CZ306547B6 - Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití - Google Patents
Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ306547B6 CZ306547B6 CZ2015-657A CZ2015657A CZ306547B6 CZ 306547 B6 CZ306547 B6 CZ 306547B6 CZ 2015657 A CZ2015657 A CZ 2015657A CZ 306547 B6 CZ306547 B6 CZ 306547B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mmol
- ethyl
- acid
- product
- morpholino
- Prior art date
Links
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 title claims abstract description 31
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000018208 Cannabinoid Receptor Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108050007331 Cannabinoid receptor Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 18
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 N-substituted indole Chemical class 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 claims description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 5
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- DUNKXUFBGCUVQW-UHFFFAOYSA-J zirconium tetrachloride Chemical compound Cl[Zr](Cl)(Cl)Cl DUNKXUFBGCUVQW-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 5
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- WSNMPAVSZJSIMT-UHFFFAOYSA-N COc1c(C)c2COC(=O)c2c(O)c1CC(O)C1(C)CCC(=O)O1 Chemical compound COc1c(C)c2COC(=O)c2c(O)c1CC(O)C1(C)CCC(=O)O1 WSNMPAVSZJSIMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010934 O-alkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical class CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 claims 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940065144 cannabinoids Drugs 0.000 abstract description 18
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 abstract description 7
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 238000012800 visualization Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 24
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 20
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 20
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 15
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 12
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 8
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- GOORTGQVODJZGU-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-4-phenylmethoxynaphthalene Chemical compound C12=CC=CC=C2C(Br)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 GOORTGQVODJZGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AQSCHALQLXXKKC-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxybenzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 AQSCHALQLXXKKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- JDNLPKCAXICMBW-UHFFFAOYSA-N JWH 018 Chemical compound C12=CC=CC=C2N(CCCCC)C=C1C(=O)C1=CC=CC2=CC=CC=C12 JDNLPKCAXICMBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)aluminum Chemical compound CC(C)C[Al]CC(C)C SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCCCCC KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000000506 psychotropic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- JWSWULLEVAMIJK-UHFFFAOYSA-N 1-phenylmethoxynaphthalene Chemical compound C=1C=CC2=CC=CC=C2C=1OCC1=CC=CC=C1 JWSWULLEVAMIJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQVRUHXWNFMWQB-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridine Chemical compound O1C(C)(C)C(C)(C)OB1C1=CC=NC(Br)=C1 NQVRUHXWNFMWQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ICEKEZSKMGHZNT-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxybenzoyl chloride Chemical compound C1=CC(C(=O)Cl)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 ICEKEZSKMGHZNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXVHJLATONZLDT-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxynaphthalene-1-carbaldehyde Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C=O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 VXVHJLATONZLDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYSZCVFYOWTMFI-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxynaphthalene-1-carbonitrile Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C#N)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 OYSZCVFYOWTMFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMTFAIVHIUNGRO-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxynaphthalene-1-carboxylic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C(=O)O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 JMTFAIVHIUNGRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005727 Friedel-Crafts reaction Methods 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QHMBSVQNZZTUGM-UHFFFAOYSA-N Trans-Cannabidiol Natural products OC1=CC(CCCCC)=CC(O)=C1C1C(C(C)=C)CCC(C)=C1 QHMBSVQNZZTUGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- QHMBSVQNZZTUGM-ZWKOTPCHSA-N cannabidiol Chemical compound OC1=CC(CCCCC)=CC(O)=C1[C@H]1[C@H](C(C)=C)CCC(C)=C1 QHMBSVQNZZTUGM-ZWKOTPCHSA-N 0.000 description 2
- 229950011318 cannabidiol Drugs 0.000 description 2
- ZTGXAWYVTLUPDT-UHFFFAOYSA-N cannabidiol Natural products OC1=CC(CCCCC)=CC(O)=C1C1C(C(C)=C)CC=C(C)C1 ZTGXAWYVTLUPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N copper(i) cyanide Chemical compound [Cu+].N#[C-] DOBRDRYODQBAMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000006264 debenzylation reaction Methods 0.000 description 2
- PCXRACLQFPRCBB-ZWKOTPCHSA-N dihydrocannabidiol Natural products OC1=CC(CCCCC)=CC(O)=C1[C@H]1[C@H](C(C)C)CCC(C)=C1 PCXRACLQFPRCBB-ZWKOTPCHSA-N 0.000 description 2
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 2
- YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L disodium;2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCC(C([O-])=O)(C(C([O-])=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960004242 dronabinol Drugs 0.000 description 2
- 239000002621 endocannabinoid Substances 0.000 description 2
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Substances NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000001869 matrix assisted laser desorption--ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002825 nitriles Chemical group 0.000 description 2
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- SDJFEICDNFXJCE-UHFFFAOYSA-N 4-phenylmethoxynaphthalene-1-carbonyl chloride Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C(=O)Cl)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 SDJFEICDNFXJCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009132 CB1 Cannabinoid Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010073366 CB1 Cannabinoid Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 150000001200 N-acyl ethanolamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000007930 O-acyl isoureas Chemical class 0.000 description 1
- 238000005609 Rosenmund-von Braun cyanation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000028810 Shared psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CYQFCXCEBYINGO-UHFFFAOYSA-N THC Natural products C1=C(C)CCC2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3C21 CYQFCXCEBYINGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- LGEQQWMQCRIYKG-DOFZRALJSA-N anandamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NCCO LGEQQWMQCRIYKG-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- LGEQQWMQCRIYKG-UHFFFAOYSA-N arachidonic acid ethanolamide Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(=O)NCCO LGEQQWMQCRIYKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N delta1-THC Chemical compound C1=C(C)CC[C@H]2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3[C@@H]21 CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N 0.000 description 1
- SPWVRYZQLGQKGK-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;hexane Chemical compound ClCCl.CCCCCC SPWVRYZQLGQKGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- SZWYXJHTNGJPKU-UHFFFAOYSA-N jwh-200 Chemical compound C=1C=CC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C(C1=CC=CC=C11)=CN1CCN1CCOCC1 SZWYXJHTNGJPKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFLSJIQJQKDDCM-UHFFFAOYSA-N jwh-250 Chemical compound C12=CC=CC=C2N(CCCCC)C=C1C(=O)CC1=CC=CC=C1OC FFLSJIQJQKDDCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000006138 lithiation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 240000004308 marijuana Species 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 1
- 125000002524 organometallic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000004800 psychological effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000011911 α-alkylation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
Vynález se týká nově připravených derivátů syntetických kanabinoidů, součástí jejichž struktury je krátký spojovací můstek nesoucí karboxylovou funkční skupinu, a chemických postupů vedoucích k přípravě takovýchto sloučenin. Tyto deriváty syntetických kanabinoidů lze s výhodou využít pro konjugaci s fluorescentní značkou, která by následně umožnila vizualizaci interakcí takto značených ligandů s kanabinoidními receptory, či pro přípravu imunogenů konjugací s nosným proteinem. Polyklonální králičí protilátky získané z imunizovaných laboratorních zvířat lze uplatnit při vývoji rychlých, uživatelsky příjemných imunochemických testů formátu LFIA (Lateral-Flow Immunochromatographic Assay).
Description
Derivát syntetického kanabinoidů, způsob jeho přípravy a použití
Oblast techniky
Vynález se týká nově připravených derivátů syntetických kanabinoidů, součástí jejichž struktury je krátký spojovací můstek nesoucí karboxylovou funkční skupinu, a chemických postupů vedoucích k přípravě takovýchto sloučenin. Tyto deriváty syntetických kanabinoidů lze s výhodou využít pro konjugaci s fluorescentní značkou, která by následně umožnila vizualizaci interakcí takto značených ligandů s kanabinoidními receptory, či pro přípravu imunogenů konjugací s nosným proteinem. Polyklonální králičí protilátky získané z imunizovaných laboratorních zvířat lze uplatnit při vývoji rychlých, uživatelsky příjemných imunochemických testů formátu LFIA (Lateral-Flow Immunochromatographic Assay).
Dosavadní stav techniky
Na drogové scéně se v posledních letech kromě tradičních drog (kokain, opiáty, amfetaminy, kanabinoidy) objevují také nové syntetické drogy (NSD). Důvodem je snaha výrobců a distributorů obejít stávající legislativní normy, v nichž jsou omamné a psychotropní látky vymezeny obvykle taxativně. Na ilegální trh se tak dostávají analoga známých látek s psychotropním potenciálem, která dosud nejsou uvedena na seznamu ilegálních látek, nebo jejichž prekurzory nejsou monitorovanými substancemi. Hlavní nebezpečí spojené s užíváním těchto nových syntetických drog (NSD) tkví v nedostatku informací o jejich farmakokinetickém a toxikologickém chování, neboť tyto látky neprošly žádnými klinickými testy.
Početně nejbohatší a ze strukturního hlediska značně rozmanitou skupinou NSD jsou syntetické kanabinoidy. Tyto látky se váží na kanabinoidní receptory, což jsou s G-proteinem spřažené transmembránové receptory. Podtyp receptoru CBÍ se nachází především v centrální nervové soustavě, podtyp CB2 je exprimován zejména v buňkách imunitního systému. Endokanabinoidní systém dodnes nebyl zcela pochopen. Je však známo, že endogenní kanabinoidy, jejichž nejznámějším zástupcem je anandamid, ovlivňují cítění bolesti, náladu, paměť, ale i chuť k jídlu. Ke kanabinoidním receptorům se váže též celá řada exogenních sloučenin, k nejvýznamnějším patří aktivní složky konopí A9-tetrahydrokanabinol (THC) a kanabidiol (CBD), které jsou parciálními agonisty obou zmíněných podtypů receptorů. Syntetické kanabinoidy jsou plní agonisté kanabinoidních receptorů s mnohem dramatičtějšími psychickými účinky. Zaznamenána byla celá řada intoxikací, které měly v některých případech i fatální důsledky. Popsány jsou i případy indukované psychózy. (Banister SD, Wilkinson SM, Longworth M, Stuart J, Apetz N, English K, Brooker L, Goebel C, Hibbs DE, Glass M, Connor M, McGregor IS, Kassiou M. The Synthesis and Pharmacological Evaluation of Adamantane-Derived Indoles: Cannabimimetic Drugs of Abuse. Chem. Neurosci. 2013;4:1081-92.)
Tradiční drogy lze detekovat pomocí komerčních imunochemických testů založených na selektivní reakci protilátky a antigenu, kterým je v tomto případě hledaná omamná či psychotropní látka. K detekci NSD však tyto testy použít nelze. (Páleníček T, Kuchař M. Je možná detekce a identifikace nových syntetických drog (NSD) pomocí orientačních testů? Adiktologie 2011; 11:208-14.) Odhalit intoxikaci osob novými syntetickými drogami je možné pomocí metod klinické biochemie, a to zejména analýzou pomocí plynové chromatografíe s hmotnostním detektorem (GCMS), což je poměrně náročné jak na přístroje, tak na odbornost obsluhy. Sestavení přístrojově nenáročných, jednoduchých, uživatelsky příjemných imunochemických testů na principu LFIA (Lateral Flow Immunochromatographic Assay) by umožňovalo daleko rychlejší a levnější orientační detekci látek v biologickém materiálu ve zdravotnictví nebo při dopravních kontrolách řidičů.
- 1 CZ 306547 B6
Přestože existuje mnoho evaluovaných imunochemických testů pro stanovení tradičních kanabinoidů, možnosti imunoanalýzy syntetických kanabinoidů jsou omezené. V literatuře jsou popsány příklady metod pro ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) stanovení JWH-018 a JWH250 v krvi, krevním séru a moči (Amtson A, Ofsa B, Lancaster D, Simon JR, McMullin M, Logan B. Validation of a Novel Immunoassay for the Detection of Synthetic Cannabinoids and Metabolites in Urine Specimens. J. Anal. Toxicol. 2013; 37:284-90.), JWH-200 ve slinách (Rodrigues WC, Catbagan P, Rana S, Wang G, Moore C. Detection of Synthetic Cannabinoids in Oral Fluid Using ELISA and LC—MS-MS. J. Anal. Toxicol. 2013; 37:526-33.) a HEIA (Homogenous Enzyme ImmunoAssay) stanovení JWH-018 A-pentanové kyseliny, což je významný metabolit JWH-018, v moči (Bames AJ, Young S, Spinelli E, Martin TM, Klette KL, Huestis MA. Evaluation of a homogenous enzyme immunoassay for the detection of synthetic cannabinoids in urine. Forensic Sci Int. 2014;241:27-34.).
Jako nosičové proteiny se používají hovězí sérový albumin (BSA), hovězí thyroglobumin (BTG), popř. další proteiny vhodných vlastností. Konjugáty se připravují reakcí aktivované formy haptenu (reaktivní anhydridy či estery) s ε-aminoskupinami lysinových zbytků proteinu za vytvoření amidových vazeb. Konjugací se dosáhne statisticky náhodného obsazení lysylů přítomných v proteinu.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou nové deriváty syntetických kanabinoidů. Tyto deriváty nesou krátký spojovací můstek s karboxylovou skupinou. Spojovací můstek je využitelný pro připojení fluorescentní značky, která následně umožní vizualizaci interakcí kanabinoidů s kanabinoidními receptory, či je karboxylová skupina spojovacího můstku využitelná pro přípravu imunogenů konjugací s nosným proteinem. Z laboratorních zvířat imunizovaných těmito imunogeny lze získat polyklonální králičí protilátky a uplatnit je při vývoji imunoanalytických metod stanovení syntetických kanabinoidů.
Spojovací můstek je připojen přes kyslík v poloze 4 benzenového jádra l-alkyl-3-benzoylindolů nebo v poloze 4 naftalenu u l-alkyl-3-naftoylindolů či přímo na dusíku 1 -alkyl-7/7-indol-3karboxamidů.
Sloučeniny obecného vzorce II a IV se připraví tak, že se benzylem chráněná 4-hydroxyaren-lkarboxylová kyselina nejprve převede na příslušný chlorid. Ten slouží jako acylační činidlo při Friedelově-Craftsově reakci s ^-substituovaným indolem v přítomnosti Lewisovy kyseliny. Jako Lewisova kyselina je s výhodou použit zirkonium tetrachlorid.
Hydroxylová skupina je odchráněna debenzylací na palladiovém katalyzátoru. č>-alkylací ethylesterem ω-bromalkanové kyseliny a následnou bazickou hydrolýzou je do molekuly zaveden spojovací můstek nesoucí karboxylovou funkční skupinu.
Připravené deriváty syntetických kanabinoidů lze s výhodou využít pro konjugaci s fluorescentní značkou, která by následně umožnila vizualizaci interakcí takto značených ligandů s kanabinoidními receptory, či pro přípravu imunogenů konjugací s nosným proteinem. Polyklonální králičí protilátky získané z imunizovaných laboratorních zvířat lze uplatnit při vývoji rychlých, uživatelsky příjemných imunochemických testů formátu LFIA (Lateral-Flow Immunochromatographic Assay).
Pro získání protilátek proti těmto syntetickým kanabinoidům, tedy nízkomolekulámím látkám (haptenům), bylo nutné připojit je k nosnému proteinu. Pro tyto účely byl jako vhodný nosný protein vybrán hovězí sérový albumin (BSA). Při tvorbě konjugátů byla využita metoda aktivovaného esteru, při níž je hapten reakcí s AJV’-dicyklohexylkarbodiimidem (DCC) a A-hydroxysukcinimidem (NHS) nejprve převeden na nestabilní derivát O-acylisomočoviny, a poté na aktivovaný
-2CZ 306547 B6 ester. Vlastní konjugační reakce, při níž dochází k tvorbě amidové vazby mezi karboxylovou skupinou haptenu a primární aminoskupinou aminokyseliny lysinu v BSA, pak probíhala v reverzním micelámím prostředí anionaktivního tenzidu.
Způsob přípravy derivátů syntetických kanabinoidů
Sloučeniny obecného vzorce II a IV se připraví tak, že se benzylem chráněná 4-hydroxyaren-lkarboxylová kyselina nejprve převede na příslušný chlorid. Ten slouží jako acylační činidlo při Friedelově-Craftsově reakci s /V-substituovaným indolem v přítomnosti zirkonium tetrachloridu jako Lewisovy kyseliny. Hydroxylová skupina je odchráněna debenzylací na palladiovém katalyzátoru. O-alkylací ethyl-esterem ω-bromalkanové kyseliny a následnou bazickou hydrolýzou je do molekuly zaveden spojovací můstek nesoucí karboxylovou funkční skupinu. Produkty, získané ve vysokém výtěžku, je proto možné konjugovat s ε-aminoskupinami lysinových zbytků proteinu za vytvoření amidových vazeb.
Zatímco 4-benzyloxybenzoová kyselina byla připravena standardním, v literatuře popsaným způsobem, pro přípravu 4-benzyloxynaftalen-l*karboxylové kyseliny je představena inovativní syntetická cesta. V molekule l-benzyloxy-4-bromnaftalenu je brom nejprve nahrazen nitrilovou funkční skupinou při Rosenmundově - von Braunově reakci. Redukce získaného nitrilu diisobutylaluminium hydridem a zpětná oxidace aldehydu oxidem stříbrným, připravovaným in situ z dusičnanu stříbrného a hydroxidu sodného, umožní zavést do molekuly karboxylovou funkční skupinu s vyšším výtěžkem, než publikovaný postup založený na lithiaci a následné reakci organokovového species s oxidem uhličitým, přestože je reakční sekvence delší.
Metodou enzymové imunoanalýzy byly testovány interakce polyklonálních králičích protilátek připravených proti příslušným syntetickým kanabinoidům. S protilátkami vykazujícími nejlepší charakteristiky byly pro imunochemické stanovení optimalizovány a charakterizovány varianty ELISA v nepřímém kompetitivním uspořádání. Byl určen významný analytický parametr tzv. 50% intercept, (I50j viz tabulka). I50 představuje koncentraci analytu, potřebnou k vyvázání 50 % protilátek přítomných v reakčním roztoku, která je nezbytná pro kvalitativní stanovení syntetického kanabinoidů v neznámém vzorku.
Při imunoanalýze v nepřímém kompetitivním uspořádání soutěží antigen zakotvený na pevném nosiči (imobilizační konjugát) se stanovovaným antigenem ve vzorku o omezený počet vazebných míst na molekulách protilátky. Čím více antigenu obsahuje analyzovaný vzorek, tím méně protilátky se naváže na zakotvený antigen. Nenavázané složky se odstraní a přidá se enzymem značená sekundární protilátka proti navázané protilátce. Detekce je uskutečněna enzymovou reakcí, kdy vzniká barevný produkt, jehož intenzita zbarvení je měřena spektrofotometricky.
Byly připraveny tyto hapteny:
Hapten II:
o názvu 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-777-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}octové kyseliny a struktuře II:
-3 CZ 306547 B6
a hapten IV:
o názvu 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7Z7-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}octové kyseliny a struktuře IV:
Objasnění výkresů
Obr. 1: Schéma syntézy haptenu II
Obr.2: Schéma syntézy haptenu IV
Obr.3: Schéma provedené konjugace hapten s BSA
Obr.4: MALDI spektrum prokazující strukturu připraveného konjugátu haptenu II s BSA, detekující, že 20 molekul haptenu II se průměrně navázalo na nosný protein - BSA
Obr.5: MALDI spektrum prokazující strukturu připraveného konjugátu haptenu IV s BSA, detekující, že 20 molekul haptenu IV se průměrně navázalo na nosný protein - BSA
Obr.6: Schématický průběh nepřímé kompetitivní ELISA; A imobilizace konjugátu na stěny jamek mikrotitraění destičky; B aplikace kompetujících složek; C aplikace sekundární protilátky značené enzymem (peroxidasou); D aplikace substrátu pro peroxidasu; E enzymová reakce peroxidasy se substrátem; F zastavení enzymové reakce kyselinou sírovou · imobilizační konjugát ©cílový analyt ve vzorku; । primární protilátka;^ sekundární protilátka značená enzymem © substrát pro peroxidasu.
-4CZ 306547 B6
Obr.7: Přehled použitých konjugátů a protilátek při vývoji metod ELISA; BSA: hovězí sérový albumin z ang. bovine serum albumin; specifická protilátka: protilátka proti imunogenu příslušného kanabinoidu s BSA
Obr.8: Chemická struktura haptenu II
Obr.9: Chemická struktura haptenu IV
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Syntéza haptenu II
Výchozí naft-l-ol (1442 mg, 10,00 mmol) byl rozpuštěn v acetonitrilu (40 mL), k roztoku byl přisypán bezvodý uhličitan draselný (2764 mg, 20.00 mmol). Po 30 minutách byl přidán benzylbromid (1784 pL, 15,00 mmol), reakční směs byla zahřáta k varu a míchána 16 hodin. Po zchladnutí reakční směsi na laboratorní teplotu byl přidán ethyl-acetát, organická fáze byla postupně promyta 2 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, poté byla vysušena pomocí síranu sodného. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan-dichlormethan 19/1). Byl izolován produkt 1-benzyloxynaftalen (2239 mg, 9,56 mmol) ve výtěžku 96 %.
1-Benzyloxynaftalen (1531 mg, 6,53 mmol) byl rozpuštěn v acetonitrilu (35 mL), roztok byl pomocí ledové lázně ochlazen na 0 °C a v několika podílech byl přidán jV-bromsukcinimid (1163 mg, 6,53 mmol). Reakční směs byla 3 hodiny míchána při 0 °C. Po ohřátí na laboratorní teplotu byl přidán ethyl-acetát a organická fáze byla třikrát promyta vodou. Vodná fáze byla zpětně extrahována dvěma podíly ethyl-acetátu a spojené organické fáze byly sušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexandichlormethan 19/1). Byl izolován produkt 1 -benzyloxy-4-bromnaftalen (1885 mg, 6,02 mmol) ve výtěžku 92 %.
1-Benzyloxy-4-bromnaftalen (1404 mg, 4,48 mmol) byl rozpuštěn v A,A-dimethylformamidu (150 mL) a k roztoku byl přidán kyanid měďný (605 mg, 6,72 mmol). Reakční směs byla po dobu 24 hodin zahřívána k varu na elektrickém topném hnízdě. Poté byl přisypán další podíl kyanidu měďného (121 mg, 1,35 mmol) a reakční směs byla zahřívána k varu dalších 21 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno a odparek extrahován mezi ethyl-acetát a vodu. Nerozpuštěný podíl byl odfiltrován a suspendován ve vodném roztoku amoniaku. Amoniakální roztok byl protřepán s dvěma podíly ethyl-acetátu, spojené organické fáze byly promyty 1 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou a vodou a poté vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Ethyl-acetát byl odpařen a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan-ethyl-acetát 20/1). Byl izolován produkt 4-benzyloxynaftalen-l-karbonitril (1013 mg, 3,91 mmol) ve výtěžku 87 %.
4-Benzyloxynaftalen-l-karbonitril (1000 mg, 3,86 mmol) byl rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (60 mL), roztok byl pomocí ledové lázně ochlazen na 0 °C a stříkačkou byl přikapán 1 mol/1 roztoku diisobutylaluminium hydridu v hexanu (7,7 mL, 7,70 mmol). Reakční směs byla ponechána míchat přes noc za laboratorní teploty. Přebytečný diisobutylaluminium hydrid byl rozložen vodou. Vodná fáze byla okyselena 2 mol/1 kyselinou chlorovodíkovou až na pH 1 a promyta dvěma podíly dichlormethanu. Organické fáze byly spojeny a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexanethyl-acetát 9/1). Byl izolován produkt 4-benzyloxynaftalen-1-karbaldehyd (762 mg, 2,91 mmol) ve výtěžku 75 %.
-5CZ 306547 B6
4-Benzyloxynaftalen-l-karbaldehyd (1544 mg, 5,89 mmol) byl rozpuštěn v ethanolu (80 mL) při 60 °C, k roztoku byl přidán dusičnan stříbrný (4002 mg, 23,56 mmol) a stříkačkou byl postupně přikapáván roztok hydroxidu sodného (942 mg, 23,56 mmol) ve směsi ethanolu s vodou. Po přidání veškerého hydroxidu byla reakční směs míchána a zahřívána po dobu 24 hodin. Přebytečný oxid stříbrný i vyloučené stříbro byly odfiltrovány a promyty větším množstvím vody. Filtrát byl okyselen 2 mol/1 kyseliny chlorovodíkové až na pH 1 a promyt dvěma podíly diethyletheru. Organické fáze byly spojeny a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a získaný surový produkt byl triturován chloroformem. Žádaný produkt 4-benzyloxynaftalen-1 karboxylová kyselina (1409 mg, 5,07 mmol) byl izolován ve výtěžku 86 %.
4-Benzyloxynaftalen-l-karboxylová kyselina (1200 mg, 4,30 mmol) byla rozpuštěna v suchém dichlormethanu (20 mL), k roztoku bylo přidáno několik kapek Λζ/V-dimethylformamidu a stříkačkou byl přikapán oxalylchlorid (482 pL, 5,60 mmol). Reakce probíhala 3 hodiny při laboratorní teplotě. Byl přidán toluen (10 mL), přebytečný oxalylchlorid a rozpouštědla byly odpařeny. Surový 4-benzyloxynaftalen-1-karbonylchlorid (382 mg, 1,29 mmol) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (25 mL) a stříkačkou byl přikapán roztok l-[2-(morfolin-4-yl)ethyl]777-indolu (385 mg, 1,67 mmol) v suchém dichlormethanu (5 mL) při teplotě -10 °C. K reakční směsi byl přidán zirkonium tetrachlorid (450 mg, 1,93 mmol). Teplota byla 1 hodinu udržována na -10 °C, poté 3 hodiny na 0 °C. Reakce dále probíhala přes noc za laboratorní teploty, ukončena byla přidáním vody. Vodná fáze byla promyta dvěma podíly ethyl-acetátu, spojené organické fáze byly zpětně extrahovány vodou a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexanaceton 3/1). Byl izolován produkt l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-benzyloxy-l-naftoyl)-777-indol (444 mg, 0,91 mmol) ve výtěžku 70 %.
l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-benzyloxy-l-naftoyl)-777-indol (144 mg, 0,29 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém ethanolu (35 mL), k roztoku byl přidán formiát amonný (93 mg, 1,47 mmol) a katalytické množství palladia na uhlíku. Reakce byla míchána 1 hodinu za laboratorní teploty. Palladiový katalyzátor byl odfiltrován, filtrát byl zahuštěn částečným odpařením ethanolu a následně naředěn ethyl-acetátem. Organická fáze byla promyta roztokem uhličitanu draselného, a dvěma podíly roztoku chloridu sodného, poté byla vysušena pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan/aceton 9/4). Byl izolován produkt l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-hydroxy-l-naftoyl)-7/7-indol (116 mg, 0,29 mmol) ve výtěžku 99 %.
l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-hydroxy-l-naftoyl)-777-indol (110 mg, 0,28 mmol) byl rozpuštěn v suchém acetonu (30 mL) při 50 °C, k roztoku byl přisypán bezvodý uhličitan draselný (57 mg, 0,41 mmol). Po 30 minutách byl přidán ethyl-2-bromacetát (36 pL, 0,32 mmol) a reakční směs byla zahřívána k varu. Reakce probíhala 3 hodiny. Po zchladnutí reakční směsi na laboratorní teplotu byl přidán ethyl-acetát, organická fáze byla postupně promyta dvěma podíly vody a nasyceným roztokem chloridu sodného, poté byla vysušena pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan/aceton 3/1). Byl izolován produkt ethyl-2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7/7-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}acetát (111 mg, 0,23 mmol) ve výtěžku 83 %.
Ethyl-2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-777-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}acetát (105 mg, 0,22 mmol) byl suspendován v ethanolu (15 mL), k roztoku byl stříkačkou přikapán 1M roztok hydroxidu sodného ve vodě (3 mL). Reakce probíhala 1 hodinu při teplotě 50 °C. Ethanol byl odpařen, vodná fáze byla okyselena na pH 1, poté byla odpařena i voda. Vyloučený chlorid sodný byl odstraněn triturací odparku vodou. Produkt byl přečištěn chromatografií na reverzní fázi (voda/methanol, gradient 10/1—>1/1). Byl izolován produkt ve formě hydrochloridu 2-{4-[l-(2(4-morfolino)ethyl)-777-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}octové kyseliny (73 mg, 0,15 mmol) s výtěžkem 68 %.
-6CZ 306547 B6
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ ppm: 2,52 (t, J=4,50 Hz, 4 H, CH2NCH2), 2,78 (t, J=6,60 Hz, 2 H, NCH2), 3,62 (t, J=4,50 Hz, 4 H, CH2OCH2), 3,83 (br s, 1 Η, NH), 4,24 (t, J=6,90 Hz, 2 H, NCH2), 4,66 (s, 2 H, OCH2), 6,60 (d, J=7,80 Hz, 1 H, ArH), 7,30 - 7,46 (m, 7 H, ArH), 8,19 8,22 (m, 1 H, ArH), 8,32 - 8,35 (m, 1 H, ArH), 8,41 - 8,44 (m, 1 H, ArH). 13C NMR (75 MHz, CDC13) δ ppm: 42,75, 52,86, 56,44, 65,42, 66,86, 103,33, 109,84, 118,07, 122,57, 122,96, 123,10, 124,04, 125,62, 125,79, 125,92, 127,12, 127,48, 127,67, 131,70, 132,15, 136,87, 138,34, 155,58, 172,61, 191,69. IČ (CHC13): 3107, 3075, 3053, 2957, 2927, 2859, 2816, 1920, 1727,1622, 1605, 1578, 1520, 1509, 1485, 1463, 1425, 1394, 1372, 1322, 1258, 1230, 1196, 1159, 1134, 1098, 1071, 1032, 1014, 986, 910, 870, 820, 794, 774, 749, 715, 669, 626, 561, 425. HRMS-ESI: monoisotopická hmota: 458,18417 Da, nalezeno (m/z) 459,19109 (vypočteno 459,19145) odpovídá iontu [M+H]+ připravené látky.
Příklad 2
Syntéza haptenu IV
Výchozí 4-hydroxybenzoová kyselina (8287 mg, 60,00 mmol) byla rozpuštěna v acetonitrilu (140 mL) při 60 °C, k roztoku byl přisypán bezvodý uhličitan draselný (19073 mg, 138,00 mmol). Po 30 minutách byl přidán benzylbromid (14 986 pL, 126,00 mmol), reakční směs byla zahřáta k varu a míchána 16 hodin. Po zchladnutí reakční směsi na laboratorní teplotu byl přidán ethyl-acetát a voda, organická fáze byla oddělena a vodná promyta dalšíma dvěma podíly ethyl-acetátu. Organické extrakty byly spojeny a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan/dichlormethan, gradient 4/1—>1/1). Byl izolován produkt benzyl-4-benzyloxybenzoát (18714 mg, 58,83 mmol) ve výtěžku 98 %.
Benzyl-4-benzyloxybenzoát (18593 mg, 58,44 mmol) byl suspendován ve směsi ethanolu (300 mL) s vodou (100 mL). Byl přidán hydroxid sodný (12 000 mg, 300,02 mmol) a reakční směs byla zahřáta k varu. Reakce probíhala 1 hodinu. Ethanol byl odpařen a vodná fáze byla po naředění promyta dvěma podíly diethyletheru. Poté byla okyselena na pH 1 a protřepána postupně s třemi podíly diethyletheru a ethyl-acetátem. Organické fáze byly spojeny a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (dichlormethan/methanol 97/3). Byl izolován produkt 4-benzyloxybenzoová kyselina (12 658 mg, 55,50 mmol) ve výtěžku 95 %.
4-Benzyloxybenzoová kyselina (1460 mg, 6,40 mmol) byla rozpuštěna v suchém dichlormethanu (35 mL), k roztoku bylo přidáno několik kapek N,A-dimethy 1 formámidu a stříkačkou byl přikapán oxalylchlorid (715 pL, 8,32 mmol). Reakce probíhala 3 hodiny při laboratorní teplotě. Byl přidán toluen (10 mL), přebytečný oxalylchlorid a rozpouštědla byly odpařeny, vznikl 4-benzyloxybenzoylchlorid.
Surový 4-benzyloxybenzoylchlorid (1081 mg, 4,38 mmol) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (55 mL) a stříkačkou byl přikapán roztok l-[2-(morfolin-4-yl)ethyl]-777-indolu (1313 mg, 5,70 mmol) připravený v suchém dichlormethanu (5 mL) při teplotě -30 °C. K. reakční směsi byl přidán zirkonium tetrachlorid (1533 mg, 6,58 mmol). Teplota byla 90 minut udržována na -30 °C, 90 minut na -20 °C, poté 90 minut na -10 °C a nakonec 3 hodiny na teplotě 0 °C. Reakce dále probíhala přes noc za laboratorní teploty, ukončena byla přidáním vody. Vodná fáze byla promyta dvěma podíly ethyl-acetátu, spojené organické fáze byly zpětně extrahovány vodou a vysušeny pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan/aceton, gradient 16/3—>3/1). Byl izolován produkt l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-benzyloxybenzoyl)-777-indol (827 mg, 1,88 mmol) ve výtěžku 43 %.
l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-benzyloxybenzoyl)-7ZZ-indol (839 mg, 1,90 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém ethanolu (65 mL), k roztoku byl přidán formiát amonný (600 mg, 9,51 mmol) a kata
-7CZ 306547 B6 lytické množství palladia na uhlíku. Reakce byla míchána 3 hodiny za laboratorní teploty. Palladiový katalyzátor byl odfiltrován, filtrát byl zahuštěn částečným odpařením ethanolu a následně naředěn ethyl-acetátem. Organická fáze byla postupně promyta roztokem uhličitanu draselného, roztokem chloridu sodného a vodou, poté byla vysušena pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan-aceton, gradient 3/1—>2/1). Byl izolován produkt l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-hydroxybenzoyl)-7Z7-indol (551 mg, 1,57 mmol) ve výtěžku 83 %.
l-[2-(4-morfolino)ethyl]-3-(4-hydroxybenzoyl)-777-indol (480 mg, 1,37 mmol) byl rozpuštěn v suchém acetonu (35 mL) při 50 °C, k roztoku byl přisypán bezvodý uhličitan draselný (285 mg, 2,05 mmol). Po 30 minutách byl přidán ethyl-2-bromacetát (183 pL, 1,64 mmol) a reakční směs byla zahřívána k varu. Reakce probíhala 3 hodiny. Po zchladnutí reakční směsi na laboratorní teplotu byl přidán ethyl-acetát, organická fáze byla postupně promyta dvěma podíly vody a nasyceným roztokem chloridu sodného, poté byla vysušena pomocí síranu hořečnatého. Rozpouštědla byla odpařena a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií (hexan-aceton 5/2). Byl izolován produkt ethyl-2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7//-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}acetát (549 mg, 1,26 mmol) ve výtěžku 92 %.
Ethyl-2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7Z7-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}acetát (63 mg, 0,14 mmol) byl rozpuštěn v ethanolu (15 mL), k roztoku byl stříkačkou přikapán 1M roztok hydroxidu sodného (8 mg, 0,20 mmol) ve vodě. Reakce probíhala 3 hodiny při teplotě 60 °C. Ethanol byl odpařen, vodná fáze byla okyselena na pH 1, poté byla odpařena i voda. Surový produkt byl zbaven vyloučeného chloridu sodného a přečištěn chromatografií na reverzní fázi (voda/methanol, gradient 10/1—>1/1). Byl izolován produkt ve formě hydrochloridu 2-{4-[ 1-(2-(4morfolino)ethyl)-777-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}octové kyseliny (36 mg, 0,08 mmol) s výtěžkem 56 %.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm: 2,94 (t, J=4,50 Hz, 4 H, CH2NCH2), 3,23 (t, J=6,l 5 Hz, 2 H, NCH2), 4,07 (t, J=4,50 Hz, 4 H, CH2OCH2), 4,82 (t, J=6,50 Hz, 2 H, NCH2), 5,03 (s, 2 H, OCH2), 7,49 (d, J=7,50 Hz, 2 H, ArH), 7,69 - 7,75 (m, 2 H, ArH), 7,97 (d, J=7,50 Hz, 1 H, ArH), 8,24 (d, J=7,50 Hz, 2 H, ArH), 8,35 (s, 1 H, ArH), 8,69 (d, J=7,80 Hz, 1 H, ArH). IČ (CHC13): 3606, 3403, 3326, 3218, 3147, 3058, 3043, 2999, 2965, 2943, 2897, 2883, 2868, 2824, 2796, 1672, 115, 1598, 1573, 1523, 1470, 1452, 1425, 1380, 1304, 1261, 1242, 1209, 1176, 1131, 1114, 1098, 1048, 1028, 991, 904, 879, 871, 843, 818, 762, 751, 716, 702, 659, 637, 621, 568, 493, 477, 449. HRMS-ESI: monoisotopická hmota: 408,16852 Da, nalezeno (m/z) 409,17600 (vypočteno 409,17580) odpovídá iontu [M+H]+ připravené látky.
Příklad 3
Konjugace haptenu II s BSA
Hydrochlorid 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-777-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}octové kyseliny (15 mg, 30.3 μτηοΐ) byl rozpuštěn v A/A-dimethylformamidu (150 μΙ), k roztoku byl přidán roztok ALW-dicyklohexylkarbodiimidu (8,1 mg, 39,4 pmol) v A/V-dimethylformamidu (85 μΐ) a roztok N-hydroxysukcinimidu (4,5 mg, 39,4 pmol) v A/A-dimethylformamidu (45 μΐ). Reakční směs byla ponechána stát přes noc v mikrozkumavce při laboratorní teplotě. Po vyloučení krystalků derivátu močoviny, bylo pomocí TLC analýzy ověřeno, že veškerá výchozí kyselina byla převedena na aktivovaný ester.
K roztoku hovězího sérového albuminu (24,2 mg, 0,4 pmol) v bikarbonátovém pufru (1,9 ml) byl přidán roztok dioktylsulfosukcinátu sodného v oktanu (12,4 ml). Do micelámího prostředí byl pipetou opatrně přenesen aktivovaný ester v A, A-dimethylformamidu tak, aby došlo k oddělení krystalků derivátu močoviny. Reakční směs byla ponechána míchat přes noc při laboratorní teplotě. Poté byl modifikovaný protein vysrážen chladným acetonem (-30 °C) z reakční směsi. Pro
-8CZ 306547 B6 dukt byl oddělen centrifugací a promyt dalším podílem chladného acetonu(-30 °C). Po centrifugaci a odlití promývacího acetonu byl modifikovaný protein ponechán 30 minut na vzduchu, aby došlo k odpaření zbylého acetonu. Poté byl produkt rozpuštěn ve vodě a lyofilizován. Analýza pomocí MS-MALDI ukázala, že k jedné molekule hovězího sérového albuminu je navázáno průměrně 20 molekul haptenu II.
Příklad 4
Konjugace haptenu IV s BSA
Hydrochlorid 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7/f-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}octové kyseliny (12 mg, 27,0 pmol) byl rozpuštěn v VN-dimethylformamidu (120 μΐ), k roztoku byl přidán roztok VW-dicyklohexylkarbodiimidu (7,2 mg, 35,1 μηιοΙ) v VN-dimethylformamidu (75 μΐ) a roztok V-hydroxysukcinimidu (4,0 mg, 351 pmol) v ΛζΑ-dimethylformamidu (40 μΐ). Reakční směs byla ponechána stát přes noc v mikrozkumavce při laboratorní teplotě. Po vyloučení krystalků derivátu močoviny, bylo pomocí TLC analýzy ověřeno, že veškerá výchozí kyselina byla převedena na aktivovaný ester.
K roztoku hovězího sérového albuminu (21,6 mg, 0,4 pmol) v bikarbonátovém pufru (1,7 ml) byl přidán roztok dioktylsulfosukcinátu sodného v oktanu (11,1 ml). Do micelámího prostředí byl pipetou opatrně přenesen aktivovaný ester v AyV-dimethylformamidu tak, aby došlo k oddělení krystalků derivátu močoviny. Reakční směs byla ponechána míchat přes noc při laboratorní teplotě. Poté byl modifikovaný protein vysrážen chladným acetonem (-30 °C) z reakční směsi. Produkt byl oddělen centrifugací a promyt dalším podílem chladného acetonu (-30 °C). Po centrifugaci a odlití promývacího acetonu byl modifikovaný protein ponechán 30 minut na vzduchu, aby došlo k odpaření zbylého acetonu. Poté byl produkt rozpuštěn ve vodě a lyofilizován. Analýza pomocí MS-MALDI ukázala, že k jedné molekule hovězího sérového albuminu je navázáno průměrně 20 molekul haptenu IV.
Příklad 5
Provedení nepřímé nekompetitivní ELISY
Imobilizace konjugátu na stěny jamek mikrotitrační destičky
Zásobní roztok imobilizačního konjugátu (I-BSA - VI-BSA) byl vhodně naředěn v 0,05 mol/1 karbonát-bikarbonátovém pufru, pH 9,6 a pipetován do jamek mikrotitrační destičky v množství 100 μΐ na jamku. Imobilizace probíhala přes noc při laboratorní teplotě. Nenavázaný imobilizační konjugát byl následující den odstraněn pomocí automatické promývačky 4x 300 μΐ 0,01 mol/1 PBS-Tw (0.0IM PBS, pH 7,4 obohacený 0,05 % Tweenem).
Aplikace kompetujících složek
Po promytí nenavázaného konjugátu byly do jamek mikrotitrační destičky pipetovány kompetující složky v pořadí 50 μΐ roztoku antigenu (kalibračního standardu nebo vzorku) ředěného v PBS a 50 μΐ roztoku polyklonální králičí protilátky ředěné v příslušném pufru (různé pufry pro různé systémy). Inkubace probíhala za mírného třepání při laboratorní teplotě, po dobu 1 hodiny. Nezreagované imunoreaktanty byly odstraněny opakovaným promytím jamek 0,01 mol/1 PBSTw (4x 300 μΐ, promývačka).
-9CZ 306547 B6
Aplikace sekundární protilátky
Ke kvantifikaci navázaných králičích protilátek na imobilizační konjugát bylo využito tzv. sekundární protilátky GAR-Po (z angl. Goat Anti-Rabbit - kozí protilátky proti králičím protilátkám značené peroxidasou). Sekundární protilátka byla ředěna 1:10 000 v příslušném pufru (v závislosti na systému) a pipetována v množství 100 μΐ na jamku. Inkubace probíhala za mírného třepání při laboratorní teplotě, po dobu 1 hodiny. Nenavázaná protilátka byla poté odstraněna opakovaným promytím jamek 0,01M PBS-Tw (4x 300 μΐ, promývačka).
Aplikace substrátu pro peroxidasu
Do každé jamky bylo následně přidáno 100 μΙ čerstvě připraveného roztoku substrátu pro peroxidasu Enzymová reakce probíhala za mírného třepání při laboratorní teplotě deset minut.
K zastavení enzymové reakce byl použit přídavek 2 mol/1 kyseliny sírové v množství 50 μΐ na jamku. Absorbance reakční směsi byla měřena v jamkách mikrotitrační destičky při vlnové délce 450 nm.
Průmyslová využitelnost
Aplikace v imunoanalytických metodách stanovení syntetických kanabinoidů ve formátech nepřímé ELISA, LFIA, FIA a dalších, které využívají kompetice mezi haptenem - některým z připravených derivátů syntetických kanabinoidů, a analytem - psychoaktivní látkou přítomnou ve vzorku, o vazebná místa protilátky.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Derivát syntetického kanabinoidů o struktuře 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)-7Z7-indol-3ylkarbonyl]RiOxy}octové kyseliny, přičemž R| je naftalen-1-yl nebo benzyl.
- 2. Derivát syntetického kanabinoidů podle nároku 1 o názvu 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)777-indol-3-ylkarbonyl]naftalen-l-yloxy}octové kyseliny o struktuře II:
- 3. Derivát syntetického kanabinoidů podle nároku 1 o názvu 2-{4-[l-(2-(4-morfolino)ethyl)7/7-indol-3-ylkarbonyl]benzyloxy}octové kyseliny o struktuře IV:- 10CZ 306547 B6
- 4. Způsob přípravy derivátu syntetického kanabinoidu podle nároků laž3, vyznačující se tím, že výchozí 4-hydroxyaren-l-karboxylová kyselina se podrobí reakci s benzylbromidem, ke vzniklé 4-benzyloxyarenkarboxylové kyselině se přikape oxalylchlorid, ke vzniklému chloridu 4-benzyloxyarenkarboxylové kyseliny se přikape //-substituovaný indol, k reakční směsi Friedel-Crafísově reakci je přidán zirkonium tetrachlorid, vzniklý produkt je debenzylován na paladiovém katalyzátoru, debenzylovaný produkt se izoluje, provede se O-alkylace, kdy se přidá ethyl-ester ω- bromalkanové kyseliny a vzniklý ester nesený na spojovacím můstku se v zásaditém prostředí hydrolyzuje na karboxylovou skupinu.
- 5. Použití derivátu syntetického kanabinoidu podle nároků 1 až 3 jako prostředku pro vizualizaci interakcí s kanabinoidními receptory.
- 6. Použití derivátu syntetického kanabinoidu podle nároků 1 až 3 jako prostředku pro přípravu imunogenů konjugací s nosným proteinem, pro získání protilátky pro analýzu drog interagujících s kanabinoidními receptory.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-657A CZ306547B6 (cs) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-657A CZ306547B6 (cs) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ306547B6 true CZ306547B6 (cs) | 2017-03-01 |
Family
ID=58449167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2015-657A CZ306547B6 (cs) | 2014-12-31 | 2014-12-31 | Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ306547B6 (cs) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6013648A (en) * | 1995-06-21 | 2000-01-11 | Sanofi | CB2 Receptor agonist compounds |
| US20130066053A1 (en) * | 2011-02-14 | 2013-03-14 | Randox Laboratories Limited | Detection of Synthetic Cannabinoids |
| US20130196354A1 (en) * | 2011-02-14 | 2013-08-01 | Randox Laboratories Limited | Detection of Synthetic Cannabinoids |
-
2014
- 2014-12-31 CZ CZ2015-657A patent/CZ306547B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6013648A (en) * | 1995-06-21 | 2000-01-11 | Sanofi | CB2 Receptor agonist compounds |
| US20130066053A1 (en) * | 2011-02-14 | 2013-03-14 | Randox Laboratories Limited | Detection of Synthetic Cannabinoids |
| US20130196354A1 (en) * | 2011-02-14 | 2013-08-01 | Randox Laboratories Limited | Detection of Synthetic Cannabinoids |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Huffman, J. W., et al: Bioorg. Med. Chem. (2003) 11, 539 - 549 * |
| Yamada, K., et al: J. Med. Chem. (1996) 39, 1967 - 1974 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH04230855A (ja) | ポリ塩化ビフェニルの検出用試薬および方法 | |
| US11628216B2 (en) | 6-acetylmorphine analogs, and methods for their synthesis and use | |
| US20070072242A1 (en) | Immunoassay method and kit to leucomalachite green and malachite green | |
| US20120135434A1 (en) | Mcpp immunoassay | |
| CZ306547B6 (cs) | Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití | |
| US9784752B2 (en) | Venlafaxine assay | |
| CN114539078B (zh) | 特异性分检单胺氧化酶的活性小分子探针及其制备方法与应用 | |
| JP2005247822A (ja) | コプラナーｐｃｂハプテン、コプラナーｐｃｂに対する抗体およびそれを用いる免疫学的測定方法 | |
| JP2008519793A (ja) | イムノアッセイに有用なインジナビル誘導体 | |
| CZ305780B6 (cs) | Derivát syntetického kanabinoidu, způsob jeho přípravy a použití | |
| US10775394B2 (en) | Immunoassay for phenethylamines of the 2C and DO sub-families | |
| US10591497B2 (en) | Immunoassay for synthetic cannabinoids of the adamantyl indazole/indole-3-carboxamide family | |
| JP5690514B2 (ja) | アゾキシストロビン誘導体、アゾキシストロビンに対する抗体またはそのフラグメント、ならびにそれらの抗体またはフラグメントを用いた測定キットおよび測定方法 | |
| KR101133246B1 (ko) | 신규한 코마린 유도체, 이의 제조방법 및 상기 코마린 유도체를 포함하는 형광 면역측정용 키트 | |
| CN114956997B (zh) | 香草扁桃酸半抗原衍生物及其合成方法，香草扁桃酸抗原及其制备方法，抗体及试剂盒 | |
| CN104535763B (zh) | β-受体阻断剂均相酶免疫检测试剂及其制备和检测方法 | |
| JP3431825B2 (ja) | 抗ｐａｈモノクローナル抗体およびそれを産生する細胞株 | |
| EP2656072A1 (en) | Multi-analyte microarrays using tag-specific antibodies and tag-anchored antibodies | |
| CN117645639A (zh) | 一种乙基葡萄糖醛酸苷半抗原制备方法及其应用 | |
| Class et al. | Patent application title: IMMUNOASSAY FOR SYNTHETIC CANNABINOIDS OF THE ADAMANTYL INDAZOLE/INDOLE-3-CARBOXAMIDE FAMILY Inventors: Ivan Mcconnell (Crumlin, GB) Ivan Mcconnell (Crumlin, GB) Elouard Benchikh (Crumlin, GB) Elouard Benchikh (Crumlin, GB) Philip Lowry (Crumlin, GB) Philip Lowry (Crumlin, GB) Peter Fitzgerald (Crumlin, GB) Peter Fitzgerald (Crumlin, GB) | |
| CN108864052A (zh) | 一种针对gc33-3-1抗体具有特异性识别的荧光探针的合成以及应用 | |
| AU2017267728A1 (en) | 2-ethylidene-1,5-dimethyl-3,3-diphenylpyrrolidine analogs and methods for their synthesis and use | |
| KR20170115814A (ko) | Tcp의 면역분석적 검출에 이용되는 합텐의 제조 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20211231 |