CZ37898U1 - Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní - Google Patents
Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní Download PDFInfo
- Publication number
- CZ37898U1 CZ37898U1 CZ2024-41905U CZ202441905U CZ37898U1 CZ 37898 U1 CZ37898 U1 CZ 37898U1 CZ 202441905 U CZ202441905 U CZ 202441905U CZ 37898 U1 CZ37898 U1 CZ 37898U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- bacteria
- preparation
- ccm
- mixture
- water
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 49
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 28
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 50
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- 241000589589 Chryseobacterium indologenes Species 0.000 claims description 22
- 241001136276 Sphingobacterium multivorum Species 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 21
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 9
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 9
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 9
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 7
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 7
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 244000144992 flock Species 0.000 description 5
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000611330 Chryseobacterium Species 0.000 description 4
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 4
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 4
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 4
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 4
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 3
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 3
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241001136275 Sphingobacterium Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N lufenuron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(C(F)(F)F)F)=CC(Cl)=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní
Oblast techniky
Předkládané technické řešení poskytuje bakteriální přípravek pro potlačení nežádoucí mikroflóry v líhních a následné zlepšení produkčních parametrů drůbeže po naskladnění na farmy.
Dosavadní stav techniky
Kuřata v komerční produkci se líhnou v líhních a bezprostředně po vylíhnutí jsou tak vystavena bakteriím, které se v prostředí vyskytují. Při líhnutí se v líhních hromadí vaječné skořápky a zbytky biologického materiálu pocházejícího z vajíček po vylíhnutí kuřat. V prostředí líhní je teplota 37 °C a 80% relativní vlhkost vzduchu, což v kombinaci s biologickým materiálem ze zbytků skořápek představuje ideální podmínky pro pomnožení bakterií, kterým jsou pak vystavena kuřata od prvních minut života. Mikrobiální složení v tomto materiálu však není známo a není znám ani vliv této mikroflóry na zdravotní stav kuřat po naskladnění na farmy. V líhních je produkce kuřat vysoce koncentrovaná, což na jedné straně zvyšuje riziko nesprávného rozvoje zdravotního stavu kuřat, ale na druhé straně představuje příležitost, jak v případě vhodného zásahu pozitivně ovlivnit zdravotní stav desítek tisíc kuřat. Přesto na dané téma nejsou dostupné žádné informace a neexistuje žádný mikrobiální preparát, který by se podával v líhních a jehož cílem by sice bylo kuře, ale nepřímo, přes ovlivnění mikroflóry prostředí líhní.
Podstata technického řešení
V rámci předkládaného technického řešení bylo studováno více než 50 vzorků odpadu ze skořápek, ve kterých bylo sekvenováním části genu pro 16S rRNA stanoveno složení bakteriální flóry. Toto složení bylo korelováno s úhyny kuřat po naskladnění na farmy. Korelační analýza identifikovala jak bakterie s nežádoucí pozitivní korelací se zvýšenými úhyny kuřat v prvních dnech života, tak i bakterie s negativní korelací k úhynům - tedy čím více bylo takových bakterií v odpadu ze skořápek, tím nižší úhyny kuřat byly zaznamenány na farmách. Na tyto bakterie jsme zaměřili kultivaci. Po kultivaci na krevním agaru byly suspektní kolonie identifikovány postupně pomocí hmotnostní spektrometrie (MALDI Biotyper), jehož výsledky byly následně potvrzeny sekvenováním části genu pro 16S rRNA a porovnáním získaných sekvencí s rRNA/ITS databázi v GenBank (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK _LOC=blasthome). Na závěr byla u získaných izolátů stanovena sekvence celého genomu.
Na základě uvedených výsledků byl vyvinut přípravek pro potlačení nežádoucí mikroflóry v líhních drůbeže, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum. Bakteriální přípravek podle technického řešení má oproti všem podobným, doposud připraveným produktům, tyto technické výhody:
- Obsažené bakterie (Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum) se běžně vyskytují v provozech líhní, ale nevyskytují se ve střevní mikroflóře kuřat, prasat nebo člověka.
- Obě bakterie patří mezi in vitro snadno kultivovatelné.
- Obě bakterie lze kultivovat v médiu bez přídavku jakýchkoli produktů živočišného původu. - Bakterie z přípravku neosídlují trávicí nebo respirační trakt drůbeže, a neovlivňují tak zdravotní stav kuřat.
- Po aplikaci v líhních dva dny před započetím líhnutí zůstávají obě bakterie v prostředí až do vylíhnutí kuřat a kompetují s pomnožením nežádoucích bakterií v prostředí jako je E. coli, Clostridium sensu stricto, Enterococcus, Klebsiella, Enterobacter nebo Pseudomonas.
- 1 CZ 37898 U1
- V reálných hejnech aplikace přípravku snižuje procento konfiskátů na porážce.
- Přípravek lze použít i v kombinaci s probiotiky pro osídlení trávicího traktu drůbeže.
Definice
BHI bujon (brain heart infusion, BHI) je mozkosrdcový bujón používaný pro kultivaci mikroorganismů.
OD600nmje zkratka označující optickou hustotu vzorku měřenou při vlnové délce 600 nm. Běžně se používá v mikrobiologii k odhadu koncentrace bakterií nebo jiných buněk v kapalině.
Master inokulum neboli matečné inokulum je kultura mikroorganismů pocházející z jedné dávky, zpracovaných společně v jedné operaci takovým způsobem, aby se zajistila stejnorodost a stabilita a nedošlo ke kontaminaci.
Krevní agar je kultivační půda, která je vhodná pro kultivaci mikroorganismů a umožňuje detekovat různé typy hemolýzy u inokulovaných mikroorganismů.
CFU je zkratka anglického termínu „Colony Forming Units“, tedy jednotky tvořící kolonie, a vyjadřuje počet mikroorganismů ve vzorku v jednotkách CFU/g či CFU/ml.
Potravinářsky přijatelné rozpouštědlo zahrnuje vodu, fyziologický roztok nebo popřípadě růstové médium pro bakterie.
Předmětem předkládaného technického řešení je bakteriální přípravek pro potlačení nežádoucí mikroflóry v líhních drůbeže, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum. Obě uvedené bakterie lze kultivovat současně, což má pozitivní dopad na případnou průmyslovou výrobu bakteriálního přípravku. Bakteriální přípravek podle technického řešení je vhodný zejména pro podání sprejováním v líhních 2 dny před započetím líhnutí kuřat, tedy 19. den embryonálního rozvoje. Bakteriální přípravek byl otestován jako bezpečný pro kuřata po sprejové aplikaci.
Ve výhodném provedení bakteriální přípravek obsahuje jako účinnou složku směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368. Tyto bakteriální kmeny jsou uloženy v České sbírce mikroorganismů (CCM), adresa: Kamenice 5/budova A25, 625 00 Brno, Česká republika. Datum uložení je 16.10.2023 a ukladatelem jsou: Ivan Rychlík, Martin Faldyna, Výzkumný ústav veterinárního lékařství, Hudcova 70, 621 00, Brno. V jednom provedení bakteriální přípravek dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, například růstové médium pro bakterie, zejména BHI bujón. V jednom mililitru bakteriálního přípravku je obsaženo 108 až 1010 CFU každé bakterie.
Předmětem předkládaného technického řešení je dále formulace pro sprejovou aplikaci obsahující bakteriální přípravek podle technického řešení a alespoň jedno potravinářsky přijatelné rozpouštědlo. Bylo zjištěno, že bakterie z přípravku vytěsňují z prostředí líhní nežádoucí bakterie jako je E. coli, Clostridium sensu stricto, Enterococcus, Klebsiella, Enterobacter nebo Pseudomonas, snižují jejich zastoupení v líhních, a tedy expozici čerstvě vylíhnutých kuřat těmto bakteriím. Uvedené bakterie sice nejsou považovány za bezprostředně patogenní, ale expozice právě vylíhnutých kuřat bez rozvinutého imunitního systému těmto oportunně patogenním bakteriím může vést k nežádoucím reakcím spojeným s defekty, které jsou poté hodnoceny jako důvody pro konfiskaci na porážce.
Formulace pro sprejovou aplikaci pro ošetření líhní tedy obsahuje výše popsaný bakteriální přípravek a kapalný nosič na bázi vody. Kapalným nosičem může být voda nebo fyziologický roztok nebo růstové médium pro bakterie, s výhodou sestávající z peptonu ze sójových bobů, kyselého hydrolyzátu sójových proteinů a kvasnicového extraktu a produktů fermentace bakterií
- 2 CZ 37898 U1 z této směsi. Bakteriální formulace pro sprejovou aplikaci obsahuje alespoň 108 CFU na mililitr tekuté formulace každé z obou obsažených bakterií. Obsažené bakterie Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum v líhních růstově kompetují s ostatními bakteriemi jako je E. coli, Clostridium sensu stricto, Enterococcus, Klebsiella, Enterobacter nebo Pseudomonas a v konečném důsledku snižují expozici vylíhnutých kuřat těmto nežádoucím bakteriím.
Objasnění výkresů
Obrázek 1. Složení mikroflóry v odpadu ze skořápek. Jednotlivé sloupcové grafy ukazují složení mikroflóry nebo zastoupení vybraných rodů v jednotlivých vzorcích odpadu skořápek. Mezi nejběžnější bakteriální rody a druhy v odpadu ze skořápek patří Chryseobacterium, E. coli, Clostridium sensu stricto, Enterococcus a Pseudomonas. Mezi Chryseobacterium, E. coli a Pseudomonas byl vzájemně negativní vztah - pokud se ve vzorcích vyskytlo Chryseobacterium nebo Sphingobacterium, E. coli a Pseudomonas byly velmi nízce zastoupeny. To vedlo k hypotéze o aktivní kolonizaci líhní Chryseobacterium a Sphingobacterium, a omezení multiplikace nežádoucích druhů.
Obrázek 2. Korelace mezi bakteriemi ve skořápkách a následnými úhyny kuřat po naskladnění na farmy. Korelace mezi zastoupením jednotlivých bakterií v odpadu ze skořápek a úhyny 7., 14., 21. a 28. den výkrmu. Pokud v odpadu ze skořápek dominovalo Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum, v hejnech byly zaznamenány snížené úhyny kuřat. Naopak pokud v tomto materiálu byly ve zvýšené míře zastoupeny rody Klebsiella, Pseudomonas, Enterococcus a Enterobacter, v hejnech poté byly zaznamenány zvýšené úhyny.
Obrázek 3. Vliv ošetření bakteriálním přípravkem na procento srážek na porážce. Ošetření přípravkem signifikantně snižovalo procento srážek na porážce.
Příklady uskutečnění technického řešení
Příklad 1: Identifikace a izolace vhodných bakteriálních druhů specifických pro mikroflóru v odpadu ze skořápek
Při návrhu bakteriálního přípravku podle předloženého technického řešení jsme izolací DNA, PCR přes část genu pro 16S rRNA a následným sekvenováním vzniklých PCR produktů identifikovali bakterie v odpadu vaječných skořápek. Korelační analýza mezi mikrobiálním složením a úhyny kuřat po naskladnění na farmy vedla k identifikaci bakteriálních druhů, které korelovaly s nízkými úhyny kuřat na farmách (Obr. 1 a 2). Na takové druhy jsme zaměřili následnou kultivaci, která byla prováděna ze vzorků skořápek odebraných v líhních kuřat naředěných ve sterilním fyziologickém roztoku o pH 7,5 při 25 °C. Jednotlivá ředění byla vyseta na krevní agar (komerčně dostupný např. od Biovendor a.s.) a inkubace probíhala aerobně po dobu 72 hodin při 37 °C. Z narostlých kolonií byl alikvot resuspendován v 1,0 ml BHI bujonu (komerčně dostupný např. od Sigma-Aldrich) s 10% glycerolem a zamražen při -70 °C pro další použití. Z jiného alikvotu byla izolována DNA, která byla využita pro stanovení kompletní sekvence bakteriální DNA a následnou druhovou identifikaci. Se znalostí celogenomové sekvence byly identifikovány geny specifické pro každou z uvedených bakterií a na ně byly zacíleny SybrGreen real-time PCR pro detekci a kvantifikaci cílových bakterií v libovolném typu vzorků s využitím následujících primerů:
| Cílová bakterie | forward primer | reverse primer |
| Chryseobacterium indologenes | ggtcattttgttattgctctggtg (SEQ ID NO. 1) | gtttcagattttcgtccttttggc (SEQ ID NO. 2) |
| Sphingobacterium multivorum | cgtgaaaccacatccagcac (SEQ ID NO. 3) | gcgtctatcccagtagagcg (SEQ ID NO. 4) |
- 3 CZ 37898 UI
Jednotlivé izolované kmeny bakterií byly identifikovány i dle sekvence genu pro 16S rRNA. Taje pro bakterie používané v dalších testech následující:
Chryseobacterium indologenes CCM 9369
CATACAATGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTAGCGGGAGGCCTAACA CATGCAAGCCGAGCGGTAGAGATCTTTCGGGATCTTGAGAGCGGCGTACGGGTGCG GAACACGTGTGCAACCTGCCTTTATCTGGGGGATAGCCTTTCGAAAGGAAGATTAAT ACCCCATAATATGTTGGATGGCATCATTCGACATTGAAAACTCCGGTGGATAGAGAT GGGCACGCGCAAGATTAGATAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGTCTGCGATCT TTAGGGGGCCTGAGAGGGTGATCCCCCACACTGGTACTGAGACACGGACCAGACTC CTACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGACAATGGGTGAGAGCCTGATCCAGCCA TCCCGCGTGAAGGACGACGGCCCTATGGGTTGTAAACTTCTTTTGTATAGGGATAAA CCTACTCTCGTGAGAGTAGCTGAAGGTACTATACGAATAAGCACCGGCTAACTCCGT GCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGTTTA AAGGGTCCGTAGGCGGATCTGTAAGTCAGTGGTGAAATCTCACAGCTTAACTGTGA AACTGCCATTGATACTGCAGGTCTTGAGTGTTGTTGAAGTAGCTGGAATAAGTAGTG TAGCGGTGAAATGCATAGATATTACTTAGAACACCAATTGCGAAGGCAGGTTACTA
AGCAACAACTGACGCTGATGGACGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACC CTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGCTAACTCGTTTTTGGGCTTTCGGGTTCAGAGA CTAAGCGAAAGTGATAAGTTAGCCACCTGGGGAGTACGAACGCAAGTTTGAAACTC AAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGATTATGTGGTTTAATTCGATGAT ACGCGAGGAACCTTACCAAGGCTTAAATGGGAAATGACAGGTTTAGAAATAGACTT TTCTTCGGACATTTTTCAAGGTGCTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGCCGTGAGGTGT TAGGTTAAGTCCTGCAACGAGCGCAACCCCTGTCACTAGTTGCCATCATTAAGTTGG GGACTCTAGTGAGACTGCCTACGCAAGTAGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAAT CATCACGGCCCTTACGCCTTGGGCCACACACGTAATACAATGGCCGGTACAGAGGG CAGCTACACAGCGATGTGATGCAAATCTCGAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGAG TCTGCAACTCGACTCTATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGCATCAGCCATGGCG CGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGCCATGGAAGTCTGGG GTACCTGAAGTCGGTGACCGTAACAGGAGCTGCCTAGGGTAAAACAGGTAACTAGG GCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAACATCTCATTTTA G(SEQ ID NO. 5)
-4CZ 37898 UI
Sphingobacterium multivorum CCM 9368
ATGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTAGCGGCAGGCCTAATACATGCA AGTCGGACGGGATCCATCGGAGAGCTTGCTCGAAGATGGTGAGAGTGGCGCACGGG TGCGTAACGCGTGAGCAACCTACCTCTATCAGGGGGATAGCCTCTCGAAAGAGAGA TTAACACCGCATAACATCAACAGTTCGCATGTTCGGTTGATTAAATATTTATAGGAT AGAGATGGGCTCGCGTGACATTAGCTAGTTGGTAGGGTAACGGCCTACCAAGGCGA CGATGTCTAGGGGCTCTGAGAGGAGAATCCCCCACACTGGTACTGAGACACGGACC AGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAAGGAATATTGGTCAATGGGCGGAAGCCTGAAC CAGCCATGCCGCGTGCAGGATGACTGCCCTATGGGTTGTAAACTGCTTTTGTCCAGG AATAAACCTAAATACGTGTATTTAGCTGAATGTACTGGAAGAATAAGGATCGGCTA ACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTATTG GGTTTAAAGGGTGCGTAGGCGGCCTATTAAGTCAGGGGTGAAATACGGTGGCTCAA CCATCGCAGTGCCTTTGATACTGATGGGCTTGAATCCATTTGAAGTGGGCGGAATAA GACAAGTAGCGGTGAAATGCATAGATATGTCTTAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGC TCACTAAGCTGGTATTGACGCTGATGCACGAAAGCGTGGGGATCGAACAGGATTAG ATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGATAACTCGATGTTGGCGATAGACAGCC AGCGTCCCAGCGAAAGCGTTAAGTTATCCACCTGGGGAGTACGCCCGCAAGGGTGA AACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGGAGCATGTGGTTTAATTCG ATGATACGCGAGGAACCTTACCCGGGCTTGAAAGTTAGTGAAGAGTGCAGAGACGC ACTCGTCCTTCGGGACACGAAACTAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGCCGT GAGGTGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATGTTTAGTTGCCAGCATG TCATGGTGGGGACTCTAAACAGACTGCCTGTGCAAACAGAGAGGAAGGTGGGGACG ACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGTCCGGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGT ACAGCGGGCAGCTACATAGCAATATGATGCTAATCTCTAAAAGCCATTCACAGTTCG GATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTTGGATTCGCTAGTAATCGCGTATCAG CAATGACGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGCCATGA AAGTTGGGGGTACCTAAAGCATGTTACCGCAAGGAGCGTGTTAGGGTAAAACCGAT AATTGGGGCTAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTACCGGAAGGTGCGGCTGGAATACCT CCTTT (SEQ ID NO. 6)
Příklad 2: Příprava bakteriálního přípravku
Čisté kultury obou výše uvedených izolátů (Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum) se skladují v BHI médiu (komerčně dostupný např. od Sigma-Aldrich) s 10% glycerolem při -70 °C. Při pomnožení se jednotlivé kultury vysejí na krevní agar (komerčně dostupný např. od Biovendor a.s.) a kultivují se 36 hodin při 37 °C. Poté se jednotlivé kultury samostatně resuspendují v 5 ml BHI média s 10% glycerolem do ODeoonm = 1, což odpovídá koncentraci IxlO9 CFU/ml. Následně se pětimililitrové objemy obou kultur smíchají a rozplní do jednomililitrových master inokulí. V případě přípravy probiotické směsi se 1 ml master inokula použije k zaočkování 3 litrů kultivační půdy a inkubuje se aerobně v médiu bez živočišných proteinů (pepton ze sojových bobů (enzymatický digestát), kyselý hydrolyzát sójového proteinu, kvasnicový extrakt) při 37 °C po dobu 36 hodin. Výsledná koncentrace fermentátu dosahuje hodnot IxlO8 CFU/ml. Po kultivaci se fermentát Ch. indologenes a .S'. multivorum centrifůguje při 5000g a 20 °C po dobu 20 min. Po odstranění supematantu se peleta resuspenduje v 30 ml BHI média s 10% glycerolem a zamrazí se při -70 °C. Výsledný přípravek tedy obsahuje IxlO10 CFU/ml a jedna dávka přípravku o objemu 30 ml je dostačující na ošetření jedné dolíhně s 30 000 vejci.
Příklad 3: Vliv ošetření bakteriálním přípravkem na procento srážek na porážce.
Devatenáctý den embryonálního vývoje se bakteriální přípravek obsahující minimálně 1010 CFU/ml naředí lOOx ve sterilním fýziologickém roztoku a sprejováním se aplikuje do prostředí líhně. Celkem bylo porovnáno 13 hejn po ošetření bakteriálním přípravkem (celkem 487 700 kuřat) s 5 kontrolními hejny (207 800 kuřat). Ošetření bakteriálním přípravkem signifikantně snižovalo procento srážek na porážce (Obr. 3).
-5CZ 37898 U1
Závěry
Bakterie Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum z bakteriálního přípravku podle předloženého technického řešení osídlují prostředí líhní, ve kterém kompetují s nežádoucí 5 mikroflórou. Přípravek se s výhodou aplikuje sprejováním v líhni 19. den embryonálního vývoje.
Přípravek nevykazuje žádné negativní účinky, po jeho podání nebyly zaznamenány žádné úhyny drůbeže a bakterie z přípravku drůbež nekolonizují. Proto se dá přípravek podle předloženého technického řešení s výhodou použít jako přípravek zlepšující celkový zdravotní stav drůbeže po vylíhnutí, a to nepřímo přes ochranu prostředí v líhních. Výsledný efekt se projeví nižším 10 procentem srážek drůbeže na porážce po ukončení výkrmu.
Claims (12)
1. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum.
2. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368.
3. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum a dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou růstové médium pro bakterie.
4. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368 a dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou růstové médium pro bakterie.
5. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum a obsahuje 108 až 1010 CFU každé bakterie v jednom mililitru přípravku.
6. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368 a obsahuje 108 až 1010 CFU každé bakterie v jednom mililitru přípravku.
7. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum, dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou růstové médium pro bakterie, přičemž obsahuje 108 až 1010 CFU každé bakterie v jednom mililitru přípravku.
8. Přípravek pro ošetření prostředí líhní, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368, dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou růstové médium pro bakterie, přičemž obsahuje 108 až 1010 CFU každé bakterie v jednom mililitru přípravku.
9. Formulace pro sprejovou aplikaci, vyznačující se tím, že obsahuje přípravek pro ošetření prostředí líhní, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum, a uvedená formulace dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující vodu, fyziologický roztok a růstové médium pro bakterie, přičemž obsah každé bakterie v jednom mililitru formulace je alespoň 107 CFU.
10. Formulace pro sprejovou aplikaci, vyznačující se tím, že obsahuje přípravek pro ošetření prostředí líhní, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368, a uvedená formulace dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující vodu, fyziologický roztok a růstové médium pro bakterie, přičemž obsah každé bakterie v jednom mililitru formulace je alespoň 107 CFU.
11. Formulace pro sprejovou aplikaci, vyznačující se tím, že obsahuje přípravek pro ošetření prostředí líhní, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes a Sphingobacterium multivorum, a uvedená formulace dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující vodu, fyziologický roztok a růstové médium pro bakterie, přičemž obsah každé bakterie v jednom mililitru formulace je v rozmezí od 108 do 1010 CFU.
12. Formulace pro sprejovou aplikaci, vyznačující se tím, že obsahuje přípravek pro ošetření prostředí líhní, který jako účinnou složku obsahuje směs bakterií Chryseobacterium indologenes
- 7 CZ 37898 U1
CCM 9369 a Sphingobacterium multivorum CCM 9368, a uvedená formulace dále obsahuje kapalný nosič na bázi vody, s výhodou vybraný ze skupiny zahrnující vodu, fyziologický roztok a růstové médium pro bakterie, přičemž obsah každé bakterie v jednom mililitru formulace je v rozmezí od 108 do 1010 CFU.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2024-41905U CZ37898U1 (cs) | 2024-04-16 | 2024-04-16 | Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2024-41905U CZ37898U1 (cs) | 2024-04-16 | 2024-04-16 | Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ37898U1 true CZ37898U1 (cs) | 2024-05-21 |
Family
ID=91185431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2024-41905U CZ37898U1 (cs) | 2024-04-16 | 2024-04-16 | Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ37898U1 (cs) |
-
2024
- 2024-04-16 CZ CZ2024-41905U patent/CZ37898U1/cs active IP Right Grant
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0033584B1 (en) | Process for the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry | |
| Mead | Prospects for ‘competitive exclusion’treatment to control salmonellas and other foodborne pathogens in poultry | |
| CN108504601B (zh) | 一株乳酸片球菌hew-ap27及其应用 | |
| CN106282072B (zh) | 一种复合乳酸菌微生态制剂及其制备方法与应用 | |
| CN112011481B (zh) | 一株防治畜禽细菌性腹泻的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| JPH09506625A (ja) | サルモネラの調節用の共生体 | |
| EP3160224B1 (en) | In ovo delivery of probiotic cultures | |
| CN105176932A (zh) | 利用对大肠杆菌具有广泛抗菌活性的噬菌体防止及处理大肠杆菌感染的方法 | |
| CN113583972A (zh) | 一株可降低抗生素耐药性的大肠杆菌噬菌体及其应用 | |
| CN111004745B (zh) | 具有抑制大肠杆菌k88生长的民猪源贝莱斯芽孢杆菌 | |
| JPH08502019A (ja) | サルモネラ菌抑制のためのプロバイオテック | |
| CN112375712A (zh) | 一株乳酸乳球菌及其应用 | |
| CN115637240A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| CN105104712B (zh) | 一种微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN114891678B (zh) | 多粘芽孢杆菌cpl258及其筛选和应用 | |
| CZ37898U1 (cs) | Bakteriální přípravek pro ošetření prostředí líhní | |
| CN110257299B (zh) | 一种阴沟肠杆菌在促进反刍动物生长的应用 | |
| CN102702373A (zh) | 一种乳酸杆菌细胞壁完整肽聚糖及其在提高iec抗菌肽表达水平中的应用 | |
| Rasheed et al. | Isolation, identification and genetic analysis of Mannheimia haemolytica in ovine clinical mastitis in Mosul city | |
| JP2007244372A (ja) | バチルス・チューリンゲンシスを含む動物の腸内感染症予防・治療用の飼料添加剤 | |
| CN116496929B (zh) | 一种猪源芽孢杆菌及其应用 | |
| KR102203670B1 (ko) | 신규한 엔테로코커스균 특이 박테리오파지 eh11 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
| KR100307187B1 (ko) | 알긴산올리고당유도체를이용한가축질병예방및치료제 | |
| KR101823073B1 (ko) | 신균주 sjp-snu kctc12756bp 및 이의 용도 | |
| RU2678978C2 (ru) | Способ получения жидкого пробиотического препарата |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20240521 |