CZ309579B6

CZ309579B6 - Protinádorové sloučeniny na bázi dusíkatých heterocyklů, jejich použití jako léčiv a farmaceutické přípravky je obsahujíci

Info

Publication number: CZ309579B6
Application number: CZ2021-230A
Authority: CZ
Inventors: Lukáš Gorecki; Gorecki Lukáš PharmDr., Ph.D; Martina Řezáčová; Jan Korábečný; Darina Muthná
Original assignee: Fakultní nemocnice Hradec Králové
Priority date: 2021-05-10
Filing date: 2021-05-10
Publication date: 2023-04-26
Also published as: WO2022237922A1; CZ2021230A3

Abstract

Předkládané řešení poskytuje dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I, kde X je C nebo N; R1 je vybráno ze skupiny C1-C6 alkylů; Z- je –CH2- nebo –C(O)-; R2 je primární nebo sekundární amin připojený přes Z k základnímu heterocyklu, vybraný ze skupiny zahrnující anilino; anilino substituovaný di(C1-C6 alkyl)amino skupinou v poloze 2, 3, nebo 4; benzylamino; benzylamino substituovaný di(C1-C6 alkyl)amino skupinou v poloze 2, 3, nebo 4; 4-fenylpiperidin-1-yl, 1-(C1-C6 alkyl)piperazin-4-yl, 1,2,3,4-tetrahydroisochinolinyl; 1-(C1-C6 alkansulfonyl)piperazin-4-yl, 4-[4‐(C1-C6 alkyl)‐piperazin‐1‐yl]piperidin-1-yl; a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, nebo jejich adiční soli s kyselinami. Uvedené látky jsou inhibitory ATR kinasy, vhodné zejména pro léčbu nádorových onemocnění, a to jak v monoterapii, tak v kombinaci s dalším chemoterapeutikem nebo s radioterapií.

Description

Protinádorové sloučeniny na bázi dusíkatých heterocyklů, jejich použití jako léčiv a farmaceutické přípravky je obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká nových derivátů dusíkatých heterocyklických sloučenin, jejich použití jako léčiv a farmaceutických přípravků s těmito sloučeninami.

Dosavadní stav techniky

Konvenční chemoterapie a radioterapie je v dnešní době, i přes velké pokroky v oblasti cílené terapie a jiných postupů, stále nepostradatelným nástrojem v boji proti nádorovým onemocněním. Tyto postupy, známé už od počátku 20. století, zasahují do základních funkcí dělících se buněk a jsou velmi účinné proti rychle proliferujícím nádorovým buňkám. Bohužel tyto zásahy také ovlivňují vitální děje zdravých buněk a způsobují tak řadu nežádoucích účinků. Mezi nejčastěji zasažené zdravé buňky patří buňky sliznice střev, kostní dřeně, reprodukčních orgánů a vlasových váčků. V důsledku protinádorové terapie dochází k řadě mutací, které mohou v budoucnu vést ke vzniku sekundárních nádorových onemocnění. Druhou nevýhodou konvenční terapie cytostatiky nebo ozařováním bývá jejich nedostatečná účinnost u některých pacientů. Mimoto se často u těchto nádorových buněk kvůli rychlé proliferaci rozvíjí rezistence na terapii.

Rezistence nádorů k léčbě je závažný problém. Mechanismů, kterými se buňky brání, je celá řada. Jednou ze základních příčin rezistence je přirozená schopnost všech buněk opravovat svou DNA. Na jednu stranu jsou opravy DNA nepostradatelné pro život a vývoj buněk, při ozařování a chemoterapii ale snižují efekt léčby, protože opravují DNA léze vzniklé právě léčbou. Díky tomu se buněčné odpovědi na poškození DNA (tzv. DNA damage response) staly studovanou oblastí výzkumu rakoviny. DNA damage response obsahuje složité, a ne zcela kompletně popsané signalizační kaskády se stovkou různých proteinů. Drobné zásahy do těchto signalizačních drah léčivy mohou přispět ke zvýšení účinnosti cytotoxické léčby. Nádorové buňky jsou totiž často zatíženy mnoha mutacemi v těchto drahách v důsledku, nichž mohou reagovat na zásah do reparačních procesů DNA citlivěji než buňky zdravé, které mají funkční i další, rezervní cesty k opravě DNA. Specifickým zásahem do DNA damage response je tedy možné zacílit léčbu na nádorové buňky a tím zvýšit účinnost klasické léčby, omezit nežádoucí účinky léčiv, ale i zabíjet nádorové buňky v monoterapii [JACKSON, Stephen P. a Jiri BARTEK. The DNA-damage response in human biology and disease. Nature [online]. 2009, 461(7267), 1071-1078. ISSN 14764687. Dostupné z: doi:10.1038/nature08467].

Doposud byla identifikovaná celá řada kináz, které by mohly být pro tento cíl využitelné. Mezi velmi zajímavé a v literatuře zkoumané kinázy patří rodina fosfatidylinositol 3-kinázám příbuzných kináz (PIKK), které hrají stěžejní roli v řízení DNA damage response. Nejdiskutovanějšími zástupci jsou pak kinázy ataxia telangiectasia mutated (ATM), ataxia telangiectasia and Rad3-related (ATR) a DNA-dependentní protein kináza (DNA-PK) [BLACKFORD, Andrew N. a Stephen P. JACKSON. ATM, ATR, and DNA-PK: The Trinity at the Heart of the DNA Damage Response. Molecular Cell [online]. 2017, 66(6), 801-817. ISSN 1097-2765. Dostupné z: doi:10.1016/j.molcel.2017.05.015]. Kináza ATR je aktivována jako odpověď na replikační stres, který může být vyvolán celou řadou endogenních i exogenních faktorů. V případě replikačního stresu dojde k zastavení a stabilizaci replikační vidlice. Při inhibici ATR kinázy dochází ke kolapsu replikační vidlice vedoucímu k ireverzibilnímu a potenciálně letálnímu poškození DNA. Pokud toto poškození není rychle vyřešeno, může být spuštěna apoptóza [SALDIVAR, Joshua C., David CORTEZ a Karlene A. CIMPRICH. The essential kinase ATR: ensuring faithful duplication of a challenging genome. Nature reviews. Molecular cell biology [online]. 2017, 18(10), 622-636. ISSN 1471-0072. Dostupné z: doi:10.1038/nrm.2017.67; LECONA, Emilio a Oscar FERNANDEZ-CAPETILLO. Targeting ATR in cancer. Nature

- 1 CZ 309579 B6

Reviews Cancer [online], 2018, 18(9), 586-595. ISSN 1474-1768. Dostupné z: doi: 10.1038/s41568-018-0034-3]. Vzhledem k atraktivnosti této kinázy s ohledem její důležitost v rakovinných buňkách, bylo vyvinuto několik stovek různě účinných a selektivních inhibitorů [např. GORECKI, Lukas, Martin ANDRS, Martina REZACOVA a Jan KORABECNY. Discovery of ATR kinase inhibitor berzosertib (VX-970, M6620): Clinical candidate for cancer therapy. Pharmacology & Therapeutics [online], 2020, 107518. ISSN 1879-016X. Dostupné z: doi:10.1016/j.pharmthera.2020.107518; GORECKI, Lukas, Martin ANDRS a Jan KORABECNY. Clinical Candidates Targeting the ATR-CHK1-WEE1 Axis in Cancer. Cancers [online], 2021, 13(4), 795. Dostupné z: doi: 10.3390/cancers 13040795]. Tyto sloučeniny pak mohou najít uplatnění v léčbě nádorových onemocnění jak v monoterapii, tak i v kombinačním režimu s některým ze standardních chemo- či radioterapeutik. V současnosti se čtyři nejúspěšnější sloučeniny nachází v klinickém testování jako monoterapeutika, nebo senzitizéry chemo- či radioterapie. Celkem bylo otevřeno již přes 60 klinických stadií. Ačkoliv tyto známé sloučeniny již potvrdily svou účinnost ve druhé fázi klinického hodnocení, postup do třetí fáze je stále v očekávání. To zároveň dává i prostor pro vývoj nových účinnějších nebo selektivnějších inhibitorů.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I:

(I), kde X je C nebo N;

R¹ je vybráno ze skupiny C1-C6 alkylů;

Z-je-CH2- nebo -C(O)-;

R² je primární nebo sekundární amin připojený přes Z k základnímu heterocyklu, vybraný ze skupiny zahrnující anilino; anilino substituovaný di(Cl-C6 alkyljamino skupinou v poloze 2, 3, nebo 4; benzylamino; benzylamino substituovaný di(Cl-C6 alkyljamino skupinou v poloze 2, 3, nebo 4; 4-fenylpiperidin-1-yl, 1-(C1-C6 alkyl)piperazin-4-yl, 1,2,3,4-tetrahydroisochinolinyl; 1(C1-C6 alkansulfonyl)piperazin-4-yl, 4-[4-(Cl-C6 alkylj-piperazin-1 -yl]piperidin-1 -yl a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, nebo jejich adiční soli s kyselinami.

Adiční soli s kyselinami zahrnují zejména hydrochloridy, hydrobromidy, hydrofluoridy, hydrojodidy, dusičnany, dusitany, sulfáty, bisulfáty, boráty, citráty, fúmaráty, laktáty, maláty, maleáty, mesyláty, tosyláty, oxaláty, vínany, octany, mravenčnany, salicyláty, aspartáty, adipáty, benzoáty, palmitáty, stearáty, besyláty, fosfáty, uhličitany, hydrogenuhličitany.

V některých výhodných provedeních X je N a Z je -C(O)-.

-2CZ 309579 B6

C1-C6 alkyl je nasycený uhlovodíkový zbytek, lineární, větvený nebo cyklický. Větvený nebo cyklický alkyl připadá v úvahu pro počty uhlíků C3-C6. Zejména může alkyl být vybrán ze skupiny methyl, ethyl, propyl, butyl, isopropyl, isobutyl, tert-butyl, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

V případě di(Cl-C6 alkyljamino skupin mohou být alkyly stejné nebo různé.

Předkládaný vynález tedy přináší nové deriváty dusíkatých heterocyklických sloučenin, konkrétně l//-pyrrolo[2,3-á]pyridiny substituované v poloze 2 nebo 3 a v poloze 5, a l//-pyrazolo[3,4Z?]pyridiny substituované v poloze 3 a 5, a jejich soli. Tyto sloučeniny se skládají ze tří základních fragmentů, které jsou nezbytné pro správnou orientaci ligandu v ATP vázající kavitě ATR kinázy. První z fragmentů je dusíkatý heterocyklus s předpokládanou π-π interakcí v kavitě kinázy. Tento dusíkatý heterocyklus je v předkládaném vynálezu disubstituovaný 1 //-pynOlo[2,3-/?]pyridin, nebo l//-pyrazolo[3,4-á]pyridin.

Z tohoto centrálního heterocyklu je připojen vazbou C-C v poloze 5 objemný alkansulfonylfenylový substituent. Ten je nezbytný pro zachování selektivity vůči ATR kináze. Tento substituent slouží rovněž jako donor vodíkových vazeb pro zajištění afinity k enzymu. Druhá strana molekuly je s výhodou zastoupena bazickými substituenty. Ty zajištují vyšší vazebnost do kavity enzymu zejména interakcemi s anionickou oblastí proteinu. Tyto bazické hlavice jsou připojeny k základnímu dusíkatému heterocyklu v poloze 2 nebo 3 v případě I //-pyrrolo[2,3Z?]pyridinu a v poloze 3 v případě l//-pyrazolo[3,4-á]pyridinu. Připojení je realizováno prostřednictvím methylenového, nebo karbonylového spojovacího můstku. Výhoda methylenového můstku spočívá ve flexibilitě daného substitoento s předpokládanou vhodnou orientací ligandu do anionické kapsy. Karbonylový můstek může naopak poskytovat přídavné vodíkové můstky při fixaci molekuly (rigidní charakter karbonylu), čímž může být při celkově správné konstrukci sloučenin docíleno selektivity vůči kináze. Oba tyto přístupy se ukázaly jako účinné.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou s výhodou vybrány ze skupiny:

číslo sloučeniny	struktura	název sloučeniny
1		4-fenyl-l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3-yl}methyl)piperidin
2		l-ethyl-4-[l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3-yl}methyl)piperidin-4yl]piperazin
3		1 -ethyl-4-(l - {5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]- 1Hpyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3-karbonyl}piperidin-4yljpiperazin
4		1 -ethyl-4- {5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]- 1Hpyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3-karbonyl}piperazin

-3CZ 309579 B6

5	Ύ*	jU	4-fenyl-1 - {5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]- 1Ηpyrrolo [2,3 -Z?]pyridin-3 -karbonyl} piperidin
6	Τ’⁶	u	2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3Z?]pyridin-3-karbonyl}-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin
7	ο 1 J I ^b	N ^H (7^¼^ -d'HH	,V-bcnzy 1 -5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl] -1Hpyrrolo [2,3 -Z?]pyridin-3 -karboxamid
8			7V-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3karboxamid
9	o Jf	ΓΙ/ #J ςΛ^Η /	7V-[4-(dimethylamino)fenyl]-5-[4-(propan-2sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3karboxamid
10		H CT	1 - [5-(4-methansulfonylfenyl)-1 //-py rrol o [2,3Z?]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin
11	N	H °	N- {[4-(diethylamino)fenyl]methyl} -5-(4methansulfonylfenyl)-l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-3karboxamid
12		N )	1 -ethyl-4-[5-(4-methansulfonylfenyl)-1 //- pyrrol o [2,3 Z?]pyridin-2-karbonyl]piperazin
13	1	'^Νν^	1 - [5-(4-methansulfonylfenyl)-1 //-pyrrole [2,3Z?]pyridin-2-karbonyl]-4-fenylpiperidin
14	/JÍ P	,V-bcnzy 1 -5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl] -1//pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-2-karboxamid
15	o [I J T ^b	^^Ν·5^Ν ° ιαΡλ	2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3Z?]pyridin-2-karbonyl}-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin
16	^xj	_u Η 0 Hn— Γ	7V-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridin-2karboxamid
17	c> Í J γ b	XX?	,V-bcnzy 1 -5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl] -1//pyrazolo[3,4-Z?]pyridin-3-karboxamid

-4CZ 309579 B6

A-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2sulfonyl)fenyl]-l//-pyrazolo[3,4-Z?]pyridin-3karboxamid

4-fenyl-1 - {5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-\Hpyrazolo[3,4-á]pyridin-3-karbonyl}piperidin

-[5-(4-methansulfonylfenyl)- l//-pyrazolo[3,4á]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin

Předmětem vynálezu jsou dále dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I pro použití jako léčiva, zejména pro léčbu nádorových onemocnění.

Látky obecného vzorce I jsou vhodné pro léčebné použití v monoterapii nebo v kombinační terapii s jinými protinádorovými léčivy (např. antracyklinová nebo platinová cytostatika) a/nebo s radioterapií. Použitím v monoterapii se rozumí podání léčiva obecného vzorce I, za účelem zastavení progrese nádorového bujení, či za účelem redukce počtu nádorových buněk. Použitím v kombinační terapii se rozumí podání léčiva obecného vzorce I v kombinaci se standardní raditoterapií či chemoterapií za účelem potenciace účinku vůči nádorovým buňkám.

Termín „léčba“ označuje podávání léčivé látky, která může sloužit ke snížení symptomatických projevů onemocnění. Tento efekt se může vztahovat ke zpomalení progrese nemoci, nebo zlepšení v jakémkoliv směru ve zdravotním stavu pacienta. To zahrnuje snížení nebo zastavení proliferace nádorových buněk, zamezení nebo potlačení invaze a metastazování, podpoření genomové nestability a mutagenity, zamezení resistence k buněčné smrti, vyhnutí se replikační nesmrtelnosti či podpoření tumorových supresorů.

Předmětem vynálezu je dále farmaceutický přípravek obsahující alespoň jednu dusíkatou heterocyklickou sloučeninu obecného vzorce I podle tohoto vynálezu a alespoň jeden farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku. Farmaceuticky přijatelné pomocné látky mohou zahrnovat nosiče, plniva, pojivá, rozpouštědla, a další, jak je známo odborníkovi v oboru farmaceutických formulací.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podány zejména perorální nebo parenterální cestou. Farmaceutický přípravek může být formulován do různých farmaceutických forem, jako jsou granule, prášky, tablety, gely, kapsle, sirupy, emulze, suspenze a formy pro parenterální podání jako injekční formulace, infůzní formulace, spreje či čípky. Tyto formy mohou být připraveny obecně známými postupy.

Farmaceutickou formu pro injekční podání lze získat například následujícím postupem. Aktivní složka je rozpuštěna, suspendována nebo emulgována ve vodném mediu, například ve vodě, solance nebo Ringerově roztoku, nebo v olejnatém médiu (např. olivový olej, sezamový olej, lněný olej, kukuřičný olej nebo propylenglykol), s dispergační složkou (např. Tween® 80, HCO® 60, polyethylenglykol, karboxymethylcelulosa nebo alginát sodný, s konzervační složkou (např. methyl-p-hydroxybenzoát, propyl-p-hydroxybenzoát, benzylalkohol, chlorbutanol nebo fenol), izotonickým činidlem (např. chlorid sodný, glycerol, sorbitol nebo glukosa), a dalšími optimální aditivy jako jsou například solubilizátory (např. salicylát sodný, acetát sodný), nebo stabilizátory (např. lidský sérový albumin).

Dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I odvozené od l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridinu, kde sekundární amin v poloze 3 základního cyklu je připojen methylenovým můstkem, lze připravit postupem uvedeným na schématu 1. V prvním kroku byla provedena reduktivní aminace za pomocí triacetoxyborohydridu sodného. V tomto kroku reagoval aromatický aldehyd 21, se sekundárními aminy za vzniku iminiového meziproduktu, který byl ihned redukován na terciární amin (sloučeniny 22 až 24). V druhém kroku byl proveden modifikovaný Suzuki-Miyaura CrossCoupling, za použití mikrovlnného reaktoru. Tato reakce aromatického bromidu (22 až 24) s arylboronovou kyselinou, byla katalyzována Pd(dppf)C12.DCM ([1,1'bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladium(II), komplex s dichlormethanem) a vedla k produktům 1 a 2.

b)

22 R = 4-fenylpiperidin-1 -yl

R = 4-(4-ethylpiperazin-1-y)piperidin-1-yl

R = 4-ethylpiperazin-1-yl

R = 4-fenylpi peridi n-1 -yl

R = 4-(4-ethylpiperazin-1 -y)pipe rid in-1 -yl

Schéma 1 Příprava sloučenin obecného vzorce I se strukturním základem l//-pyrrolo[2,3ů]pyridin s napojeným methylenovým můstkem v poloze 3 k vybranému sekundárnímu aminu. Reakční podmínky: a) sekundární amin, NaBH(OAc)3 (triacetoxyborohydrid sodný), AcOH (kyselina octová), 90 °C, THF (tetrahydrofůranj/methanol (MeOH) (1:1), Ar (argon), 24 hodin; b) arylboronová kyselina, Pd(dppf)C12.DCM ([l,l'-bis(difenylfosfino)ferrocen]dichlorpalladium(II), komplex s dichlormethanem), Na2CO3 (uhličitan sodný), dioxan/voda (4:1), Ar, reakce v mikrovlnném reaktoru (výkon 100 W) při 110 °C po dobu jedné hodiny.

Dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I odvozené od l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridinu nebo od l//-pyrazolo[3,4-ů]pyridinu, kde primární nebo sekundární amin je připojen karbonylovým můstkem v poloze 2 nebo 3 základního cyklu, lze připravit postupem znázorněným ve schématu 2 (25 až 27). V prvním kroku byl proveden modifikovaný Suzuki-Miyaura CrossCoupling katalyzovaný Pd(dppf)C12.DCM. V případě produktů 30 až 35 byla tato reakce provedena za standardních podmínek při zahřívání na 110 °C po dobu tří dnů. V případě produktů 32 až 35 došlo rovnou k hydrolýze esteru a výsledné produkty byly izolovány jako hydrochloridové soli karboxylových kyselin (32 a 33), nebo jako neutrální sloučeniny karboxylových kyselin (34 a 35). Na druhou stranu produkty 30 a 31, byly nejdřív izolovány ve formě esterových sloučenin (36 a 37), jež byly následně hydrolyzovány za pomoci hydroxidu sodného za varu. Kyseliny 30 a 31 byly následně izolovány jako hydrochloridové soli. Všechny tyto karboxylové kyseliny 30 až 35 byly nakonec podrobeny reakci s primárním nebo sekundárním aminem za vzniku příslušného sekundárního či terciárního amidu. Tato reakce byla katalyzována EDC.HC1 (N-(3dimethylaminopropyl)-V'-ethylkarbodiimidhydrochlorid), ΗΟΒΪ.Η2Ο (1 hydroxybenzotriazolhydrát) a DIPEA (V,V-diisopropylethylamin) za vzniku finálních produktů 3 až 20.

3-subst..X = C

2-subst.,X = C

3-SUbSt.. X = N

HO OH i a); b) použito pouze ll^ ^v P^r^P^^e produktu 30 a 31 o=s=o

R¹

R¹ = Me;

R¹ = IPr:

3-subst.; X = C; R¹ = Me; ,HCI

3-subst.; X = C; R¹ = ÍPr; .HCI

2-subst. X = C; R¹ = Me; .HCI

2-subst.; X = C; R¹ = IPr; .HCI

3-SUbSt.; X = N; R¹ = Me;

3-subst.; X = N; R¹ = ÍPr;

3-9 3-subst.; X = C: R¹ = IPr 10-11 3-subst.; X = C; R¹ = Me 12-13 2-subst.; X = C; R¹ = Me 14-16 2-subst.; X = C; R¹ = IPr 17-19 3-subst.; X = N; R¹ = IPr

3-subst.; X = N R¹ = Me

Schéma 2 Příprava sloučenin obecného vzorce I odvozené od l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridinu nebo od l//-pyrazolo[3,4-ů]pyridinu, kde je vybraný primární nebo sekundární amin připojen

-6CZ 309579 B6 karbonylovým můstkem v poloze 2 nebo 3 základního cyklu. Reakční podmínky: a) arylboronová kyselina 28 nebo 29, Pd(dppf)C12.DCM, Na2CO3, dioxan/voda (4:1), Ar, 110 °C, 72 hodin; b) 2M NaOH (hydroxid sodný), MeOH, 110 °C, 24 hodin; c) vybraný primární nebo sekundární amin, EDC.HC1 (7V-(3-dimethylaminopropyl)-.V-ethylkarbodiimidhydrochlorid), ΗΟΒΪ.Η2Ο (1hydroxybenzotriazolhydrát), DIPEA (ΛζΑ-diisopropylethylamin), THF, pokojová teplota, Ar, 24 hodin, b) arylboronová kyselina 28 nebo 29, Pd(dppf)C12.DCM, Na2CO3, dioxan/voda (4:1), Ar, reakce v mikrovlnném reaktoru (výkon 100 W) při 110 °C po dobu jedné hodiny.

Příklady uskutečnění vynálezu

Vynález je popsán v následujících případech, které jsou pouze ilustrativní a neomezují rozsah vynálezu.

Obecné chemické metody

Tenkovrstva chromatografie byla prováděna na hliníkových destičkách pokrytých silikagelem 60 F254 (Merck, Praha, ČR). Sloupcová chromatografie probíhala za atmosférického tlaku na silikagelu 100 (velikost částic 0,063 až 0,200 mm, 70 až 230 mesh ASTM, Fluka, Praha, ČR). Chemikálie nezbytné pro syntézu byly koupeny ze společnosti Sigma-Aldrich Co. LLC (Praha, ČR) a byly použity bez dalšího čištění. Přístroj CEM Explorer SP 12 S Class byl použit pro reakce prováděné za podmínek mikrovlnné aktivace. Pro stanovení hmotnostní spektrometrie byl využitý analytický systém Dionex Ultimate 3000 LC-MS spojený se spektrometrem Orbitrap Q Exactive Plus (Thermo Fisher Scientific, Brémy, Německo). Systém LC-MS se skládá z binárního čerpadla HHG-3400RS, které je spojené s vakuovým odplyňovačem. Dále z vyhřívaného sloupcového kompartmentu TCC-3000, autosampleru WTS-3000 a ultrafialového detektoru VWD-3000. Kvadrupolový hmotnostní spektrometr byl vybaven elektron-sprejovým ionizačním zdrojem a data byla zaznamenávána v pozitivním módu s následujícími parametry: sprejové napětí bylo 3,2 kV, kapilární teplota byla 350 °C, teplota plynu byla 300 °C. 'H-NMR a ¹³C-NMR spektra byla naměřena pomocí Varian S500 spektrometru (500 a 126 MHz) v CDCL-ti/ (CHCL-ti/; 7,26 (D), 77,16 (C) ppm), v hexadeuteriodimethylsulfoxidu (DMSO-tid; 2,50 (D), 39,7 (C) ppm) nebo CD3OD-C/7 (CHsOH-tiV; 3,35, 4,78 (D), 49,3 (C) ppm). Charaktery jednotlivých signálů byly následující: s (singlet), d (dublet), (dd) (dublet dubleta), t (triplet), p (penteť) nebo m (multiplet). Chemické posuny jsou udávané v ppm (parts per milion, d) vzhledem k TMS (tetramethylsilan). Přiřazení chemických posunů vychází ze standardních NMR experimentů ('H, ¹³C, 'H-'H COSY, 'H-¹³C HSQC, HMBC, DEPT).

Příklad 1 - Příprava sloučenin obecného vzorce I, kde na l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridin je připojen sekundární amin v poloze 3 přes methylenový můstek

THF/MeOH (1:1); Ar sekundární amin NaBH(OAc)₃; AcOH; 90 °C

R = 4-Ťenylpiperidin-1-yl

R = 4-(4-ethylpiperazin-1 -y)piperidin-1 -yl

R = 4-ethylpiperazin-1-yl

Ke sloučenině 21 (1,0 ekv.) suspendované v bezvodém THF a bezvodém MeOH (v poměru 1:1) byl přidán sekundární amin (2,0 ekv.) a kyselina octová (2,0 ekv.) pod inertní atmosférou argonu. Směs pak byla míchána po dobu jedné hodina za teploty místnosti. Následně byl po částech přidán triacetoxyborohydrid sodný (3,0 ekv.) a reakce byla zahřívána na 90 °C po dobu 24 hodin. Po

-7 CZ 309579 B6 ochlazení na teplotu teplotu byla rozpouštědla vakuově oddestilována a reakční směs extrahována mezi ethylacetát (EA; 30 ml) a hydrogenuhličitanu sodný (NaHCO3; 30 ml). Vodná fáze byla následně ještě dvakrát vytřepána s dalším podílem EA (2 x 30 ml). Organické fáze byly spojeny, vysušeny bezvodým síranem sodným (Na2SO4), směs přefiltrována a filtrát odpařen do sucha. Surový produkt byl vyčištěn za pomocí sloupcové chromatografie za zisku sloučenin 22 až 24.

1-({5-brom-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-3-yl}methyl)-4-fenylpiperidin (22): Aldehyd 21 (64 mg; 0,28 mmol); 4-fenylpiperidin (90 mg; 0,56 mmol); AcOH (32 pl; 0,56 mmol) a NaBH(OAc)3 (178 mg; 0,84 mmol) v bezvodém THF (3 ml) a bezvodém MeOH (3 ml). Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (dichlormethan (DCM)/MeOH/hydroxid amonný (NH4OH; vodný 25% roztok) (20:1:0,1) k zisku čistého produktu 22 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 56 %.

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,73 (s, 1H), 8,29 - 8,20 (m, 2H), 7,44 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,29 - 7,12 (m, 5H), 3,63 (s, 2H), 3,01 - 2,93 (m, 2H), 2,48 - 2,39 (m, 1H), 2,05 - 1,98 (m, 2H), 1,75 - 1,68 (m, 2H), 1,66 - 1,55 (m, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 147,21, 146,46, 142,53, 129,37, 128,44, 127,09, 126,84, 126,09, 121,90, 110,52, 110,22, 53,58, 53,24, 42,06, 33,32. HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C19H21BrN3⁺ (m/z): 370,09134; nalezeno: 370,09195.

1-[1-({5-brom-1 H-pyrrolo[2,3- b ]pyridin-3-yl}methyl)piperidin-4-yl]-4-ethylpiperazin (23): Aldehyd 21 (174 mg; 0,773 mmol); 1-ethyl-4-(piperidin-4-yl)piperazin (310 mg; 1,546 mmol); AcOH (90 pl; 1.55 mmol) a NaBH(OAc)3 (491 mg; 2,32 mmol) v bezvodém THF (7 ml) a bezvodém MeOH (7 ml). Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (9:1:0,1) k zisku čistého produktu 23 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 49 %.

1H NMR (500 MHz, CD3OD-d4) δ 8,26 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 3,68 (s, 2H), 3,06 - 2,97 (m, 2H), 2,75 - 2,39 (m, 10H), 2,21 (tt, J = 11,5, 3,8 Hz, 1H), 2,07 (td, J = 12,0, 2,3 Hz, 2H), 1,92 - 1,85 (m, 2H), 1,59 - 1,46 (m, 2H), 1,09 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, CD3OD) δ 148,07, 143,94, 131,16, 128,71, 123,65, 112,09, 110,55, 62,90, 53,61, 53,56, 53,49, 53,18, 49,78, 28,89, 11,68. HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro CwIlxBiNV (m/z): 406,16008; nalezeno: 406,15994.

1-({5-brom-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl}methyl)-4-ethylpiperazin (24): Aldehyd 21 (151 mg; 0,67 mmol); 1-ethylpiperazin (170 pl; 1,34 mmol); AcOH (80 pl; 1,30 mmol) a NaBH(OAc)3 (426 mg; 2,01 mmol) v bezvodém THF (7 ml) a bezvodém MeOH (7 ml). Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (15:1:0,1) k zisku čistého produktu 24 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 75 %.

1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,82 - 11,62 (m, 1H), 8,23 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,48 - 2,30 (m, 8H), 2,27 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 0,95 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 147,23, 142,55, 129,41, 126,98, 121,75, 110,46, 110,11, 53,10, 52,65, 51,74, 12,22. HRMS (ESI+): [M+H]+: vypočítáno pro C_MH20BrN4⁺(m/z): 323,08659; nalezeno: 323,08694.

- 8 CZ 309579 B6

Pd(tfppf)Cl_z.DCM, Na_zCOl· 11O*C dwxan / H_ZO: Ar

b

R = 4-tenyiplpendirM-ýl

R ^M 4-(4-e th y I piper azin-1 -y) piper id i n· 1 y I

R = 4-(eny1pipeiidin-1-yl

R “ 4 -(4 -6thylpiperaztn-1 -yjpiperid n-1 -yt

R » 4-ethyIpiperazi n-1 -yl

Ke sloučenině 22 až 24 (1,0 ekv.) suspendované vbezvodém 1,4-dioxanu, byla přidána arylboronová kyselina (1,3 ekv.) pod inertní atmosférou argonu. Následně Na2CO3 (10,0 ekv), katalyzátor Pd(dppf)C12.DCM (0,01 ekv.) a argonem probublaná voda byly postupně přidány. Reakční směs byla následně podrobena zářením mikrovlnného reaktoru s výkonem 100 W, při 110 °C po dobu jedné hodiny. Po zchlazení byla směs zředěná vodou (30 ml) a třikrát vytřepána EA (3 ^x 30 ml). Organické fáze byly posbírány, vysušeny bezvodým Na2SO4, směs přefiltrována a filtrát odpařen. Výsledek byl vyčištěn za pomocí sloupcové chromatografie pro zisk čistých produktů 1 a 2.

4-fenyl-l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-/>]pyridin-3-yl}methyl)piperidin (1): Sloučenina 22 (47 mg; 0,127 mmol); arylboronová kyselina 29 (38 mg; 0,165 mmol); Na2CO3 (135 mg; 1,27 mmol) v 0,3 ml H2O; Pd(dppf)C12.DCM (1 mg); a 3 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (15:1:0,1)) k zisku čistého produktu 1 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 52 %.

Ή NMR (500 MHz, CD₃OD-íZ₄) δ 8,55 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 8,45 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,98 - 7,91 (m, 4H), 7,45 (s, 1H), 7,24 - 7,09 (m, 5H), 3,80 (s, 2H), 3,37 - 3,34 (m, 1H), 3,11 (dt, J= 11,6, 3,4 Hz, 2H), 2,51 - 2,42 (m, 1H), 2,24 - 2,13 (m, 2H), 1,83 - 1,69 (m, 4H), 1,28 (d, J= 6,9 Hz, 6H). ¹³CNMR(126 MHz, CD3OD) δ 149,59, 147,32, 146,41, 142,71, 136,52, 130,80, 129,39, 128,85, 128,54, 128,45, 127,94, 127,75, 127,16, 122,36, 111,39, 56,63, 54,95, 54,00, 43,51, 34,16, 15,91. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro C₂8H₃2N₃O₂S⁺ (m/z): 474,22097; nalezeno: 474,22144. LC-MS čistota 99 %

l-ethyl-4-[l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-/>]pyridin-3yl}methyl)piperidin-4-yl]piperazin (2): Sloučenina 23 (105 mg; 0,258 mmol); arylboronová kyselina 29 (76 mg; 0,335 mmol); Na2CO3 (273 mg; 2,58 mmol) v 0,5 ml H2O; Pd(dppf)C12.DCM (2 mg; 0,0026 mmol); a 3 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (9:1:0,1) k zisku čistého produktu 2 j ako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 69 %.

-9CZ 309579 B6 'HNMR (600 MHz, DMSO-A) δ 11,63 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 2H), 7,89 (s, 2H), 7,38 (s, 1H), 3,61 (s, 2H), 3,41 (h, J= 6,8 Hz, 1H), 2,88 (d, J= 11,0 Hz, 2H), 2,44 2,23 (m, 8H), 2,20 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,91 - 1,83 (m, 2H), 1,67 - 1,59 (m, 2H), 1,30 (d, J= 12,1 Hz, 2H), 1,19 - 1,12 (m, 6H), 0,90 (t, J= 7,1 Hz, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-A) δ 148,75, 144,44, 141,69, 134,82, 129,31, 127,43, 126,23, 125,85, 125,79, 119,92, 110,87, 61,27, 54,21, 52,85, 52,80, 52,36, 51,62, 48,69, 28,07, 15,25, 11,99. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro C2sH4oN502S⁺ (m/z): 510,28972; nalezeno: 510,28970. LC-MS čistota 98%

Příklad 2 - Příprava sloučenin obecného vzorce I odvozených od l//-pyrrolo[2,3-Z?]pyridinu nebo od l//-pyrazolo[3,4-á]pyridinu, kde primární nebo sekundární amin v poloze 2 nebo 3 základního cykluje připojen karbonylovým můstkem.

3-subst, X = C

2-subst, X = C

3-subst., X = N

o=s=o R¹

Pd(dppf)CI₂.DCM; Na₂CO₃ dioxan/H₂O; Ar; 110 °C

R¹ = Me;

R¹ = ÍPr;

3-subst.; X = C; R¹ = ÍPr; .HCI

2-subst.; X = C; R¹ = Me; .HCI

2-subst; X = C; R¹ = ÍPr; .HCI

3-Subst„ X = N, R¹ = Me;

3-subst.; X = N; R¹ = ÍPr;

K esteru 25 až 27 (1,0 ekv.) rozpuštěném vbezvodém 1,4-dioxanu, byla přidána arylboronová kyselina 28 nebo 29 (1,3 ekv.) pod inertní atmosférou argonu. Následně Na₂CO3 (10,0 ekv.), Pd(dppf)C12.DCM (0,01 eq) a argonem probublaná voda byly postupně přidány. Reakční směs byla zahřívána na 110 °C po dobu tří dní. Po zchlazení byl dioxan odpařen za pomocí rotační odparky. Směs byla zředěna vodou a vodní fáze vzniklých kyselin 30 až 35 byla dvakrát propláchnuta EA (2 x 100 ml) a následně dvakrát DCM (2 x 100 ml). Výsledná vodní fáze byla opatrně okyselena 10% kyselinou HCI na pH ~ 1. Vzniklý precipitát byl přefiltrován, opatrně propláchnut vodou (3 ^x15 ml) a následně hexanem (3 ^x 20 ml), k zisku čistých karboxylových kyselin 32 a 33 jako hydrochloridových solí a karboxylových kyselin 34 a 35 jako neutrálních sloučenin.

Vodní fáze vzniklých esterových sloučenin 30 a 31 byla třikrát propláchnuta EA (3 ^x 100 ml). Organické fáze byly posbírány, vysušeny bezvodým Na2SO4, směs přefiltrována a filtrát odpařen. Výsledek byl ihned využit do následné reakce: hydrolýza esteru na karboxylovou kyselinu.

methyl 5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karboxylát (30): Sloučenina 25 (470 mg; 1,84 mmol); arylboronová kyselina 28 (480 mg; 2,4 mmol); Na₂CO3 (1,95 g; 18,4 mmol) v 6,1 ml H₂O; Pd(dppf)C12.DCM (15 mg; 0,018 mmol); a 30 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Tmavě hnědá pevná sloučenina 30 byla přímo použita do další reakce (hydrolýza) bez charakterizace NMR, bylo počítáno s kvantitativním výtěžkem. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro Ci6Hi₅N2O₄S⁺ (m/z): 331.07470; nalezeno: 331.07428.

methyl 5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karboxylát (31):

Sloučenina 25 (551 mg; 2,16 mmol); arylboronová kyselina 29 (640 mg; 2,8 mmol); Na₂CO3 (2,29 g; 21,6 mmol) v 7,2 ml H₂O; Pd(dppf)C12.DCM (18 mg; 0,022 mmol); a 40 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Tmavě hnědá pevná sloučenina 31 byla přímo použita do další reakce (hydrolýza), bylo počítáno s kvantitativním výtěžkem.

- 10CZ 309579 B6

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 8,71 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,58 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,05 - 8,00 (m, 2H), 7,97 - 7,92 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,51 - 3,40 (m, 1H), 1,29 - 1,14 (m, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 164,31, 148,94, 143,92, 143,37, 135,60, 134,48, 129,58, 128,68, 128,02, 127,32, 118,23, 105,86, 54,40, 51,18, 15,42. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro Ci₈Hi₉N₂O₄S⁺ (m/z): 359,10600; nalezeno: 359,10562.

5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karboxylová kyselina hydrochlorid (32): Sloučenina 26 (407 mg; 1,6 mmol); arylboronová kyselina 28 (416 mg; 2,1 mmol); Na2CO₃(1,70 g; 16,0 mmol) v 5,3 ml H2O; Pd(dppf)C12.DCM (13 mg; 0,016 mmol); a 30 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Nahnědlý prášek 32 s výtěžkem 56 %.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-A) δ 12,55 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,02 (s, 4H), 7,19 (s, 1H), 3,27 (s, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-A) δ 162,84, 149,19, 145,99, 144,03, 139,85, 130,77, 129,70,128,23, 128,20, 127,96, 119,80,107,14,44,16. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro Ci₅Hi₃N₂O₄S⁺ (m/z): 317,05905; nalezeno: 317,05948.

5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karboxylová kyselina hydrochlorid (33): Sloučenina 26 (431 mg; 1,7 mmol); arylboronová kyselina 29 (504 mg; 2,21 mmol); Na2CO₃ (1,79 g; 16,9 mmol) v 5,6 ml H2O; Pd(dppf)C12.DCM (14 mg; 0,017 mmol); a 30 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Nahnědlý prášek 33 s výtěžkem 96 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,58 - 12,54 (m, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,51 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,05 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 7,95 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 7,21 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 3,47 (p, J= 6,8 Hz, 1H), 1,21 (d, J= 6,7 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 162,81, 149,19, 145,99, 144,16, 135,70, 130,67, 129,81, 129,63, 128,04, 127,80, 119,71, 107,10, 54,67, 15,71. HRMS (ESE): [M+H]⁺: vypočítáno pro Ci7Hi7N2O₄S⁺ (m/z): 345,09035; nalezeno: 345,09070.

5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrazolo[3,4-á]pyridin-3-karboxylová kyselina (34):

Sloučenina 27 (437 mg; 1,7 mmol); arylboronová kyselina 28 (442 mg; 2,21 mmol); Na₃CO₃(1,80 g; 17,0 mmol) v 5,6 ml H2O; Pd(dppf)C12.DCM (14 mg; 0,017 mmol); a 30 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Tmavě hnědý prášek 34 s výtěžkem 86 %.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-A) δ 9,01 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 8,68 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,11 - 8,04 (m, 4H), 3,28 (s, 3H). HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro Ci₄Hi₂N₃O₄S⁺ (m/z): 318,05430; nalezeno: 318,05396.

5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrazolo[3,4-á]pyridin-3-karboxylová kyselina (35): Sloučenina 27 (880 mg; 3,44 mmol); boronová kyselina 29 (1,02 g; 4,5 mmol); Na2CO₃ (3,65 g;

34,4 mmol) v 11,5 mL H2O; Pd(dppf)C12.DCM (28 mg; 0,034 mmol); a 50 ml bezvodého 1,4-dioxanu. Tmavě hnědý prášek 35 s výtěžkem 70 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 13,38 (s, 1H), 9,01 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,56 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,12 - 8,06 (m, 2H), 8,00 - 7,94 (m, 2H), 3,51 - 3,43 (m, 1H), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H). HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: vypočítáno pro Ci6HieN₃O₄S⁺ (m/z): 346,08560; nalezeno: 346,08578.

R¹ = Me

R¹=iPr

R¹ = Me

R¹ = iPr

- 11 CZ 309579 B6

K esteru 30 nebo 31 rozpuštěném v MeOH, byl přidán 10% roztok NaOH a reakční směs byla zahřáta na 110 °C po dobu 24 hodin. Po zchlazení byl MeOH odpařen za pomocí rotační odparky a zbytek byl zředěn vodou (100 ml). Vodná fáze byla dvakrát propláchnuta EA (2 * 100 ml) a následně dvakrát DCM (2 * 100 ml). Výsledná vodní fáze byla opatrně okyselena 10% kyselinou HC1 na pH ~ 1. Vzniklý precipitát byl přefiltrován, opatrně propláchnut vodou (3 ^x 15 ml) a následně hexanem (3 ^x 20 ml), k zisku čistých karboxylových kyselin 36 a 37 jako hydrochloridových solí.

5-(4-met hansu I fonvl fenvl)-1 //-pvrrolo[2,3-b]pyridin-3-karboxylová kyselina hydrochlorid (36): Sloučenina 30 (607 mg; 1,84 mmol) byla rozpuštěna ve 20 ml MeOH a bylo přidáno 20 ml 10% NaOH. Hnědá pevná sloučenina 36 s výtěžkem 88 % po dvou krocích.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-A) δ 12,60 (d, J= 3,0 Hz, 1H), 8,70 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,58 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 8,06 - 8,01 (m, 4H), 3,26 (s, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-A) δ 165,81, 149,28, 144,17, 143,51, 139,96, 134,47, 128,94, 128,40, 128,33, 127,73, 118,97, 107,34, 44,18. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro Ci₅Hi₃N2O₄S⁺ (m/z): 317,05905; nalezeno: 317,05865.

5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karboxylová kyselina hydrochlorid (37): Sloučenina 31 (774 mg; 2,16 mmol) byla rozpuštěna ve 20 ml MeOH a bylo přidáno 20 ml 10% NaOH. Světle hnědá sloučenina 37 s výtěžkem 78 % po dvou krocích.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,66 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,22 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 8,02 (d, J= 8,0 Hz, 2H), 7,94 (d, J= 8,1 Hz, 2H), 3,52 (m, 1H), 1,18 (d, J= 6,8 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 165,75, 149,17, 144,28, 143,43, 135,76, 134,41, 129,91, 128,77, 128,26, 127,71, 118,88, 107,24, 54,75, 15,71. HRMS (ESE): [M+H]⁺: počítáno pro Ci7Hi₇N2O₄S⁺(m/z): 345,09035; nalezeno: 345,08936.

3-subst.; X = C; R¹ = Me; .HCI

3-subst.; X = C; R¹ = iPr; .HCI

2-subst.; X = C; R¹ = Me; HCI

2-subst.; X = C; R¹ = IPr; .HCI

3-subst.; X = N; R¹ = Me,

3-subst.; X = N; R¹ = IPr;

3-9 3-subst.; X = C; R¹ = iPr

10-11	3-subst.; X = C;	R¹ = Me
12-13	2-subst.; X = C;	R¹ = Me
14-16	2-subst; X = C;	R¹ = iPr
17-19	3-subst.; X = N;	R¹ = iPr

3-subst.; X = N; R¹ = Me

Ke karboxylové kyselině 30 až 35 (1,0 ekv.) rozpuštěné v bezvodém THF, byly postupně přidány EDC.HC1 (1,0 eq), ΗΟΒΪ.Η2Ο (1,1 ekv.) a DIPEA (3,0 ekv.) pod inertní atmosférou argonu. Nakonec byl přidán vybraný primární nebo sekundární amin (1,0 ekv.) a reakce byla míchána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Výsledná směs byla zředěna vodou (30 ml) a organická fáze byla odebrána. Vodná fáze byla následně ještě dvakrát vytřepána novým EA (2 ^x 30 ml). Organické fáze byly posbírány, vysušeny bezvodým síranem sodným (Na2SO₄), směs přefiltrována a filtrát odpařen. Výsledek byl vyčištěn za pomocí sloupcové chromatografie pro zisk čistých amidových produktů, anebo byl rovnou přidán MeOH pro precipitaci čistého produktu.

- 12 CZ 309579 B6

l-ethyI-4-(l-{5-[4-(propan-2-suIfonyI)fenyI]-l//-pyrroIo[2,3-/>]pyridin-3karbonyl}piperidin-4-yl)piperazin (3): Karboxylová kyselina 31 (97 mg; 0,255 mmol); EDC.HC1 (49 mg; 0,255 mmol); HOBt.H₂O (43 mg; 0,280 mmol); DIPEA (133 μΐ; 0,765 mmol) a l-ethyl-4-(piperidin-4-yl)piperazin (51 mg; 0,255 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (15:1:0,1) k zisku čistého produktu 3 jako oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 28 %.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-A) δ 12,34 (s, 1H), 8,69 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,38 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,05 - 7,99 (m, 2H), 7,95 - 7,92 (m, 2H), 7,91 (s, 1H), 4,32 (s, 2H), 3,51 - 3,41 (m, 1H), 3,31 3,26 (m, 1H), 3,01 (s, 2H), 2,50 - 2,29 (m, 8H), 2,27 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,85 - 1,76 (m, 2H), 1,45 - 1,33 (m, 2H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSOD₆) δ 164,59, 148,63, 144,47, 143,25, 135,73, 129,89, 129,82, 128,22, 127,96, 127,66, 119,28, 109,80, 61,50, 54,77, 53,39, 52,19, 49,17, 40,62, 28,89, 15,79, 12,57. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C28H38NsO3S⁺ (m/z): 524,26899; nalezeno: 524,26855. LC-MS čistota >99 %.

l-ethyl-4-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karbonyl}piperazin (4): Karboxylová kyselina 31 (85 mg; 0,223 mmol); EDC.HC1 (43 mg; 0,223 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (38 mg; 0,245 mmol); DIPEA (117 μΐ; 0,669 mmol) a 1-ethylpiperazin (29 μΐ; 0,223 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/MeOH/NH4OH (vodný 25% roztok) (15:1:0,1) k zisku čistého produktu 4 jako světle hnědé pevné sloučeniny. Výtěžek 37 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,36 (s, 1H), 8,69 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,39 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,06 - 8,00 (m, 2H), 7,93 (d, J= 8,5 Hz, 3H), 3,72 - 3,64 (m, 4H), 3,46 (p, J= 6,8 Hz, 1H), 2,44 - 2,38 (m, 4H), 2,35 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,19 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 1,01 (t, J = 7,1 Hz, 3H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 164,29, 148,27, 144,05, 142,93, 135,37, 129,69, 129,52, 127,84, 127,64, 127,31, 118,90, 109,16, 62,96, 54,39, 52,74, 51,70, 15,42, 12,08. HRMS (ESE): [M+H]⁺: počítáno pro C₂3H₂9N4O3S⁺ (m/z): 441,19549; nalezeno: 441.19580. LC-MS čistota >99 %.

4-fenyl-l-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karbonyl}piperidin (5): Karboxylová kyselina 31 (100 mg; 0,263 mmol); EDC.HC1 (50 mg; 0,263 mmol); HOBt.H₂O

- 13 CZ 309579 B6 (44 mg; 0,290 mmol); DIPEA (137 μΐ; 0,790 mmol) a 1-fenylpiperidin (42 mg; 0,263 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 5 jako nahnědlé pevné sloučeniny. Výtěžek 32 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,36 (s, 1H), 8,70 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,08 - 8,01 (m, 2H), 7,98 - 7,94 (m, 2H), 7,93 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 7,33 - 7,25 (m, 4H), 7,23 - 7,16 (m, 1H), 4,51 - 4,45 (m, 2H), 3,52 - 3,42 (m, 1H), 3,16 - 3,04 (m, 2H), 2,87 - 2,79 (m, 1H), 1,86 - 1,80 (m, 2H), 1,71 - 1,59 (m, 2H), 1,20 (d, J= 6,8 Hz, 5H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 164,62, 148,59, 146,19, 144,41, 143,19, 135,66, 129,83, 129,78, 128,87, 128,15, 127,90, 127,66, 127,24, 126,66, 119,27, 109,80, 54,70, 42,48, 33,71, 15,73. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₂₈H₃₀N₃O₃S⁺ (m/z): 488,20024; nalezeno: 488,19879. LC-MS čistota 99 %.

2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/f-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karbonyl}-l, 2,3,4tetrahydroisochinolin (6): Karboxylová kyselina 31 (95 mg; 0,250 mmol); EDC.HC1 (48 mg; 0,250 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (42 mg; 0,275 mmol); DIPEA (131 μΐ; 0,750 mmol) a

1,2,3,4-tetrahydroisochinolin (31 μΐ; 0,250 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs rovnou precipitována v MeOH k zisku čistého produktu 6 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 53 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 13,73 (s, 1H), 10,01 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 9,75 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 9,35 (s, 1H), 9,30 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 9,24 - 9,18 (m, 2H), 8,55 - 8,41 (m, 4H), 6,17 (s, 2H), 5,22 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 4,75 (hept, J= 6,8 Hz, 1H), 4,23 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 2,49 (d, J= 6,9 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 148,64, 144,38, 143,31, 135,65, 135,34, 134,19, 129,81, 129,01, 128,13, 127,99, 127,84, 126,93, 126,62, 119,49, 109,62, 60,22, 54,69, 29,05,21,23, 15,72. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₂6H₂6N₃O₃S⁺ (m/z): 460.16894; nalezeno: 460,16757. LC-MS čistota 98 %.

A-benzyl-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karboxamid (7):

Karboxylová kyselina 31 (95 mg; 0,250 mmol); EDC.HC1 (48 mg; 0,250 mmol); HOBt.H₂O (42 mg; 0,275 mmol); DIPEA (131 μΐ; 0,750 mmol) a benzylamin (27 μΐ; 0.250 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 7 jako nahnědlé pevné sloučeniny. Výtěžek 44 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,33 (s, 1H), 8,81 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,72 - 8,64 (m, 2H), 8,30 (d, J= 1,7 Hz, 1H), 8,07 - 8,00 (m, 2H), 7,99 - 7,92 (m, 2H), 7,40 - 7,31 (m, 4H), 7,27 - 7,22 (m, 1H), 4,53 (d, J= 5,9 Hz, 2H), 3,47 (hept, J= 6,8 Hz, 1H), 1,20 (d, J= 6,9 Hz, 6H). ¹³CNMR (126 MHz, DMSO) δ 164,20, 148,97, 144,49, 143,20, 140,62, 135,67, 129,96, 129,87, 128,75, 128,20,

-14 CZ 309579 B6

128,13, 127,72, 127,15, 118,99, 110,28, 54,70, 42,41, 15,72. HRMS (EST): [M+H]⁺: počítáno pro C₂4H₂4N₃O₃S⁺ (m/z): 434,15329; nalezeno: 434,15210. LC-MS čistota 98 %.

N-{ [4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrrolo[2,3á]pyridin-3-karboxamid (8): Karboxylová kyselina 31 (95 mg; 0,250 mmol); EDC.HC1 (48 mg; 0,250 mmol); ΗΟΒΐ.Η₂Ο (42 mg; 0,275 mmol); DIPEA (131 μΐ; 0,750 mmol) a (4aminomethylfenyl)diethylamin (45 pl; 0,250 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 8 jako nahnědlé pevné sloučeniny. Výtěžek 44 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-cfc) d 12,27 (s, 1H), 8,81 (d,J=2,3 Hz, 1H), 8,68 (d,J=2,3 Hz, 1H), 8,47 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,26 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 8,05 - 8,00 (m, 2H), 7,97 - 7,92 (m, 2H), 7,18 7,12 (m, 2H), 6,65 - 6,58 (m, 2H), 4,36 (d, J= 5,8 Hz, 2H), 3,46 (hept, J= 6,9 Hz, 1H), 3,29 (q, J = 7,0 Hz, 4H), 1,20 (d, J= 6,8 Hz, 6H), 1,04 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 163,97, 148,95, 146,89, 144,53, 143,12, 135,65, 129,88, 129,76, 129,15, 128,25, 128,11, 126,78, 119,05, 112,06, 110,49, 54,71, 44,17, 42,01, 15,73, 12,84. HRMS (EŠE): [M+H]⁺: počítáno pro C₂₈H₃₃N₄O₃S⁺ (m/z): 505,22679; nalezeno: 505,22733. LC-MS čistota 98 %.

N~_ z /V-[4-(dimethylamino)fenyl]-5-[4-(propan-2-suIfonyl)fenyl]-l/Z-pyrroIo[2,3-/>]pyridin-3karboxamid (9): Karboxylová kyselina 31 (105 mg; 0,276 mmol); EDC.HC1 (53 mg; 0,276 mmol); HOBt.H₂O (47 mg; 0,304 mmol); DIPEA (144 μΐ; 0,828 mmol) a A,A-dimethyl-pfenylendiamin (38 mg; 0,276 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs rovnou precipitována v MeOH k zisku čistého produktu 9 jako světle zelené pevné sloučeniny. Výtěžek 51 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,39 (s, OH), 9,65 (s, 1H), 8,82 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,71 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,44 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 8,04 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,96 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,57 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 6,74 (d, J= 9,1 Hz, 2H), 3,46 (p, J= 6,8 Hz, 1H), 2,87 (s, 6H), 1,20 (d, J= 6,8 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 162,40, 149,01, 147,47, 144,48, 143,31, 135,69, 130,10, 129,91, 129,60, 128,35, 128,26, 128,14, 121,96, 119,29, 113,12, 110,66, 54,72, 41,03, 15,73. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₂₅H₂₇N₄O₃S⁺ (m/z): 463.17984; nalezeno: 463,17841. LC-MS čistota 95 %

- 15 CZ 309579 B6

l-[5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin (10): Karboxylová kyselina 30 (85 mg; 0,242 mmol); EDC.HC1 (46 mg; 0,242 mmol); HOBt.H₂O (41 mg; 0,266 mmol); DIPEA (126 μΐ; 0,725 mmol) a 1-fenylpiperidin (39 mg; 0,242 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1). Přečištěná směs byla následně ještě precipitována v MeOH k zisku čistého produktu 10 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 32 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-tí₆) δ 12,35 (s, 1H), 8,69 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,42 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,03 (s, 4H), 7,96 (d, J= 1,7 Hz, 1H), 7,34 - 7,27 (m, 4H), 7,23 - 7,16 (m, 1H), 4,51 - 4,46 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 3,19 - 3,04 (m, 1H), 2,88 - 2,79 (m, 1H), 1,88 - 1,81 (m, 2H), 1,72 - 1,60 (m, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 164,64, 148,57, 146,19, 144,21, 143,19, 139,74, 129,79, 128,88, 128,22, 128,18, 127,99, 127,57, 127,25, 126,67, 119,25, 109,79, 44,10, 42,48, 33,71. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₂6H₂6N₃O₃S⁺ (m/z): 460,16894; nalezeno: 460,16849. LC-MS čistota 98 %

A-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-3karboxamid (11): Karboxylová kyselina 30 (107 mg; 0,303 mmol); EDC.HC1 (58 mg; 0,303 mmol); HOBt.H₂O (51 mg; 0,334 mmol); DIPEA (158 pl; 0,910 mmol) a (4aminomethylfenyljdiethylamin (55 μΐ; 0,303 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 11 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 21 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-tí₆) δ 12,27 (s, 1H), 8,79 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,67 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,47 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,08 - 7,96 (m, 4H), 7,19 - 7,08 (m, 2H), 6,65 - 6,56 (m, 2H), 4,36 (d, J= 5,9 Hz, 2H), 3,30 (q, J= 7,0 Hz, 4H), 3,27 (s, 3H), 1,05 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 163,98, 148,93, 146,89, 144,33, 143,12, 139,73, 129,74, 129,14, 128,23, 128,21, 128,18, 126,77, 119,06, 112,07, 110,46,44,17, 44,11,42,00, 12,85. HRMS (ESE): [M+H]⁺: počítáno pro C₂eH₂9N4O₃S⁺ (m/z): 477,19549; nalezeno: 477,19504. LC-MS čistota 98 %.

l-ethyl-4-[5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karbonyl]piperazin (12):

Karboxylová kyselina 32 (110 mg; 0,312 mmol); EDC.HC1 (60 mg; 0,312 mmol); HOBt.H₂O

- 16CZ 309579 B6 (53 mg; 0,343 mmol); DIPEA (163 μΐ; 0,936 mmol) a 1-ethylpiperazin (40 pl; 0,312 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze DCM/MeOH/NH4OH (25% vodný roztok) (15:1:0.1) k zisku čistého produktu 12 jako nahnědlé pevné sloučeniny. Výtěžek 60 %.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 12,32 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,04 - 7,97 (m, 4H), 6,81 (s, 1H), 3,75 - 3,64 (m, 4H), 3,27 (s, 3H), 2,47 - 2,40 (m, 4H), 2,37 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,03 (t, J= 7,2 Hz, 3H). ¹³C NMR (151 MHz, DMSO-D₆) δ 161,47, 148,00, 143,99, 143,74, 139,18, 132,15, 128,09, 127,67, 127,60, 127,18, 119,00, 102,47, 52,36,51,46, 43,61, 11,86. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro Chi^N^S* (m/z): 413,16419; nalezeno: 413,16434. LC-MS čistota >99 %

l-[5-(4-methansulfonylfenyl)-l/7-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karbonyl]-4-fenylpiperidin (13): Karboxylová kyselina 32 (97 mg; 0,275 mmol); EDC.HC1 (53 mg; 0,275 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (46 mg; 0,302 mmol); DIPEA (144 μΐ; 0,825 mmol) a 1-fenylpiperidin (44 mg; 0,275 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 13 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 28 %.

Ή NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 12,33 (s, 1H), 8,71 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,40 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,02 (s, 4H), 7,39 - 7,24 (m, 4H), 7,22 - 7,16 (m, 1H), 6,85 (s, 1H), 4,83 - 4,16 (m, 2H), 3,27 (s, 3H), 3,21 -2,93 (m, 2H), 2,93-2,83 (m, 1H), 1,94-1,81 (m, 2H), 1,74 - 1,60 (m, 2H). ¹³CNMR (151 MHz, DMSO-A) δ 162,16, 148,58, 146,06, 144,41, 144,34, 139,73, 133,14, 128,98, 128,58, 128,23, 128,16, 127,73, 127,30, 126,81, 119,63, 102,60, 44,16, 42,33, 33,62. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C26H2eN3O3S⁺ (m/z): 460,16894; nalezeno: 460,16803. LC-MS čistota 98 %

A'-benzyl-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/7-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karboxamid (14):

Karboxylová kyselina 33 (99 mg; 0,260 mmol); EDC.HC1 (50 mg; 0,260 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (44 mg; 0,286 mmol); DIPEA (136 μΐ; 0,780 mmol) a benzylamin (28 μΐ; 0,260 mmol) v 5 ml bezvodého THF. . Po extrakci byla výsledná směs rovnou precipitována v MeOH k zisku čistého produktu 14 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 73 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 12,35 (s, 1H), 9,16 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 8,75 (d,J=2,2 Hz, 1H), 8,50 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,08 - 8,02 (m, 2H), 7,96 - 7,91 (m, 2H), 7,40 - 7,32 (m, 4H), 7,30 - 7,23 (m, 2H), 4,54 (d, J= 5,9 Hz, 2H), 3,46 (hept, J= 6,9 Hz, 1H), 1,19 (d, J= 6,8 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 160,93, 148,88, 145,00, 144,35, 139,84, 135,58, 133,82, 129,77, 129,13, 128,84, 128,02, 127,82, 127,56, 127,37, 119,88, 102,72, 54,68, 42,80, 15,72. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C24H24N3O3S⁺ (m/z): 434,15329; nalezeno: 434,15277. LC-MS čistota 96 %

- 17CZ 309579 B6

2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/7-pyrrolo[2,3-á]pyridin-2-karbonyl}-l,2,3,4tetrahydroisochinolin (15): Karboxylová kyselina 33 (105 mg; 0,276 mmol); EDC.HC1 (53 mg; 0,276 mmol); HOBLH2O (46 mg; 0,303 mmol); DIPEA (144 μΐ; 0,827 mmol) a 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin (35 μΐ; 0.276 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs rovnou precipitována v MeOH k zisku čistého produktu 15 jako bílé sloučeniny. Výtěžek 58 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,39 (s, 1H), 8,75 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,45 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,04 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,94 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,23 - 7,17 (m, 4H), 6,96 (s, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,93 (s, 2H), 3,47 (hept, J= 6,8 Hz, 1H), 2,98 - 2,92 (m, 2H), 1,20 (d, J= 6,8 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 148,56, 144,70, 144,41, 135,62, 135,07, 133,59, 132,75, 129,82, 129,00, 128,79, 128,02, 127,59, 127,10, 126,76, 119,58, 54,67, 15,73. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C26H26N3O3S⁺ (m/z): 460,16894; nalezeno: 460,16739. LC-MS čistota 98 %

7V-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-suIfonyl)fenyl]-l/Z-pyrroIo[2,3á]pyridin-2-karboxamid (16): Karboxylová kyselina 33 (92 mg; 0,242 mmol); EDC.HC1 (46 mg; 0,242 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (41 mg; 0,266 mmol); DIPEA (126 μΐ; 0,725 mmol) a (4aminomethylfenyl)diethylamin (44 μΐ; 0,242 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 16 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 25 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 12,29 (s, 1H), 8,95 (t, J= 5,9 Hz, 1H), 8,73 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,07 - 8,01 (m, 2H), 7,95 - 7,89 (m, 2H), 7,24 (s, 1H), 7,18 - 7,10 (m, 2H), 6,65 - 6,59 (m, 2H), 4,37 (d, J= 5,8 Hz, 2H), 3,45 (hept, J= 6,8 Hz, 1H), 3,29 (q, J= 7,0 Hz, 4H), 1,19 (d, J= 6,8 Hz, 6H), 1,05 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 160,59, 148,84, 147,03, 144,88, 144,37, 135,56, 134,06, 129,76, 129,31, 129,05, 128,01, 127,51, 125,91, 119,89, 112,03, 102,61, 54,68, 44,16, 42,47, 15,72, 12,85. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₂sH33N₄O3S⁺ (m/z): 505,22679; nalezeno: 505,22714. LC-MS čistota 98 %

- 18 CZ 309579 B6

A-benzyl-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrazolo[3,4-á]pyridin-3-karboxamid (17):

Karboxylová kyselina 35 (128 mg; 0,370 mmol); EDC.HC1 (71 mg; 0,370 mmol); HOBt.H2O (62 mg; 0,410 mmol); DIPEA (193 μΐ; 1,11 mmol) a benzylamin (41 μΐ; 0,370 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 17 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 25 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 14,32 (s, 1H), 9,14 (t,J= 6,3 Hz, 1H), 8,95 (d,J=2,3 Hz, 1H), 8,74 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 7,90 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,35 - 7,20 (m, 4H), 7,17 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 4,46 (d,J=6,3 Hz, 2H),3,41 (p,J=6,8Hz, 1H), 1,13 (d,J=6,8Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 162,02, 152,81, 149,46, 143,30, 140,20, 138,91, 136,28, 129,90, 129,65, 128,72, 128,49, 127,85, 127,20, 114,01, 54,68, 42,46, 15,69. HRMS (ESE): [M+H]⁺: počítáno pro C23H23N40sS⁺ (m/z): 435,14854; nalezeno: 435,14798. LC-MS čistota 98 %

A-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l/Z-pyrazolo[3,4á]pyridin-3-karboxamid (18): Karboxylová kyselina 35 (200 mg; 0,580 mmol); EDC.HC1 (111 mg; 0,580 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (98 mg; 0,640 mmol); DIPEA (303 μΐ; 1,74 mmol) a (4aminomethylfenyljdiethylamin (105 μΐ; 0,580 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 18 jako světle oranžové pevné sloučeniny. Výtěžek 17 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 14,33 (s, 1H), 9,00 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,97 (t, J= 6,3 Hz, 1H), 8,81 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,08 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,97 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,17 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 6,60 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J= 6,2 Hz, 2H), 3,48 (p, J= 6,8 Hz, 1H), 3,28 (q, J= 7,0 Hz, 4H), 1,20 (d, J=6,7Hz, 6H), 1,04 (t, J= 7,0 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 161,71, 152,79, 146,90, 143,32, 139,11, 136,27, 129,91, 129,69, 129,57, 129,31, 128,47, 126,47, 113,99, 111,96, 54,69, 44,14, 41,99, 15,70, 12,84. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C₃2H27N₅O3S⁺(m/z): 506,22204; nalezeno: 506,22067. LC-MS čistota 98 %

4-fenyI-l-{5-[4-(propan-2-suIfonyI)fenyI]-LH-pyrazoIo[3,4-/>]pyridin-3-karbonyI}piperidin (19): Karboxylová kyselina 35 (200 mg; 0,580 mmol); EDC.HC1 (111 mg; 0,580 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (98 mg; 0,640 mmol); DIPEA (303 μΐ; 1,74 mmol) a 1-fenylpiperidin (94 mg; 0,580 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 19 jako nahnědlé pevné sloučeniny. Výtěžek 18 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 14,28 (s, 1H), 9,02 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,72 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,17 - 8,05 (m, 2H), 8,02 - 7,91 (m, 2H), 7,42 - 7,25 (m, 4H), 7,23 - 7,09 (m, 1H), 5,00 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 4,78 (d,J=13,0Hz, 1H), 3,56 - 3,42 (m, 1H), 3,31 - 3,26 (m, 1H), 3,01 - 2,83 (m,

-19CZ 309579 B6

2H), 1,96 - 1,81 (m, 2H), 1,74 - 1,61 (m, 2H), 1,20 (d, J = 6,9 Hz, 6H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 161,37, 152,14, 149,49, 146,05, 143,32, 139,85, 136,24, 129,91, 129,89,129,27, 128,90, 128,47, 127,23, 126,70, 115,38, 54,67, 47,25, 43,06, 42,38, 34,22, 33,33, 15,70. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C2?H29N4O3S⁺ (m/z): 489,19549; nalezeno: 489,19391. LC-MS čistota 99 %

l-[5-(4-methansulfonylfenyl)-l/Z-pyrazolo[3,4-á]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin (20): Karboxylová kyselina 34 (109 mg; 0-308 mmol); EDC.HC1 (59 mg; 0,308 mmol); ΗΟΒΪ.Η2Ο (52 mg; 0,339 mmol); DIPEA (161 μΐ; 0,924 mmol) a 1-fenylpiperidin (50 mg; 0,308 mmol) v 5 ml bezvodého THF. Po extrakci byla výsledná směs přečištěna pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze (DCM/EA) (1:1) k zisku čistého produktu 20 jako bílé pevné sloučeniny. Výtěžek 46 %.

Ή NMR (500 MHz, DMSO-A) δ 14.25 (s, 1H), 9,00 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,71 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,07 (q, J= 8,3 Hz, 4H), 7,34 - 7,25 (m, 4H), 7,20 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 5,03 - 4,96 (m, 1H), 4,81 4,75 (m, 1H), 3,29 (s, 3H), 3,01-2,85 (m, 2H), 1,99-1,81 (m, 2H), 1,75- 1,64 (m, 2H). ¹³CNMR (126 MHz, DMSO) δ 161,38, 152,12, 149,50, 146,05, 143,11, 140,28, 139,82, 129,81, 129,35, 128,91, 128,53, 128,24, 127,24, 126,70, 115,37, 47,25, 44,03, 43,07, 42,38, 34,22, 33,34. HRMS (ESI⁺): [M+H]⁺: počítáno pro C25H25N4O3S (m/z): 461,16419; nalezeno: 461,16458. LC-MS čistota 98 %

Příklad 3 - stanovení poklesu proliferace nádorových buněčných linií působením samotného inhibitoru a potenciace účinku cisplatiny inhibitorem

Pro komplexní posouzení cytotoxického účinku inhibitorů bylo vybráno devět lidských stabilizovaných buněčných linií s odlišným histogenetickým původem: Jurkat (akutní Tleukemie), MOLT-4 (akutní lymfoblastická leukemie), A549 (plicní adenokarcinom), HT-29 (kolorektální adenokarcinom), PANC-1 (karcinom pankreatu), A2780 (ovariální karcinom), HeLa (karcinom děložního čípku), MCF-7 (prsní adenokarcinom) a SAOS-2 (osteosarkom). Linie byly zakoupeny od firem ATCC (Manassas, USA) a Sigma-Aldrich (St. Louis, USA) a udržovány dle doporučení prodejce. Všechny linie byly kultivovány v inkubátoru při stálé teplotě 37 °C a kontrolované atmosféře vzduchu s 5% obsahem oxidu uhličitého. Během studie byly používány exponenciálně rostoucí buňky do maximálně dvacáté pasáže.

Buňky byly převedeny do suspenze a v optimální hustotě l*10³až 50^X10³ buněk na jamku (stanoveno na základě předchozích pokusů) nasazeny do 96 jamkových destiček (TPP, Trasadingen, Switzerland), k jejichž dnu do druhého dne přisedly. Po následujících 48 hodin byly buňky kultivovány v médiu s testovanou látkou o finální koncentraci 10 μΜ. Jako pozitivní kontrola standardního průběhu testování byl použitý doxorubicin (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) v konečné koncentraci 1 μΜ.

Po skončení inkubace byla stanovena a porovnána proliferace ovlivněných a kontrolních buněk. Použitá WST-1 proliferation assay (Roche, Basel, Switzerland) byla provedena přesně podle návodu výrobce, absorbance byla měřena na přístroji Tecan Spark (Tecan, Mannedorf, Switzerland). Každá hodnota je průměrem ze tří nezávislých pokusů a je vztažena ke stoprocentní proliferaci kontrolních buněk, které byly ovlivněny pouze samotným rozpouštědlem (0,1% DMSO). Kromě působení samotných inhibitorů byl testován i jejich chemosenzitizující účinek, tzn. schopnost zvyšovat účinnost standardních chemoterapeutik. Buněčné linie byly opět po dobu

-20CZ 309579 B6 hodin kultivovány s testovanou látkou (10 μΜ) tentokrát ovšem dohromady s cisplatinou, která byla použita dle citlivosti příslušné linie v koncentraci 2 μΜ (MOLT-4, Jurkat, A2780), 10 μΜ (MCF-7) a 15 μΜ (A549, HT-29, HeLa, SAOS-2, PANC-1). Na závěr kultivace byl opět stanoven pokles proliferace vůči kontrolním buňkám a tentokrát byl hodnocen chemosenzitizující účinek, tzn. pokles proliferace u dané buněčné linie po působení kombinace cisplatiny a testované látky proti samotné cisplatině a samotné testované látce. Pro srovnání účinnosti byl použit standardní inhibitor ATR kinázy VE-821.

(VE-821)

Tabulka 1 uvádí pokles proliferace nádorových buněčných linií Jurkat, MOLT-4, A549, HT-29, PANC-1, A2780, HeLa, MCF-7, SAOS-2 působením sloučenin obecného vzorce I v porovnání se standardem VE-821 při 10μΜ koncentraci. Pokles proliferace u buněk ovlivněných sloučeninami obecného vzorce I je vyjádřen jako procento z proliferace kontrolních, pouze rozpouštědlem (0,1% DMSO) ovlivněných buněk (100%).

Tabulka 2 uvádí potenciaci účinku působení cisplatiny na nádorových buněčných liniích Jurkat, MOLT-4, A549, HT-29, PANC-1, A2780, HeLa, MCF-7, SAOS-2. Tabulka zahrnuje samotné působení cisplatiny, samotné působení sloučeniny obecného vzorce I a kombinace sloučeniny obecného vzorce I s cisplatinou. Pokles proliferace u buněk ovlivněných sloučeninami obecného vzorce I a cisplatinou je vyjádřen jako procento z proliferace kontrolních, pouze rozpouštědlem (0,1% DMSO) ovlivněných buněk (100%).

Cisplatina v použité koncentraci (2 až 15 μΜ) snižuje proliferaci buněk na 40 až 80% z proliferace kontrolních buněk. Nově syntetizované inhibitory zvyšovaly její cytotoxické vlastnosti a to vedlo k dalšímu poklesu proliferace u nádorových buněčných linií MOLT-4, A459, HT-29, PANC-1, A2780, HeLa, MCF-7, SAOS-2.

-21 CZ 309579 B6

Tab 1: Pokles proliferace nádorových buněčných linií Jurkat, MOLT-4, A549, HT-29, PANC-1, A2780, HeLa, MCF-7, SAOS-2 samotnými inhibitory (10 μΜ) v porovnání s VE-821 (10 pM) 5 vyj ádřený v % z kontrolních buněk (100%).

-22 CZ 309579 B6

A2780	20	74	110	63
19	74	82	kD
PANC-1	19	71	98	53
ΓΜ	71	94	47
SAOS-2	19	39	78	21
16	39	93	40
	39	121	15
HeLa	19	63	CD	37
18	63	75	48
16	63	76	40
ΓΜ	63	011	43
linie	inhibitor	cispl ati na	inhibitor	inhibitor+cisplatina

%z pro life race kontrolních buněk

	19	81	80	55
	18	81	85	59
	17	81	95	68
	16	81	75	64
	13	81	70	59
	12	81	76	59
MCF	Ok	81	92	64
	w	81	64	43
	r*.	81	98	68
	ID	81	77	60
	T	81	96	69
		81	91	70
linie	inhibitor	ť			ro c '4—¹ Cl 'o +
	'P Q. — 'u		inhibitc	inhibitc
	N	pro life race	,c c c c c	buněk

Tab 2: Potenciace účinku cisplatiny inhibitorem (10 μΜ) oproti samotnému působení inhibitoru na nádorové buněčné linie MOLT-4, A549, HT-29, HeLa, SAOS-2, PANC-1, A2780 a MCF-7.

Claims

1. Dusíkaté heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I

(I), kde X je C nebo N;

R¹ je vybráno ze skupiny C1-C6 alkylů;

Z-je-CH2- nebo -C(O)-;

R² je vybráno ze skupiny zahrnující anilino; anilino substituovaný di(Cl-C6 alkyljamino skupinou v poloze 2, 3, nebo 4; benzylamino; benzylamino substituovaný di(Cl-C6 alkyljaminoskupinou v poloze 2, 3, nebo 4; 4-fenylpiperidin-1-yl, 1-(C1-C6 alkyl)piperazin-4-yl, 1,2,3,4tetrahydroisochinolinyl; 1-(C1-C6 alkansulfonyl)piperazin-4-yl, 4-[4-(Cl-C6 alkylj-piperazin-1 yl]piperidin-1 -yl;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, nebo jejich adiční soli s kyselinami.

2. Sloučeniny podle nároku 1, kde X je N a Z je -C(O)-.

3. Sloučeniny podle nároku 1, vybrané ze skupiny:

4-fenyl-l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-yl}methyl)piperidin, l-ethyl-4-[l-({5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-yl}methyl)piperidin-4yl]piperazin, l-ethyl-4-(l-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-karbonyl}piperidin-4yljpiperazin,

1 -ethyl-4- {5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]- l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-karbonyl}piperazin,

4-fenyl-l-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-karbonyl}piperidin,

2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3-karbonyl}-l,2,3,4tetrahydroisochinolin,

V-benzyl-5- [4-(propan-2-sulfonyl)fenyl] -1 //-pyrrol o [2,3-6] py ri di n-3-karboxam i d,

V-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-l//-pyrrolo[2,3-ů]pyridin-3karboxamid,

-24CZ 309579 B6

N-[4-(dimethylamino)fenyl]-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-3karboxamid,

1-[5-(4-methansulfonylfenyl)-1 H-pyrrolo[2,3- b ]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin,

N-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-(4-methansulfonylfenyl)-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-3karboxamid,

1-ethyl-4-[5-(4-methansulfonylfenyl)-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-2-karbonyl]piperazin,

1-[5-(4-methansulfonylfenyl)-1 H-pyrrolo[2,3- b ]pyridin-2-karbonyl]-4-fenylpiperidin,

N-benzyl-5- [4-(propan-2-sulfonyl)fenyl] -1H-pyrrolo[2,3- b ]pyridin-2-karboxamid,

2-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-2-karbonyl}-1,2,3,4tetrahydroisochinolin,

N-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrrolo[2,3-b ]pyridin-2karboxamid,

N-benzyl-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrazolo[3,4-b ]pyridin-3-karboxamid,

N-{[4-(diethylamino)fenyl]methyl}-5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrazolo[3,4-b ]pyridin-3karboxamid,

4-fenyl-1-{5-[4-(propan-2-sulfonyl)fenyl]-1 H-pyrazolo[3,4-b ]pyridin-3-karbonyl}piperidin,

1-[5-(4-methansulfonylfenyl)-1 H-pyrazolo[3,4-b ]pyridin-3-karbonyl]-4-fenylpiperidin.

4. Sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití jako léčiva.

5. Sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití pro léčbu nádorových onemocnění.

6. Sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití v kombinaci s radioterapií nebo s chemoterapií pro léčbu nádorových onemocnění.

7. Sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití v kombinaci s cis platinou pro léčbu nádorových onemocnění.

8. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 a alespoň jeden farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku.

9. Farmaceutický přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že je ve formě vybrané ze skupiny zahrnující granule, prášky, tablety, gely, kapsle, sirupy, emulze, suspenze, injekční formulace, infuzní formulace, spreje a čípky.