CZ301216B6

CZ301216B6 - Pregnanové anionické slouceniny, zpusob jejich výroby a jejich použití

Info

Publication number: CZ301216B6
Application number: CZ20080434A
Authority: CZ
Inventors: Štastná@Eva; Chodounská@Hana; Pouzar@Vladimír; Kapras@Vojtech; Cais@Oldrich; Vyklický@Ladislav; Kohout@Ladislav
Original assignee: Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved CR, v. v. i.
Priority date: 2008-07-10
Filing date: 2008-07-10
Publication date: 2009-12-09
Also published as: EP2313424B1; WO2010003391A2; CZ2008434A3; WO2010003391A3; EP2313424A2

Abstract

Pregnanové anionické slouceniny obecného vzorce I, kde R.sup.1.n. znamená esterovou skupinu obecného vzorce R.sup.4.n.O-, která je schopna tvorit ion, kde R.sup.4.n. znamená skupinu HSO.sub.3.n.-, pyridin-SO.sub.3.n.-, HOOC-(CH.sub.2.n.).sub.2.n.-CO-, R.sup.2.n. znamená atom vodíku v konfiguraci alfa nebo beta, R.sup.3.n. znamená esterovou skupinu obecného vzorce R.sup.5.n.-COO-, kde R.sup.5.n. znamená CH.sub.3.n.-, nebo C.sub.5.n.H.sub.4.n.N-, a jejich farmaceuticky použitelné soli. Slouceniny obecného vzorce I se pripraví ze slouceniny vzorce II nebo slouceniny vzorce VIII. Slouceniny obecného vzorce I se používají pro výrobu farmaceutického prostredku pro lécení neurologických a psychiatrických onemocnení a stavu spojených s nadmernou aktivací NMDA receptoru jakými jsou neuroprotektiva proti excitotoxickému poškození centrálního nervového systému (CNS), stavy spojené s nadmernou aktivací NMDA podtypu glutamátových receptoru nebo tam, kde se tento typ receptoru podílí na vzniku nebo prubehu nekterých duševních a neurologických onemocnení, zvlášte jde o traumatické a hypoxické poškození nervové tkáne pri chorobách centrální nervové soustavy, jako jsou napr. Alzheimerova, Huntingtonova a Parkinsonova choroba, dále pri kognitivních poruchách vznikajících ve stárí, dalšími indikacemi jsou tardivní dyskineze, amyotrofická laterální skleróza, olivopontocerebelární degenerace, neurologické obtíže spojené s AIDS infekcí, alergická encefalomyelitida, a pro medikaci epilepsie, úzkosti, deprese, schizofrenie, chronické bolesti i lékové závislosti.

Description

Vynález se týká pregnanových aníonických sloučenin a způsobu jejich výroby. Dále se týká farmaceutických prostředků, které obsahují tyto anionické steroidní sloučeniny, a jejich použití jako neuroprotektiv proti excitotoxickému poškození centrálního nervového systému (CNS), stavů spojených s nadměrnou aktivací NMDA podtypu glutamátových receptorů nebo kde se to tento typ receptorů podílí na vzniku nebo průběhu některých duševních a neurologických onemocnění. Jedná se především o traumatické a hypoxické poškození nervové tkáně při chorobách centrální nervové soustavy, jako jsou např. Alzheimerova, Huntingtonova a Parkinsonova choroba, dále také při kognitivních poruchách vznikajících ve stáří. Dalšími indikacemi by mohly být tardivní dyskineze, amyotrofická laterální skleróza, olivopontocerebelámí degenerace, neuro15 logické obtíže spojené s AÍDS infekcí, alergická encefalomyelitida, a pro medikaci epilepsie, úzkosti, deprese, schizofrenie, chronické bolesti i lékové závislosti.

Dosavadní stav technikv

Neurony jsou součástí systému, který adekvátní reakcí na nejrůznější podněty chrání stabilitu organismu. Nepostradatelnou součástí aktivity neuronů je obvykle excitace, ale za určitých podmínek může být zejména nadměrná excitace pro neurony škodlivá. Takový stav, označovaný jako excitotoxicita, může vést k symptomům charakteristickým pro závažná onemocnění nervového systému, jako jsou Alzheimerova, Huntingtonova nebo Parkinsonova choroba. Uvedené choroby začínají být vážným a stále rostoucím problémem zejména pro stárnoucí populaci. Léky pro prevenci a péči o nemocné jsou naléhavě potřeba. Jedním z cílů, kde lze proti zmíněným chorobám zasahovat, je NMDA receptor. Jde o iontový kanál aktivovaný kyselinou glutamovou, přítomný ve všech oblastech mozku a míchy.

Medikace patologických stavů, jako je kraniocerebrální poranění, mozková mrtvice a další neurologické stavy spojené s excitotoxicitou, je v současné době předmětem intenzivního výzkumu. Dosud neexistují spolehlivé preparáty ani jednoznačně určené aktivní látky použitelné jako univerzální léčiva. V roce 2006 byla neúspěšně ukončena 3. fáze klinického výzkumu NXY- 059 (disufenton disodný; Chacon M.R., Jensen M.B., Sattin J.A., Živin J.A.: Neuroprotection in cerebral ischemia: emphasis of SAINT trial, Curr. Cardiol. Rep. 2008, 10, 37 až 42), slibné látky pro vylepšení šancí na přežití a zmenšení následků po mozkové příhodě. Pro léčbu raných stadií Alzheimerovy choroby se používá memantin s diskutabilní terapeutickou využitelností. Využití látek, které prokázaly velmi dobré neuroprotektivní působení na excitotoxicitu vyvolanou nad40 měrnou aktivací NMDA receptorů, a to jak v in vitro testech, tak v animálních studiích, jako léčiv brání to, že jejich aplikace způsobuje v některých případech závažné psychické obtíže (časté jsou psychózy). Tato skupina látek je představovaná např. ketaminem.

Neurosteroidy jsou látky, které vznikají v nervové tkáni z cholesterolu nebo ze steroidních pre45 kurzorů z periferních zdrojů (Baulieu EE. Neurosteroids: a novel function of the brain. Psychoneuroendocrinology 1998; 23, 963 až 87). Působí na membránových receptorech pro neuropřenašeče (např. γ-aminomáselná kyselina (GABA) a V-metyl-D-aspartát (NMDA)). Schopnost neurosteroidů ovlivnit neuronální excitabilitu prostřednictvím modulace aktivity iontových kanálů (Paul SM, Purdy RH. Neuroactive steroids. Faseb J 1992; 6, 2311 až 22; Biggio G,

Concas A, Costa E. Steroid modulation of amino acid neurotransmitter receptors. v: Farb DH, Gibbs TT, Wu FS, Gyenes M, Fríedman L, Russek SJ. GABAergic Synaptic Transmission: Molecular, Pharmacological, and Clinical Aspects, New York: Raven Press; 1999, str. 119 až 131) hraje klíčovou roli v etiologii duševních procesů, jako jsou např. učení (Tsíen JZ, Huerta PT, Tonegawa S. The essential role of hippocampal CA1 NMDA receptor-dependent synaptic plasticity in spatial memoiy. Cell 1996; 87, 1327 až 38), stárnutí (Vallee M, Mayo W,

Damaudery M, Corpechot C, Young J, Koehl M, a spol. Neurosteroids: deficient cognitive performance in aged rats depends on low pregnenolone sulfáte levels in the hippocampus. Proč

Nati Acad Sci USA 1997; 94, 14865 až 70), stres (Grobin AC, Roth HR, Deutch AY. Regulation ofthe prefrontal cortical dopamine systém by the neuroactive steroid 3a,21-dihydroxy-5a5 pregnane-20-one. Brain Res 1992; 578, 351 až56„) atd., a také v řadě neurologických a psychiatrických poruch, např. u Alzheimerovy choroby (Nasman B, Olsson T, Backstrom T, Eriksson S, Grankvist K, Viitanen M, et al. Sérum dehydroepiandrosterone sulfáte in Alzheimer's disease and in multi-infarct dementia. Biol Psychiatry 1991; 30, 684 až 90) a epilepsie (Gasior M, Carter RB, Witkin JM. Neuroactive steroids: potential therapeutic use in neurological and ío psychiatrical disorders. Trends in Pharmacol Sci 1999; 20, 107-112.) atd.

Nalezení vazebného místa pro neurosteroidy a rozklíčování molekulárního mechanismu účinku představují v současné době základní pilíře pro design a vývoj nových terapeutik. Mechanismus účinku neurosteroidů na ligandem aktivované iontové kanály nebyl doposud zcela objasněn. Je známo, že neurosteroidy mění pravděpodobnost otevření příslušného iontového kanálu (Twyman RE, Macdonald RL. Neurosteroid regulation of GABA(A) receptor singlechannel kineticproperties of mouše spinal-cord neurons in culture. J Physiol 1992; 456, 215-45; Callachan H, Cottrell GA, Hather NY, Lambert JJ, Nooney JM, Peters JA. Modulation of the GABA-A receptor by progesterone metabolites. Proč R Soc Loud B Biol Sci 1987; 231, 359-369).

Současný výzkum se také intenzivně věnuje rozpoznání vazebných míst neurosteroidů, která dosud nebyla jednoznačně identifikováno ani pro GABA, ani pro NMDA receptor. Výsledky současných studií naznačují, že neurosteroidy mají své vlastní vazebné místo, které je nezávislé na vazebných místech pro příslušné agonisty nebo allosterické modulátory (Park- Chung M, Wu

FS, Purdy RH, Malayev AA, Gibbs TT, Farb DH. Distinct sites for inverse modulation of N-methyl-D-aspartate receptors by sulfated steroids. Mol Pharmacol 1997; 52, 1113-23; Akk G, Bracamontes JR, Covey DF, Evers A, Dao T, Steinbach JH. Neuroactive steroids háve multiple actions to potentiate GABAA receptors J Physiol 2004; 558, 59-74.).

Povědomí o vazebném místě neurosteroidů na NMDA receptoru není tak obsáhlé jako poznatky o vazebném místě na GABA receptoru, nicméně již bylo prokázáno, že steroidy působí extracelulámě (Park-Chung M, Wu FS, Farb DH. 3a-Hydroxy-5(ý-pregnan-20-one sulfáte: a negative modulátor of the NDMA-induced current in cultured neurons. Mol Pharmacol 1994; 46,1 46—50; Horák M, Vlček K, Chodounska H, Vyklicky L. Subtype-dependence of N-methyl35 D-aspartate receptor modulation by pregnenolone sulfáte, Neuroscience 2006; 137, 93-102.). Pokusy s chimérickými receptory rovněž objasnily klíčový význam extracelulámí smyčky mezi třetí a čtvrtou transmembránovou doménou NR2 podjednotky v mechanismech potenciačního a inhibičního účinku pregnenolonsulfátu a 3a,5p-pregnanolonsulfátu (Horák M, Vlček K, Chodounska H, Vyklicky L. Subtype-dependence of N-methyl-D-aspartate receptor modulation by pregnenolone sulfáte. Neuroscience 2006; 137,93-102; Petrovic M, Sedlaček M, Horák, Chodounska H, Vyklicky L. 20-Oxo-5|3-pregnan-3a-yl sulfáte is a use-dependent NMDA receptor inhibitor. J Neurosci 2005; 25, 8439-50.).

Je zřejmé, že mnoho dalších aspektů může ovlivňovat vlastnosti receptoru a následnou vazbu neurosteroidů na NMDA receptor; stereochemie substrátu by měla být zmíněna na prvním místě. Struktuměn-aktivitní studie shrnují základní strukturní rysy nezbytné pro účinnost neurosteroidů: přítomnost sulfátové skupiny v poloze C3 a ketoskupina v poloze C20 (Cais O, Vyklicky L. Psychiatrie Suppl 2006; 10, 8-11). Sulfátová skupina v poloze C3 může příp. být nahrazena hemisukcinátovou, hemiglutarátovou či hemioxalátovou, aniž by došlo ke ztrátě funkce steroidu, což naznačuje, že klíčová je přítomnost skupiny nesoucí záporný náboj (Park-Chung M, Wu FS, Purdy RH, Malayev A A, Gibbs TT, Farb DH. Distinct sites for inverse modulation of N-methylD-aspartate receptors by sulfated steroids. Mol Pharmacol 1997; 52, 1113-23; Weaver CE, Land MB, Purdy RH, Richards KG, Gibbs TT, Farb DH. Geometry and charge determine pharmacological effects of steroids on N-methyl-D-aspartate receptor-induced Ca(2+) accumulation and cell death. J Pharmacol Exp Ther 2000; 293,747-54).

Řada preklinických studií dokládá výraznou schopnost NMDA antagonistů zabránit výlevu glutamátu a tím omezit narušení funkcí CNS. Nicméně jejich neuroprotektivní potenciál je z klinického pohledu malý. Vzhledem k faktu, že NMDA receptory jsou jedním z nejrozšířenějších typů receptorů v CNS, vede podání NMDA antagonistů k řadě závažných nežádoucích účinků, od narušení motoriky po indukci psychóz schizofrenního typu. Na druhou stranu rozdílné podjednotkové složení NMDA receptorů na presynaptickém a postsynaptickém elementu, na různých typech nervových buněk i v různých částech mozku nabízí možnost hledat látky selektivně ovlivňující pouze určitou podmnožinu NMDA receptorů, a tím omezit výskyt neočekávaných a nežádoucích účinků při zachování neuroprotektivního působení. Ve spisu US 2003/0069425 je popsána příprava a aktivita hemiskucinátu 16a-brom-3fkhydroxy-5a-androstan-17-onu, kde se tvrdí, že zlepšuje imunitu, což může zmírnit příznaky četných nemocí a poruch.

Steroidní deriváty, přestože je dlouho známa jejich neuroaktivita, v současné době po vyřazení alfaxolonu z lékařské praxe, pro medikaci zatím využívány nejsou. Cílem autorů předloženého vynálezu jsou neuroaktivní sloučeniny na bázi anionických sloučenin, které mají vysoký index selektivity a efektivity, tzn. jsou méně toxické, avšak účinnější než dříve známá analoga.

Autoři předloženého vynálezu zahájili proto vývoj a testování nových NMDA antagonistů odvo20 zených od neurosteroidů. Během tohoto studia zjistili, že nově syntetizované látky vykazují afinitu k extrasynaptickým NMDA receptorům. Co je však ještě důležitější, elektrofyziologické studie ukázaly, že tento typ látek se váže pouze na dlouhodobě otevřené NMDA receptory. Předpokládaný neuroprotektivní mechanismus účinku je tedy blokování nadměrného vtoku vápníku do buňky prostřednictvím dlouho otevřených NMDA receptorů.

Během uvedených studií byly syntetizovány nové pregnanové deriváty, které inhibují NMDA receptor a mohou být tedy užitečné pro léčení onemocnění CNS, jako jsou kognitivní poruchy při stárnutí, Alzheimerova choroba, cévní mozková příhoda, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba a další onemocnění a poruchy vzniklé v důsledku nadměrné aktivace NMDA receptorů.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou nové pregnanové anionické sloučeniny obecného vzorce I (I), v němž

R¹ znamená esterovou skupinu obecného vzorce R⁴O-, která je schopna tvořit ion, kde R⁴ znamená skupinu HSO3-, pyridin-SO₃, HOOC-fCFbjr-CO“ apod.,

R² znamená atom vodíku s konfigurací alfa nebo beta a

R³ znamená esterovou skupinu obecného vzorce R⁵OO-, kde R⁵ znamená CH₃- nebo C5H4N-, jako je acetoxyskupína, nikotinyloxyskupina apod., ajejich farmaceuticky použitelné soli.

Tento vynález zahrnuje také způsob výroby sloučenin obecného vzorce 1, v němž R² znamená atom vodíku s konfigurací alfa a R¹ a R³ znamenají jak shora uvedeno, podle kterého se sloučenina vzorce II

(Ιϊ) převede na 3,7-dichráněný derivát, s výhodou d i acetát vzorce III

který se parciální hydrolýzou, s výhodou působením hydroxidu alkalického kovu, jako je hydroxid draselný, sodný nebo lithný, nebo kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, chloristá apod., ve vhodném rozpouštědle, jako je alkohol, vodný alkohol, nebo ve směsi rozpouštědel, s výhodou ve směsi methanolu s benzenem, převede na monoester vzorce IV

(IV), z něhož se působením anhydridů kyseliny jantarové v pyridinu za přítomnosti DMAP připraví příslušný ester, s výhodou hemisukcinát vzorce I

(I), v němž R¹ znamená hemisukcinátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³znamená acetoxyskupinu, nebo reakcí komplexu pyridinu—oxid sírový v inertním rozpouštědle, s výhodou v chloroformu, pyridiniumsulfát vzorce I

(D, v němž R¹ znamená pyridiniumsulfátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená acetoxyskupinu. Popřípadě se posledně uvedená sloučenina vzorce I

v němž R¹ znamená pyridiniumsulfátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³5 znamená acetoxyskupinu, může reakcí s hydroxidem alkalického kovu, s výhodou hydroxidem sodným, v alkoholu, s výhodou v methanolu, převést na sloučeninu obecného vzorce

acetoxyskupinu.

Sloučenina obecného vzorce I, v němž R¹ znamená pyridiniumsulfát, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená nikotinyloxyskupinu, se vyrobí tak, že se sloučenina obecného vzorce IV

převede reakcí s /erc-butyldimethylsilylchloridem a imidazolem ve vhodném rozpouštědle, s výhodou v DMF, na /erc-butyldimethylsilylderivát vzorce V

který obvyklým zmýdelněním acetátové skupiny v poloze 7, s výhodou hydroxidem draselným ve směsi ethanolu a benzenu za zvýšené teploty, poskytl sloučeninu vzorce VI

(VI), která se esterifikuje nikotinoylchloridem v pyridinu za přítomnosti DMAP za vzniku nikotiny 1oxy derivátu vzorce VII

v němž R znamená TBDMS, a ta působením p-toluensulfonové kyseliny v methanolu poskytne sloučeninu vzorce VII, v němž R znamená atom vodíku, která pak působením komplexu pyridinu s oxidem sírovým ve vhodném nereagujícím rozpouštědle, s výhodou v chloroformu, poskytne sloučeninu obecného vzorce I

ío v němž R¹ znamená sodnou sůl pyridiniumsulfátu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³znamená nikotinyloxyskupinu.

Podobným sledem reakcí se mohou vyrábět sloučeniny obecného vzorce I, v nichž R2 znamená atom vodíku s konfigurací beta, ze sloučeniny vzorce Vlil

která se od sloučeniny vzorce II liší pouze konfigurací atomu vodíku v poloze 5.

Podobným sledem reakcí, jako je shora uvedeno, se tak vyrobí následující sloučeniny obecného vzorce I:

20-Oxo-5 a-pregnan-3a,7a-diyl 3-hem i sukcinát 7-acetát,

200xO“5a-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát pyridiniová sůl,

20-Oxo-5a-pregnan-3tt,7tt-dÍyl 3-sulfát 7-acetát sodná sůl,

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-nikotinát pyridiniová sůl,

CZ 301216 Bó

20-Oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát,

20-0x0-5 p-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát pyridiniová sůl,

20-0x0-5(J-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát sodná sůl a 20-Oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-níkotinát pyridiniová sůl.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití sloučenin obecného vzorce 1 jako neuroprotektiv při traumatickém poranění mozku, míchy, cévní mozkové příhodě, pří chorobách centrální nervové soustavy, jako jsou např, Alzheimerova, Huntingtonova a Parkinsonova choroba, dále také při prevenci onemocnění CNS a pro medikaci stavů spojených s excitotoxicitou. Indikací by mohla ío být prevence nebo zpomalení nástupu neurodegenerace u Alzheimerovy choroby, důsledky mozkové příhody, traumatické poškození mozku, Parkinsonova choroba, tardivní dyskineze, Huntingtonova choroba, amyotroflcká laterální skleróza, olivopontocerebellamí degeneraci, AIDS, alergickou encefalomyelitidu, a pro medikaci epilepsie, anxiety, deprese, schizofrenie, chronické bolesti i lékové závislosti.

Předmětem vynálezu jsou také farmaceutické přípravky, které jako účinnou složku zahrnují shora uvedené sloučeniny obecného vzorce I, v něm R¹, R² a R³ znamenají jak shora uvedeno nebo jejich substituované analogy buď samotné, nebo v kombinaci spolu s jakýmkoliv farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem či adjuvans.

Pregnanolonsulfát a jeho homology vykazují příznivou roli v různých modelech onemocnění člověka, jako jsou NMDA-indukované epileptické záchvaty, bolest indukovaná formalinem a neuroprotektivní účinek, jak v in vitro, tak in vivo modelech. Na základě našich zjištění (podrobnosti viz v příkladu 20) se domníváme, že homology pregnanolonsulfátu mohou mít terapeutickou hodnotu při léčení onemocnění centrálního nervového systému člověka.

Následující příklady slouží pouze pro ilustraci uvedených předmětů vynálezu, aniž by se tím jakkoliv omezovaly tento vynález, který je dán rozsahem pouze přiloženými patentovými nároky.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza 20-oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl diacetátu

Anhydrid kyseliny octové (0,42 ml, 4,4 mmol) byl přidán k roztoku 20-oxo-5a-pregnan-3a,7adiolu (100 mg, 0,3 mmol) v pyridinu (5 ml). Reakční směs byla zahřívána 6 hodin při 50 °C a poté stála ještě 2 dny za laboratorní teploty. Po nalití do směsi led-voda byla reakční směs extrahována ethyl-acetátem, promyta vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného, vodou a sušena. Rozpouštědla byla odpařena a olejovitý odparek čištěn deskovou chromatografií na tenké vrstvě ve směsí rozpouštědel petrolether/aceton (1:1). Byl izolován diacetát uvedený v nadpisu (67 mg, 54 %), t.t. 112 až 114 °C, [a]_D+21,8 (c 0.363, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 1726 (C=O, acetát); 1702 (C=O, keton); 1259,1241, 1030 (C-O). 'H NMR (200 MHz): 0,60 (s, 3 H, 3 χ H18); 0,80 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,05 (s, 3 H, C(3)-OAc); 2,08 (s, 3 H, C(7)-OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x

H-21); 2,54 (t, 1 H, J - 8.8, H-17); 4,92 (q, 1 H, J = 2.9, H-7); 5,03 (m, 1 H, H-3). FAB MS:

399 (12 %, M + Na), 359 (8 %, M+1 - H₂O), 299 (80 %, M+1 - H₂O, AcOH). Pro CmHjjO, vypočteno: C, 71,74; H, 9,15, nalezeno: C, 72,44; H, 9,22.

Příklad 2

Syntéza 3a-hydroxy-20~oxo-5a-pregnan-7a-yl acetátu

K roztoku diacetátu z příkladu 1 (90 mg, 0,22 mmol) v benzenu (10 ml) byl přidán methanolický roztok (1 ml) hydroxidu draselného (15,4 mg, 0,27 mmol). Reakční směs stála za laboratorní teploty přes noc, poté byla nalita do vody a extrahována ethyl-acetátem (50 ml). Organická fáze byla promyta vodou, sušena a rozpouštědla byla odpařena. Odparek byl čištěn preparativní chromatografií na tenké vrstvě ve směsi rozpouštědel aceton/petrolether (1:1). Byla izolována titulní sloučenina (69 mg, 85 %): t.t. 148 až 150 °C (ether-petrolether), [a]_D +64,5 (c 0,346, CHC1₃). IR spektrum (CHCI,): 3616 (O-H); 1717 (C=O, acetát); 1701 (C-O, keton); 1256 (C-O). 'H NMR (200 MHz): 0,59 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,78 (s, 3 H, 3 x H-l9); 2,07 (s, 3 H, OAc); 2,11 (s, 3 H, 3 x

H-21); 2,55 (t, 1 H, J = 8,8, H-l 7); 4,06 (kvintet, 1 H, J = 2,4, H-3); 4,91 (q, 1 H, J = 2,9, H-7). FAB MS: 399 (17 %, M + Na), 317 (8 %, Μ + 1 - AcOH), 299 (9 %, M + AcOH, H₂O). Pro C₂₃H₃₆O₄ vypočteno: C, 73.37; H, 9.64, nalezeno: C, 74.12; H, 9.87.

io Příklad 3

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát

Ke směsi látky vyrobené podle příkladu 2 (100 mg, 0,27 mmol) a anhydridu kyseliny jantarové (100 mg, 2 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 30 minut, byl přidán suchý pyridin (10 ml) a 4-dimethylaminopyridin (20 mg, 0,17 mmol). Reakční směs byla zahřívána 6 hodin při 140 °C. Další anhydrid kyseliny jantarové (200 mg, 4 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (20 mg, 0,17 mmol) byly přidány a reakční směs byla míchána 10 hodin při 140 °C. Po nalití do vody byla organická Část extrahována ethyl-acetátem (50 ml), vodná fáze znovu extrahována ethyl-acetátem a spojené organické fáze promyty vodou a sušeny. Rozpouš20 tědla byla odpařena a odparek krystalován z horkého ethyl-acetátu za vzniku titulního hemisukcinátu (71 mg, 35 %): t.t. 193 až 195 °C, [<x]_D +43,3 (c 0,246, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 3516 (COOH); 3100 (COOH); 1717 (C=O, acetát); 1701 (C=O, keton); 1379 (CH₃); 1257, 1248 (C-O, acetát). *H NMR (200 MHz): 0,60 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,80 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,08 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, 3 H, J = 8,8, H-17); 2,60-2,71 (m, 4 H,

OOCH₂CH₂OO); 4,92 (m, 1 H, H-3); 5,06 (q, 1 H, J = 2,4, H-7). FAB MS: 499 (100 %, M + Na), 417 (13 %, Μ + 1 - AcOH), 299 (55 %, M - AcOH, C₄H₅O₄). Pro C₂₇H₄o0₇ vypočteno: C, 68,04; H, 8,46, nalezeno: C, 67,83; H, 8,46.

Příklad 4

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát pyridiniová sůl

Směs látky vyrobené v příkladu 2 (200 mg, 0,53 mmol) a komplexu pyridin-oxid sírový (400 mg, 2,5 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 1 hodiny, byla rozpuštěna v suchém chloroformu (10 ml) a pod argonem míchána 4 hodiny za laboratorní teploty. Poté stála reakční směs při teplotě -20 °C přes noc, nerozpuštěný komplex pyridin—oxid sírový zfiltrován a filtrát odpařen. Odparek byl rozpuštěn v absolutním methanolu (1 ml), ke kterému byl přidán absolutní ether (15 ml). Směs byla zahuštěna téměř na polovinu a nechána stát přes noc při -20 °C. Vzniklé krystaly titulního sulfátu, (230 mg, 82 %) byly odsáty a sušeny v exikátoru (nad hydroxidem draselným): t.t. 156 až 160 °C, [a]_D +29,3 (c 0,288, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 3072 (pyridin); 1716 (C=O, acetát); 1702 (C=O, keton); 1258, 1220 (C-O, acetát);

1258 (S-O). Ή NMR (400 MHz): 0,59 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,80 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,06 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,56 (t, 1 H, J = 9,2, H-17); 4,78 (kvintet, 1 H, J = 2,6, H-3); 4,89 (q, 1 H, J = 2,9, H-7); 7,98 (m, 2 H, H-3 a H-5, pyridinium); 8,48 (tt, 1 H, J, = 7,8, J₂ =1,5, H-4, pyridinium); 8,94 (m, 2 H, H-2 a H-6, pyridinium). ESI MS: 574 (17 %, Μ + K), 494 (14 %, M + K - pyridinium), 478 (21 %, M + Na - pyridinium), 412 (15 %, M - CH₃CO, pyridinium), 341 (47 %, M + Na - OSO₃C_sH₆N, CH₃CO). C₂₈H_4tO₇S: vypočteno: C, 62,78; H, 7,71; N, 2,61; S, 5,99, nalezeno: C, 60,92; H, 7,62; N, 2,70; S, 6,73.

Příklad 5

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát sodná sůl

K methanolickému roztoku (2 ml) sloučeniny vyrobené podle příkladu 4 (140 mg, 16,1 mmol) byl v průběhu I hodiny postupně přikapáván roztok hydroxidu sodného v methanolu (0,9 ml,

0,373 M) do hodnoty pH 8. Po zahuštění roztoku na polovinu byl přidán absolutní ether (10 ml) a směs stála přes noc pri -20 °C. Vzniklé kry staly titulní sodné soli (86 mg, 68 %) byly odsáty a sušeny v exikátoru (nad hydroxidem draselným); t.t. 162 až 163 °C, [a]p +29,6 (c 0,215, CHC1₃).

IR spektrum (CHC1₃): 1733, 1717 (C-O, acetát); 1703 (C=O, keton); 1257, 1245, 1198 (C-O, acetát). ^]H NMR (200 MHz): 0,61 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,79 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,10 (s, 3 H, OAc); 2,11 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, 1 H, J = 8,8, H-17); 4,69 (m, 1 H, H-3); 4,85 (m, 1 H, H-7). ESI MS: 501 (12 %, M + Na), 381 (100 %, M + Na - OSO₃Na). C₂₃H₃₅NO₇S + 2H₂O: vypočteno: C, 53,68; H, 7,63; S, 6,23, nalezeno: C, 53,52; H, 7,64; S, 6,11.

io

Příklad 6

3a-(ter/-Butyldimethylsilyloxy)-20-oxo-5a-pregnan-7a-yl acetát

Směs titulního alkoholu vyrobeného podle příkladu 2 (528 mg, 1,4 mmol) a imidazolu (570 mg,

8,37 mmol) rozpuštěná v Ν,Ν-dimethylformamidu (11 ml) byla ochlazena na 0 °C. Poté k ní byl přidán ZerZ-butyldimethylsilyl chlorid (528 mg, 3,5 mmol) a reakční směs byla míchána za laboratorní teploty. Po 2 hodinách byla reakční směs extrahována ethyl-acetátem (150 ml), organická fáze promyta roztokem kyseliny citrónové, hydrogenuhličitanu draselného, vodou a sušena. Po odpaření a krystalizací z ethyl-acetátu bylo získáno 687 mg (99 %) titulní sloučeniny: t.t. 120 až

121 °C, [a]_D +29,0 (c 0,369, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 2897 ((CH^Si); 1715 (C=O, acetát);

1701 (C=O, keton); 1472, 1463 ((CHj)jC); 1258 (C-Ό, acetát); 1053 (C-Osi). 'H NMR (200 MHz): 0,02 (s, 6 H, 6 x (CHjhSi); 0,59 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,76 (s, 3 H, 3 x H-19); 0,89 (s, 9 H, (CH₃)₃C); 2,03 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, I H, J = 8,7, H-17); 3,97 (kvintet, 1 H, J = 2,9, H-3); 4,89 (q, 1 H, J = 2,4, H-7). ESI MS: 513 (83 %, M + Na), 457 (20 %, M + Na

- (CH₃)₃C), 353 (42 %, M + Na - (CH₃)₃C(CH₃)₂SiO, CH₃CO, AcOH). C₂₉H₅o0₄Si: vypočteno:

C, 70,97; H, 10,27, nalezeno: C, 70,49; H, 10,39.

Příklad 7

3a-(Zer/-Butyldimethylsilyloxy)-7a-hydroxy-5a-pregnan-20-on

Roztok titulního acetátu vyrobeného v předchozím příkladu 6 (650 mg, 1,32 mmol) v benzenu (50 ml), ke kterému byl přidán hydroxid draselný v ethanolu (0,89 M, 60 ml) byl zahříván po dobu 16 hodin pri teplotě 60 °C. Po zreagování veškeré výchozí látky byla reakční směs nalita na vodu a extrahována ethyl-acetátem (80 ml). Organická fáze byla promyta vodou, sušena a rozpouštědla odpařena. Odparek byl kiystalován z horkého ethyl-acetátu za vzniku titulní sloučeniny (527 mg, 88 %): t.t. 135 až 140 °C, [a]_D +63,3 (c 0,232, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 3615 (O-H); 1699 (C=O, keton); 1472, 1463 ((CH₃)₃C); 1253 ((CHj)jSi); 1052 (C-Osi). ‘H NMR (200 MHz): 0,02 (s, 6 H, (CHjhSi); 0,59 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,88 (s, 12 H, 3 x H-19 a (CH₃)₃C); 2,11 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,56 (t, 1 H, J = 8,8, H-17); 3,83 (m, 1 H, H-7); 3,98 (tn, 1 H,

H-3). ESI MS: 919 (100 %, 2M + Na), 471 (50 %, M + Na). C₂₇H4₈O₃Si: vypočteno: C, 72,26; H, 10,70, nalezeno: C, 72,25; H, 11,11.

Příklad 8

3a-ýřerř-Butyldimethylsilyloxy)-20-oxO“5a-pregnan-7a-yl nikotinát

K roztoku sloučeniny vyrobené v předchozím příkladu (10 mg, 0,09 mmol) v pyridinu (15 ml), který byl předem vychlazen na 0 °C, byl přidáván hydrochlorid nikotinoylchloridu (900 mg, so 5,0 mmol) po malých dávkách. Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty 3 hodiny, nalita do vody (50 ml) a stála 15 hodin při teplotě 5 °C. Vysrážený titulní produkt byl odsát a následně sušen v exikátoru (nad hydroxidem draselným) (498 mg, 89 %): t.t. 147 až 151 °C, [a]_D +14,5 (c 0,391, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 2897 ((CH^Si); 1714 (C=O, nikotinát); 1703 (C=O, keton); 1286 (C-O, nikotinát); 1053 (C-Osi). ‘H NMR (400 MHz): 0,05 (s, 6 H, (CH₃)₂Si); 0,64 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,72 (s, 9 H, (CH₃)₃C); 0,83 (s, 3 H, 3 x H-l 9); 2,11 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,51 n

(t, 1 HJ = 8,8, H-17); 3,96 (kvintet, J = 2,4, 1 H, H-3); 5,22 (q, l H, J = 2,6, H-7); 7,40 (ddd,

H, J, = 7,8, J₂ = 4,8, J₃ = 0,7, H-5, nikotinát); 8,29 (dt, 1 H, J, = 8, J₂ = 2, H-4, nikotinát); 8,79 (dd, 1 H, Ji = 4,8, J₂ = 1,8, H-6, nikotinát); 9,25 (m, 1 H, H-2, nikotinát). FAB MS: 554 (36 %,

M+l), 496 (8 %, M - (CH₃)₃C), 299 (4 %, M - (CH₃)₃C(CH₃)₂SiO, OCOC₆H₄N), 255 (79 %,

M - (CH₃)₃(CH₃)₂SiO, OCOC₆H₄N, CH₃CO). C₃₃H₅|O₄Sí: vypočteno: C, 71,56; H, 9,28; N, 2,53, nalezeno: C, 71,40; H, 9,41; N, 2,25.

Příklad 9 io 3a-Hydroxy-20-oxo-5a-pregnan-7a-yl nikotinát

Sloučenina vyrobená v předchozím příkladu 8 (120 mg, 0,21 mmol) byla rozpuštěna v methanolickém roztoku kyseliny p-toluensulfonové (0,005 M, 72 ml). Po 10 dnech stání za laboratorní teploty byla reakční směs zneutralizována 10% roztokem uhličitanu draselného, extrahována ethyl-acetátem (100 ml), organická fáze promyta vodou, sušena a rozpouštědla odpařena. Preparativní chromatografii na tenké vrstvě ve směsi rozpouštědel petrolether/aceton (8:2) byla získána titulní sloučenina (83 mg, 87 %): t.t. 183 až 187 °C (aceton-heptan), [a]_D +15,0 (c 0,169, CHCI₃). IR spektrum (CHCb): 3615 (O-H); 1715 (C=O, nikotinát); 1703 (C=O, keton); 1287 (CO, nikotinát); 1002 (C-OH). Ή NMR (200 MHz): 0,72 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,86 (s, 3 H, 3 x

H-19); 2,25 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,53 (t, 1 H, J = 8,8, H-17); 4,05 (kvintet, 1 H, J = 2,4, H-3);

5,25 (q, 1 H, J = 2,8, H-7); 7,44 (m, 1 H, H-5, nikotinát); 8,30 (dt, 1 H, Ji = 7,8, J₂ = 1,9, H-4, nikotinát); 8,78 (dd, 1 H, Ji = 4,8, J₂ = 1,4, H-6, nikotinát); 9,26 (m, 1 H, H-2, nikotinát). ESI MS: 901 (100 %, 2M + Na), 462 (93 %, M + Na), 440 (24 %).C27H,₇NO₄: vypočteno: C, 73,77; H, 8,48; N, 3,19, nalezeno: C, 73,75; H, 9,24; N, 2,53.

Příklad 10

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-nikotinát pyridiniová sůl

Směs sloučeniny vyrobené v příkladu 9 (60 mg, 0,13 mmol) a komplexu pyridin-oxid sírový (120 mg, 0,75 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 1 hodiny, byla rozpuštěna v suchém chloroformu (5 ml) a pod argonem míchána 4 hodiny za laboratorní teploty. Poté stála tato reakční směs při teplotě -20 °C pres noc, nerozpuštěný komplex pyridin-oxid sírový byl zfiltrován a filtrát odpařen. Odparek byl rozpuštěn v absolutním methanolu (1 ml), ke kterému byl přidán absolutní ether (5 ml). Směs byla zahuštěna téměř na polovinu a nechána stát přes noc při -20 °C. Odpařením rozpouštědel byl získán titulní produkt (71 mg, 87 %) jako pěna: [a]_D +6,0 (c 0,204, CHCb). IR spektrum (CHCb): 3457, 3139 (pyridin); 1715 (C=O, nikotinát); 1702 (C-O, keton); 1289 (C-O, nikotinát); 1243, 1046 (SO=3). *H NMR (400 MHz): 0,63 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,87 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,11 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, 1 H, J = 8,7, H-17);

4,79 (kvintet, J = 2,7, 1 H, H-3); 5,25 (q, 1 H, J = 2,5, H-7); 7,74 (dd, 1 H, J, = 7,8, J₂ = 5,5,

H-5, nikotinát); 7,83 (m, 2 H, H-3 a H-5, pyridínium); 8,30 (tt, 1 H, Ji = 7,8, J₂ - 1,5, H-4, pyridínium); 8,62 (dt, 1 H, J_t = 7,8, J₂ = 1,5, H—1, nikotinát); 8,84 (m, 2 H, H-2 a H-6, pyridínium); 8,93 (m, 1 H, H-6, nikotinát); 9,29 (m, 1 H, H-2, nikotinát). FAB MS: 554 (3 %, M~CH₃CO)_s 440 (0,5 %, M - 2 x C₅H₆N), 422 (10 %, M+l - OSO₃C₅H₆N).

vypočteno: C, 64,19; H, 7,07; N, 4,68; S, 5,36, nalezeno: C, 60,87; H, 7,33; N, 3,55; S, 5,37.

Příklad 11

3a-Hydroxy-20-oxo-5p-pregnan-7a-yl acetát 50

K roztoku 20-oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl diacetátu (100 mg, 0,24 mmol), kterýje znám z předchozí oblasti techniky, v methanolu (8 ml) byl přidán vodný roztok hydrogenuhličitanu draselného (0,7 ml, 0,2 M). Reakční směs byla zahřívána na 70 °C. Po 5 hodinách byla nalita do vody a extrahována ethyl-acetátem (70 ml). Organická fáze byla promyta vodou, sušena a rozpouštědla byla odpařena. Krystalizaci odparku byla získána titulní sloučenina (40 mg, 45 %): t.t. 143 až

145 °C, [a]_D +40,3 (c 0,303, CHCI,) IR spektrum (CHClj): 3610, 3527, 1047 (C-O, COOH);

1726 (C=O, acetát); 1703 (C=O, keton); 1252 (C-O), 'H NMR (200 MHz): 0,61 (s, 3 H, 3 x

H-18); 0,93 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,06 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,55 (t, 1 H, J = 8,8,

H-17); 3,52 (tn, 1 H, W = 32,7, H-3); 4,89 (q, 1 H, J = 2,4, H-7). FAB MS: 377 (5 %, M + 1),

317 (12 %, Μ + 1 - AcOH), 299 (40 %, M+l - AcOH, H₂O), 283 (32 %, M - AcOH, H₂O,

CHj), 255 (17 %, M - AcOH, H₂O, CHjCO), 159 (30 %), 145 (34 %), 131 (33 %), 119 (37 %). C23H36O4: vypočteno: C, 73,37; H, 9,64, nalezeno. C, 73,49; H, 9,93.

Příklad 12 to 20-oxo-5fJ-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát

Ke směsi titulní sloučeniny vyrobené podle příkladu 11 (100 mg, 0,27 mmol) a anhydridu kyseliny jantarové (200 mg, 4 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 30 minut, byl přidán suchý pyridin (20 ml) a 4-d imethy lam i nopyridin (20 mg, 0,17 mmol). Reakční směs byla zahřívána 4 hodiny při 140 °C. Po nalití do vody byla organická část extrahována ethyl-acetátem (50 ml), vodná fáze byla znovu extrahována ethyl-acetátem (50 ml), spojené organické fáze promyty vodou a sušeny. Preparativní chromatografií na tenké vrstvě ve směsi petrolether/aceton (9:1) byl získán titulní hemisukcinát (44 mg, 35 %): t.t. 131 až 134 °C, [a]_D +50,3 (c 0,218, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 3517, 2676 (COOH); 1756 (CO, COOH); 1726 (C=O, acetát); 1720 (C=O, hemisukcinát); 1703 (C=O, keton); 1252 (C-O, acetát); 1173 (C-O, hemisukcinát). ^lH NMR (200 MHz): 0,61 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,94 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,06 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54-2,69 (m, 5 H, H-17 a OOCH₂CH₂OO); 4,62 (m, 1 H, W 31,8, H-3); 4,89 (q, 1 H, J = 2,7, H-7). FAB MS: 499 (69 %, M + Na), 417 (18 %, Μ + 1 -AcOH), 299 (28 %, M - AcOH, C₄H₅O₄). C₂₇H₄₀O₇: vypočteno: C, 68,04; H, 8,46, nalezeno: C,

69,20; H, 8,59.

Příklad 13

20-Oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát pyridiniová sůl

Směs sloučeniny vyrobené podle příkladu 11 (110 mg, 0,3 mmol) a komplexu pyridin-oxid sírový (220 mg, 1,4 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 1 hodiny, byla rozpuštěna v suchém chloroformu (4 ml) a pod argonem míchána 4 hodiny za laboratorní teploty. Poté stála reakční směs při teplotě -20 °C přes noc, nerozpuštěný komplex pyridin-oxid sírový zfiltrován a filtrát odpařen. Odparek byl rozpuštěn v absolutním methanolu (1 ml), ke kterému byl přidán absolutní ether (7 ml). Směs byla zahuštěna téměř na polovinu a nechána stát přes noc při -20 °C. Vzniklé krystaly titulního sulfátu (155 mg, 99 %) byly odsáty a sušeny v exikátoru (nad hydroxidem draselným): t.t. 155 až 158 °C, [<x]_D + 45,7 (c 0,285, CHC1₃). IR spektrum (CHClj): 3140 (pyridin); 1725 (C-O, acetát); 1702 (C=O, keton); 1253 (C-O); 1363, 1171, 960 (O-SO₃). 'H NMR (200 MHz): 0,60 (s, 3 H, 3 x H-18); 0,92 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,04 (s, 3 H,

OAc); 2,56 (t, 1 H, J = 8,7, H-17); 4,34 (m, 1 H, W = 31, H-3); 4,88 (q, 1 H, J = 2,9, H-7); 7,97 (m, 2 H, H-3 a H-5, pyridinium); 8,48 (tt, 1 H, J_t = 7,8, J₂ = 1,5, pyridinium); 8,95 (m, 2 H, H-2 a H-6, pyridinium). El MS: 558 (0,5 %, M + Na), 455 (0,5 %, M - pyridinium), 256 (0,5 %, M - pyridinium, OSO₃, CH₃CO, AcOH), 230 (3 %), 80 (100 %). Pro C₂8H4iNO₇S vypočteno: C, 62,78; H, 7,71; N, 2,61; S, 5,99, nalezeno: C, 59,99; H, 7,71; N, 2,61; S, 6,25.

Příklad 14

20-Oxo-S(3-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát sodná sůl

K methanolickému roztoku (2 ml) titulní pyridiniové soli vyrobené podle příkladu 13 (90 mg,

0,17 mmol) byl v průběhu 1 hodiny postupně prikapáván roztok hydroxidu sodného v methanolu (0,45 ml, 0,373 M) do hodnoty pH 8. Po zahuštění roztoku na polovinu byl přidán absolutní ether (6 ml) a směs stála přes noc při -20 °C. Vzniklé krystaly titulní sodné soli (54 mg, 67 %) byly odsáty a sušeny v exikátoru (nad hydroxidem draselným): tt 187 až 191 °C, [aJ_D + 35,0 t 1 (c 0,248, CHC1₃). IR spektrum (CHCI,): 1726 (C=O, acetát); 1703 (CO, keton); 1251, 1236 (CO); 1262, 1236, 1198 (O-SO3). 'H NMR (200 MHz): 0,61 (s, 3 H, 3 x H-l8); 0,93 (s, 3 H, x H-19); 2,07 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, 1 H, J = 8,8, H-l 7); 4,23 (tn, 1 H,

W = 32, H-3); 4,84 (m, 1 H, H-7). FAB MS: 449 (3 %), 427 (2,5 %), 405 (2,5 %), 381 (5 %),

307 (10 %), 285 (10 %), 263 (10 %), 143 (100 %). Pro C_nH_)sNaO₇S: vypočteno: C, 57,72; H,

7,37; S, 6,70, nalezeno: C, 50,66; H, 6,85; S, 4,57.

Příklad 15

3a-(řerí-Butyldimethylsilyloxy)-5p-pregnan-7a-yl acetát io

Směs alkoholu vyrobeného podle příkladu 11 (70 mg, 0,18 mmol) a imidazolu (76 mg, 1,1 mmol) rozpuštěná v Ν,Ν-dimethyIformamidu (14 ml) byla ochlazena na 0 °C. Poté k ní byl přidán /er/-butyldimethylsilyl-chlorid (84 mg, 0,56 mmol) a reakční směs byla míchána za laboratorní teploty. Po 2 hodinách byla reakční směs extrahována ethyl-acetátem (50 ml), organická fáze promyta roztokem kyseliny citrónové, hydrogenuhličitanu draselného, vodou a sušena. Po odpaření a krystalizací z ethyl-acetátu bylo získáno 50 mg (55 %) titulní sloučeniny: t.t. 110 až 112 °C, [a]_D +30,5 (c 0,333, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 2955, 2906 ((CH₃)₃C); 1725 (C=O, acetát); 1702 (C=O, keton); 1254, 1021 (C^O, acetát); 1090, 1076 (C-OSi); 853, 837 ((CH₃)₂Si). Ή NMR (200 MHz): 0,05 (s, 6 H, (CH₃)₂Si); 0,6 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,88 (s, 9 H, (CH₃)₃C); 0,91 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,04 (s, 3 H, OAc); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,54 (t, 1 H, J = 8,7, H-l 7); 3,45 (m, 1 H, W = 32, H-3); 3,87 (q, 1 H, J = 2,4, H-7). FAB MS: 433 (2 %, M - 57, (CH₃)₃C), 373 (18 %, M - (CH₃)₃C, AcOH), 299 (100 %, M - (CH₃)₃(CH₃)₂Si, AcOH), 255 (12 %, M -(CH₃)₃(CH₃)₂SiO, AcOH, CH₃CO). Pro C29H50O4SÍ vypočteno: C, 70,97; H, 10,27, nalezeno: C, 70,03; H, 10,44.

Příklad 16

3a-(fórZ-Butyldimethylsilyloxy)-7a-hydroxy-5|3-pregnan-20-on

Roztok acetátu vyrobeného podle předchozího příkladu 15 (40 mg, 0,08 mmol) v benzenu (5 ml), ke kterému byl přidán hydroxid draselný v ethanolu (0,89 M, 4 ml) byl zahříván po dobu 3 hodin při teplotě 90 °C. Po zreagování veškeré výchozí látky byla reakční směs nalita na vodu a extrahována etherem (40 ml). Organická fáze byla promyta vodou, sušena a rozpouštědla odpařena. Deskovou chromatografií na tenké vrstvě ve směsi rozpouštědel petrolether/aceton (8:2) byla získána titulní sloučenina (20 mg, 55 %): t.t. 131 až 136 °C, [a]_D +47,6 (c 0,29, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 3621 (O-H); 1005 (OO); 1699 (OO); 1472, 1463, 1385 ((CH₃)₃C); 1361 (Ac, (CHjJjC); 1254 ((CH₃)₂Si); 1098,1082 (C-Osi). 'H NMR (200 MHz): 0,05 (s, 6 H, (CH₃)₂Si); 0,60 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,88 (s, 12 H, 3 x H-19 a (CH₃)₃C); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,53 (t, 1 H, J = 9, H-l7); 3,41 (m, I H, W = 32,7, H-3); 3,86 (m, 1 H, H-7). FAB MS: 449 (11 %, M + 1), 317 (10 %, M - (CHjMCHjhSiO), 299 (26 %, M+l - (CHjMCHjfcSiO, H₂O),

283 (13 %, M+l - (CHjMCHjfcSiO, H₂O, O), 255 (14 %, M - (CHj^CHjhSiO, H₂O,

CH3CO). Pro C₂,H₄₈O,Si vypočteno: C, 72,26; H, 10,70, nalezeno: C, 72,20; H, 10,84.

Příklad 17

3a-(íert-Butyldimethylsilyloxy)-20-oxo-5f)-pregnan-7a-yl nikotinát

K roztoku sloučeniny vyrobené podle předchozího příkladu 16 (240 mg, 0,53 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (10 mg, 0,09 mmol) v pyridinu (10 ml), který byl předem vychlazen na 0 °C, byl přidáván hydrochlorid nikotinoylchloridu (720 mg, 4,0 mmol) po malých dávkách. Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty 10 hodin a poté nalita do vody. Organická část byla extrahována ethyl-acetátem (100 ml). Organická fáze byla extrahována znovu ethylacetátem (100 ml) a spojené organické fáze sušeny a odpařeny, Preparativní chromatografií na tenké vrstvě směsí petrolether/aceton (9:1) byl získán titulní hydroxyderivát (208 mg, 70 %): t.t. 57 až 59 °C, [a]_D +54,9 (c 0,387, CHC1₃). IR spektrum (CHC1₃): 2907 (CH₃, (CH₃)₃(CH₃)₂SiO); 1714 (OO, nikotinát); 1703 (C=O, keton); 1286, 1108 (C-O, nikotinát); 1092 (C-OSi). *H NMR(400 MHz):

0,05 (s, 6 H, (CH₃)₂Si); 0,63 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,77 (s, 9 H, (CH,)₃C); 0,96 (s, 3 H, 3 x H-l 9);

2,11 (s, 3 H, 3 χ H—21); 2,52 (t, 1 H, J - 9,1, H-17); 3,43 (tn, 1 H, W = 32, H-3); 5,21 (q, 1 H,

J = 2,8, H-7); 7,44 (ddd, 1 H, J, = 7,8, J₂ = 7,8, h = 0,7, H-5, nikotinát); 8,30 (dt, 1 H, J, = 8,3,

J₂ = 2, H-4, nikotinát); 8,78 (dd, 1 H, Ji = 4,8, J₂ = 1,7, H-6, nikotinát); 9,27 (dd, 1 H, Ji = 2, J₂ = 0,7, H-2, nikotinát). FAB MS; 579 (6 %, M + Na), 554 (22 %, M + l), 496 (7 %, M (CHj)jC), 299 (4 %, M - (CH,),(CH₃)₂SiO, OCOC^N), 255 (79 %, M - (OBCÍCH,),SiO, -OCOC_ÓH₄N, CH3CO). Pro C33H51O4S1 vypočteno: C, 71,56; H, 9,28; N, 2,53, nalezeno: C, 70,77; H, 9,32; N,2,23.

io

Příklad 18

3a-Hydroxy-20-oxo-5a-pregnan-7a-yl nikotinát

K vychlazenému (na 0 °C) roztoku sloučeniny vyrobené v předchozím příkladu (100 mg,

0,18 mmol) v suchém THF (10 ml) byl přidán roztok tetrabutylammonium-fluoridu (1 Mv THF,

0,3 ml, 1,6 mmol). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty 2 dny a poté k ní byl přidán další roztok tetrabutylammonium-fluoridu (1 M v THF, 0,1 ml, 0,5 mmol). Po 3 dnech byla reakční směs extrahována ethyl-acetátem (100 ml), organická fáze promyta roztokem kyseliny citrónové, hydrogenuhličitanu draselného, vodou a sušena. Preparativní chromatografií na tenké vrstvě směsí petrolether/aceton (9:1) byla získána titulní sloučenina (58 mg, 74 %): t.t. 70 až 73 °C (aceton-heptan), [a]_D +29,2 (c 0,279, CHCb). IR spektrum (CHCb): 3613; 3451 (O-H); 1715 (C=O, nikotinát); 1705 (CO, keton); 1287 (CO, nikotinát); 1034, 1026 (COH); 1592, 1421 (nikotinát). ^lHNMR (400 MHz): 0,64 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,98 (s, 3 H, 3 x H-19); 2,12 (s, 3 H, 3 x H-2 Ϊ); 2,54 (t, 1 H, J = 9,2, H-17); 3,49 (m, 1 H, W = 31, H-3); 5,20 (q, 1 H, J = 2,7,

H-7); 7,45 (ddd, 1 H, J, = 7,8, J₂ = 4,8, J₃ = 0,7, H-5, nikotinát); 8,31 (dt, 1 H, J, = 7,8, J₂ = 1,7,

H-4, nikotinát); 8,80 (dd, 1 H, J, = 4,8, J₂ = 1,7, H-6, nikotinát); 9,26 (dd, 1 H, J, — 2, J₂ = 0,7, H-2, nikotinát). FAB MS: 440 (12 %, M + 1), 145 (7 %), 124 (100 %), 105 (35 %). Pro C₂₇H₃₇NO4 vypočteno: C, 73,77; H, 8,48; N, 3,19, nalezeno: C, 73,71; H, 8,95; N, 2,67.

Příklad 19

200x0-5fb-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-nikotinát pyridiníová sůl

Směs sloučeniny, která byla vyrobena podle předcházejícího příkladu 18 (45 mg, 0,1 mmol) a komplexu pyridin-oxid sírový (90 mg, 0,56 mmol), která byla sušena na vakuu (25 °C, 100 Pa) po dobu 1 hodiny, byla rozpuštěna v suchém chloroformu (5 ml) a pod argonem míchána 4 hodiny za laboratorní teploty. Poté stála reakční směs pří teplotě -20 °C přes noc, nerozpuštěný komplex pyridin-oxid sírový zfiltrován a filtrát odpařen. Odparek byl rozpuštěn v absolutním methanolu (1 ml), ke kterému byl přidán absolutní ether (4 ml). Směs byla zahuštěna na téměř polovinu a nechána stát přes noc při -20 °C. Odpařením rozpouštědel byla získána titulní slouče40 nina (40 mg, 74 %) jako pěna: [a]_D +42,0 (c 0,321, CHCb). IR spektrum (CHCb): 3139, 2652 (pyridin); 1714 (C=O, nikotinát); 1703 (C=O, keton); 1287 (C-O, nikotinát); 1175, 978, 958 (O-SO₃). ’H NMR (400 MHz): 0,63 (s, 3 H, 3 x H-l 8); 0,98 (s, 3 H, 3 x H-l9); 2,11 (s, 3 H, 3 x H-21); 2,56 (t, 1 H, J = 8,7, H-17); 4,32 (m, 1 H, W = 32, H-3); 5,26 (m, 1 H, H-7); 7,74 (dd, 1 Η, ί, = 7,6, J₂ = 5,3, H-5, nikotinát); 7,82 (m, 2 H, H-3 a H-5, pyridinium); 8,33 (t, 2 H,

J - 7,8, H-4, pyridinium); 8,60 (d, 1 H, J = 7,6, H-4, nikotinát); 8,88 (m, 2 H, H-2 a H-6, pyridinium); 8,93 (d, 1 H, J = 5, H-6, nikotinát); 9,33 (m, 1 H, H-2, nikotinát). FAB MS: 564 (10%), 542 (20 %), 519 (12 %, Μ + 1 - pyridinium), 444 (18 %), 422 (10 %, Μ + 1 OSO3C₅HtíN). Pro C3₂H₄₂N₂O₇S vypočteno: C, 64,19; H, 7,07; N, 4,68; S, 5,36, nalezeno: C, 58,39; H, 6,88; N, 3,70; S, 6,99.

Příklad 20

Test biologické aktivity

5

Buněčné kultury

Primárně dísociované hippokampální kultury byly připraveny z 1-2 denních krys. Zvířata byla dekapitována a hippokampus isolován. Buněčná suspenze byla připravena rozvolněním trypsinem a mechanickou disociací. Buňky byly nasazeny na 31 mm nebo 12 mm polylysinem potaže5 ná krycí sklíčka v hustotě 500 000 buněk/cm². Neuronální kultuiy byly udržovány v médiu Neurobasal^rw-A (Invitrogen, Carisbad, USA) doplněného glutaminem (0,5 mM) a B-27 SerumFree Supplement (Invitrogen) při 37 °C a 5 % CO2.

Elektrofyziologie io Pro elektrofyziologické pokusy byly použity 5 až 10 dní staré kultury. Proudy vzniklé při snímání z celé buňky byly měřeny pomocí patch-clamp zesilovače (Axopatch ID; Axon Instruments, Inc. Poster City, USA) po kompenzaci kapacity a sériového odporu (<10 ΜΏ) na 80 až 90 %). Agonistou indukované odpovědi byly filtrovány na 1 kHz (filtr 8-pole Bessel; Frequency Devices, Haverhill, USA), digitalizovány při 5 kHz a analyzovány softwarovým programem pClamp verze 9 (Axon Instruments). Borosilikátové mikropipety byly naplněny intracelulámím roztokem, který obsahoval 125 mM D-glukonové kyseliny, 15 mM chloridu česného, 5 mM EGTA, 10 mM HEPES, 3 mM chloridu horečnatého, 0,5 mM chloridu vápenatého a 2 mM horečnaté soli ATP (pH upraveno na 7,2 roztokem hydroxidu česného). Extracelulámí roztok (ECS) obsahoval 160 mM chloridu sodného, 2,5 mM chloridu draselného, 10 mM HEPES,

10 mM glukózy, 0,2 mM EDTA a 0,7 mM chloridu vápenatého (pH upraveno na 7,3 roztokem hydroxidusodného). Glycin (10 μΜ) a TTX (0,5 μΜ) byly přítomny jak v kontrolním, tak v testovacím roztoku. Roztoky se steroidem byly připraveny ze čerstvě připraveného zásobního roztoku (20 mM steroidů rozpuštěného v dimethylsulfoxidu (DMSO). Ve všech extracelulámích roztocích byla použita stejná koncentrace DMSO. Kontrolní a testovací roztoky byly aplikovány mikroprocesorem kontrolovaným systémem promývání, s rychlostí výměny roztoku v okolí buňky ~10 ms.

Biologická aktivita

Odezvy (proudy) vyvolané 100 μΜ NMDA byly měřeny na kultivovaných hippokampálních neuronech při udržovaném membránovém potenciálu -60 mV. V souladu a předchozími výsledky pregnanolonsulfát snížil amplitudu NMDA-indukované odpovědi (obr. 1). Při použití 100 μΜ pregnanolonsulfátu byl průměrný inhibiční efekt 71,3 ± 5,0 % (n = 5). Syntetická analoga pregnano Ion sulfátu měla také inhibiční efekt na NMDA-indukované odpovědi s průměrnou mírou inhibice 17 % (sloučenina z příkladu 5) až 71 % (SfJ-pregnenolonsulfát) pri stejné koncen35 traci steroidů (100 μΜ). Relativní míra steroidem indukované inhibice byla použita pro výpočet IC$q. IC50 byly vypočítány rovnicí RI = 1 - (1/1 + ([steroid]/IC5o)^h), kde RI je relativní míra steroidem indukované inhibice a h je parametr Hillova koeficientu (1,2). 3D modely steroidů a hodnoty jejich relativní inhibice a vypočtené hodnoty IC₅o jsou uvedeny v následující tabulce.

Tabulka

Inhibice NMDA-indukované odpovědi v kulturách hippokampalních neuronů pregnenolonsulfátem a jeho syntetickými analogy.

Sloučenina z příkladu č.	Inhibice (X)	SD	IC₅₀	IC50SD
12	21,4	2,7	299,9	40,9
13	34,1	10,2	185,8	61,1
19	46,9	9,7	116,0	36,5
3	17,4	4,3	383,5	93,5
4	35,2	2,7	167,2	16,3
10	37,8	4,7	153,8^	25,0

Odezvy indukované v kulturách hippokampalních neuronů na aplikaci 100μΜ NMDA a 45 současné koaplikaci 100 μΜ pregnenolonsulfátu.

Claims

5 1. Pregnanové anionické sloučeniny obecného vzorce I v němž

R? znamená esterovou skupinu obecného vzorce R⁴O-, která je schopna tvořit ion, kde R⁴ znamená skupinu HSO₃- pyridin-SO₃, HOOC-(CH2)2-CO-, ío R² znamená atom vodíku s konfigurací alfa nebo beta a

R³ znamená esterovou skupinu obecného vzorce R^SCOO-, kde R⁵ znamená CH₃- nebo C₅H₄Na jejich farmaceuticky použitelné soli.

15 2. Pregnanové anionické sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kterými jsou:

20-oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát,

20-oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát pyridiniová sůl, 20-oxo-5a-pregnan-3ot,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát sodná sůl,

20-oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-nikotínát pyridiniová sůl,

20 20-oxo-5P“pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát,

20-oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát pyridiniová sůl, 20-oxo-5ft-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-acetát sodná sůl a 20-oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3-sulfát 7-nikotinát pyridiniová sůl

25 3. Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 až 2, v němž R¹ má význam uvedený v nároku 1, R² znamená atom vodíku s konfigurací alfa a R³ znamená CH₃COO-, vyznačující se tím, že se sloučenina vzorce II převede na 3,7-dichráněný derivát, který se parciální hydrolýzou ve vhodném rozpouštědle, jako 30 je alkohol, vodný alkohol, nebo ve směsi rozpouštědel, s výhodou ve směsi methanolu s benzenem, převede na monoester vzorce IV (IV),

1 Γ z něhož se působením anhydridu kyseliny jantarové v pyridinu za přítomnosti DMAP připraví příslušný hemisukcinát vzorce I, v němž R¹ znamená hemisukcinátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená acetoxyskupinu,

5 nebo se působením komplexu pyridinu-oxid sírový v chloroformu připraví pyridiniumsulfát vzorce I, v němž R¹ znamená pyridiniumsulfátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená acetoxyskupinu, načež se může posledně uvedená sloučenina vzorce I, v němž R¹ znamená pyridiniumsulfátovou skupinu, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³znamená acetoxyskupinu, reakcí s hydroxidem alkalického kovu v alkoholu, s výhodou v methaio nolu, převést na sloučeninu obecného vzorce I, v němž R¹ znamená sodnou sůl sulfátu,

R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená acetoxyskupinu.

4. Způsob výroby podle nároku 3, vyznačující se tím, že 3,7-dichráněný derivát

5. Způsob výroby podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že se parciální hydrolýza provádí působením hydroxidu alkalického kovu, jako je hydroxid draselný, sodný nebo lithný, nebo kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, chloristá.
2o 6. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 3až5, vyznačující se tím, že se jako vhodné rozpouštědlo používá alkohol, vodný alkohol nebo směs rozpouštědel, s výhodou ve směsí methanolu s benzenem.

7. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 3až6, vyznačující se tím, že se

25 jako směs rozpouštědel používá směs methanolu s benzenem.

8. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 3až7, vyznačující se tím, že se reakce s hydroxidem alkalického kovu provádí hydroxidem sodným v alkoholu.

30 9. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 3 až 8, vyznačující se tím, že se jako alkohol používá methanol.

10. Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 a 2, v němž R¹ znamená pyridiniumsulfát, R² znamená atom vodíku v alfa poloze a R³ znamená nikotinoy loxy skupinu,

35 vyznačující se t í m, že se sloučenina vzorce IV řerc.butyldimethylsilylderivát vzorce V vzorce VI oxyderivátu vzorce Vil v němž R znamená TBDMS, a ta působením p-toluensulfonové kyseliny v methanolu poskytne sloučeninu vzorce VII, v němž R znamená atom vodíku, která se nechá zreagovat s komplexem

10 pyridinu s oxidem sírovým ve vhodném nereagujícím rozpouštědle.

11. Způsob výroby podle nároku 10, vyznačující se tím, že se jako vhodné rozpouštědlo používá DMF.

15 12. Způsob výroby podle nároku 10 nebo 11, vyznačující se tím, že se jako zmýdelnění používá zmýdelnění hydroxidem draselným ve směsi ethanolu a benzenu.

13. Způsob výroby podle nároku 10, vyznačující se tím, že se jako vhodné nereaguj ící rozpouštědlo používá chloroform.

14. Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 a 2, v nichž R¹ má význam uvedený v nároku 1, R² znamená atom vodíku s konfigurací beta a R³ znamená CH₃COO, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce Vlil

HO' '⁷0H (vin), která se od sloučeniny vzorce II liší pouze konfigurací atomu vodíku v poloze 5, se nechá zreagovat stejným způsobem jako je popsáno pro sloučeninu 11 v nárocích 3 až 13.

15. Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 a2, vyznačující se
5 t í m . že se ze sloučeniny vzorce II, resp. VIII, podle nároků 3 až 13, resp. 14, vyrobí následující sloučeniny obecného vzorce I

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát,

20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát pyridiniová sůl, 20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát sodná sůl, io 20-Oxo-5a-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-nikotinát pyridiniová sůl, 20-Oxo-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3-hemisukcinát 7-acetát,

20-0x0-5P-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát pyridiniová sůl,

20-Oxo-5 p-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-acetát sodná sůl a 20-0x0-5p-pregnan-3a,7a-diyl 3—sulfát 7-nikotinát pyridiniová sůl.

16. Použití sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 a 2 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení neurologických a psychiatrických onemocnění a stavů spojených s nadměrnou aktivací NMDA receptorů, jakými jsou neuroprotektiva proti excitotoxickému poškození centrálního nervového systému, stavy spojené s nadměrnou aktivací NMDA podtypu glutamátových

20 receptorů nebo tam, kde se tento typ receptorů podílí na vzniku nebo průběhu některých duševních a neurologických onemocnění, zvláště jde o traumatické a hypoxické poškození nervové tkáně pri chorobách centrální nervové soustavy, jako jsou např. Alzheimerova, Huntingtonova a Parkinsonova choroba, dále pri kognitivních poruchách vznikajících ve stáří, dalšími indikacemi jsou tardivní dyskineze, amyotrofická laterální skleróza, olivopontocerebelámí degenerace,

25 neurologické obtíže spojené s AIDS infekcí, alergická encefalomyelitida, a pro medikaci epilepsie, úzkosti, deprese, schizofrenie, chronické bolesti i lékové závislosti.

17. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje efektivní množství sloučenin obecného vzorce I podle nároků 1 a 2 a popřípadě další adjuvans nebo léčiva.

18. Použití farmaceutického prostředku podle nároku 17 pro výrobu léčiva pro léčení neurologických a psychiatrických onemocnění a stavů spojených s nadměrnou aktivací NMDA receptorů jakými jsou neuroprotektiva proti excitotoxickému poškození centrálního nervového systému, stavy spojené s nadměrnou aktivací NMDA podtypu glutamátových receptorů nebo tam, kde se

35 tento typ receptorů podílí na vzniku nebo průběhu některých duševních a neurologických onemocnění, zvláště jde o traumatické a hypoxické poškození nervové tkáně při chorobách centrální nervové soustavy, jako jsou např. Alzheimerova, Huntingtonova a Parkinsonova choroba, dále při kognitivních poruchách vznikajících ve stáří, dalšími indikacemi jsou tardivní dyskineze, amyotrofická laterální skleróza, olivopontocerebelámí degenerace, neurologické obtíže

40 spojené s AIDS infekcí, alergická encefalomyelitida, a pro medikaci epilepsie, úzkosti, deprese, schizofrenie, chronické bolesti i lékové závislosti.