CZ307163B6 - Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů - Google Patents
Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307163B6 CZ307163B6 CZ2014-369A CZ2014369A CZ307163B6 CZ 307163 B6 CZ307163 B6 CZ 307163B6 CZ 2014369 A CZ2014369 A CZ 2014369A CZ 307163 B6 CZ307163 B6 CZ 307163B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- vinyl
- phenanthroline
- trifluoromethanesulfonate
- diium trifluoromethanesulfonate
- tetrahydrodipyrido
- Prior art date
Links
- 108091081406 G-quadruplex Proteins 0.000 title claims abstract description 63
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 title description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 24
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 11
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract 5
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 130
- -1 2,4-bis ((E) -2- (thiophen-3-yl) vinyl) -6,7,10,1-tetrahydrodipyrido [2,1-a: 1 ', 2'-k] [2,9] phenanthroline- 5.12-Diium trifluoromethanesulfonate Chemical compound 0.000 claims description 55
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 claims description 25
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 23
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- PDQRQJVPEFGVRK-UHFFFAOYSA-N 2,1,3-benzothiadiazole Chemical compound C1=CC=CC2=NSN=C21 PDQRQJVPEFGVRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 125000000814 indol-3-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C([*])C2=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 125000005504 styryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FPGVQENCHPNRGE-UHFFFAOYSA-M [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)c1cc(\C=C\c2cc[n+]3CCc4c(C)c(C)c5CC[n+]6ccc7ccccc7c6-c5c4-c3c2)c[nH]1 Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)c1cc(\C=C\c2cc[n+]3CCc4c(C)c(C)c5CC[n+]6ccc7ccccc7c6-c5c4-c3c2)c[nH]1 FPGVQENCHPNRGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 claims description 2
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004890 (C1-C6) alkylamino group Chemical group 0.000 claims 1
- VXWVFZFZYXOBTA-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-1h-indole Chemical compound BrC1=CC=C2NC=CC2=C1 VXWVFZFZYXOBTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HWXJTNUIHOQKPT-UHFFFAOYSA-L [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.CCn1c2ccccc2c2cc(\C=C\c3cc[n+]4CCc5c(C)c(C)c6CC[n+]7ccc8ccccc8c7-c6c5-c4c3)ccc12 Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.CCn1c2ccccc2c2cc(\C=C\c3cc[n+]4CCc5c(C)c(C)c6CC[n+]7ccc8ccccc8c7-c6c5-c4c3)ccc12 HWXJTNUIHOQKPT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- DPAAMHHEKKVZPO-NSKUCRDLSA-L [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.Cc1c(C)c2CC[n+]3ccc4ccccc4c3-c2c-2c1CC[n+]1ccc(\C=C\c3cccc4c3oc3ccccc43)cc-21 Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.Cc1c(C)c2CC[n+]3ccc4ccccc4c3-c2c-2c1CC[n+]1ccc(\C=C\c3cccc4c3oc3ccccc43)cc-21 DPAAMHHEKKVZPO-NSKUCRDLSA-L 0.000 claims 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 151
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 117
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 75
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 49
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 45
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 39
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 33
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 31
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 25
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 24
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 21
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 21
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 16
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 16
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 16
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 16
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 16
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 15
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 14
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 13
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-FIBGUPNXSA-N acetonitrile-d3 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C#N WEVYAHXRMPXWCK-FIBGUPNXSA-N 0.000 description 12
- 238000002212 electronic circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 108010087705 Proto-Oncogene Proteins c-myc Proteins 0.000 description 9
- 102000009092 Proto-Oncogene Proteins c-myc Human genes 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 8
- 108700024542 myc Genes Proteins 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 7
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 6
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 5
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 5
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000002519 electronic circular dichroism spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-MICDWDOJSA-N 2-deuterioacetonitrile Chemical compound [2H]CC#N WEVYAHXRMPXWCK-MICDWDOJSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 3
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 239000007978 cacodylate buffer Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- JACYMBNQPPWQML-UHFFFAOYSA-M sodium;4-methoxy-5-[3-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfonatophenyl)-5-(phenylcarbamoyl)tetrazol-3-ium-2-yl]-2-nitrobenzenesulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC([N+]([O-])=O)=C(S([O-])(=O)=O)C=C1N1[N+](C=2C(=CC(=C(C=2)S([O-])(=O)=O)[N+]([O-])=O)OC)=NC(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)=N1 JACYMBNQPPWQML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 2
- KXYBYRKRRGSZCX-UHFFFAOYSA-N 1-methylindole-3-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2N(C)C=C(C=O)C2=C1 KXYBYRKRRGSZCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADZUEEUKBYCSEY-UHFFFAOYSA-N 1h-indole-5-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=C2NC=CC2=C1 ADZUEEUKBYCSEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CYZIVXOEJNAIBS-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1h-indole-3-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2C(C=O)=C(C)NC2=C1 CYZIVXOEJNAIBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RBIGKSZIQCTIJF-UHFFFAOYSA-N 3-formylthiophene Chemical compound O=CC=1C=CSC=1 RBIGKSZIQCTIJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 238000006000 Knoevenagel condensation reaction Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 125000002249 indol-2-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([*])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 2
- OLNJUISKUQQNIM-UHFFFAOYSA-N indole-3-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2C(C=O)=CNC2=C1 OLNJUISKUQQNIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- WOQIDNWTQOYDLF-RPWUZVMVSA-N quarfloxin Chemical compound CN1CCC[C@H]1CCNC(=O)C(C1=O)=CN2C3=C1C=C(F)C(N1C[C@@H](CC1)C=1N=CC=NC=1)=C3OC1=CC3=CC=CC=C3C=C12 WOQIDNWTQOYDLF-RPWUZVMVSA-N 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 125000006700 (C1-C6) alkylthio group Chemical group 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-M (R)-pantothenate Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-M 0.000 description 1
- RHKPJTFLRQNNGJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzothiazole-2-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2SC(C=O)=NC2=C1 RHKPJTFLRQNNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUKQTRFCDKSEPL-UHFFFAOYSA-N 1-Methyl-2-pyrrolecarboxaldehyde Chemical compound CN1C=CC=C1C=O OUKQTRFCDKSEPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBNOTUDDIXOFSN-UHFFFAOYSA-N 1h-indole-2-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2NC(C=O)=CC2=C1 SBNOTUDDIXOFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAIWRKYDYWYFIT-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2C(C=O)=CNC2=N1 KAIWRKYDYWYFIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHWUPSAKKXZTKT-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethyl-1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]pyrrole-3-carbaldehyde Chemical compound CC1=CC(C=O)=C(C)N1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 JHWUPSAKKXZTKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWHJWEBMUYYQKM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxypyridine-3-carbaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C(OC)=N1 UWHJWEBMUYYQKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFOIBEJBQITLOX-UHFFFAOYSA-N 2,9-phenanthroline Chemical compound C1=CN=CC2=C(C=NC=C3)C3=CC=C21 CFOIBEJBQITLOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 2-methylbenzenesulfonate Chemical compound CC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940080296 2-naphthalenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- IFIFXODAHZPTEY-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-1h-indole-3-carbaldehyde Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C(C=O)=C1C1=CC=CC=C1 IFIFXODAHZPTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNZPAYBMUBPMHB-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydro-2h-indolizin-1-one Chemical compound C1C=CC=C2C(=O)CCN21 LNZPAYBMUBPMHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 3-phenylpropionate Chemical compound [O-]C(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-M 4-aminobenzenesulfonate Chemical compound NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CGXVTWQTGQAMMX-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-1h-indole-3-carbaldehyde Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=C1C(C=O)=CN2 CGXVTWQTGQAMMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APWHJDHTLFVWSQ-UHFFFAOYSA-N 5-phenylthiophene-2-carbaldehyde Chemical compound S1C(C=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 APWHJDHTLFVWSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAJUTJHDGBYGSL-UHFFFAOYSA-N 6-propan-2-yl-1h-indole-3-carbaldehyde Chemical compound CC(C)C1=CC=C2C(C=O)=CNC2=C1 KAJUTJHDGBYGSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGJXVBICNCIWEL-UHFFFAOYSA-N 9-ethylcarbazole-3-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 QGJXVBICNCIWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000713836 Avian myelocytomatosis virus Species 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 101100239628 Danio rerio myca gene Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 102100031113 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 15 Human genes 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000777455 Homo sapiens Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L L-tartrate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100163901 Rattus norvegicus Asic2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000242739 Renilla Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229910006069 SO3H Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 102100032938 Telomerase reverse transcriptase Human genes 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- DABKUUFTFFIYMC-UHFFFAOYSA-M [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.C1C[n+]2ccc(\C=C\c3c[nH]c4c3ccc3ccccc43)cc2-c2c1ccc1CC[n+]3ccc4ccccc4c3-c21 Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.C1C[n+]2ccc(\C=C\c3c[nH]c4c3ccc3ccccc43)cc2-c2c1ccc1CC[n+]3ccc4ccccc4c3-c21 DABKUUFTFFIYMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UUFBUUOHRMXBQS-UHFFFAOYSA-M [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.C1C[n+]2ccccc2-c2c1ccc1CC[n+]3c(\C=C\c4cc5ccccc5[nH]4)cc(\C=C\c4cc5ccccc5[nH]4)cc3-c21 Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.[O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F.C1C[n+]2ccccc2-c2c1ccc1CC[n+]3c(\C=C\c4cc5ccccc5[nH]4)cc(\C=C\c4cc5ccccc5[nH]4)cc3-c21 UUFBUUOHRMXBQS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-BKBMJHBISA-N alpha-D-galacturonic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-BKBMJHBISA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000001449 anionic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000001769 aryl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005110 aryl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N beta-phenylpropanoic acid Natural products OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- TXCDCPKCNAJMEE-UHFFFAOYSA-N dibenzofuran Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3OC2=C1 TXCDCPKCNAJMEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQYTWBPRZFRASB-UHFFFAOYSA-N dibenzofuran-4-carbaldehyde Chemical compound C12=CC=CC=C2OC2=C1C=CC=C2C=O GQYTWBPRZFRASB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N galactaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229940097042 glucuronate Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-O hydron;quinoline Chemical compound [NH+]1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L malate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C(O)CC([O-])=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M mandelate Chemical compound [O-]C(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M naphthalene-2-sulfonate Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002891 organic anions Chemical class 0.000 description 1
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-M pivalate Chemical compound CC(C)(C)C([O-])=O IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229950010765 pivalate Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O pyridinium Chemical compound C1=CC=[NH+]C=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 239000012132 radioimmunoprecipitation assay buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000025915 regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009703 regulation of cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000031539 regulation of cell division Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000008943 replicative senescence Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
- C07D471/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed systems contains four or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
- C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D471/04—Ortho-condensed systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Vynález se týká nových helquatů s heteroaromatickými substituenty, způsobu jejich přípravy, jejich využití jako léčiv k léčbě onemocnění souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a pro stabilizaci G-kvadruplexů.
Dosavadní stav techniky
Originální látky využitelné v terapii rakoviny jsou předmětem zájmu průmyslu i akademických laboratoří [Avendano, C, Menendez, J. C. (2008) Medicinal Chemistry of Anticancer Drugs, Elsevier Science, 1. vydání].
Zhoubná nádorová onemocnění jsou jednou z nejčastějších příčin úmrtí [Siegel R. a spol. (2012), CA Cancer J. Clin. 62, 10-29], Jedná se o nekontrolovaný buněčný růst, jehož vznik bývá podmíněn jak negativními vnějšími vlivy během života, tak genetickou výbavou. Pro vznik a vývoj nádorového onemocnění je potřeba akumulace několika různých genetických nebo epigenetických změn vedoucích k transformaci zdravé buňky v plně maligní fenotyp [Stratton M. R. (2011), Science 331, 1553-1558], Jedná se především o mutace v genech kódujících proteiny, které se podílejí na regulaci dělení a diferenciaci buněk, replikaci a opravách DNA, na regulaci apoptózy poškozených buněk, na mezibuněčné komunikaci a přenosu signálů uvnitř buňky [Hanahan D., Weinberg R. A. (2000), Cell 100, 57-70]. Maligní (zhoubné) buňky mají na rozdíl od benigních schopnost prorůstat do okolní normální tkáně (invazivita) a také schopnost uvolňovat shluky buněk primárního nádoru, které cestují krevním nebo mízním řečištěm do vzdálených míst, kde se usazují a zakládají nová nádorová ohniska (proces metastázování) [Nguyen D. X. a spol. (2009), Nat. Rev. Cancer 9, 274-284].
Cílem protinádorové terapie je selektivně indukovat apoptózu u nežádoucích nádorových buněk, bez současného poškození okolní zdravé tkáně. Cytotoxické léky působí tak, že poškozují DNA nebo mikrotubuly a jejich specifičnost vůči nádorovým buňkám v lidském těle spočívá v jejich schopnosti přednostně zabíjet rychle proliferující buňky. Tato selektivita může být doložena jejich cytostatickými účinky v buněčné kultuře in vitro [Chabner B. A., Roberts T. G (2005), Nat. Rev. Cancer 5, 65-72; Lullmann H. a spol. (2005), Farmakologie a toxikologie, Grada, 15. Vydání],
Limitujícím faktorem pro docílení co nejvyšší selektivity cytotoxického účinku je však skutečnost, že nádorové buňky jsou odvozeny od buněk vlastního organizmu. Citlivost nádorových buněk vůči cytostatiku je pak dána růstovou frakcí nádoru (poměrem proliferujících a neproliferujících buněk nádoru), pozicí buňky v rámci buněčného cyklu a přirozenou a získanou rezistencí nádorových buněk vůči cytostatiku.
G-kvadruplexy jsou považovány za atraktivní molekulární cíle protinádorové terapie budoucnosti [Neidle S. (2011), Therapeutic Applications of Quadruplex Nucleic Acids, Academie Press, 1. vydání]. Ovlivnění stability DNA G-kvadruplexů bylo identifikováno jako jeden z mechanismů regulace klíčových procesů na buněčné úrovni. Originální látky využitelné pro ovlivnění stability G-kvadruplexů jsou tedy předmětem zájmu průmyslu i mnoha akademických laboratoří. Důležitým stimulem pro hledání terapeuticky využitelných stabilizátorů těchto DNA struktur jsou nedávno zveřejněné důkazy jejich existence na buněčné úrovni [Biffi G. a spol. (2013), Nátuře Chemistry, 5, 182—186; Biffi G. a spol. (2014), Nátuře Chemistry, 6, 75] i významného zastoupení sekvencí tvořících G-kvadruplexy v lidském genomu [Yi E. a spol. (2013), Nátuře Communications, 4, 1796].
- 1 CZ 307163 B6
Četný výskyt G-kvadruplexů byl zaznamenán v promotorových oblastech genů, přičemž jejich fyzikálně-chemické a strukturní charakteristiky z nich činí zajímavé terapeutické cíle. Represe transkripce onkogenů v důsledku stabilizace těchto čtyřvláknových DNA struktur v promotorových oblastech genů malými molekulami je tak jednou ze sledovaných strategií protinádorové terapie [Balasubramanian S. a spol. (2011), Nátuře Reviews Drug Discovery 10, 261-275],
Další oblastí, kde sehrávají G-kvadruplexy klíčovou roli, jsou telomerické konce chromozomu [Neidle S. (2010), FEBS Joumal 277, 1118-1125], Lidské telomery jsou nukleoproteinové komplexy, které obsahují opakující se DNA sekvenci (5'GGGTTA3')n (n = 100 až 4000), která má jednovláknový přesah o délce 24 až 400 bází na 3'-konci [Cimino-Reale G. a spol. (2001) Nucleic Acids Res. 29, E35J. Telomerická DNA se každým cyklem buněčného dělení postupně zkracuje (tzv. end replication problém). Tento proces určuje limit celkového počtu dělení, které normální (nerakovinné) buňky můžou podstoupit. Většina rakovinných buněk tento takzvaný end replication problém překonává pomocí telomerázou zprostředkované extenze telomerických konců DNA. Stabilizace G-kvadruplexů v telomerách prostřednictvím malých molekul může vést k účinné inhibici aktivity telomerázy a obnovení limitace dělení buňky.
Cílení telomerických G-kvadruplexů však může ovlivnit funkci telomer i jinak než prostřednictvím inhibice telomerázy. Konce chromozomů jsou asociované se širokou škálou proteinů, které se na ně váží. Tento nukleoproteinový komplex (tzv. shelterin complex) je zodpovědný za strukturní integritu telomer in vivo. Malé molekuly, které se váží na v oblasti telomer, mohou uvolnit proteiny ze shelterinového komplexu a způsobit tak destabilizaci telomer. Tento proces může vést k apoptóze nebo replikativní senescenci.
Podobně jako zacílení na G-kvadruplexy v promotorech genů, je zacílení na telomerické konce chromozomu bohaté na G-kvadruplexy sledovanou strategií protirakovinné terapie.
V současnosti jsou hledány malé molekuly, které by byly schopné indukovat tvorbu komplexů G-kvadruplexu a ligandu. Takové molekuly by vedly k selektivní inhibici růstu nádorové buňky [Ou T.-M. a spol. (2008), ChemMedChem, 3, 690-713; Phatak P. a spol. (2007), Br. J. Cancer, 96, 1223-1233; Di Leva F. S. a spol. (2013) J. Med. Chem., 56, 9646-54], Příkladem malé organické molekuly, která se používá na stabilizaci G-kvadruplexů in vitro a in vivo, je TMPyP4 [Balasubramanian S. a spol. (2011), Nátuře Reviews Drug Discovery 10, 261-275]. Problémem je ovšem nízká selektivita této látky vůči G-kvadruplexu v přítomnosti dvouvláknové DNA.
V současné době existuje celá řada stabilizátorů G-kvadruplexu, z nichž několik bylo i klinicky testováno. Ačkoliv tyto látky slibně omezovaly růst rakovinných buněk, žádná z nich nebyla uvedena do klinické praxe. Například quarfloxin nevykazoval dostatečnou biologickou dostupnost [Quarfloxin (CX—3543); Phase II clinical trials; NCT00780663].
Vývoj nových stabilizátorů G-kvadruplexu je stále velmi sledovanou oblastí. Žádoucí jsou zejména originální malé molekuly, účinné například pro represi transkripce onkogenů a zároveň vykazující únosné množství nepříznivých vedlejších účinků při aplikaci.
Vynález otevírá snadnou cestu k získání skupiny zcela nových látek, použitelných jako léčiva pro onemocnění, související se zvýšenou proliferací buněk a pro stabilizaci G-kvadruplexů. Strukturně se tyto látky řadí do rodiny helquatů, organických kationtů na bázi kvartérního atomu dusíku, u nichž bylo navrženo i neléčebné použití, například ve formě sensibilizátorů ve fotografii [Táni T. (1995) Photographic Sensitivity, Theory and Mechanisms, OUP, Oxford],
Helikální extendované diquaty (helquaty) [Adriaenssens a spol. (2009), Chem. Eur. J. 15, 1072— 1076; Severa a spol. (2010), Tetrahedron 66, 3537-3552; Vávra a spol. (2012), Eur. J. Org. Chem. 489-499] představují novou a téměř neprobádanou třídu látek s dikationickým helikálním skeletem. Popsané základní skelety helquatů jsou vystavěny tak, že každý obsahuje dvě kvartémí
-2CZ 307163 B6
N-heteroaromatické jednotky, které vnáší do systému dvě kladně nabitá centra, například v podobě pyridiniových, chinoliniových, nebo isochinoliniových kationických jednotek. Celé uskupení typického helquatu se tak pojí s dikationicitou a zároveň i helikální chiralitou, což je kombinace, která dříve nebyla na úrovni malých aromatických organických molekul studována.
Předchozí práce, zabývající se helquaty, poskytly vzhledem ke skutečnosti, že se každá připravovaná látka budovala vícestupňovou syntézou de novo, jen omezenou variabilitu struktur [PV2009-237], Další přihláška vynálezu (PV 2013-32, PCT/CZ2014/000009) předložila nejen nové deriváty helquatů, ale také způsob jejich přípravy jednokrokovou diverzifikací stávajících methyl-substituovaných helquatů pomocí Knoevenagelovy kondenzace s arylaldehydy.
Nyní předkládaný vynález popisuje úplně novou skupinu helquatů, odlišujících se přítomností heteroarylového substituentu. Připraveny byly opět pomocí jednokrokové diverzifikace methyl— substituovaných helquatů pomocí Knoevenagelovy kondenzace, ovšem se substituovanými či nesubstituovanými heteroarylaldehydy.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu jsou helquaty obecného vzorce I
kde substituenty R1 a R2 jsou nezávisle na sobě vybrány ze skupiny, zahrnující H a C] až C4 alkyl, nejvýše tři páry sousedících atomů v polohách 1 a 2, 3 a 4, 1' a 2', 3' a 4'jsou případně přemostěny spojkou S a zároveň jeden až čtyři atomy se sudým deskriptorem (tj. 2, 4, 2', 4') jsou substituovány substituentem R’ obecného vzorce II —CH=CH—R4 (II), přičemž R4 je substituovaný, či nesubstituovaný heteroaryl.
1 7 34 14
S S S ’ a S'’ 'je spojka tvořená uhlovodíkovým řetězcem o 3 až 6 atomech uhlíku, s výhodou uhlovodíkovým řetězcem o 4 atomech uhlíku, přičemž struktura jednotlivých spojek S je vzájemně nezávislá, a
- D CZ 307163 B6
T1 a T2 jsou spojky, které přemosťují atomy Ν' s C8 a Nť' s C8', kde uvedená spojka je tvořena uhlovodíkovým řetězcem o 2 až 5 atomech uhlíku, s výhodou o 2 nebo 3 atomech uhlíku, přičemž struktura jednotlivých spojek T je vzájemně nezávislá, kde heteroaryl je aromatická karbocyklická skupina obsahující 4 až 26 uhlíkových atomů a alespoň jeden aromatický kruh nebo kondenzované aromatické kruhy, kde alespoň jeden atom uhlíku aromatického kruhu je nahrazen heteroatomem vybraným ze skupiny N, S, O, přičemž heteroaryl může obsahovat 1 až 5 substituentů, vybraných ze skupiny, zahrnující C; až C6 alkyl, C| až C6 halogenalkyl, C; až C|2 alkoxy, aryloxy, benzyloxy, C; až C6 alkylthio, arylthio, halogen, -OH, -SH, -NH2, C, až C6 alkylamino, arylamino, C| až C2, acylamino, -CN, -SO3H, nitro, -COORn, -C(=O)N(Rn)2, kde Rn je vodík nebo C| až C6 alkyl nebo aryl;
a anionty (X1) a (X ) jsou na sobě nezávislé anionty solí, s výhodou anionty ťarmaceuticky přijatelných solí.
Uvedené soli zahrnují soli s alkalickými kovy, soli s anorganickými či organickými anionty a zejména, ne však výhradně, farmaceuticky přijatelné soli vhodné pro fyziologické podání.
Farmaceuticky přijatelné soli mohou být soli odvozené od anorganických či organických kyselin. Osoba znalá oboru bude schopná určit, které soli jsou farmaceuticky přijatelné; obzvláště se jedná o soli, mající jednu či více žádoucích fyzikálních vlastností jako zvýšenou farmaceutickou stabilitu při různých teplotách a vlhkostech, požadovanou rozpustnost ve vodě či oleji, anebo nejsou toxické.
Vhodné farmaceuticky přijatelné soli látek podle tohoto vynálezu s výhodou zahrnují anionty odvozené od anorganických kyselin, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, fluorovodíková, boritá, fluorboritá, fosforečná, metafosforečná, dusičná, uhličitá, siřičitá a sírová, a od organických kyselin, jako je kyselina octová, benzensulfonová, benzoová, citrónová, ethansulfonová, fumarová, glukonová, glykolová, isethionová, mléčná, laktobionová, maleinová, malonová, methansulfonová, trifluormethansulfonová, jantarová, toluensulfonová, vinná a trifluoroctová. Vhodné organické kyseliny obecně zahrnují například následující třídy organických kyselin: alifatické, cykloalifatické, aromatické, arylalifatické, heterocyklické, karboxylové a sulfonové kyseliny.
Specifické příklady vhodných organických kyselin zahrnují acetát, trifluoracetát, formiát, propionát, sukcinát, glykolát, glukonát, diglukonát, laktát, malát, tartarát, citrát, askorbát, glukuronát, maleát, fumarát, pyruvát, aspartát, glutamát, benzoát, anthranilát, stearát, salicylát, p-hydroxybenzoát, fenylacetát, mandelát, pamoát, methansulfonát, ethansulfonát, benzensulfonát, pantothenát, toluensulfonát, 2-hydroxyethansulfonát, sulfanilát, cyklohexylaminosulfonát, 13hydroxybutyrát, galaktarát, galakturonát, adipát, alginát, butyrát, kafrát, kafrsulfonát, cyklopentanpropionát, dodecylsulfát, glykoheptanoát, glycerofosfát, heptanoát, hexanoát, nikotinát, 2naftalensulfonát, oxalát, palmoát, pektinát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, thiokyanát a undekanoát.
Předmětem vynálezu jsou rovněž následující helquaty:
2,4—bis((2i)—2—(thiofen—3—yljvinyl)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-
5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C5-9 (E)-2-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. USA-C13-8
-4CZ 307163 B6 (£)-13-(2-( 5-(ethoxy karbony 1)-1 H-pyrrol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,IO-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C828 (£)-13-(2-(5-brom-l//-indol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyM,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C9-30
2.13- bis((£)-2-(5-bromthiofen-2-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 a:r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. MJB-C5-3
2.13- bis((£)-2-(2,6-dimethoxypyridin-3-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. MJB-C8-27
19—((£)—2—( 1 —methy 1— 1 TY—indol—2—y l)vi ny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 '2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[r,2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C10-10
19—((£)—2—(2—methy 1— 1 £7—i ndol—3—y I )v i ny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3,5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2—a] ch inol i n—5,14-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C 10-11
19—((£)—2—( 177-benzo[g]indol-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3,5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C 13-16
19—((£)—2—(2—feny 1— 1 £7—indo I—3—y l)viny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l 4-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C 15-8
19—((£>-2—(1 ££—indol—5—y l)viny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ I '.2': I ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l 4-diium trifluormethansulfonát, tj. MSCC9-10
19-((£)-2-(5-brom-l/f-indol-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l 4-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C9-30
4.15— bis((£)—4—(py rid in—2—y 1 )sty ry I)—6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRA-C12-5
2,4,15,17-tetra( (£)-(2-( 1 -methyl-1 H-\ndo 1- 2-y 1 )vi ny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[l,2-a:l',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRC-C10-10 (£)-l l-(2-([2,2':5',2-terthiofen]-5-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJA-C13-6 (£)-l l-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7-dimethyI-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJA-C13-8
2.15- bis((£)-2-(2,6-dimethoxypyridin-3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ’,2'— k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C8-27 (£)-2-(2-(5-brom-177-indol-3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,’tj. LSA-C9-30
- 5 CZ 307163 B6 (£)-13-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2k][2,9]fenantrolin-3,l0-diium trifluormethansulfonát, tj. MSB-C13-8
2.15- bis((E)-2-(2-methyl-1 H-indol-3-yl)vinyl)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: 1 ',2'k][2,9][fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C10-11
2.15- bis((E)-2-( 1-methyl-1H-indol- 3-yljviny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: l',2'k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C10-13
2.15- bis((E)-2-(2-fenyl-l H—indol—3—yljviny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1 —a: l',2'k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C15-8
2.15- bis((E)-2-(5-brom-l H indol 3—yljviny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'k][2,9][fenantrolin-5,!2-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C9-30 (rac)-(E)-13-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C13-8
8.9- dimethyl-2,15-bis((E)-2-(2-methyl-l H indol—3—yIjvinyl)—6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,1-a: r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C10-11
2.15- b i s((E)2-(1 H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C8-14
2.4- bis((E)-2-( IH—i ndo 1—2—y 1) vi ny I)—6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: 1 ’,2'-k] [2,9]fenantrolin—5,12—diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C10-10
2.4- bis((E)-2-([2,2- bith iofen]-5-y 1 )vi ny I)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1 —a: 1 ',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C9-16
2.4- bis((E)-2-(benzofuran-2-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C9-17 (E)-2-(2( [2,2- bith iofen]-5-y 1) v i ny I)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1 —a: 1 ',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. LSA-C9-16 (E)-13-(2-(5-hexylthiofen-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,l 0-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C11-25 (E)—13—(4—(9//karbazol-9-yljsty ryl)-6,7-dimethy 1-4,5,8,9—tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,l0-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C19-4
8.9- dimethyl-2,13-bis((E)-2-(4-methyl-l H-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,l-a:r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. MJB-C5-11
19-((E)-2-(3-methylbenzo[b]thiofen-2-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3: 5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C10-36
19—((E)—2—([2,2'—bith iofen]—5—yl)v i ny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l4-diium trifluormethansulfonát, tj. MSCC9-16
-6CZ 307163 B6
19-((7)-2-(6-brom-l //-indol-3-yl )vinyl >6.7.8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 '2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, tj.
MSC-C9-18
2.15- bis((E)-2-(4-methyl-l 7f-imidazol-5-yl)viny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: l',2'k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C5-11
2.15- bis((£’)-2-(dibenzo[b,d]furan=:l-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C13-8 (rac)-2,4,13,15-tetrakis((E)-2-(thiofen-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2a:r,2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRC-C5-9 (Ti)—1 3-(2-(dibenzo[b,d]furan-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[ 1,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C13-22 (E)-13-(2-(4-fenylthiofen-2-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MSB-C11-7 (E)-l 3-(2-( l/7-benzo[g] indol—3—yl)vinyl)—4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[1.2-a]pyrido[ 1,2— k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MSB-C13-16
19-((7)-2-( 7-methy 1-1 H-indol-3-y 1 )v i ny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydopyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[r,2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, tj. MSC-C10-31 (£)-1 l-(2-(dibenzo[b,d]thiofen-4-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJA-C13-20 (rac)-(7)-13-(2-(9-ethyl-9H-karbazol-3-yl)vinyl)-6.7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C15I (rac)-8,9-dimethyl-2,l3-bis((E)-2-(thiofen-3-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydrodipyrido[2,la: 1 ',2'- k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. MJB-C5-9 (rac)-2,15—bis((jE7>—2—(1 H-indol-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. MJC-C9-7
4,13-bis((E)-2-(2-methyl-l H—indol—3—y l)vinyl)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2.1-a: l',2'k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJC-C10-11 (7)—1 l-(2-(benzo[d]thiazol-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l ,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj.VDJA-C8-5 (E)-6,7-dimethyl-l l-(2-(5-fenylthiofen-2-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj.VDJA-Cl 1-13 (rac)-(7)-2-(2-(4-nitro-l 77—i ndo 1—3—y 1) vi ny 1)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: 1 ',2'— £][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. LSA-C9-32 (rac)—(7)2-(2-( 6-isopropy 1—1 Z/-indol-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2a: l',2'-a']benzo[2, l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PSA-C12-6
- 7 CZ 307163 B6 (racj-2,17-bis((E)-2-( 1 H—i ndol—5—y 1 )v iny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRB-C9-10 (rac)-4,15-bis((£j-2-(2,5—dimethy 1—1 —(3—(trifluormethyl)fenyl)—1H—pyrrol—3—yl)vinyl)—
6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRA-C14-6
8,9—dimethyl—2,15—bis((A·)—2—(2—fenyl— 1H—indol—3—yl)vinyl)~6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,1—a: 1 ',2'—k][2,9]fenantrolin—5,12—diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C15-8 (rac)-2,4,15,17-tetrakis((E)-2-( 1 //—i ndo 1—2—y 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydro-dipyrido[ 1,2a: r,2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRC-C9-11 (rac)-2,4-bis((E)-2-( 1 -methyl -1H-pyrrol- 2-y l)vinyl)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,la:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C6-4 (rac)-2,4-bis((E)-2-(4-methyl-l/7-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydrodipyrido[2,la:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,l2-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C5-11
2,4,13,15-tetrakis((E)-2-( 1 -methy 1-1 H-indol-3-y 1) v iny 1)—6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. TKA-C10-13
Dále jsou předmětem vynálezu helquaty obecného vzorce I nebo konkrétní výše uvedené helquaty podle tohoto vynálezu, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití jako léčiva.
Předmětem vynálezu jsou dále helquaty obecného vzorce I nebo konkrétní výše uvedené helquaty podle tohoto vynálezu, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití ke stabilizaci G-kvadruplexů.
Dalším předmětem předkládaného vynálezu jsou helquaty obecného vzorce I nebo konkrétní výše uvedené helquaty podle tohoto vynálezu, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití jako léčiva k léčbě onkologických onemocnění.
Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1 nebo konkrétní výše uvedené helquaty podle tohoto vynálezu, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití k léčbě onemocnění souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách nebo v promotorech genů.
Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek, obsahující alespoň jeden helquat obecného vzorce I podle tohoto vynálezu, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.
Význakem tohoto vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek, který obsahuje alespoň jeden helquat obecného vzorce I podle tohoto vynálezu, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, případně i další aktivní složku a popřípadě alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo nebo ředidlo.
Předmětem vynálezu je dále farmaceutický prostředek, obsahující alespoň jeden helquat obecného vzorce 1 podle tohoto vynálezu, nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, pro použití k léčbě onkologických onemocnění, nemocí souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách nebo v promotorech genů.
Předmětem vynálezu je také použití helquatů obecného vzorce I podle nároku 1, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro přípravu léčiva.
- 8 CZ 307163 B6
Dalším předmětem předkládaného vynálezu je i použití helquatů obecného vzorce I podle tohoto vynálezu, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro výrobu léčiva k léčbě onkologických onemocnění, onemocnění souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách nebo v promotorech genů.
Vývoj nových stabilizátorů G-kvadruplexu je stále velmi žádoucí. Uplatní se zejména originální malé molekuly, účinné pro represi transkripce onkogenů a vykazující současně únosné množství nepříznivých vedlejších účinků. Pro komerční přípravu a využití nových stabilizátorů G-kvadruplexu je rovněž důležitou otázkou snadnost syntézy takových látek. Výhodou zde předkládaných helquatů je skutečnost, že jejich izolaci lze provést bez použití chromatografie, což přináší úspory času i materiálu.
Nově připravené helquaty překvapivě prokázaly významnou účinnost při stabilizaci G-kvadruplexů. Představují tak velmi nadějnou novou skupinu látek, vhodných pro aplikace spojené se stabilizací G—kvadruplexu. Jsou využitelné k ovlivnění exprese proteinů, spojených s procesy nezbytnými pro vznik a rozvoj nádorových onemocnění, jako jsou např. proliferace, růst, invazi vita, metastázování, přežití/odolnost vůči apoptóze, angiogeneze, a podobně. Mezi takové proteiny patří transkripční faktory c-myc, c-inyb. HIFI a (hypoxia-inducible factor la), vaskulární endotelový růstový faktor (VEGF, vascular endothelial growth factor), destičkový růstový faktor (PDGFA, platelet-derived growth factor oc polypeptide), KRAS, protein BCL-2 (B cell lymphoma 2), receptor pro destičkový růstový faktor (PDGFRp, PDGF receptor β polypeptide), proteinová podjednotka lidské telomerázy (TERT, human telomerase reverse transcriptase), ADAM15.
Schopnost stabilizace G-kvadruplexu byla demonstrována pomocí in vitro experimentů: FRET analýzy a ECD spektroskopie.
Ovlivnění exprese proteinů použitím helquatů, které jsou předmětem vynálezu, byla demonstrována pomocí duální luciferázové reportérové (DLR) analýzy a Western Blotu.
Měření interakce G-kvadruplexu s ligandem pomocí FRET analýzy je zavedeným a běžně používaným přístupem pro stanovení schopnosti ligandu stabilizovat G-kvadruplex. Tato metoda zároveň umožňuje stanovit selektivitu ligandu vůči G-kvadruplexu ve srovnání s dvouvláknovou DNA [De Cian A. a spol. (2007) Methods, 42, 183-195], Řada takto testovaných helquatů prokázala schopnost významně stabilizovat G-kvadruplexy, které se tvoří v důležité části regulační sekvence promotoru c-myc genu (tab. 1) a v lidských telomerách (tab. 2) a to i v přítomnosti nadbytku kompetitoru, představujícího dvouvláknovou DNA (ds26). Bylo zjištěno, že ve srovnání s G-kvadruplexovým ligandem TMPyP4, který se běžně používá jako pozitivní kontrola, stabilizují helquaty podle tohoto vynálezu G-kvadruplex s podstatně větší selektivitou.
Měření ECD spekter je další z citlivých metod, umožňující určit míru stabilizace G-kvadruplexu v přítomnosti ligandu. ECD spektroskopie potvrdila schopnost vybraných helquatů (tab. 4) významně stabilizovat c-myc promotorovy G-kvadruplex. Dokládají to experimenty používající modelový oligonukleotid c-Myc27, který má stejnou sekvenci jako NHE III, segment v c-myc regulační oblasti.
Pomocí duální luciferázové analýzy byla na buněčné úrovni zjištěna neobvykle vysoká schopnost helquatů inhibovat expresi luciferázy, která je řízena regulační oblastí c-myc genu obsahující NHE IIIi segment. NHE 111] obsahuje G-bohatou sekvenci schopnou tvorby paralelního Gkvadruplexu. Je prokázáno, že stabilizace c-myc promotorového G-kvadruplexu v NHE IIIi segmentu vede ke snížení exprese c-myc transkripčního faktoru, případně reportérového enzymu (firefly luciferáza), jehož exprese je touto regulační oblastí řízena [Siddiqui-Jain A. a spol. (2002) PNAS, 99, 11593—11598; Brooks T. A. (2010), Genes & Cancer, 1, 641—649. Analýza například ukázala, že pět helquatů (VDJA-CI3-6, LSA-C13-8, MJA-C9-30, MJA-C13-8, MSC-C9-10) inhibovalo expresi firefly luciferázy více než o 40 % ve srovnání s kontrolou (tab. 5). V případě
-9CZ 307163 B6 látky VDJA-CI3-6 se jednalo o inhibici exprese o více než 70 %). Devět helquatů (VDJA-C138, MSC-C10-11, MSC-C9-30, MJB-C5-9, MJB-C5-3, LSA-C9-32, MJA-C8-28, MSCC15-8, PDA-C8-27) inhibovalo expresi o více než 20 % a dalších pět látek (HTA-C5-9, MJBC8-27, MSC-C 13-16, MSC-C10 10. PRA-C12-5) o více než 10% ve srovnání s kontrolou. Výsledky byly potvrzeny minimálně dvěma nezávislými experimenty (každý v tetraplikátu). U dvou látek, MJA-C13-8 a VDJA-C13-6, byla také prokázána koncentrační závislost uvedeného inhibičního efektu (tab. 6). Detailní výsledky jsou uvedeny níže, v sekci nazvané Stabilizace G-kvadruplexu promotorové oblasti c-myc genu.
Pomocí metody imunodetekce byl na buněčné úrovni stanoven krátkodobý (24 hodin) vliv helquatů na expresi c-myc proteinu. V experimentech byla použita nádorová buněčná linie HGC-27 overexprimující c-myc protein. Helquaty uvedené v tabulce 7 snižovaly množství c-myc proteinu minimálně o 15 % a u více než poloviny látek bylo zjištěno snížení ve srovnání s kontrolou převyšující 40 %. Výsledky byly potvrzeny minimálně dvěma nezávislými experimenty. U nezanedbatelného počtu helquatů (MSC-C9-30, LSA-CI3-8, MJA-C8-28, MJB-C5-9, MJA-C138, MSC-C 15-8, PRC-C10-10, VDJA-C13-8) tak byla zjištěna shoda mezi výsledky ovlivnění exprese reportérového enzymu řízeného c-myc regulační oblastí získanými v duální luciferázové analýze a výsledky stanovení množství c-myc proteinu v nádorových buňkách.
Antiproliferační účinky helquatů byly testovány pomocí XTT cytotoxicitního/proliferačního testu na nádorové buněčné linii CCRF-CEM a normální (nenádorové) buněčné linii endoteliálních buněk z unbilikální vény HUVEC po dobu 72 hodin. Helquaty uvedené v tabulce 9 byly výrazně toxičtější vůči nádorové buněčné linii a netoxické, nebo méně toxické, vůči linii nenádorové. Deset testovaných helquatů (MSC-C 13-16, MSC-C9-30, MJA-C13-22, MSC-C9-16, MSCC9-I0, MSC-C 10-10, MSB-C11-7, MSC-C 10-11, VDJA-C13-20, LSA-C9-32) bylo toxických vůči CCRF-CEM buňkám v koncentraci nižší než 25 μηιοΙ.Γ1 a netoxických vůči HUVEC buňkám v koncentraci vyšší než 100 μηιοΙ.ΓNaměřené hodnoty ICso byly získány z minimálně tří nezávislých experimentů.
Vynález bude dále ozřejměn příklady provedení, které ho však žádným způsobem nelimitují.
Objasnění výkresů
Obr. 1 znázorňuje spektra ECD oligonukleotidu c-Myc27 při teplotách 25 °C a 95 °C; svislá čára odpovídá maximálnímu rozdílu signálu spekter a určuje vlnovou délku zvolenou pro sledování tání struktury G-kvadruplexu.
Obr. 2 znázorňuje závislost intenzity ECD detekované u 263 nm na teplotě roztoku oligonukleotidu c—Myc27 v přítomnosti ligandu PDB-C10—1 1 (molární poměr oligonukleotid : ligand =1:1).
Příklady uskutečnění vynálezu
Číselné údaje chemických posunů v NMR spektrech jsou uvedeny v ppm.
Notace v NMR spektrech: s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet).
Seznam zkratek:
| ATCC/LGC BCA metoda | Američan Type Cell Collection dle LGC standardů metoda stanovení množství proteinu založená na použití 2,2'—bichinolin— 4.4'-dikarboxylové kyseliny |
- 10 CZ 307163 B6
| c-myc | gen kódující transkripční faktor c-myc (avian myelocytomatosis virus oneogene cellular homolog) |
| c-myc DMSO ds26 | transkripční faktor c-myc dimethylsulfoxid oligonukleotid tvořící dvouvláknovou vlásenku |
| ATm ECD EDTA EGF F21T | rozdíl teplot tání elektronický cirkulární dichroismus disodná sůl ethylendiamintetraoctové kyseliny epidermální růstový faktor sekvence z lidské telomery dlouhá 21 nukleotidů, značená na 5'- konci FAM a na 3'-konci TAMRA |
| FAM firefly luciferáza Fmyc27T | fluorescein luciferáza odvozená z luciferázy světlušek sekvence z promotoru c-myc genu dlouhá 27 nukleotidů, schopná vytvářet G-kvadruplex, značená na 5'-konci FAM a na 3'-konci TAMRA |
| FBS | fetální hovězí sérum |
| FRET | Forsterův rezonanční přenos energie |
| G c-Myc27 | guanin sekvence z promotoru c-myc genu dlouhá 27 nukleotidů, schopná vytvářet G-kvadruplex |
| h HGC-27 | hodina lidská buněčná linie odvozená z metastatické lymfatické uzliny pacienta se žaludečním nádorem |
| NHE III1 | nukleázový hypersenzitivní element (NHE) III 1 v oblasti promotoru cmyc genu |
| HRP | křenová peroxidáza |
| HSV-TK | promotor thymidin kinázy viru herpes simplex (HSV) |
| IC5O | koncentrace testované látky, působící pokles počtu viabilních buněk na polovinu (tj. 50% zpomalení dělení buněk) vzhledem ke kontrolní, neovlivněné populaci |
| PBS PCR pGL4.10 (luc2) pGL4.10-myc (luc2) PhIC PMS | fosfátem pufrovaný fyziologický roztok polymerázová řetězová reakce vektor kódujícífirefly luciferázu bez promotoru vektor kódujícífirefly luciferázu s regulační oblastí c-myc směs inhibitorů fosfatáz phenazine methosulfate |
| PrIC pRL-TK | směs inhibitorů proteáz savčí ko-reporterový vektor s nízkou konstitutivní expresí Renilla luciferázy |
| PVDF membrána RIPA | membrána z polyvinyliden difluoridu radioimunoprecipitační pufr (radioimmunoprecipitation assay buffer) |
| SD | směrodatná odchylka |
| SDS-PAGE TAMRA | polyakryiamidový gel s dodecylsíranem sodným pro elektroforézu karboxytetramethylrhodamin |
- 11 CZ 307163 B6
TBS-T roztok tris(hydroxymethyl)aminomethanu, chloridu sodného a Tween-20 (50 mmol.l1 Tris, 150 mmol.l 1 NaCI, 0,05% Tween-20
I. Syntéza látek
Struktury výchozích helquatů A až Q jsou následovně:
G
E
F
- 12 CZ 307163 B6
Příklad 1 (rac)-(E)-l 3-(2-(Dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7-dimethylA,5,8,9-tetrahydroisochinolin[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C13-8
Výchozí helquat A (40 mg, 1 ekv., 59 pmol), dibenzo[b,d]furan-4-karbaldehyd (60 mg, 5 ekv., 306 pmol), pyrrolidin (30 mg, 35 μΙ, 7 ekv., 419 μηιοί) a suchý methanol (1 ml) byly umístěny do baňky o objemu 5 ml a směs byla míchána pod argonem po dobu 2 h za teploty místnosti. Postup reakce byl sledován pomocí tenkovrstvé chromatografie. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (40 ml). Suspenze byla odstředěna a kapalný podíl byl oddělen od pevné látky. Pevný podíl byl částečně rozpuštěn v methanolu (3 ml), směs byla promíchána a rozpuštěný produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (40 ml). Následovalo odstředění této suspenze, odstranění kapalného podílu a se získaným pevným podílem byla tato procedura ještě dvakrát zopakována. Pevný podíl byl poté vysušen pod vakuem za použití olejové pumpy. Takto bylo získáno 36 mg (42 pmol, 71% výtěžek) světle žluté pevné látky MJA-C13-8.
2CF,SO,'
'H NMR (400 MHz, aceton-d6): 2.67 (s, 3H), 2,67 (s, 3H). 3,31 (m, 2H), 3,69 (dq, J = 5,4, 1,9 Hz, 1H), 3,73 (ddd, J = 7,5, 3,4, 1,7 Hz, IH), 5,04 (m, 3H), 5,21 (ddd, J = 13,9, 4,5, 1,6 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 16.4 Hz. IH), 7.43 (d, J = 16,4 Hz, IH), 7,57 (t, J =
7.6 Hz, IH), 7,60 (td, J = 7,7, 0,9 Hz, IH), 7,69 (dd, J = 7,7, 0,8 Hz, IH), 7,76 (ddd, J = 9,7, 6,7, 1,3 Hz, 2H), 7,82 (dd, J = 6,6, 1,9 Hz, IH), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, IH), 8,24 (dd, J = 7,7, 0,5 Hz, 1H), 8,25 (dd, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H). 8,49 (d, J = 6,7 Hz, 1H). 8,68 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 8,90 (d, J =
6.7 Hz, IH).
Příklad 2 (rac)-(£)-13-(2-(9-Ethyl-9H-karbazol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj. MJA-C15-
Výchozí helquat A (100 mg, 1 ekv., 148 pmol), 9-ethyl-9H-karbazol-3-karbaldehyd (66 mg, ekv., 296 pmol), pyrrolidin (74 mg, 86 pl, 7 ekv., 1,035 mmol) a suchý methanol (1 ml) byly umístěny do baňky o objemu 5 ml a směs byla míchána pod argonem po dobu 2 h za teploty místnosti. Postup reakce byl sledován pomocí tenkovrstvé chromatografie. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (40 ml). Suspenze byla odstředěna a kapalný podíl byl oddělen od pevné látky. Pevný podíl byl částečně rozpuštěn v methanolu (5 ml), směs byla promíchána a rozpuštěný produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (40 ml). Následovalo odstředění této suspenze, odstranění kapalného podílu a se získaným pevným podílem byla tato procedura ještě dvakrát zopakována. Pevný podíl byl poté vysušen pod vakuem za použití olejové pumpy. Takto bylo získáno 67 mg (76 pmol, 51 % výtěžek) světle žluté pevné látky M.IAC15-1.
- 13 CZ 307163 B6
'Η NMR (400 MHz, aceton-d6) δ 1,45 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 3,11 (td, J = 16,0, 4,5 Hz, IH), 3,26 (m, 2H), 3,58 (dd, J = 15,3, 1,6 Hz, 1H), 4,58 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 5,00 (td, J = 14,1, 3,6 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 13,8, 3,7 Hz, 1H), 5,29 (m, 2H), 6,77 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,35 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,69 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,78 (dd, J = 6,7, 1,8 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,90 (d, J =
8,7 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,41 (d, J = 6,6 Hz, IH), 8,74 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 8,97 (d, J = 6,7 Hz, 1H).
Příklad 3 (rac)-8,9-dimethyl-2,13-bis(E)-2-(thiofen-3-y l)viny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,la: r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. MJB-C5-9
Výchozí helquat M (40 mg, 1 ekv., 62 μιηοΙ), thiofen-3-karbaldehyd (210 mg, 30 ekv., 1,873 mmol), pyrrolidin (67 mg, 78 μΙ, 15 ekv.. 937 μιηοΙ) a suchý methanol (1 ml) byly umístěny do baňky o objemu 5 ml a směs byla míchána pod argonem po dobu 12 h za teploty místnosti. Postup reakce byl sledován pomocí tenkovrstvé chromatografie. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (40 ml). Suspenze byla odstředěna a kapalný podíl byl oddělen od pevné látky. Pevný podíl byl částečně rozpuštěn v methanolu (5 ml), směs byla promíchána a rozpuštěný produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (40 ml). Následovalo odstředění této suspenze, odstranění kapalného podílu a se získaným pevným podílem byla tato procedura ještě dvakrát zopakována. Pevný podíl byl poté vysušen pod vakuem za použití olejové pumpy. Takto bylo získáno 48 mg (43 μιηοΙ, 69% výtěžek) světle žluté pevné látky MJB-C5-9.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d,) δ 2,44 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 3,03 (m, 2H), 3,45 (m, 2H), 4,53 (td, J = 14,6, 3,4 Hz, 1H), 4,61 (td, J = 15,6, 15,2, 3,7 Hz, 1H), 4,83 (dd, J = 14,0, 4,0 Hz, IH), 5,30 (dd, J = 14,2,3,3 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 5,1, 1,0 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 5,1, 2,9 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 5,4,
3,2 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 7,3, 2,5 Hz, 1H), 7,89 (dd, 2,9, 1,0 Hz, 1H), 8,00 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 8,06 (dd, J = 8,2, 1,4 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 6,6 Hz, IH).
- 14CZ 307163 B6
Příklad 4 (rac)-2,15-bis((E)-2-( 1 H—i ndol—3 —y 1 )v iny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: I ',2 — a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. MJC-C9-7
Výchozí helquat J (35 mg, 1 ekv., 55 μιηοΙ), 1 H-indol-3-karbaldehyd (238 mg, 30 ekv., 1,639 mmol), pyrrolidin (58 mg, 68 μΙ, 15 ekv., 820 μηιοί) a suchý methanol (1 ml) byly umístěny do baňky o objemu 5 ml a směs byla míchána pod argonem po dobu 16 h za teploty místnosti. Postup reakce byl sledován pomocí tenkovrstvé chromatografie. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (40 ml). Suspenze byla odstředěna a kapalný podíl byl oddělen od pevné látky. K pevnému podílu byl přidán diethylether (35 ml), suspenze byla promíchána a odstředěna. Získaný pevný podíl byl částečně rozpuštěn v methanolu (3 ml), směs byla promíchána a rozpuštěný produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (40 ml). Následovalo odstředění této suspenze, odstranění kapalného podílu a se získaným pevným podílem byla tato procedura ještě dvakrát zopakována. Pevný podíl byl poté vysušen pod vakuem za použití olejové pumpy. Takto bylo získáno 32 mg (36 pmol, 66% výtěžek) červené pevné látky MJC-C9-7.
H NMR (400 MHz, acetonitril-d3) δ 2,34 (m, 2H), 2,49 (m, 2H), 2,61 (m. IH), 2,80 (m, IH), 2,99 (dd, J = 14,1, 6,5 Hz, IH), 3,07 (m, IH), 4,35 (td, J = 13,4, 5,0 Hz, IH), 4,40 (dd, J = 15,6, 5,3 Hz, IH), 4,58 (dd, J = 13,9, 6,3 Hz, IH), 5,13 (dd, J = 14,6, 5,5 Hz, IH), 6,98 (dd, J = 7,7,
1,1 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 16,2 Hz, IH), 7,12 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 7,6 Hz, IH), 7,30 - 7,38 (m,3H), 7,50 (d, J = 8,1 Hz. IH), 7,59 (dd, J = 6,0, 2,8 Hz, IH), 7,68 (d, J = 7,8 Hz, IH), 7,70 (d, J = 7,8 Hz. IH), 7.73 (s. IH), 7,88 - 8,01 (m, 5H), 8,02 - 8,06 (m, 1 H), 8,09 (d, J = 15,6 Hz, I H), 8,20 (d, J = 8,5 I Iz, 1 H), 8.5 I (d,J = 6,8 Hz, 1 H).
Příklad 5
4,13-bis((£')-2-(2-methyl-l H—i ndo 1—3—y I) v i ny 1)—6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: 1 ’,2'— k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJC-C10-11
Výchozí racemický helquat N (10 mg, 16,3 μπιοί), 2-methyl-l H-indoI-3-karbaldehyd (78 mg,
489,7 μιηοΙ), pyrrolidin (20 μΙ, 244,8 μιτιοΙ), a suchý methanol (1 ml) byly dány do 10 ml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 24 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (8 ml). Vzniklá suspenze byla odstředěna a supernatant byl oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v acetonitrilu (6 ml) a čistý produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (36 ml). Potom odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k 8,7 mg (9,8 μιτιοΙ, 60% výtěžek) oranžové pevné látky VDJC-C10-11.
- 15 CZ 307163 B6
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,68 (s, 6H), 3,08-3,23 (m, 4H), 4,31-4,58 (m, 2H), 5,165,36 (m, 2H), 7,27-7,33 (m, 6H), 7,48 (dd, .7= 2,1, 5,6 Hz, 2H), 7,50 (dd, /=1,3, 7,9 Hz 2H), 7,69 (s, 2H), 7,91 (t, J= 8,1 Hz, 2H), 7,99 (d, J= 15,5 Hz, 2H), 8,06 (dd, J= 2,0, 5,4 Hz, 2H), 8,21 (dd, J = 1,1,8,4 Hz, 2H), 10,15 (bs,2H).
Příklad 6 (E)-l l-(2-(benzo[d]thiazol-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydro isochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,IO-diium trifluormethansulfonát, tj. VDJA-C8-5
Výchozí racemický helquat B (20 mg, 29,6 pmol), benzo[d]thiazol-2-karbaldehyd (121 mg, 739 pmol), pyrrolidin (30 μΐ, 367,2 μιηοΐ) a suchý acetonitril (2 ml) byly dány do 10 ml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 1 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (16 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant byl oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (2 ml) a čistý produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (12 ml). Potom odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k 14 mg (17,0 pmol, 58% výtěžek) oranžové pevné látky VDJA-C 8-5.
'H NMR (400 MHz, acetone-d6): 2,67 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 3,49-3,54 (m, 2H), 3,82 (dq, J= 1,7,
17,1 Hz, 1H), 3,89 (dq, .7= 1,7, 17,1 Hz, 1H), 5,17 (dt, .7= 3,4, 14,6 Hz, 1H), 5,33 (dt, J= 3,7, 14,0 Hz, 1H), 5,40 (dd, .7 = 1,6, 13,9 Hz, 1H), 5,75 (dd, .7 = 1,6, 13,9 Hz, 1H),7,61 (dt, J =
1,2,7,2 Hz, 1H), 7,64 (dt, .7 = 1,3, 8,2 Hz, 1 H),7,69 (dt, J = 1,3, 7,2 Hz, 1H), 7,88 (dt, J= 1,2, 6,8 Hz, 1 H),7,91 (t,.7=8,l Hz, 1H), 8,00 (d,<7= 15,8 Hz, 1H), 8,02 (t, J= 1,2 Hz, 1H), 8,17 (dq, J = 0,7, 8,1 Hz, 1H), 8,18 (dd, J = 0,8, 8,7 Hz, IH), 8,22 (dq, .7 = 0,7, 8,1 Hz, 1H), 8,24 (dd, J = 1,3, 8,1 Hz, 1H), 8,31 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 8,41 (d, .7 = 15,9 Hz, 1H), 8,58 (d, .7= 6,7 Hz, 1H), 9,06 (d, ,7 = 6,7 Hz, 1H).
Příklad 7 (E)-6,7-dimethyl-l l-(2-(5-fenylthiofen-2-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydro isochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, tj.VDJA-Cl 1-13
Výchozí racemický helquat B (10 mg, 14,78 pmol), 5-fenylthiofen-2-karbaldehyd (53,87 mg,
147,8 pmol), pyrrolidin (15 μΙ, 183,6 pmol), a suchý methanol (I ml) byly dány do 10 ml baňky
- 16CZ 307163 B6 a výsledná směs byla míchána pod argonem 2 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (8 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant byl oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (2 ml) a čistý produkt byl vysrážen přidáním diethyletheru (16 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 9,0 mg (10,6 pmol. 72% výtěžek) žluté pevné látky VDJACll-13.
'H NMR (400 MHz, acetone-d6): 2,64 (s, 3H), 2,65 (s, 3H), 3,11-3,31 (m, 2H), 3,62 (dd, J= 2,0,
17.2 Hz, 1H), 3,66 (dd, J = 1,7, 17,4 Hz, IH), 4,80 (dt, J = 2,6, 13,0 Hz, 1H), 4,89 (dt, J = 2,6, 13,0 Hz, 1H), 5,10 (dd, J= 2,1, 13,9 Hz, 1H), 5,39 (dd, 7=2,1, 13,9 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 1,1,
6,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 7,54 (dt, J = 7,3, 1,4, 2,16 Hz, 1H), 7,59 (dd, J= 1,5,
2.2 Hz, 1H), 7,61 (d, .7 = 3,9, 1H), 7,63 (d,./=3,9 Hz, 1H), 7,64 (d,J=3,9 Hz, 1H), 7,66 (d,J = 3,9, 1H), 7,76 (dd, J= 1,2, 7,3 Hz, 1H), 7,86-7,91 (m, 5H), 7,99 (dd,7 = 1,1,7,1 Hz, 1H), 8,22 (d, .7=9,3 Hz, 1H), 8,40 (d, .7= 6,7 Hz, 1H), 8,70 (d,.7=6,8 Hz, 1H).
Příklad 8 {racý-(E)~2-(2-(4-nitro-1 //-indol-3-yl)viny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-r/: Γ,2'Áj[2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. LSA-C9-32
Výchozí racemický helquat E (12,7 mg, 21,2 μιηοΙ, 1 ekv.), 4-nitro-l//-indol-3-karbaldehyd (52,3 mg, 275,0 pmol, 13 ekv.), piperidin (25 μΐ, 21,7 mg, 254,6 pmol, 12 ekv.) a suchý methanol (1 ml) byly dány do Schlenkovy zkumavky a výsledná směs byla míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (15 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant byl oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (15 ml) celkem dvakrát. Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu LSA-C9-32 na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 13,1 mg (17,0 pmol, 80% výtěžek) tmavé pevné látky.
'H NMR (400 MHz, aceton itril-d3-l.94): 3,25-3,33 (m, 4H), 4,60-4,98 (m, 4H), 6,82 (d, J = 16,0, 1H), 7,32 (t, 7 = 8,0; 8,0 Hz, 1 H), 7,68-7,70 (m, 4H), 7,87-7,91 (m, 2H), 7,96 (dd, J = 8,0; 1,0 Hz, 1H), 7,98 (dd,7 = 15,9; 0,7 Hz, 1 H), 8,06 (dd, J= 8,3; 1,5 Hz, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,20 (td, 7=7,9; 7,9; 1,5 Hz, 1H), 8,45 (d,7=7,3 Hz, 1H), 8,86 (dd. 7=6,4; 1,3 Hz, 1H).
- 17CZ 307163 B6
Příklad 9 (rac)-(E)-2-(2-(6-isopropyl-l /7 i ndoI—3—y 1)v i ny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2a: l',2'- a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PSA-C12-6
Výchozí racemický helquat F (14,2 mg, 22,7 μιηοΙ, I ekv.), 6-isopropyl-l//-indol-3-karbaldehyd (63,2 mg, 337,5 pmol, 15 ekv.), pyrrolidin (15 μΙ, 12,9 mg, 181,3 pmol, 8 ekv.) a suchý methanol (1 ml) byly dány do Schlenkovy zkumavky a výsledná směs byla míchána pod argonem 1,5 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (15 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v acetonitrilu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (15 ml) celkem dvakrát. Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 13,7 mg (17,2 pmol, 76% výtěžek) hnědé pevné látky PSA-C12-6.
'HNMR (400 MHz, acetonitril-ds-l .94): 1,28 (d, J= 6,9 Hz, 6H), 2,26-2,72 (m), 2,96-3,06 (m), 4,28-4,36 (m, 1H), 4,53 (dd, J= 14,0; 6,1 Hz, 1H), 4,63 (td, J= 13,4; 13,2; 5,6 Hz, 1H), 4,86 (dd, J = 13,6; 6,3 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 16,0, 1H), 6,93 (d, ./=2,2 Hz, 1H), 7,16 (dd, J= 8,3; 1,6 Hz, 1H), 7,39-7,41 (m, 2H), 7,69 (s, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,83-7,90 (m, 3H), 7,93 (ddd, J= 7,8; 6,2; 1,5 Hz, 1H), 8,23 (td, J = 7,9; 7,9; 1,5 Hz, 1H), 8,45 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 8,91 (dd, J = 6,2;
1,8 Hz, 1H).
Příklad 10 (rac)-2,17-bis((E)-2-( 1H indol—5—yI)viny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-cjbisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRB-C9-10
Výchozí racemický helquat H (30 mg, 47 pmol, 1 ekv.), 1 H-indol-5-karbaldehyd (204 mg, 1.40 mmol, 30 ekv.), piperidin (74 ml, 750 pmol) a suchý methanol (1 ml) byly dány do 10 ml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 1 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (34 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (2 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (34 ml) celkem čtyřikrát. Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 24 mg (27 pmol, 57% výtěžek) oranžové pevné látky PRB-C9-10.
- 18CZ 307163 B6 'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,34-2,44 (m, IH), 2,46-2,67 (m, IH), 2,60-2,69 (m, IH),
3,01 (dd, .7=6,2, 13,7 Hz, IH), 4,46 (td,.7=5,6, 13,2 Hz, IH), 4,71 (dd, .7=6,2, 13,8 Hz, IH),
6,53-6,54 (m, IH), 7,09 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7,3 1-7,32 (m, 1H), 7,437,50 (m,2H), 7,70 (s, IH), 7,72 (d, J= 16,1 Hz, IH), 7,83 (s, IH), 7,99 (dd,.7= 1,9, 6,7 Hz, IH),
8,66 (d, J= 6,7 Hz, 1H), 9,63 (bs, 1H).
Příklad 11 (rac)-4,15-bis((£)-2-(2,5-dimethyl-l-(3-(trifluormethyl)fenyl)-lH-pyrrol-3-yl)vinyl)6,7,8,11,12,13-hexhydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'-a']benzo[2,1 -c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRA-C14-6
Výchozí racemický helquat G (30 mg, 47 pmol, 1 ekv.), 2,5-dimethyl-l-(3-(trifluormethyl)fenyl)-lH-pyrrol-3-karbaldehyd (375 mg, 1,40 mmol, 30 ekv.), pyrrolidin (62,5 ml, 750 pmol) a suchý methanol (1 ml) byly dány do 10 ml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 30 min za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (34 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (2 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (34 ml) celkem čtyřikrát. K pevnému podílu byl přidán THF (0,5 ml) a suspenze byla odstředěna. Po odstranění supernatantu byl pevný podíl přečištěn dvakrát diethyletherem (5 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 34 mg (30 pmol, 64% výtěžek) žluté pevné látky PRA-C14-6.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,04 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,29-2,38 (m, IH), 2,41-2,49 (m, IH), 2,70 (tt, J= 5,9, 13,0 Hz, IH), 3,03 (dd, .7 = 5,9, 13,8 Hz, IH), 4,28 (id, J= 5,0, 14,1 Hz, IH), 4,99 (dd, .7 = 5,6, 14,5 Hz, IH), 6,62 (s, 1 H), 6,93 (dd, J = 1,3, 7,7 Hz, IH), 6,99 (d, J =
15,1 Hz, IH), 7,57-7,60 (m, IH), 7,67-7,68 (m, 2H), 7,78 (t, J= 7,9 Hz, IH), 7,84-7,91 (m, 3H), 8,24 (dd, 7 = 1,0, 8,6 Hz, IH).
Příklad 12
2,15-bis((E)-2-(2,6-dimethoxypyridin-3-yl)vinyl)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1 -a: 1 ’,2'— k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C8-27
Výchozí racemický helquat K (30 mg, 49,0 pmol), 2,6-dimethoxynicotinaldehyd (245,6 mg, 1,47 mmol), piperidin (72 ml, 734,6 pmol) a suchý methanol (2 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (30 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant byl oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (30 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k 35 mg (38,4 pmol, 78% výtěžek) žluté pevné látky PDA-C8-27.
- 19CZ 307163 B6
'Η NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 3,26-3,30 (m, 4H), 3,94 (s, 6H), 3,99 (s, 6H), 4,68-4,72 (m, 2H), 4,78-4,81 (m, 2H), 6,37 (d, J = 8,32 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 16,32 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 16,32 Hz, 2H), 7,68-7,71 (m, 4H), 7,85 (dd, = 1,93 Hz, Λ = 6,64 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 1,85 Hz, 2H), 8,60 (d, J = 6,64 Hz, 2H)
Příklad 13
2,15-bis((£)-2-(1 - methyl-1 H-indol-3- yl)vinyl)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2’k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDA-C10-I3
Výchozí racemický helquat K (30 mg, 49,0 μιηοΙ), l-methyl-lH-indol-3-karbaldehyd (233,9 mg, 1,47 mmol), piperidin (72 ml, 734,6 μιηοΙ) a suchý methanol (2 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (30 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (30 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 37 mg (41,3 μιηοΙ, 84% výtěžek) tmavě červené pevné látky PDA-CI0-13.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 3,27-3,30 (m, 4H), 3,77 (s, 6H), 4,64-4,68 (m, 2H), 4,764,78 (m, 2H), 6,91 (d, J= 10,70 Hz, 2H), 7.20-7,23 (m, 2H), 7,29-7,32 (m, 2H), 7,43 (d, J = 5,47 Hz, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,63 (d, J= 10,69 Hz, 2H), 7,68 (s, 2H), 7,80-7,83 (m, 4H), 7,92 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 8,52 (d, 7 = 4,48 Hz, 2H).
Příklad 14
8,9-dimethyl-2a5-bis((£)- 2-(2- fenyl-1H-indol- 3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,la: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C15-8
Výchozí racemický helquat L (30 mg, 46,8 μιηοΙ), 2-fenyl-lH-indol-3-karbaldehyd (310,8 mg, 1,40 mmol), piperidin (69 ml, 702,4 μηιοΙ) a suchý methanol (2 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monito-20CZ 307163 B6 rován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (30 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (30 ml).
Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k získání 49 mg (46,8 μιηοΙ, 81% výtěžek) tmavě červené pevné látky PDB-C15-8.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,43 (s, 6H), 3,01-3,10 (m, 2H), 3,42-3,46 (m, 2H), 4,524,59 (m, 2H), 4,71-4,75 (m, 2H), 7,02 (d, J=16 Hz, 2H), 7,18 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 7,28 (t, J =
7,1 Hz, 2H), 7,38 (d, J= 7,4 Hz, 2H), 7,46-7,62 (m, 14H), 7,68 (d, J= 1,49 Hz, 2H), 7,87 (d,./ = 8 Hz, 2H), 8,20 (d, 7 = 6,68 Hz, 2H).
Příklad 15
8,9-dimethyl-2,15-bis((E)-2-(2-methyl-l H-indol-3-y l)vinyl)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C10-11
Výchozí racemický helquat L (30 mg, 46,8 μιηοΙ), 2-methyl-lH-indol-3-karbaldehyd (223,6 mg, 1,40 mmol), piperidin (69 ml, 702,4 μιηοΙ) a suchý methanol (2 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (30 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (1 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (30 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k získání 38 mg (41,2 μιηοΙ, 88% výtěžek) tmavě červené pevné látky PDB-C10-11.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,43 (s, 12H), 3,02-3,10 (m, 2H), 3,42-3,46 (m, 2H), 4,604,66 (m, 2H), 4,76-4,79 (m, 2H), 6,89 (d, J = 16 Hz, 2H), 7,12-7,19 (m, 4H), 7,36 (d, J = 8,16 Hz, 2H), 7,63 (d, J= 16 Hz, 2H), 7,78-7,85 (m, 6H), 8,46 (d. J= 6,74 Hz, 2H).
Příklad 16
2,15—bis((2T)—2—(1H—pyrrolo[2,3—b]pyridin—3—yl)—vinyl—8,9—dimethyl—6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. PDB-C8-14
Výchozí racemický helquat L (30 mg, 46,8 μιηοΙ), 1 H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-karbaldehyd (205,3 mg, 1,40 mmol), piperidin (69 ml, 702,4 μιηοΙ) a suchý methanol (2 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs míchána pod argonem 6 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (30 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (I ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (30 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supematantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k zisku 31 mg (34,6 μιηοΙ, 74% výtěžek) žluté pevné látky PDB-C8-14.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,45 (s, 6H), 3,05-3,12 (m, 1H), 3,42-3,49 (m, 2H), 4,624,70 (m, 1H), 4,80-4,85 (m, 2H), 6,94 (d, J= 16,21 Hz, 2H), 7,17-7,20 (m, 2H), 7,60 (d, J = 16,21 Hz, 2H), 7,68-7,72 (m, 4H), 7,84 (dd, J, = 1,34 Hz, Λ = 6,46 Hz, 2H), 8,20 (dd, J, = 1,26 Hz, J2 = 8,03 Hz, 2H), 8,3 1-8,32 (m, 2H), 8,54 (d, J= 6,79 Hz, 2H).
Příklad 17 (rac)-2,4,15,17-tetraki s((£)-2- (1 H-indol-2-y 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydro-dipyrido[ 1,2a;l',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRC-C9-11
Výchozí racemický helquat Q (10,0 mg, 14,9 μιηοΙ), l//-indol-2-karbaldehyd (138 mg, 957 μιηοΙ), pyrrolidin (39 ml, 478 μιηοΙ) a suchý methanol (0,5 ml) byly dány do 10 ml baňky a výsledná směs míchána pod argonem 1 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (5 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (0,5 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (5 ml). Stejná procedura byla zopakována s tetrahydrofuranem (0,5 ml) - diethyletherem (5 ml) a acetonitrilem (0,3 ml) - diethyletherem (5 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supematantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy vedlo k získání 12,9 mg (10,9 pmol, 73% výtěžek) tmavě fialové pevné látky PRC-C9-11.
-22 CZ 307163 B6
'H NMR (400 MHz, dimethysulfoxid-d6): 2,31-2,35 (m, IH), 2,52-2,53 (m, IH), 2,67-2,78 (m, IH), 3,11-3,13 (m, IH), 4.55 (m, IH), 5,00-5,03 (m, IH), 6,61 (s, IH), 6,76 (d,J= 1,04 Hz, IH), 6,866 (s, IH), 6,97-7,04 (m, IH), 7,08-7,12 (m, IH), 7,146 (dd, J= 1,28, 8,32 Hz, IH), 7,157,19 (m, IH), 7,29-7,34 (m, 2H), 7,47 (d, J = 7,92 Hz, IH), 7,53 (dd, J = 1,0, 8,96 Hz, IH), 7,59-7,70 (m, 2H), 7,75 (d, J = 16.92 Hz, 1H). 7,82 (d, J = 9,72 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 15,52 Hz, IH), 8,58 (d,J= 1,84 Hz, IH), 11,61 (s, lHfor-NH), 11,90 (s, lHfor-NH).
Příklad 18 (rac)-2,4,13,15-tetrakis((E)-2-(thiofen-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydro-dipyrido[ 1,2a;r,2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, tj. PRC-C5-9
Výchozí racemický helquat Q (10,0 mg, 14,9 μιηοΙ), thiofen-3-karbaldehyd (107 mg, 957 μιηοΙ), pyrrolidin (39 ml, 478 μιτιοί) a suchý methanol (0,5 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 5 min za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (5 ml). Suspenze byla odstředěna a supematant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (0,5 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (5 ml). Stejná procedura byla zopakována s tetrahydrofuranem (0,5 ml) - diethyletherem (5 ml) a acetonitrilem (0,3 ml) - diethyletherem (5 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy poskytlo 13,1 mg (12,5 μιτιοί, 84% výtěžek) žluté pevné látky PRC-C5-9.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 2,32-3.38 (m, IH). 2.45-2,54 (m, IH), 2,67-2,72 (m, IH), 3,01-3,06 (dd, J= 6,44. 14,04 Hz, IH), 4,24-4,32 (td, J = 5,32, 14,04 Hz, IH), 5,013 (dd, J =
-23 CZ 307163 B6
5,72, 14,68 Hz, 1H), 6,97 (d, J= 16,28 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 1,96 Hz, 1H), 7,316 (d, J = 15,8 Hz,
H),7,37 (dd, J= 1,28,5,16 Hz, 1H), 7,48 (dd, J= 2,80, 5,08, IH), 7,60 (dd, J= 2,88, 5,16 Hz,
IH), 7,65-7,71 (m. 4H), 7,83 (d, .7 = 15,76 Hz, 1H),7,88 (dd, J = 1,24, 2,88 Hz, 1H), 8,24 (d, J =
2,04, 1H).
Příklad 19 (rac)-2,4-bis((7T)-2-(l-methyl-l//-pyrrol-2-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydro-dipyrido[2,la: 1 ',2'—k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C6^l
Výchozí racemický helquat O (10,0 mg, 16,3 pmol), 1 -methyl-I Tf-pyrrol-2-karbaldehyd (57 mg, 522 pmol), pyrrolidin (22 ml, 261 pmol) a suchý methanol (0,5 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 1 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (5 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (0,5 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (5 ml). Stejná procedura byla zopakována s tetrahydrofuranem (0,5 ml) - diethyletherem (5 ml) a acetonitrilem (0,3 ml) - diethyletherem (5 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vysušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy poskytlo 10,1 mg (12,7 pmol, 78% výtěžek) oranžové pevné látky HTA-C6-4.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d3): 3,08-3,33 (m, 4H), 3,68 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 4.22-4.26 (m, 1H), 4,89^,90 (m, 2H), 5,02-5,05 (m, 1H), 6,17-6,19 (m, 1H), 6,26-6,28 (m, 1H), 6,73 (d, J = 16,4 Hz, 1H) 6,71 (t, 1.6 Hz, 1H), 6,91 (t, J = 2,04 Hz, 1H), 6,98-7,00 (m, 2H), 7,13 (d, J = 15,56 Hz, 1H), 7,37 (d, .7= 15,96 Hz, IH), 7,44 (d, J= 1,96, 1H), 7,16-7,71 (m, 3H), 7,85 (td, J = 1,44, 2,96, 7,64 Hz, 1H), 7,99 (dd, J = 1,4, 8,48 Hz, 1H), 8,08 (d, .7 = 1,96 Hz, 1H), 8,15 (td, J = 1,48, 1,92, 8,48, IH), 8,78 (dd, J= 1,36, 5,68/7,16 Hz, IH).
Příklad 20 (rac)-2,4-bis((E)-2-(4-methyl-l/7-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydro-dipyrido[2,la:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. HTA-C5-11
Výchozí racemický helquat O (10,0 mg, 16,3 μιηοΙ), l-methyl-177-pyrrol-2-karbaldehyd (57 mg, 522 pmol), pyrrolidin (22 ml, 261 pmol) a suchý methanol (0,5 ml) byly dány do lOml baňky a výsledná směs byla míchána pod argonem 1 h za laboratorní teploty. Postup reakce byl monitorován tenkovrstvou chromatografií. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (5 ml). Suspenze byla odstředěna a supernatant oddělen od pevného podílu. Pevný podíl byl rozpuštěn v methanolu (0,5 ml) a čistý produkt vysrážen přidáním diethyletheru (5 ml). Stejná procedura byla zopakována s tetrahydrofuranem (0,5 ml) - diethyletherem (5 ml) a acetonitrilem (0,3 ml) - diethyletherem (5 ml). Odstředění této suspenze, odstranění supernatantu a vy-24 CZ 307163 B6 sušení pevného produktu na vakuu olejové pumpy poskytlo 10,1 mg (12,7 pmol, 78% výtěžek) tmavě žluté pevné látky HTA-C5-11.
'H NMR (400 MHz, acetonitril-d,): 2,32 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 3,12-3,43 (m, 4H), 4,27-4,31 (m, 1H), 4,80-4.88 (m, 2H), 5,05 (m, 1H). 7,01 (d, J= 16,04 Hz, 1H), 7,44-7,52 (m, 4H), 7,62-7,76 (m, 4H), 7,83-7,96 (m, 2H), 8,13-8,17 (m, 1H), 8,026 (d, J= 1,96 Hz, 1H), 8,77 (dd, J= 2,12, 6,32 Hz, 1H), 10,38 (broad s, 2H for-NH).
Příklad 21
2,4,13,15-tetrakis((£)-2-(1 - methyl- \H- indol- 3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,la:r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, tj. TKA-C10-13
Výchozí helquat P (10 mg, 15,6 pmol), l-methyl-l//-indol-3-karbaldehyd (149,1 mg, 936,6 pmol), pyrrolidin (41 μΙ, 499,5 pmol) a suchý methanol (0,5 ml) byly umístěny do vialky se šroubovacím uzávěrem o objemu 10 ml a směs byla míchána pod argonem po dobu 45 min za teploty místnosti. Postup reakce byl sledován pomocí tenkovrstvé chromatografie. Surový produkt byl vysrážen z reakční směsi přidáním diethyletheru (5 ml). Suspenze byla odstředěna a kapalný podíl oddělen od pevné látky. Pevný podíl byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (0,3 ml) a produkt vysrážen přidáním diethyletheru (5 ml). Následovalo odstředění této suspenze a odstranění kapalného podílu. Tato procedura byla opakována ještě třikrát za použití methanolu (0,5 ml) místo tetrahydrofuranu a poté ještě dvakrát jenom s diethyletherem (5 ml). Následovalo vysušení pevného produktu pod vakuem za použití olejové pumpy. Takto bylo získáno 12,3 mg (10,2 μιηοΐ, 65% výtěžek) temně červené pevné látky TKA—C 1 0—13.
-25 CZ 307163 B6 ‘H NMR (400 MHz, dimethylsulfoxid-d6): 3,23-3,41 (m, 4H), 3,72 (s, 6H), 3,97 (s, 6H), 4,54 (t,
J= 12,4; 12,4 Hz, 2H), 5,24 (d, J= 11,1 Hz, 2H), 6,93 (dd, J= 15,1; 0,1 Hz, 2H), 6,95 (d, J =
16,2 Hz, 2H), 7,13 (ddd, 8,2; 7,2; 1.1 Hz, 2H), 7,33-7,42 (m, 4H), 7,45 (d, J= 8,4 Hz, 2H),
7,53 (d, J= 16,7 Hz, 2H), 7,65-7,70 (m, 6H), 7,77-7,79 (m, 4H), 8,07 (d, J= 1,8 Hz, 2H), 8,198,23 (m, 6H), 8,30 (d, J= 1,9 Hz, 2H).
Metody biologické charakterizace látek
Kvantifikace míry interakce helquatů s G-kvadruplexy v modelových oligonukleotidech pomocí metody FRET
Pro zjištění míry in vitro interakce helquatů s G-kvadruplexem byly použity oligonukleotidy obsahující na guanin bohaté sekvence lidské teíomery (F21T) a NHE IIIi oblasti promotoru onkogenu c-myc (Fmyc27T). Oba oligonukleotidy schopné tvorby intramolekulárního G-kvadruplexu byly na koncích značené vhodnými fluorofory tak, aby vznikl donor-akceptorový FRET pár (5FAM a 3-TAMRA). Pokud je oligonukleotid sbalen do struktury G-kvadruplexu, donor se nachází v blízkosti akceptoru a dochází k nezářivému přenosu energie na akceptor. S rostoucí teplotou reakční směsi dochází k postupné denaturaci struktury G-kvadruplexu a tím i vzdalování donoru a akceptoru (FAM-TAMRA). Dochází tak k růstu fluorescence donoru (FAM) a poklesu fluorescence akceptoru (TAMRA). Výsledkem měření je křivka intenzity fluorescence donoru v závislosti na teplotě. Pokud je G-kvadruplex stabilizován ligandem, dojde ke zvýšení teploty tání. Teplota tání G-kvadruplexu odpovídá teplotě, kdy je denaturováno 50% původního množství sbaleného G-kvadruplexu. Výsledkem měření je stanovení rozdílu teplot tání (A7jn) samotného G-kvadruplexu a G-kvadruplexu stabilizovaného ligandem. Experimenty byly prováděny v 10 mmol 1 kakodylátovém pufru (pH=7,2) s 5 mmol”1 K.C1 a 95 mmol.F1 LiCI v případě oligonukleotidu Fmyc27T a v 10 mmol 1 kakodylátovém pufru (pH=7,2) s 25 mmol.F1 KCI a 75 mmol.Γ1 LiCI v případě oligonukleotidu F21T. Oba oligonukleotidy byly denaturovány 5 minut při 95 °C a následně ponechány ve vypnutém termobloku až do vychladnutí na teplotu místnosti (3 hodiny). Finální koncentrace oligonukleotidu v reakční směsi byla 0,2 μιηοΙ.Γ1. Testované helquaty byly přítomny v koncentraci 1 pmol.lCelkový objem reakční směsi byl 30 μΙ. Teplota tání samotných oligonukleotidů (bez přítomnosti helquatů) byl za těchto podmínek 58,1 ± 0,2 °C pro F21T a 64,7 ± 0,4 °C pro Fmyc27T. Pro stanovení selektivity vazby helquatů na G-kvadruplex ve srovnání s dvouvláknovou DNA se do reakce přidával 50násobný nadbytek dvouvláknové DNA (10 mmol.Γ 1 neznačený kompetitor ds26 tvořící vlásenku). Po přídavku do reakční směsi soutěží ds26 se značeným oligonukleotidem (Fmyc27T, či F21T) o vazbu ligandu. Pokud je testovaný ligand selektivní vůči G-kvadruplexu nedojde v přítomnosti kompetitoru ds26 k poklesu ATm oproti ATm měřené bez ds26 kompetitoru. Teplota tání samotných oligonukleotidu v přítomnosti kompetitoru je 59,4 ± 0,5 °C pro F21T a 66,3 ± 0,6 °C pro Fmyc27T.
Fluorescence donoru FAM byla měřena pomocí real-time PCR přístroje Opticon 2 (excitace 470 až 505 nm a emise 523 až 543 nm) v teplotních krocích 0,5 a v rozmezí 25 až 95 °C. Vyhodnocení sigmoidních křivek intenzity fluorescence v závislosti na teplotě bylo provedeno v programu GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, lne., USA). Pomocí nelineární pěti parametrické regrese byl vypočítán inflexní bod křivky, který odpovídá teplotě tání (Tm) G-kvadruplexu za daných podmínek. Uvedené hodnoty byly získány z nejméně tří nezávislých měření.
ds26: 5 '-CAATCGGATCGAATTCGATCCGATTG-3'
F2IT: 5'- FAM-GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG-TAMRA-3'
Fmyc27T: 5-FAM TGGGGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAAGG-T AMRA-3'
-26CZ 307163 B6
Tabulka 1: Změna teploty tání G-kvadruplexu oligonukleotidu Fmyc27T v přítomnosti různých ligandů; hodnoty určeny metodou FRET
| označení látky | ATm(°C) Fmyc27T | SD Fmyc27T | ATm(° C) Fmyc27T/ds26 (° C) | SD Fmyc27T/ds26 |
| LSA-C9-30 | 10,5 | 0,4 | 8,2 | 0,4 |
| LSA-C9-32 | 10,4 | 0,5 | 8,1 | 0,2 |
| MJA-C13-8 | 11,0 | 1,1 | 4,9 | 1,2 |
| MJB-C8-27 | 9,7 | 1,0 | 10,0 | 1,3 |
| MSB-C13-8 | 12,6 | 0,2 | 7,7 | 0,9 |
| PDA-C10-11 | 14,9 | 0,4 | 13,9 | 0,7 |
| PDA-C10-13 | 13,8 | 0,9 | 13,6 | 1,1 |
| PDA-C15-8 | 18,8 | 1,3 | 19,9 | 0,4 |
| PDA-C8-27 | 11,8 | 0,6 | 9,6 | 0,3 |
| PDA-C9-30 | 14,6 | 0,8 | 16,0 | 1,1 |
| PDB-C10-11 | 14,2 | 0,9 | 13,1 | 1,1 |
| PDB-C15-8 | 15,7 | 1,5 | 14,5 | 1,3 |
| PDB-C8-14 | 11,5 | 0,7 | 9,3 | 0,7 |
| PRA-C12-5 | 11,3 | 0,2 | 8,6 | 0,5 |
Tabulka 2: Změna teploty tání G-kvadruplexu oligonukleotidu F21T v přítomnosti různých ligandů; hodnoty určeny metodou FRET
| označení látky | A7m (°C) F21T | SD F21T | ATm(°C) F21T/ds26 | SD F21T/ds26 |
| PDA-C10-11 | 12,9 | 0,2 | 12,3 | 0,4 |
| PDA-C10-13 | 9,7 | 1,2 | 9,1 | 0,3 |
| PDA-C15-8 | 17,2 | 1,2 | 17,3 | 1,0 |
| PDA-C9-30 | 12,3 | 2,0 | 13,1 | 2,0 |
| PDB-C10-11 | 13,0 | 0,8 | 10,7 | 1,0 |
| PDB-C15-8 | 11,3 | 1,2 | 11,1 | 1,2 |
| PDB-C8-14 | 8,4 | 1,0 | 5,0 | 0,1 |
| LSA-C9-30 | 8,6 | 0,4 | 5,5 | 0,9 |
| LSA-C9-32 | 9,3 | 0,1 | 6,6 | 0,2 |
| MJA-C13-8 | 7,4 | 0,1 | 1,4 | 1,0 |
| MJB-C8-27 | 8,0 | 0,8 | 5,2 | 0,8 |
| MSB-C13-8 | 9,0 | 0,3 | 3,4 | 0,3 |
| PDA-C8-27 | 9,3 | 0,5 | 7,0 | 0,6 |
| PRA-C12-5 | 8,8 | 0,3 | 5,4 | 0,7 |
Hodnoty teplot tání c-myc promotorového (Fmyc27T) a telomerického (F21T) G-kvadruplexu (tab. 1 a tab. 2) ukazují na nečekaně významnou schopnost testovaných látek stabilizovat tyto
-27 CZ 307163 B6 struktury. Zároveň helquaty mají výrazně vyšší selektivitu vůči G-kvadruplexům ve srovnání s dvouvláknovou DNA než pozitivní kontrola TMPyP4.
Kvantifikace míry interakce helquatů s G-kvadruplexem v modelových oligonukleotidech pomo5 cí metody ECD
Spektrometr ECD
Spektra ECD byla měřena na spektrometru J-815 (Jasco, Japan). Nastavení parametrů měření 10 (tab. 3), ukládání spekter a odečítání pozadí bylo prováděno v programu Spectra Manager (Jasco, Japan).
Tabulka 3: Nastavení parametrů pro měření spekter ECD a křivky tání měřené pro zvolenou 15 vlnovou délku
| Parametr | Nastavení | |
| spektrum | křivka tání | |
| počátek | 800 nm | 25 °C |
| konec | 210 nm | 95 °C |
| šířka pásu | 1 nm | 1 nm |
| odpověď | 1 s | 1 s |
| citlivost | standard | standard |
| přírůstek | 1 nm | 1 °C |
| rychlost skenu | 200 nm min-1 | - |
| akumulace | 5 | - |
| monitorovaná vlnová délka | - | 263 nm |
| nárůst teploty | - | 1 “C.min“1 |
Pro měření teplotních závislostí byly kyvety v kyvetovém prostoru umístěny do Peltierova nástavce, teplota byla řízena programem Spectra Manager. Křivky tání byly měřeny při vlnové délce, která odpovídala maximálnímu rozdílu intenzity signálu ECD spektra oligonukleotidu při teplotě 25 a 95 °C, jak je ukázáno na obr. 1. Před i po měření křivek tání byla změřena spektra ECD v krajních teplotách, aby byla ověřena stabilita studovaného systému.
Zpracování ECD spekter
Zpracování spekter bylo provedeno pomocí programu Spectra Manager (Jasco, Japonsko). Výsledná spektra byla získána tak, že od naměřeného spektra vzorku bylo odečteno spektrum 30 pozadí, kterým bylo spektrum rozpouštědla. Měření spektra vzorku a pozadí probíhala za identických podmínek. Spektra ECD jsou uváděna jako elipticita, značená v obrázcích CD [mdeg], jejíž číselná hodnota souvisí s bezrozměrným cirkulárním dichroismem AA (CDV = 32980 AAV). Toto značení CD zachovává zvyklosti mezinárodních časopisů, v nichž jsou publikovány články z oboru.
Roztoky oligonukleotidu
Z oligonukleotidu c-Myc27 byl připraven zásobní roztok o koncentraci 100 μιηοΙ.Γ1 rozpuštěním v EEO. Kyveta o tloušťce 1 mm byla plněna 7 μΙ roztoku oligonukleotidu a 133 μΐ Li+-kakodylá40 tovém pufru. Roztok oligonukleotidu byl v kyvetě převrstven minerálním olejem, aby se při
-28CZ 307163 B6 měření teplotních závislostí omezily koncentrační změny způsobené odpařováním rozpouštědla při vyšších teplotách.
c-Myc27: 5 '-TGGGGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAAGG-3'
Roztoky ligandu
Ze zásobních roztoků racemických směsí ligandu v DMSO o koncentraci 10 mmol Γ1 byly připraveny roztoky o koncentraci 140 pmol Γ1 rozpuštěním v H2O. Ligandy byly přidávány do roztoku oligonukleotidu pod rozhraní pufr/minerální olej mikrostříkačkou Hamilton (5 pl roztoku o koncentraci 140 pmol Γ1). Výsledný molární poměr oligonukleotid ligand byl 1:1.
Postup měření
Kyveta naplněná roztokem oligonukleotidu c-Myc27 v Li -kakodylátovém pufru (cc..Myc27 = 5 pmol Γ’) byla nejprve ohřátá 5 minut na 95 °C, při této teplotě bylo změřeno spektrum ECD. Poté byl vzorek ochlazen na 25 °C, ponechán 10 min ke stabilizaci a poté bylo opět změřeno spektrum ECD. Poté byla změřena křivka tání ECD oligonukleotidu při 263 nm v rozmezí teplot 25 až 95 °C a pro ověření stability vzorku byla opět změřena spektra při 95 a 25 °C. Pod olejovou vrstvu byl k roztoku oligonukleotidu přidán roztok ligandu (cilgai,d = 5 pmol Γ1), vzorek byl důkladně promíchán a bylo změřeno spektrum ECD při 25 °C, křivka tání a opět kontrolní spektra při 95 a 25 °C.
Výsledky
Na obr. I jsou spektra ECD oligonukleotidu c-Myc27 v Li*-kakodylátovém pufru (cc Mvc27 = 5 pmol 1 ') při teplotách 25 a 95 °C. Při teplotě 25 °C byly pozorovány pásy u 210(+), 240(-) a 263(+). Tento spektrální průběh odpovídá paralelní konformaci G-kvadruplexu [Vorlickova M. a spol. (2012) Methods, 57, 64; Sun, D. a spol. (2010) Methods in moleculctr biology, 608, 65; Yang D. a spol. (2010) Future Med. Chem., 2, 619], Na základě podobnosti spekter ECD by se nabízelo, že i při teplotě 95 °C roztok obsahuje strukturu paralelně uspořádaného G-kvadruplexu. Po změření křivky tání (sigmoidální průběh, obr. 2) však bylo evidentní, že s rostoucí teplotou došlo k rozložení G-kvadruplexu. Zachování tvaru signálu ECD, zejména přítomnost pásu u 263 nm odpovídá interakci sousedních bází v řetězci oligonukleotidu [Kypr J. a spol. (2002) Biopolymers, 67, 275; Kypr J. a spol. (2007) Biopolymers, 87, 218; Kejnovska 1. a spol. (2007) Biopolymers, 85, 19],
Interakce G-kvadruplex/ligand: teplotní experiment
Rozklad struktury G-kvadruplexu v přítomnosti ligandu vlivem teploty byl sledován při vlnové délce, která odpovídala maximálnímu rozdílu intenzit signálů ECD systému oligonukleotid/ligand při teplotách 25 a 95 °C, tj. při 263 nm. Teplotní stabilita G-kvadruplexu byla sledována v rozmezí 25 až 95 °C, a to v molárním poměru oligonukleotid ligand =1:1. Příklad vlivu studovaného ligandu na stabilitu G-kvadruplexu tvořeného oligonukleotidem c-Myc27 je znázorněn na obr. 2. Tento obrázek ukazuje zvýšení teploty tání G-kvadruplexu v přítomnosti ligandu PDB-C10-11.
Za míru stabilizace G-kvadruplexu byla zvolena změna teploty tání G-kvadruplexu způsobená přítomností ligandu (ATm):
XTm Tm.oligimukleoliíl ligimil'TiH.oliffmiklwiiil (1),
-29CZ 307163 B6 kde r!Kímíi)& teplota tání molekulárního systému tvořeného oligonukleotidem a ligandem a je teplota tání samotného oligonukleotidu. V tab. 4 jsou shrnuty změny teploty tání G-kvadruplexu oligonukleotidu c-Myc27 v přítomnosti studovaných ligandu.
Tabulka 4: Změna teploty tání G-kvadruplexu oligonukleotidu c-Myc27 v přítomnosti různých ligandu; hodnoty určeny metodou ECD
| označení látky | ATm (°C) |
| MJA-C13-8 | 6,8 |
| PDB-C10-11 | 9,8 |
| PDB-C8-14 | 5,0 |
| PDA-C15-8 | 10,1 |
| LSA-C9-30 | 6,4 |
| PDA-C10-11 | 8,2 |
Výsledky této části studie ukazují, že helquaty způsobují překvapivě vysokou míru stabilizace Gkvadruplexu. Tyto výsledky také dokumentují citlivost spektroskopie ECD k sekundárním strukturám oligonukleotidu a ukazují, že pomocí měření křivek tání ECD lze charakterizovat stabilizační schopnosti ligandu vůči struktuře G-kvadruplexu.
Stabilizace G-kvadruplexu promotorové oblasti c-myc genu
K stanovení míry stabilizace G-kvadruplexu v promotorové oblasti c-myc genu na buněčné úrovni byla využita duální luciferázová analýza. Stabilizace G-kvadruplexu je vyjádřená poměrem exprese dvou luciferáz (firefly a Renilla) z kotransfekovaných vektorů pGL4.10-myc (Iuc2) a pRL-TK (Remlla) do buněčné linie HGC-27 exprimující c-myc protein. Exprese reportérového genu (firefly luciferázy) z pGL4.10-myc vektoru je řízena c-myc regulační oblastí o délce 860 bp (v rozsahu od -306 do +554). Tato vložená sekvence obsahuje NHE III| segment, který tvoří G-kvadruplex [Yang D. a spol. (2010), Future Med Chem., 2, 619] a je zodpovědný až za 90% transkripční aktivity c-myc genu.
Míra exprese firefly luciferázy, reportérového genu, tak odpovídá aktivitě promotoru c-myc a tím i míře stabilizace G-kvadruplexu. Signál je normalizován na expresi Renilla luciferázy z pRLTK vektoru, která je pod kontrolou konstitutivního virového thymidin kinázového (HSV-TK) promotoru. Míra exprese Renilla luciferázy slouží jako vnitřní kontrola pro normalizaci firefly signálu na účinnost transfekce v měřeném vzorku.
Plasmidy pGL4.10-myc (luc2) a pRL-TK byly namnoženy v bakterii Escherichia coli (kmen DH5a) a purifikovány pomocí Qiagen Plasmid Mini a Midi kitu. Buňky byly kultivovány za standardních podmínek a v exponenciální fázi růstu byly vysazeny do bílých 96-jamkových mikrotitračních destiček. Transfekce byla provedena pomocí transfekčního činidla X-tremeGENE HP DNA v médiu OptiMEM po dobu dvou hodin. Poměr reportérového a kontrolního vektoru byl 1:1a transfekčního činidla k celkovému množství DNA byl 1:1.2 hodiny po transfekci byly přidány helquaty v koncentraci 50 pmol.l '. Množství firefly a Renilla luciferázy v jednotlivých vzorcích bylo stanoveno 24 hodin po transfekci. Duální luciferázová analýza byla prováděna pomocí komerčně dostupného kitu (Promega, kat. č. EI960) podle instrukcí od výrobce. Luminiscence byla měřena pomocí luminometru EnSpire Alpha Plate Reader. Získaná data byla normalizována na signál Renilla luciferázy a poté byly hodnoty vztaženy ke kontrole. Výsledky stabilizace G-kvadruplexu a inhibice exprese firefly luciferázy jsou shrnuty v tabulce 5. Tabulka 6 uvádí koncentrační závislosti pro dva vybrané helquaty (MJA-C13-8 a VDJAC13-6).
-30CZ 307163 B6
Tabulka 5: Výsledky inhibiční studie exprese luciferázy v luciferázové duální analýze s plasmidem pGL4.10-myc (luc2) při koncentraci helquatů 50 μνηοΙ.Ι 1 vztažené ke kontrole (kontrola =
100%)
| označení látky | 50 junoU·1 [%] |
| VDJA-C13-6 | 27 |
| VDJA-C13-8 | 76 |
| LSA-C13-8 | 58 |
| MJA-C9-30 | 55 |
| MSC-C10-11 | 74 |
| MSC-C9-30 | 68 |
| MJA-C13-8 | 56 |
| MJB-C5-9 | 75 |
| MSC-C9-10 | 56 |
| MJB-C5-3 | 65 |
| LSA-C9-32 | 74 |
| HTA-C5-9 | 85 |
| MJA-C8-28 | 72 |
| MSC-C 15-8 | 76 |
| MJB-C8-27 | 88 |
| MSC-C13-16 | 85 |
| MSC-C 10-10 | 85 |
| PRA-C12-5 | 86 |
| PDA-C8-27 | 77 |
Tabulka 6: Koncentrační závislosti inhibice exprese luciferázy v luciferázové duální analýze s plasmidem pGL4.10-myc (11102) pro helquaty MJA-C13-8 a VDJA-C13-6 vztažené ke kontrole (kontrola = 100%)
| označení látky | Koncentrace μιηοΙ.Γ1 | % exprese vzhledem ke kontrole |
| MJA-C13-8 | 10 | 79,3 ± 6,7 |
| 50 | 69,8 ± 6,0 | |
| 150 | 57,9 ±2,5 | |
| VDJA-C13-6 | 10 | 59,0 ±17,9 |
| 50 | 27,1 ±0,8 | |
| 150 | 15,3 ±2,9 |
Imunodetekce proteinu c-myc
Stanovení změny exprese proteinu (transkripčního faktoru) c—myc v buněčných lyzátech připravených z nádorové buněčné linie HGC-27 po ovlivnění testovanými helquaty (tab. 7) bylo provedeno imunodetekcí po separaci proteinů dle jejich velikosti pomocí gelové elektroforézy (SDS-PAGE) a jejich přenosu na membránu.
-31 CZ 307163 B6
Pro zjištění vlivu helquatů na expresi c-myc proteinu byly buňky kultivovány za standardních podmínek a v exponenciální fázi růstu byly vysazeny do kultivačních lahví v hustotě 25 000 buněk/cm2. Další den byly přidány vybrané helquaty o koncentraci 50 pmol.!1. Po 24 hodinové inkubaci byly získány buněčné pelety a po přidání RIPA pufru s inhibitory proteáz (PrIC) a fosfatáz (PhIC) (složení viz tab. 8) byly připraveny buněčné lyzáty. Na 107 buněk bylo použito 150 pl RIPA pufru. Koncentrace proteinů v lyzátech byla změřena pomocí BCA metody. Separace proteinů v lyzátech proběhla na 12% denaturačním polyakrylamidovém gelu. Rozdělené proteiny byly přeneseny na PVDF membránu metodou Western blot. Inkubace s primární monoklonální myší protilátkou proti proteinu c-myc (ředění 1:1000 v SignalBoost činidle) probíhala přes noc při 4 °C, a poté s primární myší protilátkou proti β-aktinu (ředění 1:5000 v 5% mléce v TBS-T pufru) při laboratorní teplotě 2 hodiny. Následně byla použita sekundární koňská monoklonální protilátka konjugovaná s křenovou peroxidázou (ředěna 1:2000 v 5% mléce v TBS-T pufru) vázající se na myší protilátky typu IgG. Proteiny c-myc a β-aktin navázané na membráně byly vizualizovány pomocí detekčního kitu (SuperSignaí*West Femto Maximum Sensitivity Substráte, kat.č. 34095, Thermo Fisher Scientifíc, lne., USA) snímáním chemiluminiscence v detekčním sytému ImageQuant LAS 4000 Mini (kat.č. 28-9558-13, GE Healthcare Life Sciences, USA). Množství proteinu bylo kvantifikováno denzitometricky v programu Quantity One. Množství c-myc v jednotlivých vzorcích bylo normalizováno k P-aktinu a následně vztaženo ke kontrolnímu vzorku.
Tabulka 7: Testované helquaty; výsledky inhibice exprese proteinu c-myc vůči kontrole (kontrola = 100 %) při celkové koncentraci 50 pmol.Γ 1
| označení látky | 50 pmol.r1 [%] |
| MSC-C9-30 | 14 |
| LSA-C13-8 | 15 |
| MJB-C5-11 | 23 |
| MJA-C8-28 | 23 |
| LSA-C9-16 | 28 |
| MJB-C5-9 | 30 |
| MSC-C9-18 | 31 |
| HTA-C9-16 | 32 |
| PRC-C5-9 | 34 |
| MSC-C9-16 | 36 |
| HTA-C9-17 | 44 |
| MJA-C 13-8 | 58 |
| MSC-C15-8 | 58 |
| MJA-C11-25 | 66 |
| PRC-C10-10 | 71 |
| HTA-C10-10 | 75 |
| VDJA-C13-8 | 77 |
| PDA-C5-11 | 80 |
| MJA-C 19-4 | 81 |
| PDB-C13-8 | 83 |
| MSC-C10-36 | 85 |
-32 CZ 307163 B6
Tabulka 8: Složení lyzačního pufru
RIPA pufr:
mmol.r1 TRIS-HC1
1% Nonidet-40
150 mmol.r1 NaCl
0,5% deoxycholát sodný
0,1% SDS inhibitor proteázy a fosfatázy:
PrIC 2,5 μ1/100 μΐ RIPA pufru
PhIC 1 μΐ/ΐ00 μΐ RIPA pufru
Stanovení viability pomocí XTT testu
Vliv testovaných látek na viabilitu (proliferaci) použitých buněčných linií byl zkoumán v koncentracích 0 až 100 mmol.r
Charakterizace použitých buněčných linií
Pro zhodnocení antiproliferačních účinků testovaných látek in vitro byla použita nádorová buněčná linie CCRF-CEM odvozená od akutní lymfoblastické leukémie a normální (zdravá) buněčná linie HUVEC endoteliálních buněk z umbilikální vény. Obě uvedené buněčné linie byly kultivovány za podmínek optimálních pro jejich růst v příslušném médiu v plastových lahvích nebo plastových Petriho miskách o různé velikosti (TPP, BD Biosciences) při 37 °C, 5% CO2 a 95% vzdušné vlhkosti. Buňky HUVEC byly získány od BD Biosciences. CCRF-CEM buněčná linie byla získána z ATCC/LGC Standards (Američan Type Cell Collection).
CCRF-CEM (kat. č. ATCC CCL-119)
Suspenzní buněčná linie CCRF-CEM je permanentní in vitro kultura akutní lymfoblastické leukémie. Linie CCRF-CEM byla kultivována v RPMI 1640 médiu (Sigtna-Aldrich. kat. č. R8758) s přídavkem 2 mmol.!1 glutaminu (Invitrogen, kat. č. 35050-038), 10% fetálního hovězího séra (FBS, Sigma-Aldrich, kat. č. F9665), 100 IU/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu (SigmaAldrich, kat. č. P0781). Pasážování probíhalo 2 až 3x týdně. Doba zdvojení populace CCRFCEM za použitých kultivačních podmínek je 20 hodin.
HUVEC (BD Biosciences, kat. č. 354151)
Normální lidské endoteliální buňky z umbi I ikální vény jsou adherentní buňky, které byly kultivované v plastových Petriho miskách potažených kolagenem I. Do kultivačního média (E-STIM™; BD Biosciences, kat. č. 355054) již obsahujícího 2% FBS (fetální bovinní sérum), hydrokortizon a heparin byl dále přidán epidermální růstový faktor (EGF, 5 mg) a směs faktorů podporujících růst endoteliálních buněk (ECGS, 100 mg). Použité kultivační médium neobsahovalo antibiotika. Buňky byly pasážovány po dosažení 90% monovrstvy uvolněním inkubací s 0,25% roztokem trypsinu s EDTA (1 ml: 3 min; 37 °C). Poté bylo přidáno 5 ml kompletního kultivačního média E-STIM™ a buňky byly odstředěny (180 x g, 7 min), resuspendovány a přeneseny v požadovaném množství do nové Petriho misky s čerstvým médiem. V experimentech byly používány buňky mezi pasážemi 3 a 8 po rozmražení. Doba zdvojení populace HUVEC za použitých kultivačních podmínek je 38 hodin.
- jj CZ 307163 B6
Zhodnocení viability nádorových a normálních buněk po působení různých koncentrací testovaných látek
Při testování citlivosti buněčných linii na studované helquaty byl použit XTT cytotoxicitní/proliferační test pro stanovení buněčné viability. Tato metoda je založena na schopnosti metabolicky aktivních buněk redukovat žlutou tetrazoliovou sůl XTT na oranžový formazan. Míra této přeměny je měřena jako nárůst absorbance při 492 nm a je úměrná enzymatické aktivitě mitochondriálních dehydrogenáz a tedy i počtu metabolicky aktivních (viabilních) buněk. Výstupem je hodnota 1C50, která odpovídá koncentraci testované látky, působící pokles počtu viabilních buněk na polovinu (tj. 50% zpomalení dělení buněk) vzhledem ke kontrolní, neovlivněné populaci. Odráží tedy účinnost testované látky vzhledem k dané buněčné linii.
Buňky v exponenciální fázi růstu byly vysety na 96-jamkovou mikrotitrační destičku v koncentraci 3000 buněk na jamku. Každá jamka obsahovala 90 μΙ buněčné suspenze. Následující den bylo přidáno vždy po 10 μΐ 10 x koncentrovaných testovaných látek. Účinek helquatů byl zkoumán v rozsahu koncentrací 1 až 100 μιηοΐ.1 1 (popřípadě 1; 2,5; 5; 7,5; 10; 15; 25; 50 a 100 μιηοΙ.Γ1). Kromě části obsahující uvedenou koncentrační řadu zkoumaných látek byly na destičce vždy přítomny 2 kontrolní sloupce, první s čistým médiem (tzv. blank) a druhý s buňkami v médiu bez testovaných látek (kontrola). Do kontroly i blanku byl přidán objem rozpouštědla (vody) totožný s objemem přidávaných látek. Po 72 hodinách působení látek bylo provedeno stanovení viability dle návodu výrobce. Ve stručnosti: Do každé jamky 96-jamkové mikrotitrační destičky bylo přidáno 50 μΙ připraveného pracovního roztoku XTT (detekčního činidla) a poté byla mikrotitrační destička vrácena do CO2 inkubátoru. Po 2 hodinách byla změřena v každé jamce absorbance při 492 nm (referenční vlnová délka 690 nm) pomocí multifunkčního readeru (Tecan Genios, Rakousko).
Pracovní roztok XTT byl připraven smícháním 5 ml XTT reagens a 100 μΙ roztoku PMS. Příprava obou složek je uvedena níže:
XTT reagens
Roztok XTT byl připraven rozpuštěním 500 mg sodné soli XTT (Sigma-Aldrich, kat. č. X4626) v 500 ml RPMI-1640 média (Sigma-Aldrich, kat. č. R7509) a následném ohřevu 10 min při 60 °C. Z takto připraveného roztoku byly připraveny alikvoty po 5 ml a uchovány při -20 °C. Před použitím byl alikvot rozpouštěn ve vodní lázni o teplotě 37 °C.
Roztok PMS (phenazine methosulfate)
Roztok PMS byl připraven rozpuštěním 0,383 mg PMS (Sigma-Aldrich, kat. č. P9625) v 1 ml fosfátového pufru (PBS). V 100 ml alikvotech byl skladován při -20 °C.
Výsledky stanovení viability nádorových a normálních buněk po působení různých koncentrací testovaných látek jsou shrnuty v tabulce 9. IC50 udává koncentraci testované látky, která způsobila 50% pokles počtu viabilních buněk (inhibici růstu buněk) po 72 hodinách ovlivnění. Každá koncentrace helquatu byla testována v triplikátech v rámci jednoho stanovení hodnoty IC50. Každé z těchto stanovení hodnoty 1C5O bylo opakováno minimálně ve třech nezávislých experimentech. Hodnoty nad 100 μιηοΙ.Γ1 byly získány extrapolací dat naměřených v rozsahu koncentrací 0-100 pmol.!1 daného helquatu.
-34CZ 307163 B6
Tabulka 9
| IC50 | ||
| označení látky | CCRF CEM | HUVEC |
| MSC-C13-16 | **** | > 100 |
| MSC-C9-30 | **** | > 100 |
| MJA-C13-22 | >100 | |
| MSC-C9-16 | **** | > 100 |
| MSC-C9-10 | **** | >100 |
| MSC-C10-10 | *** | > 100 |
| MSB-C11-7 | *** | > 100 |
| MSC-C10-11 | *** | > 100 |
| VDJA-C13-20 | *** | >100 |
| LSA-C9-32 | *** | >100 |
| MJA-C13-8 | ** | >100 |
| MSB-C13-8 | ** | > 100 |
| MSC-C10-36 | **** | * |
| MSB-C13-16 | *** | * |
| MSC-C 10-31 | *** | * |
| VDJA-C 13-6 | *** | * |
| MSC-C 15-8 | *** | * |
| MSC-C9-18 | *** | * |
| HTA-C9-16 | *** | ** |
| HTA-C9-17 | ** | * |
hodnota IC50 leží v rozmezí μιηοΙ. 1 _ 1 $ $ * $ < 10 μιηοΙ.I až 25 μιηοΙ.Γ1 až 50 μιηοΙ.Γ1 > 51 μηιοΙ.Γ1 >100 μιηοΙ.Γ’ >100
Použité buněčné linie, reagencie, programy a přístroje:
Buněčné linie:
CCRF-CEM (kat. č. CCL-119, ATCC/LGS Standards-American Type Cell Collection)
HUVEC (kat. č. 354151, BD Biosciences, USA)
HGC-27 (kat. č. 94042256, Sigma-Aldrich, USA)
Reagencie:
Kultivace buněk
Minimum Essential Medium Eagle (kat.č. M2279, Sigma-Aldrich, USA)
-35 CZ 307163 B6
RPMI-1640 medium (kat. č. R7509, R7638 a R8758, Sigma-Aldrich, USA)
Dulbecco's Phosphate Buffered Salině (kat.č. D8537, Sigma-AIdMCh, USA) Penicillin-Streptomycin (kat.č. P0781, Sigma-Aldrich, USA) fetální hovězí sérum (kat.č. F9665, Sigma-Aldrich, USA)
L-glutamin, roztok (kat.č. G7513, Sigma-Aldrich, USA)
MEM Non-essential Amino Acid Solution (kat. č. M7145, Sigma-Aldrich, USA)
0,25% trypsin-EDTA solution (kat.č. T4049, Sigma-Aldrich, USA) kultivační médium pro HUVEC E-STIM™ (kat. č. 355054, BD Biosciences, USA)
Petriho misky potažené kolagenem I (kat. č. 354450, BD Biosciences, USA)
Transfekce buněk a Luciferázová reportérova analýza
Dual-Luci terase Reportér Assay Systém (kat.č. El960, Promega, USA) pGL4.10 (luc2) Vector (kat.č. E665A, Promega, USA) pRL-TK Vector (kat.č. E2241. Promega, USA)
X-tremeGENE HP DNA transfekční činidlo (kat.č. 06366236001, Roche, Švýcarsko)
Opti-MEMB I Reduced Sérum Medium (kat.č. 31985-062, Life Technologies, USA)
96-ti jamková destička Nunclon Delta Surface MicroWell Plates (kat.č. 136101, Thermo Fisher Scientific, lne., USA)
Qiagen Plasmid Mini Kit (100) (kat.č. 12125, Qiagen, Německo)
Qiagen Plasmid Midi Kit (25) (kat.č. 12143, Qiagen, Německo)
Western Blot
Protease Inhibitor Cocktail - PrIC - (kat.č. P8340, Sigma-Aldrich, USA)
Halt Phosphatase Inhibitor Cocktail - PhIC (kat.č. 78420, Thermo Fisher Scientific, lne., USA) QuantiPro™ BCA Assay Kit (kat.č. QPBCA, Sigma-Aldrich, USA) lmmobilon-P Membráně (kat.č. 1PVH00010, EMD Millipore Corporation, USA) Monoklonální myší anti-MYC protilátka (kat.č. 11—433—C100, EXBIO, Praha)
Anti-mouse IgG, HRP-konjugovaná protilátka (kat.č. 7076, Cell Signaling Technology, lne., USA)
Monoklonální anti-p-Actin protilátka (kat.č. A5441, Sigma-Aldrich, USA)
SuperSigna®West Femto Maximum Sensitivity Substráte (kat.č. 34095, Thermo Fisher Scientific, lne., USA)
Nonfat Dry Milk (kat.č. 9999, Cell Signaling Technology, lne., USA) SignalBoost™Immunoreaction Enhancer Kit (kat.č. 407207, EMD Millipore Corporation, USA)
XTT stanovení
PMS (kat. č. P9625, Sigma-Aldrich, USA)
XTT (kat. č. X4626, Sigma-Aldrich, USA)
Programy:
Microsoft Excel 2010 (Microsoft, USA)
Quantity One software V.4.6.9 (Bio-Rad, USA).
GraphPad Prism 5 V.5.04. (GraphPad Software, USA)
-36CZ 307163 B6
Přístroje:
EnSpire Alpha Plate Reader (kat.č. 2300—001 A, Perkin Elmer. USA)
ImageQuant LAS 4000 mini (kat.č. 28-9558-13, GE Healthcare Life Sciences, USA)
Fastblot B33 (kat.č. 014-100, Biometra, Německo)
Opticon 2 (kat.č. 200232, MJ Research, USA)
Průmyslová využitelnost
Nové helquaty s heteroaromatickými substituenty mohou být využity k přípravě léčiv pro léčbu onemocnění, souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a pro stabilizaci G-kvadruplexů. Další oblast jejich možného využití zahrnuje senzibilizační činidla ve fotografii.
Claims (10)
1. Helquaty obecného vzorce 1 kde substituenty R1 a R2 jsou nezávisle na sobě vybrány ze skupiny, zahrnující H a Ci až C4 alkyl, nejvýše tři páry sousedících atomů v polohách 1 a 2, 3 a 4, 1' a 2', 3' a 4' jsou případně přemostěny spojkou S a zároveň jeden až čtyři atomy se sudým deskriptorem (tj. 2, 4, 2', 4') jsou substituovány substituentem R’ obecného vzorce II —CH=CH—R4 (II), přičemž R4 je substituovaný, či nesubstituovaný heteroaryl.
-37CZ 307163 B6
S1’2, S1',2', S’·4 a S1'·4' je spojka tvořená uhlovodíkovým řetězcem o 3 až 6 atomech uhlíku, s výhodou uhlovodíkovým řetězcem o 4 atomech uhlíku, přičemž struktura jednotlivých spojek S je vzájemně nezávislá, a
T1 a T2jsou spojky, které přemosťují atomy N’sC8a N5' s C8', kde uvedená spojka je tvořena uhlovodíkovým řetězcem o 2 až 5 atomech uhlíku, s výhodou o 2 nebo 3 atomech uhlíku, přičemž struktura jednotlivých spojek Tje vzájemně nezávislá, kde heteroaryl je aromatická karbocyklická skupina obsahující 4 až 26 uhlíkových atomů a alespoň jeden aromatický kruh, nebo kondenzované aromatické kruhy, v níž je alespoň jeden atom uhlíku aromatického kruhu nahrazen heteroatomem vybraným ze skupiny N, S, O, přičemž heteroaryl může obsahovat I až 5 substituentů, vybraných ze skupiny, zahrnující C6 až C^aryl, C6 až C|6 arylalkyl, C6 až C|6 arylhalogenalkyl, Cj až C6 alkyl, C| až C& halogenalkyl, C| až C12 alkoxy, benzyloxy, C| až C6 alkylthio, halogen, -OH, -SH, -NH2, C| až C6 alkylamino, C| až C6 acylamino, -CN, -SO3H, nitro, -COORn, -C(=O)N(Rn)2, kde Rn je vodík nebo Ci až C6 alkyl;
anionty (X1) a (X2) jsou na sobě nezávislé anionty solí, ajejich ťarmaceuticky přijatelné soli.
2. Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1, zvolené ze skupiny, zahrnující:
2,4-bis((£)-2-(thiofen-3-yljvinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-
5.12- diium trifluormethansulfonát, (£)-2-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin—5,12-diium trifluormethansulfonát, (£)-13-(2-(5-(ethoxykarbonyl)-l H-pyrrol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, (£)-13-(2-(5-brom-l//-indol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyM,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát,
2.13- bis((£')-2-(5-bromthiofen-2-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,la: 1 ',2'—k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
2.13- bis((£')-2-(2,6-dimethoxypyridin-3-y l)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,l2-diium trifluormethansulfonát,
19—((£>—2—(1 —methy 1— 177—indol—2—y 1 jviny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[l',2':l,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
19-((E)-2-(2-methyl-l 77—i ndol—3—y 1) vi ny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[l',2':l,2]azepino[4,3:5',6']benzo[r,2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
19-((7)-2-( 1 //-benzolg] indol—3—y l)v i ny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[T,2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
-38CZ 307163 B6
19—((ΖΓ)—2—(2—feny 1— 177—i ndo 1—3—y 1 )v i ny 1)—6,7,8,11,12,13hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
19-((7)-2-( I //-indol-5-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
19-((£)-2-(5-brom-l Λ/ i ndo 13y I )v iny l > 6.7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[ 1 ’,2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
4.15- bis((£)-4-(pyridin-2-yl)styryl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'-a']benzo[2, l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát,
2,4,15,17-tetra((£)-(2-( l-methyl-l/7-indol-2-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[l,2-a:l',2’-a']benzo[2,l-c:3.4-c’]bisazepindiium trifluormethansulfonát, (£)-l l-(2-([2,2':5',2-terthiofen]-5-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[1,2-a]pyrido[ 1,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, (£)-l l-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k] [2,9]fenantrolin-3,l 0-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((£)-2-(2,6-dimethoxypyridin-3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ',2'k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (£)-2-(2-(5-brom-l/7-indol-3-yl)viny 1)-6,7,10,11- tetrahydrodipyrido[2,1- a: 1 ',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (£)-13-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2k][2,9]fenantrolin-3,l 0-diium trifluormethansulfonát,
2.15- b is((7f )-2-(2-methyl-l H-indol-3-yl)viny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ',2'k][2,9] [fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
2.15- b is((£)—2—( 1-methyl-l H-indol-3-yl)vinyl)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ',2'k][2,9]fenantrolin-5,l 2-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((£)-2-(2-fenyl-l H-indol-3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ',2'k][2,9]fenantrolin-5,l2-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((£)-2-(5-brom-1 H-indol-3-yl)viny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-
k][2,9][fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (rac)-(£)-13-(2-(dibenzo[b,d]furan-4-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[ 1,2-a]pyrido[ 1,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát,
8,9-dimethyl-2,l 5-bis((£)-2-(2-methyl-l H—indol—3—y l)vinyl)~6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,1-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((£)2-( 1 H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,11-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,l2-diium trifluormethansulfonát,
2,4—bis((£)—2—(1H—indol—2—yl)vinyl)—6,7,10,11—tetrahydrodipyrido[2,1—a: 1 ',2'—k][2,9]fenantro1 in—5,12-diium trifluormethansulfonát.
-39CZ 307163 B6
2.4- bis((E)-2-([2,2'-bithiofen]-5-yl)vinyl)-6,7,10,1 ltetrahydrodipyrido|2.1-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
2.4- bis((E)-2-(benzofuran-2-yl)vinyl )-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (2Γ)—2—(2—([2,2'—bith iofen]—5—y l)viny 1)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,l-a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (E)-13-(2-(5-hexylthiofen-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, (E)-l 3-(4-(9J/-karbazol-9-yl)styryl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[ 1,2-a]pyrido[l ,2-k] [2,9]fenantrolin-3,l 0-diium trifluormethansulfonát,
8,9-dimethyl-2,13-bis((E)-2-(4-methyl-l H-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,l 1-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
19-((E)-2-(3-methy lbenzo[b]thiofen-2-y l)viny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3: 5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát,
19-((E)-2-([2,2'-bithiofen]-5-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l 4-diium trifluormethansulfonát,
19-((E)-2-(6-brom-l H-indol-3-y l)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydropyrido[l'2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[l',2':3,4]azepino[l,2-a]chinolin-5,l4-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((E)-2-(4-methyl-l//-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,l l-tetrahydrodipyrido[2,l-a:l',2'-
k] [2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát,
2.15- bis((E)-2-(dibenzo[b,d]furan^4-yl)vinyl)-8,9-dimethyl-6,7,10,l 1-tetrahydrodipyrido- [2,1 —a: 1 ',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (rac)-2,4,13,15-tetrakis((E)-2-(thiofen-3-yl)vinyl)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2a:l',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, (£)-13-(2-(dibenzo[b,d]furan-2-yl)viny))-6,7-dimethy)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,l0-diium trifluormethansulfonát, (E)-13-(2-(4-fenylthiofen-2-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2k][2,9]fenantrolin-3,l 0-diium trifluormethansulfonát, (E)-l 3-(2-( l/7-benzo[g]indol-3-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2k][2,9]fenantrolin-3,l0-diium trifluormethansulfonát,
19-((E)-2-(7-methyl-l /7-indol-3-yl)viny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydopyrido[ 1 ',2': 1 ,2]azepino[4,3:5',6']benzo[ 1 ',2':3,4]azepino[ 1,2-a]chinolin-5,14-diium trifluormethansulfonát, (E)-l l-(2-(dibenzo[b,d]thiofen^4-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2a]pyrido[ 1,2—k][2,9]fenantrolin—3,10-diium trifluormethansulfonát, (rac)-(E)-13-(2-(9-ethyl-9H-karbazol-3-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l,2-a]pyrido[l,2-k][2,9]fenantrolin-3,l0-diium trifluormethansulfonát,
-40CZ 307163 B6 (rac)-8,9-dimethyl-2,13 - bi s((E)~2-(th i ofen- 3 - y 1) v i ny 1)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,1a: 1 '.2' -k][2,9]fčnantrolin 5.12-diium trifluormethansulfonát, (rac)-2,15-bis((E)-2-( 1 H-indol-3-yl)viny 1)-6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát,
4.13- bis((E)-2-(2-methyl-l H—indol—3—y l)v iny I)—6,7,10.1 l-tetrahydrodipyrido[2,1-a: 1 ',2'— k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (E)-l l-(2-(benzo[d]thiazol-2-yl)vinyl)-6,7-dimethyl-4,5,8,9-tetrahydroisochinormo[l,2a]pyrido[ 1,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, (E)-6,7-dimethyl-l l-(2-(5-fenylthiofen-2-yl)vinyl)-4,5,8,9-tetrahydroisochinolino[l ,2a]pyrido[ 1,2-k][2,9]fenantrolin-3,10-diium trifluormethansulfonát, (rac)-(E)-2-(2-(4-nitro-l 77-indol-3-yl)vinyl)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1 -α·. 1 ',2'Ř][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (rac)-(E)-2-(2-(6-isopropyl-l//-indol-3-yl)viny 1)-6,7,8,1 l,12,13-hexahydrodipyrido[l,2a:l',2'-a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, (rac)-2,17-bis((E)-2-( 1H—i ndol—5—y l)v iny 1)—6,7,8,11,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-c’]bisazepindiium trifluormethansulfonát, (rac)-4,15-bis((E)-2-(2,5-dimethyl-l-(3-(trifluormethyl)fenyl)-l H-pyrrol-3-yl)vinyl)-
6.7.8.11.12.13- hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'-a']benzo[2, l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát,
8,9-dimethyl-2,l 5-bis((E)-2-(2-fenyl-l H—indol—3—y l)v inyl)—6,7,10,11-tetrahydrodipyrido- [2,1-a: r,2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (rac)-2,4,15,17-tetrakis((E)-2-( 1H- i ndo I- 2-y I)-6,7,8,1 1,12,13-hexahydrodipyrido[ 1,2-a: 1 ',2'a']benzo[2,l-c:3,4-c']bisazepindiium trifluormethansulfonát, (racj-2,4-bis((E)-2-( 1-methyl-l 77—pyrrol—2—yljviny 1)-6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1a:l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát, (r«c)-2,4-bis((E)-2-(4-methyl-l 77-imidazol-5-yl)vinyl)-6,7,10,11 -tetrahydrodipyrido[2,la: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát.
2,4,13,15-tetrakis((E)-2-( 1-methyl-l H—i ndol—3—y 1) v iny 1)—6,7,10,1 l-tetrahydrodipyrido[2,1 -a: l',2'-k][2,9]fenantrolin-5,12-diium trifluormethansulfonát.
3. Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1 nebo helquaty podle nároku 2, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití jako léčiva.
4. Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1 nebo helquaty podle nároku 2, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití ke stabilizaci G-kvadruplexů.
5. Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1 nebo helquaty podle nároku 2, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití k léčbě onkologických onemocnění.
6. Helquaty obecného vzorce I podle nároku 1 nebo helquaty podle nároku 2, či jejich farmaceuticky přijatelné soli, pro použití k léčbě onemocnění, souvisejících se zvýšenou proliferací
-41 CZ 307163 B6 buněk a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách nebo v promotorech genů.
7. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m , že obsahuje alespoň jeden helquat obecného vzorce I podle nároku I nebo helquat podle nároku 2, či jeho farmaceuticky přijatelnou sůl.
8. Farmaceutický prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že případně dále obsahuje i další aktivní složku a popřípadě alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo nebo ředidlo.
9. Farmaceutický prostředek podle nároku 8 nebo 9 pro použití k léčbě onemocnění, souvisejících se zvýšenou proliferací buněk a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách, nebo v promotorech genů.
10. Použití helquatů obecného vzorce 1 podle nároku 1 nebo helquatů podle nároku 2, či jejich farmaceuticky přijatelných solí, pro výrobu léčiva k léčení onemocnění, souvisejících se zvýšenou proliferací buněk, onkologických onemocnění a k léčbě, vyžadující ovlivnění G-kvadruplexu, s výhodou v telomerách nebo v promotorech genů.
1 výkres
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-369A CZ307163B6 (cs) | 2014-05-29 | 2014-05-29 | Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů |
| EP15729750.8A EP3148997B1 (en) | 2014-05-29 | 2015-05-26 | Helquats with heteroaromatic substituents, preparation thereof, and use thereof as g-quadruplex stabilizers |
| PCT/CZ2015/000052 WO2015180701A1 (en) | 2014-05-29 | 2015-05-26 | Helquats with heteroaromatic substituents, preparation thereof, and use thereof as g-quadruplex stabilizers |
| US15/313,492 US9932339B2 (en) | 2014-05-29 | 2015-05-26 | Helquats with heteroaromatic substituents, preparation thereof, and use thereof as G-quadruplex stabilizers |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2014-369A CZ307163B6 (cs) | 2014-05-29 | 2014-05-29 | Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2014369A3 CZ2014369A3 (cs) | 2015-12-09 |
| CZ307163B6 true CZ307163B6 (cs) | 2018-02-14 |
Family
ID=53432909
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2014-369A CZ307163B6 (cs) | 2014-05-29 | 2014-05-29 | Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9932339B2 (cs) |
| EP (1) | EP3148997B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ307163B6 (cs) |
| WO (1) | WO2015180701A1 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2009237A3 (cs) * | 2009-04-16 | 2010-10-27 | Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved Ceské republiky, v. v. i. | Nové helquaty, jejich prekurzory a zpusob jejich prípravy |
| CZ201332A3 (cs) * | 2013-01-17 | 2014-07-30 | Ústav Organické Chemie A Biochemie Akademie Věd Čr, V.V.I. | Deriváty helquatů, jejich příprava a použití jako léčiva |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPS234402A0 (en) * | 2002-05-15 | 2002-06-13 | Auckland Uniservices Limited | Anti-tumour polycyclic carboxamides |
-
2014
- 2014-05-29 CZ CZ2014-369A patent/CZ307163B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-05-26 EP EP15729750.8A patent/EP3148997B1/en not_active Not-in-force
- 2015-05-26 US US15/313,492 patent/US9932339B2/en active Active
- 2015-05-26 WO PCT/CZ2015/000052 patent/WO2015180701A1/en active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ2009237A3 (cs) * | 2009-04-16 | 2010-10-27 | Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved Ceské republiky, v. v. i. | Nové helquaty, jejich prekurzory a zpusob jejich prípravy |
| CZ201332A3 (cs) * | 2013-01-17 | 2014-07-30 | Ústav Organické Chemie A Biochemie Akademie Věd Čr, V.V.I. | Deriváty helquatů, jejich příprava a použití jako léčiva |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3148997B1 (en) | 2018-06-27 |
| WO2015180701A1 (en) | 2015-12-03 |
| EP3148997A1 (en) | 2017-04-05 |
| US20170096433A1 (en) | 2017-04-06 |
| US9932339B2 (en) | 2018-04-03 |
| CZ2014369A3 (cs) | 2015-12-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Indole-nitroimidazole conjugates as efficient manipulators to decrease the genes expression of methicillin-resistant Staphylococcus aureus | |
| Kamal et al. | Synthesis of 1, 2, 3-triazole-linked pyrrolobenzodiazepine conjugates employing ‘click’chemistry: DNA-binding affinity and anticancer activity | |
| US6462069B2 (en) | Compounds, pharmaceutical compositions, and methods for inhibiting protein kinases | |
| AU780241B2 (en) | Benzazole derivatives and their use as JNK modulators | |
| Kundu et al. | Discovery and mechanistic study of tailor-made quinoline derivatives as topoisomerase 1 poison with potent anticancer activity | |
| TWI527800B (zh) | 作為聚（二磷酸腺苷酸－核醣）聚合酶（ｐａｒｐ）之抑制劑之１－（芳基甲基）喹唑啉－２，４（１ｈ，３ｈ）－二酮及其應用 | |
| ES2231725T3 (es) | 3,5-diamino-1,2,4-triazoles como agentes inhibidores de cinasas. | |
| Che et al. | Discovery of novel schizocommunin derivatives as telomeric G-quadruplex ligands that trigger telomere dysfunction and the deoxyribonucleic acid (DNA) damage response | |
| MXPA05006437A (es) | Derivados de piridino[2,3-d]pirimidina como inhibidores selectivos de kdr y fgfr. | |
| MXPA05001526A (es) | Pirimidinas macrociclicas, produccion de las mismas y su uso como medicamentos. | |
| Palluotto et al. | Quinolino [3, 4-b] quinoxalines and pyridazino [4, 3-c] quinoline derivatives: synthesis, inhibition of topoisomerase IIα, G-quadruplex binding and cytotoxic properties | |
| KR20050086770A (ko) | 단백질 키나제 억제제로서의티에노[3,2-ｂ]피리딘-6-카보니트릴 및티에노[2,3-ｂ]피리딘-5-카보니트릴 | |
| KR20070015575A (ko) | 단백질 키나제 억제제로서의티에노[3,2-ｂ]피리딘-6-카보니트릴 | |
| US20190209548A1 (en) | Linked diaryl compounds with anticancer properties and methods of using the same | |
| Long et al. | Molecular recognition and imaging of human telomeric G-quadruplex DNA in live cells: a systematic advancement of thiazole orange scaffold to enhance binding specificity and inhibition of gene expression | |
| Babushkina et al. | Efficient synthesis and evaluation of antiviral and antitumor activity of novel 3-phosphonylated thiazolo [3, 2-a] oxopyrimidines | |
| Verga et al. | Polyheteroaryl oxazole/pyridine-based compounds selected in vitro as G-quadruplex ligands inhibit rock kinase and exhibit antiproliferative activity | |
| Hu et al. | Design, synthesis and biological evaluation of methylenehydrazine-1-carboxamide derivatives with (5-((4-(pyridin-3-yl) pyrimidin-2-yl) amino)-1H-indole scaffold: Novel potential CDK9 inhibitors | |
| US20100063046A1 (en) | Tetracyclic imidazole analogs | |
| Singu et al. | Benzimidazole-1, 2, 3-triazole hybrid molecules: Synthesis and study of their interaction with G-quadruplex DNA | |
| Stolić et al. | Effect of 3, 4-ethylenedioxy-extension of thiophene core on the DNA/RNA binding properties and biological activity of bisbenzimidazole amidines | |
| CA2411928A1 (en) | Pyrazole-thiazole compounds, pharmaceutical compositions containing them, and methods of their use for inhibiting cyclindependent kinases | |
| CZ307163B6 (cs) | Helquaty s heteroaromatickými substituenty, jejich příprava a použití jako stabilizátory G-kvadruplexů | |
| CN111732584A (zh) | 二芳基取代稠杂环类化合物及其制备方法和在制药中的用途 | |
| Huang et al. | Discovery of novel benzofuro [3, 2-b] quinoline derivatives as dual CDK2/Topo I inhibitors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20230529 |