CZ307555B6 - Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy - Google Patents
Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307555B6 CZ307555B6 CZ2017-271A CZ2017271A CZ307555B6 CZ 307555 B6 CZ307555 B6 CZ 307555B6 CZ 2017271 A CZ2017271 A CZ 2017271A CZ 307555 B6 CZ307555 B6 CZ 307555B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- concentration
- sarcosine
- reagent
- activity
- sample
- Prior art date
Links
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 152
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 28
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 20
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 108010060059 Sarcosine Oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000008118 Sarcosine oxidase Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims abstract description 13
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 11
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 claims description 7
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 4
- NPAWNPCNZAPTKA-UHFFFAOYSA-M sodium;propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCS([O-])(=O)=O NPAWNPCNZAPTKA-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 4
- 102100037644 Kelch-like protein 41 Human genes 0.000 description 3
- 108050003242 Kelch-like protein 41 Proteins 0.000 description 3
- 208000003313 Sarcosinemia Diseases 0.000 description 3
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N ornogenin Natural products CC(OC(=O)C=Cc1ccccc1)C2(O)CCC3(O)C4(O)CC=C5CC(O)CCC5(C)C4CC(OC(=O)C=Cc6ccccc6)C23C NPKKRSHVJIQBKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000010726 Glycine Plasma Membrane Transport Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010063380 Glycine Plasma Membrane Transport Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108700018535 Sarcosinemia Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- FRYOUKNFWFXASU-UHFFFAOYSA-N 2-(methylamino)acetic acid Chemical compound CNCC(O)=O.CNCC(O)=O FRYOUKNFWFXASU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025494 Aortic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000013147 Classic homocystinuria Diseases 0.000 description 1
- 206010071093 Cystathionine beta-synthase deficiency Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010020365 Homocystinuria Diseases 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- 208000001769 Multiple Acyl Coenzyme A Dehydrogenase Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PZYAYFPGUMSVJW-UHFFFAOYSA-N SSSSSSS Chemical compound SSSSSSS PZYAYFPGUMSVJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079870 Sarcosine Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000013000 Sarcosine dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUVRVMIRSUYVBQ-UHFFFAOYSA-L [Cl-].[Na+].P(=O)(O)(O)[O-].[K+].NC(=O)N Chemical compound [Cl-].[Na+].P(=O)(O)(O)[O-].[K+].NC(=O)N BUVRVMIRSUYVBQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- BUKHSQBUKZIMLB-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;dichloride Chemical compound [Na+].[Cl-].[Cl-].[K+] BUKHSQBUKZIMLB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Řešení se týká reakční směsi pro snadné, rychlé a finančně nenáročné enzymatické stanovení množství sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy prostřednictvím automatizovaných fotometrických systémů. Reakční směs obsahuje činidlo R1, které tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 µM a sarkosin v koncentraci 10 až 100 µM a reakční činidlo R2, které tvoří peroxidáza o aktivitě 10 až 100 KU/l, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 KU/l, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a barviva 4-amino-2,3-dimethyl-1-fenyl-3-pyrazolin-5-on o koncentraci 0,1 až 2,0 mM a sodná sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin)propanesulfonové kyseliny v koncentraci 0,1 až 2,0 mM nebo 3,3´- diaminobenzidin v koncentraci 1 až 10 mM nebo o- enylendiamin v koncentraci 5 až 20 mM. Předmětem vynálezu jsou též příslušné diagnostické soupravy.
Description
Vynález se týká reakční směsi pro kvantitativní enzymatické stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy prostřednictvím automatizovaných fotometrických systémů.
Dosavadní stav techniky
Sarkosin (N-methylglycin) je aminokyselina, která může vznikat methylací glycinu. Fyziologicky je sarkosin v organismu přítomen ve stopovém množství. Zvýšené hodnoty nacházíme v krvi a v moči u sarkosinemie z deficitu sarkosindehydrogenázy a u glutarové acidurie typu II. Sarkosinemie je velmi vzácná metabolická porucha, která nemá přesně definované klinické projevy. U onemocnění dochází k vzestupu hladiny sarkosinu v moči i krevní plazmě [1]. Analyzované hodnoty sarkosinu se tak mohou pohybovat v desítkách až stovkách mikromolámích koncentrací ve sledovaném biologickém vzorku. Ν,Ν-dimethylglycin byl testován pro potencionální antioxidační efekt v průběhu fertilizace. Bylo zjištěno, že použitím Ν,Ν-dimethylglycinu dochází k lepšímu vývinu zárodků skotu [2].
Kromě uvedeného jsou hladiny vybraných aminokyselin (v moči, krevním séru) možné ukazatele potencionálního kardiovaskulárního rizika [3]. Klasická homocysteinurie (HCU) je způsobena deficitem cystathionin-beta-synthasy aje charakterizován poruchami pojivové tkáně, mentální retardací a kardiovaskulárními onemocněními. Léčba typicky zahrnuje snižování hladiny homocysteinu s dietou omezující methionin a dietní suplementace betainem, což přímo navazuje na metabolickou dráhu spojenou se sarkosinem [4]. Podobně byly popsány poměrně významné změny hladin aminokyselin, včetně sarkosinu u pacientů s chorobami aorty [5]. Navržený marker by mohl napomoci při neinvazivní a objektivní diagnostice takové závažné zdravotní poruchy [5].
Bylo zjištěno, že u pacientů s aktivně probíhajícím onemocněním HIV dochází k významným změnám hladiny sarkosinu a Ν,Ν-dimethylglycinu [6]. Bylo zde také prokázáno, že po proběhlé antivirotické terapii došlo k významnému snížení hladiny obou markérů [6].
Terapeuticky se sarkosin používá ve vysokých koncentracích (2 g/den) jako podpůrná léčba psychických a psychiatrických onemocnění, především schizofrenie [7, 8]. Při jeho použití dochází k ovlivnění glutamátového receptorového systému a sarkosin je pravděpodobně inhibitorem glycintransporter-1 (GlyT-1) [9].
V řadě experimentálních studií byly sledovány aminokyselinové profily ve vztahu k nádorům prostaty [5, 10, 11]. Zvýšené hladiny sarkosinu v moči byly identifikovány jako potencionální marker zhoubných nádorů a to především nádorů prostaty [12].
Kromě výše uvedených důvodů pro analýzu sarkosinu v biologickém vzorku je sarkosin v běžném spotřebitelské síti dostupný jako doplněk stravy. Zde by jeho zvýšené koncentrace měly být pravděpodobně sledovány pro posouzení maximálních vhodných dávek aminokyseliny.
Ke stanovení sarkosinu se dosud používaly běžně chromatografické a elektrochemické metody. Vzhledem ke klinickému významu tohoto metabolitu byly určité snahy o nalezení způsobu, jak tyto metody modifikovat pro použití v klinických laboratořích a umožnit kvantitativní detekci u pacienta jako součást diagnostického vyšetření.
- 1 CZ 307555 B6
Metodu kvantitativní detekce sarkosinu ve vzorku moči pomocí chromatografie a hmotnostní spektrometrie uvádí spis CN 102662013 nebo CN 1026800599. Detekci sarkosinu pomocí zařízení na bázi elektroforézy-elektrochemiluminiscence popisuje například dokument CN 101718746. Kvantitativní rutinní stanovení sarkosinu je však stále náročné na přístrojové vybavení, často vyžaduje chemickou úpravu biologického vzorku a není dostatečně citlivé a přesné.
Enzymatické metody pro automatické analýzy při stanovení kreatininu, kyseliny močové, triacylglycerolu, cholesterolu, glukosy a případně dalších analytů využívají Trinderovy reakce 4aminoantipyrinu a fenolu v přítomnosti peroxidu a peroxidázy, kdy vzniká chioniminové barvivo s výsledným vyhodnocením automatizovanými fotometrickými systémy [13]. Zavedení této reakce do klinické biochemie přineslo ve spojení se substrátově specifickými enzymy výrazné zlepšení specifity a selektivity [14].
Analýza sarkosinu v klinických laboratořích v běžném provozu není v současné době možná. Pro její provedení je nezbytné zavést vhodnou metodiku včetně práce s jednotlivými složkami a poměrně náročnou optimalizací metody.
Literatura:
1. Lee SY, Chan KY, Chan AYW, et al. A report of two families with sarcosinaemia in Hong Kong and revisiting the pathogenetic potential of hypersarcosinaemia, Annals of the Academy of Medicíně Singapore 2006; 35(8): 582-584,
2. Takahashi T, Sasaki K, Somfai T,et al. Ν,Ν-Dimethylglycine decreases oxidative stress and improves in vitro development of bovine embryos, Journal of Reproduction and Development 2016; 62(2): 209-212.
3. Lever M, George PM, Dellow WJ, et al, Homocysteine, glycine betaine, and N,Ndimethylglycine in patients attending a lipid clinic. Metabolism: Clinical and Experimental 2005; 54(1): 1-14.
4. Maclean KN, Jiang H, Greiner LS, et al. Long-term betaine therapy in a murine model of cystathionine beta-synthase deficient homocystinuria: Decreased efficacy over time reveals a significant threshold effect between elevated homocysteine and thrombotic risk. Molecular Genetics and Metabolism 2012; 105(3): 395-403.
5. Wang LL, Liu S, Yang WG, et al. Plasma Amino Acid Profile in Patients with Aortic Dissection, Sci Rep 2017 Jan; 7.
6. Look MP, Riezler R, Berthold HK, et al. Decrease of elevated Ν,Ν-Dimethylglycine and Nmethylglycine in human immunodeficiency virus infection during short-term highly active antiretroviral therapy. Metabolism: Clinical and Experimental 2001; 50(11): 1275-1281.
7. Strzelecki D, Kaluzynska O, Wysokinski A. BDNF sérum levels in schizophrenic patients during treatment augmentation with sarcosine (results of the PULSAR study). Psychiatry Res 2016 Aug; 242: 54-60.
8. Strzelecki D, Podgorski M, Kaluzynska O, et al. Adding Sarcosine to Antipsychotic Treatment in Patients with Stable Schizophrenia Changes the Concentrations of Neuronal and Glial Metabolites in the Left Dorsolateral Prefrontal Cortex. Int J Mol Sci 2015 Oct; 16(10): 2447524489.
9. Hashimoto K, Malchow B, Falkai P. efal. Glutamate modulators as potential therapeutic drugs in schizophrenia and affective disorders, Eur Arch Psych Clin Neurosci 2013 Aug; 263(5): 367377.
10. Sreekumar A, Poisson LM, Rajendiran TM, et al. Metabolomic profiles delineate potential role for sarcosine in prostatě cancer progression. Nature 2009 Feb; 457(7231): 910-914
11. Derezinski P, Klupczynska A, Sawicki W, et al. Amino Acid Profiles of Sérum and Urine in Search for Prostatě Cancer Biomarkers: a Pilot Study. Int J Med Sci 2017; 14(1): 1-12.
12. Heger Z, Gumulec J, Cernei N, et al. Relation of exposure to amino acids involved in sarcosine metabolic pathway on behavior of non-tumor and malignant prostatic cell lineš. Prostatě 2016 May; 76(7): 679-690.
-2CZ 307555 B6
13. Jia J, Liu G, Li S, et al., inventors; SHANGHAI XUHUI DISTRICT CENT HOSPITAL (SHAN-Non-standard), assignee. Urine sample hepatitis B virus covalently dosed circular DNA sarcosine quantitative detection method, involves detecting quantitative rate of sarcosine solution, and calculating content of sarcosine in urine sample patent CN102662013-A CN102662013-A
Sep 2012 G01N-030/02 201309.
14. Wiewiorka O, Dastych M, Čermákova Z Trinderova reakce v klinické biochemii - přínosy a limity. Cem Listy 2017; 111(3): 186-191.
Podstata vynálezu
Výše uvedené přetrvávající nedostatky řeší reakční směs podle vynálezu pro snadné kvantitativní stanovení sarkosinu enzymatickou metodou s použitím 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3pyrazolin-5-onu (AAP) a sodné soli 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS), 3,3'-diaminobenzidinu nebo o-fenylendiaminu. Použitím těchto činidel vznikne stabilní směs s velmi dobrou citlivostí k identifikaci sarkosinu jak při použití běžných fotometrů, tak plně automatizovaných systémů.
Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy in vitro s použitím 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin-5-onu u (AAP) a sodné soli 3-(Nethyl-3-methylanilin)propansulfonové kyseliny (TOPS) využívá následující enzymatické reakce:
Sarkosinoxidáza
Sarkosin + O2 + H2O θ Glycin +HCHO + H2O2
Peroxidáza
2H2O2 + AAP + TOPS + fenol θ chinonimin + 4 H2O
Tuto reakční směs tvoří reakční činidlo Rl a reakční činidlo R2 v objemových poměrech 9:36:55. Reakční činidlo Rl pro tuto enzymatickou reakci obsahuje sarkosin o koncentraci 10 až 100 μΜ, chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovinu v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ. Reakční činidlo R2 obsahuje sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, peroxidázu o aktivitě 10 až 100 kU/1, 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin-5-on (AAP) v koncentraci 0,1 až 2,0 mM, fenol v koncentraci 1 až 5 mM a sodnou sůl 3-(N-ethyl-3methylanilin)propansulfonové kyseliny (TOPS) v koncentraci 0,1 až 2,0 mM. Zvýšení absorbance produktu chinoniminu fialového zbarvení v poslední reakci při λ=546 nm měřitelné fotometrickou metodou je přímo úměrné koncentrací sarkosinu ve vzorku (Obr. 1 a Obr. 4). Stanovení je lineární v rozmezí koncentrací 1 až 1000 μΜ.
Jednotka sarkosin oxidázy (1 U) je definována jako produkující 1,0 μιηοΐ formaldehydu ze sarkosinu za minutu při pH 8,3 a 37 °C. Jednotka peroxidázy (1 U) odpovídá množství enzymu, který zoxiduje 1 pmol diamonné soli 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonové kyseliny) za minutu při pH 6,0 a 25 °C (dle katalogu chemikálií Sigma-Aldrich).
Předmětem vynálezu je také diagnostická souprava pro kvalitativní a kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy in vitro. Souprava obsahuje reakční činidlo Rl, které tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ a sarkosin v koncentrací 10 až 100 μΜ, reakční činidlo R2, které tvoří sarkosin oxidáza o aktivitě 2
-3CZ 307555 B6 až 10 kU/1, peroxidáza o aktivitě 10 až 100 kU/1, 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin5-on (AAP) v koncentraci 0,1 až 2,0 mM, fenol v koncentraci 1 až 5 mM a sodná sůl 3-(Nethyl-3-methylanilin)propansulfonové kyseliny (TOPS) v koncentraci 0,1 až 2,0 mM. Součástí diagnostické soupravy je také kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ.
Reakční činidlo R2 v reakční směsi pro kvantitativní stanovení sarkosinu, kterou tvoří reakční činidlo R1 a reakční činidlo R2 v objemových poměrech a se složením reakčního činidla Rl, jak je uvedeno výše, může mít také následující složení: peroxidáza o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a 3,3'-diaminobenzidin v koncentraci 1 až 10 mM.
Předmětem vynálezu je dále příslušná diagnostická souprava pro kvalitativní a kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy in vitro. Souprava obsahuje reakční činidlo Rl, které tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentrací 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ a sarkosin v koncentraci 10 až 100 až μΜ, reakční činidlo R2, které tvoří peroxidáza o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a 3,3'-diaminobenzidin v koncentraci 1 až 10 mM. Součástí diagnostické soupravy je také kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ.
Reakční činidlo R2 v reakční směsi pro kvantitativní stanovení sarkosinu, kterou tvoří reakční činidlo Rl a reakční činidlo R2 v objemových poměrech a se složením reakčního činidla Rl, jak je uvedeno výše, může mít i následující složení: peroxidáza o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a o-fenylendiamin v koncentraci 5 až 20 mM.
Předmětem vynálezu je i příslušná diagnostická souprava pro kvalitativní a kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy in vitro. Souprava obsahuje reakční činidlo Rl, které tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ a sarkosin v koncentraci 10 až 100 μΜ, reakční činidlo R2, které tvoří peroxidáza o aktivitě 10 až 100kU/l, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a o-fenylendiamin v koncentraci 5 až 20 mM. Součástí diagnostické soupravy je také kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ.
Reakční směsi jsou vhodné pro kvalitativní stanovení sarkosinu díky výslednému zbarvení reakce, ale především pro kvantitativní stanovení ve vzorku lidského séra, plazmy nebo moči v koncentračním rozmezí 0 až 1000 μΜ. Rozmezí hodnot sarkosinu u zdravého člověka v moči je 0 až 1 μΜ, v plazmě je rozmezí hodnot 0 až 5 μΜ. Předpokládá se, že každá laboratoř si stanoví své vlastní referenční rozmezí.
Reakční směsi podle vynálezu pro kvalitativní a kvantitativní enzymatické stanovení ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy umožňují snadnou a rychlou detekci sarkosinu v biologickém vzorku v laboratořích klinické biochemie prostřednictvím automatizovaných fotometrických systémů.
Objasnění výkresů
Obr. 1: Kvalitativní test přítomnosti sarkosinu ve vzoru (biologický vzorek, degradační produkt apod.) za využití kterékoli enzymatické reakční směsi podle vynálezu. V reakci dochází ke
-4CZ 307555 B6 vzniku intenzivního zabarvení roztoku podle přítomného barevného produktu reakce, a) sarkosin negativní; b) sarkosin pozitivní
Obr. 2: Kvantitativní stanovení sarkosinu v pufrovaném prostředí (0,2 M fosfátový pufr pH 7,0) za využití enzymatické reakční směsi dle příkladu 1 v automatizovaném fotometrickém systému. (A) Typické spektrum je ukázáno v insertu obrázku s maximem pří 546 nm. Reakční kinetická křivka ukazuje strmou, časově závislou reakci (pro vlastní test je potřeba 10 až 15 min.). Při použití odečtu při 510 nm je citlivost metody o 25 % snížena. (B) Kalibrační závislost je striktně lineární (R2 = 0,9994), LOQ = 25 μΜ, LOD = 5 μΜ, relativní chyba stanovení pod 2 %, n = 30. Rkchlorid sodný v koncentraci 130mM, chlorid draselný 60mM, fosforečnan sodný 30mM, močovina 300mM, kreatinin 20mM, bovinní sérový albumin 750 μΜ, sarkosinlOO μΜ. R2: peroxidáza o aktivitě 20 kU/1, sarkosin oxidáza o aktivitě 4 kU/1, 4-amino-2,3-dimethyl-lfenyl-3-pyrazolin-5~on o koncentraci 0,5 mM, sodnou sůl 3-(N-ethyl-3methylanilin)propanesulfonové kyseliny v koncentraci 0,5 mM a fenol o koncentraci 2 mM.
Obr. 3: Kvantitativní stanovení sarkosinu v prostředí umělé moči (chlorid sodný v koncentrací 130mM, chlorid draselný v koncentraci 60mM, fosforečnan sodný v koncentraci 30 mM, močovina v koncentraci 300 mM, kreatinin v koncentraci 20 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 750 μΜ, sarkosin v koncentraci 10 až 100 μΜ) za využití enzymatické reakční směsi v automatizovaném fotometrickém systému. (A) Typické spektrum je ukázáno v insertu obrázku s maximem při 546 nm. Reakční kinetická křivka ukazuje strmou, časově závislou reakci (pro vlastní test je potřeba 10 až 15 min). (B) Kalibrační závislost je striktně lineární v celém testovaném rozsahu (0 až 1 000 μΜ; R2 = 0,9997), LOQ 15 μΜ, LOD 5 μΜ a v rozsahu nízkých koncentrací (0 až 10 μΜ, R2 = 0,9873), LOQ = 2 μΜ, LOD = 0,5 μΜ, relativní chyba stanovení pod 2%, n = 30. V případech A, B, C a) byl standardní přídavek sarkosinu 100 μΜ. Obrázek C b) znázorňuje kalibrační závislost v nízkých koncentracích (0 až 10 μΜ, R2=0,972), LOQ = 35 μΜ, LOD = 10 μΜ, při standardním přídavku sarkosinu 10 μΜ.
Obr. 4: Kvantitativní stanovení sarkosinu v prostředí reálného vzorku moči (hustota moči 1,0112, pH 7,1) za využití enzymatické reakční směsi dle příkladu 2 v automatizovaném fotometrickém systému. (A). Typické spektrum je ukázáno v insertu obrázku s maximem při 546 nm. Reakční kinetická křivka ukazuje strmou, časově závislou reakci (pro vlastní test je potřeba 10 až 20 min). (B) Kalibrační závislost je striktně lineární v celém testovaném rozsahu (0 až 1 000 μΜ; R2 = 0,9979), LOQ 50 μΜ, LOD 15 μΜ. (C a)). V rozsahu nízkých koncentrací (0 až 10 μΜ, R2 = 0,9873), LOQ = 2 μΜ, LOD = 0,5 μΜ, relativní chyba stanovení pod 2%, n = 30. (C b)). Metoda je využitelná pro stanovení sarkosinu i pří odečtu 510 nm (0 až 10 μΜ, R2 = 0,9824), LOQ = 2 μΜ, LOD = 0,8 μΜ, relativní chyba stanovení pod 5 %, n = 30.
Obr. 5: Kvantitativní stanovení sarkosinu v prostředí krevní plazmy (koncentrace bílkoviny 75 g/1, pH 7.1) za využití enzymatické reakční směsi dle příkladu 3 v automatizovaném fotometrickém systému. (A) Typické spektrum je ukázáno v insertu obrázku s maximem při 546 nm. Reakční kinetická křivka ukazuje strmou, časově závislou reakci (pro vlastní test je potřeba 10 až 20 min). (B) Kalibrační závislost je striktně lineární v celém testovaném rozsahu (0 až 1000 μΜ; R2 = 0,9933), LOQ 85 μΜ, LOD 25 μΜ. (C a)) V rozsahu nízkých koncentrací (0 až 10 μΜ, R2 = 0,987), LOQ = 2 μΜ, LOD = 0,5 μΜ, relativní chyba stanovení pod 2 %, n = 30. Obrázek C b) znázorňuje hladiny sarkosinu v krevní plasmě u 7 vzorků (0,8 až 3,4 μΜ).
-5CZ 307555 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1:
Kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidského séra enzymatickou metodou s použitím barviv 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin-5-onu (AAP) a sodné soli 3-(N-ethyl-3methylanilin)propansulfonové kyseliny (TOPS).
Ke stanovení se použila diagnostická souprava obsahující kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ, činidlo RI a R2 s níže uvedeným složením a koncentrací jednotlivých složek:
CWrtd sodný cňorid draselný
Močovina
1025 mM
Bovínní sérový μΜ
KM 00 μΜ
Sarkssin i
Ke stanovení množství sarkosinu se použil vzorek lidského séra s trvanlivostí až 7 dní při 2 až 8 °C nebo 3 měsíce při -20 °C nebo vzorek moči s trvanlivostí při 4 až 8 °C 5 dní. Je možné použít též vzorek lidské plazmy, která má stejnou trvanlivost jako sérum. Plná krev a hemolytické vzorky se však nedoporučují zpracovávat touto metodou. Současně se s přípravou vzorku ke stanovení sarkosinu připravil i slepý vzorek (blank). Pro stanovení sarkosinu v séru se jako blank používá fosfátový pufr o koncentraci 0,2 M a pH 7,0.
K 180 μΐ výše uvedeného činidla R1 v plastové kyvetě se napipetovalo 45 μΐ vzorku lidského séra a v případě blanku 45 μΐ fosfátového pufru o koncentraci 0,2 M a pH 7,0. Směs činidla R1 a vzorku se promíchala a inkubovala 1 až 5 minut při 37 °C. Následně se přidalo k této směsi 275 μΐ činidla R2. Výsledná směs se promíchala a inkubovala 21 minut při 37 °C. Fotometrickou metodou se měřila absorbance vzniklého produktu chinoniminu fialového zbarvení ve vzorku a blanku při 546 nm (Obr. 2A). Získaná hodnota rozdílu absorbance ΔΑ = [ΔΑ vzorku] - [ΔΑ blanku] byla přímo úměrná množství sarkosinu ve vzorku séra, moči dle odečtu pomocí kalibrační křivky (Obr. 2B).
-6CZ 307555 B6
Příklad 2:
Kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči enzymatickou metodou s použitím barviva 3,3'-diaminobenzidin
Ke stanovení se použila diagnostická souprava obsahující kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ, činidlo RI a R2 s níže uvedeným složením a koncentrací jednotlivých složek:
RI
Chlorid sodný .SSSSSSS'.SSSSSSSSXNSNSSXXNXNXNSNNSXSNNXSSSSNSSXXS
Chlorid draselný Fosforečnan sodný Močovina Kreatinin
Boloni sérový albumin
100-200 mM Sřsomír
200-500 mM “loSmM 1
-------------............................í
600800 μΜ __________________________________________i .....iCMOOpM..........
Ke stanovení množství sarkosinu se použil vzorek lidské moči s trvanlivostí při 4 až 8 °C 5 dní. Současně se s přípravou vzorku ke stanovení sarkosinu připravil i slepý vzorek (blank).
Pro stanovení sarkosinu v moči se jako blank použila artificiální moč, kterou tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 rnM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM a bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ.
K 180 μΐ výše uvedeného činidla RI v plastové kývete se napipetovalo 45 μΐ vzorku lidského séra a v případě blanku 45 μΐ artificiální moči. Směs činidla RI a vzorku se promíchala a inkubovala 1 až 5 minut při 37 °C. Následně se přidalo k této směsi 275 μΐ činidla R2. Výsledná směs se promíchala a inkubovala 21 minut při 37 °C. Fotometrickou metodou se měřila absorbance vzniklého produktu chinoniminu fialového zbarvení ve vzorku a blanku při 546 nm (Obr. 4A). Získaná hodnota rozdílu absorbance ΔΑ = [ΔΑ vzorku] - [ΔΑ blanku] byla přímo úměrná množství sarkosinu ve vzorku séra, moči dle odečtu pomocí kalibrační křivky (Obr. 4B).
Příklad 3
Kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské plazmy enzymatickou metodou s použitím barviva o-fenylendiamin
-7 CZ 307555 B6
Ke stanovení se použila diagnostická souprava obsahující kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ, činidlo RI a R2 s níže uvedeným složením a koncentrací jednotlivých složek:
| ............................................................. | |
| _____________________________________ i 100-200 mM | |
| .......... ___________________ | [_________________' |
| ; Fosforečnan sodný | f KFSOmM ' |
| : Močovina | 200-500 mM |
| :...................Kreatinin................ | i 10-25 mM............ |
| : Bovtnni sérový ..........albumin . . | 000-800 μΜ |
| Sarkosfo | : 10-100 μΜ : |
R2
Satkosin oxidáza
PeraxMáza
Fenol
2-10 kU/i
10-100 kwi
1*5
5-20 mM j
Ke stanovení množství sarkosinu se použil vzorek lidské plazmy s trvanlivostí až 7 dní při 2 až 8 °C nebo 3 měsíce při -20 °C. Plná krev a hemolytické vzorky se nedoporučují zpracovávat touto metodou. Současně se s přípravou vzorku ke stanovení sarkosinu připravil i slepý vzorek (blank). Pro stanovení sarkosinu v plazmě se jako blank používá fosfátový pufr o koncentraci 0,2 M a pH 7,0.
K 180 μΐ výše uvedeného činidla R1 v plastové kyvetě se napipetovalo 45 μΐ vzorku lidského séra a v případě blanku 45 μΐ fosfátového pufru o koncentraci 0,2M a pH 7,0. Směs činidla R1 a vzorku se promíchala a inkubovala 1 až 5 minut při 37 °C. Následně se přidalo k této směsi 275 μΐ činidla R2. Výsledná směs se promíchala a inkubovala 21 minut při 37 °C. Fotometrickou metodou se měřila absorbance vzniklého produktu chinoniminu fialového zbarvení ve vzorku a blanku při 546 nm (Obr. 5A). Získaná hodnota rozdílu absorbance ΔΑ = [ΔΑ vzorku] - [ΔΑ blanku] byla přímo úměrná množství sarkosinu ve vzorku séra, moči dle odečtu pomocí kalibrační křivky (Obr. 5B).
Průmyslová využitelnost
Stabilní a citlivá reakční směs podle technického řešení umožňuje snadné, rychlé a finančně nenáročné enzymatické stanovení množství sarkosinu ve vzorku lidské moče, séra či plazmy v běžném fotometru nebo plně automatizovaném fotometrickém systému. Stanovení sarkosinu a jeho množství usnadňuje jeho detekci obecně jako markerové molekuly pro diagnostiku a další aplikace v klinické biochemii.
Claims (6)
1. Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy fotometrickou metodou in vitro, vyznačující se tím, že jej tvoří reakční činidlo R1 a reakční činidlo R2 v objemových poměrech 9:36:55, přičemž reakční činidlo R1 obsahuje chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovinu v koncentrací 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ a sarkosin v koncentraci 10 až 100 μΜ a reakční činidlo R2 obsahuje peroxidázu o aktivitě 10 až 100 KU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, 4-amino2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin-5-on o koncentraci 0,1 až 2,0 mM, sodnou sůl 3(N-ethyl-3-methylanilin)propanesulfonové kyseliny v koncentraci 0,1 až 2,0 mM a fenol o koncentraci 1 až 5 mM.
2. Reakční směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že reakční činidlo R2 obsahuje peroxidázu o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a 3,3'-diaminobenzidin v koncentraci 1 až 10 mM.
3. Reakční směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že reakční činidlo R2 obsahuje peroxidázu o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a o-fenylendiamin v koncentraci 5 až 20 mM.
4. Diagnostická souprava pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy fotometrickou metodou in vitro, vyznačující se tím, že obsahuje reakční činidlo Rl, které tvoří chlorid sodný v koncentraci 100 až 200 mM, chlorid draselný v koncentraci 30 až 80 mM, fosforečnan sodný v koncentraci 10 až 50 mM, močovina v koncentraci 200 až 500 mM, kreatinin v koncentraci 10 až 25 mM, bovinní sérový albumin v koncentraci 600 až 800 μΜ, sarkosin v koncentraci 10 až 100 μΜ, reakční činidlo R2, které tvoří peroxidáza o aktivitě 10 až 100 KU/1, sarkosin oxidáza o aktivitě 2 až 10 kU/1, 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolin-5-on v koncentraci 0,1 až 2,0 mM, sodná sůl 3-(N-ethyl-3-ethylanilin)propanesulfonové kyseliny v koncentraci 0,1 až 2,0 mM, fenol o koncentraci 1 až 5 mMa kalibrační roztok standardu sarkosinu o koncentraci 10 μΜ.
5. Diagnostická souprava podle nároku 4, vyznačující se tím, že reakční činidlo R2 obsahuje peroxidázu o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a 3,3'-diaminobenzidin v koncentraci 1 až 10 mM.
6. Diagnostická souprava podle nároku 4, vyznačující se tím, že reakční činidlo R2 obsahuje peroxidázu o aktivitě 10 až 100 kU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 2 až 10 kU/1, fenol o koncentraci 1 až 5 mM a o-fenylendiamin v koncentraci 5 až 20 mM.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2017-271A CZ2017271A3 (cs) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2017-271A CZ2017271A3 (cs) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ307555B6 true CZ307555B6 (cs) | 2018-11-28 |
| CZ2017271A3 CZ2017271A3 (cs) | 2018-11-28 |
Family
ID=64425801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2017-271A CZ2017271A3 (cs) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2017271A3 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1930443A1 (en) * | 2005-09-30 | 2008-06-11 | DENKA SEIKEN Co., Ltd. | Method for selective, simultaneous quantification of two substances in biological sample |
| EP2653551A1 (en) * | 2010-12-13 | 2013-10-23 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for analysis for component to be assayed |
-
2017
- 2017-05-16 CZ CZ2017-271A patent/CZ2017271A3/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1930443A1 (en) * | 2005-09-30 | 2008-06-11 | DENKA SEIKEN Co., Ltd. | Method for selective, simultaneous quantification of two substances in biological sample |
| EP2653551A1 (en) * | 2010-12-13 | 2013-10-23 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for analysis for component to be assayed |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Anonym: "Creatinine Reagent - Enzymatic 2 Part Liquid" Thermo Fischer Scientific Inc. 2010 * |
| Anonym: "Quantitative determination of creatinine. Enzymatic colorimetric method" Creatinine Enzymatic LR 30335 - Rev. 01-2010/10 (SGM Italia) * |
| H. Crocker et al: "Evaluation of an enzymatic method for determining creatinine in plasma" J. Clin. Pathol. 41, 576-581 (1988) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2017271A3 (cs) | 2018-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240027480A1 (en) | Method of analyzing diluted biological sample component | |
| Adams et al. | Nutritional and metabolic status of children with autism vs. neurotypical children, and the association with autism severity | |
| Stabler et al. | Quantification of serum and urinary S-adenosylmethionine and S-adenosylhomocysteine by stable-isotope-dilution liquid chromatography-mass spectrometry | |
| CN104630324A (zh) | 改进的同型半胱氨酸检测试剂及方法 | |
| CN114875115A (zh) | 一种显色剂的稳定剂及稳定方法 | |
| Fismen et al. | Simultaneous quantification of tetrahydrobiopterin, dihydrobiopterin, and biopterin by liquid chromatography coupled electrospray tandem mass spectrometry | |
| CN116249904A (zh) | 用于测定来自样品的nad代谢物的量的方法以及与其相关的方法和用途 | |
| Persichilli et al. | A reversed-phase HPLC fluorimetric method for simultaneous determination of homocysteine-related thiols in different body fluids | |
| CN104120165A (zh) | 一种稳定性强的同型半胱氨酸检测试剂盒 | |
| JP2023549028A (ja) | アルツハイマー病（ａｄ）の診断のための指標を得るための方法 | |
| Watts | Determination of uric acid in blood and in urine | |
| WO2011133581A1 (en) | Methods and compositions for assaying enzymatic activity of myeloperoxidase in blood samples | |
| Price et al. | Analytical reviews in clinical biochemistry: the measurement of urate | |
| CZ30896U1 (cs) | Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy | |
| CZ307555B6 (cs) | Reakční směs pro kvantitativní stanovení sarkosinu ve vzorku lidské moči, séra nebo plazmy | |
| Marchetti et al. | Fluorescence quantification of allantoin in biological samples by cap-immobilized allantoinase/resorcinol assay | |
| Jeevanandam et al. | A rapid, automated micromethod for measuring free fatty acids in plasma/serum. | |
| Lous et al. | A comparison of three methods, utilizing different principles, for the determination of uric acid in biological fluids | |
| Bekaert et al. | Effect of selenium status and supplementation with high‐selenium yeast on plasma homocysteine and B vitamin concentrations in the UK elderly | |
| JP2003502055A (ja) | ホモシステインについての迅速かつ感度の高いアッセイ | |
| Wu | Screening for inborn errors of amino acid metabolism | |
| JPS59140899A (ja) | オキシダ−ゼによる基質の新規定量法 | |
| WO1997039352A1 (en) | Assays for detection of purine metabolites | |
| Rodriguez et al. | A low-cost mass spectrometry-based approach for quantifying purines in placental explants | |
| Mazzachi et al. | A manual spectrophotometric method for the measurement of serum sodium and potassium by enzyme activation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20210516 |