CZ355199A3

CZ355199A3 - Sloučeniny

Info

Publication number: CZ355199A3
Application number: CZ19993551A
Authority: CZ
Inventors: Thomas Mcinally; Alan Tinker
Original assignee: Astra Pharmaceuticals Ltd.
Priority date: 1997-04-09
Filing date: 1998-04-07
Publication date: 2000-03-15
Also published as: AU7091098A; BR9807950A; NZ338006A; US6303613B1; CA2285388A1; JP2001519805A; KR20010006143A; SK128999A3; IS5208A; NO994900D0; PL336141A1; EE9900448A; WO1998045294A1; SE9701304D0; IL132085A0; TR199902495T2; CN1259131A; EP0973772A1; HUP0001865A2; NO994900L

Description

SLOUČENINY

Oblast vynálezu

Tento vynález se vztahuje k novým sloučeninám, které jsou aminopyrimidinovými deriváty. Vynález se rovněž zabývá souvisejícími aspekty, zahrnujícími způsoby přípravy sloučenin, přípravky tyto sloučeniny obsahující a jejich použití jako farmaceutických přípravků. Jsou zde rovněž poskytnuty chemické meziprodukty použitelné k přípravě sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý je vytvářen v savčích buňkách z L-argininu působením specifických syntetáz oxidu dusnatého (NOS). Tyto enzymy spadají do dvou odlišných tříd - konstitutivních syntetáz oxidu dusnatého (cNOS) a induktabilních syntetáz oxidu dusnatého (iNOS). V současné době byly identifikovány dvě konstitutivní syntetázy oxidu dusnatého a jedna induktabilní syntetáza oxidu dusnatého. Endoteliální enzym (ecNOS) ze skupiny konstitutivních syntetáz se účastní relaxace hladkého svalstva a regulace krevního tlaku a krevního toku, zatímco neuronální enzym (ncNOS) slouží jako neurotransmitor a ukazuje se, že se účastní při regulaci různých biologických pochodů, jako je mozková ischemie. Induktabilní syntetáza oxidu dusnatého je předpokládána zejména u patogeneze zánětlivých onemocnění. Regulace těchto enzymů by proto nabízela významnou možnost v léčbě velkého počtu stavů nemocí [J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 31.

221 až 230 (1996)].

Podstata vynálezu • · • · • · ·

Podle vynálezu je poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I)

ve které

R¹ představuje vodík, alkylovou skupinu s 1 až 6 uhlíky alkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíky, halogen nebo trifluormethyl, R² představuje vodík, alkylovou skupinu s 1 až 6 uhlíky,

A představuje pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z kyslíku (0), dusíku (N) nebo síry (S), nebo šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku, (i) R³ představuje fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z kyslíku, dusíku a síry, kde fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh mohou být případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem, hydroxyskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, kyanoskupinou, trifluormethylovou skupinou, nitroskupinou nebo skupinou -NR⁵R⁶;

a R⁴, R⁵ a R⁵ nezávisle představují vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

• · • *

nebo (ii) R³ představuje alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku nebo alkinylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku;

a R⁴ představuje vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až atomy uhlíku;

nebo (iii) R³ a R⁴ společně představují (CH₂)_a-Z-(CH₂)^,

Z představující skupinu N(COOR⁷), kde R⁷ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo haloalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo R⁷ představuje skupinu (CH₂)_nYR⁹, ve které n představuje celé číslo od 2 do 5,

Y představuje atom kyslíku, síry nebo vazbu a R⁹ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku případně substituoQ vanou halogenem nebo nitroskupinou nebo R představuje fenyl případně substituovaný alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem nebo nitroskupinou; a a b nezávisle představují celé číslo od 1 do 3 za předpokladu, že a+b je 3 nebo 4;

nebo (iv) R³a R⁴ společně představují (CH₂)_a-Z-(CH₂)_b, kde Z před stavující skupinu N(COR⁸), kde R⁸ představuje fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou zvoleny z kyslíku, dusíku a síry, kde fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh mohou být popřípadě substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem, nitroskupinou, kyanoskupinou, trifluormethylovou skupinou, alkylsulfonylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo aminosulfonylovou skupinou; a a a b nezávisle představují celé číslo od 1 do 3 za předpokladu, že a+b je 3 nebo 4;

• · • · nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery těchto látek.

Vynález dále poskytuje způsob přípravy takových sloučenin nebo farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, racemátů a tautomerů těchto látek.

Podle vynálezu je rovněž poskytnuta sloučenina obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemáty a tautomery této látky pro použití jako léčivo .

Jiný aspekt vynálezu poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátu a tautomeru této látky při výrobě léčiva, pro léčbu nebo profylaxi nemocí nebo stavů, ve kterých inhibice syntetázy oxidu dusnatého je prospěšná.

Zvláštní aspekt vynálezu poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátu a tautomeru této látky při výrobě léčiva, pro léčbu nebo profylaxi zánětlivé nemoci.

Podle vynálezu je zde rovněž poskytnuta metoda léčení nebo snížení rizika nemocí nebo stavů, ve kterých je inhibice syntetázy oxidu dusnatého prospěšná, které zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enanciomeru, racemátu a tautomeru této látky osobě, trpící takovou nemocí nebo které taková nemoc hrozí.

Zvláště je zde poskytnuta metoda léčení nebo snížení rizika zánětlivé nemoci osoby, trpící takovou nemocí nebo • · · které taková nemoc hrozí, kde metoda zahrnuje podávání tera peuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu a tautomeru této látky dané osobě.

Sloučeniny v presentovaném vynálezu mohou být rovněž výhodně používány v kombinaci s jinou farmaceuticky aktivní substancí, zejména v kombinaci se selektivním inhibitorem induktabilní isoformy cyklooxygenázy (COX-2). Tímto je v dalším aspektu vynálezu poskytnuto použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu a tautomeru této látky v kombinaci s inhibitorem cyklooxygenázy (COX-2) pro léčbu zánětu, zánět livé nemoci a stavů spojených se zánětem. Rovněž je zde poskytnuta metoda léčení nebo snížení rizika zánětu, zánětlivé nemoci a potíží spojených se zánětem u osoby, trpící takovou nemocí nebo které takový stav hrozí, kde metoda zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu a tautomeru této látky v kombinaci s inhitorem cyklooxygenázy (COX-2) dané osobě.

A představuje přednostně thienový kruh. Zvláště výhodné je, když sloučenina obecného vzorce (I) je thieno[2,3-d]pyrimidin nebo thieno[3,2-d]pyrimidin.

V jiném výhodném ztělesnění A představuje pyridový kruh. Zvláště výhodné je, když sloučenina obecného vzorce (I) je pyrido[2,3-d]pyrimidin, pyrido[3,2-d]pyrimidin, pyrido[3,4-d]pyrimidin nebo pyrido[4,3-d]pyrimidin.

Pyrido[3,2-d]pyrimidinové sloučeniny obecného vzorce (I) jsou nejvýhodnější.

• ·

- ή:

*5

R^J představuje přednostně fenylovou, cyklopropylovou, ethylovou, thiazolylovou, ethinylovou nebo furanylovou skupinu.

V jiném výhodném ztělesnění, kde R³ a R⁴ jsou v souladu s možností (iii) ve vzorci (I), Z představuje N(COOC₂H₅) a a a b má každý hodnotu 2.

Zvláště přednostní sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnuj i:

7-amino-4,5-dihydro-5-fenylthieno[3,2-d]pyrimidin;

5-cyklopropyl-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidin;

5-ethyl-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidin;

5- ( 2-thiazolyl)-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidin;

5-( 2-furyl)-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidin;

7-amino-4,5-dihydro-5-ethylthieno[3,2-d]pyrimidin;

ethyl-[7'-aminospiro[piperidin-4,5'(4'H)-thieno[3,2-d]pyrimidin]-l-karboxylat];

ethyl-[4'-amino-3'-chlorospiro[piperidin-4,6'(7H)-thieno[2,3-d]pyrimidin]-l-karboxylat];

4'-amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1 Ή)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)];

4'-amino-(2-thienoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1Ή)• ·

7· · · • ·”1 · · *

-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2¹ -(1Ή)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)]-l-karboxylat];

4'-amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1Ή)-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-(1'H)-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)]-1-karboxylat];

' -amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4, 2 ' - (1 Ή) -(pyrido[4,3-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4, 2 ' - (1 Ή) - (pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylat];

4-amino-2-(2-thienyl)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)];

7'-amino-l-(6-kyan-3-pyridinkarbonyl)spiro[piperidin-4,5'-(4 Ή) -(thieno[ 3,2-d]pyrimidin) ];

a farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery nebo tautomery těchto látek.

Pokud není uvedeno jinak, pojem alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku zde popisuje alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo cyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 6 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methylovou, ethylovou, n-propylovou, isopropylovou, n-butylovou, isobutylovou, terc.-butylovou, cyklopentylovou a cyklohexylovou skupinu.

• 0

Pokud není uvedeno jinak, pojem alkenylová skupina se 2 až 6 atomy uhlíku zde popisuje alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 dvojnou vazbu nebo cyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 6 atomů uhlíku a obsahující 1 dvojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethenylovou, 1a 2-propenylovou, 2-methyl-2-propenylovou, 2-butenylovou, cyklopentenylovou a cyklohexenylovou skupinu.

Pokud není uvedeno jinak, pojem alkinylová skupina se 2 až 6 atomy uhlíku zde popisuje alkinylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 6 atomů uhlíku a jednu trojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethinylovou, 1- a 2-propinylovou a 2-butinylovou skupinu.

Pokud není uvedeno jinak, pojem alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku zde popisuje alkoxyskupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 1 až 6 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methoxyskupinu, ethoxyskupinu, n-propoxyskupinu, isopropoxyskupinu, n-butoxyskupinu, isobutoxyskupinu, sek.-butoxyskupinu a terc.-butoxyskupinu.

Jiné skupiny, například alkylthioskupina, haloalkylová, alkylsulfonylová skupina jsou vysvětleny podobně.

Výše uvedený způsob přípravy sloučenin podle tohoto vynálezu nebo farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, racemátů a tautomerů těchto látek zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce (II) • · • ·

ve které

A, R a R mají význam uvedený vyse, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo s acetalovým deri vátém této sloučeniny

R³ C 0 R⁴ (III) kde R³ a R⁴ mají význam uvedený výše;

nebo (b) reakci sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV

R²

(IV)

(IV’) kde A, R¹, R², R³ a R⁴ mají význam uvedený výše a R⁸ předs tavuje alkylovou skupinu;

• ·

- ία·»· ·· s amoniakem nebo ekvivalentem této látky;

nebo (c) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), kde R³ a R⁴jsou podle volby (i) v obecné definici vzorce (I) uvedené výše a jeden nebo oba zbytky R⁵ a R⁶ představují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylací příslušné sloučeniny, ve které jeden nebo oba zbytky R⁵ a R⁶ představují vodík;

nebo (d) přípravu sloučeniny vzorce (I), kde R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylací příslušné sloučeniny, ve které R² představuje vodík; nebo (e) odstranění ochranné skupiny u sloučeniny vzorce (I), kde jeden nebo více atomů dusíku a/nebo jiný atom jsou chráněny;

(f) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), kde R³ a R⁴ jsou v souladu s volbou (iv) v obecné definici vzorce (I) uvedené výše, reakcí sloučeniny obecného vzorce (V)

kde A, R , R , a a b mají význam uvedený výše, se sloučeninou obecného vzorce (VI)

X-L (VI) kde

X představuje COOR⁷ nebo COR⁸, R⁷ a R⁸ mají význam uvedený výše a L je odstupující skupina;

a kde je žádoucí nebo nutná přeměna výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její jiné soli na svou farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak, a kde je to žádoucí, přeměnu výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) na jejich optický izomer.

Při způsobu (a) reakce sloučenin obecných vzorců (II) a (III) se může provést mícháním reaktantů v inertním rozpouštědle při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou varu rozpouštědla po dobu až 72 hodin nebo dokud reakce není proběhlá úplně. Původci zjistili, že je často vhodné použít sloučeninu obecného vzorce (III) v chráněné formě, například ve formě acetalu, jako je diethoxyacetal. Způsob se potom přednostně uskutečňuje v přítomnosti kyselého katalyzátoru. Potřebné acetaly mohou být vytvářeny reakcí nechráněné sloučeniny obecného vzorce (III) s alkoholem, například etanolem, použitím způsobů dobře známých v oboru.

Při způsobu (b) reakce se může provést probubláváním plynného amoniaku roztokem sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV) v nereaktivním polárním rozpouštědle. Jinak se může reakce provést působením roztoku sloučeniny vzorce (IV) nebo (IV) v polárním protickém rozpouštědle na vodný roztok amoniaku, amoniak v acetonitrilu nebo roztok amoniaku v methanolu nebo zpracováním sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV) s jodidem amonným a amoniakem v alkoholickém roztoku.

Při způsobech (c) a (d) alkylační reakce se může provést způsoby dobře známými v oboru. Například amin se může ·· ·« • · · · • · · • · ·

·· ··

nechat reagovat s alkylhalogenidem, zejména s alkylbromidem nebo alkyljodidem.

Při způsobu (e) ochranné skupiny pro aminy zahrnují alkyl, aralkyl, acyl, acylsufonyl, arylsulfonyl a trialkylsilyl. Koncové alkiny mohou být rovněž chráněny použitím trialkylsilylové skupiny. Když je ochranná skupina trialkylsilyl, tato skupina může být odstraněna působením například tetra-n-butylamoniumfluoridu. Jiné ochranné skupiny a další podrobnosti procesů jejich odstranění lze najít v odkazech k základnímu textu Protecting Groups in Organic Synthesis,

2.vydání (1991), autorů Greena a Wutse.

Při způsobu (f) reakce se může provést smísením reaktantů v nereaktivním rozpouštědle při vhodné teplotě za přítomnosti baze, například pyridinu. Ačkoli existuje množství standardních odstupujících skupin L, původci dávají přednost tomu, aby L představoval halogen, především chlor nebo brom.

Předkládaný vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce (I) ve formě solí, zvláště adičních solí s kyselinou. Vhodné soli jsou ty, které se tvoří s organickými i anorganickými kyselinami. Takové adiční soli s kyselinou jsou obvykle farmaceuticky přijatelné, ačkoli farmaceuticky nepřijatelné kyseliny mohou být využity při přípravě a čištění těchto sloučenin. Soli, kterým je třeba dát přednost, jsou ty, které se tvoří z chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, fosforečné, citrónové, vinné, mléčné, pyrohroznové, octové, jantarové, fumarové, jablečné, maleinové, methansufonové a benzensulfonové kyseliny.

Soli sloučenin obecného vzorce (I) se mohou vytvořit reakcí volné baze nebo soli, enantiomerů nebo tautomeru • · • ·

- 13” těchto látek s jedním nebo více ekvivalenty vhodné kyseliny. Reakce se může provést v rozpuštědle nebo prostředí, ve kterém je sůl nerozpustná nebo v rozpuštědle, ve kterém je sůl rozpustná, například ve vodě, dioxanu, ethanolu, tetrahydrofuranu nebo diethyetheru, nebo ve směsi rozpuštědel, které může být odstraněno ve vakuu nebo lyofilizací. Reakce může rovněž být podvojnou výměnou nebo může být provedena na iontoměničové pryskyřici.

Nové meziprodukty vzorců (II), dalším aspektem vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce (II) sloučeniny obecného vzorce (VII) (IV), (IV) a (V) jsou lze připravit redukcí

(VII) kde i o ,

A, R a R mají vyznám uvedený výše.

Tento proces redukce je možno provést působením vodíku na sloučeninu obecného vzorce (VII) za přítomnosti paladia na uhlí nebo rhodia na oxidu hlinitém nebo Raneyova niklu za zvýšené teploty a tlaku, obvykle při teplotě 65 °C a tlaku 3,039 MPa.

Sloučeniny obecného vzorce (VII) lze připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce (VIII)

R²

CN kde

A, R a R mají význam uvedený výše, s hydrochloridem hydroxylaminu.

V této reakci se tyto dva reaktanty mohou společně zahřívat v přítomnosti baze, jako je methoxid sodný, v methanolu.

Jinou metodou přípravy sloučenin obecného vzorce (II) je působení sloučeniny obecného vzorce (VIII) na primární alkohol, jako je ethanol, v přítomnosti kyseliny a následně působením chloridu amonného k získání sloučeniny obecného vzorce (II), nebo se sloučenina obecného vzorce (VIII) může zpracovat se směsí chloridu amonného a trimethylhliníku v rozpuštědle jako je toluen.

Další možnou metodou přípravy sloučenin obecného vzorce (II) se může působit na sloučeninu obecného vzorce (IX)

R²

Nx

M⁰

NH₂ (IX)

- 1·5· kde

A, R¹ a R² mají význam uvedený výše, amoniakem.

Reakce se uskuteční za standardních podmínek, ačkoli krok předreakční aktivace je obvykle nezbytný, například použitím Meerweinova činidla.

Sloučeniny obecného vzorce (III), (VIII) a (IX) jsou buď známy nebo se mohou jednoduše připravit obvyklými metodami .

o

Sloučeniny obecného vzorce (VIII) a (IX), kde R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku lze připravit alkylaci příslušných sloučenin obecného vzorce (VIII) nebo (IX), kde R² představuje vodík, procesem popsaným výše pod d).

Sloučeniny obecného vzorce (IV) lze připravit reakcí sloučenin obecného vzorce (X)

kde

A, R¹ a R² mají význam uvedený výše, • * « · · · · ? * ··· · · ·

se sloučeninou obecného vzorce (III) v přítomnosti alkyljodidu.

Podmínky pro tuto reakci jsou obdobné podmínkám pro proces (a), popsaným výše.

Sloučeniny obecného vzorce (X) lze připravit působením Lawessonova činidla na sloučeninu obecného vzorce (IX).

Sloučeniny obecného vzorce (II) lze rovněž připravit přeměnou sloučeniny obecného vzorce (X) na příslušný alkylthioderivát působením alkylhalogenidu (obzvláště alkyljodidu) a následnou reakcí s amoniakem, po kterém následuje proces analogický procesu (b) popsanému výše.

Meziprodukty se mohou použít v chráněné formě. Chrániči skupiny a další podrobnosti procesu jejich odstranění lze najít v odkazech k základnímu textu Protecting Groups in Organic Synthesis, 2.vydání (1991), autorů Greena a Wutse.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu a jejich meziprodukty lze izolovat z reakčních směsí a pokud je to nezbytné, dále čistit použitím standardních technik.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v enantiomerních formách. Proto všechny enanciomery, diastereomery, racemáty a jejich směsi jsou zahrnuty do oblasti tohoto vynálezu.

Rozličné optické izomery se mohou izolovat oddělením z racemické směsi sloučenin použitím obvyklých technik, nap• · ' » · · * • · · · · · říklad frakční krystalizace nebo HPLC.

Meziprodukty mohou rovněž existovat ve formách enantiomerů a mohou se použít jako čištěné enantiomery, diastereomery, racemáty nebo jejich směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat ve formě jiného tautomeru. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou poskytnuty ve formě jiného tautomeru nebo jako jejich směs.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery jsou využitelné, protože vykazují farmakologickou aktivitu na zvířatech. Zejména jsou tyto sloučeniny aktivní jako inhibitory enzymu syntetázy oxidu dusnatého. Zvláště jsou inhibitory induktabilní isoformy enzymu syntetázy oxidu dusnatého přítomné v makrofágách a předpokládá se, že budou užitečné v léčbě, například jako protizánětlivé látky.

Sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery jsou využitelné v léčbě nebo profylaxi nemocí nebo stavů, na kterých se podílí syntéza nebo nadbytečná syntéza syntetázy oxidu dusnatého. Zejména jsou tyto sloučeniny indikovány k použití v léčbě zánětlivých stavů u savců včetně člověka.

Zvláště je možno uvést tyto stavy:

osteoarthritida, revmatoidní arthritida, revmatoidní spondylitida, dnová arthritida, a jiné stavy arthritidy, způsobující záněty kloubů;

ekzém, lupénka, dermatitida nebo stavy zánětu kůže, jako je . » spálení sluncem;

zánětlivé stavy očí zahrnující uveitidu a konjuntivitidu;

plicní onemocnění, na kterých se podílí zánět, například astma, bronchitida, nemoc holubářů, farmářské plíce, akutní respiratorní stresový syndrom;

bakteremie, endotoxemie (septický šok), aftózní vředy, gingivitida, horečka, bolest a pankreatitida;

stavy gastrointestinálního traktu, zahrnující Crohnovu nemoc, atrofickou gastritidu, variaformní gastritidu, ulcerativní colitidu, břišní celiakální nemoc, regionální ileitidu, žaludeční vředy, syndrom dráždivého tračníku, poškození gastrointestinálního traktu způsobené infekcemi, například Helicobacter pylori, nebo léčbou nesteroidními protizánětlivými léčivy;

a jiné stavy související se zánětem.

Tyto sloučeniny jsou rovněž užitečné v léčbě a mírnění akutní nebo persistující zánětlivé nebo neuropatické bolesti nebo bolesti centrálního původu.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery rovněž mohou být užitečné v léčbě a profylaxi nemocí a stavů dalších než byly uvedeny výše. Například mohou být tyto sloučeniny užitečné v léčbě aterosklerózy, cystické fibrózy, hypotenze související se septickým a/nebo toxickým šokem, v léčbě dysfunkcí imunitního systému, jako pomocná léčba ke krátkodobé imunosupresi při transplantaci orgánů, v léčbě cév- ιβ:« • · * · • · · • » · • · · · · · • · · · · nich komplikací souvisejících s diabetem a v kombinované léčbě s cytokiny, například TNF (tumor necrosis faktorem) nebo interleukiny.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou rovněž vykazovat inhibiční aktivitu proti nervové isoformě syntetázy oxidu dusnatého. Tím mohou být rovněž užitečné v léčbě hypoxie, například v případech srdeční zástavy a mrtvice, neurodegenerativních onemocnění zahrnujících nervovou degeneraci a/nebo nekrózu při poruchách jako je hypoxie, hypoglykemie, epilepsie a při vnějších poraněních (jako je zranění hlavy a páteře), hyperbarické kyslíkové křeče a toxicita, demence, například presenilní demence a Alzheimerova nemoc a demence související s AIDS, Sydenhamova chorea, Parkinsonova nemoc, Tourettův syndrom, Huntingtonova chorea, amyotrofní laterální skleróza, Korsakovova nemoc, imbecilita související s poruchami mozkových cév, poruchy spánku, schizofrenie, deprese, autismus, sezónní afektivní poruchy, pásmová nemoc, deprese nebo jiné symptomy související s premenstruálním syndromem (PMS), úzkost a septický šok. Lze rovněž očekávat, že sloučeniny obecného vzorce (I) vykazují účinky v prevenci a obratu tolerance na opiáty a benzodiazepiny, léčbě drogové závislosti, léčbě migrény a jiných bolestí hlavy, majících cévní příčiny, neurogenních zánětů, v léčbě poruch gastrointestinální motility, rakoviny a navození porodu.

Pro výše uvedené léčebné indikace se budou samozřejmě používané dávky lišit s použitou látkou, způsobem podání a požadovanou léčbou. Nicméně všeobecně uspokojivé výsledky lze získat jestliže jsou sloučeniny podávány v dávce mezi 1 mg až 2000 mg pevné formy denně.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a farmaceuticky přija• · ♦· • · · · • · r • · 9 9

20··— · · >« ·· • · * • · · telné deriváty těchto látek se mohou použít samostatně nebo ve formě vhodného farmaceutického přípravku, ve kterém sloučenina nebo její derivát jsou smíchány s farmaceuticky vhodnou pomocnou látkou, ředidlem nebo nosičem. Podání může být enterální [to zahrnuje perorální (ústy), sublingvální (pod jazyk), nebo rektální], intranasální (do nosu), intravenosní (do žíly), lokální (místní) nebo jinou parenterální cestou, ale není omezeno na tyto způsoby. Běžné postupy pro výběr a přípravu vhodného farmaceutického složení jsou popsány například v publikaci M.E.Aulton: Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, Churchill Livingstone (1988). Farmaceutický přípravek výhodně obsahuje méně než 80% a ještě výhodněji méně než 50% sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu nebo tautomeru.

Je zde rovněž poskytnut proces pro přípravu takových farmaceutických přípravků, které obsahují směs obsahových látek.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a farmaceuticky přijatelné deriváty těchto látek lze rovněž s výhodou použít v kombinaci s inhibitory cyklooxygenázy COX-2. Zvláště upřednostněny jsou inhibitory cyklooxygenázy COX-2 celecoxib a MK-966. Inhibitor syntetáz oxidu dusnatého (NOS) a inhibitor cyklooxygenázy COX-2 lze vyrábět společně v jednom farmaceutickém přípravku pro podání v jedné dávce lékové formy nebo může být každá látka formulována samostatně, takže jsou podávány oddělené dávky, to buď současně nebo následně po sobě.

Příklady provedení vynálezu • ·

·

- 21,

Vynález je ilustrován následujícími příklady, ale v žádném případě není omezen pouze na ně:

Příprava 1

Hydrochlorid 2-amidino-3-aminopyridinu (a) 3-Az ido-2-kyanpyridin

Roztok 2,6 g (14,2 mmol) 3-brom-2-kyanpyridinu [Chem. Pharm. Bull., 33, 565 (1988)] a 1,0 g (15,3 mmol) azidu sodného ve 30 ml dimethylformamidu se zahřívá na teplotu 90 °C po dobu 16 hodin. Výsledná směs se ochladí, přidá voda a celá směs se extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Odpařením rozpouštědla vznikne olej, který se čistí pomocí bleskové chromatografie na silikagelu, při eluování směsí ethylacetátu s benzínem v poměru 1:3 až 1:1. Jako odparek se dostane produkt MS (El) m/z 145, ¹H NMR (d₆-DMSO) 8,50 (lH,d), 8,09 (lH,d), 7,77 (lH,dd) (b) 3-Amino-2-kyanpyridin

Roztok 1,44 g (9,9 mmol) 3-azido-2-kyanpyridinu ve 100 ml ethanolu se hydrogenuje na 50 g 10% paladia na uhlí při teplotě místnosti a tlaku 24,045 kPa po dobu 18 hodin. Katalyzátor se odfiltruje přes rozsivkovou zeminu (Celit) a filtrát se odpaří a oddělí od produktu (1,16 g).

¹H NMR (dg-DMSO) 7,87 (lH,d), 7,33 (lH,dd), 7,22 (lH,d), 6,28 (2H,S).

(c) 3-Amino-2-[amino(hydroxyimino)methyl]pyridin « _ο· 4 — 22··^ ··

Roztok 1,18 g (9,9 mmol) 3-amino-2-kyanpyridinu, 0,64 g (12 mmol) methoxidu sodného a 0,83 g (12 mmol) hydrochloridu hydroxylaminu v 10 ml ethanolu se zahřívá za zpětného toku po dobu 1 hodiny. Směs se zfiltruje a filtrát se odpaří na olej, který se čistí pomocí bleskové chromatografie na sloupci silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu s meta nolem v poměru 50:1 až 10:1 jakožto elučním činidlem, aby se dostal pevný produkt žluté barvy (0,82 g), MS (+CI) m/z 153 [M+H]⁺;

¹HNMR (dg-DMSO) 9,80 (1H, široký s), 7,80 (lH,dd), 7,10 (lH,d), 7,08 (lH,d) 6,62 (2H,s), 5,90 (lH,s).

(d) 2-Amidino-3-aminopyridinhydrochlorid

Suspenze 0,82 g (5,4 mmol) 3-amino-2-(amino(hydroxyimino)methyl)pyridinu a přibližně 0,1 g vlhkého Raneyova niklu ve 200 ml ethanolu se míchá ve vodíkové atmosféře při tlaku 304 kPa a teplotě 60 °C po dobu 16 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací a rozpouštědlo odpaří, aby vznikl olejovitý produkt, který se rozpustí v malém množství ethanolu. Za míchání se přidá 11 ml IN roztoku chlorovodíku v etheru, sraženina se zfiltruje, aby se získal pevný produkt. MS (+CI) m/z 137 [M+H]⁺;

¹H NMR (dg-DMSO) 9,15 (4H,široký s), 7,93 (lH,dd), 7,34 (lH,d), 7,26 (lH,d).

Příprava 2

4-Amidino-3-aminopyridinhydrochlorid (a) 3,5—Dichlor-4-formylpyridin

9,3 ml (14,9 mmol) 1,6M roztoku n-buthyllithia se přidá po

kapkách při teplotě 0 °C do roztoku 1,95 ml (14,9 mmol) diisopropylaminu ve 30 ml tetrahydrofuranu (THF). Po 15 minutách při teplotě 0 °C se roztok ochladí na teplotu -78 °C a přidá se 2,0 g (13,5 mmol) 3,5-dichlorpyridinu. Po 1 hodině se přidá 0,92 ml methyformiatu (methylesteru kyseliny mravenčí) a směs se zahřívá na teplotu místnosti po dobu 2 hodin, zředí IN roztokem kyseliny chlorovodíkové a extrahuje dvakrát ethylacetatem. Spojené extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří, aby se dostal žlutý olej, který tuhne s táním. Teplota tání 110 až 111 °C.

(b) 3,5-Chlor-4-kyanpyridin

Suspenze 1,0 g (5,68 mmol) 3,5-dichlor-4-formylpyridinu a 0,96 g (8,5 mmol) kyseliny hydroxylamin-O-sulfonové ve 20 ml vody se zahřívá při teplotě 70 °C po dobu 16 hodin, poté se ochladí a dvakrát extrahuje ethylacetatem. Extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného a vysuší síranem sodným. Odpařením rozpouštědla vznikne olejovitý produkt, který se pročistí bleskovou chromatografií na sloupci silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu s metanolem v poměru 10:1, aby se dostal produkt. MS (+EI) m/z 172/174/176;

^•H NMR (CDC1₃) 8,69 (2H,s).

(c) 5-Azido-3-chlor-4-kyanpyridin

Tato sloučenina se připraví z 3,5-chlor-4-kyanpyridinu použitím metody z přípravy l(a), aby vznikl pevný produkt. MS (+EI) m/z 151 (M⁺-N₂);

¹H NMR (CDC1₃) 8,89 (lH,s), 8,69 (lH,s) .

(d) 5-Amino-3-chlor-4-kyanpyridin • ·

1,42 g (7,5 mmol) chloridu cínatého se přidá do roztoku 0,9 g (5 mmol) 5-azido-3-chlor-4-kyanpyridinu ve 20 ml ethanolu a 0,3 ml vody. Následuje šumění. Směs se míchá po dobu 1 hodiny a potom se dvakrát extrahuje ethylacetátem. Extrakty se dvakrát promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vysuší síranem sodným. Odpařením rozpouštědla vznikne olej ovitý produkt, který se čistí bleskovou chromátografií na sloupci silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu s metanolem v poměru 10:1, aby se dostal produkt. MS (+CI) m/z 152 [M-H]⁺;

¹H NMR (d₆-DMSO) 8,15 (lH,s), 7,87 (lH,s), 6,88 (2H,s).

(e) 4-Amidino-3-aminopyridinhydrochlorid

Tato sloučenina se připraví z 5-amino-3-chlor-4-kyanpyridinu použitím metody z přípravy 1, kroky (c) a (d), aby se dostal pevný produkt. MS (+CI) m/z 171 [M+H]⁺;

³Η NMR (dg-DMSO) 9,54 (2H,s), 9,34 (2H,s), 8,27 (lH,s),

8,00 (2H,s), 7,55 (2H,d).

Příprava 3

- Amidino-4 -aminopyr idinhydrochlor id (a) 4-Amino-3-kyanpyridin

Tato sloučenina se připraví z 4-amino-3-formylpyridinu použitím metody z přípravy 2 (b), aby se dostal pevný bílý produkt. MS (+EI) m/z 119 (M)⁺;

¹H NMR (dg—DMSO) 8,38 (1H,S), 8,12 (lH,d), 7,02 (2H,s), 6,66 (lH,d).

9 — 25··-» (b) 3-Amidino-4-aminopyridin

Do 430 mg (8,1 mmol) chloridu amonného v toluenu se přidá 4 ml 2M (8,1 mmol) roztoku trimethylhliníku v hexanu při teplotě 5 °C a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Přidá se 320 mg (2,7 mmol) 4-amino-3-kyanpyridinu a réakční směs se zahřívá na teplotu 80 °C přes noc. Směs se ochladí, vylije na oxid hlinitý v chloroformu, ochladí ethanolem a zfiltruje. Filtrát se odpaří a rozetře s etherem, aby se dostal pevný produkt. MS (+EI) m/z 119 (M-NH3)⁺.

Příklad 1

7-Amino-4,5-dihydro-5-fenylthieno[3,2-d]pyrimidinhydrochlorid (a) 3-Aminothiofen-2-thiokarboxamid

Roztok 4,5 g (31 mmol) 3-aminothiofen-2-karboxamidu v tetrahydrofuranu se nechá reagovat s 7,7 g (190 mmol) Lawessonova činidla a roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se čistí chromatografií na silikagelu za použití dichlormethanu jako eluentu. Produkt se získá ve formě žlutého prášku (2,8 g, 56%), teplota tání 98 až 99 °C.

(b) 4,5-Dihydro-7-(methylthio)-5-fenylthieno[3,2-d]pyrimidinhydroj odid

Roztok 1,0 g (6,3 mmol) 3-aminothiofen-2-thiokarboxamidu, 0,39 ml (6,3 mmol) methyljodidu a 0,67 g (6,3 mmol) benzaldehydu v acetonitrilu se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Produkt se zachytí filtrací, promyje acetonitrilem, potom etherem a vysuší se (1,58 g, 64%). Teplota tání 193 až 194 °C.

• · • · · · · ·

- 26Í.-r ..

(c) 4,5-Dihydro-7-amino-5-fenylthieno[3,2-d]pyrimidinhydrochlorid

Roztok 0,5 g (1,29 mmol) 4,5-dihydro-7-(methylthio)

-5-fenylthieno[3,2-d]pyrimidinhydrojodidu v acetonitrilu se nasytí suchým plynným amoniakem a potom se zahřívají pod zpětným chladičem po dobu 20 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se roztírá se směsí etheru a ethanolu, aby se dostalo 92 mg hydrojodidu jako hygroskopického prášku s teplotou tání 179 až 181 °C. Tento produkt se přemění na hydrochlorid (teplota tání 229 až 231 °C) neutralizací, po které následuje zpracování s přebytkem chlorovodíku v etheru.

Příklad 2

Postupem stejným jako v příkladu 1 se připraví následující sloučeniny:

(a) 5-cyklopropyl-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidinhydrochlorid, teplota tání 195 až 196 °C, (b) 5-ethy1-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidinhydrojodid, teplota tání 177 °C, (c) trihydrat 5-(2-thiazolyl)-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidinhydrojodidu, teplota tání 194 až 195 °C a (d) trihydrat 5-(2-furyl)-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidinhydrojodidu, teplota tání 239 až 240 °C.

Příklad 3 (a) Postupem stejným jako v příkladu 1 se připraví následující sloučenina:

7-amino-4,5-dihydro-5-[2-(trimethylsilyl)ethinyl]thieno[ 3,2-d]pyrimidinhydrojodid, MSm/z 250 [M+H] ⁺ .

• ·

- 24· (b)7-amino-4,5-dihydro-5-ethinylthieno[3,2-d]pyrimidinhydrochlorid

Roztok 0,47 g (1,9 mmol) produktu kroku (a) v tetrahydrofuranu se nechá reagovat s 2,27 ml (2,27 mmol) 1M roztoku tetrabutylamonniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin a rozpouštědlo se odpaří při sníženém tlaku. Odparek se čistí chromatografií na oxidu hlinitém (Brockmanův, jakost 1, neut rální) za použití směsi dichlormethanu a methanolu a surová frakce produktu se dále čistí preparativní HPLC na reversní fázi. Frakce produktu se zkoncentrují a nechají reagovat s přebytkem chlorovodíku v etheru, aby se vysrážel hydrochlorid. Po roztírání s etherem se získá hydrochlorid titulní sloučeniny jako prášek krémové barvy (14,2 g) o teplotě tání 194 až 196 °C.

Příklad 4

Ethyl-[7'-aminospiro[piperidin-4,5'-(4'H)-(thieno[3,2-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]hydroj odid (a) Ethyl-[7'-(methylthio)spiro[piperidin-4,5'-(4 Ή)- (thieno[3,2-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]hydroj odid Roztok 0,5 g (3,16 mmol) 3-aminothiofen-2-thiokarboxamidu, 0,2 ml (3,16 mmol) methyljodidu a 0,47 ml (3,16 mmol) N-karbethoxy-4-piperidonu v acetonitrilu se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Produkt se zachytí filtrací, promyje v acetonitrilu a vysuší, aby se dostal jasně žlutý pevný produkt (0,88 g) MS(FAB)m/z 326 [M+H]⁺.

(b) Ethyl-[7'-aminospiro[piperidin-4,5'-(4'H)-(thieno[ 3,2-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]hydrojodid

Směs 0,88 g (1,94 mmol) produktu z příkladu 4(a) a 2,28 g (1,94 mmol) jodidu amonného v minimálním objemu • · acetonitrilu se nasytí suchým plynným amoniakem a potom se zahřívá pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a odparek čistí chromatografií na neutrálním oxidu hlinitém, při eluování směsí dichlormethanu a methanolu a potom rozetře s etherem, aby vznikl citrónově zbarvený prášek jako produkt (0,15 g) o teplotě tání 239 °C, měknoucí při 143 °C.

Příklad 5

Ethyl-[4'-amino-3'-chlorspiro[piperidin-4,6'(7'H)-thieno[2,3-d]pyrimidin]-l-karboxylat]hydrochlorid (a) 3-Amidino-2-amino-4-chlorthiofenhydrochlorid

4,2 ml (8,33 mmol) 2,0M roztoku trimethylhliníku v toluenu se po kapkách přidá za míchání do roztoku 446 mg (8,33 mmol) chloridu amonného v 10 ml toluenu při teplotě 5 °C. Po 2 hodinách při teplotě místnosti se po dávkách během 10 minut přidá 440 mg (2,78 mmol) 2-amino-4-chlor-3-kyanthiofenu a roztok se zahřívá na teplotu 80 °C po dobu 2 hodin, ochladí, vylije do 2 g oxidu křemičitého a směs se za míchání nechá reagovat s 10 ml methanolu. Po 5 minutách se směs zfiltruje, pevný produkt promyje methanolem a filtrát odpaří, aby se dostal surový produkt (640 mg), MS (+CI) m/z 176 [M+H]⁺, 300 MHZ ¹H NMR (dg-DMSO) 9,07 (1H, široký s.), 8,95 (1H, široký s), 6,92 (1H, široký s), 6,57 (lH,s) (rovněž signál pro nadbytek chloridu amonného).

(b) Ethyl-[4'-amino-3'-chlorspiro[piperidin-4,6'(7 Ή)-thieno[ 2,3-d]pyrimidin]-l-karboxylat]hydrochlorid

130mg 3-amidino-2-amino-4-chlorthiofenhydrochloridu se zahřívá s 0,1 ml (0,6 mmol) N-karbethoxy-4-piperidonu při 90 °C • · • · • ·

- 29··-*· po dobu 2 hodin, ochladí se a odpaří. Odparek se čistí bleskovou chromatografií na neutrálním oxidu hlinitém, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem a produkt se nechá reagovat s IN roztokem chlorovodíku v diethyletheru, aby vznikl pevný produkt béžové barvy, MS (+CI) m/z 329 [M+H]⁺, ¹H NMR (d₆-DMSO) 6,34 (1H, s), 4,10 (2H,q, J 7,2Hz) , 3,79 - 3,64 (4H, m), 2,09 - 1,99 (4H, m), 1,24 (3H, t, J 7,2 Hz).

Příklad 6 ' -Amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-[1'H]-(pyrido[ 3,2-d]pyrimidin]hydrochlorid

Roztok 0,22 g (1,05 mmol) 2-amidino-3-aminopyridinhydrochloridu, 1,08 g (3,98 mmol) 1-(4-kyanbenzoyl)-piperidonethylenketalu ve 3 ml 1M roztoku chlorovodíku v etheru a 15 ml etanolu se míchá při teplotě 70 °C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí, odpaří a čistí bleskovou chromatografií na neutrálním oxidu hlinitém, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 10:1 až 5:1 jako eluentu, aby se dostal pevný produkt žluté barvy o teplotě tání 173 až 175 °C.

Příklad 7 ' -Amino-(4-thienoyl)-spiro[piperidin-4,2'-[1'H]-(pyrido[ 3,2-d]pyrimidin]hydrochlorid

Tato sloučenina se připraví z 2-amidino-3-aminopyridinhydrochloridu postupem podle metody z příkladu 6, aby se dostal pevný produkt žluté barvy o teplotě tání 144 až 145 °C.

Příklad 8

Ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-[1'H]-(pyrido[3,2-d]pyrimidin) ] -1-karboxylat]hydrochlorid • · • · • · ·

- 3ť>

Tato sloučenina se připraví z 2-amidino-3-aminopyridinhydrochloridu postupem podle metody z příkladu 6, aby se dostal pevný produkt žluté barvy o teplotě tání 135 až 136 °C.

Příklad 9 ' -Amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-[1Ή]-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)]hydrochlorid

Tato sloučenina se připraví z 4-amidino-3-aminopyridin hydrochloridů postupem podle příkladu 6, aby se dostal pevný produkt žluté barvy. MS (+CI) m/z 347 [M+H]⁺,

¹H NMR (dg-DMSO) 10,76 (1H, s), 9,66 (1H, s), 8,96 (1H,	s) ,
8,42	(1H, S), 8,15	(1H, s),	8,06 (1H, d), 7,96	(2H, d),
7,81	(1H, d), 7,60	(2H, d),	3,75 - 3,95 (2H, m)	, 3,35 -	3,6
(2H,	m), 1,8 - 2,2	(4H, m).

Příklad 10

Ethyl-[ 4'-aminospiro[piperidin-4,2'-[1'H]-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]hydrochlorid

Tato sloučenina se připraví z 4-amidino-3-aminopyridinhydrochloridu postupem z příkladu 6, aby se dostal pevný produkt žluté barvy. MS (+CI) m/z 290 [M+H]⁺, l-H NMR (dg-DMSO) 8,24 (1H, s), 7,95 (1H, d) , 7,60 (1H, s), 7,50 (1H, s), 4,04 (2H, q), 3,4 - 3,6 (4H, m), 1,6 - 1,9 (4H, m), 1,19 (3H, t).

Příklad 11

4'-Amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-[1 Ή]-(pyrido[4,3-d]pyrimidin)]hydrochlorid

Suspenze 0,56 g 3-amidino-4-aminopyridinu, 1,08 g (3,98 mmol) l-(4-kyanbenzoyl)-4-piperidon ethylenketalu a 0,5 g uhliči- 31 tanu draselného ve 20 ml ethanolu se míchá při 70 °C po dobu 48 hodin. Směs se ochladí, odpaří a čistí bleskovou chromatografií na sloupci neutrálního oxidu hlinitého, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 20:1 až 1:1, aby se dostal pevný produkt bílé barvy. MS (+CI) m/z 347 [M+H]⁺, ¹H NMR (dg-DMSO) 8,99 (1H, s), 8,34 (1H, d), 7,97 (2H, d), 7,60 (2H, d), 7,01 (1H, d), 3,3 - 4,0 (4H, m), 1,8 - 2,2 (4H, m).

Příklad 12

Ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4, 2' - [ 1Ή ] - (pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]hydrochlorid (a) Ethyl-[3',4'-dihydro-4'-oxospiro[piperidin-4,2' — [l*H] — -(pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]

0,5 g (3,6 mmol) 3-amido-2-amidopyridinu, 0,7 g (4,02 mmol) N-karbethoxy-4-piperidonu a 4 g 3A molekulových sít ve 3 ml 1M roztoku chlorovodíku v etheru a 10 ml etanolu se zahřívá pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny. Směs se absorbuje na silikagelu a čistí bleskovou chromatografií na sloupci silikagelu při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 20:1 až 5:1, aby se dostal pevný produkt bílé barvy (0, 8 g). MS (+CI) m/z 291 [M+H]⁺, ^ΣΗ NMR (dg-DMSO) 8,56 (1H, s), 8,36 (1H, s), 8,21 (1H, d), 8,02 (1H, d), 6,80 (1H, dd), 4,04 (2H, q), 3,4 - 3,62 (4H,

m), 1,65 - 1,92 (4H, m), 1,18 (3H, t).

(b) Ethyl-[3',4'-dihydro-4'-thioxospiro[piperidin-4, 2' -[1'H]-(pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylat]

Roztok 0,74 g (2,55 mmol) ethyl [3',4'-dihydro-4'-oxospiro[ piperidin-4,2'-[1’H]-(pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-l-karboxy- 32·“ latu] a 0,62 g (1,5 mmol) Lawessonova činidla v 15 ml dioxanu se zahřívá pod zpětným chladičem po dobu 2 hodin. Směs se absorbuje na silikagelu a čistí bleskovou chromatografií na sloupci silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 50:1, aby se dostal pevný produkt bílé barvy (0,7 g). MS (+CI) m/z 307 [M+H]⁺, l-H NMR (dg-DMSO) 10,37 (1H, dd), 8,34 (1H, dd), 8,24 (1H, dd), 8,10 (H, S), 6,76 (1H, dd), 4,04 (2H, q), 3,6 - 3,78 (2H, m), 3,3 - 3,5 (2H, m), 1,75 - 1,90 (4H, m), 1,21 (3H, t) .

(c) Ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-[1Ή]-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)]-l-karboxylat]hydrochlorid Do roztoku 0,5 g (1,63 mmol) ethyl-[3',4'-dihydro-4'thioxospiro[piperidin-4,2'-[1Ή]-(pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylatu] ve 20 ml acetonitrilu se při teplotě místnosti přidá 0,1 ml (1,63 mmol) jodmethanu. Roztok se míchá po dobu 20 hodin, odpaří a čistí bleskovou chromatografií na sloupci silikagelu, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 10:1 jako eluentu, aby vznikl thioimidat. Thioimidat se rozpustí ve 20 ml acetonitrilu nasyceného amoniakem a zahřívá na teplotu 150 °C v tlakové lahvi po dobu 48 hodin. Roztok se odpaří a odparek se čistí bleskovou chromatografií na sloupci neutrálního oxidu hlinitého, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 10:1, aby se dostal produkt po okyselení 1M roztokem chlorovodíku v etheru. MS (+CI) m/z 290 [M+H]⁺, ¹H NMR (dg-DMSO) 10,34 (1H, s), 9,40 (1H, s), 8,61 (1H, s),

8,41	(1H,	s) ,	8,40 (1H,	dd) ,	8,26 (1H, dd), 6,89	(1H, dd),
4,05	(2h,	q),	3,4 - 3,7	(4H,	m) , 1,85 - 2,01 (4H,	m) , 1,20
(3H,	t) .

Příklad 13

- 33·« ·· ·· ·· , . · · · · > r · · · • · » · · ··* • · · ··»·· ·· ··

4-Amino-2-(2-thienyl)-pyrido[3,2-d]pyrimidinhydrochlorid Roztok 0,10 g (0,47 mmol) 2-amidino-3-aminopyridinhydrochloridu a 60 mg (0,54 mmol) 2-thiofenaldehydu v 1 ml ethanolu se míchá při teplotě 50 °C po dobu 18 hodin. Směs se ochladí, odpaří a odparek se čistí bleskovou chromatografii na sloupci neutrálního oxidu hlinitého, při eluování směsí dichlormethanu s methanolem v poměru 20:1 až 10:1 jako eluentu, aby se dostal pevný produkt hnědočervené barvy, teplota tání 186 až 187 °C.

Příklad 14 ' -Amino-1-(6-kyan-3-pyridinkarbonyl)spiro[piperidin-4, 5' -(4 ’ H)-(thieno[3,2-d]pyrimidin)]hydrojodid

Tato sloučenina se připraví z l-(6-kyan-3-pyridinkarbonyl)4-piperidonethylenketalu postupem podle příkladu 4 (WO 97/14686), teplota tání 260 až 261 °C (rozklad).

Zkoušky

Farmakologická aktivita sloučenin podle vynálezu byla testována pomocí těchto zkoušek.

Zkouška 1

Aktivita sloučenin obecného vzorce (I) nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů nebo tautomerů může být zkoušena pro jejich inhibiční aktivitu na syntetázu oxidu dusnatého postupem, založeným na postupu, který popsal Forstermann a ko.l, Eur.J.Pharm., 225, 161 - 165 (1992). Syntetáza oxidu dusnatého mění ³H-L-arginin na • · • · · ³H-L-citrulin, který se může oddělit výměnnou chromatografií na katexech a kvantifikovat kapalinovým scintilačním čítáním.

Enzym se připraví, po indukci, z kultury myších makrofágů buněčné linie J774A-1 (získané z laboratoří Imperiál Cancer Research Fund). Buněčná kultura J774A-1 se pěstuje podle Dulbecca na modifikovaném hovězím mediu (DMEM), obohaceném 10% fetálním hovězím sérem, 4 mM L-glutaminu a antibiotiky (100 jednotek penicilinu na ml, 100 mg/ml streptomycinu a 0,25 mg/ml amfotericinu B). Buňky se nechají růst v běžných 225 ml baňkách, obsahujících 35 ml media a udržovaných při teplotě 37 °C ve atmosféře se zvětšenou vlhkostí s obsahem 5% oxidu uhličitého.

Syntetáza oxidu dusnatého je vytvářena buňkami v odpovědi na interferon-g (IFNg) a lipopolysacharid (LPS). Medium ze spojených baněk se odstraní a nahradí 25 ml čerstvého media (na 1 baňku), obsahujícího 1 mg/ml LPS a 10 jednotek/ml IFNg. Po 17 až 20 hodinách se sklizeň buněk provede seškrabáním vrstvy buněk z povrchu baňky do media kultury. Buňky se získají centrifugací (lOOOg po dobu 10 minut) a lyzát se připraví přidáním buněčných pelet do roztoku obsahujícího 50mM tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10% (objemově) glycerolu, 0,1% (objemově) Triton-X-100, 0,1 mM dithiothreitolu a směs inhibitorů proteáz, obsahující 2 mg/ml leupeptinu, 10 mg/ml inhibitoru trypsinu ze sojových bobů, 5 mg/ml aprotininu a 50 mg/ml fenylmethylsulfonylfluoridu.

Pro zkoušku se přidá 25 μΐ směsi substrátu (50 mM tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavinadenindinukleotidu, 20 μΜ flavinmononukleotidu, 4 μΜ tetrahydrobiopterinu, 12 μΜ L-argininu a 925 kBq L-[³H]argininu) do • ·

jamek na filtrační plotně, obsahujících každá 96 jamek (o velikosti pórů 0.45 μΜ), obsahujícího 25 μΐ roztoku testované sloučeniny v 50 mM tris-HCl. Reakce se zahájí přidáním 50 μΐ buněčného lyzátu (příprava uvedena výše) a po inkubaci po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitroargininu a 21 mM EDTA.

Značený L-citrulin se oddělí od označeného L-argininu použitím Dowex AG-50W. 150 μΐ 25% vodné suspenze Dowexu 50W (Na⁺ formy) se přidá do zkoušeného vzorku a potom se vše zfiltruje přes plotnu obsahující 96 jamek. Odebere se vzorek 75 μΐ filtrátu a přidá do jamek na filtrační plotně, obsahující 96 jamek, obsahujících pevné scintilační činidlo. Po vysušení vzorků se L-citrulin kvantifikuje použitím scintilačního čítání.

V typickém experimentu je základní (bazální) aktivita 300 dpm na vzorek 75 μΐ a tato hodnota je u kontroly zvýšena na 1900 dpm. Aktivita sloučeniny se vyjadřuje jako IC_5Q(koncentrace léčivé látky, která způsobí 50% inhibici enzymu ve zkoušce) a aminoguanidin, který způsobí IC^q (50% inhibiční koncentrace) při 10 μΐ, se testuje jako standard pro ověření postupu. Sloučeniny se testují v řadě koncentrací ze získaných inhibici se počítají hodnoty IC_5Q. Sloučeniny, které inhibují enzym nejméně o 25% v koncentraci 100 μΜ jsou klasifikovány jako aktivní a provede se na nich nejméně jedna opakovaná zkouška.

Ve výše popsané zkoušce byly testovány sloučeniny z příkladů 1 až 14 a jejich hodnoty IC₅₀ nastaly při méně než 25 μΜ koncentraci. To dává předpoklad pro jejich využitelnou léčebnou aktivitu.

• · ·

Zkouška 2

Sloučeniny rovněž vykazují aktivitu proti lidské formě indukované syntetázy oxidu dusnatého, jak se může doložit následující zkouškou.

Enzym se připraví po indukci z kultury kolonií lidských adrenokarcinomových buněk linie DLD1 (získané z Evropské kolekce živočišných buněčných kultur - buněčná linie č. 90102540). Buňky DLD1 se kultivují v mediu RPMI 1640 obohaceném 10% fetálním hovězím šerem, 4mM L-glutaminem a antibiotiky (100 jednotek/ml penicilinu G, 100 μ9^1 streptomycinu a 100 μ9/πι1 amphotericinu B). Buňky se kultivují běžným

O postupem v baňkach o objemu 225 cm , ktere obsahuji 35 ml media při teplotě na 37 °C a ve zvlhčené atmosféře s obsahem 5% C0₂.

Syntetázy oxidu dusnatého produkují buňky v reakci na interferon-τ(IFN-t ) a interleukin-ΐβ (IL-Ιβ). Medium ze společného vývodu jednotlivých baněk se odvádí a nahrazuje 25 ml (na jednu baňku) čerstvého media, které obsahuje 250 jednotek/ml IL-Ιβ a 1000 jednotek/ml IFN-τ. Po uplynutí kultivační doby 17 až 20 hodin se buňky, které se na stěně baňky vytvořily v jedné vrstvě, seškrábou do prostředí kultury. Buňky se odebírají centrifugováním (1000 g po dobu 10 minut) a lyzát se připraví přidáním k peletám buněk roztoku obsahujícího 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10% objemových glycerolu, 0,1% objemových Triton-X100, 0,lmM dithiothreitolu a směsi inhibitorů proteazy včetně leupeptinu (2μ9/πι1), inhibitoru trypsinu ze sojových bobů (10 μ9/τη1), aprotoninu (5μ9/ιη1) a fenylmethylsulfonylfluoridu (50μg/ml).

Pro zkoušku se přidává 25 μΐ substrátové směsi (50 mM tris-HCl (pH 7,5), 400μΜ NADPH, 20μΜ flavinadenindinukleotidu, 20μΜ flavinmononukleotidu a 4μΜ tetrahydrobiopterinu) do jamek na plotně s 96 jamkami. Zkoušené sloučeniny se předběžně inkubují s enzymem přidáním 40 μΐ buněčného lyzátu (připraveného postupem výše popsaným) po dobu 1 hodiny při teplotě 37 °C. Na konci této doby se přidá 10 μΐ 30 μΜ

O

L-argininu a 0,925 kBq L-[ H]-argininu v 50Mm tris-HCl, aby se zahájila enzymatická reakce. Inkubace pokračuje po dobu další hodiny při teplotě 37 °C. Reakce se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitoargininu a 21 mM EDTA.

Značený L-citrulin se oddělí od značeného L-argininu použitím Dowexu AG-50W. 120 μΐ 25% vodné suspenze Dowexu 50W se přidá do plotny s 96 filtračními jamkami (o velikosti pórů 0,45 μη). K tomu se přidá 120 μΐ směsi z ukončené zkoušky. Odebere se vzorek 75 μΐ filtrátu a přidá do jamek na filtrační plotně, obsahující 96 jamek, obsahujících pevné scintilační činidlo. Po vysušení vzorků se L-citrulin kvantifikuje použitím scintilačního čítače.

V typickém experimentu je základní (bazální) aktivita 300 dpm na kontrolní vzorek objemu 75 μΐ a tato hodnota je za přítomnosti enzymu zvýšena na 3000 dpm. Aktivita sloučeniny se vyjadřuje jako IC₅₀ (koncentrace léčivé látky, která způsobí 50% inhibici enzymu ve zkoušce) a L-NMMA, která způsobí IC₅₀ (50% inhibiční koncentrace) při přibližně 0,4 μΜ, se testuje jako standard pro ověření postupu. Sloučeniny se testují v řadě koncentrací ze získaných inhibici se počítají hodnoty IC_5Q.

V této zkoušce byly testovány sloučeniny příkladů 1 až 14 a jejich hodnoty ICg_Q byly při menší než 25 μΜ. To dává předpoklad pro jejich využitelnou léčebnou aktivitu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce (I) ve kterém q

R představuje vodík, alkylovou skupinu s 1 az 6 uhlíky alkoxyskupinu s 1 až 6 uhlíky, halogen nebo trifluormethyl

R² představuje vodík, alkylovou skupinu s 1 až 6 uhlíky

A představuje pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z kyslíku (0), dusíku (N) nebo síry (S), nebo šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku, o (i) R představuje fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z kyslíku, dusíku a síry, kde fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh mohou být případně substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinou se 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem, hydroxyskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, kyanoskupinou, trifluormethylovou skupinou, nitroskupinou nebo skupinou -NR⁵R⁶;

• · • 0 · · · a R⁴, R⁵ a R⁵ nezávisle představují vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

nebo (ii) R³ představuje alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku nebo alkinylovou skupinu se 2 až 8 atomy uhlíku;

a R⁴ představuje vodík nebo alkylovou skupinu s 1 až

6 atomy uhlíku;

nebo (iii) R³ a R⁴ společně představují (CH₂)_a-Z-(CH₂)_1;),

Z představující skupinu N(COOR'), kde R představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo haloalkylovou skupinu s l až 6 atomy uhlíku nebo R⁷ představuje skupinu

Q (CH₂)_n ^YR λ ve ktere n představuje cele číslo od 2 do 5,

Y představuje atom kyslíku, síry nebo vazbu a R⁹ představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku případně substituovanou halogenem nebo nitroskupinou nebo R⁹ představuje fenyl případně substituovaný alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem nebo nitroskupinou; a a b nezávisle představují celé číslo od 1 do 3 za předpokladu, že a+b je 3 nebo 4;

nebo (iv) R³a R⁴ společně představují (CH₂)_a-Z-(CH₂)_b, kde Z před stavující skupinu N(COR⁸), kde R⁸ představuje fenyl, šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 atomy dusíku nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou zvoleny z kyslíku, dusíku a síry, kde fenyl nebo heterocyklický aromatický kruh mohou být popřípadě substituovány alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenem, nitroskupinou, kyanoskupinou, trifluormethylovou skupinou, alkylsulfonylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo amino40 sulfonylovou skupinou; a a a b nezávisle představují celé číslo od 1 do 3 za předpokladu, že a+b je 3 nebo 4; nebo farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery těchto látek.
2. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém A představuje thienový nebo pyridový kruh.
3. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 2, kde sloučeninou je derivát thieno[2,3-d]pyrimidinu nebo thieno[3,2-d]pyrimidinu.
4. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 2, kde sloučeninou je derivát pyrido[2,3-d]pyrimidinu, pyrido[ 3,2-d]pyrimidinu, pyrido[3,4-d]pyrimidinu nebo pyrido[4,3-d]pyrimidinu.
5. Sloučenina obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, ve kterém R³ představuje fenyl, cyklopropyl, ethyl, thiazolyl, ethinyl nebo furyl.
6. Sloučenina obecného vzorce (I) podle kteréhokoli nároku 1 až 5, ve kterém R³ a R⁴ jsou v souladu s volbou (iii) v nároku 1, Z představuje

N(COOC₂H₅) a a a b jsou čísla, každé mající hodnotu 2.
7. Sloučenina obecného vzorce (I), kterou je:

7-amino-4,5-dihydro-5-fenylthieno[ 3,2-d]pyrimidin ;

5-cyklopropyl-4,5-dihydro-7-aminothieno[ 3,2-d]pyrimidin;

5-ethyl-4,5-dihydro-7-aminothieno [ 3,2-d ] pyrimidin;

• ·

5- ( 2-thiazolyl) -4,5-dihydro-7-aminothieno[ 3,2-d]pyrimidin;

5- ( 2-f uryl)-4,5-dihydro-7-aminothieno[3,2-d]pyrimidin;

7-amino-4,5-dihydro-5-ethylthieno[ 3,2-d]pyrimidin;

ethyl-[7¹-aminospiro[piperidin-4,5'(4'H)-thieno[3,2-d]pyrimidin]-1-karboxylat];

ethyl- [ 4'-amino-3'-chlorospiro[piperidin-4,6'(7H)-thieno[ 2,3-d]pyrimidin]-l-karboxylat];

4 ' -amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1Ή)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)] ;

4'-amino-(2-thienoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1'H)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-(1'H)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin)]-l-karboxylat];

4 ' -amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4,2'-(1Ή)-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-(1'H)-(pyrido[3,4-d]pyrimidin)]-1-karboxylat];

4 ' -amino-(4-kyanbenzoyl)-spiro[piperidin-4, 2 ' - (1Ή) -(pyrido[4,3-d]pyrimidin)];

ethyl-[4'-aminospiro[piperidin-4,2'-(1Ή)-(pyrido[2,3-d]pyrimidin)]-1-karboxylat];

• · • · · · · · • · · · · _ 42 — ···· ·· ··· **·

4-amino-2-( 2-thienyl)-(pyrido[3,2-d]pyrimidin) ] ;

7'-amino-l-(6-kyan-3-pyridinkarbonyl)spiro[piperidin-4, 5' -(4 Ή)-(thieno[3,2-d]pyrimidin)];

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enantiomer nebo tautomer.
8. Sloučenina obecného vzorce (I) podle kteréhokoli nároku 1 až 7 nebo farmaceuticky přijatelná sůl, enantiomer nebo tautomer této látky pro použití jako léčivo.
9. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) podle kteréhokoli nároku 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, enantiomer nebo tautomer ve směsi s farmaceuticky přijatelnou pomocnou látkou, rozpouštědlem nebo ředidlem.
10. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli nároku 1 až 7 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi lidských nemocí nebo stavů, ve kterých inhibice syntetázy oxidu dusnatého je prospěšná.
11. Použití podle nároku 10, kde je převážně inhibována induktabilní syntetáza oxidu dusnatého.
12. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli nároku 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi zánětlivých nemocí.

• · ·
13. Použití podle nároku 12, kde nemocí je astma nebo revmatoidní arthritida.
14. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi bolesti.

•
15. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli * nároku 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru, v kombinaci s inhibitorem cyklooxygenázy COX-2 pro výrobu léčiva k léčbě nebo profylaxi zánětlivých nemocí.
16. Způsob léčení nebo snížení rizika lidských nemocí nebo stavů, při kterých je výhodná inhibice aktivity syntetázy oxidu dusnatého, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu a tautomeru osobě, trpící danou nemocí nebo stavem nebo osobě, u které je zvýšené takovéto nebezpečí.
17. Způsob léčby podle nároku 16,vyznačuj ící se t i m, že je převážně inhibována induktabilní syntetáza oxidu dusnatého.
18. Způsob léčení nebo snížení rizika zánětlivé nemoci ' u osoby, trpící takovou nemocí nebo která je v nebezpečí takové nemoci, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru dané • · • · · · • · · · osobě.
19. Způsob léčby podle nároku 18, kde nemocí je astma nebo revmatoidní arthritida.
20. Způsob léčení nebo snížení rizika bolesti u osoby, trpící bolestí nebo která je v nebezpečí bolesti, i vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) * podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru dané osobě.
21. Způsob léčení nebo snížení rizika zánětlivé nemoci u osoby, trpící takovou nemocí nebo která je v nebezpečí takové nemoci, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství kombinace sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru s inhibitorem cyklooxygenázy COX-2 dané osobě.
22. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce (I) podle kteréhokoli z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru, vyznačující se tím, že zahrnuje:

(a) reakci sloučeniny obecného vzorce (II) kde

Ν, R a R mají význam uvedený výše, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo s acetalovým derivátem této sloučeniny

R³ C 0 R⁴ (III) kde

R³ a R⁴ mají význam uvedený výše;

nebo (b) reakci sloučeniny obecného vzorce (IV) nebo (IV) (IV) (IV’) kde

A, R¹, R², R³ a R⁴ mají význam uvedený výše a R⁸ představuje alkylovou skupinu; s amoniakem nebo ekvivalentem této látky; nebo (c) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), kde R³ a R⁴ • · · • · · jsou podle volby (i) v obecné definici vzorce (I) uvedené výše a jeden nebo oba zbytky R⁵ a R⁶ představují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylací příslušné sloučeniny, ve které jeden nebo oba zbytky R⁵ a R⁶ představují vodík;

nebo (d) přípravu sloučeniny vzorce (I), kde R² představuje alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylací příslušné sloučeniny, ve které R² představuje vodík; nebo (e) odstranění ochranné skupiny u sloučeniny vzorce (I), kde jeden nebo více atomů dusíku a/nebo jiný atom jsou chráněny;

(f) přípravu sloučeniny obecného vzorce (I), kde R³ a R⁴ jsou v souladu s volbou (iv) v obecné definici vzorce (I) uvedené výše, reakcí sloučeniny obecného vzorce (V)

R² kde

A, R¹, R², a a b mají význam uvedený výše, se sloučeninou obecného vzorce (VI)

X-L (VI) kde

X představuje COOR⁷ nebo COR⁸, R⁷ a R⁸ mají význam uvedený výše a L je odstupující skupina; a kde je žádoucí nebo nutné přeměnu výsledné sloučeniny obecného vzorce (I) nebo jiné její soli v její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo naopak a kde je žádoucí nebo nutné přeměnu výsledné sloučeniny obecného vzorce (I). na její optický izomer.