CZ307195B6 - Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů - Google Patents

Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů Download PDF

Info

Publication number
CZ307195B6
CZ307195B6 CZ2013-891A CZ2013891A CZ307195B6 CZ 307195 B6 CZ307195 B6 CZ 307195B6 CZ 2013891 A CZ2013891 A CZ 2013891A CZ 307195 B6 CZ307195 B6 CZ 307195B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
composition
glycerol
administration
pharmaceutical composition
polyethylene glycol
Prior art date
Application number
CZ2013-891A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2013891A3 (cs
Inventor
František Trnka
Pavel DoleĹľal
Original Assignee
František Trnka
Pavel DoleĹľal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by František Trnka, Pavel DoleĹľal filed Critical František Trnka
Priority to CZ2013-891A priority Critical patent/CZ307195B6/cs
Priority to DK14814733.3T priority patent/DK3071218T3/en
Priority to HUE14814733A priority patent/HUE042667T2/hu
Priority to PT14814733T priority patent/PT3071218T/pt
Priority to SI201431004T priority patent/SI3071218T1/sl
Priority to HRP20182155TT priority patent/HRP20182155T1/hr
Priority to PL14814733T priority patent/PL3071218T3/pl
Priority to LTEP14814733.3T priority patent/LT3071218T/lt
Priority to PCT/CZ2014/000133 priority patent/WO2015070828A1/en
Priority to ES14814733T priority patent/ES2707376T3/es
Priority to EA201691018A priority patent/EA033123B9/ru
Priority to SM20190076T priority patent/SMT201900076T1/it
Priority to EP14814733.3A priority patent/EP3071218B1/en
Priority to RS20190120A priority patent/RS58296B1/sr
Priority to JP2016553704A priority patent/JP6568095B2/ja
Priority to US15/037,331 priority patent/US20160339085A1/en
Publication of CZ2013891A3 publication Critical patent/CZ2013891A3/cs
Publication of CZ307195B6 publication Critical patent/CZ307195B6/cs
Priority to CY20191100031T priority patent/CY1121276T1/el
Priority to US16/281,130 priority patent/US11185587B2/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4826—Trypsin (3.4.21.4) Chymotrypsin (3.4.21.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0031—Rectum, anus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0075—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a dry powder inhaler [DPI], e.g. comprising micronized drug mixed with lactose carrier particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0078—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a nebulizer such as a jet nebulizer, ultrasonic nebulizer, e.g. in the form of aqueous drug solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/02—Suppositories; Bougies; Bases therefor; Ovules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21001—Chymotrypsin (3.4.21.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21004—Trypsin (3.4.21.4)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nových farmaceutických kompozic obsahujících směs proenzymů a enzymů majících antiproliferační a antimetastatické účinky.
Dosavadní stav techniky
Zhoubná nádorová onemocnění představují velmi rozsáhlou skupinu onemocnění, které jsou jednou z nejhůře léčitelných příčin úmrtí. V posledních letech celosvětově způsobují 13 procent úmrtí ročně. (Jemal A. et al., CA: Cancer J. Clinic, 61, 2011, 69-90.). Vznik zhoubných nádorů přináší nebezpečí, které je dáno schopností nádorových buněk měnit okolní buňky, za vzniku nových krevních cév, dalších podpůrných buněk a metastáz.
Protinádorová farmakoterapie je důležitou součástí celé palety současných léčebných přístupů. Podle terapeutické pozice farmakoterapie nádorových onemocnění dělí na adjuvantní (postihující tzv. zbytkovou nemoc, např. po chirurgickém zákroku), neoadjuvantní (předcházející operační a radiační léčbu, sledující devitalizaci a zmenšení tumoru) a metroterapii (dlouhodobá aplikace minimálních dávek cytostatik, ovlivňující neoangiogenezi u pokročilých forem nádorové nemoci).
Příslušné autority jako World Health Organisation WHO, Federal Drug Administration (FDA), European Medicines Agency (EMA) nebo Státní ústav pro kontrolu léčiv (SÚK.L, Praha, ČR) dnes pro farmakoterapii onkologických onemocnění registrují celkem přes 260 látek, které WHO (Collaborating Centre for Drug Statistics Methodology) třídí podle aplikačních, terapeutických a chemických kritérií do čtyř hlavních ATC podskupin WHO: (http://www.whocc.no/; on line 25. 6. 2012): 1. Cytostatika (s dalšími 5 podskupinami), 2. Hormonální léčiva (2 podskupiny), 3. Imunostimulancia (4 podskupiny) a 4. Imunosupresiva (5 podskupin). V současné době má povolení FDA asi 160 látek ze skupiny imunostimulancií a imunosupresiv. S přihlédnutím k ATC členění lze řadu podrobností o antineoplastických látkách a mechanismech jejich účinku nalézt v například v aktuální monografii Avendano, C, Menéndez, J. C, Medicinal Chemistry of Anticancer Drug. Elsevier, 2008, Amsterodam. 441 s.
Ve výčtu látek a mechanismů jsou zde popsány antimetabolity, inhibitory mitóz inhibitory funkce hormonů, reaktivní radikálové látky, fotosenzitizéry, DNA alkylační činidla, interaktory dělicího vřeténka DNA, interkalátory a topoizomerázové inhibitory, látky atakující tubulin a mikrotubuly, inhibitory signálních cest nádorového růstu a proliferace.
Z teoretického hlediska i pro praktické účely velmi zajímavou se jeví klasifikace založená na buněčných biologických mechanismech, která plně respektuje skutečnost, že pro výslednou reakci na terapii je logicky zodpovědná vzájemná interakce mezi léčivem, nádorem a jeho nositelem (Wu, Xi-Z.: Medical Hypotheses 66, 2006, 883-887). Z tohoto pohledu jsou protinádorová léčiva členěna na látky cytotoxické a biologické buněčné modifikátory, které nádorové buňky usmrcují. Používají se často jako základní léčiva. Další dvě skupiny, modulátory biologické reakce a biochemické modulátory, zahrnují látky, které jsou považovány za léčiva určená pro adjuvantní kombinovanou terapii.
Výsledky dosavadního intenzivního výzkumu v oblasti mechanismu účinků cytostatik a imunomodulačních antineoplastických látek a pokroků v biofarmaceutickém výzkumu přinesly obrovskou šíři poznatků, ale současně také nových otázek.
- 1 CZ 307195 B6
Dnes je již zcela jasné, že normální růst buněk, činnost a funkce jsou koordinovány a regulovány mnohostrannou sítí signálních drah, které přijímají extracelulámí signální molekuly, a přes kaskádu proteinů a aktivaci genové transkripce koordinují širokou škálu procesů, jakými jsou růst, proliferace, invaze, a apoptóza (Dowanward, J., Nátuře 411, 2001, 759-762). Novější strategie se zaměřují na interakce typu protein-protein (Wells, J.A., McClendon, CL, Nátuře 450, 2007, 1001-1009), kterých se nepochybně uplatňují také v případě naší nové kompozice, se zvýrazněním role terciální struktury látek tohoto typu, a to jak na parametry farmakodynamické, tak především na parametry inherentně farmakokinetické.
K tomu lze obecně doplnit, že jakýkoli zásah do takového komplikovaného a stále ještě málo poznaného systému, vede vždy k nějakým důsledkům, které však zatím nejsou vždy ani známé, ani předvídatelné ani vždy pozitivní. S nimi se také spojují i nedostatky současné farmakoterapie v onkologii.
Nevýhody současné onkologické farmakoterapie
Lidské nádory vznikají v důsledku nejrůznějších faktorů, a jejích buňky přitom samy dále ovlivňují buněčnou signalizaci a cesty, které regulují buněčnou proliferaci a dobu přežití ostatních buněk. Složitá buněčná signalizace uvnitř rakovinné buňky je pozměněna, počet podnětů, na které nádory reagují, se snižuje, ale intenzita následné odpovědi se zvyšuje. To představuje základ zvýšené citlivosti nádorů vůči genotoxickým stresům a imunitním vlivům (0'DriscoU, L, Cur. Cancer DrugTargets 9, 2009, 250-251).
Úspěchy léčby rakoviny jsou dnes velmi rozdílné v závislosti na konkrétním typu malignity. Některé druhy nádorových onemocnění, například seminom varlat, dětská leukémie i některé lymfomy jsou na protinádorovou léčbu velmi citlivé (Gonzalez-Angulo, A.M et al., Adv. Exp. Med. Biol., 608, 2007, 1-22). Jiná maligní nádorová onemocnění vykazují jen velmi omezenou reaktivitu (pokud vůbec nějakou), a v současné době není vůči nim k dispozici žádná účinná terapie (Jemal, A. et al., CA Cancer J. Gin., 60, 2010, 277-300). Zejména v případech, kdy se jedná o pokročilé nádory s rozvinutými metastázami, zůstává chemoterapie v lepším případě léčbou paliativní. Definujeme-li úspěšnost současné farmakoterapie dobou přežití pacientů s rakovinou, potom zjišťujeme, že tento zásadní parametr léčby zůstal za posledních 30 let téměř beze změny. Dosažené úspěchy přitom lze přičíst hlavně včasné diagnostice (Hemminki, K., Annals Oncol., 23, 2012, 760-764). Kromě toho je většina klinicky schválených protinádorových léčiv charakterizována úzkým terapeutickým oknem, které souvisí především s jejich vysokou systémovou toxicitou (Lowenthal, R. M.; Eaton, K., Hematol. Oncol. Clin. North Am., 10,1996, 967-90).
Druhý závažný problém představuje rezistence vůči protinádorovým léčivům, zejména při dlouhodobé léčbě (Redmond, K. M. et al.: Front. Biosci., 13, 2008, 5138-5154), ať je založena vnitřně v nádorových buňkách (intrinsic resistivity) nebo se jedná o resistenci získanou. Stále častěji se objevuje i vícečetná rezistence vůči většímu počtu protinádorových látek, často značně rozdílných struktur a funkcí (Wu, Ch.-P. et al.; Curr. Pharm. Biotechnol., 12, 2011, 609-620). Tato klinická rezistence je multifaktoriální a heterogenní, s mnoha molekulárními mechanismy (Glickman, M.S., Sawyers, C, Cell 148, 2012, 1089-98). Relativně krátká historie cílené biologické léčby rakoviny je dnes již zaplněna pestrou škálou mechanismů rezistencí (Gorre, M.E. et al., Science 293, 2001, 876-880).
Možná nej kritičtější vlastnosti onkologické farmakoterapie jsou spojeny se zvýšeným rizikem nežádoucích indukce imunogenních reakcí, resp. toxických efektů, neboť většina novějších léčiv náležejících do 3. ATC a 4. ATC skupiny jsou výšemolekulámí aktivní látky, převážně biotechnologického původu. Patří mezi tzv. biofarmaceutika, nověji biologika, proteinová terapeutika, a vlastně každá z nich má potenciál ovlivnit u pacientů nejméně stovku fyziologických procesů (Yang, J. A.; Hastings Sci.Tech. L. J., 3, 2011, 217, 1—18), což oproti léčivům s malou molekulou představuje zásadní nárůst. K rizikům imunitních reakcí patří přecitlivělost, anafylaxe, pseudoalergická anafylaktoidní reakce, sérová nemoc, reakce na infúzi,
-2CZ 307195 B6 snížení terapeutické účinnosti (Borges, S. et al.; Clin. Pharmacol. Ther. 74, 2006, 61-74; Barbosa, M.D.F.S., Drug Disc. Today 16, 2011, 345-53), generování protilátek proti léčivu a zkřížená reakce mezi protilátkami pro terapeutické a endogenní proteiny (Wager K., Jones, G.: Cur. Biotechnol., 297, 2012, 297-317). Samozřejmě to také přináší značné nároky na podmínky výroby (Singh, S. K., J. Pharm. Sci., 100, 2011, 354-87), včetně kontrolních přístupů (EMA. 2007. Doc. Ref. EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006.
http://www.ema.europa.eu/docs/en GB/document library/Scientifíc guideline/2009/09/WC5000 03946.pdf, což se promítá v ceně těchto léčiv. Také z tohoto důvodu jsou tato léčiva často používána nikoli jen monoterapeuticky, ale také v kombinacích s klasickými chemoterapeutiky, sekvenčně, i v návaznosti na další fyzikální, resp. chirurgické metody léčby.
K nevýhodám současné farmakoterapie nádorů látkami ze skupiny biologik, patří dále skutečnost, že přibližně v 98 procentech případů je spojena pouze s parenterálním injekčním, resp. infůzním podáním léčiva. Znamená to, že parenterální aplikační přístup a jemu příslušné lékové formy jsou detailně rozpracovány. Na druhé straně však zůstávají nevyřešeny všechny principiální nevýhody parenterálního podání jako takového, počínaje zvýšeným rizikem zanesení infekce v místě vpichu až po non-compliance pacienta, a to i v důsledku vazby na zdravotnické zařízení a jeho kvalifikovaný personál. Převážná většina biologik má pouze krátký plazmatický poločas a musí být podávána prostřednictvím infuzí.
Uvedený poukaz na dosavadní nevýhody onkologické farmakoterapie souhrnně znamená, že k léčbě nádorových onemocnění jsou stále zapotřebí alternativní koncepční i praktické přístupy (Sachlos,E., et al., Cell 149, 2012, 1284-1297), a že dosavadní paletu protinádorových látek je stále potřebné rozšířit o taková léčiva, která výše stručně shrnuté nevýhody nemají nebo alespoň co nejvíce eliminují.
Podstata vynálezu
Podstatou řešení je farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů, obsahující jako účinné látky proenzymy trypsinogen a chymotrypsinogen a enzymy α-amylázu a lipázu, a jeden nebo více farmaceuticky přijatelných excipientů, pro současné, oddělené nebo postupné podávání kompozice cestou parenterální nebo transmukosální, přičemž kompozice má antiproliferační a antimetastatické účinky na rakovinové nádory a je určena pro terapeutické, profylaktické nebo diagnostické použití u savců.
Farmaceutická kompozice má s výhodou poměr enzymatických účinných látek, tedy aktivit trypsinogenu (T), chymotrypsinogenu typu A (CH), α-amylázy Bacillus sp. (A)a lipázy z pšeničných klíčků Triticum aescivum (L) pro poměr T:CH:A:L vyjádřený v m.j. je v intervalu od 150:150:40:1 do poměru 400:1200:200:1, přičemž m.j. znamenají měrnou aktivitu, převoditelnou podle Nomenclature Committee of the Intemational Union of Biochemistry (NC-IUB) (1979). Units of Enzyme Activity. Eur. J. Biochem. 97 (2): 319-20. 1 U ~16,67 nkat doi: 10.1111/j. 1432-1033.1979.tbl 3116.x na jednotku katal dle vztahu:
V uvedené farmaceutické kompozici je s výhodou trypsinogen typu I, chymotrypsinogen je typu A, α-amyláza je produkována Bacillus sp. a lipáza je z Triticum aestivum.
Minimální enzymatická aktivita účinných látek je ve farmaceutické kompozici podle vynálezu s výhodou následující: trypsinogen 40 m.j./mg, chymotrypsinogen 60 m.j./mg, a-amyláza
20. m.j./mg a lipáza 1 m.j./mg.
S výhodou je alespoň jedna z účinných látek ve farmaceutické kompozici podle vynálezu nahrazena biologicky podobnou látkou získanou extrakčními postupem z vyšších rostlin, živočichů, nebo kultivačními postupy za použití buněk plísní, kvasinek, nebo bakterií, přičemž primární struktura biologicky podobné látky s účinnou látkou, kterou v kompozici nahrazuje, je
-3 CZ 307195 B6 nejméně z 70% shodná a poloha aktivních míst podstatných pro účinek je nejméně z 95 % shodná.
Farmaceutická kompozice podle vynálezu je zejména vhodná pro systémové sublingvální, rektální, inhalační nebo pro parenterální podání.
Farmaceutická kompozice podle tohoto vynálezu může obsahovat jako farmaceuticky přijatelný excipient řadu látek, a to zejména jeden nebo více hydrofilních polyhydrických alkoholů zahrnující polyethylenglykol s mol. hmotností 100 až 8000 a/nebo hydrofilní nízkomolekulámí alkoholy jako glycerol, propylenglykol, n-propanol, a/nebo sacharidů jako trehalóza, mannitol, laktóza, sorbitol, myoinositol, a/nebo polysorbátů jako polysorbát 20, polysorbát 60, polysorbát 80, poloxamerů jako poloxamer 182, poloxamer 417, poloxamer 908, a/nebo jeden nebo více lipofilních excipientů zahrnujících hydrogenované triglyceridy jako hydrogenovaný glyceroltrioleát, hydrogenovaný glycerol-kokoát, a/nebo esterů vyšších mastných kyselin s glycerolem nebo propylenglykolem jako, glycerol-tripalmitát, glycerol-trioleát, glycerol-tristearát, glyceroldistearát, glycerol-dioleát, glycerol-monolaurát, propylenglykol-myristát, glyceroldipalmitostearát, a/nebo esterů nižších jednovazných alkoholů jako diisopropyl-adipát, isopropyl-laurát, isopropyl-linoleát, isopropyl-palmitát, a/nebo esterů vyšších mastných kyselin se středními a vyššími mastnými alkoholy zahrnující, myristyl-strearát, kapryl stearát, cetylpalmitát, kaprin-behenát, lauroyl-oleát, a/nebo vyšších mastných alkoholů zahrnujících laurylalkohol, myristylalkohol, palmitylalkohol, stearylalkohol, behenylalkohol a analogické vyšší mastné kyseliny jako kyseliny laurová, myristová, palmitová, stearová, lignocerová, arachidonová, behenová ajejich ethoxylované deriváty jako polyethylenglykol-10-oleylalkohol, polyethylenglykol-25-stearylalkohol, polyethylenglykol-40-stearylalkohol, stearoylpolyethylenglykol-32-glycerol, polyethylenglykol-15-hydroxystearát, a/nebo rostlinných olejů zahrnujících bavlníkový, slunečnicový, podzemnicový, sójový, ricinový a jejich polyethoxylované deriváty jako polyoxyl-35-ricinooleát, a/nebo fosfolipidů zahrnujících vaječný lecitin, sójový lecitin, dioleyl-fosfatidylcholin, dipalmityl-fosfatidylserin, a/nebo sterolů zahrnující cholesterol a jeho deriváty jako cholesteryl-linoleát, cholesteryl-acetát, a/nebo biokompatibilní a biodegradovatelná polymery zejména polyesterů jako kyselina poly(D,L)mléčná (PDLLA), kyselina polyglykolová (PGA), kyselina poly(DL) mléčnáglykolová (PLGA).
Pokud je farmaceutická kompozice určena pro sublingvální aplikaci, s výhodou je v podobě nanovláken, přičemž obsahuje alespoň jeden z polyvinylových polymerů jako jsou polyvinylpyrrolidony s mol. hmotností asi 30 až 50 tisíc a polyvinylalkoholy s mol. hmotností od 20 tisíc do 200 tisíc, z derivátů celulózy jako methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, hydroxyethylcelulóza, a/nebo z polysacharidů typu škrobu jako hydroxyethylškrob, sodná sůl karboxymethylškrobu, a/nebo dextrinů s molekulovou hmotnosti od 4 tisíc až po 80 tisíc, a/nebo z biotechnologických polysacharidů typu dextranů s molekulovou hmotností od 10 tisíc až po 80 tisíc, a/nebo látek typu glukuronátů jako xantanová klovatina, a/nebo dalších polyuronidů resp. jejich solí, zejména sodných, draselných, jako hyaluronanů, alginanů, pektinanů, arabinanů a/nebo polymerů založených na kyselině akrylové, methakrylové a/nebo jejich kopolymerech jako jsou karboxyvinylpolymery (karbomery) síťované s polyalkenylethery cukrů nebo polyalkoholů (jako diallylsacharóza a diallylpentaerytritol, biodegratovatelné polyestery α-hydroxykyselin jako jsou PDLLA, PGA, PLGA, polykaprolaktony s mol. hmotností od 10 do 100 tisíc, další polymemí excipienty typu kopolymerů jako polyvinylkaprolaktam-polyvinylacetát-polyethylenglykol.
Pokud je farmaceutická kompozice nebo její část určená k inhalační aplikaci, obsahuje s výhodou rovněž alespoň jeden nebo více sacharidů zahrnující sacharózu, trehalózu, mannitol, glukózu a/nebo různé formy laktózy.
-4CZ 307195 B6
Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv může být s výhodou ve formě nanovlákenného stabilizovaného přípravku pro přímou aplikaci účinných látek nebo jako stabilizovaný zásobník účinných látek v meziproduktu nebo ve finálním přípravku.
Jde o kompozici proenzymů a enzymů, představující svým složením a účinností výraznou modifikaci enzymoterapie. Řeší základní nežádoucí účinky současné onkologické léčby, které spočívající především postihu čile se dělicích zdravých tkání, jakými jsou sliznice gastrointestinálního traktu, kostní dřeň, parenchym jater a ledvin. Jedná se tedy o cílenou biologickou terapii v pravém slova smyslu, netoxickou, selektivně zaměřenou na nádorové buňky, širokospektrální z hlediska antineoplastických efektů. Postihuje karcinomy, sarkomy i akutní hematologické malignity.
Dávkování léčebné kompozice je limitováno pouze minimální účinnou denní dávkou při vztahu k množství degradačních produktů pocházejících z nádorových buněk. Vzhledem k intrinsitní netoxičnosti vlastní kompozice podle vynálezu, kdy mohou toxicky působit především či pouze degradační produkty z rozpadlých nádorových buněk, lze kompozici podle vynálezu využít také diagnosticky, a svým způsobem Vzhledem ke zkušenostem získaným při použití metod in vivo testování účinnosti na liniích nádorových buněk pěstovaných na myších je zřejmé, že kompozice podle této patentové přihlášky bude antineoplasticky účinná nejen u člověka, ale předpokládá se její účinek také proti nádorům postihujících zvířata, například psa nebo kočku. Je ovšem potřebné počítat s jejich rozdílnou anatomií, ale také jinou imunogenitou, přičemž vlivy těchto rozdílností se nedají spolehlivě predikovat.
Minimální účinnou denní dávkou se rozumí takové množství antineoplastické kompozice, které s ohledem na aktuální stav nádorového onemocnění a v návaznosti na konkrétní metodu aplikace zajistí úplnou nebo parciální terapii nádorového onemocnění nebo nádorově diagnostický nebo profylaktický efekt.
Stabilizace jednotlivých součástí antineoplastické čtyřkompozice podle této přihlášky vynálezu je pro účely zpracování do farmaceutického přípravku a pro účely aplikace řešena s využitím excipientů a postupů, které zajišťují zachování, resp. i regeneraci sekundární a vyšších nadmolekulámích struktur dílčích aktivních komponent.
Systémové podání neinvazivními cestami, které lze s výhodou pro antineoplastickou kompozici podle vynálezu využít, řeší jeden z významných problémů současného podání biologických léčiv (biologik, proteinových terapeutik apod.), kterým je krátký plazmatický poločas těchto látek v organismu.
Podrobné vysvětlení vynálezu
Nové řešení podle vynálezu je principiální, empiricky odpozorované z vlivů na trofoblast jako biologický model zhoubných nádorů, to i na molekulární úrovni (Soundarajan, R., Rao, J.: Reprod. Biol. Endocrinol., 2, 2004, 15 (http://www.rbej.com/content /2/1/15, on line: 30 6 2013;). Řešení vychází z klasického konceptu J. Bearda (Beard, J., Lancet 168, 1905, 281— 283), který více než před sto lety navrhl léčbu pokročilých karcinomů pomocí čerstvých výtažků z pankreatu. Jejich protinádorová aktivita byla založena na proteolytickém potenciálu. Předpokládal, že enzymy produkované pankreatem omezují trofoblastickou invazi, a usoudil, že pankreatické extrakty by měly mít na invazivní nádory podobný inhibiční účinek. V následujících letech byly extrakty enzymů z pankreatu na tehdejší dobu dále podrobně studovány. Bylo zjištěno, že skutečně velmi účinně zastavují rakovinné bujení, a to i u pacientů s pokročilým stadiem maligních neoplaplasmat (Goeth, R.A., J. Am. Med. Assoc. 1907;1030). Vzhledem k několika následným zprávám o negativních důsledcích podání tehdy pouze velmi nedokonale zpracovaných extraktů z pankreatu se ovšem od jejich zkoumání na dlouhou dobu upustilo (Gurchot, Ch., Oncology 31, 1975, 310-333). Pozdější dohledatelné výjimky z posledních let,
-5CZ 307195 B6 (např. Maeda et al.: EU Pat. 0215 662 A2, 1986) uvádějí vždy pouze proteázy, nikoli proenzymy proteáz, zymogeny.
Hypotéza, že proenzymy a nikoli aktivované enzymy jsou stěžejními komponentami účinku extraktů, byla poprvé formulována a následně podrobněji rozvedena F. Trnkou (Trnka, F. et al.: EU Pat. 0 743 070 A2, 1996; CZ Pat. 283 972, 1998; US Pat. 5 858 357; 1999). Někdy před 30 lety tento autor odhalil a experimentálně potvrdil skutečnost, že směs trypsinogenu, chymotrypsinogenu a amylázy, přibližně v koncentracích doporučených J. Beardem, poskytuje silný protinádorový, antiinvazivní a antiangiogenní efekt. Jedním z účinků uvedených proenzymů a jejich směsi s amylázou, je na buněčné úrovni inhibice migrace nádorových buněk. Kromě toho bylo Trnkou et al. zjištěno (Novák, J.; Trnka, F.: Anticancer Res., 25, 2005, 1157-77), že kontinuální expozice nádorových buněk nízkou koncentrací výše zmiňovaných látek vede k vytvoření buněčných agregátů a zábraně metastáz. Podařilo se mu spojit historické údaje se soudobými poznatky a vyvodil, že (a) proenzymy proteáz jsou odolné vůči inaktivaci inhibitorů proteáz, (b) aktivace proenzymů se vyskytuje výhradně v nádorové buněčné membráně, (c) aktivní šeřinové proteázy ničí buněčný povrch nádorových buněk, mají apoptoidní účinek, což jsou základní poznatky, na kterých je založen tento vynález.
Jedním ze znaků tohoto vynálezu je tedy dosud nepopsané začlenění enzymu lipázy do antineoplastické kompozice a její námi nově rozšířená a prokázaná širokospektrální účinnost.
Účinek směsi proenzymů proteáz a hydrolytických enzymů
Význam in vivo použití proenzymů proteáz místo aktivních proteáz tkví v existenci antiproteáz plazmy, které spolu s proteázami tvoří komplexy, jež brání průniku proteáz k povrchům nádorové buňky (Currie, G.A., Bagshawe, K.D., Lancet 279 (7492), 1967, 708-10). Těmito antiproteázami jsou konkrétněji alfa-1 antitrypsin a alfa-2 makroglobulin (Lah, T. T. et al., Expert Opin. Biol. Ther., 6, 2006, 257-279), pro něž jsou proenzymy nečitelné. Protinádorový selektivní účinek proenzymů pankreatických proteáz spočívá v přítomnosti pankreatického sekrečního inhibitoru (PSTI), jenž je tvořen acinámími buňkami pankreatu a které jej chrání před samonatrávením. Tento inhibitor byl nalezen také na površích slizničních buněk žaludku, tenkého i tlustého střeva, na buňkách adenomů, ne však karcinomů (Bohe, H. et al., J. Clin. Pathol., 43,1990, 901-904).
Dalším přínosem použití proenzymů je neúčast na hemokoagulační kaskádě a invazivním charakteru maligních nádorů. Díky trypsinové aktivitě maligních tumorů jsou proenzymy proteáz selektivně aktivovány na nádorových buňkách. Tato vlastnost mechanismus proenzymů, obcházející protektivní účinek antiproteáz, se neuplatňuje v ovlivnění nádorových buněk in vitro, kdy je tedy jedno, zda se použijí aktivní proteázy či jejich proenzymy. Pokusy in vitro jsme prokázali agregační vliv na nádorové buňky a dalšími pokusy in vivo také inhibiční vliv na tumorózní proliferaci a metastázy u několika zásadních linií lidských nádorových buněk.
Významným bylo zjištění, že buňky, které neagregovaly, podlehly apoptóze (Trnka F. et al., EU Pat. 0 743 070 A2, 1996; Novák, J.F., Trnka, F., Chemin, M.I., AACR Meeting Abstracts, Apr. 2006; 1023-1024. Další autoři popsali supresivní roli trypsinu na nádorovou progresi epigenetickým mechanismem (Yamashita, K. et al., Cancer Res., 63, 2003, 6575-6578), nebo antiproliferativní účinky slinné alfa-amylázy na myší a lidské rakovinné buňky zprostředkováním buněčné adheze a stimulací buněčné anoikis, typu apoptózy (Fedrowitz, M. et al., J. Exp. Clin. Cancer Res., 30, 2011, 102-114). Dále byla prokázána elevace plasmatické hladiny endostatinu a angiostatinu a tím omezení cévní novotvorby.
Působení amylázy na nádorové buňky je tedy dnes opět studováno, stejně jako role trypsinogenu a chymotrypsinogenu (Itkonen, O., Scandin. J. Clin. Lab. Invest., 70, 2010, 136-143; Koskensalo, S. et al.: Oncology 82, 2012, 234-241) a jako působení lipáz (Nomura, D. K. et al.,
-6CZ 307195 B6
Cell 140, 2010, 49-61), tedy triacylglycerolhydroláz, EC 3.1.1.3 coby serinových proteáz, jejichž společné využití je podstatou účinku čtyřkompozice podle této přihlášky vynálezu.
Antimetastatický účinek terapeutické, diagnostické a profylaktické kompozice podle vynálezu je oproti výše dokumentovanému stavu techniky nově rozšířen a potencován přidáním rostlinné lipázy (Aub, J.C, Tieslau, C, Nati. Acad. Sci. USA, 50, 1963, 613-619), charakterizované v aktivním místě triádou aminokyselin serin-histidin-asparagin.
Ve standardizovaných pokusech se subkutánně transplantovanými liniemi lidských buněk karcinomu prsu, kolorektálního karcinomu, nádoru prostaty a malobuněčného nádoru plic, byl na nu/nu myších prokázán terapeutický efekt, a to jak při subkutánním, tak při rektálním podávání přípravku.
Univerzální antitumorózní účinek kompozice, bez ohledu na původ ovlivněných tumorů, si dnes vysvětlujeme společnou přítomností sializované molekuly glykoproteinu choriogonadotropinu (Currie, G.A., Bagshawe, K.D., Brit. J. Cancer 22, 1968, 848-853; Willey, K.P. et al., J. Biol. Chem., 264, (1989), 1971, 619-729; Acevedo H.F. et al., Cancer 69, 1992, 1818-1928; Acevedo
H.F. et al., Cancer 78, 1996, 2388-99), kterou považujeme za cílovou strukturu pro chymotrypsinogen (Regelson W., Cancer 76, 1995, 1299-1301; Hles R.K.: Mol. Cell. Endocrinol., 260-262, 2007, 264-270) a amylázu (Varki, N.M., Varki, A., Lab. Invest. 87, 2007, 851-857). Toto sializované centrum je zřejmě nositelem či zprostředkovatelem invazivních a metastatických vlastností maligních tumorů (Nguyen, D.H., Tangvoranuntakul, P., Varki, A., J. Immunol., 2005; 175, 228-236).
Inovativní uplatnění lipázy je podloženo nedávným zjištěním D. K. Nomury et al., kteří experimentálně prokázali, že monoacylglycerol lipáza (MAGL) reguluje tvorbu volných mastných kyselin v rakovinných buňkách, což jim umožňuje vytvářet onkogenní lipidickou signalizaci, která zvyšuje migraci, invazivnost tumorózních buněk, nárůst tumoru a jeho patogenitu. Pomocí proteomického přístupu spočívajícího v analýze desítek nadřazených serinových hydroláz zjistili, že hladiny MAGL jsou trvale zvýšeny právě v buňkách agresivních nádorů a zřejmě předávají agresivitu také buňkám neagresivním (Nomura, D.K., Long, J.Z., Niessen, S., et al., Cell 140, 2010, 49-61).
Sirokospektrální antineoplastické působení nové kompozice je dáno jejím novým složením, které respektuje komplexnost vztahů v živém organismu člověka nebo zvířat. Nezabraňuje sice vzniku nádorových buněk, ale ničí nádorové buňky již vzniklé, čímž navrací a udržuje složité rovnováhy biologického prostředí v normálním, zdravém stavu, omezuje vznik a šíření onkogenních signálů.
Zajímavé a prakticky využitelné jsou rovněž projevy terapie při podávání antineoplastické kompozice, které u jedinců s nádorovým postižením spočívají ve tvorbě potu, dechu, moče a výmětu specifického zápachu. K tomu se přidává únavnost až spavost, případně bolesti ve svalech. Všechny tyto projevy jsou důležité, subjektivně i klinicky odečitatelné průkazy kontaktu léčiva s nádorově postiženou tkání. Neznamenají přitom toxicitu přípravku jako takového, ale jsou příznakem toxicity zplodin produkovaných v důsledku jeho působení na nádorové buňky. V tomto smyslu jsou tyto projevy také důležitým indikátorem toho, je-li v organismu nádorová tkáň přítomna nebo nikoli. V případě, že se po dvou až třech dnech podávání obvyklých úvodních terapeutických dávek kompozice podle přihlášky vynálezu nedostaví u příslušného jedince žádný ze zmíněných projevů, lze s velkou mírou jistoty usuzovat na nepřítomnost nádorových buněk. Jinými slovy, při minimální vlastní toxicitě lze kompozici podle vynálezu použít v popsaném smyslu také k diagnostice nádorového onemocnění v bezpříznakovém období, u jedinců, kteří dosud žádné známky nemoci nezaznamenali.
V této souvislosti je důležité zmínit možnosti využití hemodialýzy, resp. hemoperfuze, které lze v případě potřeby využívat při léčebném nasazení takových dávek kompozice podle vynálezu, které
-7CZ 307195 B6 by v důsledku destrukce nádorových buněk znamenaly ohrožení důležitých životních funkcí pacienta. Takový přístup samozřejmě předpokládá odborné vedení a dohled klinického onkologa.
V principu analogicky lze také stručně popsat princip profylaktického použití antineoplastické kompozice podle vynálezu. Vzhledem k minimální vlastní toxicitě přípravku lze totiž do procesu sledování onkologického pacienta zařadit také periodu podávání terapeutických dávek kompozice. V případě, že by se v organismu vyskytly nádorové buňky, tudíž substrát pro působení součástí přípravku, poskytne podávání přípravku svůj efekt ve skutečnosti již i profylakticky, s průvodními příznaky popsanými výše.
Spojený diagnostický a profylakticky efekt krátkodobého podání kompozice se tedy dostavuje i u jedince, u kterého žádné příznaky onkologického onemocnění nebyly dosud zaznamenány. V případě, že se u něj po podání přípravku nedostaví žádný z výše popsaných průvodních efektů působení přípravku, je lze tuto skutečnost logicky považovat za orientační průkaz jeho onkologického zdraví.
Řešení podle vynálezu spočívá v aktivitě definované kompozici dvou proenzymů skupiny trypsinogenu a chymotrypsinogenu s enzymy alfa-amylázou a lipázou (dále souhrnně také jen aktivních látek). Tato čtyřkompozice, vykazuje za in vivo podmínek překvapivě výrazné, pozitivní efekty vůči širokému spektru nádorových buněk zcela odlišných histologických charakteristik, jak je zmíněno výše, a to jak po injekčním subkutánním podání, tak po neinvazivní transmukosální, konkrétně rektální aplikaci.
Dílčí součásti antineoplastické kompozice
Kompozice podle vynálezu představuje kombinaci proenzymů a enzymů získaných extrakcí z orgánů, resp. tkání živočichů (především savců), rostlin, a/nebo substancí produkovaných kultivačními metodami za použití plísní a mikroorganismů nebo například kontinuální perfúzi kultur savčích buněk a následnou úpravou supematantu. Se zdokonalováním separačních a analytických metod narůstá podíl produktů z kultivačních procesů.
Při dnešní úrovni poznání v oblasti biotechnologií je tak prakticky možné získávat příslušné proenzymy (Jungo, C, Marison, I., von Stockar, U.; J., Biotechnol., 128, 2007, 824—837; Paulová,
L. et al., J. Biotechnol., 157, 2012, 180-188) i oba příslušné enzymy, tedy pro kompozici všechny potřebné účinné látky, oběma základními přístupy.
Výrobní postupy obvykle vedou k produkci izolovaných proteinů a polypeptidů, které jsou pečlivě vyjmuty z jejich přirozeného prostředí, separovány a identifikovány. Kontaminanty pocházející z přírodního materiálu mohou ovlivňovat terapeutické, diagnostické, resp. profylaktické použití proteinů a polypeptidů. Mohou zahrnovat nejen proteinové součásti, ale i řadu dalších kontaminant různé povahy. Mohou vést ke změně ve složení původního přírodního proteinu, změně jeho glykosylace, změně sekundární či vyšších nadmolekulámích struktur, což může po jejich podání do živého organismu vést k nežádoucím imunitním a dalším reakcím. Dnes se má za prokázané, že o výsledných interakcích proteinů v organismu rozhoduje nejen jejich primární struktura, ale zcela zřetelně právě sekundární a terciální struktura proteinu, které jsou v přímých fyzikálně chemických interakcích s biologickým prostředím.
Vzhledem k tomu, že zejména při kultivačních postupech mohou jakékoli drobné změny podmínek přinést nežádoucí výsledky, je potřebné nejen produkční procesy ale také kvalitu finálních produktů velmi detailně a nákladně kontrolovat. Je známo, že i proto je cena biologik v průměru více než dvacetkrát vyšší, než finanční náklady na léčiva získaná metodami klasické chemie nízkomolekulámích látek nebo extrakčními a purifikačními postupy z orgánů a tkání běžně dostupných živočichů a rostlin.
-8CZ 307195 B6
Proto je nutné přiměřeně definovat nejen jejich původní primární, sekundární, a terciální strukturu, ale také pro jejich další použití také přípustné odchylky od předloh proteinů a polypeptidů v jejich původním, přirozeném stavu. Proto se definují nejen požadavky na čistotu, například na úrovni 95 %, lépe i 99 % (v závislosti rovněž na metodě stanovení čistoty), přípustné počty reziduí např. na N-terminálním zakončení proteinu, vnitřní sekvence aminokyselin proteinu nebo glykosylace řetězců aminokyselin, ale vyjadřuje se také přípustná procentuální odlišnost struktury těch míst proteinu nebo polypeptidů, která jsou pro jejich účinek důležitá.
Na druhé straně je potřebné výrazně zmínit a doplnit, že již bylo prokázáno, že změny v primární struktuře enzymů, konkrétně například u serinových proteáz, nemusí vést ke změně fůnkce enzymu, je-li zachována nadmolekulámí struktura aktivního místa enzymu (Kraut, J., Annu. Rev. Biochem., 46, 1977, 331-58).
Za další, ale stejně významné je i to, že ani samotná primární sekvence aminokyselin, ačkoli je identická s předlohou lidského proteinu nezaručuje imunokompatibilitu, jak bylo prokázáno např. pro erythropoetin (Prabhakar, S. S., Muhlfelder, T., Clin. Nephrology 47, 1997, 331-335) nebo interferon-a2B (Óberg, K. et al., J. Nati. Cancer Inst. 81, 1989, 531-535).
Z právě uvedených faktů vyplývají důležité důsledky pro záměrné využití enzymů. Obecně se přijímá, že ve většině případů distribuce enzymů v systémovém oběhu a jejich chování v organismu jsou řízeny kombinací jejich velikosti, náboje, pozice a začlenění hydrofilních povrchových funkčních skupin. Existuje mnoho informací o tom, jak tyto vlastnosti ovlivňují vazbu na bílkoviny, chování v cirkulaci, interakce s vaskulámími endoteliálními buňkami, extravazálními kapilárními lůžky, o šíření prostřednictvím tkáňového stromatu a konečné komunikaci s cílovými buňkami. Zatím však stále ještě neexistují sjednocující principy, které popisovaly, co je pro částice proteinových léčiv nejlepší, a to především u živých organismů za in vivo podmínek. Z tohoto pohledu jde stále o struktury pro cílenou tvorbu farmak příliš komplexní a dosavadní znalosti o mechanismech jejich interakcí jsou stále nedostačující.
I v kontextu nádorových onemocnění je navíc nutné mít stále na paměti, že aktivita enzymů, resp. proenzymů vyjádřená na základě arbitrámě stanovených metod, nemusí odpovídat protinádorové aktivitě jednotlivých aktivních látek.
V každém případě je nutné biologické produkty, proenzymy a enzymy, správně a reprodukovatelně definovat. Proto je kompozice podle vynálezu definována složením nikoli na základě hmotnosti, ale na základě jednotek enzymatické aktivity.
Význam tohoto přistupuje zřejmý například při porovnání aktivit dvou komerčně dostupných proenzymů dvou různých dodavatelů: chymotrypsinogen s deklarovanou aktivitou > 40 m.j./mg vs chymotrypsinogen A s aktivitou = 1422,3 m.j./mg (http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/tl 143?lanR=en&region=CZ; http://www.applichem.com/en/home-Dage/). Pro využitelnost informace o složení biologických léčiv je proto zásadně nutné splnit požadavek definování jejich biologické aktivity, například v podobě údajů aktivity na jednotku hmotnosti (nejčastěji miligram), na daný objem nebo na jednu dávku. Tímto způsobem stále udávají enzymatickou aktivitu i renomovaní výrobci, přestože ve vědeckém světě je již dost dlouho za správné považováno vyjádření enzymatické aktivity v katalech (kat), jako jednotek odvozených z SI soustavy (1 U: 60 = pkatal; 0,01667 U = pkatal a 60 pkatal = U).
Také v tomto ohledu spočívá důležitý rozdíl kompozice podle vynálezu ve srovnání s dřívějšími patenty Trnky, F. et al. nebo Psaledakise N. G. (Psaledakis N.G: US Pat. 4 514 388, 1985), které byly rovněž inspirovány poznatky J. Bearda. Tento rozdíl je také zásadní v porovnání s obsahem analogických patentů, resp. přihlášek patentů Kenoyna, J. N. et al., založených na stejné myšlence, která je v nich zastřena heterogenní deklarací dalších nároků vztažených k různým
-9CZ 307195 B6 antioxidantům a dalším potenciálně kancerostatickým látkám heterogenní povahy. (Kenyon J. N. et al., Austral. Pat Appl. 2010/310 887, 2012; US Pat Appl. 13/502,917, 2012; EP 2 490 711 Al, 2012). Navíc, fakticky ani nelze definovat složení enzymatických přípravků, na které se oba posledně zmíněné patenty zaměřují, pouze na základě hmotnosti příslušných substancí, nýbrž na základě jejich enzymatické aktivity.
Postupy produkce substancí pro kompozici podle vynálezu, včetně obvyklé závěrečné lyofilizace nebo sprejového sušení, využívají technologické poznatky dnes dobře popsané a dostupné v rozsáhlé vědecké a patentové literatuře. Umožňují nejen získání neimunogenních produktů vysoké čistoty, ale také produktů, které mohou být oproti přírodním předlohám různě modifikovány. Někdy tyto modifikace mají za cíl zlepšit některé vlastnosti svých předloh, nej častěji vlastnosti stabilitní nebo parametry farmakokinetické. Druhou stranou tohoto technologického pokroku, a v současné době jíž i problémem, je skutečnost, že dnes vlastně rutinní tvorba modifikací proteinů, enzymů, polypeptidů slouží k obejití stávající patentové ochrany původních látek, jejich kompozic a přípravků, případně zneužití cesty tzv. biosimilars. Příslušné legislativní autority hledají, a v diskusi i svědeckou komunitou postupně nacházejí, v této oblasti konsensus. Údaje nutné pro charakterizaci biologických léčiv, resp. proteinových terapeutik jsou pro biosimilars od roku 2006 postupně formulovány ve směrnicích EMA (Doc. Ref. EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006. http://www.ema.europa.eu/docs/en GB/document library/Scientific guideline/2009/09/W C500003946.pdf (on line 30. 10.2013) a FDA Draft http://www.fda.gov/Drugs/Guidance ComplianceRegulatorylnformation/Guidances/ default.htm. (on line 30. 10. 2013), přístup obou regulačních autorit se přitom poněkud liší, FDA je zdrženlivější.
Důležité je tedy připomenutí toho, že každý ze proenzymů (zymogenů) a enzymů námi nově navrhované antineoplastické kompozice je v současné době možné získat v desítkách různě odlišných podob, z nichž logicky některé budou působit stejně jako námi použité a testované substance, řada z nich naopak nikoli. Odborníkům příslušných disciplín je známo, že desítky substancí, které podle EC čísla patří do stejné klasifikační skupiny enzymů, mají různou primární strukturu, tedy různý počet a pořadí aminokyselin v řetězcích, různý počet i polohu disulfidických můstků, různě dlouhé a umístěné hydrofobní a hydrofilní části, různá místa pro substituci, různé konkrétní substituenty, například různé a na různých místech glykosidicky vázané cukerné jednotky, a tedy například také různé chování ve vodném prostředí, chování na mezifázích nebo mají různou polohou aktivních míst pro reakci se substrátem. To vše je dáno původem a způsobem produkce příslušných zymogenů a enzymů.
Pro vymezení definice proenzymů a enzymů antineoplastické kompozice podle této patentové přihlášky byly v tomto kontextu využity údaje a charakteristiky z vědeckých databází NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein, on line 30.4.2013); a PDB http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do, on line 30. 4. 2013).
Jednotlivé substance antineoplastické kompozice lze těmito charakteristikami popsat a následně tak vymezit rozsah podobnosti případných možných obměn, ve kterém lze očekávat stejný účinek jak dílčích komponent, tak i antineoplastické kompozice jako celku.
Pro kompozici podle vynálezu tudíž považujeme za důležité, aby podobnost v ní využitých konkrétních variant zymogenů a enzymů byla alespoň zhruba kvalitativně vymezena sekvencemi aminokyselin čtyř námi zkoušených substancí (viz Příklad 2.1, 3.1., 4.1 a 5.1) Za podobné je z hlediska účinku nutné považovat substance s alespoň 70% (a vyšší) shodou aktivních funkčních míst a úseků primárních struktur pro jednotlivé typy součástí čtyřkompozice. Tedy se 70% shodou pro trypsinogen, typ I z bovinního pankreatu, pro chymotrypsinogen A z bovinního pankreatu, pro α-amylázu produkovanou Bacillus sp., a se stejnou 70% shodou pro lipázu z Tritici aestivum.
- 10CZ 307195 B6
Přitom platí, že jakkoli je důležitá sekvence aminokyselin enzymu a jeho primární struktura, vlastního účinku se zúčastňuje enzym ve svém nadmolekulámím uspořádání, s určitou pozicí aktivních míst. Pro farmakodynamiku je tedy významná především charakteristika a pozice aktivních míst, ostatní části enzymu jsou v daném kontextu důležité pro jeho farmakokinetiku.
Potřebná stabilizace antineoplastické kompozice pro účely zpracování do farmaceutického přípravku vychází ze stabilizace jednotlivých součástí. Tyto součásti musejí být pro zpracování na aplikační přípravek a jeho použití vyhodnoceny a shledány jako neimunogegenní. Jejich stabilizace pro zpracování a aplikaci je řešena s využitím excipientů a postupů, které na základě poznatků ze současné úrovně stavu techniky zajišťují zachování, resp. regeneraci sekundární a vyšších nadmolekulámích struktur dílčích aktivních komponent a tím i čtyřkompozice podle naší přihlášky jako celku (Lee, G.: Spray drying of proteins, in: Carpenter, J. Manning M. (Eds.), Rational Protein Formulation: Theory and Practice. Plenům Press, New York, 2002, 135-158). Jedná se přitom především o využití postupů ke zpracování roztoků či disperzí proteinů pomocí lyofilizace, sprej ové lyofilizace, superkritického sušení, případně kombinace dialýzy a sprejového sušení nebo kryogenních dispergačních metod. Přitom jsou tyto metody podle potřeby spojeny s využitím přídavku strukturálně stabilizujících látek, zejména sacharidů, např. sorbitolu, trehalózy, sacharózy (Maury, M. et al., Eur. J. Pharm. Biopharm., 59, 2005, 251-261), polymerů, např. polyethylenglykolů, polyvinylpyrrolidony, dextranů ( Platz, R. et al.: US Patent 6 019 168, 2000), lipidů, např. středněřetězcových triglyceridů (Hauss, D.J.,Adv. Drug Deliv. Rev.;59, 2007, 667-76; Tan, A., Rao, S., Prestidge, C. A.; Pharm. Res., 2013, 1-25), vybraných surfaktantů, např. dipalmitoylfosfatidylcholinu, polysorbátů, polyoxyethylenstearátů (Mansour, H.M., Damodaran, S., Zografi, G.: Mol. Pharm., 5, 2008, 681-695), kryoprotektiv, například glycerolu, ethylenglykolu, propyleneglykolu, dimethylsulfoxidu; hydroxyethyl-škrobu, polyvinylpyrolidonu (Meryman H.T.; Cryobiology 8,1971,173-183).
Směs polyethylenglykolů (PEGs) potřebné čistoty například stabilizuje příslušné účinné látky fyzikálně-chemicky a je současně vhodná ke zpracování účinných látek do aplikačních soustav jak pro neinvazivní typy podání, tak i pro podání parenterální. Podobně byly popsány a jsou využitelné stabilizační efekty glycerolu a n-propanolu. Řešení antineoplastické směsi podle vynálezu v daném kontextu tedy využívá informací, které se v publikacích věnují čištění, regeneraci a stabilizaci nadmolekulámích struktur, a to pro všechny konkrétní dílčí součásti kompozice podle vynálezu (Pellegrini-Malpiedi, L, Picó, G. A, Nerli, B. B., Separ. Purif. Technol., 78, 2011, 91-96; Porfiri, M.C. et al.: Int. J. Biol. Macromol., 49, 2011, 7-13; Bassani, G.et al.; J. Chromatogr. B, 859, 2007, 222-228).
Způsoby podání a aplikační cesty
Je obecně známou a přijímanou skutečností, že perorální podání léčivých polypeptidických látek a proteinů do živého organismu lidského nebo zvířecího těla gastrointestinální cestou představuje zásadní problém, který dosud nebyl ani částečně vyřešen. Naráží totiž na podmínky, které jev žaludku nebo střevě takové léčivo zcela destruují nebo zamezí jejich vstřebávání v aktivní podobě. Z tohoto důvodu se pro podání biologik či terapeutických proteinů, ke kterým kompozice podle vynálezu patří, používá dnes zcela dominantně parenterální aplikace.
Složení kompozice a její dávkování je možné v detailech upravovat podle zvolené aplikační cesty a návazně i podle použitého vehikula pro konkrétní aktivní látku, a dávkování v klinických podmínkách určovat a optimalizovat podle aktuálního stavu nádorového onemocnění, podle reakce tumoru, resp. podle reakce organismu na podanou dávku. Antineoplastická kompozice podle vynálezu v zásadě umožňuje ambulantní přístup k léčbě. Navíc, zejména v případě využití neinvazivních aplikačních cest, poskytuje možnost autoaplikace pacientem a použití tomu odpovídajících typů přípravků, například pro sublingvální nebo rektální podání. Pro podání kompozice podle vynálezu obě tyto cesty považujeme výhodné, stejně jako cestu inhalační, přes stěnu plicních alveolů. Samozřejmým předpokladem je dobrá snášenlivost přípravku pacientem a
-11 CZ 307195 B6 nepřítomnost známek alergizace, resp. jiné nežádoucí imunologické či jiné biologické reakce pacienta.
Je samozřejmé, že pro podání antineoplastické kompozice podle vynálezu je možné využít parenterálního podání, se všemi výhodnými alternativami, které rozvoj technologií v této oblasti již přinesl. Lze například využít suchých injekcí včetně lyofilizováných, tedy směsi práškových substancí účinných látek a pomocných látek upravujících pH, osmolaritu, smáčivost, rozpustnost, antioxidační ochranu, v případě lyofilizovaných produktů také excipienty typu kryoprotektiv (glycerol, dimethylsulfoxid), lyoprotektiv a látek strukturálních. Tyto přípravky se v čas potřeby dispergují ve vhodném kapalném vehikulu a podávají injekční jehlou.
Rovněž lze využít injekční přípravky s prodlouženým nebo jinak modifikovaným uvolňováním účinných látek, které po podání, tam kde je to vhodné, například při intraperitoneální aplikaci, uvolňují součásti kompozice pozvolna a po delší dobu. K depotnímu podání se využívají další excipienty, z nichž jsou vhodné jak pomalu degradovatelné lipidy, tak biodegradabilní polymemí soustavy založené na ověřených polymerech či oligomerech kyseliny glykolové, mléčné, a jejich kopolymerech (Chaubal, M.V. et al.: Excipient selection and criteria for injectable dosage forms. In: Kathdare, A., Chaubal, M.V.: Excipient Development for Pharmaceutical, Biotechnology and Drug Delivery Systems. InformaHealthcare, New York, London 2006, 271-290; Gokam, Y.R. et al, Excipient for protein drug. 291-331. In: Kathdare A., Chaubal M.V.: Excipient Development for Pharmaceutical, Biotechnology, and Drug Delivery Systems. InformaHealthcare, New York, London 2006, 291-331.
Aplikační cesta alveolámím epitelem, který je nej prostupnější a pokud jde o velikost využitelné plochy alvelolů zdaleka nerozsáhlejším mukózním povrchem, by měla z tohoto pohledu být nejvhodnější. Inhalované nízkomolekulámí léčivo může objevit v systémové cirkulaci řádově v sekundách, což se velmi přibližuje intravenóznímu podání. Tento rys inhalační aplikace ovšem není pro kompozici podle vynálezu podstatný. Doba nástupu účinku v sekundách nebo minutách není vdaném případě důležitá a pro makromolekulami substance ani dosažitelná. Druhým avšak významnějším faktorem v této souvislosti je skutečnost, že již byl uspokojivě vyřešen průchod vdechovaných částic komplikovaným stromem rozvětvujících se bronchů a bronchiolů až k alvelolámímu povrchu. Novější poznatky ukazují, že na rozdíl od bronchodilatačních a antiastmatických léčiv je optimální velikost tuhých částic pro systémové podání suchých práškových léčiv typu proteinů poněkud nižší optimální velikost částic na úrovni 2 až 4 mikrometrů (Patton, J.S., Byron, P.R., Nat. Rev. Drug Discovery 6, 2007, 67-74). Tohoto požadavku lze již dnes technologicky dosáhnout. Problematika se tak přenáší do technické oblasti částicového inženýrství a technického řešení inhalátorů. Biofarmaceuticky zůstává k řešení zpětný, fyziologicky jinak žádoucí pohyb částic z alveolů zpět (Scheuch, G. et al., J. Aerosol Med. Pulm. Drug Deliv., 23(S2), 2010,39-5; Forbes, B. et al., Adv. Drug Deliv. Rev., 63, 2011, 69-87). Ten je zřejmě, kromě komerčních důvodů, jednou z příčin do nedávné doby nedostatečně reprodukovatelného inhalačního podání insulinu, které bylo nověji technologicky zvládnuto právě inovací inhalátoru, a vzápětí také beznosičové úpravy insulinu (Balduci, A.G. et al., Eur. J. Pharm. Sci., 2013, http://dx.doi.Org/l0.1016/j.eips.2013.08.009, on line 18.9.2013).
Kompozice podle vynálezu splňuje požadavky na zpracovatelnost do podoby prášků k inhalaci, a to jak bez dalších excipientů, tak za použití vhodného tuhého nosiče (např. trehalóza, laktóza, mannitol), tak substance typu polyethylenglykolů o nižší nebo střední molekulové hmotnosti (např. makrogol 300, resp. makrogol 1500) a jejich směsí. Stejně účinná může být také inhalace vodné disperze kompozice podle vynálezu připravené v čase potřeby a aplikované za použití nebulizérů (např. elektrického nebo ultrazvukového aj.) z ex tempore připravených vodných disperzí s obsahem právě výše uvedených excipientů, ale také dextranů a vhodných tenzidů (například polysorbátů). Kompozice podle vynálezu je rovněž vhodná pro zpracování do lipidických mikročástic, u kterých se mohou projevit jak jejich stabilizační a manipulační výhody, především však výhodné vlastnosti jako aplikačních soustav pro inhalační podání
-12CZ 307195 B6 proteinů (Chow, A.H.L. et al., Pharm. Res. 24, 2007, 411-437; Mehnert, W., Máder, K.: Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 2012, 83-101).
Protože pro využití inhalačního (transalveolámího) podání kompozice podle vynálezu existují z hlediska možných technologií pro produkci fyzikálně i stabilitně vhodných částic k inhalaci různé prakticky využitelné metody, uvádíme jednu z nich, adaptovanou podle odborné literatury (Byrappa, K., Ohara, S. Adschiri, T., Adv. Drug Deliv. Rev., 60, 2008, 299-327), v Příkladu 12 provedení kryogenního postupu tvorby částic protinádorové kompozice pro inhalaci.
Analogické konstatování platí i pro formulačně-technologickou stránku jednotlivých dílčích způsobů parenterálního podání. Z nich jsme v přihlášce dokumentovaných experimentech konkrétně využívali injekční podání subkutánní. Ostatní dílčí způsoby parenterálního podání kompozice podle této přihlášky vynálezu, například intraperitoneální, intrathekální, jsou dalšími z možných a do úvahy připadajících variant (Huynh, G. H., Deen, D. F., Szoka, F. C, J. Control. Rek, 110, 2006, 236-259). Technologicko-formulačně jsou dobře zvládnutelné, rozhodující pro jejich využití však budou konkrétní imunologické vlastnosti všech použitých substancí, tedy imunologická čistota součástí kompozice podle vynálezu včetně všech excipientů a samozřejmě také příslušná biologická odezva.
Důvody pro výše zdůrazňované neinvazivní způsoby podání kompozice podle vynálezu vycházejí mimo jiné z toho, že jak sublingvální, tak i rektální sliznice představují značně permeabilní a přitom dobře dostupné biologické bariéry, přes které procházejí i výšemolekulámí léčiva. Rychlostí nástupu účinku léčiva jsou pro zamýšlené protinádorové působení zcela vyhovující. Navíc je významné a dostatečně známé, že látky při těchto způsobech podání nepodléhají po své absorpci rychlému first-pass efektu v samotné absorpční biologické membráně (na rozdíl například od stěny střeva).
Za konkrétní inovativní poznatek v tomto kontextu považujeme skutečnost, že jsme nalezli takovou kombinaci antineoplastické kompozice a aplikačního vehikula, která při rektální aplikaci v in vivo pokusech na nu/nu/ myších vykázala v protinádorovém působení vůči vybrané nádorové linii, konkrétně linii A 549 malobuněčného nádoru plic, signifikantně lepší výsledky než podání stejných dávek stejné kompozice prostřednictvím subkutánní injekce. Transport látek k nádorově postiženému místu je po subkutánním podání zřejmě komplikován více.
Relativně pokročilé je námi navrhované řešení v současné době spojeno se sublingvální aplikační cestou, která v principu umožňuje přibližně stejně rychlý (spíše poněkud rychlejší) nástup účinku léčiva jako injekční podání subkutánní. Její zásadní výhodou je to, že pro látky s velkou molekulou (například 50 000) zajišťuje jejich pozvolnější a dlouhodobější předání do systémové cirkulace. Lze tedy vlastně hovořit o sublingvální infuzi. Oproti parenterálním typům podání, včetně subkutánního, má také sublingvální podání navíc jednu zásadní přednost. Tou je skutečnost, že se látky po vstřebání přes sublingvální sliznici nedostávají žilním řečištěm přímo do jater, kde jsou z větší části metabolizovány a inaktivovány, ale jatemímu first-pass efektu vyhýbají. Dráha a doba jejich pohybu v organismu jsou tedy mnohem větší a umožňují nemetabolizováným substancím dosáhnout i do vzdálenějších částí těla. Proto sublingvální aplikační cestu době považujeme za velmi výhodnou i pro podání antineopastické kompozice podle vynálezu.
K sublingválnímu podání lze obecně využít rychle se dezintegrující a rozpustné lisované sublingvální tablety nebo rychle rozpustné lyofilizované tablety, jejichž technologie je v současnosti dobře popsána a v praxi zavedena. Rozsáhlý rozbor dané problematiky, včetně dalších aplikačních forem, jakými jsou spreje, gely, pasty, náplasti, filmy a stripy, podává novější přehled V. Heamdenové (Heamden V. et al., Adv. Drug Deliv. Rev., 64, 2012, 16-28). V případě biologik je hlavní problém pro využití této cesty polykací reflex a inhibice léčiva obsahem slin.
- 13CZ 307195 B6
Zcela nový typ přípravku, složením a vlastnostmi pro biologika vhodného sublingválního přípravku (nové lékové formy), vychází z využití nanovlákenných membrán (Stránská, D. et al.: Pat CZ 303 244; 2012). Svým designem a využitím vhodných farmaceuticky akceptovaných polymerů umožňují zamezit obvyklému problému jiných sublingválních přípravků, konkrétně jejich interakci se slinami nebo spolknutí většiny léčiva do žaludku. Tyto nanovlákenné membrány mají vynikající mechanické vlastnosti, obvykle umožňují přímo do vláken inkorporovat až 50 procent účinných látek, a to včetně biologik. Impregnačně lze také zakotvit ještě vyšší hmotnostní podíl aktivních látek. Velkovýrobně jsou výhodně produkovány např. elektrospinningem. Obvykle využívají nosné a strukturální polymery ze skupiny polyvinylalkoholů, polylaktidů, polykaprolaktonů, polyvinylpyrrolidonů, jejich kopolymerů, kopolymer polyethylenglykol/polyvinylkaprolaktam/polyvinylacetát, deriváty celulózy jako například hydroxypropylcelulózu, hydroxypropylmethycelulózu, dextrany různých molekulových hmotností samotné i ve směsích, a dále rovněž mnohé polymerizovatelné monomery nebo směsi alespoň dvou z nich. Pro kompozici podle vynálezu je nej významnější varianta, kdy jsou účinné látky zakomponovány přímo v materiálu nanovláken aktivní vrstvy přípravku určené pro kontakt se sliznicí, která je překryta další nanovlákennou vrstvou, například polyurethanovou (viz Příklad 12), chránící aktivní látky proti kontaktu se slinami.
Navíc, což může být zásadní, je depozice biologik do nanovláken dnes zřejmě nejslibnějším způsobem stabilizace biologik. Ve srovnání s náročností kryogenních technik a sprej ových technologií jde o metodu šetrnou jak z hlediska minimálního teplotního a tlakového zatížení aktivní látky, tak z hlediska uložení její struktury ve vlákenném nosiči. (Klein, S. et al., Biomacromolecules 10, 2009, 1751-1756). Využitím velkoprodukčních technologií elektrostatického zvlákňování lze prakticky bez ztráty biologické aktivity účinných látek (například typu proteinů, polypeptidů, virů i bakterií) zpracovat antineoplastickou kompozici podle vynálezu nejen do nanomembrán pro přímou aplikaci účinných látek, ale také za účelem tvorby stabilizovaných zásobních meziproduktů a produktů typu biologik.
Stejné přednosti, pokud jde o obejití first-pass efektu a současné zajištění delšího transportního dosahu pro nemetabolizované molekuly léčiva poskytuje rovněž rektální aplikační cesta. Kromě drobných nesnází, které jsou vzhledem ke smyslu a významu rektálního podání antineoplastické kombinace podle vynálezu zcela podružné, lze tuto aplikaci považovat za jednoznačně výhodnou, jak jsme pro kompozici podle vynálezu opakovaně prokázali v již zmiňovaných in vivo experimentech.
Rektální systémové podání léčiv je tradičně využíváno, dobře prozkoumáno, zajištěno relativně širokým výběrem excipientů i vhodnými výrobními technologiemi. Může využít obvyklých lékopisných excipientů, tedy neiontových substancí ze skupiny zahrnující neutrální lipidy, například tri-, di- případně monoestery vyšších mastných kyselin a polyolů, například glycerolu, polyoxyethylenované glyceridy, například glyceryl-kokoát polyoxyethylenglykolu, polyoxyethylenglykoly, ethery polyethylenglykolu a vyšších mastných alkoholů, například laurylalkoholu, polyoxyethylenované polární oleje, například ricinový, sacharoglyceridy olejů, kopolymery polyethylenoxidu a propylenoxidu, a jejich směsi, podle potřeby s obsahem vybraných antioxidantů (např. tokoferoly, kyselina askorbová, jejich deriváty jako tokoferylaskorbát) a dalších pomocných látek.
K dosažení účinných hladin antineoplastické kompozice v organismu lze využít principu coadministration podání. Tím se rozumí podání všech součástí kompozice v takovém množství, které s ohledem na cestu podání zajistí efekt najednou ve stejném čase, nebo v různých časech, pomocí jednoho aplikačního přípravku nebo většího počtu aplikačních přípravků. Může se jednat o jednotlivé co-administration podání nebo násobné podání v určitých časových intervalech. Vzhledem k možnosti využití různých aplikačních cest lze v daném kontextu podat část kompozice jednou z možných cest (například rektálně) a druhou část potřebnou k dosažení účinných hladin kompozice v organismu podat jinou cestou, například sublingválně, nebo parenterálně.
- 14CZ 307195 B6
Inovativnost
Zásadní inovativnost řešení podle vynálezu spočívá v dosud nepopsaném začlenění enzymu lipázy do antineoplastické kompozice a její prokázaná širokospektrální účinnost. Nově navržené složení kompozice vykazuje v pokusech in vivo souhrn aktivit, které přinášejí komplexní, překvapivě silné buněčné protinádorové a antimetastázové účinky. Toto zjištění je opřeno o výsledky získané v pokusech in vivo u nu/nu myší se subkutánně implantovanými buňkami standardizovaných linií lidského nádoru prsu, kolorektálního nádoru, nádoru pankreatu a malobuněčného nádoru plic.
Další inovativnost řešení podle vynálezu spočívá ve složení definovaném na základě jednotek enzymatické aktivity, nikoli pouze podílů hmotností jednotlivých účinných látek, jak tomu dosud je u dřívějších, vzdáleněji podobných patentů (Trnka et al, 1996, 1998, viz výše). Tímto přístupem k definování účinnosti je zajištěna technická realizovatelnost vynálezu a reprodukovatelnost složení účinných látek, návazně také příslušných soustav určených k jejich podání do organismu. Současné lékopisy obsahují požadavek používání aktivitních charakteristik pro enzymy.
Další inovativnost řešení podle vynálezu spočívá vtom, že pro podání kompozice proenzymů a enzymů jsme prokázali a na základě získaných výsledků využili výhodné neinvazivní aplikační cesty a příslušné aplikační soustavy. Na rozdíl od všech dosavadních patentů pro podání biologik jsme v široké škále indikací protinádorové kompozice podle vynálezu navrhli přípravky pro neinvazivní transmukosální podání. Překvapivě pozitivní terapeutické výsledky rektální aplikace následně ukázaly cestu k podání sublingválnímu. To přináší perspektivu zvýšené compliance pro pacienta i snadnou možnost autoaplikace antineoplastického přípravku.
Inovativnost řešení spočívá dále v tom, že pro podání kompozice definujeme výhodná vehikula, v přímé návaznosti na zvolenou aplikační cestu a také konkrétní terapeutické, diagnostické či profylaktické požadavky. Pro jednotlivé účinné látky samostatně i pro jejich kompozice je výhodným excipientem zejména polyethylenglykol vhodné molekulové hmotnosti nebo směs vybraných polyethylenglykolů (například makrogolu 300 a makrogolu 1500 v poměru 45:55 dílů hmotnostních), případně glycerol, n-propanol, nebo trehalóza a další sacharidy (sacharóza, mannitol) jako strukturálních stabilizátorů pro proteiny. Řešení podle vynálezu také počítá s uplatněním polyethoxylovaných lipidických látek (například stearoyl polyoxyl-6-glycerid), neutrálních lipidů (například glyceryl-palmitostearátu), esterů jednovazných alkoholů s vyšší mastnou kyselinou (například isopropyl-myristátu, isopropyl-palmitátu) při zpracování bezvodé práškové protinádorové kompozice, stejně jako permeačních enhancerů, například, glycerolu, cyklopentandekanolidu, polykarbofilcysteinu.
Inovativnost řešení spočívá také v přípravě a využití výše již zmíněných strukturálních a stabilizujících excipientů, jakož i technologie elektrostatického zvlákňování pro zpracování jednotlivých součástí do společné, stabilizované kompozice proenzymů a enzymů jako formulačního meziproduktu (viz Příklad 11, Příklad 12).
Objasnění výkresů
Na obr. 1 je prezentována část fotodokumentace vizuálního porovnání léčené a neléčené myši s podkožně transplantovanou linií MDA-MB-231 karcinomu prsu v 36 denním in vivo pokusu při každodenní rektální aplikaci antineoplastické kompozice.
Na obr. 2 je grafické znázornění průměrných hodnot objemů tumoru (včetně SD) v 36 denním in vivo pokusu u nu/nu myší s podkožně transplantovanou linií MDA-MB-231 karcinomu prsu při každodenním subkutánním a rektálním podávání antineoplastické kompozice podle této přihlášky
-15CZ 307195 B6 (kompozice Kl, resp. K2 dle, tabulky 1); samice nu/nu myši; cca 28 g; 8 myší v každé skupině; lipofilní čípkové vehikulum; dávka 2 reprezentuje dvojnásobné množství kompozice K2.
Na obr. 3 je prezentována část fotodokumentace vizuálního porovnání léčené a neléčené myši s podkožně transplantovanou linií Η 116 kolorektálního karcinomu v 75denním in vivo pokusu při každodenní rektální a subkutánní aplikaci antineoplastické kompozice.
Na obr. 4 je grafické znázornění průměrných hodnot objemů tumoru (včetně SD) v75denním v in vivo pokusu u nu/nu myší s podkožně transplantovanou linií Η 116 kolorektálního karcinomu při každodenním subkutánním a rektálním podávání antineoplastické kompozice podle této přihlášky; samice nu/nu myši; cca 28 g; 8 myší v každé skupině; lipofilní čípkové vehikulum.
Na obr. 5 je prezentována část fotodokumentace vizuálního porovnání léčené a neléčené myši s podkožně transplantovanou linií CAPAN 2 karcinomu pankreatu v 75denním in vivo pokusu při každodenním subkutánním a rektálním podávání antineoplastické kompozice.
Na obr. 6 je grafické znázornění průměrných hodnot objemů tumoru (včetně SD) v 85 denním in vivo pokusu u nu/nu myší s podkožně transplantovanou linií CAPÁN 2 karcinomu pankreatu při každodenním subkutánním a rektálním podávání antineoplastické kompozice podle této přihlášky; samice nu/nu myši: cca 28 g; 8 myší v každé skupině; lipofilní čípkové vehikulum.
Na obr. 7 je prezentována část fotodokumentace vizuálního srovnání léčené a neléčené myši s podkožně transplantovanou linií A 549 malobuněčného karcinomu plic 40. a 85. den in vivo pokusu při každodenním podávání antineoplastické kompozice.
Na obr. 8 je grafické znázornění průměrných hodnot objemů tumoru (včetně SD) v in vivo pokusu s podkožně transplantovanou linií A 549 malobuněčného karcinomu plic při každodenním rektálním podání antineoplastické kompozice (K2 podle tabulky 1) samice nu/nu myši: cca 28 g; 8 myší v každé skupině; hydrofílní čípkové vehikulum.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1: Kvalitativní složení antineoplastické kompozice podle přihlášky vynálezu
1. Amyláza: Alfa-amyláza z Bacillus sp. Typ II-A, lyofilizovaný prášek; Izolováno z Bacillus amyloliquefaciens. Sigma-Aldrich. Praha. Produktové číslo: A 6380; EC číslo (Sigma): 232560-9; EC číslo: 3.2.1.1; CAS číslo: 9000-90-2
Molekulová hmotnost: 58 403
Enzymatická aktivita: 1333 m.j./mg tuhé látky; 3100 m.j./mg proteinu, přičemž aktivitou na úrovni jedné jednotky se uvolní 1,0 mg maltosy (MAL) ze škrobu za 3 minuty při pH 6,9 a 20 °C. httpL/www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/aóSSO/lang^en&region-CZ
2. Lipáza: Lipase from wheat germ, Type I; lyofilizovaný prášek. Izolováno z Triticium aestivum. Sigma-Aldrich. Praha. Produktové číslo: L 6380, EC číslo (Sigma): 232-619-9 EC 3.1.1.3;
CAS číslo: 9001-62-1; Molekulová hmotnost: 143 000
Aktivita: 5-15 m.j./mg proteinu, přičemž aktivitou na úrovni jedné jednotky se hydrolyzuje 1,0 mikroekvivalent mastné kyseliny (FA) z triglyceridu za jednu hodinu při pH 7,4 a 37 °C. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/13001 ?lang=en&region=CZ
3. Chymotrypsinogen: α-Chymotrypsinogen A z hovězího pankreatu. Lyofilizovaný prášek, bez obsahu solí. Applichem. Produktové číslo: A3975
CAS číslo: 9035—75—0 ;Molekulová hmotnost: asi 25 000
- 16CZ 307195 B6
Aktivita: min. 1200 m.j./mg, přičemž aktivitou na úrovni jedné jednotky ATTE snižuje aktivovaný zymogen absorbanci acetyl-L-tyrosin-ethylesteru o 0,0075 při 237 nm při 25°C jako výsledku hydrolýzy.
https://www.applichem.com/en/shop/product-detail/as/chvmotrypsinogen-a/
4. Trypsinogen: Trypsinogen z hovězího pankreatu. Dialyzovaný a lyofilizovaný prášek, bez obsahu solí. Sigma-Aldrich. Praha. Produktové číslo TI 143; EC číslo (Sigma): 232-651-3;
CAS číslo: 9002-08-8; Molekulová hmotnost: 23 700
Aktivita: 10 900 m.j./mg proteinu, přičemž aktivita na úrovni jedné jednotky BAEE po aktivaci na trypsin se rovná změně 0,001 za minutu absorbance při 253 nm benzoyl L-arginin-ethylesteru (BAEE) při pH 7,6 a 25 °C, objemu 3,2 ml a 1 cm tloušťce vrstvy.
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/tl 143?lang=en&region=CZ
Tabulka 1: Příklady poměrného hmotnostního složení součástí antineoplastické kompozice k formulaci přípravků pro různé typy podání. Kvalitativní složení konkrétních součástí je uvedeno v příkladu 1.
Označení Kompozice 1 Kompozice 2 Kompozice 3 Kompozice 4 Kompozice 5
Způsob aplikace Subkutánní Rektální Sublingvální Inhalační Intraperitoneální
Množství mg mg mg mg mg
Amyláza 2,07 4,07 5,6 1,95 9,6
Lipáza 2,89 9,89 12,8 9,89 12,2
Chymotrypsinogen 10,24 14,24 14,24 28,5 14,2
Trypsinogen 29,58 22,32 29,58 14,24 35,0
Jednotlivé součásti kompozice lze zpracovat podle obvyklých pravidel jako směsný prášek a dále s ním pracovat jako s meziproduktem směrem k uvažované aplikační formě. Rovněž lze jednotlivé, jemně rozdrobené součásti postupně vpravit do předem připraveného vehikula nebo jeho části za účelem prvotního zpracování s vhodným nosičem (například trehalózou pro inhalační podání, viz příklad 12, stabilizujícím excipientem (například n-propanolem, polyethylenglykolem 300) nebo kompletním vehikulem (ztužený tuk s přídavkem isopropylmyristátu jako čípkovým základem) podle uvažované konkrétní aplikace, (viz příklad 8 a příklad 9)
Při zpracování a při případném uchovávání kompozic do zásoby je nutné respektovat podmínky výrobců jednotlivých součástí (například teplota, vlhkost, ochranná atmosféra, čistota prostředí).
Konkrétní množství konkrétní terapeutické kompozice určené k podání jedné dávky člověku je podřízeno charakteristikám dotyčného jedince (hmotnost, věk, parametry zdravotního stavu vč. individuální reaktivity na podanou kompozici), charakteristikám nádorového onemocnění (například typ, lokalizace, stádium), aplikační cestě (například systémová sublingvální, parenterální infuzní, systémová rektální), způsobu podání (například monoterapeutická, sekvenční, stupňovaná) a fyzikálním charakteru přípravku (například koloidní roztok, dělená prášková směs).
Příklady 2.1, 3.1, 4.1, a 5.1 prezentují sekvence aminokyselin enzymatických a proenzymatických substancí pro antineoplastické kompozice podle příkladu 1. a tabulky 1.
- 17CZ 307195 B6
Navazující Referenční příklady 2.2, 2.3, 3.2 až 3.4, 4.2, a 5.2 prezentují sekvence aminokyselin představitelů biologicky podobných substancí, které mohou být použity k náhradě substancí podle tabulky 1 jako tzv. biosimilars, a to jednotlivě nebo i v kompletní sestavě. Při zachování kvality účinku jsou pro takto připravené biologicky podobné kompozice vždy důležité jednotlivé enzymatické aktivity součástí vztažené na jednotku hmotnosti proteinu. Tento údaj spolurozhoduje o použitelnosti alternativní kompozice, biosimilars, pro danou, resp. uvažovanou aplikaci.
Příklady v zásadě ilustrují možnost náhrady dílčích substancí, a to jak biologicky podobnými izolovanými přírodními látkami, tak biotechnologicky získanými substancemi.
Příklad 2.1: Sekvence aminokyselin alfa-amylázy, Bacillus species, Amyloliquefaciens http://www.brenda-enzymes.org/index.php4?page=sequences/seq.php4?ID=7605 (on line 18. 9. 2013) (další viz tabulka 1)
MIQKRKRTVS FRLVLMCTLL FVSLPITKTS AVNGTLMQYF EWYTPNDGQH WKRLQNDAEH 61 LSDIGITAVW IPPAYKGLSQ SDNGYGPYDL YDLGEFQQKG TVRTKYGTKS ELQDAIGSLH 121 SRNVQVYGDV VLNHKAGADA TEDVTAVEVN PANRNQETSE EYQIKAWTDF RFPGRGNTYS 181 DFKWHWYHFD GADWDESRKI SRIFKFRGEG KAWDWEVSSE NGNYDYLMYA DVDYDHPDW 241 AETKKWGIWY ANELSLDGFR IDAAKHIKFS FLRDWVQAVR QATGKEMFTV AEYWQNNAGK 301 LENYLNKTSF NQSVFDVPLH FNLQAASSQG GGYDMRRLLD GTWSRHPEK AVTFVENHDT 361 QPGQSLESTV QTWFKPLAYA FILTRESGYP QVFYGDMYGT KGTSPKEIPS LKDNIEPILK 421 ARKEYAYGPQ HDYIDHPDVI GWTREGDSSA AKSGLAALIT DGPGGSKRMY AGLKNAGETW 481 YDITGNRSDT VKIGSDGWGE FHVNDGSVSI YVQ
Referenční příklad 2.2: Sekvence aminokyselin biologicky podobné (90 %) α-amylázy, Triticum urartu (Red wild einkorn), (Crithodium urartu) http://www.uniprot.org/uniprot/M8AC56 (on line 18. 9. 2013)
MERRGLLKAA LLASCLLWC SGRVPTVIQQ PSTTIYNSTL AKTLVEYAAA IYTADLTQLF
TWTCDRCGDL IEGFEMMDII VDVESCLEAY VGFASDINAV VWFRGTQEN SIQNWIEDLL
101 WKQLDLDYPG MPEAMVHRGF YSAYHNTTIR DGIVSGIQKT QKLHGDVPIM VTGHSMGAAM
151 ASFCALDLW NYGLDDVKLM TFGQPRVGNA AFASYLKRYL PHAIRVTNAND IVPHLPPYF
201 SFFPQKTYHH FPREVWVHDV GLGSLVYTVE QICDDSGEDP ACSRSVSGNS IQDHITYLGV
301 SMHAEAWSSC RIVMDYAELR YKMDLHGNW LSKQQQQSGL SNERRRHSAQ
Referenční příklad 2.3: Sekvence aminokyselin biologicky podobné (90 %) α-amylázy, Bacillus lichenformis http://www.uniprot.org/uniprot/P06278 (on line 18. 9. 2013)
- 18CZ 307195 B6
MKQQKRLYAR LLTLLFALIF LLPHSAAAAA NLNGTLMQYF EWYMPNDGQH WKRLQNDSAY 61 LAEHGITAVW IPPAYKGTSQ ADVGYGAYDL YDLGEFHQKG TVRTKYGTKG ELQSAIKSLH 121 SRDINVYGDV VINHKGGADA TEDVTAVEVD PADRNRVISG EHRIKAWTHF HFPGRGSTYS 181 DFKWHWYHFD GTDWDESRKL NRIYKFQGKA WDWEVSNENG NYDYLMYADI DYDHPDVAAE 241 IKRWGTWYAN ELQLDGFRLD AVKHIKFSFL RDWVNHVREK TGKEMFTVAE YWQNDLGALE 301 NYLNKTNFNH SVFDVPLHYQ FHAASTQGGG YDMRKLLNST WSKHPLKAV TFVDNHDTQP 361 GQSLESTVQT WFKPLAYAFI LTRESGYPQV FYGDMYGTKG DSQREIPALK HKIEPILKAR 421 KQYAYGAQHD YFDHHDIVGW TREGDSSVAN SGLAALITDG PGGAKRMYVG RQNAGETWHD 480 ITGNRSEPW INSEGWGEFH VNGGSVSIYV QR
Příklad 3.1: Sekvence aminokyselin lipázy, Tritici aestivum (další viz tabulka 1) http://www.uniprot.org/uniprot/Q8L5T0 (on line 18. 9. 2013)
MERRGLLKTA LLACLLWCS GRVPMVIQQP STTIYNSTLA KTLVEYAAAI YTADLTQLFT
WTCDRCGDLI EGFEMMDIIV DVENCLEAYV GFASDINAVI WFRGTQENS IQNWIEDLLW
121 KQLDLDYPGM PEAMVHRGFY SAYHNTTIRD GIVSGIQKTR KLHGDVPIMV TGHSMGAAMA
181 SFCALDLWN YGLDDVKLMT FGQPRVGNAA FASYFKRYLP HAIRVTNAND IVPHLPPYFS
241 FFPQKAYHHF PREVWVHDVG LGSLVYTVEQ ICDDSGEDPA CSRSVSGNSI QDHITYLGVS
301 MHAEAWSSCR IVMDYAELRY KMDLHGNWL SKQQQQQPGL SDQRRRHSAQ
Referenční příklad 3.2: Sekvence aminokyselin biologicky podobné lipázy, Sus Scrofa ío http://www.uniprot.org/uniprot/P00591 (on line 18. 9. 2013)
SEVCFPRLGC FSDDAPWAGI VQRPLKILPW SPKDVDTRFL LYTNQNQNNY QELVADPSTI
TNSNFRMDRK TRFIIHGFID KGEEDWLSNI CKNLFKVESV NCICVDWKGG SRTGYTQASQ
121 NIRIVGAEVA YFVEVLKSSL GYSPSNVHVI GHSLGSHAAG EAGRRTNGTI ERITGLDPAE
181 PCFQGTPELV RLDPSDAKFV DVIHTDAAPI IPNLGFGMSQ TVGHLDFFPN GGKQMPGCQK
241 NILSQIVDID GIWEGTRDFV ACNHLRSYKY YADSILNPDG FAGFPCDSYN VFTANKCFPC
301 PSEGCPQMGH YADRFPGKTN GVSQVFYLNT GDASNFARWR YKVSVTLSGK KVTGHILVSL
361 FGNEGNSRQY EIYKGTLQPD NTHSDEFDSD VEVGDLQKVK FIWYNNNVIN PTLPRVGASK
421 ITVERNDGKV YDFCSQETVR EEVLLTLNPC
Referenční příklad 3.3: Sekvence aminokyselin biologicky podobné lipázy (50 %), Oryza sativa 15 Japonica Group http://www.uniprot.org/uniprot/Q6F357 (on line 18. 9. 2013)
MSSSPMLGGI ADRWRELHGQ DSWNGLLDPL DLDLRSSILS YGELVQATYD SFNRERRSPH
AGACVYGHGD LLAAAGASAA GSYAVTKFVY ATSGLPVPEA FLLLPLPSLL· PPAWSRESNW
121 MGYVAVATDE GVAALGRRDI WAWRGTVES LEWVNDFDFT PVPAAPVLGA AAAANPRAIV
181 HRGFLSVYTS SNKDSKYNKA SARDQVLEEV RRLMELYKDE VTSITWGHS LGASLATLNA
241 VDIVANGANC PPASSSSSQP PCPVTAIVFA SPRVGDGFFK AAFASFPDLR ALHVKNAGDV
301 VPMYPPLGYV DVAVKLRIST SRSPYLRSPG TIETLHNLEC YLHGVAGEQG SAGGFKLEVD
361 RDVALANKGV DALKDKYPVP PRWWVSKNRC MVKDADGHWA LHDFEQI
- 19CZ 307195 B6
Referenční příklad 3.4: Sekvence aminokyselin biologicky podobné lipázy, Bifidobacterium animalis subsp. lactis DSM10140 http://www.uniprot.org/uniprot/C6A8G0 (on line 18. 9. 2013)
MELYRNNEIP PIEYTPGTSE FRDAVIGLAR YWTAIAEDLH ADEPGVQERT AAACLRFRKE
CAMFDYARAL QWHDPQGVYV HTDIPYLPDG GYRDGEVRGH LLDVYIPRDA IVRGGNTLPV 121 YIDIHGGGFT YGYKELNRNF NTHLADLGFG VFSLNYRPAP QTDLVGQLHD IQAALCWIGE 181 HITQFPVSPD NIFITGDSAG ACLSLLTLLI EHNDDAAHAF GIERASGIHL RGASLISGVY 241 DITPSSPMRA RLAETVGNEF FAGLDDATVF LDPADWLTQG IGIPPLFLVT SSDDFVQSET 301 LALATSLARN GRDFELHDFK VPCTQTLGHV FPVGMTWLPE SERVLHGIRE FSYPLTR
Příklad 4.1: Sekvence aminokyselin trypsinogenu, Bos Taurus (další viz tabulka 1)
Řetězec A:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/lTGN_A (on line 18. 9. 2013)
VDDDDKIVGG YTCGANTVPY QVSLNSGYHF CGGSLINSQW WSAAHCYKS GIQVRLGEDN
INWEGNEQF ISASKSIVHP SYNSNTLNND IMLIKLKSAA SLNSRVASIS LPTSCASAGT
121 QCLISGWGNT KSSGTSYPDV LKCLKAPILS DSSCKSAYPG QITSNMFCAG YLEGGKDSCQ
181 GDSGGPWCS GKLQGIVSWG SGCAQKNKPG VYTKVCNYVS WIKQTIASN
Referenční příklad 4.2: Sekvence aminokyselin biologicky podobného trypsinogenu I Sekvence 2, Patent US 7 049 484, 2006
CGVPAIQPVL SGLSRIVNGE EAVPGSWPWQ VSLQDKTGFH FCGGSLINEN WWTAAHCGV 61 TTSDWVAGE FDQGSSSEKI QKLKIAKVFK NSKYNSLTIN NDITLLKLST AASFSQTVSA 121 VCLPSASDDF AAGTTCVTTG WGLTRYTNAN TPDRLQQASL PLLSNTNCKK YWGTKIKDAM 181 ICAGASGVSS CMGDSGGPLV CKKNGAWTLV GIVSWGSSTC STSTPGVYAR VTALVNWVQQ 241 TLAAN
Příklady 5.1: Sekvence aminokyselin chymotrypsinogenu A, Bos taurus (další viz tabulka 1) Řetězec A http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/2CGA_A (on line 18. 9. 2013)
CGVPAIQPVL SGLSRIVNGE EAVPGSWPWQ VSLQDKTGFH FCGGSLINEN WWTAAHCGV
TTSDWVAGE FDQGSSSEKI QKLKIAKVFK NSKYNSLTIN NDITLLKLST AASFSQTVSA
121 VCLPSASDDF AAGTTCVTTG WGLTRYTNAN TPDRLQQASL PLLSNTNCKK YWGTKIKDAM
181 ICAGASGVSS CMGDSGGPLV CKKNGAWTLV GIVSWGSSTC STSTPGVYAR VTALVNWVQQ
241 TLAAN
-20CZ 307195 B6
Řetězec B http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/2CGA_B (on line 18. 9. 2013)
CGVPAIQPVL SGLSRIVNGE EAVPGSWPWQ VSLQDKTGFH FCGGSLINEN WWTAAHCGV
TTSDVWAGE FDQGSSSEKI QKLKIAKVFK NSKYNSLTIN NDITLLKLST AASFSQTVSA
121 VCLPSASDDF AAGTTCVTTG WGLTRYTNAN TPDRLQQASL PLLSNTNCKK YWGTKIKDAM
181 ICAGASGVSS CMGDSGGPLV CKKNGAWTLV GIVSWGSSTC STSTPGVYAR VTALVNWVQQ
241 TLAAN
Referenční příklad 5.2: Sekvence aminokyselin biologicky podobného chymotrypsinogenu B (syntetický konstrukt, CDS klon)
MAFLWLLSCW ALLGTTFGCG VPAIHPVLSG LSRIVNGEDA VPGSWPWQVS LQDKTGFHFC
GGSLISEDWV VTAAHCGVRT SDVWAGEFD QGSDEENIQV LKIAKVFKNP KFSILTVNND
121 ITLLKLATPA RFSQTVSAVC LPSADDDFPA GTLCATTGWG KTKYNANKTP DKLQQAALPL
181 LSNAECKKSW GRRITDVMIC AGASGVSSCM GDSGGPLVCQ KDGAWTLVGI VSWGSDTCST
241 SSPGVYARVT KLIPWVQKIL AAN
Referenční příklad 5.3: Sekvence aminokyselin biologicky podobného chymotrypsinogenu B,
Gadus morhua http://www.brenda-enzymes.org/index.php4?page=sequences/seq.php4?ID=7605 (on line
18.9. 2013)
MGHEVDSVLP GLFRRTYGCG RPAISPVITG YSRIVNGEEA VPHSWSWQVS LQDQTGFHFC
GGSLINENWV VTAAHCNVKN YHRWLGEHD RSSNSEGVQV MTVGQVFKHP RYNGFTINND
121 ILLVKLATPA TLNMRVSPVC LAETDDVFEG GMKCVTSGWG LTRYNAADTP ALLQQAALPL
181 LTNEQCKKFW GNKISDLMIC AGAAGASSCM GDSGGPLVCQ KAGSWTLVGI VSWGSGTCTP
241 TMPGVYARVT ELRAWVDQTI AAN
Příklad 6: Přípravek s antineoplastickou kompozicí 1 pro injekční intravenózní podání k léčbě karcinomu prsu člověka.
Složení (g) na 100 dávek
Kompozice 1 2, 239
Trehalóza 25,00
Uvedená směs je zpracována jako směsný lyofílizovaný prášek s obsahem kompozice 1 podle tabulky 1 se strukturální a stabilizující trehalózou, následně asepticky rozplněný do 100 vialek.
Součástí balení přípravku je ampulka s vodným vehikulem o složení (mg/100 ml):
Hydrogenfosforečnanu sodný, dihydrát 167 mg
Dihydrogenfosforečnan draselný 20 mg
Chlorid draselný 20 mg
Chlorid sodný 800 mg
Polysorbát 80 10 mg
Polyethylenglykol 300 3,0 ml
Voda na injekci do 100,0 ml
-21 CZ 307195 B6
Vodné vehikulum je určeno pro ex tempore přípravu 3 mililitrů roztoku ze suchého lyofilizováného prášku. Příslušná dávka kompozice 1 ve vzniklém roztoku o objemu 3 mililitrů je dále aplikována prostřednictvím kapénkové infúze vhodného složení, například s dextranem 10 000.
Konkrétní terapeutické, diagnostické nebo profylaktické dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 7: Přípravek s antineoplastickou kompozicí pro injekční subkutánní podání k léčbě karcinomu prsu člověka.
Složení (g) na 100 dávek
Kompozice 1 2,580 (viz Tab. 1)
Polyethylenglykol 4000 5,160
Uvedená směs je zpracována jako směsný lyofilizovaný prášek s obsahem kompozici 1 podle tabulky 1 a stabilizujícího polyethylenglykolu 4000 a následně asepticky rozplněna do 100 vialek. Součástí balení je ampulka s roztokem 8 mg chloridu sodného v 1 ml vody na injekci.
Konkrétní terapeutické, diagnostické nebo profylaktické dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 8: Přípravek s antineoplastickou kompozicí k léčbě kolorektálního karcinomu člověka pro rektální podání lipofilním čípkem.
Složení (g) na 100 čípků
Kompozice 22,563
Izopropyl-palmitát nebo
Stearoyl-polyoxyl-6-glycerid1,9
Ztužený tuk180,0
Postup:
1. Ve vhodné nádobě za pomalého míchání se roztaví směs hydrogenováných glyceridů z kokosového oleje asi na 35 °C za vzniku homogenní disperzní fáze.
2. V jiné nádobě se k dobře zhomogenizované směsi kompozice 2 podle tabulky 1 postupně vmísí stejné hmotnostní množství vytemperovaného izopropylmyristátu nebo stearoyl polyoxyl-6-glyceridu za vzniku koncentrovaného premixu.
3. K zhomogenizovánému premixu se postupně, za pomalého míchání přidává roztavená vytemperovaná lipofilní disperzní fáze.
4. V míchání se při teplotě pod 35 °C pokračuje alespoň 15 minut a poté se za pomalého míchání ponechá vychladnout na teplotu 30 až 31 °C.
5. Čípkovina s antineoplastickou kompozicí se následně se vylévá do připravených čípkových forem, resp. formovacích obalů po cca 1,8 g.
6. V míchání čípkoviny se při vylévání do forem pokračuje tak, aby se zabránilo sedimentaci kompozice, ale nedošlo k provzdušňování taveniny.
Podle potřeby lze využít ochranné atmosféry.
Uvedená kompozice 2 je podávána jako hydrofobní čípek v jedné ranní dávce.
-22CZ 307195 B6
Konkrétní terapeutické, diagnostické nebo profylaktické dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 9: Přípravek s antineoplastickou kompozicí pro rektální podání hydrofilním čípkem k léčbě malobuněčného karcinomu plic člověka.
Složení (g) na 100 čípků:
Kompozice 22,563 n-propanol nebo glycerol1,9
Polyethylenglykol 30095,0
Polyethylenglykol 150085,0
1. Ve vhodné nádobě za pomalého míchání se roztaví směs polyethylenglykolu 300 a polyethylenglykolu 1500 na 40 °C za vzniku homogenní disperzní fáze.
2. K dobře zhomogenizované směsi kompozice 2 podle tabulky 1 se v jiné nádobě postupně vmísí stejné hmotnostní množství n-propanolu nebo glycerolu za vzniku koncentrované suspenze.
3. K zhomogenizovánému suspenzi se postupně, za pomalého míchání přidává roztavená vytemperovaná hydrofilní disperzní fáze.
4. V míchání se při teplotě pod 35 °C pokračuje alespoň 15 minut a poté se za pomalého míchání ponechá vychladnout na teplotu 30 až 31 °C.
5. Čípkovina s antineoplastickou kompozicí 2 se následně se vylévá do připravených čípkových forem, resp. formovacích obalů po cca 1,8 g.
6. V míchání čípkoviny se při vylévání do forem pokračuje tak, aby se zabránilo sedimentaci kompozice 2, ale nedošlo k provzdušňování taveniny.
Uvedená kompozice 2 podle tabulky 1 je podávána jako hydrofilní čípek v jedné ranní dávce, nebo v poloviční dávce ráno a v poloviční dávce v poledne.
Konkrétní terapeutické, diagnostické nebo profylaktické dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 10: Přípravek s antineoplastickou kompozicí 3 k sublingválnímu podání pro léčbu karcinomu pankreatu člověka.
Složení nanovlákenné membrány (g) pro 100 aplikací
Kompozice 33,11
Trehalóza10,0
Glycerol 85% pufrovaný na pH 7,43,5
Hydroxypropylmethylcelulóza2,2
Polyethylenglykol 4001,1
Voda redestilovanáq.s.
Postup:
1. Ve vhodné nádobě se připraví koncentrovaný roztěr kompozice 3 podle tabulky 1 s glycerolem pufrovaným na pH 7,4.
2. V jiné nádobě se připraví roztok trehalózy, polyethylenoxidu 400 a hydroxypropylmethylcelulózy ve vodném vehikulu.
3. Roztok trehalózy podle bodu 2 se postupně přidá k roztěru kompozice 3, dobře se rozmíchá a vloží do zásobníku výrobního zařízení NS WS 50 (Elmarco, Liberec, CZ)
4. Iontové složení obsahu zásobníku se optimalizuje pro proces elektrospinningu.
-23 CZ 307195 B6
5. Po kontrole vodivostních a procesních parametrů se připravený roztok zvlákňuje za teploty nepřekračující 45 °C za vzniku nanovlákenné membrány, která se kotví na pásu podložního materiálu.
6. V dalším pracovním cyklu se tato nanovlákenná membrána analogickým procesem převrství z roztoku hydroxymethylpropylcelulózy a polyethylenglykolu 400.
7. Kombinovaná dvojvrstevná nanomembrána se formátuje podle vyprodukované gramáže kompozice 3 v nanovlákenné membráně a podle požadované dávky, a to na stripy o ploše 10 cm2
8. Strip určený pro jednodávkovou aplikaci a adjustuje se do zásobní části vhodného dispenzačního obalu.
Nanovlákenný sublingvální přípravek se aplikuje ráno a večer po jídle jako adhesivní film na spodní stranu jazyka.
Konkrétní dávkování je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 11: Přípravek s antineoplastickou kompozicí 3 k sublingválnímu podání pro léčbu karcinomu pankreatu člověka.
Složení nanovlákenné membrány (g) pro 100 aplikací
Kompozice 33,11
Mannitol10,0 n-propanol pufrovaný na pH 7,43,5
Polyvinylalkohol2,2
Polyethylenoxid 4001,1
Polyurethan0,9
Voda redestilovanáq.s.
Postup: analogicky jako v příkladu 9. Převrstvení nanovlákenného rezervoáru Kompozice 3 se provádí elektrospinningem ve vodě nerozpustného polyurethanu. Vzniklý dvojvrstevný přípravek se aplikuje ochrannou polyuretanovou vrstvou směrem do dutiny ústní a hydroxypropylmetylcelulózovým rezervoárem kompozice 3 na sublingvální stranu.
Nanovlákenný sublingvální přípravek se aplikuje ráno a večer po jídle jako adhesivní film na spodní stranu jazyka.
Konkrétní terapeutické, diagnostické nebo proíylaktické dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.
Příklad 12: Přípravek s antineoplastickou kompozicí 4 pro inhalační podání k léčbě malobuněčného nádoru plic člověka.
Složení (g) prášku k 100 inhalacím
Kompozice 4 2,73
Threhalóza 20,00
Voda na injekci do 100,0
Postup:
1. Navážka kompozice 4 se rozpustí ve 100 g 20% (hmotn.) vodného roztoku trehalózy.
2. Do izolované dispergační nádoby se vloží magnetické míchadlo a přikryje se kuželovým krytem s uzavíratelnými pracovními otvory.
-24CZ 307195 B6
3. Jedním otvorem se krytu do nádoby vloží ultrazvukovou sonda (120 kHz), a nádoba se uchytí na stolku magnetické míchačky.
4. Po naplnění nádoby až po okraj kapalným dusíkem se na nádobu přiloží kryt a kapalina se ponechá uklidnit.
5. Na povrch kapalného dusíku se vstříkne cca 5 ml roztoku a prostor se uzavře.
6. Dalším otvorem se pomocí peristaltického čerpadla do pracovního prostoru přivádí 3 ml/min. roztoku protinádorové kompozice 4 a trehalózy ve vodě a zapne magnetická míchačka.
7. Po ukončení dispergace se vzniklé tuhé částice roztoku přenesou do vialek z čirého skla I třídy a za obyčejné teploty předběžně uzavřou lyofilizační zátkou.
8. Vialky se umístí na přepážky lyofilizátoru (GFT 6, Klein Vakuumtechnik), (Niederfishbach, DE) a následně se sníží tlak na 80 kPa.
9. Vialky se postupně chladí na 0 °C po dobu 3 hodin, dále na - 35 °C po dobu 12 hodin, primární sušení probíhá zvyšováním teploty na teplotu - 10 °C po dobu 8 hodin a na 10 °C po 8 hodin.
10. Po zvýšení tepoty na 30 °C v úseku 1 hodiny, následuje sekundární sušení při 30 °C po dobu 6 hodin při tlaku 10 kPa.
l.Po vytemperování produktu na obyčejnou teplotu lyofilizátor zaplní sterilizovaným vzduchem a vialky s lyofilizovaným produktem se uzavřou.
Získaný prášek je připraven pro zpracování, plnění a použití v dávkovacím práškovém inhalátoru (například typu Turbhaler, Easyhaler, Novolizer, Certihaler) nebo jako stlačený prášek (například v inhalátoru typu Ultrahaler nebo MAG-haler), nebo v jednodávkovém systému s kapslemi preadjustovaných prášků (například typu Spinhaler, Aerolizerk, Handihaler), nebo prášky ve vícedávkových systémech kapslí nebo blistrů (například typu Diskhaler, nebo Diskus).
Příklad 13: Přípravek s antineoplastickou kompozicí 4 pro inhalační podání roztoku k inhalaci nebulizérem při léčbě nádoru hrtanu člověka.
Složení prášku (g) k nebulizaci 10 dávek (g):
Kompozice 4 0, 482 g
Trehalóza 5,50
Prášková kompozice pro rekonstituci k inhalačnímu podání je asepticky rozplněna do deseti skleněných injekčních lahviček na 100 ml s obsahem 48,2 mg kompozice 4.
Pro rekonstituci se 1 lavička doplní vodou na injekci nebo sterilizovanou vodou. Nebulizace se provádí ve vhodném malém například tryskovém, vibračním membránovém nebo elektronickém nebulizéru, například typu Spag-2, PARI LC Star, Aero-Eclipse nebo Pro-Dose.
Příklad 14. Přípravek pro intraperitoneální podání k léčbě karcinomu prsní žlázy psa nebo kočky.
Složení (g) na 100 dávek
Kompozice 5 2,239 (viz tab. 1)
Trehalóza 20,00
Uvedená kompozice je zpracována jako směsný lyofilizovaný prášek s obsahem kompozice 5 podle tabulky 1 a strukturální a stabilizující trehalózy rozplněný do 100 vialek.
Je podávána v jedné dávce jako eutonicko-isotonický vodný roztok po rekonstituci ex tempore ze suchého prášku v 5% roztoku glukózy.
-25 CZ 307195 B6
Konkrétní dávkování kompozice je záležitostí komplexního onkologického posouzení léčeného jedince.

Claims (7)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Antiproliferační a antimetastatická farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů pro terapeutické, profylaktické nebo diagnostické použití u savců, vyznačující se tím, že kompozice sestává z následujících účinných látek: proenzymy trypsinogen a chymotrypsinogen a enzymy α-amyláza a lipáza, přičemž poměr enzymatických aktivit účinných látek, tedy aktivit trypsinogenu (T), chymotrypsinogenu typu A (CH), α-amylázy B.s. (A) a lipázy T.a. (L) v pořadí T:CH:A:L vyjádřený v m.j. je v intervalu od 150:150:40:1 do 400:1200:200:1, a dále obsahuje jeden nebo více farmaceuticky přijatelných excipientů, pro současné, oddělené nebo postupné podávání kompozice cestou parenterální nebo transmukosální.
  2. 2. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že s výhodou je trypsinogen typu I, chymotrypsinogen je typu A, α-amyláza je produkována Bacillus species a lipáza jez Triticum aestivum.
  3. 3. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2, vyznačující se tím, že minimální enzymatická aktivita účinných látek v kompozici je následující: trypsinogen 40 m.j./mg, chymotrypsinogen 60 m.j./mg, a-amyláza 20 m.j./mg a lipáza 1 m.j./mg.
  4. 4. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že transmukosálním podáním je systémové sublingvální, rektální nebo inhalační podání.
  5. 5. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že jako farmaceuticky přijatelný excipient obsahuje jeden nebo více hydrofilních polyhydrických alkoholů zahrnující polyethylenglykol s mol. hmotností 100 až 8000, a/nebo hydrofilní nízkomolekulámí alkoholy jako glycerol, propylenglykol, n-propanol, a/nebo sacharidů jako trehalóza, mannitol, laktóza, sorbitol, myoinositol, a/nebo polysorbátů jako polysorbát 20, polysorbát 60, polysorbát 80, poloxamerů jako poloxamer 182, poloxamer 417, poloxamer 908, a/nebo jeden nebo více lipofilních excipientů zahrnujících hydrogenované triglyceridy jako hydrogenovaný glycerol-trioleát, hydrogenovaný glycerol-kokoát, a/nebo esterů vyšších mastných kyselin s glycerolem nebo propylenglykolem jako, glyceroltripalmitát, glycerol-trioleát, glycerol-tristearát, glycerol-distearát, glycerol-dioleát, glycerolmonolaurát, propylenglykol-myristát, glycerol-dipalmitostearát, a/nebo esterů nižších jednovazných alkoholů jako diisopropyl-adipát, isopropyl-laurát, isopropyl-linoleát, isopropyl-palmitát, a/nebo esterů vyšších mastných kyselin se středními a vyššími mastnými alkoholy zahrnující, myristyl-stearát, kapryl stearát, cetyl-palmitát, kaprin-behenát, lauroyl-oleát, a/nebo vyšších mastných alkoholů zahrnujících laurylalkohol, myristylalkohol, palmitylalkohol, stearylalkohol, behenylalkohol a analogické vyšší mastné kyseliny jako kyseliny laurová, myristová, palmitová, stearová, lignocerová, arachidonová, behenová a jejich ethoxylované deriváty jako polyethylenglykol-10-oleylalkohol, polyethylenglykol-25-stearylalkohol, polyethylenglykol-40-stearylalkohol, stearoyl-polyethylenglykol-32-glycerol, polyethylenglykol-15-hydroxystearát, a/nebo rostlinných olejů zahrnujících bavlníkový, slunečnicový, podzemnicový, sójový, ricinový ajejich polyethoxylované deriváty jako polyoxyl-35-ricinooleát,
    -26CZ 307195 B6 a/nebo fosfolipidů zahrnujících vaječný lecitin, sójový lecitin, dioleyl-fosfatidylcholin, dipalmityl-fosfatidylserin, a/nebo sterolů zahrnující cholesterol a jeho deriváty jako cholesteryl-linoleát, cholesteryl-acetát, a/nebo biokompatibilní a biodegradovatelné polymery zejména polyesterů jako kyselina 5 poly(D,L)mléčná PDLLA, kyselina polyglykolová PGA, kyselina poly(DL) mléčná-glykolová PLGA.
  6. 6. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 určena pro sublingvální aplikaci, vyznačující se tím, že je v podobě nanovláken, přičemž obsahuje alespoň jeden z 10 polyvinylových polymerů jako jsou polyvinylpyrrolidony s mol. hmotností asi 30 000 až 50 000 a polyvinylalkoholy s mol. hmotností od 20 000 do 200 000, z derivátů celulózy jako methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, hydroxypropylcelulóza, hydroxyethylcelulóza, a/nebo z polysacharidů typu škrobu jako hydroxyethylškrob, sodná sůl karboxymethylškrobu, a/nebo dextrinů s molekulovou hmotností od 4000 až po 80 000,
    15 a/nebo z biotechnologických polysacharidů typu dextranů s molekulovou hmotností od 10 000 až po 80 000, a/nebo látek typu glukuronátů jako xantanová klovatina, a/nebo dalších polyuronidů resp. jejich solí, zejména sodných, draselných, jako hyaluronanů, alginanů, pektinanů, arabinanů a/nebo polymerů založených na kyselině akrylové, methakrylové a/nebo jejich kopolymerech jako jsou 20 karboxyvinylpolymery, tzn. karbomery, síťované s polyalkenylethery cukrů nebo polyalkoholů (jako diallylsacharóza a diallylpentaerytritol, biogedradovatelné polyestery a-hydroxykyselin jako jsou PDLLA, PGA, PLGA, polykaprolaktony s mol. hmotností od 10 000 do 100 000, další polymemí excipienty typu kopolymerů jako polyvinylkaprolaktam-polyvinylacetátpolyethylenglykol.
  7. 7. Farmaceutická kompozice nebo její část podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 určená k inhalační aplikaci, vyznačující se tím, že je obsahuje alespoň jeden nebo více sacharidů zahrnující sacharózu, trehalózu, mannitol, glukózu a/nebo různé formy laktózy.
    30 8. Farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že je ve formě nanovlákenného stabilizovaného přípravku pro přímou aplikaci účinných látek nebo jako stabilizovaný zásobník účinných látek v meziproduktu nebo ve finálním přípravku.
CZ2013-891A 2013-11-18 2013-11-18 Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů CZ307195B6 (cs)

Priority Applications (18)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-891A CZ307195B6 (cs) 2013-11-18 2013-11-18 Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů
ES14814733T ES2707376T3 (es) 2013-11-18 2014-11-12 Composición farmacéutica que contiene una mezcla de proenzimas y enzimas
EA201691018A EA033123B9 (ru) 2013-11-18 2014-11-12 Антипролиферативная и антиметастатическая фармацевтическая композиция и способ лечения рака
PT14814733T PT3071218T (pt) 2013-11-18 2014-11-12 Composição farmacêutica contendo uma mistura de proenzimas e enzimas
SI201431004T SI3071218T1 (sl) 2013-11-18 2014-11-12 Farmacevtski sestavek, ki vsebuje mešanico proencimov in encimov
HRP20182155TT HRP20182155T1 (hr) 2013-11-18 2014-11-12 Farmaceutski pripravak koji sadržava mješavinu proenzima i enzima
PL14814733T PL3071218T3 (pl) 2013-11-18 2014-11-12 Kompozycja farmaceutyczna zawierająca mieszaninę proenzymów i enzymów
LTEP14814733.3T LT3071218T (lt) 2013-11-18 2014-11-12 Farmacinė kompozicija, kurios sudėtyje yra profermentų ir fermentų mišinys
PCT/CZ2014/000133 WO2015070828A1 (en) 2013-11-18 2014-11-12 Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes
DK14814733.3T DK3071218T3 (en) 2013-11-18 2014-11-12 PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING A MIXTURE OF PROENZYMES AND ENZYMES
HUE14814733A HUE042667T2 (hu) 2013-11-18 2014-11-12 Proenzimek és enzimek keverékét tartalmazó gyógyszerészeti összetétel
SM20190076T SMT201900076T1 (it) 2013-11-18 2014-11-12 Composizione farmaceutica contenente una miscela di proenzimi e di enzimi
EP14814733.3A EP3071218B1 (en) 2013-11-18 2014-11-12 Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes
RS20190120A RS58296B1 (sr) 2013-11-18 2014-11-12 Farmaceutske kompozicije koje sadrže smešu proenzima i enzima
JP2016553704A JP6568095B2 (ja) 2013-11-18 2014-11-12 プロ酵素及び酵素の混合物を含む医薬組成物
US15/037,331 US20160339085A1 (en) 2013-11-18 2014-11-24 Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes
CY20191100031T CY1121276T1 (el) 2013-11-18 2019-01-14 Φαρμακευτικη συνθεση που περιεχει ενα μειγμα προενζυμων και ενζυμων
US16/281,130 US11185587B2 (en) 2013-11-18 2019-02-21 Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-891A CZ307195B6 (cs) 2013-11-18 2013-11-18 Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2013891A3 CZ2013891A3 (cs) 2015-05-27
CZ307195B6 true CZ307195B6 (cs) 2018-03-14

Family

ID=67353809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2013-891A CZ307195B6 (cs) 2013-11-18 2013-11-18 Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů

Country Status (17)

Country Link
US (2) US20160339085A1 (cs)
EP (1) EP3071218B1 (cs)
JP (1) JP6568095B2 (cs)
CY (1) CY1121276T1 (cs)
CZ (1) CZ307195B6 (cs)
DK (1) DK3071218T3 (cs)
EA (1) EA033123B9 (cs)
ES (1) ES2707376T3 (cs)
HR (1) HRP20182155T1 (cs)
HU (1) HUE042667T2 (cs)
LT (1) LT3071218T (cs)
PL (1) PL3071218T3 (cs)
PT (1) PT3071218T (cs)
RS (1) RS58296B1 (cs)
SI (1) SI3071218T1 (cs)
SM (1) SMT201900076T1 (cs)
WO (1) WO2015070828A1 (cs)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107625957B (zh) * 2009-10-22 2021-06-15 普罗潘克股份有限公司 包含胰蛋白酶原和糜蛋白酶原的用于治疗癌的药物组合物
US11185587B2 (en) 2013-11-18 2021-11-30 Frantisek Trnka Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY196737A (en) * 2015-11-12 2023-05-03 Propanc Pty Ltd Proenzyme composition
CN105385669A (zh) * 2015-11-24 2016-03-09 青岛康原药业有限公司 一种二次亲和层析法提取激肽释放酶原的方法及提高激肽释放酶原稳定性的药物组合物
NZ744845A (en) * 2016-01-29 2023-04-28 Propanc Pty Ltd Cancer treatment
EP3442564B1 (en) * 2016-04-12 2023-12-06 Propanc Pty Ltd Composition of proenzymes for cancer treatment
DK3335696T3 (da) * 2016-12-15 2020-03-16 Upm Kymmene Corp Fremgangsmåde til tørring af cellefrit vævsekstrakt i en hydrogel omfattende nanofibrillær cellulose og en tørret hydrogel omfattende nanofibrillær cellulose og cellefrit vævsekstrakt
WO2021009768A1 (en) * 2019-07-12 2021-01-21 Lovely Professional University An oral pharmaceutical composition for alpha- amylase inhibition
EP4041190A1 (en) * 2019-10-08 2022-08-17 Afyx Therapeutics A/S Compositions for the delivery of proteins

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ127295A3 (en) * 1995-05-17 1996-12-11 Frantisek Mudr Trnka Pharmaceutical preparation exhibiting modulation effect on malignant tumors and the use thereof

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4514388A (en) 1983-03-22 1985-04-30 Psaledakis Nicholas G Proteolytic enzymes in the zymogen form to treat sarcoma cells
US4844897A (en) 1985-09-13 1989-07-04 Hiroshi Maeda Anti-tumor protease preparations
US6087558A (en) 1998-07-22 2000-07-11 Prodigene, Inc. Commercial production of proteases in plants
US6019468A (en) 1998-10-02 2000-02-01 Altemare, Jr.; Kenneth D. Spectacle kit
US6428785B1 (en) * 1999-10-28 2002-08-06 Immunolytics Inc. Method and composition for treating prostate cancer
TR201808840T4 (tr) 2007-02-20 2018-07-23 Allergan Pharmaceuticals Int Ltd Stabil sindirim enzimi bileşimleri.
SG10201406651PA (en) 2009-10-22 2014-11-27 Propanc Pty Ltd A pharmaceutical composition for treating cancer comprising trypsinogen and/orchymotrypsinogen and an active agent selected from a selenium compound, a vanilloid compoundand a cytoplasmic glycolysis reduction agent
CZ303244B6 (cs) 2011-01-17 2012-06-13 Elmarco S.R.O. Nosic pro oromukosální, zejména pro sublingvální aplikaci fyziologicky aktivních látek
CN102949712A (zh) * 2011-08-21 2013-03-06 李红彬 一种治疗肿瘤疾病的中西复合药物
US10087401B2 (en) 2012-03-16 2018-10-02 Monosol, Llc Water soluble compositions incorporating enzymes, and method of making same
CZ307195B6 (cs) 2013-11-18 2018-03-14 František Trnka Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ127295A3 (en) * 1995-05-17 1996-12-11 Frantisek Mudr Trnka Pharmaceutical preparation exhibiting modulation effect on malignant tumors and the use thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anonym: "Enzýmová terapia a prevencia (NIE LEN) rakoviny", 18.7.2012 www.badatel.sk/kpm/enzymova-terapia-a-prevencia-nie-len-rakoviny/ *
L.J.Hansen et al.: "Immunohistochemical Localization of Pancreatic Exocrine Enzymes in Normal and Neoplastic Pancreatic Acinar Epithelium of Rat" The Journal of Histochemistry and Cytochemistry, 29 (2) 309-313 (1981). *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107625957B (zh) * 2009-10-22 2021-06-15 普罗潘克股份有限公司 包含胰蛋白酶原和糜蛋白酶原的用于治疗癌的药物组合物
US11185587B2 (en) 2013-11-18 2021-11-30 Frantisek Trnka Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes

Also Published As

Publication number Publication date
EP3071218B1 (en) 2018-10-31
JP6568095B2 (ja) 2019-08-28
SMT201900076T1 (it) 2019-02-28
CZ2013891A3 (cs) 2015-05-27
JP2016538339A (ja) 2016-12-08
EA033123B9 (ru) 2019-10-31
ES2707376T3 (es) 2019-04-03
EA201691018A1 (ru) 2016-11-30
EP3071218A1 (en) 2016-09-28
US20160339085A1 (en) 2016-11-24
PL3071218T3 (pl) 2019-05-31
CY1121276T1 (el) 2020-05-29
US11185587B2 (en) 2021-11-30
WO2015070828A1 (en) 2015-05-21
PT3071218T (pt) 2019-01-30
DK3071218T3 (en) 2019-02-18
LT3071218T (lt) 2018-12-27
EA033123B1 (ru) 2019-08-30
US20190247471A1 (en) 2019-08-15
RS58296B1 (sr) 2019-03-29
SI3071218T1 (sl) 2019-01-31
HRP20182155T1 (hr) 2019-02-08
HUE042667T2 (hu) 2019-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11185587B2 (en) Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes
Lin et al. Active targeted nanoparticles for oral administration of gastric cancer therapy
JP5722782B2 (ja) ナノエマルジョン治療用組成物及びその使用方法
US11786713B2 (en) Methods and compositions related to physiologically responsive microneedle delivery systems
CN105624126A (zh) 一种新型重组高稳定性超氧化物歧化酶及其应用
JPH04503071A (ja) 良性前立腺肥大処置のための組成物および方法
Mao et al. Biosynthesis of lysosomally escaped apoptotic bodies inhibits inflammasome synthesis in macrophages
EP0062434B1 (en) Insoluble crosslinked cytotoxic oxidase-peroxidase system
CN107198768A (zh) 一种下泌尿道疾病的治疗剂和一种下泌尿道症状的改善剂
CN115054577B (zh) 纳米解毒剂及其在中和mrsa穿孔毒素的应用
CN105749260B (zh) 一种盐酸溶菌酶阴道片及其制备方法和应用
US20130171263A1 (en) Snake Powder Extract For Treatment Of Cancer
CN102793724A (zh) 一种小菜蛾提取物及其应用
Blackwell Sporopollenin exines as a novel drug delivery system
WO2021157619A1 (ja) 膵液瘻の予防または治療剤
Shvets et al. From liposomes of the 1970s to 21st century nanobiotechnology
CN101647824A (zh) 一种全蝎的仿生酶解产物及其用途
EP1774976B1 (en) Malignant tumor local infiltration inhibitor containing batroxobin
CN117982669A (zh) 抗动脉粥样硬化的药物及其制备方法
Ali et al. Venom poisons from the Egyptian cobra Naja haje: Possible treatments for Breast cancer
CN120617481A (zh) 十二指肠钩虫多肽AdKI1在制备抗过度炎症反应药物中的应用
Luo et al. Advances in gasdermin activation, regulation, and targeted drug development
CN118384125A (zh) 一种装载两性霉素b的制剂及其制备方法、应用
CN118697714A (zh) 一种工程化细菌外囊泡探针的制备方法及其应用
CN104546982A (zh) 乳香提取物在制备维持血管内皮稳态药物中的应用