CZ309798B6 - Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití - Google Patents
Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ309798B6 CZ309798B6 CZ2022-116A CZ2022116A CZ309798B6 CZ 309798 B6 CZ309798 B6 CZ 309798B6 CZ 2022116 A CZ2022116 A CZ 2022116A CZ 309798 B6 CZ309798 B6 CZ 309798B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- tissue
- perinatal
- ground
- homogenized
- perinatal tissue
- Prior art date
Links
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 title claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 14
- 239000012254 powdered material Substances 0.000 title description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 43
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229910000811 surgical stainless steel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 238000002271 resection Methods 0.000 claims abstract description 7
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 12
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 61
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 11
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 11
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 11
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 11
- 102000007456 Peroxiredoxin Human genes 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 108030002458 peroxiredoxin Proteins 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 7
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 5
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 5
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 101150079978 AGRN gene Proteins 0.000 description 4
- 102100040026 Agrin Human genes 0.000 description 4
- 108700019743 Agrin Proteins 0.000 description 4
- 102100037985 Dickkopf-related protein 3 Human genes 0.000 description 4
- 101710099550 Dickkopf-related protein 3 Proteins 0.000 description 4
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 4
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 4
- 102000009073 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 4
- 102000011695 Matrix Metalloproteinase 10 Human genes 0.000 description 4
- 108010076497 Matrix Metalloproteinase 10 Proteins 0.000 description 4
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 4
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 4
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 4
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 description 4
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 108010093564 inter-alpha-inhibitor Proteins 0.000 description 4
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 4
- 108010009114 laminin beta2 Proteins 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100036597 Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein Human genes 0.000 description 3
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 3
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 102100038910 Alpha-enolase Human genes 0.000 description 2
- 102000004881 Angiotensinogen Human genes 0.000 description 2
- 108090001067 Angiotensinogen Proteins 0.000 description 2
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 2
- 102000015279 Basigin Human genes 0.000 description 2
- 102100032412 Basigin Human genes 0.000 description 2
- 108010064528 Basigin Proteins 0.000 description 2
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 108010061635 Cystatin B Proteins 0.000 description 2
- 102100026891 Cystatin-B Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102100022277 Fructose-bisphosphate aldolase A Human genes 0.000 description 2
- 101710123627 Fructose-bisphosphate aldolase A Proteins 0.000 description 2
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100021736 Galectin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 description 2
- 102000044465 Galectin-7 Human genes 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 2
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 2
- 101000798441 Homo sapiens Basigin Proteins 0.000 description 2
- 101000608772 Homo sapiens Galectin-7 Proteins 0.000 description 2
- 101000898034 Homo sapiens Hepatocyte growth factor Proteins 0.000 description 2
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 101001082142 Homo sapiens Pentraxin-related protein PTX3 Proteins 0.000 description 2
- 101000868152 Homo sapiens Son of sevenless homolog 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000644684 Homo sapiens Ubiquitin-conjugating enzyme E2 N Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 2
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 102100026019 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 2
- 102000014017 Lactoylglutathione lyase Human genes 0.000 description 2
- 108010050765 Lactoylglutathione lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000011681 Lumican Human genes 0.000 description 2
- 108010076371 Lumican Proteins 0.000 description 2
- 102000000424 Matrix Metalloproteinase 2 Human genes 0.000 description 2
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100024289 Metalloproteinase inhibitor 4 Human genes 0.000 description 2
- 108050006579 Metalloproteinase inhibitor 4 Proteins 0.000 description 2
- 102100036592 Neutral alpha-glucosidase AB Human genes 0.000 description 2
- 101710140639 Neutral alpha-glucosidase AB Proteins 0.000 description 2
- 102100037369 Nidogen-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100037371 Nidogen-2 Human genes 0.000 description 2
- 101710091705 Nidogen-2 Proteins 0.000 description 2
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 102100027351 Pentraxin-related protein PTX3 Human genes 0.000 description 2
- 102100040283 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B Human genes 0.000 description 2
- 108010085824 Peroxiredoxin VI Proteins 0.000 description 2
- 102000007514 Peroxiredoxin VI Human genes 0.000 description 2
- 102100028251 Phosphoglycerate kinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710139464 Phosphoglycerate kinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000016525 Phosphoglycerate mutase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108050006040 Phosphoglycerate mutase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004079 Prolyl Hydroxylases Human genes 0.000 description 2
- 108010043005 Prolyl Hydroxylases Proteins 0.000 description 2
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 description 2
- 102100037097 Protein disulfide-isomerase A3 Human genes 0.000 description 2
- 101710106224 Protein disulfide-isomerase A3 Proteins 0.000 description 2
- 102100037061 Protein disulfide-isomerase A6 Human genes 0.000 description 2
- 101710106306 Protein disulfide-isomerase A6 Proteins 0.000 description 2
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 2
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 2
- 101710139715 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 2
- 102100032891 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 101710202572 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 102100033055 Transketolase Human genes 0.000 description 2
- 108010043652 Transketolase Proteins 0.000 description 2
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 description 2
- 102100029290 Transthyretin Human genes 0.000 description 2
- 102100033598 Triosephosphate isomerase Human genes 0.000 description 2
- 101710194411 Triosephosphate isomerase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100020695 Ubiquitin-conjugating enzyme E2 N Human genes 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 2
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 2
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 108700006666 betaIG-H3 Proteins 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 2
- 108010008094 laminin alpha 3 Proteins 0.000 description 2
- 108010088360 laminin alpha5 Proteins 0.000 description 2
- 108010090909 laminin gamma 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108010044156 peptidyl-prolyl cis-trans isomerase b Proteins 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 108010017843 platelet-derived growth factor A Proteins 0.000 description 2
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 2
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000009517 secondary packaging Methods 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000009518 tertiary packaging Methods 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- TYNLGDBUJLVSMA-UHFFFAOYSA-N 4,5-diacetyloxy-9,10-dioxo-2-anthracenecarboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(O)=O)=CC(OC(C)=O)=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2OC(=O)C TYNLGDBUJLVSMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 102100035634 B-cell linker protein Human genes 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101710151712 Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein Proteins 0.000 description 1
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- 241000189617 Chorda Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 238000006595 Griess deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101001000001 Homo sapiens Basement membrane-specific heparan sulfate proteoglycan core protein Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003109 Karl Fischer titration Methods 0.000 description 1
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001741 anti-phlogistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 238000003869 coulometry Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 229960004590 diacerein Drugs 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 210000005224 forefinger Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002849 glucosamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003771 matrix metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121386 matrix metalloproteinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 238000012898 one-sample t-test Methods 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 108010049224 perlecan Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- -1 polymixn B Chemical compound 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003813 thumb Anatomy 0.000 description 1
- 230000008354 tissue degradation Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0029—Radiation
- A61L2/0035—Gamma radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Hematology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Předkládané řešení poskytuje způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, který zahrnuje kroky: a) čištění vstupní perinatální tkáně a volitelně její resekci na části, jejichž rozměr v žádném směru nepřesahuje 50 mm; přičemž se tkáň po čištění ponechá uschnout po dobu alespoň 15 minut; b) kryomletí perinatální tkáně v uzavíratelných kapslích z chirurgické oceli s mlecími kuličkami z chirurgické oceli; c) homogenizace namleté perinatální tkáně ultrazvukovým homogenizátorem; d) plnění namleté a homogenizované perinatální tkáně za stálého míchání do primárního obalu; e) lyofilizace namleté a homogenizované perinatální tkáně v primárním obalu; f) sterilizace lyofilizované namleté a homogenizované perinatální tkáně v primárním obalu gama-zářením při dávce 5 až 20 kGy; přičemž celý proces se provádí bez přítomnosti antibiotik i antimykotik.
Description
Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká způsobu výroby biologického léčivého přípravku, vhodného zejména pro léčbu onemocnění muskuloskeletálních a pojivových tkání a kůže. Výchozím materiálem pro výrobu přípravku je amniová membrána, chorion, pupečník a další perinatální tkáně.
Dosavadní stav techniky
Osteoartróza (dále jen OA) je degenerativní artropatie charakterizovaná epizodami akutní bolesti a je jedním z nejčastějších chronických muskuloskeletálních onemocnění. Současnou léčbou akutní osteoartrózy, kdy se bolest dočasně zvýší na vysokou intenzitu, jsou analgetika, nesteroidní protizánětlivé léky (NSAID) nebo intraartikulární injekce kortikosteroidů v kombinaci s viskosuplementací k dosažení antiflogistického účinku (kyselina hyaluronová). Při těžkém průběhu dochází k náhradě kloubů (endoprotéze). Neakutní léčba je založena na tzv. symptomatických, pomalu působících lécích proti OA (SYSADOA), které zahrnují prekurzory extracelulární matrix chrupavky, jako je kyselina hyaluronová, glukosamin nebo chondroitin sulfát, nebo cytokinové modulátory, jako je diacerein, piascledin nebo inhibitory matricové metaloproteinázy. Kromě léků modifikujících symptomy, mohou být některé způsoby léčby založeny na modifikaci progrese onemocnění, a to buď zpomalením, nebo zvrácením degenerace tkáně. Takovéto léky jsou známy jako léčiva modifikující strukturu a mohou nebo také nemusí mít účinky zmírňující příznaky. V nedávné době byla navržena léčba OA pomocí intraartikulárních injekcí částic amniové membrány a/nebo pupečníku.
Ve stavu techniky jsou již známy postupy výroby přípravků pro injekční podání, odvozených z placentárních materiálů.
Ve WO 2014/143990 A1 jsou amnion i chorion čištěny s použitím antibiotických látek, poté zpracovány s pomocí enzymů trypsinu (který způsobuje nekrózu epiteliálních buněk) nebo kolagenázy při teplotě 37 °C. V procesu je materiál opakovaně zamražován a rozmražován. Finální produkt není sterilizován finální γ-sterilizací. Na konci procesu je směs různě smísena s kyselinou hyaluronovou, kolagenem, fibrinem nebo želatinou obsahující multipotentní buňky, a dodávána v zamraženém stavu.
US 2017 0 258 727 A1 popisuje způsoby přípravy prášků z fetální tkáně a způsoby použití tohoto práškového produktu. V produktu je využito směsi amnionové, chorionové i pupečníkové tkáně. Při odběru je tkáň vystavena působení antibiotik (amfotericin, ciprofloxacin). U tohoto způsobu výroby je nejdříve tkáň zmražena, pak lyofilizována, a poté namleta - což vede k nerovnoměrnému namletí a mechanické degradaci tkáně. U lyofilizace probíhá nejprve předsušování při teplotě -5 až 25 °C, poté probíhá primární lyofilizace při teplotách 0 až -100 °C a nakonec sekundární lyofilizace při 25 °C. V některých případech se k přípravku přidává HEPES pufr, glycerol nebo propylen glykol. V některých případech byl produkt napřímo vystaven působení tekutého dusíku.
US 2019 0 374 584 A1 popisuje způsoby výroby a použití mikronizovaných kompozitů z amnionu a chorionu a jejich farmaceutické využití. Placenta je transportována po odběru na suchém ledu. Amnion je čištěn pomocí sterilní gázy a dále roztoků obsahujících Triton-X a antibiotické látky (streptomycin, gentamicin, polymixn B, bacitracin). K dehydrataci je zde užíváno chemické dehydratace (dimethylsulfoxid, aceton, ethanol, isopropanol) v kombinaci se
- 1 CZ 309798 B6 sušením mrazem. Po kroku dehydratace následuje mikronizace na oscilačním mlýnu. V případě výroby tohoto produktu není prováděna žádná finální sterilizace.
Dosavadní způsoby zpracování amniové membrány na práškové materiály vhodné pro ochranu a podporu hojení poškozených tkání, v nichž jsou zachovány vlastnosti membrány, vyžadují použití antibiotik při jejím zpracování, ačkoli je vždy postup prováděn asepticky v GMP podmínkách. Ve všech dosavadních způsobech je využíváno chemikálií nebo velkých teplotních výkyvů k přípravě finálního produktu, což může působit negativně na integritu léčivých proteinů. Předkládaný vynález si klade za cíl poskytnout takový postup zpracování amniové membrány, který umožňuje výrobu mikronizovaného materiálu pro injekční podání bez nutnosti přidávání jakýchkoli chemikálií nebo antibiotik, a zároveň minimalizuje teplotní výkyvy za účelem maximální ochrany proteinů, které mohou ovlivnit biologické a mechanické vlastnosti materiálu na bázi amniové membrány.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, který zahrnuje kroky:
a) čištění vstupní perinatální tkáně a volitelně její resekci a/nebo tvarování na části, jejichž rozměr v žádném směru nepřesahuje 50 mm; přičemž se tkáň po čištění ponechá uschnout po dobu alespoň 15 minut;
b) kryomletí perinatální tkáně v kryogenním mlýnu v uzavíratelných kapslích z chirurgické oceli s mlecími kuličkami z chirurgické oceli;
c) homogenizace namleté perinatální tkáně ultrazvukovým homogenizátorem;
d) plnění namleté a homogenizované perinatální tkáně za stálého míchání do primárního obalu;
e) lyofilizace namleté a homogenizované perinatální tkáně v primárním obalu;
f) sterilizace lyofilizované namleté a homogenizované perinatální tkáně, tvořící biologický léčivý přípravek, v primárním obalu gama-zářením při dávce 5 až 20 kGy;
přičemž celý proces se provádí bez přítomnosti antibiotik i antimykotik.
Vstupní perinatální tkáň je v souladu s legislativou (zákonem č. 296/2008 Sb. o tkáních a buňkách a vyhláškou 422/2008 Sb. o stanovení bližších požadavků pro zajištění jakosti a bezpečnosti lidských tkání a buněk určených k použití u člověka) získávána od informovaných dárkyň po porodu císařským řezem. Vstupní perinatální tkání je zejména amionová membrána nebo pupečník, které se oddělují od dárcovské placenty. Amnion je vnitřní plodový obal obepínající amniovou dutinu, která je vyplněna plodovou vodou. Amnionový epitel přechází přes pupečník (lat. chorda umbilicalis) až na periderm. Krev dárkyně je testována na hepatitidu B (HBsAg, anti HBc), hepatitidu C (anti HCV), HIV 1 a HIV 2 (anti HIV 1 a anti HIV 2 + p24), syfilis (TP Ab), HTLV-1 a HTLV-2 (Anit HTLV 1 a 2). Tkáně se zpracovávají a transportují zásadně za sterilních podmínek a za podmínek správné výrobní praxe (GMP). Pro transport se tkáně balí do primárního sterilního obalu, přepravního kontejneru, který je vložen do sekundárního sterilního obalu.
Krok a), tedy krok čištění a resekce perinatální tkáně, se provádí po oddělení požadovaných tkání od ostatních tkání placenty, zejména oddělením amnionu od chorionu sekcí pomocí sterilních nůžek či skalpelu. Čištění se provádí propíráním (laváží) ve fyziologickém roztoku a následným mechanickým očištěním, tedy manuálním odstraněním reziduí krve a nečistot z tkáně rozložené
- 2 CZ 309798 B6 na pracovní ploše. Laváž a mechanické očištění se alespoň dvakrát, s výhodou třikrát, opakují. S výhodou se poslední laváž provede ve sterilní vodě pro injekce. Čistění a zpracování perinatálních tkaní může být prováděno manuálně nebo automaticky či poloautomaticky.
Po čištění se tkáň ponechá alespoň 15 minut volně vysychat (stále v aseptickém prostředí), poté se fragmentuje a/nebo tvaruje na části, jejichž rozměr v žádném směru nepřesahuje 50 mm, s výhodou nepřesahuje 30 mm. Materiál se uloží se do primárního obalu, a zamrazí se, s výhodou na teplotu nižší než -40 °C, výhodněji na teplotu v rozmezí -40 až -80 °C. S výhodou se ukládá v jedné dávce objem tkáně 1 až 100 ml.
Takto zpracovaná tkáň vede k dosažení maximální výtěžnosti a účinku následujícího kroku kryomletí.
V rámci vytváření tohoto vynálezu původci testovali alternativní možnosti provádění kroku a). 30-minutová laváž s antibiotikem gentamicinem vedla k neakceptovatelnému obsahu antibiotika ve finálním produktu. Větší rozměry částí tkáně vedou k nerovnoměrnému kryomletí. Přílišný obsah vody v tkáni vede k problémům s kryomletím i s balením tkáně do primárního obalu voda se dostává do obalového materiálu, což může vést k riziku porušení sterility.
Zabalená a uložená tkáň se skladuje po dobu předepsané karantény, což jsou alespoň 2 týdny.
Krok b), tedy krok kryomletí, se provádí v uzavřených kapslích, s výhodou z chirurgické oceli, chlazených zvnějšku kapalným dusíkem. Do kapsle se vloží tkáň pro mletí (bez přídavku vody) a vysterilizované ocelové kryomlecí kuličky, kapsle se uzavře a vloží do chladicího pláště s kapalným dusíkem, a provede se kryomletí. Kryomletí se s výhodou v kryogenním mlýnu provádí s předchlazením za třepání při frekvenci alespoň 3 Hz a samotným mletím při frekvenci alespoň 20 Hz, v alespoň 4 mlecích cyklech, po celkovou dobu mlecích cyklů alespoň 15 minut. I při mezichladících cyklech se vzorek protřepává při frekvenci alespoň 3 Hz, takže nedojde k přilepení a přimrznutí tkáně ke stěně kapsle.
V rámci vývoje tohoto procesu bylo testováno rovněž mletí s přídavkem vody, které však vedlo k nedostatečnému mletí a k degradaci tkáně. Sterilní voda pro injekce se přidává až po rozemletí vzorku, kdy usnadňuje vyjmutí namletého vzorku z kapsle téměř beze ztrát. Po namletí tkáně se nádoba nechá rozmrznout a obsah je poté smísen se sterilní vodou pro injekce v objemovém poměru tkáně a vody v rozmezí 1:0,7 až 1:1.
Byly testovány i kapsle pokryté zevnitř vrstvou oxidu zirkoničitého, ale oxid zirkoničitý podléhá opotřebení a může kontaminovat mletou tkáň. Proto byly zvoleny mlecí kapsle a kuličky z chirurgické oceli, u kterých je náchylnost k opotřebení menší.
Oproti obvyklým postupům bylo přidáno předchlazení při třepání, aby nedošlo k přimrznutí tkáně na stěnu kapsle, a byla prodloužena celková doba mletí. Vzorek se nedostával do kontaktu s kapalným dusíkem, protože i to je nežádoucí a zejména při kontaktu s kapalným dusíkem dochází k degradaci složek vzorku a případně i ke kontaminaci bakteriemi, které mohou být v dusíku přítomny.
V rámci testování a vývoje kroků b), c) a d) bylo umožněno poolování tkání od více donorů, přičemž v kroku c) je dosažena uniformita a homogenita produktu kryomletí. S výhodou se kombinuje produkt z 3 až 10 donorských perinatálních tkání.
Krok homogenizace (krok c) zajišťuje promíchání tkáně od několika donorů. Je nutný pro dosažení uniformity produktu. Provádí se ultrazvukovým homogenizátorem, s výhodou při výkonu 40 až 100 W, 10 až 20 pulzy. Tento způsob homogenizace předchází zahřátí mleté tkáně.
- 3 CZ 309798 B6
Obvyklé postupy provádějí kryomletí až po lyofilizaci, ale v rámci předkládaného vynálezu bylo zjištěno, že je vhodnější a efektivnější provést nejprve kryomletí a homogenizaci, a teprve takto upravený materiál lyofilizovat.
Krok d) plnění do primárního obalu zahrnuje výpočet objemu plnění, tak, že se odebere více vzorků pro měření obsahu sušiny, a potom se na základě průměrného obsahu sušiny vypočte objem materiálu mleté tkáně, který odpovídá požadovanému množství sušiny pro plnění do primárního obalu.
Do primárního obalu se materiál plní s výhodou pomocí peristaltické pumpy za míchání materiálu magnetickým míchadlem. Směs by měla být konstantně ve vznosu, ale bez tvorby vírů.
Primárním obalem jsou s výhodou vialky.
Následný krok lyofilizace (krok e) se provádí při nejnižší hodnotě tlaku 100 mTorr (13 Pa) a nejnižší teplotě -60 °C, s výhodou při nejnižší teplotě -50 °C, a následně se primární obal uzavře. Je výhodné, pokud je pokles teploty postupný, např. v řádu hodin.
Takto lyofilizovaný materiál má velmi nízký obsah vody, což prodlužuje skladovatelnost, snižuje riziko růstu mikroorganismů, pokud by došlo ke kontaminaci v kterémkoliv kroku předcházejícím aplikaci materiálu, a vede k tvorbě sypkého prášku, se kterým se lépe manipuluje.
Krok sterilizace (krok f) se provádí působením gama-záření. Obvykle používané hodnoty dávky 25 až 30 kGy však degradovaly produkt natolik, že nemohl být ani rozsuspendován. Bylo však zjištěno, že nižší dávky záření zajistí stejnou kvalitu sterilizace, a zachování funkce proteinů, ale nezpůsobí mechanickou degradaci pozorovanou za obvyklých dávek. Krok sterilizace se tedy provádí při dávkách 5 až 20 kGy, výhodněji 12 až 18 kGy.
Výsledkem postupu podle předkládaného vynálezu je dále práškový materiál na bázi perinatální tkáně, připravitelný popsaným způsobem. Materiál má s výhodou velikost částic nejvýše 200 μm. Hmotnostní spektroskopie potvrdila, že tento výsledný materiál obsahuje více než 68 proteinů. Tyto proteiny zahrnují cytokiny, embryonální růstové faktory, enzymy, proteiny extracelulární matrix, hormony, matricové metaloproteinázy, neurotrofické faktory, inhibitory proteáz.
Konkrétněji tyto proteiny zahrnují:
Cytokiny: TIMP-4, bFGF, PDGF-AA, HGF, EGF, VEGF; glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenáza, annexin 2; interleukiny (IL): IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13; galektin-1, galektin3, inhibiční faktor migrace makrofágů (Macrophage migration inhibition factor), pentraxin-3, galektin-7, protein indukovaný transformujícím růstovým faktorem beta (Transforming growth factor beta-induced protein);
Embryonální růstové faktory: dickkopf-příbuzný protein 3 agrin (Dickkopf-related protein 3 agrin);
Enzymy: 5'-nukleosidáza / CD73, alfa-enoláza, fruktóza-bisfosfát aldoláza A, beta podjednotka glukosidázy 2, glutathion S-transferáza P, laktotransferrin, neutrální alfa-glukosidáza AB, peptidyl-prolyl cis-trans isomeráza B, peroxiredoxin-1, peroxiredoxin-6, fosfoglycerát kináza 1, fosfoglycerát mutáza 1, alfa-1 podjednotka prolyl 4-hydroxylázy, protein disulfid-isomeráza, protein disulfid-isomeráza A3, protein disulfid-isomeráza A6, transglutamináza 2 (Proteinglutamine gamma-glutamyltransferáza 2), transketoláza, triosafosfát isomeráza 1, ubikvitinkonjugující enzym E2 N, kataláza peroxiredoxin 1 (thioredoxin peroxidáza 1), peroxiredoxin 2 (thioredoxin peroxidáza 2), superoxid dismutáza [Cu-Zn], superoxid dismutáza [Mn], mitochondriální prekurzor, transthyretinový prekurzor (Prealbumin), laktoylglutathion lyáza;
- 4 CZ 309798 B6
Proteiny extracelulární matrix: kolagen I, kolagen III, kolagen IV, kolagen V, kolagen VI, kolagen VII, fibronektin, alfa-5 podjednotka lamininu, beta-1 podjednotka lamininu, beta-2 podjednotka lamininu, gama-1 podjednotka lamininu, lumikan, nidogen-1, nidogen-2, alfa-3 podjednotka lamininu, gama-2 podjednotka lamininu, beta-2 podjednotka lamininu, perlekan (proteoglykanový jádrový protein heparansulfátu specifický pro bazální membránu);
Hormony: angiotensinogen;
Matricové metaloproteinázy: kolagenáza typu IV (matrix metalloproteináza-2), stromelysin-2 (matrix metalloproteináza-10), induktor metaloproteináz extracelulární matrix /basigin;
Neurotrofické faktory: neuron-specifická enoláza;
Inhibitory proteáz: alfa-1-antitrypsin, alfa-2-makroglobulin, cystatin B, těžký řetězec H1 interalfa-trypsin inhibitoru, těžký řetězec H2 inter-alfa-trypsin inhibitoru.
Materiál nevykazuje známky cytotoxicity vůči savčím buňkám, má vysokou vazebnou schopnost vůči savčím buňkám tvořícím koloidní prostředí; snižuje aktivaci zprostředkovanou makrofágy ve srovnání s aktivovanými kontrolními buňkami, bez imunomodulačních účinků, má prokazatelně protizánětlivé účinky.
Přípravek může být ve formě farmaceutické formulace, která obsahuje materiál na bázi perinatální tkáně, připravený popsaným způsobem podle vynálezu, a alespoň jednu pomocnou látku vybranou ze skupiny rozpouštědla, gelovacího činidla, hnacího plynu, masťového základu, krémového základu, plniva, a pojiva. Farmaceutická formulace může být například ve formě injekčního roztoku, suspenze, koloidu, spreje, hydrogelu, masti, krému. Farmaceutické formulace lze připravit například rozpuštěním nebo suspendováním práškového materiálu v rozpouštědle, případně zkombinováním s hnacím plynem pro tvorbu spreje, či vnesením práškového materiálu do gelovacího činidla a reakcí pro vytvoření hydrogelu nebo vnesením do již vytvořeného hydrogelu, nebo vnesením do masťového či krémového základu.
Práškový materiál na bázi perinatální tkáně nebo farmaceutická formulace jsou vhodné pro použití pro léčbu zánětlivých a degenerativních onemocnění muskuloskeletálních a pojivových tkaní a kůže, popálenin, autoimunních poruch kůže, a zejména pro léčbu osteoartrózy intraartikulárním podáním, tenditidy lokálním podáním, léčbu kožních defektů (termického, chemického, mechanického, trofického nebo bakteriálního původu) topickou aplikaci včetně aplikace ve formě spreje, hydrogelu nebo suspenze.
Postup výroby biologického léčivého přípravku podle vynálezu umožňuje plně využít biologické a fyzikální vlastnosti perinatálních tkání (např. lidské amniové membrány, placenty, chorionu, pupečníku), bezpečně uchovat maximální podíl přirozeně bioaktivních složek přítomných v lidské amniové membráně, čímž je při léčebném podání dosaženo nejlepší distribuce v poškozeném orgánu a většího účinného povrchu, a tím se také zajistí zlepšení funkce muskuloskeletálních a pojivových tkaní, orgánů a kůže. Práškový přípravek získaný výrobním postupem lze snadno reformulovat do dalších farmaceutických forem, například injekční, gelové, atd. To umožňuje větší volbu a možnou kombinaci léčebných postupů.
Objasnění výkresů
Obrázek 1: Srovnání distribuce velikostí částic v různých oblastech zhomogenizovaného vzorku (příklad 1).
Obrázek 2: Srovnání vlivu dávek záření a teploty při ozařování na množství celkového proteinu (příklad 1).
- 5 CZ 309798 B6
Obrázek 3: Srovnání vlivu dávek záření a teploty při ozařování na množství interleukinů (příklad 1).
Obrázek 4: Aktivace makrofágů pomocí produktu z příkladu 1.
Obrázek 5: Detekce dusitanů v médiu.
Obrázek 6: Aktivace produkce IL-6 makrofágy pomocí produktu z příkladu 1.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1: Příprava materiálu na bázi amnionu
Získání vstupního materiálu, čištění, resekce:
Placenty jsou získávány při plánovaném porodu císařským řezem pouze od zdravých dárkyň. Po aseptickém odebrání a informovaném souhlasu dárkyně je placena transportována za sterilních podmínek do GMP laboratoře. Placenta je zabalena ve sterilním obalu. Při zpracování se typicky oddělí amnion od chorionu sekcí pomocí sterilních nůžek či skalpelu. Krok čištění amnionu se skládá ze dvou kroků. Amnion ve fyziologickém roztoku se jemně propírá a pak následuje mechanické očištění, které je prováděno rozložením amnionu na pracovní plochu a manuálním odstraňováním reziduí krve a nečistot jemným pohybem palce a ukazováčku. Tyto kroky se alespoň 2x opakují. Poslední krok čištění je prováděn laváží ve sterilní vodě pro injekce. Po čištění se nechá tkáň uschnout volně na vzduchu (za aseptických podmínek), obvykle po dobu 15 až 40 minut. Takto vyčištěný amnion je uložen, ve tvaru nepřesahujícím 50 mm v žádném směru, v primárním, sekundárním a terciálním obalu a je zamražen v hlubokomrazícím boxu.
Kryomletí:
V prostorách čistoty A je tkáň vybalena a umístěna do mlecí kapsle, kam jsou doplněny i vysterilizované mlecí kuličky. Kapsle i mlecí kuličky jsou z nerezové oceli. Kapsle je pevně uzavřena a umístěna do chladícího pláště, který se rovněž pevně uzavře. Následně je prováděn kryomlecí proces při kterém se amnion mikronizuje. Nejprve se provede předchlazení při třepání o frekvenci 5 až 10 Hz, potom 5 mlecích cyklů při 20 až 40 Hz, přičemž mezi mlecími cykly jsou mezichladící cykly (intercooling) při 5 až 10 Hz. Poté následuje rozmrzání kapsle. Chlazení je zajištěno prouděním kapalného dusíku.
Homogenizace a plnění do primárního obalu:
Po namletí amnionu se nádoba nechá rozmrznout a obsah je poté smísen se sterilní vodou pro injekce v objemovém poměru tkáň:voda 1:0,8. Směs je pomocí sterilní jednorázové pipety přenesena do sterilní lahve, celý objem se homogenizuje pomocí ultrasonického homogenizátoru, který při 40 až 100 W 10 až 20 pulzy celou směs rovnoměrně zhomogenizuje. Takto zpracovaný produkt se označuje jako meziprodukt 1 (MP1).
Po homogenizaci byla srovnána distribuce velikostí částic (PSD). Srovnání PSD v různých oblastech zhomogenizovaného vzorku je uvedeno na obr. 1.
Dále bylo otestováno, zda homogenizace nesnižuje obsah celkového proteinu ve směsi. Po kryomletí se odebral vzorek nehomogenizované směsi na analýzu celkového proteinu. Obsah celkového proteinu byl měřen pomocí metody obsahu celkového proteinu podle Bradfordové. Vzorky použité pro metodu jsou odvozeny izolací proteinů pomocí RIPA pufru. Tento test se používá k měření koncentrace celkového proteinu ve vzorku. Princip tohoto testu spočívá v tom, že vazba proteinových molekul na barvivo Coomassie za kyselých podmínek vede ke změně
- 6 CZ 309798 B6 barvy z hnědé na modrou. Vzorek se aplikuje na mikrotitrační destičku v objemu 5 μΐ a přidalo se k němu Coomassie barvivo v objemu 250 μΐ. Následně se destička četla při 595 nm. Hodnoty se vyčíslí na základě kalibrační křivky.
| vzorek | koncentrace pg/ml | průměrná hodnota absorbance | směrodatná odchylka |
| standard A | 2000 | 0,2733 | 0,0014 |
| standard B | 1500 | 0,1967 | 0,0061 |
| standard C | 1000 | 0,1290 | 0,0042 |
| standard D | 750 | 0,0793 | 0,0060 |
| standard E | 500 | 0,0530 | 0,0067 |
| standard F | 250 | 0,0173 | 0,0026 |
| standard G | 125 | 0,0070 | 0,0067 |
| standard H | 25 | 0,0017 | 0,0031 |
| standard I | 0 | 0,0000 | 0,0000 |
| nehomogenizovaný vzorek 1 | 1736 | 0,2412 | 0,0012 |
| nehomogenizovaný vzorek 2 | 1724 | 0,2395 | 0,0027 |
| homogenizovaný vzorek 1 | 1715 | 0,2389 | 0,0021 |
| homogenizovaný vzorek 2 | 1685 | 0,2348 | 0,0025 |
Z homogenize váného produktu jsou pak odebrány 3 reprezentativní vzorky na vyhodnocení obsahu sušiny. Vzorky o přesném objemu 1 ml jsou sušeny na analyzátoru vlhkosti až do konstantní hmotnosti. Z toho výsledku je dále vypočítán objem nutný pro rozplnění do primárního obalu, tak aby vždy dávka byla naprosto stejná.
X/ + x? + %?
= -------[w] y =--— [ml]
Xq + Z xo = průměr naměřených hodnot v mg z 1 ml vysušeného MP1 (xi, X2, X3) y = finální plněný objem MP1 z = % odchylka stanovená na základě rozdílů sušení v analyzátoru vlhkosti a v lyofilizátoru
Plnění ze směsi amnionů od různých donorů do primárního obalu je prováděno peristaltickou pumpou nebo jiným způsobem za tak, aby byla směs konstantně ve vznosu. Po rozplnění jsou vialky opatřeny gumovou zátkou, která je v takové pozici, aby do vialky mohl proudit vzduch při následném kroku.
Lyofilizace:
Dalším krokem je sušení mrazem (lyofilizace), které vysušuje již mikronizovanou směs amnionu s vodou. Produkt je po skončení lyofilizace chlazen na teplotu 5 ±3°C.
Příklad protokolu lyofilizace byl následující:
| krok lyofilizace | naprogramované parametry | vakuum (Pa) | |
| teplota polic (°C) | čas (min) | ||
| teplotní adjustace | 5 | 30 | N/A |
| 0 | 15 | N/A | |
| -10 | 90 | N/A | |
| -15 | 30 | N/A | |
| -45 | 320 | N/A | |
| mrazicí teplota | -45 | N/A | N/A |
| doba mrazení | N/A | 10 | N/A |
| spuštění vakua | -60 | N/A | 53 |
| primární sušení | -20 | 1260 | 13 |
| sekundární sušení | 10 | 30 | 60 |
| skladování | 5 | N/A | 60 |
Sterilizace:
Vialky s lyofilizovaným materiálem jsou při sterilních podmínkách opatřeny sterilními slitinovými uzávěry. Po tomto kroku je produkt přepraven na finální sterilizaci. Finální sterilizace je prováděna v zařízení certifikovaném pro sterilizaci biologických léčivých přípravků při dávkách 12 až 18 kGy, získaný produkt byl sypký prášek.
U takto získaného produktu byl stanoven obsah celkového proteinu metodou podle Bradfordové. Vzorky použité pro metodu jsou odvozeny izolací proteinů pomocí RIPA pufru. Dále byl stanoven obsah interleukinů komerčním kitem metodou ELISA. Výsledky jsou uvedeny na obr. 2 a 3, a ukazují, že sterilizace při uvedených dávkách nesnížila obsah proteinů ani interleukinu. Ani teplota sterilizace neměla vliv.
Pokud se sterilizace prováděla při dávkách 25 až 30 kGy, byla výsledkem pevná fáze, která byla lepivá, mazlavá, a nebylo možné s ní provádět žádné další experimenty.
Charakterizace produktu:
U produktu získaného uvedeným postupem byly provedeny některé testy a studie ukazující stabilitu pro transport a skladování, a biologickou aktivitu.
Stabilita produktu byla monitorována po dobu 4 týdnů. Obsah vody byl stanoven coulometrickou Karl Fischer titrací s tepelnou desorpcí, obsah celkového proteinu metodou podle Bradfordové. Výsledky jsou uvedeny v tabulce:
| Týden | Zbytková vlhkost [%] | Celkový protein [pg/mg] |
| 0. | 1,743 | 154,633 |
| 2. | 1,8 | 173,152 |
| 4. | 1,8 | 158,397 |
Testování cytotoxicity bylo provedeno za použití několika in vitro savčích buněčných kultur. Neošetřené (kontrolní) makrofágy jsou znázorněny na obrázku A. Kultivace makrofágů ošetřených produktem (10 mg/ml) prokázala adherenci testovaného materiálu k buňkám a tvorbu koloidu na obrázku B. Imunomodulační aktivita vzorků z lidské placenty byla testována pomocí
- 8 CZ 309798 B6 standardních buněčných linií RAW 264.7 myších makrofágů. Byly použity THP-1 - lidské a nediferencované buňky monocytární linie a komplexní systém plné lidské krve. Imunomodulační aktivita byla studována detekcí různých aktivačních markerů, tzn. endotoxin z E.coli (LPS - lipopolysacharid) - aktivace RAW buněk a dlouhodobá aktivace lidské krve; ii. TNF-α - aktivace THP-1 buněk. Produkt nevykazuje známky cytotoxicity. Má také vysokou vazebnou schopnost vůči savčím buňkám tvořícím koloidní prostředí. Výsledky jsou uvedeny na obr. 4.
Detekce dusitanů byla prováděna Griessovou reakcí. Produkce NO je jedním z vysoce citlivých aktivačních markerů makrofágů. Data pro aktivované vzorky byla analyzována statistickou metodou ANOVA a porovnána s aktivovanou kontrolou a následována Dunnettovým vícenásobným srovnávacím testem. Produkt obsahuje určité stopy dusitanů, což je typické pro amniovou membránu. Aplikace produktu (před a po aktivaci makrofágů) významně snížila zprostředkovanou aktivaci buněk ve srovnání s aktivovanou kontrolou bez aplikace roduktu. To demonstruje imunomodulační a protizánětlivý potenciál produktu. Výsledky jsou uvedeny na obr. 5 (HAS = produkt).
Dále byla zkoumána produkce interleukinu 6. IL-6 je typický prozánětlivý cytokin produkovaný např. aktivovanými makrofágy. Nastavení A - předléčení produktem a další aktivace, nastavení B - aktivace buněk a následné ošetření produktem. V obou případech bylo předléčení 1 h a celé ošetření 24 h. Data byla vyjádřena jako průměr + střední chyba průěmru. K analýze významnosti léčby produktem s neošetřenou kontrolou byl použit t-test jednoho vzorku. Data pro aktivované vzorky byla analyzována pomocí ANOVA, porovnána s aktivovanou kontrolou a následována Dunnettovým vícenásobným srovnávacím testem. Aktivace makrofágů a sekrece IL-6 buněčnými liniemi RAW s/bez kultivace s Produktem byla testována pomocí ELISA testu. Produkt významně snížil produkci IL-6 makrofágy po aktivaci LPS v různých experimentálních uspořádáních. Výsledky jsou uvedeny na obr. 6 (HAS = produkt).
Příklad 2: Příprava materiálu na bázi perinatální tkáně
Získání vstupního materiálu, čištění, resekce:
Placenty jsou získávány při plánovaném porodu císařským řezem pouze od zdravých dárkyň. Po aseptickém odebrání a informovaném souhlasu dárkyně je placena transportována za sterilních podmínek do GMP laboratoře. Placenta je zabalena ve sterilním obalu. Při zpracování se sebe oddělní všechny typy perinatálních tkání pomocí sterilních nůžek či skalpelu. Krok čištění perinatálních tkání se skládá ze dvou kroků. Jemného proprání ve fyziologickém roztoku a mechanického očištění. Tyto kroky se alespoň 2x opakují. Poslední krok čištění je prováděn laváží ve sterilní vodě pro injekce. Po čištění se nechá tkáň uschnout volně na vzduchu (za aseptických podmínek), obvykle po dobu 15 až 40 minut. Takto vyčištěná tkáň je uložena, ve tvaru nepřesahujícím 50 mm v žádném směru, v primárním, sekundárním a terciálním obalu a je zamražena v hlubokomrazícím boxu.
Kryomletí:
V prostorách čistoty A je tkáň vybalena a umístěna do mlecí kapsle, kam jsou doplněny i vysterilizované mlecí kuličky. Kapsle i mlecí kuličky jsou z nerezové oceli. Kapsle je pevně uzavřena a umístěna do chladícího pláště, který se rovněž pevně uzavře. Následně je prováděn kryomlecí proces. Nejprve se provede předchlazení při třepání o frekvenci 5 až 10 Hz, potom 5 mlecích cyklů při 20 až 40 Hz, přičemž mezi mlecími cykly jsou mezichladicí cykly (intercooling) při 5 až 10 Hz. Poté následuje rozmrzání kapsle. Chlazení je zajištěno prouděním kapalného dusíku.
- 9 CZ 309798 B6
Homogenizace a plnění do primárního obalu:
Po namletí tkáně se kapsle nechá rozmrznout a obsah je poté smísen se sterilní vodou pro injekce v objemovém poměru tkáň:voda 1:0,85. Směs je pomocí sterilní jednorázové pipety přenesena do sterilní lahve, celý objem se homogenizuje pomocí ultrasonického homogenizátoru, který při 40 až 100 W 10 až 20 pulzy celou směs rovnoměrně zhomogenizuje.
Obdobně jako v příkladu 1 se vypočte objem tkáně pro rozplnění do vialek, a rozp lnění se rovněž provede stejně jako v příkladu 1.
Lyofilizace:
Dalším krokem je sušení mrazem (lyofilizace), které vysušuje již mikronizovanou směs perinatálních tkání s vodou. Může být použit stejný lyofilizační protokol jako v příkladu 1.
Sterilizace:
Sterilizace je prováděna obdobně jako v příkladu 1, dávkou 12 až 18 kGy gama-záření. Byl získán sypký prášek.
Testovaná srovnávací standardní dávka 25 až 30 kGy vedla rovněž k produktu, který byl lepivý a dále neanalyzovatelný. Pro použití by takový produkt byl problematický kvůli nejisté rozpustnosti a degradaci proteinů.
Hmotnostní spektroskopie přípravku sterilizovaného dávkou 12 až 18 kGy gama-záření potvrdila, že tento výsledný materiál obsahuje více než 68 proteinů. Obsažené a identifikované proteiny zahrnují:
Cytokiny: glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenáza, annexin 2, TIMP-4, bFGF, PDGF-AA, HGF, EGF, VEGF, cytokiny IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, galektin-1, galektin-3, inhibiční faktor migrace makrofágů (Macrophage migration inhibition factor), pentraxin-3, galektin-7, protein indukovaný transformujícím růstovým faktorem beta (Transforming growth factor beta-induced protein);
Embryonální růstové faktory: dickkopf-příbuzný protein 3 agrin (Dickkopf-related protein 3 agrin);
Enzymy: 5'-nukleosidáza / CD73, alfa-enoláza, fruktóza-bisfosfát aldoláza A, beta podjednotka glukosidázy 2, glutathion S-transferáza P, laktotransferrin, neutrální alfa-glukosidáza AB, peptidyl-prolyl cis-trans isomeráza B, peroxiredoxin-1, peroxiredoxin-6, fosfoglycerát kináza 1, fosfoglycerát mutáza 1, alfa-1 podjednotka prolyl 4-hydroxylázy, protein disulfid-isomeráza, protein disulfid-isomeráza A3, protein disulfid-isomeráza A6, transglutamináza 2 (Proteinglutamin gamma-glutamyltransferáza 2), transketoláza, triosafosfát isomeráza 1, ubikvitinkonjugující enzym E2 N, kataláza peroxiredoxin 1 (thioredoxin peroxidáza 1), peroxiredoxin 2 (thioredoxin peroxidáza 2), superoxid dismutáza [Cu-Zn], superoxid dismutáza [Mn], mitochondriální prekurzor, transthyretinový prekurzor (Prealbumin), laktoylglutathion lyáza;
Proteiny extracelulární matrix: kolagen I, kolagen III, kolagen IV, kolagen V, kolagen VI, kolagen VII, fibronektin, alfa-5 podjednotka lamininu, beta-1 podjednotka lamininu, beta-2 podjednotka lamininu, gama-1 podjednotka lamininu, lumikan, nidogen-1, nidogen-2, alfa-3 podjednotka lamininu, gama-2 podjednotka lamininu, beta-2 podjednotka lamininu, perlekan proteoglykanový jádrový protein heparansultátu specifický pro bazální membránu);
Hormony: angiotensinogen;
- 10 CZ 309798 B6
Matricové metaloproteinázy: kolagenáza typu IV (matrix metalloproteináza-2), stromelysin-2 (matrix metalloproteináza-10), induktor metaloproteináz extracelulární matrix /basigin;
Neurotrofické faktory: neuron-specifická enoláza;
Inhibitory proteáz: alfa-1-antitrypsin, alfa-2-makroglobulin, cystatin B, těžký řetězec H1 interalfa-trypsin inhibitoru, těžký řetězec H2 inter-alfa-trypsin inhibitoru.
Materiál má velikost částic nejvýše 200 μm.
Přípravek lze dále formulovat dle potřeby do formy injekčních přípravků (rozpuštění ve vodě pro injekce), gelových přípravků (vnesení do gelového základu), mastí (vnesení do masťového základu), krémů (vnesení do krémového základu). Masťové, krémové a gelové základy jsou běžně komerčně dostupné, např. od dodavatele Ambiderman.
Claims (7)
1. Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:
a) čištění vstupní perinatální tkáně a volitelně její resekci a/nebo tvarování na části, jejichž rozměr v žádném směru nepřesahuje 50 mm; přičemž se tkáň po čištění ponechá uschnout po dobu 15 až 40 minut;
b) kryomletí perinatální tkáně v kryogenním mlýnu v uzavíratelných kapslích z chirurgické oceli s mlecími kuličkami z chirurgické oceli;
c) homogenizace namleté perinatální tkáně ultrazvukovým homogenizátorem;
d) plnění namleté a homogenizované perinatální tkáně za stálého míchání do primárního obalu;
e) lyofilizace namleté a homogenizované perinatální tkáně v primárním obalu;
f) sterilizace lyofilizované namleté a homogenizované perinatální tkáně, tvořící biologický léčivý přípravek, v primárním obalu gama-zářením při dávce 5 až 20 kGy;
přičemž celý proces se provádí bez přítomnosti antibiotik i antimykotik.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že krok čištění a resekce perinatální tkáně se provádí laváží ve fyziologickém roztoku a následným mechanickým očištěním, tedy manuálním odstraněním reziduí krve a nečistot z tkáně, přičemž laváž a mechanické očištění se alespoň dvakrát opakují, a přičemž se s výhodou poslední laváž provede ve sterilní vodě pro injekce.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že krok kryomletí se provádí v kryogenním mlýnu předchlazením za třepání při frekvenci alespoň 3 Hz a samotným mletím při frekvenci alespoň 20 Hz, v alespoň 4 mlecích cyklech, po celkovou dobu mlecích cyklů alespoň 15 minut, přičemž i při mezichladících cyklech se vzorek protřepává při frekvenci alespoň 3 Hz.
4. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že krok homogenizace se provádí ultrazvukovým homogenizátorem při výkonu 40 až 100 W, 10 až 20 pulzy.
5. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že krok plnění do primárního obalu zahrnuje výpočet objemu plnění, tak, že se odebere více vzorků namleté a homogenizované perinatální tkáně pro měření obsahu sušiny, a potom se na základě průměrného obsahu sušiny vypočte objem namleté a homogenizované perinatální tkáně, který odpovídá požadovanému množství sušiny pro plnění do primárního obalu.
6. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že se do primárního obalu namletá a homogenizovaná perinatální tkáň plní pomocí peristaltické pumpy za míchání namleté a homogenizované perinatální tkáně, s výhodou za míchání magnetickým míchadlem.
7. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že krok lyofilizace se provádí při nejnižší hodnotě tlaku 13 Pa a nejnižší teplotě -60 °C, a následně se primární obal uzavře.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2022-116A CZ309798B6 (cs) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití |
| PCT/CZ2023/050013 WO2023174463A1 (en) | 2022-03-15 | 2023-03-14 | Method of preparation of a biological therapeutic product based on perinatal tissue, and the product |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2022-116A CZ309798B6 (cs) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2022116A3 CZ2022116A3 (cs) | 2023-09-27 |
| CZ309798B6 true CZ309798B6 (cs) | 2023-10-18 |
Family
ID=86282115
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2022-116A CZ309798B6 (cs) | 2022-03-15 | 2022-03-15 | Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ309798B6 (cs) |
| WO (1) | WO2023174463A1 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007038686A2 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Tissuetech, Inc. | Amniotic membrane preparations and purified compositions and methods of use |
| WO2012170905A1 (en) * | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Tissuetech, Inc. | Methods of processing fetal support tissues, fetal support tissue powder products, and uses thereof |
| WO2013032938A1 (en) * | 2011-08-26 | 2013-03-07 | Tissuetech, Inc. | Methods of sterilizing fetal support tissues |
-
2022
- 2022-03-15 CZ CZ2022-116A patent/CZ309798B6/cs unknown
-
2023
- 2023-03-14 WO PCT/CZ2023/050013 patent/WO2023174463A1/en unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007038686A2 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Tissuetech, Inc. | Amniotic membrane preparations and purified compositions and methods of use |
| WO2012170905A1 (en) * | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Tissuetech, Inc. | Methods of processing fetal support tissues, fetal support tissue powder products, and uses thereof |
| WO2013032938A1 (en) * | 2011-08-26 | 2013-03-07 | Tissuetech, Inc. | Methods of sterilizing fetal support tissues |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023174463A1 (en) | 2023-09-21 |
| CZ2022116A3 (cs) | 2023-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2652025T3 (es) | Composición de injerto óseo | |
| KR101967085B1 (ko) | 건조 및 안정한 지혈 조성물의 제조 방법 | |
| JP5226914B2 (ja) | 粒状無細胞組織マトリックス | |
| JP6533212B2 (ja) | 成型胎盤組織組成物、ならびにその製造および使用の方法 | |
| US20190134099A1 (en) | Human tissue derived compositions and uses thereof | |
| EP3672607B1 (fr) | Composition comprenant de la gelee de wharton, procede de preparation et utilisations | |
| EP3862422A1 (en) | Extracellular matrix composition beads for cell culture | |
| CZ309798B6 (cs) | Způsob přípravy biologického léčivého přípravku na bázi perinatální tkáně, práškový materiál a jeho použití | |
| Zhang et al. | Functionalized human umbilical cord mesenchymal stem cells and injectable HA/Gel hydrogel synergy in endometrial repair and fertility recovery | |
| JP2021506931A (ja) | 病原体減少血小板組成物および関連方法 | |
| WO2019035925A1 (en) | COMPOSITION AND METHOD FOR TREATING SKIN AFFECTION | |
| Albieri et al. | Induction of erythrophagocytic activity in cultured mouse trophoblast cells by phorbol myristate acetate and all-trans-retinal | |
| Bujia et al. | Determination of viability of cryopreserved cartilage grafts | |
| US7264826B2 (en) | Pharmaceutical compositions of cell lysate and processes for the production and use thereof | |
| US20160287752A1 (en) | Reconstituted amniotic membrane-amniotic fluid combination tissue graft with standardized stem cell component and method of forming same | |
| WO2016109834A1 (en) | Denuded amnion flowable tissue graft and method of forming same | |
| WO2024006343A1 (en) | Micronized compositions for wound healing prepared from intact human amnion-chorion tissue having an intact intermediate spongy layer positioned there between | |
| US20160287749A1 (en) | Reconstituted amniotic membrane-amniotic fluid combination tissue graft | |
| RU2794766C1 (ru) | Композиционный биоматериал, обладающий гемостатической и регенеративной активностью (варианты) | |
| WO2023211823A1 (en) | Compositions and methods relating to pooled fetal support tissue | |
| EP4117626A1 (en) | Human tissue derived compositions and uses thereof | |
| WO2024006353A1 (en) | Sterile human placental allografts and methods of making thereof | |
| Wolkers et al. | 77. Effect of gamma sterilization on proteins in AlloDermTM regenerative tissue matrix |