparaben, propylparaben, benzalconiumchlorid nebo benzylalkohol, například v množství 0,06 až 0,5 % nebo v případě benzylalkoholu až 2,0 %, například 0,1 % nebo v případě benzylakoholu přibližně 1,0 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Dalšími nosnými prostředími mohou být hydrofobní materiály, například takové, které splňují požadavky na rozpustnost účinné složky, tak, jak byly svrchu uvedeny. Další vhodné prostředky s obsahem účinné látky, například určené pro místní podání mohou tedy sestávat z následujících složek

2

C a) Cyklosporin A v orthorhombické, s výhodou nesolvatované formě, například krystalické formě tyi pu CY-A/X-III, například tak, jak byly tyto formy 7 definovány v odstavcích A až A svrchu a

f) hydrofobní nosič, například některý se svrchu uvedených nosičů.

Množství složky a) se bude pohybovat v určitém vztahu, uvedené v prostředku c\ Vhodnými složkami f) jsou například naftové deriváty, jako minerální oleje, tuky a gelovité látky, například vaselina (minerální tuk nebo gelovitý derivát z: nafty), kapalná vaselina (bílý minerální olej nebo kapalný parafin) nebo jakýkoliv jiný ze známých produktů, běžně dodávaných pod obchodním názvem Vaseline (Fiedler 2, 986), jakož i neiontové deriváty lanolinu, tak jak se dodávají pod obchodním názvem Amerchol, například Amerchol CAB [Fiedler, 1, 119 - 120].

Další vhodné složky f) jsou například přírodní nebo nasycené rostlinné oleje a tuky, jako frakcionovaný kokosový olej, běžně dodávaný pod obchodním názvem Miglyol, například Myglyol 812 (Fiedler, 2, 615) , dále pod-.umnicový olej a nssyccný podzemnicový olej, dále estery alifatických alkoholů s přímým nebo rozvětveným řetězcem s alifatickými ky35 selinami, například stearylalkohol, cetylpamitát a 2-oktyldodekanol, které jsou obchodně dodávány pod názvem Eutanol G (Fiedler, 1, 375). \

Tyto prostředky mohou ještě obsahovat jednu nebo větší počet složek d) a e), stejně jako jednu nebo větší počet antimikrobiálních látek, například tak, jak byly svrchu popsány.

Zvláště nohou tyto prostředky obsahovat jednu nebo větší počet složek a), obvykle v množ ství nejvýše 30 %, s výhodou nejvýše 20 %, zvláště 1 až 15 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Prostředky s hydrofobním základem typu C s obsahem emulgační složky d) je rovněž možno připravit ve formě krémů nebo emulzí dalším přidáním vody. Získané krémy nebo emulze mohou být buS typu olej ve vodě nebo voda v oleji. Množství případné vody v těchto prostředcíh se může měnit v rozmezí 5 až 80 %, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku, s výhodou 20 až 70 % hmotnostních.

Množství složky e) a antimikrobiálniho činidla je v případě přítomnosti těchto složek stejné jako v prostředcích 0.

Množství formy pro místní podání, která se bude nanášet na určité místo, bude samozřejmě záviset na koncentraci účinné látky, na povaze onemocnění a na požadovaném účinku a v případě podání na kůži také na velikosti postižené oblasti. V případě prostředků pro kožní podání, například v případě léčby lupenky nebo atopických dermatóz, bude obvyklé množství schopné zajistit dostatečnou dávku účinné látky v rozmezí 0,1 až 5 mg/cm², například 2

0,5 mg/cm , přičemž prostředek se bude podávat dvakrát denně. V případě podání do oka je možno používat s výhodou prostředku s obsahem 0,1 až 10 %, například 1,0 až 2,0 % hmotnostních účinné látky, přičemž prostředek se bude užívat jako oční kapky jeden- až třikrát denně.

Injekční formy, například pro podkožní, nitrosvalové nebo jiné parenterální podání, zejména nitrokloubní podání, například při zánětech kloubů, jako jsou rheumatoidní arthritis nebo pro podání do poškozených míst, například při lupence.

Disperze, suspenze, emulze a podobné prostředky, vhodné pro injekční podání je možno připravit obvyklým způsobem, je například možno \ postupovat tak, že se účinná látka ve formě jemných orthorhombických krystalů disperguje, uvede do suspenze, nebo se jinak rozptýlí ve vhodném kapalném nosném prostředí, za současného přidání příslušných emulgačnícn činidel, smáčedel, stabilizátorů, vločkovacích činidel a podobně. Velikost částic účinná látky v těchto prostředcích je s výhodou nižší než 100, ještě výhodněji nižší než 50 a nejvýhodněji nižší než 20^um. Střední průměr částic se má pohybovat od velikosti 0,1 až 0,5 až do 20, 50 nebo lOO^um.

V případě, že injekční formy jsou určeny například pro podkožní nebo nitrosvalové podáni, například k dosažení depotního účinku, je možno užít také částic s větším středním průměrem. V případě, že jsou tyto formy určeny pro podání do poškozených orgánů, zejména do kloubů, je žádoucí použít jemnější částice. Pro ,toto použití je vhodný střední průměr částic účinné látky, například v rozmezí od 0,1 až 0,5 do 20/iim, tedy například v rozmezí 5 až 15/Um.

Aby bylo možno dosáhnout stálosti částic účinné látky v injekčních formách, například aby bylo možno zabránit zvýšení rozměru větších krystalických částic na úkor krystalických částic menšíX ho rozměru a aby bylo možno udržet co nejstejnoměrnější velikost částic. Vhodné odchylky mezi maximální a minimální velikostí částic by neměly převyšovat 50, s výhodou 20/Um.

Přestože požadovanou velikost částic je možno zajistit jejich příslušným zmenšením, například mikronizací, je však obvykle k zábraně přítomnosti rozdrcených částic a k zábéaně změn na krystalickém povrchu, například k udržení sméčivosti a ke snadnému dosažení požadavků sterility výhodnější použít nerozdrcených mikrokrystalků, tj. krystalků, jejichž přirozená velikost odpovídá požadavkům na jejich rozměr, jak bylo uvedeno svrchu.

Injekční prostředky tedy s výhodou obsahují

C³ a) Cyklosporin A ve formě jemných částic, s výhodou ve formě orthothrombických nesolvatizovaných krystalků, například ve formě CY-A/X-III, například jak byly definovány v odstavcích A až A¹, zejména A& a a\ tyto částice jst-u rozptýleny nebo je možno je roptýlit v

b) nosiči pro injekční podání.

Vhodným nosným prostředím je například voda pro farmaceutické účely.

Mimoto mohou prostředky, definova3 né v odstavci C obsahovat ještě emulgační činidkteré napomáhá k řási nosiče.

g) smáčedlo, dispergační činidlo, lo a/nebo vločkovací činidlo, udržení rozptýlených částic va

Vhodnými smáčedly g) mohou být například estery polyoxyethylensorbitanu s alifatickými kyselinami nebo polysorbáty, tak jak byly uvedeny v odstavci d^ svrchu, například Tween 80 nebo Polysorbate SO (Fiedler, 2, str. 746). Vhodným vločkovacím činidlem g) je například ethylendiamintetraacetát a jeho soli, například vápenatá nebo sodná sůl, stejně jako další ekvivalentní chelatační činidla a peptisační ěinidla, například kyselina jantarová nebo citrónová.

Aby bylo mošno udržet rozdělení velikosti částic, je možno včlenit do prostředku také stabilizační činidlo. Vhodným stabilizačním činidlem je například želatina nebo modifikovaná želatina, stejně jako některé deri\áty pravmy, kterS se bažně dodávají pod obchodní značkou Gelafundin a Haemaccel nebo typy želatiny, rozpustné ve studené vodě, zejména vysocečištěné hydrolyzáty kolagenu.

prostředky typu (P mohou rovněž obsahovat jedno nebo větší počet antimikrobiálních činidel, tak jak byly svrchu popsány, stejně jako svrchu uvedená peptisační činidla, například kyselinu štavelovou nebo citrónovou.

Poměr složek a) : b) v prostředcích typu _C3 se obvykle pohybuje v rozmezí 1 : 10 až 1 : 1000 s výhodou 1 : 50 až 1 : 200, například 1 : 100 hmotnostních dílů.

Aby nedošlo k porušení stálosti částic, je s výhodou zapotřebí použít smáčedla ve složce g) jen v malých koncentracích, například 0,1 až 2,0, s výhodou 1 % hmotnostní, vztaženo na hmotnost složky a). V případě, že se použije vločkovací činidlo, má být poměr vločkovacího činidla ke složce a) v rozmezí 1,5 3 až 1 : 3, například 1 : 5 hmotnostním dílům. V případě, že se použije stabilizační činidlo, má být poměr složky a) ke stabilizačnímu činidlu 1 ; 5 až 1 : 30, s výhodou 1 : 10 až 1 : 30, například 1 · 20 hmotv . dílům. V případě, 5 užije peptizační činidlo, je vhodný poměr peptizačního činidel ke složce a) v rozmezí 1 : 1 až 1 : 10, aapřík.'.ad 1 : 15 hiaotnos tru. * dílům.

Množství cyklosporinu v Jednotce dávky, určené pro injekční podání se bude měnit v záviúosti na onemocnění, v místě podání a požadovaném účinku, například na tom, zda je požadován depotní účinek nebo poměrně rychlé uvolňování do okolní tkáně. Jednotlivá dávka se bude pohybovat v rozmezí 10 až 500 mg, s výhodou 30 až 100 mg.

Ja zřejmé, že je možno použít také složitějšího systému, například injekční stříkačky se dvěma oddíly, v níž je účinná látka v částicové formě s dalšími složkami, například stabilizátorem nebo antimikrobiální látkou uložena v prvním oddíle a nosné prostředí je uloženo ve druhéta oddíle, přičemž složky z obou oddílů se mísí například tak, že se uvede do chodu píst. Stříkačky tohoto typu jsou dlouho známé a jejich použití spadá rovněž do oboru vynálezu.

Perorální formy, například pro léčbu autoinunních chorob a podobných stavů, například pro prevenci odmítnutí transplantátů.

Přestože, jek již bylo uvedenu, jsou perorální formy méně výhodné, jejich použiti rovněž spadá do oboru vynálesu.

Perorální formy je možno, připravit při použití příslušných nosičů nebo nosných prostředí tak, jak je to v oboru běžné. Kapalné nebo polotuhé lékové formy pro perorální podání mohou obsahovat účinnou látku v orthorhombické krystalické formě, například ve formě CY-A/X-III, spolu s ředidlem nebo nosičem, přijatelným z farmaceutického hlediska, v němž je krystalická forma sama o sobě nerozpustná nebo v podstatě nerozpustná. Tyto nosiče nebo tato ředidla zahrnují například transesterifikační produkty triglyceridů z přírodních rostlinných olejů s polyalkylenpolyoly, tak jak byly popsány v odstavci d^ například prostředky typu Laorafil a reakční produkty přírodního nebo hydrogenovaného ricinového olep je a ethylenoxidu, tak jak byly popsány v odstavci d zvláště produkty kapalné, jako Cremophor, zvláště Cremophor EL.

Účinná látka je s výhodou obsažena ve formě jemných částic, například se středním průměrem 0,5 až 200, zvláště 0,5 až 30, s výhodou méně než 20, například 0,5 až 10/Um.

Pro snadnost podání s? uvedené bio středky obvyklo plní do kapslí z měkké nebo z tvrdé želatiny.

- 43 Lékové formy pro perorální podání obvykle obsahují v’ jednotlivé dávce 25 až 75 až 200, například 50 nebo 100 mg účinné látky. Podávají se '' 1 až čtyřikrát denně k dosažení dostatečné hladiny plasmy stejným způsobem jako v případě běžných dosud známých prostředků.

Složky, které byly uvedeny jako možné složky farmaceutických prostředků je možno užívat podle obvyklých pravidel, to znamená, že například pro perorální podání se užijí složky, vhodné pro toto podání a pro místní podání, například na kůži nebo do oka se užijí složky, které jsou v tomto případě dobře snášeny.

Je zřejmé, že obdobným způsobem je možno navrhnout a vyrobit ještě další galenické formy pro totéž nebo jiné podání.

Praktické provedení způsobu podle vynálezu bude osvětleno v následujících příkladech.

Příklad 1

Příprava CY-A/X-III

a) 100 g cyklosporinu A v amorfní formě se za míchání rozpustí ve 400 g polyethylenglykolu 300 při teploo tě 50 C. Produkt se začíná vyvíjet krátce po úplném rozpuštění· Roztok se nechá stát 24 až 43 hodin při teplotě přibližně 35 ež 40 °C k dovršení krystalizace a pak se zředí 1000 ol vody za energického míchání Získaná sraženina se oddělí filtrací, promyje se vodou k odstranění zbývajícího polyethylenglykolu a pak se suší, čímž se získá v podstatě čistý CY-A/X-III s teplotou tání 195 °C, částice mají velikost v rozmezí 100 až 200 yUm.

Analogicky je možno připravit CY-A/X-III také tak, že se užije místo polyethylenglykolu 300 materiálů, která jsou uvedeny v následující tabulce:

Rozpouštědlo

- 45 teplota tání získaného CY-A/X-III (°C)

b) polyethylenglykol 300/
Cremophore RH 40	190
c)	(objemový poměr 1 : 1) Cremophore SL
d)	Solutol HS 15	188
e)	Gelucire 44/14	180
f)	Myrj 52	184
g)	Tween 80	186
h)	Cremophor RH 40	190

V každém případě se pohyboval střední průměr částic v rozmezí 50 až 200/Um. Stanovená struktura mřížky odpovídala svrchu uvedenému popisu. Sifrskce v rtg-záření bude dále uvedena v tabulbeí? III a obr. IV.

Příklad 2 .

Příprava CY-A/X-III

- 46 20 g cyklosporinu A ve formě CY-A/X-I se rozpustí v 60 ml ethanolu a kondenzuje se na 1/6 původního objemu destilací za sníženého tlaku při teplotě vyšší než 60 °C. Pak se pomalu přidá 160 ml polyethylenglykolu 300 a 20 ml vody při teplotě 50 až 85 °C za současného míchání při 300 ot/min. Pak se směs zpracovává ultrazvukovým vibračním zařízením při 20 000 cyklů za sekundu. Při teplotě 65 až 75 °C se v průběhu 3 až 5 minut počnou tvoři t kry stali . Získaná disperze se pak postupně chladí v průběhu 10 až 20 minut na teplotu 40 °C za stálého působení ultrazvuku a míchání při 700 ot/min. Získaná hustá pastovitá směs se zfiltruje, promyje se směsí polyethylenglykolu 300 a vody v objemovém poměru 3 : 1, pak se promyje vodou, teplou 30 °C, načež se suší ve vysokém vakuu při teplotě 50 °C, čímž se získá, čistý CY-A/X-III s teplotou tání 192 °C. Velikost částic je v rozmezí 3 až 15/Um krystalová mřížka odpovídá svrchu uvedenému popisu, dífrakce v rtg-záření je uvedena v následující tabulce III a na obr. IV.

Opakované- pokusy prokázaly, že rozměry krystalků jsou ovlivněny spíše teplotou a rychlostí růstu krystalů než celkovou dobou zpracování. Například v případě, že se krystalky počnou tvořit pří teplotě

°C a krystalizace pokryčuje při téže teplotě, byl získán krystalický materiál s velikostí částic přibližně 50/Um.

Příklad 3

Příprava galenických forem pro perorální podání

3-1 Prostředky I pro plnění do želatinových kapslí

Suspenze s obsahem 20 % hmotnostních CY-A/X-III, získaná způsobem podle příkladu 1 v C-elucire 44/14 se mele při zvýšené teplotě v koloidním mlýnu tak dlouho, až střední průměr částic účinné látky je v rozmezí 0,5 až 10/Ua. Pak se podíly této suspenze o hmotnosti 250 mg plní do kapslí velikosti 2 z tvrdé želatiny, z nichž pak každá obsahuje 50 mg účinné látky ve formě CY-A/X-III.

3.2 Prostředek II pro plnění do želatinových kapslí

Cx-A/?k-IIx, získaný z půso Den podle příkladu 1 se mele v koloidním mlýnu tak dlouho, až

- 48 střední průměr částic účinné látky je v rozmezí 0,5 až 20 ,ιυη. Podíly oo 50 mg se pak důkladně promísí s / \

200 g prostředku Cremophore EL a plní se do kapslí velikosti 2 z tvrdé želatiny, z nichž pak každá obsahuje 50 mg účinné látky ve formě CY-A/X-III.

Příklad 4

Příprava galenických forem pro místní podání

4.1 Prostředek I ve formě gelu

CY-A/X-III, získaný způsobem podle příkladu 1 se mikronizuje v mlýnu se vzduchovým paprskem Mikronizovaný produkt s maximální velikostí částic 60 až 70/Um a se střední velikostí částic 2 až 10/Um se mísí běžným způsobem s dalšími složkami, uvedenými v následující tabulce za vzniku vodného gelu, který obsahuje 10 % hmotnostních účinné látky, ve formě CY-A/X-III a je vhodný pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

složka % hmotnostní

a) Cyklosporin (mikronizovaný

CY-A/X-III) 10,0

b) polyakrylová kyselina (Carbopol 934P) 0,5

c) 5% roztok hydroxidu sodného 3,0

d) methylparaben 0,07

e) propylparaben 0,03

f) voda (pro farmaceutické použití) do 100,0

4.2 Prostředek II ve formě gelu složka % hmotnostní prostředek A prostředek 3

a) Cyklosporin (mikronizovaný

CY-A/X-III)	10,0	1,0
b) polyethylenglykol 300	30,0	30,0
c) Labrafil M 2130 03	1,0	1,0
d) Carbopol 934 P	1,0	1,0

složka % hmotnostní prostředek A prostředek B

e)	5% hydroxid sodný	6,0	6,0
f)	methylparaben	0,07	0,07
g)	propylparaben	0,03	0,03
h)	voda (pro farmaceutické
	použití)	51,9	60,9
		100,0 %	100,0

Účinná látka se připraví stejně jako v odstavci 4.1. Složky c), f) a g) se rozpustí ve složce b) za zahřátí a získaná směs se zchladí na teplotu místnosti, načež se získaný roztok disperguje ve vodě. Pak se přidá složka d) a směs se homogenizuje za vzniku disperze. Pak se přidá účinná látka a směs se znovu homogenizuje. Pak se přidá složka e) k neutralizaci směsi za míchání a výsledný gel se plní do tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.3 Mazání složka % hmotnostní prostředek A prostředek B

a) Cyklosporin (mikronizo-

váný CY-A/X-III)	1,0	10,0
b) A.®erchol CAB	2,0	2,0
c) kapalný parafin	42,0	·? · y r
d) bílá vaselina	55,0	50,5
	100,0	% 100,0 %
Účinná látka odstavci 4.1. Složky b), c) a d) a promísí a pak se přidá účinná	se připraví jako v se společně roztaví složka při teplotě

přibližně 30 °C , načež se výsledná směs homogenizuje. Získané mazání se zchladí a plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.4 Příprava krému složka _____ % hmotnostní

a) Cyklosporin (mikronisov ný CY-A/X-III)

1,0 < .· · složka % hmotnostní

b)	polysorbát 60	5,0
c)	cetylstearylalkohol	10,0
d)	glycerol 85%	10,0
e)	bílá vaselina	24,0
f)	methylparaben	0,07
g)	propylparaben	0 ,03
h)	voda (pro farmaceutické
	účely)	49,0

100,0 %

Účinná látka se připraví stejně jako v odstavci 4.1, smísí se se složkami b) až h) analogickým způsobem jako v odstavci 4.3 a pak se plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4-5 Příprava mazání

Suspenze ' obsahem 20 % kmotr..·'síních CY-A/X-III, získaného způsobem podle příkladu 1 v polyethylenglykolu 300 se mele za vlhka tak dlouho, ( ...

- 53 až se střední průměr částic účinné látky pohybuje v rozmezí 2 až 10/Um- Pak se 10 g získaného produktu smísí obvyklým způsobem s 50 g polyethylenglykolu 300 a 40 g roztaveného polyethylenglykolu 1500 za vzniku tekuté pasty s obsahem 10 % účinné látky ve formě CY-A/X-III, která je vhodná pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.6 Příprava gelu složka % hmotnostní

a) Cyklosporin (mikronizováný

CY-A/X-III) 1,0

b) Labrafil M 1944 CS 1,0

c) polyethylenglykol 300 30,0

d) benzylalkohol 1,0

e) hydroxypropylmethylcelulóza (Methocel E4M) 2,5

f) voda (pro farmaceutické pctrzii i;

100,0 %

Účinná složka se připraví·, jako v odstavci 4.1. Složky b), c) a d) se smísí, přidá se složka f) a směs se promísí, ve výsledné směsi se pak homogenizací uvede do suspenze účinná látka. Pak se přidá pomalu za míchání složka e) až do dovršení tvorby gelu. Vzniklý gel se pak plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.7 Příprava gelu složka % hmotnostní

a)	Cyklosporin (mikronizovsný
CY-A/X-III)	5,0
b)	polyethylenglykol 300	30,0
c)	glycerylmonostearát	5,0
d)	methylparaben	0,07
e)	propylparaben	0,03
f)	Carbopol 934 P	1,0
β)	5% hydroxid sodný	6,0
h)	voda(pro farmaceutické
	použití	52,9

100,0 %

- 55 Složka a) se připraví stejným způsobem jako v odstavci 4.1. Složky c) , d) a e) se rozpustí za zahřívání ve složce b). Teplá směs se pak disperguje homogenizací ve složce h) a směs se zchladí na teplotu místnosti. Přidá se účinná látka a složka f) a výsledná směs se opět homogenizuje, načež se přidá složka d), čímž dojde ke tvorbě gelu. Získaný gel se plni do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.8 Příprava krému (voda v oleji) složka % hmotnostní

a)	Cyklosporin (aikronizovaný
	CY-A/X-III)	2,0
b)	Amerchol CAB	5, ·'
o)	Miglyol 812	10,0
d)	bílá vaselina	53,0
e)	voda (pro farmaceutické
	použití)	30,0

100,0 %

- 56 Účinná složka se připraví' stejně jako v odstavci 4.1 a pak se disperguje spolu se složkou b) ve složce e) za současného zahřívání a homogenizace. Složky c) a d) se společně roztaví, smísí a směs se přidá za intenzivní homogenizace ke svrchu připravené disperzi a výsledná směs se zchladí za vzniku bílého krému, který se plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.9 Příprava gelovitého krému

Opakují se postupy, uvedené v příkladech 4.1 až 4.8 s tím rozdílem, že se jako účinná složka užije krystalický produkt, získaný způsobem podle příkladu 2.

Příklad 5

5-1 Injekční formy, například pro parenterální podání

C\ , rtV - /V TTT - . . z ....

sterilních podmínek běžným způsobem při použití následujících složek:

- 57 složka množství (mg)

a) cyklosporin (CY-A/X-III)	20,0
b) polysorbát 80	4,0
c) sodná sůl karboxymethylcelulózy	5,0
d) chlorid sodný	9,0
e) benzylalkohol	9,0
f) voda pro injekční pc-dání do	1,0

Uvolňování účinná složky že získaného prostředku závisí na středním průměru částic složky a). To znamená, že v případě, že je požadován dlouhodobější účinek, je možno zvolit produkt typu CY-A/X-III s velkým středním průměrem částic, například ICO sž 200/Uta, tak jak je možno jej získat přímo způsobem podle příkladu 1. V případě, že se požaduje kratší účinek, je možno použít účinnou látku s poměrně menším středním průiažrem částic, například po taikronizace nebo mletí produktu z příkladu 1 na velikost částic například v rozmezí 0,5 až 10/Um. Získaná suspenze se pak plní do injekčních ampulí a je určena pro parenterální podání nebo přímo do poškozené tkáně například při léčbě lupenky, například je možno dosáhnout i depotního účinku.

Ve zvláště výhodném provedení se k výrobě injekčního roztoku užije účinná látka ve formě CY-A/X-III·,·· připravená způsobem podle příkladu 2 s velikostí částic 5 až 15/Um, sloučeninu je nutno připravit za sterilních podmínek.

5.2 Injekční formy například pro nitroklcubní podání

Injekční formy, vhodné pro nitrokloubní podání je možno připravit při použití následujících složek:

složka množství v mg

Prostředek A

a) Cyklosporin (CY-A/X-III) 10,0

b) sodná sůl karboxyaethylcelulózy 10,0

c) sodná sůl EDTA d) voda pro injekční podání	2,0 do 1,0 ml
Prostředek B
a) Cyklosporin (CY-A/X-III)	10,0
b) polysorbát 60	0,1
c) kyselina citrónová	2,0
d) voda pro injekční podání	uo 1,0 ml

Prostředky se vyrábějí běžným způsobem za sterilních podmínek. Účinná látka sestává z nerozdrcených mikrokrystalků, které byly získány za sterilních podmínek způsobem podle přikladu 2 a jejichž velikost se pohybuje v rozmezí 3 až 15/Um. Získané prostředky se plní za sterilních podmínek do ampulí pro injekční podání, například nitrokloubní podání při rheumatoídní arhritidě.

Výhodné vlastnosti prostředků, získaných způsobem podle vynálezu je možno prokázat při pokusu na zvířeti i při klinických pokusech. Použitelnost těchto prostředků pro podání na kůži, například při léčbě lupenky nebo různých dermatoz je možno prokázat při následujících pokusech.

Alergická kontaktní dermatitis na morčeti (test DTH) t

Morčecí saméi kmene Hartley o hmotnosti 400 až 500 g se sensitizují aplikací 50/ul 2% roztoku dinitrofluorbenzenu (DNFB) ve směsi acetonu a olivového oleje v objemovém poměru 1 : 1 na vnitř ní stranu pravého ucha. Po sedmi dnech se zvířatům znovu podá 20/ul 0,5% roztoku dinitrofluorbenzenu ve směsi acetonu a olivového oleje v poměru 4 ' 1 na označené oblasti vyholeného levého a pravého boku.

Toto druhé podání vyvolá alergický- zánět, který se projeví červenáním a infiltrací (otokem) kůže. Pak se nanese na uvedené oblasti zkoumaná látka v množství 200 až 250 mg, obvykle na pravý bok. Na levý bok se nanese základ bez účinné látky (placebo) jako kontrola. Nanesení na oba boky se provede pětkrát v intervalu 20 minut, 8 hodin, 24 hodin, 32 hodin a 48 hodin po podání dráždící látky. Před každým podáníaíse kontroluje otok kůže, tato hodnota se znovu kontroluje 8 hodin po posledním podání tak, že se kůže vytáhne do řasy a tlouštka řasy se změří. Stupeň zrudnutí se hodnotí vizuálně podle stupnice 0 až 4. Účinnost uvedených prostředků proti vzniku zánětu se stanoví ve srovnání s druhým bokem, ošetřeným pouze základem.

Výsledky, získané při svrchu uvedených pokusech při použití prostředků podle příkladů 4.1 a 4-5, avšak s obsahem 0,1 % hmotnostní účinné látky ve formě CY-A/X-III ve srovnání s placetem a s místně podaným 0,1% roztokem cyklosporinu jsou uvedeny na obr, I, II a'III. Koncentrace 0,1 % CY-A/X-III se užívá pří tomto pokusu vzhledem k veliké citlivosti zvířete. Prostředky se připravují analogicky jakc v příkladech 4-1 a 4.5 s tím rozdílem, že se množství

účinné látky v těchto prostředcích sníží na 0,1 g a místo účinné látky se přidá navíc 9,9 g vody v příkladu 4.1 a polyethylenglykolových složek v příkladu 4· 5. '

Na každém výkresu je na ose úseček uveden čas v hodinách a na ose pořadnic je uvedena tlouštka kůže v mm. Na obr. I jsou uvedeny výsledky při použití 0,1% hmotnostních cyklosporinu A pro běžné použití ve formě běžně dodávaného perorálního roztoku ve srovnání s placebem. Pro perorální roztek je možno prokázat malé, avšak statisticky nevýznamné snížení reakce. Na obr. II a III jsou uvedeny výsledky při použití 0,1 % hmotnostních cyklosporinu v prostředcích podle příkladů 4.1 a 4.5 při srovnání s placebem. V obou případech došlo k podstatnému snížení otoku kůže při prvním podání a kontinuálně v průběhu celé léčby ve srovnání s placebem až do ukončení pokusu·

Použitelnost svrchu získaných farmaceutických prostředků je možno prokázat také v klinických pokusech, například následujícím způsobem:

Klinický pokus: léčba lupenky místním podáním

Pokus se převádí dvojitou slepou zkouškou při náhodném výběru nemocných a při použití placeba. Každý z nemocných obdrží účinnou složku a placebo, tvořené pouze nosným prostředím na dvě symetrická poškozená místa. Tato místa se volí tak, aby jedno z nich bylo vpravo a druhé vlevo.

Nemocný se seskupí do skupiny 12 až 24 při věku 18 až 70 let, použít je možno muže nebo ženy po menopauze, chirurgicky sterilizované nebo používající perorální antikoncepční prostředky, s negativ ním testem na případné těhotenství.

Všichni nemocní musí splnit dvě podmínky: a) podepsaný souhlas a b) klinicky definovanou, stálou, chronickou lupenku s kožními projevy. Nemocný musí mít alespoň dvě mírně nebo těžce poškozená symetrická místa na obou stranách těla o ploše 4 až 2 cm při závažnosti poškození větší než 5 při použití škály 0 až 9« Toto hodnocení je složeno z jednotlivých hodnocení 0 (nejméně závažné) až 3 (nejzávažnější) pro následující parametry: zčervenání, zvýšení poškozeného místa a tlouštka kůže. Poškození na obou stranách těla musí být u téhož nemocného-srovnatelné, to znamená že závažnost obou poškosení se nesmí od sebe lišit o více než 20 %.

Z pokusů byly vylučováni romomí podle následujících kriterií:

- 63 a) jakákoliv léčba, která by mohla nějakým způsobem ovlivnit průběh pokusu,

b) systemická léčba lupenky v posledních dvou měsících (PUVA, methotrexat, steroidy, retionidy, cyklosporin), .

c) specifické místní léčení s výjimkou indeferentních látek, například bílé vaseliny, nebo salicylové kyseliny v množství nejvýše 10 % v průběhu dvou týdnů před pokusem, toto léčení však může být prováděno na poškozených místech, na nichž nebude prováděn pokus,

d) nemocní, u nichž se lupenka sama lepší bez léčby nebo se lepší po předchozí léčbě bez dalšího zásahu,

e) známá přecitlivělost na kteroukoliv složku aplikovaných farmaceutických prostředků,

f) nespolupracující nemocní, kteří patrně nebudou správně provádět léčbu, nebo kteří nechtějí nebo nemohou pravidelně docházet na kontroly,

g) léčba jinou zkoumanou látkou v průběhu jednoho měsíce před pokusem,

h) těžké současné onemocnění, zvláště porušená funkce ledvin s kreatidinem v seru nad 130/Umol/litr, zvýšený krevní tlak 'xckou noonocou po 5 minutách sezení, nemocný se správně léčeným vyšším tlakem mohou se pokusu zúčastnit,

- 64 j) rakovinné bujení i v anamnese, včetně rakoviny kůže,

k) akutní bakteriální, virové nebo plísňové onemocnění kůže,

l) v těhotenství a kojení,

m) alkoholici i v anamnéze, narkomani, psychotici a lidé s emocionálními nebo intelektuálními problémy,

n) nemocní, kteří potřebují současnou léčbu jinými látkami, potlačujícími imunologickou odpověď, chemotherapeutickými látkami, sloučeninami s nefrotoxicitou, například aminoglykosidy nebo látkami, které působí interakci s cyklosporinem, jako jsou ketoconazol, erythromýcin, fenytoin, fenobarbiton, rifsmbicin,

INH, carhamazepin, válproát sodný,

o) nemocní s abnormální bazálním metabolismem, odlišujícím se o více než 15 % od normální hodnoty,

p) nemocní s odchylkami při běžném vyšetření.

K pokusu je možno užít jakékoliv prostředky z příkladů 4.1 až 4.9, například 1% prostředek B z příkladu 4.2 nebo 10% prostředek B z příkladu

4.3·

Každý nemocný obdrží pár tub s obsahem 20 g materiálu a s dvojitou nálepkou. Nálepka je modrá pro podání na pravou stranu a červená pro lovců stranu. Dále obsahuje nálepka údaj o straně, na níž má

být materiál nanesen, tj. vlevo nebo vpravo, kód pokusu, jméno toho, kdo pokus vede, číslo nemocného a datum počátku pokusu. Nálepka, kterou je možno z tuby sejmout, se pak připevní na zprávu o průběhu pokusu.

denně, ráno a zeného místa, . p spon nu A/cn

Materiál z tub se nanáší dvakrát večer, množství závisí na velikosti poškodenní dávka má být 0,2 až 2,0 mg cyklotj. při jedné sérii pokusů, přibližně o

0,5 mg/ca . Placebo se nanáší ve stejném množství.

Žádná z látek se nanenáší na povrch větší než 25 cm a týdně se nenanese více než 1 g účinné látky. Při každé kontrole se tuby zváží a stanoví se nanesená denní dávka. Nemocní se mohou krátce před nanesením vykoupat. Nanášení se provádí v rukavicích pro jedno použití, aby nedošlo k přenesení účinné látky do místa, kam se má nanést pouze placebo a obráceně. Před nanesením masti a omytím mají uplynout alespoň 3 hodiny. První nanesení se provádí pod dohledem a nemocný dostane psané instrukce. Léčba trvá čtyři týdny. V případě, že dojde k úplnému vymizení afekce, před uplynutí® této doby, léčba se přesto provádí až do čtvrtého týdne. Nemocní se kontrolují před začátkem pokusu (týden -1), na začátku pokusu týden 0) a pak ještě po jedno®, dvou, třech a čtyřech -týdnech.

Hodnocení provádí pracovník, který se pokusu neúčastní při použití následující číselné škály O až 3 (hodnocení LPSI- local gsoriasis severity index).

zčervenání vyvýšení tlouštka kůže

O = žádné = minimální, sotva znatelný, světle růžová = žádné O = ňeztaěněno = minimální, 1 = minimální zvýšení, špatně zjistitel- sotva ??ozeznatelné né vyvýšení = mírné zčervenání, dobře odlišitelné

2»aírné, 2 dobře definované, počínající odlupování mírné, avšak dobře odlišitelné = silné, hluboce až jasně červené zbarvení = silné, odlu- 3 = vyjádřené silné pování kompaktních ztluŠtění úseků celSoučet těchto hodnot tedy může být O až 9. Aby byl nemocný vzat do pokusu, musí být alespoň dva znaky v obou zvolených místech mírné až silné, kové hodnocení tedy musí být vyšší než 5.

- 67 Při zařazení do pokusu a při každé kontrole se měří také velikost poškozeného místa, pro 2 zařazení musí mít velikost 4 až 25 cm . V této oblasti se pak hodnotí tři svrchu uvedené znaky. Pigmentace v oblasti poškození se nehodnotí.

Poškozená místa se fotografují v týdnu -1 a v týdnu 4. Pořizují se tři fotografie. Jedna z nich ukazuje současně obě místa a druhé dvě každá jedno z těchto míst.

Svědění se vyhodnocuje podle údajů nemocného podle následující stupnice:

= žádné, = minimální, občas nutí ke škrábání, = mírné, často nutí ke škrábání, = nesnesitelné, velmi často nutí ke škrábání a může rušit i noční spánek.

Na konci pokusu se provádí celkové hodnocení odpovědi na. léčbu podle následujících hledisek :

- vyléčeno = 100% očpověŮ na léčbu,

- podstatné zlepšení š alespoň 66% snížení LPSI s/nebo alespoň 66% zmenšení poškozeného místa,

- mírné zlepšení, 65% až 33% snížení LPSI nebo 65% až 33% zmenšení poškozeného místa,

- malé zlepšení! méně než 32% snížení LPSI a/nebo méně než 32% zmenšení poškozené plochy, i

- zhoršení: exacerbace onemocnění.

Za léčebný úspěch se pokládá poškozené místo, které je vyléčeno nebo v němž je možno prokázat podstatné zlepšení.

Lékař i nemocní také uvádějí svůj názor na výhodnost léčby pravá nebo levé strany podle následujícího hlediska:

- levá strana je zřetelně lepší,

- levá strana je o něco lepší,

- není zjistitelný rozdíl,

- pravá strana je o něco lepší,

- pravé strana je zřetelně lepší.

Pokud jde o účinnost na konci léčby, srovnávají se hodnocení LPSI a plocha poškozených míst Wilcoxonovýs párovým testem pro léčené afekce a pro afekce, na něž bylo naneseno placebo po 4 týdnech léčby, hodnotí se významnost změn po této době.

Všechna další srovnání v jiných pracovních obdobách nebo pro jiné paramet.x*y se považují pouze za popis vývoje pokusu.

c·..

- 69 Při provádění svrchu uvedeného pokusu bylo možno pozorovat, že u jednotlivých nemocných došlo k podstatnému zlepšení míst, poškozených lupenkou, pokud jde o LPSI na místech, na něž byly naneseny prostředky s obsahem účinné látky. Bylo možno pozorovat také subjektivní zlepšení svědění na místech, léčených cyklosporinem Á ve srovnání s místy, na něž bylo naneseno placebo.

Positivní výsledky byly získány také při pokusech s nemocnými s kontaktní dermatitidou, kde byla hodnocena alespoň tři z následujících hodnot:

- svědění,

- typická morfologie a distribuce:

flexurální lichenifikace nebo linearita u dospělých, účast tváře a extesorových partií u dětí,

- chronická nebo relapsující deraatitis,

- osobní nebo rodinná anamnéza atopických projevů, jako je aSthma, alergická rýma, atopická dermatitis.

Hodnotí se také alespo tři vedlejší znaky z následující skupiny:

xerosisi, ichthyosis/palraérní hyperlinearita/kerstosis pilaris, okamžitá reaktivita typu I při kožní reakci, zvýšené IgE v seru, nízký věk při výskytu onemocnění,

- 70 tj. nižší než pět let, sklon ke kožním infekpím, zvláště Staph. aureus a Herpes simplex, porušení buněčně zprostředkované imunity, sklon ke specifické dermatitidě na rukou a nohou, ekzém na prsních bradavkách, . cheilitis , opakující se zánět spojivek, anomálie infraorbitálního uspořádání Dennie-Morgan, keratoconus, cataracta subcapsularis snterior, ztmavnutí orbity, bledost tváře nebo její zčervenání, pityriasis alba, řasy na přední straně krku, častá pocení, tvorba potniček, nesnášenlivost rozpouštědel, zejména tukových, nesnášenlivost různých druhů potravin, snadné ovlivnění faktory z okolí a emočními faktory, bílý dermografismus zejména zpožděný. Doba pokusu jsou 3 týdny, škálou 0 až 3 se vyhodnocuji následující parametry: svědění, zčervenání, mokvéní, olupování a lichenifikace.

Prostředky pro místní podání, tak jak byly popsány v příkladech 4.1 až 4.9 s obsahem 1 až 10 % účinné látky, například prostředek z příkladu 4.7 s obsahem 5,0 % účinné látky jsou účinné také při alergické kontaktňí dermatitidě i při vypadávání vlasů.

Prostředky s obsahem účinné látky, získané způsobem podle vynálezu je tedy možno užít také

- 71 D. K léčbě cyklosporinem u nemocných, kteří tuto léčbu vyžadují, léčení se provádí podáním účinného množství účinné látky ve formě orthorhombických krystalů, zvláště v nesolvatysované formě, například ve formě CY-A/X-III, tak, jak byla definována v odstav7 cích A až A , zejména

D~ k léčbě, při níž dochází k potlačení imunologického systému a k protizánětlivé léčbě u nemocných, kteří, tutoláčbu vyžadují, léčení se provádí tak, že se podá účinné množství cyklosporinu A v orthorhorabické krystalické formě, která není ve formě solvátu, například ve formě CY-A/X-III, tak jak bylo definováno v odstavcích A až TJ.

Účely k nimž je možno podat uvedenou látku, jsou například prevence odmítnutí transplantátu, léčba autoimunologických a rheumatických onemocnění, léčba jakýchkoliv dalších onemocnění nebo stavů, při nichž dochází k příliš vysoké odpovědi imunologického systému, například může jít o zvrat odolnosti nádoru proti léčbě nebo o léčbu alopecie. Jde zejména o onemocnění kůže nebo oka jako je lupénka, atopická nebo kontaktní dermatitís, transplantáty rohovky, zánět spojivek a uveitis, v tomto případě jde o místní podání, při rheuma- 72 toidní arthritidě nebo při jiných kloubních onemocněních padá v úvahu také nitrokloubní podání.

K uvedenému účelu se tedy podává:

E. Cyklosporin A v nesolvatované formě orthothrombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III, tak jak byla definována v odstavcích A až A , pro použití ve farma cii například při léčbě různých onemocnění, zejména k potlačení imunologická odpovědi a zánětu, a

F. Cyklosporin A ve formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III, tak jak byl definován 7 v odstavcích A až A .

Aby bylo možnocusnadnit identifikaci cyklosporinu A v uvedené formě, ze jména-CY-A/X-III, budou dále uváděny údaje o difrakci působením rtg-paprsků pro formu CY-A/X-III a také pro obě formy CY-A/X-l; /a CY-A/X-II v následujících tabulkách I až III. Na obr. IV je znázorněna difrakce ve formě diagramu. Tento diagram tyl získán při použití kamery (Cuinier-DeWolff II) a při použití záření CuKa, lambda = 1,542 2.

- 73 Tabulka I

Difrakce rtg-záření pro CY-A/X-I čára č. d (£) intenzita

1	13,0	VS
2	11,4	VS
3	10,3	VS
4	9,7	VS
5	9,4	VS
6	8,25	vs
7	7,1	s
8	6,1
9	5,85	s
10	5,6	s
11	5,25	VS
12	4,81	s
13	4,53	s
14	4,25	M
15	4,0	M
16	3,67	14
17	3,45

	Tabulka	II
Difrakce	rtg-záření pro CY-	-A/X-II
čára č.	d(X)		intenzita
1	17,9		S
2	11,4		VS
3	11,0		s
4	10,6		M
5	10,2		s
6	8,9		ií
7	8,7		M
8	8,1		M
9	7,2		VS
10	6,3		M
11	5,95		M
12	5,7		M
13	5,35		M
14	5,1		S
15	4,85		S
16	4,8		M
17	4,55		M
18	4,4		M

c .

Tabulka III

Difrakce rtg-záření pro CY-A/X-III intenzita čára č.

d(S)

1	12,0
2	10,4	VS
3	9,6	s
		o
4.	y *	vJ
5	7,9	M
6	7,7	S
7	6,7	M
8	6,0	M
9	5,83	s
10	5,3	M
11	5,2	M
12	4,92	S
13	4,88	S
14	4,58	Á/i
15	4,48	M
16	4,0	lí
17	3,59	JA
13	3,38

Claims (3)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Způsob výroby cyklosporinu A v orthorhombické (^2^2^2^) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 A, rozměr b je roven 22,9 Á, rozměr o

   c je roven 28,4 A a objem na asymetrickou jednotku je roven

   O

   2027 A, vyznačující se tím, že se cyklosporin A rozpustí v rozpouštécím prostředí, tvořeném polymerním etherem s molekulovou hmotností alespoň 200, za teploty alespoň 40 ’C na roztok obsahující od 5 do 60 % hmotnostních cyklosporinu A, vztaženo na celkovou hmotnost roztoku a cyklosporin A se krystaluje z tohoto rozpouštědla za vzniku orthorhombické krystalické formy vymezené výše.
2. 2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že rozpouštěcí prostředí obsahuje polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.
3. 3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že rozpouštěcí prostředí obsahuje glycerolpolyethylenglykolester, ester polyoxyethylensorbitanu, polyoxyethylenester nebo produkt trans-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpo-lyolů.