CZ301458B6

CZ301458B6 - Inhibitor synthetázy NO

Info

Publication number: CZ301458B6
Application number: CZ20031744A
Authority: CZ
Inventors: Box@David; Colclough@David; Gillies@Iain; Simon Loft@Michael; Moore@Rebecca
Original assignee: Glaxo Group Limited
Priority date: 2000-12-21
Filing date: 2001-12-17
Publication date: 2010-03-10
Also published as: PL207158B1; JP3971704B2; EP1351929A1; WO2002050021A1; NO20032835L; BR0116369A; US20040087654A1; NZ526563A; IL156305A0; NO20032835D0; AU2225202A; NO328982B1; ZA200304683B; PL364833A1; AR031944A1; CN1527814A; CZ20031744A3; HUP0500736A3; GB0031179D0; US7317040B2

Abstract

Sloucenina vzorce I s názvem kyselina (2S)-2-amino-4-{[2-(ethanimidoylamino)-ethyl]-thio}-butanová, sloucenina s kyselinou fosforecnou nebo její solvát nebo fyziologicky funkcní derivát je vhodná jako relativne nehydroskopický, selektivní inhibitor synthetázy oxidu dusnatého. Slouceniny se používají pri profylaxi a lécbe klinických stavu, pri nichž se indikuje inhibitor synthetázy NO, zvlášte inhibitor iNOS. Tyto stavy zahrnují zánetlivé stavy, šokové stavy, poruchy imunity a poruchy gastrointestinální motility. Slouceniny vzorce I lze také použít pro profylaxi a lécbe onemocnení centrálního nervového systému, zahrnující migrénu a metabolické poruchy, vcetne dyslipidemie.

Description

Předkládaný vynález se týká nových amidinových sloučenin, způsobu jejich výroby, farmaceutického prostředku s obsahem těchto sloučenin, a jejich použití při léčbě, zvláště jejich použití jako selektivní inhibitory synthetázy oxidu dusnatého.

Inhibitor synthetázy NO

Oblast techniky io

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý je endogenní stimulátor rozpustného enzymu guanylatcyklázy a zasahuje do velkého množství biologických účinků. Předpokládá se, že nadbytečná produkce oxidu dusnatého způ15 sobuje mnoho stavů, zahrnující septický šok a mnoho zánětlivých onemocnění. Biochemická synthéza oxidu dusnatého z L-angininu se katalyzuje enzymem synthetázou NO. Mnoho inhibitorů synthetázy NO bylo popsáno a použito pro terapeutické účely.

V poslední době existují v této oblasti inhibitory synthetázy NO, které se mají selektivitu buď na indukovatelnou synthetázu NO (iNOS) nebo neuronovou synthetázu NO (nNOS) před endotelovou synthetázu NO (eNOS).

Proto WO98/30537 popisuje selektivní inhibitory synthetázy NO podle vzorce

NK co₂h nebo jejich sůl, solvát nebo fyziologicky funkční derivát.

Vhodné soli podle WO98/30537 zahrnují soli, vytvořené s anorganickými nebo organickými kyselinami nebo bázemi. Farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami zahrnují soli, vytvořené z kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, citrónové, vinné, fosforečné, mléčné, pyrohroznové, octové, trifluoroctové, jantarové, oxalové, fumarové, maleinové, oxaloctové, methansulfonové, ethansuifonové, p-toluensulfonové, benzensulfonové a isethionové. Farmaceuticky přijatelné soli bází zahrnují amoniové soli, soli alkalických kovů, jako je sodík a draslík, soli kovů alkalických zemin, jako je vápník a hořčík, a soli s organickými bázemi, jako je dicyklohexylamin a N-methyl-D-glukamin. Hydrochloridové soli jsou doloženy příklady a jsou hydroskopické.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje selektivní inhibitor iNOS, který se považuje za méně hydroskopický než jsou například hydrochloridové soli, uvedené v WO98/30537.

Zjistilo se nyní, že sloučeniny, spadající do oblasti WO98/30537, jsou selektivní inhibitory iNOS a jsou výhodné tím, že nejsou relativně hydroskopické. Sloučeniny, které nejsou relativně hydroskopické jsou vhodné, protože neabsorbují vlhkost z atmosféry a lze je proto lépe izolovat, formulovat a používat.

(l)

Předmět předkládaného vynálezu se proto týká sloučeniny podle vzorce (I)

NH .h₃po₄ nebo jejího solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu.

Předkládaný vynález se proto týká kyseliny (2S)-2-amino-4-{[2-(ethanimidoylamino)ethyl]thio}-butanové, sloučeniny s kyselinou fosforečnou nebo jejího solvátu (výhodně hydrátu) nebo io fyziologicky funkčního derivátu. Předkládaný vynález zahrnuje všechny polymorfy této sloučeniny. Výhodně je každá molekula sloučeniny vzorce (I) spojena s alespoň jednou molekulou vody, jako je !, 2 nebo 3 molekuly vody, zvláště 1 nebo 3 molekuly vody. Ve zvláště výhodném aspeb tu se předkládaný vynález týká kyseliny (2S)-2-amÍno-4-{[2-(ethanimidoylamino)ethyl]-thio}butanové, sloučeniny s kyselinou fosforečnou, (1:1) hydrátu.

Odborníkovi v oboru je zřejmé, že kyselina fosforečná existuje ve více než jedné formě. Výhodnou formou pro použití v souvislosti s předkládaným vynálezem je kyselina ortofosforečná.

S výhodou sloučenina vzorce (I) v podstatě nevlhne (neabsorbuje atmosférickou vlhkost) pod relativní vlhkostí 60 % při teplotě 25 °C. Výhodněji sloučenina vzorce (I) v podstatě nevlhne pod relativní vlhkostí 70 % při teplotě 25 °C.

Výhodně u sloučeniny vzorce (I) nedochází ke změně hmotnost při adsorpcí více než 5 % hmotn./hmotn. při relativní vlhkosti 70 % při teplotě 25 °C. Výhodněji u sloučeniny vzorce (I) nedochází ke změně hmotnosti při adsorpcí více než 2 % hmotn./hmotn. při relativní vlhkosti 70 % při teplotě 25 °C. Nejvýhodněji u sloučeniny vzorce (I) nedochází ke změně hmotnosti při adsorpcí více než 1 % hmotn./hmotn. při relativní vlhkosti 70 % při teplotě 25 °C.

Solváty sloučeniny vzorce (I), které jsou vhodné pro použití v medicíně, jsou solváty, v nichž je obsažené rozpouštědlo farmaceuticky přijatelné. Avšak solváty, které obsahují farmaceuticky nepřijatelná rozpouštědla, jsou součástí oblasti předkládaného vynálezu, například se používají jako meziprodukty při výrobě sloučeniny vzorce (I) a jejich solvátů a fyziologicky funkčních derivátů.

Pojem „fyziologicky funkční derivát“ znamená chemický derivát sloučeniny vzorce (I), který má stejnou fyziologickou funkci jako sloučenina vzorce (I), například, že je navíc konvertibilní v těle. Podle předkládaného vynálezu zahrnují příklady fyziologicky funkčních derivátů estery, amidy a karbamáty; výhodně estery a amidy.

Farmaceuticky přijatelné estery a amidy sloučeniny vzorce (1) mohou mít kyselinovou skupinu převedenou na skupinu Ci_6 -alkyl, aryl, aryl-CialkyI nebo aminokyselinový ester nebo amid. Farmaceuticky přijatelné amidy a karbamáty sloučeniny vzorce (I) mohou mít skupinu amino převedenou na skupinu C_w -alkyl, aryl, aryl-C,__ή-alkyl nebo amid aminokyseliny nebo karbamát.

Jak je uvedeno výše, sloučenina vzorce (I) je inhibitorem synthetázy NO. WO98/30537 to uvádí obecně pro sloučeniny následujícího vzorce h₃c

NH₂ co₂h

NH nebo jejich sůl, solvát nebo fyziologicky funkční derivát: fosfátové soli se neuvádí jako příklad.

Sloučenina nebo jejich sůl, solvát nebo fyziologicky funkční derivát: fosfátové soli se neuvádí jako příklad.

Sloučenina vzorce (I) a její farmaceuticky přijatelné solváty a fyziologicky funkční deriváty se používají při profylaxi a léčbě klinických stavů, při nichž se indukuje inhibitor synthetázy NO, zvláště inhibitor iNOS. Tyto stavy zahrnují zánětlivé stavy, šokové stavy, poruchy imunity a poruchy gastrointestinální motility. Sloučenina vzorce (I) a její farmaceutické solváty a fyziologicky funkční deriváty se mohou také použít při profylaxi a léčbě onemocnění centrálního nervového systému, zahrnující migrénu a metabolické poruchy, včetně dyslipídemie.

Šokové stavy jsou výsledkem nadprodukce NO, jako je septický šok, šok při krvácení nebo šok, způsobený náhlým selháním jater nebo při léčbě cytokiny, jako je TNF, 1L—1 a IL-2, nebo léčbě činidly s obsahem cytokinů, například kyseliny 5,6-dimethylxanthenonoctové.

Příklady zánětlivých stavů a poruch imunity zahrnují stavy a poruchy kloubu, zvláště arthiritidu (například reumatoidní arthritida, osteoarthritida, protézové selhání kloubu) nebo gastrointestinálního traktu (například ulcerativní kolitida, Crohnova nemoc a jiná zánětlivá onemocnění střev, gastritida a mukózní zánět způsobený infekcí, enteropatie vyvolaná nesteroidním i protizánětlivými léky), dýchacích cest (například syndrom bolesti při dýchání u dospělých, astma, cystická fibróza, zánětlivé onemocnění horních cest dýchacích (například rhinitida, jako je alergická rhini25 tida) nebo chronické obstruktivní plicní onemocnění), nervové tkáně (například roztroušená skleróza), slinivky břišní (například cukrovka a její komplikace), ledvin (například gromerulonefritida), kůže (například dermatitida, lupénka, ekzém, kopřivka), očí (například glaukom) a také transplantovaných orgánů (například nepřijetí) a víceorgánová onemocnění (například systémický lupus erythematóza) a záněty následně po virové nebo bakteriální infekci.

Dále vzniká nadprodukce NO způsobená iNOS při ateroskleróze a po hypoxickém nebo ischemickém napadení (s nebo bez reperfuze), například v mozku nebo při ischemické chorobě srdeční.

Poruchy gastrointestinální motility zahrnují střevní neprůchodnost, například pooperační neprůchodnost střev a neprůchodnost střev při sepsi.

Onemocnění centrálního nervového systému znamená onemocnění, při nichž nadprodukce NO zahrnuje například migrénu, psychózy, úzkosti, schizofrenii, poruchy spánku, cerebrálni ische40 mil, trauma CNS, epilepsii, roztroušenou sklerózu, demenci následkem AIDS, chronické neurodegenerativní onemocnění (například demence Lewy Body, Huntingtonova nemoc, Parkinsonova nemoc nebo Alzheimerova nemoc) a akutní a chronická bolest a stavy, které mohou zahrnovat neadrenergní necholinergní nerv, jako je priapismus, obezita a hyperfagie (přejídání).

Příklady akutní bolesti zahrnují bolest kosterního svalstva, pooperační bolest a chirurgickou bolest. Příklady chronické bolesti zahrnují chronickou zánětlivou bolest (například reumatoidní arthritidu a osteoarthritidu), neuropathickou bolest (například nervová bolest s pásovým oparem, diabetická neuropathie spojená s cukrovkou, nervová bolest trojklanného nervu, bolest spojená s funkčním onemocněním střev, například syndrom podráždění střev, nesrdeční bolest hrudníku a bolest udržovaná nervovým systémem) a bolest spojená s rakovinou a fibromyalgií.

-3CZ 301458 B6

NadprodukceNO se zahrnuje do metabolických poruch svým účinkem na aktivitu lipoproteinové lipázy, způsobující hypertriglyceridemii. Selektivní inhibitory iNOS budou vhodné pro metabolické stavy, které zahrnují nadprodukci NO, jako je dyslipidemie.

Dále může být inhibice synthetázy NO výhodná pro prevenci ztráty lymfocytů, spojené s infekcí HIV, pro zvýšení radiosenzitivity nádorů během radioterapie a pro snížení růstu tumoru, tumorové progrese, angiogeneze a metastáze.

Podle toho se předkládaný vynález týká způsobu profylaxe nebo léčby klinického stavu u savců, io jako je člověk, u něhož se indukuje inhibitor synthetázy oxidu dusnatého, například inhibitor iNOS, který zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu. Zvláště se předkládaný vynález týká způsobu profylaxe nebo léčby zánětlivého a/nebo imunitního onemocnění, jako je arthritida, alergická rhinitida nebo astma. V dalším výhodném aspektu se předkládaný vynález týká způsobu profylaxe nebo léčby klinického stavu, zahrnující bolest, migrénu, střevní neprůchodnost a syndrom podráždění střev.

Alternativně se také předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu pro použití při léčbě, zvláště pro použití při profylaxi nebo léčbě klinického stavu u savců, jako je člověk, u něhož se indikuje inhibitor synthetázy oxidu dusnatého, například inhibitor iNOS, Zvláště se předkládá sloučenina vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelný solvát nebo fyziologicky funkční derivát pro profylaxi nebo léčbu zánětlivého a/nebo imunitního onemocnění, jako je arthritida, alergická rhinitida nebo astma. V dalším výhodném aspektu se předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky fukčního derivátu pro profylaxi nebo léčbu bolesti, migrény, neprůchodnosti střev nebo syndromu podráždění střev.

Množství sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu, které se požaduje pro dosažení terapeutického účinku, se bude samozřejmě měnit s konkrétní sloučeninou, cestou podávání, předmětem léčby a konkrétním onemocněním nebo poruchou, která se léčí. Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat orálně nebo injekcí v dávce 0,001 az 200 mg/kg denně, výhodně 0,01 až 20 mg/kg denně. Rozmezí dávek pro dospělé lidi jsou obecně 0,1 mg až 10 g/den a výhodně 1 mg až 1 g/den. Tablety nebo jiné formy provedení jednotlivých dávek mohou obvykle obsahovat množství sloučeniny podle vynálezu, které je účinné při této dávce nebo jako násobky této dávky, například jednotky, obsahující 0,1 mg až 500 mg, obvykle okolo 1 mg až 200 mg.

Pokud je možné podávat sloučeninu vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelný solvát nebo fyziologicky funkční derivát samostatně, je výhodné je předkládat ve formě farmaceutického prostředku.

Podle toho se předkládaný vynález dále týká farmaceutického prostředku, obsahující sloučeninu vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelný solvát nebo fyziologicky funkční derivát a farmaceuticky přijatelný nosič nebo pomocnou látku a případně jednu nebo více jiných terapeutických složek.

Předkládaný vynález se také týká použití sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu pro výrobu léčiva pro profylaxi nebo léčbu klinického stavu, u něhož se indikuje inhibitor synthetázy oxidu dusnatého, například inhibitor iNOS, například zánětlivá a/nebo imunitní porucha, jako je arthritida, alergická rhinitida nebo sama. V dalším výhodném aspektu se předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu pro výrobu léčiva pro profylaxi nebo léčbu klinického stavu, zahrnující bolest, migrénu, neprůchodnost střev a syndrom podráždění střev.

-4CZ 301458 B6

Dále pojem „aktivní složka“ znamená sloučeninu vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelný solvát nebo fyziologicky funkční derivát.

Formulace zahrnují formulace, které jsou vhodné pro orální, parenterální (zahrnující subkutánní, intradermální, intramuskulámí, intravenózní a intraartikulámí), inhalací (zahrnující jemné částice prášku nebo mlhy, které se mohou vytvořit různými typy aerosolů, vytlačených do odměřených dávek, rozprašovači nebo insulfátory), rektální a lokální (zahrnující dermální, bukální, sublinguální a intraokulámí) podávání, ačkoliv nej vhodnější cesta může být závislá například na stavu a poruše příjemce. Formulace se mohou předkládat výhodně ve formě jednotkové dávky a mohou se vyrobit kterýmkoli způsobem, velmi dobře známým ve farmacii. Všechny způsoby zahrnují krok zapracování aktivní složky do nosiče, který tvoří jedna nebo více dalších složek. Obecně se formulace vyrobí jednotným a dokonalým sloučením aktivní složky s kapalnými nosiči nebo jemně rozdělenými pevnými nosiči nebo oběma způsoby a potom, pokud je to žádoucí, zformováním produktu do žádané formulace.

Formulace podle předkládaného vynálezu, které jsou vhodné pro orální podávání, se mohou předkládat jako konkrétní jednotky, jako jsou kapsle, tobolky nebo tablety, přičemž každá obsahuje předem definované množství aktivní složky; jako prášek nebo granule; jako roztok nebo suspenze ve vodné nebo nevodné formě; nebo jako emulze oleje ve vodě nebo jako emulze vody v oleji.

Aktivní složka se může také být ve formě žvýkačky, lektvaru nebo pasty.

Tableta se může vyrobit stlačením nebo tvarováním, případně s jedním nebo více dalšími složkami, Stlačené tablety se mohou vyrobit ve vhodném zařízení stlačením aktivní složky v libovolné formě, jako je prášek nebo granule, případně smíchané s pojivém, mazadlem, inertním ředidlem, povrchově aktivním nebo disperzním činidlem. Tvarované tablety se mohou vyrobit tvarování ve vhodném zařízení směsi práškové sloučeniny zvlhčené inertním kapalným ředidlem. Tablety se mohou případně potáhnout a mohou se formulovat tak, že umožňují pomalé nebo řízené uvolňování aktivní složky.

Formulace pro parenterální podávání zahrnují vodné a nevodné sterilní infekční roztoky, které mohou obsahovat antioxidanty, pufry, bakteriostatika a rozpuštěné látky, jimiž se formulace stává izotonická s krví konkrétního příjemce; a vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou zahrnovat suspendační a zahušťovací prostředky. Formulace se mohou předkládat v zásobnících o jedné nebo více dávkách, například utěsněné ampule a lahvičky, a mohou se skladovat v suchém ledu (lyofilizované), což vyžaduje bezprostředně před použitím pouze přidání sterilního kapalného nosiče, například solného roztoku nebo vody pro injekční účely. Injekční roztoky a suspenze mohou připravit ze sterilních prášků, granulí a tablet způsobem popsaným výše.

Formulace pro rektální podávání se mohou předkládat jako čípky s obvyklými nosiči, jako je kakaové máslo nebo polyethylenglykol.

Formulace pro lokální podávání do úst, například bukálně nebo sublinguálně, zahrnují pastilky, obsahující aktivní složku na chuťové bázi, jako je sacharóza a akácie nebo kozinec, pastilky, obsahující aktivní složku na bázi želatiny a glycerolu nebo sacharózy a akácie.

Relativně nehydroskopická povaha sloučeniny vzorce (I) umožňuje, že se může zvláště výhodně podávat v pevné formě, například ve formě tablet.

Ve výhodném aspektu se předkládaný vynález týká pevné dávkové formy, která obsahuje slouče50 ninu vzorce (I) nebo její solvát nebo fyziologicky funkční derivát.

Výhodné formulace jednotkové dávky jsou formulace, obsahující výše uvedenou účinnou dávku aktivní složky nebo její vhodnou frakci.

5CZ 301458 B6

Rozumí se, že kromě složek uvedených výše mohou formulace podle tohoto vynálezu zahrnovat jiné prostředky obvyklé v oboru s ohledem na typ formulace, například prostředky vhodné pro orální podávání mohou zahrnovat chuťové látky.

Podle dalšího aspektu se vynález týká způsobu výroby sloučeniny vzorce (I) nebo jejího solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu, který zahrnuje:

(i) provedení reakce sloučeniny vzorce (II)

H₂N to

NH₂ ^CO,H (II) nebo jejího enantiomerů, soli nebo chráněného derivátu, se sloučeninou vzorce (III)

HN

(IH) nebo její solí, kde L je odštěpitelná skupina, nej výhodněji skupina - alkoxy (například ethoxy), skupina alkylthio, skupina aralkylthio, skupina arylthio (například benzy lthio), skupiny 1- nebo 2-nafty Imethy lthio nebo skupina heterocykl; a potom následující kroky v kterémkoli pořadí:

(ii) převedení výsledné sloučeniny na monofosfátovou sůl;

(iii) případné odstranění kterékoliv ochranné skupiny;

(iv) případné oddělení enantiomerů ze směsi enantiomerů;

(v) případnou konverzi produktu na její odpovídající solvát nebo fyziologicky funkční derivát.

S výhodou se sloučeniny vzorce (I), vyrobené tímto způsobem, čistí rekrystalizací z vhodného rozpouštědla, jako je vodný roztok, například voda, vodný roztok alkoholu nebo vodný roztok acetonitrilu, nebo polární organické rozpouštědlo, například Ν,Ν-dimethyl formamid, dimethylsulfoxid, dimethylacetamid nebo l-methyl-2-pyrrolidinon. Výhodným rozpouštědlem pro rekrystalizací je vodný roztok alkoholu.

Ve výhodném provedení se provede reakce sloučeniny, která vznikla z reakce sloučenin vzorce (II) a (III), s kyselinou fosforečnou, výhodně s kyselinou ortofosforečnou, za vzniku sloučeniny vzorce (l).

S výhodou zahrnuje krok převedení výsledné sloučeniny na fosfátovou sůl dvoufázovou reakci, za použití toluenu a vodného roztoku kyseliny fosforečné.

Ve výhodném provedení se po provedení kroku (i) do vodné vrstvy přidá toluen, přičemž vodná 40 vrstva vzniká z reakce sloučeniny vzorce (II) nebo jejího enantiomerů, solí nebo chráněného derivátu se sloučeninou (III) nebo její solí za vzniku dvoufázové směsi; toluenová vrstva se oddělí ze směsi; do toluenové vrstvy se přidá vodný roztok kyseliny fosforečné za vzniku další dvoufázové směsi; a z této další směsi se oddělí vodná vrstva.

Pokud L je skupina Cm -alkoxy, může se výše uvedená reakce v kroku (i) provést v roztoku o alkalické hodnotě pH, například pH 8 až 11, výhodně pri pH 5 az 10,5 a pri nízké teplotě, například -5 až 25 °C, výhodně 20 °C. Pokud L je skupina alkylthio, aralkylthio nebo arylthio, reakce se může uskutečnit v organickém rozpouštědle, například v dimethylformamidu, tetrahydrofuranu, ethylacetátu nebo C_M -alkoholu, jako je ethanol, při mírné teplotě, například 10 až

40 °C, výhodně pri teplotě okolí.

-6CZ 301458 B6

Výhodně je sloučenina vzorce (II)

NHBoc co₂h,h₂n

CO₂tBU

Sloučeniny vzorce (II) ajejich deriváty se mohou vyrobit provedením reakce sloučeniny vzorce (iv), x^J

NH, ™ (iv) CO.H is kde X je odštěpitelná skupina, nejvýhodněji halogenová skupina, jakoje Br, nebo jejího enantiomeru, soli nebo chráněného derivátu se sloučeninou vzorce (V)

H₂N

SH (V) nebo její solí nebo chráněným derivátem,

Sloučeniny vzorce (Π) ajejich soli se mohou vyrobit způsoby organické chemie, které jsou velmi dobře známé odborníkovi v oboru, například způsoby popsanými Shearer et al v Tetrahedron Letters, 1997, 38,179-182.

Ochranné skupiny, používané při výrobě sloučenin vzorce (I) se mohou použít obvyklým způsobem, například za použití metod, popsaných v „Protective Groups in Organic Synthesis“ od Theodora W Green, 2. vydání (John Wiley a synové, 1991), které také popisuje metody odstranění těchto skupin.

Ve výše uvedených reakcích jsou primární aminy výhodně chráněné jako karbamáty, jako jsou skupiny t-butoxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl, které se mohou odstranit za kyselých podmínek, například působením kyseliny chlorovodíkové nebo hydrogenolýzou.

Jak bude odborníkovi v oboru zřejmé, použití těchto ochranných skupin může zahrnovat ortogonální ochranu aminoskupin v sloučeninách vzorce (II), aby se usnadnilo odstranění jedné skupiny za přítomnosti jiné, tedy umožnit selektivní reaktivitu samotné aminové funkční skupiny. Například skupina benzyloxykarbonyl se může selektivně odstranit hydrogenolýzou. Odborník v oboru bude také znát jiné ortogonální strategie ochrany, použitelné obvyklým způsobem, popsaným v Theodora W. Green (vide supra).

Enantiomemí sloučeniny podle vynálezu se mohou získat (a) oddělením složek zodpovídající racemické směsi, například způsobem chirální chromatografické kolony, enzymatickými rozlíšo-7CZ 301458 B6 vacími metodami nebo výrobou a separací vhodných diastereoizomerů, nebo (b) přímou syntézou z vhodných chirálních výchozích materiálů výše popsanými způsoby.

Případná konverze sloučeniny vzorce (1) na odpovídající solvát nebo fyziologicky funkční derivát 5 se může uskutečnit způsoby, známými odborníkovi v oboru. Například trihydrát sloučeniny vzorce (I) se může vyrobit z odpovídajícího monohydrátu tak, že se vystaví působení prostředí s vysokou vlhkostí po dobu 24 hodin.

io Přehled obrázků na výkresech

Předkládaný vynález bude následně popsán příkladem pouze s odkazem na přiložené grafické výkresy, kde:

Obr. 1 je plně izotermní graf při teplotě 25 °C % cílové relativní vlhkosti proti % hmotn. změny (hmotn./hmotn.), který zobrazuje sorpci a desorpci vlhkosti sloučeniny vzorce (1), monohydrátu:

Obr. 2 je jiný plně izotermní graf při teplotě 25 °C % cílové relativní vlhkosti proti % hmotn. změny (hmotn./hmotn.), který zobrazuje sorpci a desorpci vlhkosti sloučeniny vzorce (1), mono20 hydrátu;

Obr. 3 je další plně izotermní graf při teplotě 25 °C % cílové relativní vlhkostí proti % hmotn. změny (hmotn./hmotn.), který zobrazuje sorpci a desorpci vlhkosti sloučeniny vzorce (I), monohydrátu;

Obr. 4 je srovnávací izotermní graf sorpce vlhkosti při teplotě 25 °C % cílové relativní vlhkostí proti % hmotn. změny kyseliny (2S)-2-amino-4-{[2-(ethanimidoylamino)--ethyl]-thio}-butanové, sloučeniny s kyselinou chlorovodíkovou;

jo a

Obr. 5 je plně izotermní graf při teplotě 25 °C % cílové relativní vlhkosti proti % hmotn. změny (hmotn./hmotn.), který zobrazuje sorpci a desorpci vlhkosti sloučeniny vzorce (I), trihydrátu. Stopy sorpce a desorpce se překrývají. Sorpční izoterma začíná při relativní vlhkosti 30 % a zvy35 suje se na 90 %, a následně desorpční z 90 % na 0 % relativní vlhkosti.

Obr. 6 je zobrazení difrakce záření X sloučeniny vzorce (I), monohydrátu.

Obr. 7 je zobrazení difrakce záření X sloučeniny vzorce (I), trihydrátu.

-8CZ 301458 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 Výroba sloučeniny vzorce (II)

A) Stupeň l: Výroba L-homoserin laktonu

L-Methionin

Br^CC.H —„->.

IPA, voda, AcOH

NH₂.HBr .0

L-Homoserin lakton

MH (molekulová hmotnost) = 149, 21 MH = 182,01

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Vyrobila se míchaná suspenze L-methioninu (1 mol ekv., 1,0 hmotn.) při pokojové teplotě ve vodě (4 obj.), isopropylalkobolu (4 obj.) glaciální kyseliny octové (1,6 obj.), do které se přidala kyselina bromoctová (1,0 hmotn.). Suspenze se zahřívala na teplotu 50 ^ÓC a udržovala při této teplotě 2 hodiny. Teplota se zvýšila na cca 82 až

85 °C a roztok se zahříval dalších 5 hodin. Oranžově-hnědý roztok se ochladil a rozpouštědla se odstranila za sníženého tlaku. Hustá, tmavě hnědá kaše se zahřívala (teplota vodní lázně 90 ^QC) dvě hodiny ve vakuu. Kaše se nechala ochladit, potom se suspendovala ve 4M HCl v dioxanu (2 obj.) a míchala při pokojové teplotě minimálně 3 hodiny. Krystalická pevná látka se jímala filtrací a suspendovala v izopropylalkoholu (1,5 obj): suspenze se míchala alespoň 1 hodinu.

Pevná látka se opět jímala filtrací a sušila ve vakuu při teplotě 50 až 60 °C za vzniku L-homoserin laktonu ve formě bílé, zabarvené krystalické pevné látky.

B) Stupeň 2: Výroba hydrochloridu kyseliny (2S)-2-amino-4_bromobutanové ,ΝΗ,.ΗΒγ ΝΗ-,ΗΒγ

ΜΗ = 182,01 ΜΗ = 262,93

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. L-homoserin lakton (1,0 mol ekv., 1,0 hmotn.) se suspendoval a míchal v glaciální kyselině octové (2 obj.) pri teplotě 20±5 °C za stálé atmosféiy N₂. Do suspenze se přidalo (8 obj.) 45 % hmotn. roztoku bromovodíku v kyselině octové. Obsah se zahříval na teplotu 52±1 °C 4 hodiny a potom se míchal při teplotě 52±1 °C 16 hodin za vzniku bílé pevné látky, suspendované ve žlutém nebo oranžovém roztoku. Obsah se ochladil na teplotu 20±2 °C a udržoval při teplotě 20±2 °C alespoň dvě hodiny, přičemž se produkt zcela vysrážel. Pevná látka se jímala filtrací. Koláč se potom promyl, nejprve kyselinou octovou (3x2 obj.) a potom terc-butyletherem (TBME; 3x2 obj.). Produkt se sušil na konstantní hmot35 nost ve vakuové peci při teplotě 45±5 °C a jímal jako bílá/zabarvená bílá krystalická pevná látka.

-9CZ 301458 B6

C) Stupeň 3: Výroba terc-butyl (2S)-2-amino—4-bromobutanoát sulfátu tert-Butyiacetat , c.HjSO₄, AcOH

--BC nh₂.h₂so₄‘CO₇ tBu

MH = 262,93 MH = 336,21

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Hydrochlorid kyseliny (2Sj-2-amino-4-bromobutanové (1 mol ekv., 1,0 hmotn.) se suspendoval a míchal v terc-butylacetátu (10 obj.) při teplotě 5±3 °C cca 1 hodinu pod atmosférou N₂. Do suspenze se 30 minut po kapkách přidávala koncentrovaná kyselina sírová (1,2 ekv., 0,445 hmotn.), přičemž se udržovala teplota obsahu ío 5±3 °C. Obsah se zahřál na teplotu 18±3 °C a míchal při této teplotě 10 minut. Přidávala se minut glaciální kyselina octová (2,5 obj.) a potom se reakční směs silně míchala, dokud se nezískal čirý roztok (až 3 hodiny). Míchání pokračovalo pří teplotě 18±3 °C alespoň 2 hodiny. Po nasazení krystalizace reakční směs zrála alespoň 4 hodiny při teplotě 18±3 °C. Potom se do kaše 50 minut přidával toluen (5,5 obj.). Předjímáním produktu filtrací se výsledná bílá směs míchala 18 hodin při teplotě 18±3 °C. Filtrační koláč se promyl ethylacetátem (2,5 obj.). Vlhký produkt se proplachoval čerstvým ethylacetátem (10 obj.) při teplotě 20±3 °C 1 hodinu. Produkt se opět jímal filtrací a filtrační koláč se promyl ethylacetátem (2 x 2,5 obj.). Produkt se sušil ve vakuové peci při teplotě 20±5 ^ŮC.

D) Stupeň 4: Výroba terc-butyl (2S}~4-bromo-2-[(terc-butoxykarbonyl)amino]-butanoátu

NK₂.H₂SO₄ NHBoc

J? EtOAc, NsHCC₃(sc), 1 tBu-->“ Sr CO₂ tBu eoc₂o

MH = 336,21

MH = 338,24

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Bezvodý hydrogenuhličitan sodný (2,0 mol ekv.) se rychle míchal ve vodě (3,0 obj.) při teplotě 20±3 °C pod stálou atmosférou N₂. Přidal se ethylacetát (3,0 obj.) a směs se ochladila na teplotu 5^2 °C. Po dobu cca 20 minut se přidával roztok terc-butyl (2S)-2-amino-4-bromobutanoát sulfátu (1,0 mol ekv., 1,0 hmotn.) ve vodě (2,0 obj.), přičemž se udržovala teplota obsahu 5±2 °C. Potom se do reakční směsi 5 minut přidával roztok di-t-butyldikarbonátu (0,96 ekv.) v ethylacetátu (2,0 obj.), přičemž se teplota obsahu udržovala při 5±2 °C. Dvoufázová směs se nechala zahřát na teplotu 20±3 °C a potom se míchala dalších 3 až 5 hodin. Vrstvy se oddělily přes noc. Vodná vrstva se odstranila a organická vrstva se promyla solným roztokem (1x5 obj.). Vrstvy se oddělily a organická vrstva se sušila nad bezvodým MgSO₄, filtrovala a potom zkoncentrovala za sníženého tlaku za vzniku bezbarvého oleje. Bezbarvý olej se stáním změnil na tvrdou bílou pevnou látku.

- toCZ 301458 Bó

E) Stupeft 5: Výroba terc-butyl S-(2-aminoethyl)-N-(terc-butoxykarbonyl)-L-homocysteinátu

NHSOC 8r^x''^x'^x^x*COJ8u	+ HCIKN'^^xSH	(1) K,C3,, MaOH x-s (it) TSME ⁵	^HBcc '^^xSCO?.6u 4
	Cysiesmin hydrúůhlond

MH = 338,24 MH = 380,15 ₅ MH = 334,12 (volná baze)

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Do míchané suspenze cysteamin hydrochloridu (1,5 mol ekv.) v methanolu (5 obj.) se při teplotě 2O±3 °C pod atmosférou N₂ přidal bezvodý uhličitan draselný (3,0 mol ekv.). Směs se míchala 30 minut a potom se po kapkách přidával io roztok terc-butyl (2S)-4-bromo-2-[(terc-butoxykarbonyl)-amino]-butanoátu (1,0 mol ekv.,

1,0 hmotn.) v methanolu (5 obj.), přičemž se udržovala teplota obsahu při 20+3 °C. Reakční směs se nechala míchat při teplotě 25+2 °C 4 hodiny. Reakění směs se zkoncentrovala za sníženého tlaku za použití vodní lázně při teplotě <30 °C za vzniku bílého zbytku. Zbytek se rozdělil mezi terc-butylmethylether (TBME; 8 obj.) a vodu (8 obj.). Po 10 minutách třepání/míchání se vrstvy nechaly oddělit. Vodná fáze se odstranila a organická fáze se zkoncentrovala za sníženého tlaku za použití vodní lázně při teplotě <30 °C na přibližně poloviční objem (cca 4 obj.). Po kapkách se přidávala kyselina mravenčí (1,0 mol ekv.) do míchaného roztoku TBME, přičemž se udržovala teplota obsahu 20+3 °C. Reakční směs se míchala při teplotě 2O±3 °C jednu hodinu, během níž se vytvořila bílá sraženina. Směs se chladila na teplotu 5±2 °C alespoň 16 hodin. Produkt se jímal

2ú filtrací a potom se promyl dalším roztokem TBME (2 x 1 obj.). Pevná látka se sušila na konstantní hmotnost ve vakuové peci při teplotě 40+2 °C za vzniku produktu ve formě bílé krystalické pevné látky.

Příklad 2 Alternativní výroba sloučeniny vzorce (II)

Hydrobromid kyseliny (2S)-2-amino-4-bromobutanové (1,0 hmotn., 1,0 mol) se suspendoval a míchal v terc-butylacetátu (TBA, 5 obj.) při teplotě cca 5 °C pod stálou atmosférou dusíku. Do suspenze se 20 minut přidávala koncentrovaná kyselina sírová (98 % čistota; 1,2 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota obsahu ~ 15 °C. Obsah se potom zahříval asi 20 °C a nechal míchat alespoň 7 hodin při teplotě 20 °C. Po l až 2 hodinách od konce přidávání kyseliny sírové se pozorovala krystalizace. Po dobu 60 minut se přidal 2M vodný roztok hydroxidu sodného (8 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota obsahu cca 20 °C. Zkontrolovala se hodnota pH vodného roztoku a zjistilo se, že je vyšší než 9. Vrstvy se oddělily a vodná vrstva se vyhodila.

V odděleném zásobníku se v TBME (2 obj.) rozpustil di-t-butyldikarbonát (99 %; 0,95 mol ekv.). Tento roztok se 20 minut přidával do roztoku TBA, přičemž se udržovala teplota obsahu pod 20 °C. Roztok se míchal při teplotě 20 °C 4 hodiny.

Do reaktoru se vložil 32% hmotn./hmotn. NaOH (4 obj.) a ochladil na cca 10 °C. Přidal se cysteamin hydrochlorid (1,2 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota obsahu 10 až 20 °C. Tato směs se potom míchala cca 30 minut, přičemž se dosáhlo úplné neutralizace hydrochloridu. Přidal se Aliguat 175 (methyltributylamoniumchlorid; 75% hmotn./hmotn. vodný roztok; 0,05 mol), přičemž se udržovala teplota obsahu 10 až 20 °C. Do vodného roztoku se 20 minut přidával roztok TBA/TBME, přičemž se udržovala teplota cca 20 °C. Dvoufázová směs se potom míchala při teplotě cca 20 °C cca 20 hodin. Po dobu cca 10 minut se přidávala voda (4 obj.), přičemž se udržovala teplota obsahu cca 20 °C. Mícháním 15 minut vznikly 2 čiré vrstvy. Vodná vrstva se oddělila a vyhodila. Organická vrstva se promyla vodou (2x4 obj.). Organický roztok se zředil přidáním TBME (6 až 8 objemů). Do míchaného roztoku TBA/TBME se cca 20 minut přidávala kyselina mravenčí (98 % hmotn ./hmotn.; 0,8 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota obsahu cca20°C. Reakční směs se ochlazovala na teplotu -5 °C 24 hodin. Produkt se jímal filtrací a potom se promyl dalším roztokem TBME (2 x 1 obj.). Pevná látka se potom sušila ve vakuové peci při teplotě 40±5 °C za vzniku produktu ve formě bílé krystalické pevné látky. Reakční schéma tohoto způsobuje uvedeno níže:

io MW = molekulová hmotnost (MH)

NH_rHBr ’C0-H

MW = 262.23

1. t-Butylacetat ; c.H,SO₄

2. NaOH (aq.), TBME

NH, ‘CO₂ tBu

MW=228.2

BOCjO.TBME, t-butyl acetat

MW=338.24

NHBoc

CO₂ tBu ^L HCI.H-N^^SHCysteamin hydrochiorid (i) NaOH (aq), TBME, t-butyl acetat , Allquat 175 <ii) Kyselina mravenčí

NHBoc MH = 380,15

MH = 334,12 (volná baze)

I5 Příklad 3 Výroba sloučeniny vzorce (III)

MH = 75,13

MH = 176,64

MH = 251,77

- p CZ 301458 Bó

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Do acetonitrilu (14 obj.) se za míchání pod atmosférou dusíku přidal ethanthioamid (1 hmotn., 1 ekv.). Výsledná kaše se zahřívala na teplotu ^ŮC±2 °C, dokud se nevytvořil žlutý roztok. Do roztoku se po kapkách přidával oddělený roz5 tok Mchloromethy!)naftalenu (2,47 hmotn., 1,05 ekv.) v acetonitrilu (3 obj.) tak, aby se udržovala teplota obsahu 60 až 65 °C. Po skončení přidávání se další část acetonitrilu (1 obj.) použila pro promytí. Výsledný roztok se zahříval na teplotu 70 °C±2 °C: do 10 až 20 minut se pozorovala krystalizace. Kaše se zahřívala při teplotě 70±2 °C celkem 3 hodiny a potom se ochladila na pokojovou teplotu. Pevná fáze se zfiltrovala a koláč se promyl acetonitrilem (2x5 obj.). Výsledio ná bílá pevná látka se sušila ve vakuu při teplotě 45 °C±5 °C alespoň 16 hodin.

Příklad 4 Výroba sloučeniny vzorce (I) (monohydrát)

Reakce se provedla pod atmosférou dusíku. Směs sloučeniny terc-butyl S-(2-aminoethyl)-N(terc-butoxykarbonyl)-L-homocysteinátu s kyselinou mravenčí (1:1) (sloučenina vzorce II) (1,0 mol ekv., 1,0 hmotn.) a l-naftylmethyl ethanimidothioát hydrochloridu (sloučenina vzorce III) (1,2 mol ekv.) se míchala v ethylacetátu (6 obj.) při pokojové teplotě 2 hodiny. Přidala se voda (8,5 obj.) a směs se rychle míchala 30 minut. Vrstvy se nechaly usadit a jímala se vodná

2o vrstva, obsahující terc-butyl N-(terc-butoxykarbonyl)-S-[2-(ethanimidoylamino)-ethyl]-Lhomocysteinát hydrochlorid. Vodná vrstva se ochladila na teplotu 0 °C a přidal se toluen (5 obj.). Pomalu se přidával 32 % hmotn./hmotn. vodný roztok hydroxidu sodného (2,5 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota 2 °C a dvoufázová směs se rychle míchala 10 minut. Vrstvy se oddělily, vodná vrstva se vrátila do nádoby a toluenová vrstva se uložila. Do vodné vrstvy se přidal toluen (2,5 obj.) a směs se ochladila na teplotu 0 °C. Pomalu se přidával 32 % hmotn./hmotn. vodný roztok hydroxidu sodného (1,0 mol ekv.), přičemž se udržovala teplota 0 °C a dvoufázová směs se rychle míchala 5 minut. Vrstvy se oddělily, vodná vrstva se odstranil a toluenové vrstvy, obsahuj ící terc-butyl N-(terc-butoxykarbony l)-S-[2-(ethanimidoylamino)-ethy l]-L-homocysteinát, se spojily v nádobě. Přidal se vodný roztok (2,5 obj.) kyseliny ortofosforečné (1,5 mol ekv.). Dvoufázová směs se rychle míchala při teplotě 70 °C 12 hodin. Potom se přidala voda (4 obj.) a směs se ochladila na teplotu 40 °C. Vodná vrstva se oddělila a hodnota pH se potom upravila na 5,5 za použití koncentrovaného vodného roztoku Čpavku, přičemž se udržovala teplota 35 °C. Výsledný vodný roztok se zahříval na teplotu 75 °C a potom se 20 minut přidával ethanol (6,5 obj,), přičemž se udržovala teplota 75 °C. Roztok se 30 minut postupně ochlazoval z tep35 loty 75 ^QC na 50 ^ĎC a zrál. Udržoval se při teplotě 53 °C 2 hodiny a postupně se 4 hodiny ochlazoval na teplotu 5 °C. Výsledná kaše se udržovala při této teplotě 20 minut. Produkt se jímal filtrací a promyl směsí 1:1 ethanol/voda (2 obj.) a potom ethanolem (2 obj.). Sloučenina vzorce (1) s názvem kyselina (2S)-2-amino-4-{[2-(ethanimidoylamino)-ethyl]-thio}-butanová, sloučenina s kyselinou fosforečnou, monohydrát, se sušila při teplotě 60 °C ve vakuu na konstantní hmotnost.

Reakční schéma tohoto způsobuje uvedeno níže.

HCO3H.H2N

NHEoc

CGztSu (i) J

Ύ

HHTO /EtOAc

Ms (ii) EtOAc/H₂O

7'

NH.HCI

NMEcc 'eojtBu

J Aq.

-13CZ 301458 B6

NaOH(aq) toluen

Me

H

NH

NHBoc

Me

NH

Toluen

(I) HaPO^aq)/toluen» (ii) NH₃ (aq) to pH 5.5 (iii) EtOH

H3PO4

Hydroskopické vlastnosti tří vzorků sloučeniny vzorce (I), monohydrátu, vyrobené podle výše uvedeného způsobu, se testovaly, zjišťováním jejich % hmot. změny (hmotn./hmotn.) cílové rela5 tivní vlhkosti 0 až 90 % pri teplotě 25 °C. Výsledky jsou uvedeny na obrázcích 1 až 3.

Pro provedení těchto měření se použily následující přístroje a parametry:

Hiden IGASORP, série: IGA SA-040;

Hiden Inteligent Analyser, model: HAS-022-120E, série: HAUGA-0042;

Průtok = 495 ml/min Izotermální parametry:
Způsob analýzy	: FI
Čekání do:	97%
Min. doba:	10 minut
Max. doba:	240 minut
Hladina M:	0,2 %
Izotermální sekvence:
Teplota:	25 °C
Adsorpce/% 1	Desorpce/%
0	80
10	70
20	60
30	50
40	40
50	30
60	20
70	10
80	0

90

- Skeny = 2(1 cykl)

Z obrázků 1 až 3 je vidět, že neexistuje významná absorpce atmosférické vlhkosti pod relativní 40 vlhkostí 70 %.

- 14CZ 301458 B6

Difrakce záření X pro kyselinu (2S)-2-amÍno-4-{[2-(ethanimidoylamino)-ethyl]-thio} butanové, sloučeninu s kyselinou ortofosforečnou, hydrát (1:1) je uvedena na obrázku 6. Tabulka I níže uvádí použité přístroje a parametry. Tabulka 2 níže uvádí zaznamenané píky.

Tabulka 1

Výrobce	Phillips Analytical X-Ray B.V. (Holadsko)
Difraktometr, typ	PW1800 (PC-APD)
Sériové číslo	DY701
Trubice anody	Cu
LabdaAlfa 1	1,54056
LabdaAlfa 2	1,54439
Poměr Alfa 21	0,50000
Divergenční štěrbina	automaticky
Přijímací štěrbina	jemná
Používaný monochromátor	ano
Voltáž generátoru	40
Obvyklá trubice	45
Datum, čas	4.10.2003, 3:23
Rozmezí úhlu (°2Θ)	6.0000 -45.0000
Velikost stupně skenu (°2Θ)	0,020
Typ skenu	stupňový (STEP)
Doba stupně skenu	4,00

Tabulka 2

Úhel (°2Θ)	Relativní intenzita (%)
7,2900	100
7,5100	19,4
8,5000	1

- 15CZ 301458 B6

Pokračování tabulky 2

12,0650	0
14,4950	60
16,9250	2
18,4300	16
18,6950	2
20,3350	2
20,7400	1
21,1200	1
21,8250	6
22,2150	10
22,4500	12
23,4950	2
23,7100	4
24,1450	38
25,3450	2
25,8800	2
26,4950	3
26,6750	2
27,4650	7
27,9600	6
28,4050	2
29,0200	7
29,4950	1
30,1800	3

Pokračování tabulky 2

30,7400	1
31,8000	1
32,1800	2
32,5200	5
33,8400	1
34,4650	5
35,5200	1
35,8150	1
36,5950	5
37,8300	1
38,5550	1
39,2200	1
39,7850	4
40,9400	1
41,5450	1
42,0900	1
42,5700	1
43J200	1
44,4700	2

Příklad 5 Výroba sloučeniny vzorce (l) (trihydrát) io Sloučenina vzorce (I) monohydrát, vyrobená způsobem uvedeným v příkladu 4 (5 g), se vystavila po dobu 2 týdnů relativní vlhkosti větší než 80 %. Produkt se analyzoval práškovou difrakcí záření X a zjistilo se trihydrát (obr. 7).

Difrakcí záření X pro kyselinu (2S)~2-amino-4-{[2-(ethanimidoylamino)-Othyl]-thio}-butano15 vou, sloučeninu s kyselinou ortofosforečnou, hydrát (1:3) je uvedena na obr. 7. Tabulka 3 níže uvádí použitý přístroj a parametry. Tabulka 4 níže uvádí zaznamenané píky.

- 17CZ 301458 B6

Tabulka 3

Výrobce	Phillips Analytical X-Ray B.V., (Holandsko)
Difraktometr, typ	PW3040/60
Sériové Číslo	DY1379
Anodová trubice	Cu
K-Alfa 1 vlnová délka (A)	1,54056
Úhel divergenční štěrbiny (°)	0,1250
Přijímací štěrbina	není
Použitý monochromátor	ano
Voltáž generátoru	40
Obvyklá trubice	45
Rozmezí úhlu (’2Θ)	5,000 - 45,000
Velikost stupně skenu (’2Θ)	0,0128
Typ skenu	kontinuální
Doba skenu na stupeň (s)	2999,33
Příprava vzorku	vzorek se plní do kapilární trubice
Detektor	Raytech PSD
Způsob PSD	Skenování PSD
Číslo aktivního kanálu PSD	591,00
Sklon PSD	0,0533
Divergenční štěrbina	fixovaná štěrbina 1/8°
Hybridní monochromátor	2xGe220 Asym. (Hybrid)
Zrcadlo	Cu zrcadlo paprsků X (hybrid MRD)

- 18CZ 301458 B6

Tabulka 4

Úhel (°2Θ)	Relativní intenzita (%)
6,558	45
7,261	84
7,748	15
11,469	1
13,127	13
13,530	30
15,529	5
17,241	27
18,082	17
18,288	12
19,688	6
19,867	7
20,122	77
20,302	40
20,884	34
21,877	65
22,025	100
22,520	9

- 19CZ 301458 B6

Pokračování tabulky 4

22,943	18
23,041	30
23,182	43
23,380	41
23,796	24
24,422	17
24,607	7
24,934	9
25,569	23
26,156	35
26,432	7
27,347	73
27,499	23
27,796	3
28,195	20
28,743	12
28,961	18
29,313	7
29,861	6
30,011	8
30,225	25
30,810	7
31,095	16
31,366	33

-20CZ 301458 B6

Pokračování tabulky 4

31,541	8
32,228	6
32,585	7
33,260	13
33,473	13
34,113	5
34,387	1
34,676	7
34,866	12
35,020	7
35,284	3
36,287	6
36,578	8
36,761	17
37,054	4
37,530	13
37,733	5
38,386	7
38,597	13
38,834	15
39,462	9
39,827	9
39,897	8
40,082	4

-21 CZ 301458 B6

Pokračování tabulky 4

40,367	4
40,492	4
40.875	2
41,464	7
41,839	1
42,466	5
42,557	6
43,166	2
43,478	2
43,750	3
44,016	4
44,473	3
44,672	2

Hydroskopická schopnost vzorku sloučeniny vzorce (I) trihydrátu, vyrobeného podle výše uvedeného způsobu se testovala měřením % hmotn. změny (hmotn./hmotn.) při cílové relativní vlhkosti 0 až 90 % při teplotě 25 °C. Používané přístroje a parametry pro vytvoření dat byly uvedeny v tabulkách 1 až 3. Výsledky jsou uvedeny na obrázku 5, io

Srovnávací příklad A

Dihydrochloridová sůl sloučeniny, jejíž sloučeninou vzorce (I) je fosfátová sůl, se vyrobila pro15 vedením reakce meziproduktu z příkladu 1 s názvem terc-butyl-(terc-butoxykarbonyl)-S-[2(ethanimidoylamino)-ethyl]~L-homocystenát hydrochlorid, s chlorovodíkem a dioxanem při pokojové teplotě, jak je uvedeno níže.

Hydroskopická schopnost vzorku dihydrochloridové soli. vyrobené výše uvedeným způsobem, se testovala měřením její % hmotn. změny (hmotn./hmotn.) při cílové relativní vlhkosti 30 až 80 % při teplotě 25 °C. Výsledky jsou uvedeny na obrázku 4.

Je zřejmé, že probíhala rychlá absorpce atmosférické vlhkosti nad 50% relativní vlhkosti. Při 55% relativní vlhkosti měla dihydrochloridová sůl změnu hmotnosti asi 11 %; při 60% rela-22CZ 301458 B6 tivní vlhkosti měla dihydrochloridová sůl změnu hmotnosti asi 24 %; a při 65 % relativní vlhkosti měla dihydrochloridová sůl změnu hmotnosti asi 32 %. Změna hmotnosti nad relativní vlhkostí v rozmezí 30 až 75 % byla 47 %.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY io

1. Sloučenina vzorce I h₃c nh₂ co₂h .h,po₄ (I)

15 nebo její solvát nebo fyziologicky funkční derivát.
2. Kyselina (2S)-2-amino-4-{[2-(ethanÍmidoylammo}-^thyl]-thio}-butanová, sloučenina s kyselinou fosforečnou (1:1) nebo její solvát nebo fyziologicky funkční derivát.

20
3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde kyselinou fosforečnou je kyselina orthofosforečná.
4. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde solvátem je hydrát.
5. Sloučenina podle nároku 4, kde hydrátem je monohydrát.
6. Sloučenina podle nároku 4, kde hydrátem je trihydrát.
7. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití jako léčivo.

30
8. Sloučenina podle z nároku 7 pro použití k profylaxi nebo léčení klinických stavů ze skupiny arthritis, astma, rýma, zánětlivý stav nebo imunitní porucha pokožky, zánětlivý stav nebo imunitní porucha oka, ileus, migréna, bolest a syndrom dráždivého tračníku.
9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle

35 kteréhokoliv z nároků 1 až ó a farmaceuticky přijatelný nosič nebo pomocnou látku a popřípadě jednu nebo větší počet dalších léčebných složek.
10. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že je v pevné lékové formě.
11. Farmaceutický prostředek podle nároku 9 nebo 10, vyznačující se tím, že je určen pro použití k profylaxi nebo léčení klinických stavů ze skupiny arthritis, astma, rýma, zánětlivý stav nebo imunitní porucha pokožky, zánětlivý stav nebo imunitní porucha oka, ileus, migréna, bolest a syndrom dráždivého tračníku.
12. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro výrobu farmaceutického prostředku pro profylaxi nebo léčení klinických stavů ze skupiny arthritis, astma, rýma, zánětlivý stav nebo imunitní porucha pokožky, zánětlivý stav nebo imunitní porucha oka, ileus, migréna, bolest a syndrom dráždivého tračníku.

-23CZ 301458 B6
13. Způsob výroby sloučeniny podle nároku 1 nebo 2 nebo jejího solvátu nebo fyziologicky funkčního derivátu, vyznačující se tím, že se

i) uvede do reakce sloučenina vzorce II nebo její enantiomer, sůl nebo chráněný derivát, io se sloučeninou obecného vzorce III kde L je odštěpitelná skupina, nebo s její solí, načež se v jakémkoliv pořadí uskuteční následující stupně;

ii) výsledná sloučenina se převede na monofosfát, iii) případně se odstraní jakékoliv ochranné skupiny,

20 i v) případně se oddělí enantiomer ze směsi enantiomerů,

v) produkt se popřípadě převede na odpovídající solvát nebo fyziologicky funkční derivát.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že přeměna výsledného produktu na monofosfát zahrnuje dvoufázovou reakci s použitím toluenu a vodného roztoku kyseliny

25 fosforečné.
15. Způsob podle nároku 13 nebo 14, vyznačující se tím, že se po provedení stupně i) do vodné vrstvy, vzniklé reakcí sloučeniny vzorce II nebo jejího enantiomerů, soli nebo chráněného derivátu se sloučeninou vzorce III nebo její soli přidá toluen za vzniku dvoufázové směsi,

30 ze směsi se oddělí toluenová vrstva, k toluenové vrstvě se přidá vodný roztok kyseliny fosforečné za vzniku další dvoufázové směsi a z této další směsi se oddělí vodná vrstva.