CZ300305B6 - Farmaceutická kompozice obsahující derivát taxanu se zlepšenou terapeutickou úcinností - Google Patents

Abstract

Farmaceutická kombinace, která obsahuje smes (a) alespon jednoho derivátu taxanu a (b) alespon jedné .omega.-3 polynenasycené mastné kyseliny, prednostne .alfa.-linolenové kyseliny, nebo jejího derivátu, pricemž molární pomer (b) k (a) není vyšší než 2. Kapalná farmaceutická kompozice, která obsahuje výše uvedenou smes a navíc (c) alespon jeden farmaceuticky vhodný nosic. Zpusob prípravy této kompozice, pri nemž se smísí složky (a), (b) a (c) a poprípade se pro prípravu infuzního roztoku dalším zredením upraví koncentrace kompozice. Výše popsaná farmaceutická kombinace nebo kompozice pro použití k lécení maligních nádorových chorob senzitivních na deriváty taxanu, jako je rakovina prsu, rakovina vajecníku, nemalobunecná rakovina plic, rakovina prostaty a jiný typ rakoviny s tuhými nádory. Kit, který obsahuje jednotlivé složky kompozice v oddelených kontejnerech.

Description

Vynález se týká farmaceutických kompozic, které obsahuji deriváty taxanu. s podstatně zlepšenou terapeutickou účinností. Dále se vynález týká použití těchto kompozic k léčení rakoviny.

Dosavadní stav techniky

Kl farmaceutické kompozice obsahující deriváty taxanu, například paklitaxel. doeetaxel. ortataxel nebo protaxel, jsou široce užívány k léčení maligních nádorových chorob, které se obecně označují jako rakovina. Deriváty taxanu vykazují širokou antineoplastickou účinnost díky tomu, že působí prostřednictvím několika mechanismů. Často se jích používá k léčení metastázující rako15 viny prsu a rakoviny vaječníků. nemalobuněčné rakoviny plic, rakoviny prostaty a také jiných typů rakoviny se solidními nádory.

Deriváty taxami mají nízkou speeifieitu vůči neoplastickým tkáním, což je bohužel společné všem toxickým cytostatickým činidlům, která se v současnosti používají. Vysoká toxicita a nízká speciíicila vůči neoplastickým tkáním vedou k systemické toxicitě, která je vážným úskalím při takovém léčení rakoviny. Byla podniknuta řada pokusů zlepšit nízkou speeifieitu cytostatik k neoplastickým tkáním, například zapouzdřování činidel do mikročástic, jako líposomů, chemická konjugace činidel s nerůznějšími přírodními a syntetickými polymeru ím i nosiči za použití tzv. EPR efektu, a chemická konjugace činidel s nosiči o nízké molekulární hmotnosti a specifickou afinitou ke strukturám, které jsou spojeny s neoplastickými tkáněmi. Tyto pokusy nebyly příliš úspěšné, jelikož chemická dcrivatizace obvykle vede k podstatně vyšší ceně léčiva, a navíc snižuje aktivitu léčiva. Jeden z částečně úspěšných pokusů o zlepšení spécificity k neoplastickým tkáním je založen na esterifikaci paklitaxelu nebo docetaxelu cis—4,7,10,13.16.19-dokosahexaenovou kyselinou (DHA). Tento způsob je popsán v EP914 1 16 (PC 17DS97/0886), EP 912 535

5(i (CT/LJS97/08792 a PCT/USOO/96160. Při této esterifikaci se konkrétně dává přednost poloze 2' postranního řetězce paklitaxelu a docetaxelu. lyto kovalentní nové chemické entity (NCE) vykazují zlepšenou speeifieitu vůči neoplastickým tkáním a nižší systemickou toxicitu, ale jsou bohužel výrazně méně účinné, což vede k nutnosti zvýšit terapeutickou dávku navrženou na klinická hodnocení alespoň pětkrát. Následkem toho jsou celkové náklady na léčbu za použití těchto NCE alespoň desetkrát vyšší než náklady na léčbu za použití obvyklých taxanovýeh kompozic, například Taxolu nebo Taxotere. Z výše uvedeného přehledu vyplývá, žc jednoduché a efektivní zlepšení nízké specifieity derivátů taxanu k neoplastickým tkáním a zlepšení terapeutické účinnosti derivátů taxanu dosud nebylo vyřešeno.

4o V dokumentu Menendez J. A. et al.: Oneology Reports, sv. I 1, č. 6. červen 2004 je popsán in vitro synergieký účinek jednoho protirakovinného činidla, kyseliny gamma-linolenové, a jiného protirakovinného činidla, docetaxelu, na zvolené nádorové linie.

I vto problémy řeší tento vynález.

I‘odstata vynálezu

Zjistilo se, že polynenasycené mastné kyseliny, zejména ω 3 polynenasycené mastné kyseliny, jsou významnými složkami buněčné výživy, zajišťující zachování pružnosti a permeability buněčné membrány. Kromě toho se také zjistilo, že zvýšený obsah polynenasycených mastných kyselin v krvi vede k přibližně 4- až 8násobnérnu zvýšení nádorového růstu a že nádory akumulují 30 až 85 % těchto mastných kyselin při jediném průchodu krve. Tento jev je možno vysvětlit tím. že nádorové buňky jsou melabolicky mnohem aktivnější než normální tkáň. O deri55 vátech taxanu je známo, že mají dobrou afinitu ke sloučeninám obsahujícím nenasycené vazby uhlík-uhlík. Konečně je také známo, že chemická derivatizace paklitaxelu nebo docetaxelu obvykle vede ke snížení nebo úplné ztrátě jejich aktivity.

Podle prvního aspektu je předmětem vynálezu farmaceutická kombinace, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje směs (a) alespoň jednoho derivátu taxanu a (b) alespoň jedné ω-3 polynenasycené mastné kyseliny nebo jejího derivátu, přičemž molární poměr (b) k (a) není vyšší než 2.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu kapalná farmaceutická kompozice, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje směs (a) účinného množství alespoň jednoho derivátu taxanu a io (b) účinného množství alespoň jedné ω-3 polynenasycené mastné kyseliny nebo jejího derivátu, přičemž molární poměr (b) k (a) není vyšší než 2, a (c) alespoň jednoho farmaceuticky vhodného nosiče.

V přednostním provedení je derivát taxanu ve složce (a) zvolen z paklitaxelu, docetaxelu. ortataxelu nebo protaxelu.

V dalším přednostním provedení je polynenasycenou kyselinou ve složce (b) a-linolenová kyselina (ALA),

Řešení podle vynálezu se liší od řešení popsaného ve výše citovaném dokumentu Menendez J.A.

ct al. Narozdíl od předloženého vynálezu se podle tohoto dokumentu používá gamma-linolcnové kyseliny (GLA). která není ω-3 polynenasycenou mastnou kyselinou. Přestože názvy obou těchto kyselin, tj. ALA a GLA, jsou podobné, jejich účinky a použití jsou zcela odlišné. Podle citovaného dokumentu má GI.A svůj vlastní protirakovinný účinek, a po přidání k nádorové buněčné linii poleneiuje protirakovinný účinek docetaxelu. Naproti tomu ALA a podobné ω-3 polynenasycené mastné kyseliny, použité podle vynálezu, jsou nutričně užitečné složky, které zvyšují koncentraci taxanového derivátu v nádorové tkáni a tím zvyšují jeho účinek. Navíc je možno si povšimnout, že Menendez J.A. et al. přímo přidávají GLA k buněčné linii in vivo a uspořádání popsaných experimentu se tedy evidentně nespoléhá na směrovací účinek GLA na doxctaxel. Předložený vynález se naopak opírá o zjištění, žc ALA a podobné ω-3 póly nenasycenu né mastné kyseliny přednostně orientují taxanový derivát do nádoru. Přestože se tedy z hlediska chemické struktury ALA a GLA podobají, nelze tyto sloučeniny v žádném ohledu považovat za ekvivalentní. To však není nijak překvapující, poněvadž v oblasti farmakoterapie je obecně známo, žc byť i jen malé strukturní odlišnosti použitých látek mohou vyvolávat hluboké změny v mechanismu jejich účinku, aktivitě apod.

Aniž by přihlašovatel měl v úmyslu vázat se platností jakékoliv navržené teorie, má za to. že ω-3 polynenasycené mastné kyseliny a/nebo jejich deriváty mohou s deriváty taxanu tvořit dostatečně silné fyzikální konjugáty, aniž by došlo ke změně jejich chemické povahy, lakové fyzikální konjugáty. díky faktu, že obsahují přednostní složky výživy neoplastických buněk, podstatně zvyšují

4(i speficifitu laxanovýeh kompozic vůči neoplastickým tkáním, a lim dochází k podstatnému zvýšení terapeutické účinnosti.

LJčinné množství směrovací složky (b) je s výhodou I až 2 molární množství vzhledem k obsahu derivátu taxanu složky (a) kompozice, loto množství je dostatečné pro vytvoření fyzikálních konjugátů s derivátem taxanu. Množství směrovacích přídatných látek přesahující molární poměr (b): (a) = 2 může být nežádoucí, jelikož v tomto případě směrovací přídatné látky mohou soupeřit s taxanovýin konjugálem. poněvadž poskytují výživu neoplastickým buňkám bez jakéhokoliv žádoucího zdravotního přínosu.

5o Nejlepší ω-3 polynenasycenou mastnou kyselinou a/nebo jejími deriváty složky (b) z hlediska terapeutického zlepšení podle vynálezu jc cis,cis,cis-9,12,l5-oktadekatrienová kyselina (a-linolenová kyselina. ALA) a její esterové deriváty. Nižšího, ale stále ještě velkého terapeutického zlepšení lze dosáhnout za použili cis-eikosapentaenové kyseliny (LPA) a cis-dokosahexaenové kyseliny (DHA). Aniž by se přihlašovatel chtěl vázat platností jakékoliv navržené teorie, má za s

to, žc nejlepší účinek α-linolenové kyseliny a jejich esteru je založen na skutečnosti, že a-linolenová kyselina je obecným prekursorem všech biologicky důležitých ω-3 polynenasycených mastných kyselin, jako RPA a DHA, a je tudíž nejatraktivnější nutriční sloučeninou pro buňky neoplastických tkaní.

Jako farmaceuticky vhodné nosiče (složka (c)) lze uvést neionlová povrchově aktivní činidla nebo korozpouštědlovc systémy, které obsahuji neiontová povrchově aktivní činidla v kombinaci s vhodným polárním rozpouštědlem nebo směsí polárních rozpouštědel. Jako konkrétní příklady takových nosičů lze uvést polyoxyethylen sorbitan monooleát nebo směs polyoxycthylevanélio io ricinového oleje a ethanolu v poměru 1 : 1 (objemově). Farmaceuticky vhodným nosičem muže být též směs hydrofobníeh sloučenin, jako hlavní složka (až 80 %), například glyeeridů a esterů mastných kyselin, v kombinací s hydrofilní složkou, například ethanolem. Pokud se kompozice podle vynálezu obsahující takové nosiče zředí za účelem přípravy infuzního roztoku, vznikne mikroemulze typu „olej ve vodě, která obsahuje derivát taxanu. Samoemulgující prekoncentráty i? tohoto Ivpu nesmějí mít obsah ω-3 polynenasycených mastných kyselin a/nebo jejich derivátů (složky b) vyšší než 2 mol na mol taxanu (složky (a)), jelikož jinak může dojít k potlačení nebo porušení směrujícího účinku.

Podle dalšího aspektu tohoto vynálezu je výše uvedené směrovací přídatné látky možno přidávat 20 do kompozice obsahující alespoň jeden derivát taxanu těsně před jejím zředěním za účelem přípravy infuzního roztoku. Značného zlepšení terapeutické účinnosti kompozice podle vynálezu se dosahuje začleněním výše uvedených směrovacích přídatnýeh látek do kompozice obsahující deriváty taxami nezávisle na čase. kdy byla směrovací přídatná činidla ke kompozici přidána. Dokonce i krátký kontakt uvedených směrovacích přídatnýeh činidel s deriváty taxami v kompozici je dostatečný pro vytvoření jejich fyzikálních konjugátu s deriváty taxami a zvýšení terapeutické účinnosti kompozice. Předmětem vynálezu je tedy dále způsob přípravy' výše popsané farmaceutické kompozice, jehož podstata spočívá v tom, že se smísí složky (a), (b) a (c) a popřípadě se za účelem přípravy infuzního roztoku dalším zředěním upraví koncentrace kompozice.

2(i Přídavku výše uvedených směrovacích přídatnýeh látek ke kompozici obsahuj íeí deriváty taxanu těsně před tím. než se kompozice zředí za účelem přípravy infuzního roztoku, se dává přednost, jelikož tímto způsobem se lze vyhnout problému se stabilitou kompozice.

Předmětem vynálezu je dále kit k přípravě infuzního roztoku, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje (a) účinné množství alespoň jednoho derivátu taxanu, (b) účinné množství alespoň jedné ω 3 polynenasycené mastné kyseliny nebo jejího derivátu, přičemž molární poměr (b) k (a) není vyšší než 2 a (c) alespoň jeden farmaceuticky vhodný nosič, přičemž složky (a), (b) a (e) jsou rozděleny mezi alespoň dva kontejnery, z. nichž jeden obsahuje složku (a), která je popřípadě smísena s částí složky (e) za vzniku koncentrátu, a druhý obsahuje složku ( b). která je popřípadě smísena se složkou (c), zatímco případný další kontejner obsahuje pouze složku (e).

Předmětem vynálezu je dále farmaceutická kompozice popsaná výše pro použiti k léčení rakoviny, která je senzitivní na deriváty taxanu. jako je například rakovina plic. rakovina vaječníků. nemalobuněčná rakovina plic, rakovina prostaty a jiné typy rakoviny s tuhými nádory.

Další výhodou použití farmaceutické kompozice podle vynálezu je fakt, že k podstatnému zvýšení antineoplastické aktivity derivátů taxanu je třeba pouze malého množství směrovacích činidel. Například přidání ekvimolárního množství α-linolenové kyseliny, vztaženo na obsah paklitaxelu 6 mg/ml v kompozici, představuje množství 1,96 mg/ml, což odpovídá přibližně 0,2% změně

5(i celkového složení. V důsledku této malé. ale důležité změny ve složení tento vynález umožňuje využívat všech výhod a terapeutických zkušeností, které poskytuji obvykle používané kompozice obsahující paklicaxel nebo doeetaxel, avšak současně s podstatně zvýšenou antineoplastickou účinností. Farmaceutické kompozice podle vynálezu lze také používat při kombinované terapii rakoviny s jinými antineoplastickými sloučeninami.

C7. 300305 B6

Farmaceutické kompozice podle vynálezu jsou ve srovnání se známými taxanovými kompozicemi jednoduché. levnc, snadno se připravují za použití všeobecné známých způsobu a snadno se používají pro terapeutické účely.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad I

Příprava paklitaxelové kompozice s u-1 ino lenovou kyselinou i? Výchozí látky:

Fthanol: obsah vody < OJ %

Polvoxyetliylovaný ricinový olej: Cremophor EL P (BASF)

Paklitaxel: čistota 99,7 % (stanoveno vysoce účinnou kapalinovou chromatografíí) Směrovací sloučenina: kyselina α-linolenová, čistota >99 %

Postup;

600 mg paklilaxelu (0.703 mmol) se rozpustí v 50 ml ethanolu a ke vzniklému roztoku se přidá

52.7 g (50 ml) Cremophor EL-P. 300 mg α-linolenové kyseliny (1.077 mmol) se smísí s OJ ml ethanolu a vzniklý roztok se přidá k roztoku paklilaxelu. Výsledná paklitaxelová kompozice sc za použití přetlaku dusíku nechá projít sterilizačním filtrem s velikostí pórů 0.2 μιη. Sterilním roztokem se následně za podmínek laminárního loku plni sterilní skleněné lahvičky v množství 5 ml/lahvička. Každá lahvička obsahuje 30 mg paklitaxelu a 15 mg o linolenové kyseliny. Lahvičky se pod atmosférou dusíku uzavřou pryžovou zátkou Omnificx a zabezpečí hliníkovým uzávěrem. Lahviček s paklitaxelem se neprodleně použije pro zkoušky terapeutické účinnosti.

.ίο V případě potřeby se lahvičky až do upotřebení skladují při 5 °C, aby nedošlo k problémům se stabilitou.

Příklad 2

Příprava docetaxclového koncentrátu s vitaminem F a rozpouštědlem pro inluzni roztoky

Výchozí látky:

Ethanol: obsah vody <0.1 %

Polyoxyethylen sorbitan monooleát (Tween 80)

Docctaxel trihydrát: čistota 99,8 % (stanoveno vysoce účinnou kapalinovou ehromatografií) io Směrovací sloučenina: vitamin E. čistota >99 %

Postup:

a) 855 mg docetaxcl trihydrátu (1.008 mmol) se rozpustí v 8.5 ml ethanolu a k doectaxelovému roztoku se přidá 20,8 g (19,5 ml) Tween 80. 700 mg vitamínu E (1.625 mmol) se smísí s 0,5 ml ethanolu a vzniklý roztok se přidá k docetaxelovému roztoku. Z doeetaxelového roztoku se za sníženého tlaku při maximální teplotě 40 °C odstraní ethanol. Získaná teplá docetaxclová kompozice, která obsahuje 40 mg docetaxelu a 35 mg vitaminu E na mililitr, se za použití přetlaku vodíku nechá projít sterilizačním filtrem s velikostí pórů 0,2 pm. Sterilním roztokem se za podmínek laminárního toku plní sterilní skleněné lahvičky v množství 0.5 ml/lahvička. Každá lahvička .vi obsahuje 20 mg docetaxelu a 17,5 mg vitaminu E. Lahvičky se pod atmosférou dusíku uzavřou pryžovou zátkou Omnitlex a zabezpečí hliníkovým uzávěrem.

-4C7. 300305 B6

b) Připraví se 50 ml 13 % (hmotu.) roztoku ethanolu ve vodě pro injekce. Tento roztok se za použití přetlaku dusíku nechá projít sterilizačním filtrem s velikostí pórů 0.2 μιη. Sterilním ethanol ickym rozpouštědlem se poté za podmínek laminárního toku plní sterilní skleněné lahvičky v množství 1,5 ml/labviěka. Lahvičky se poté pod atmosférou dusíku uzavřou pryžovou zátkou

Omniflex a zabezpečí hliníkovým uzávěrem.

Infuzní roztok lze připravit tak. že se ethanolické rozpouštědlo obsažené v jedné lahvičce smísí s kompozici obsahující docetaxel a vitamin E obsaženou v jiné lahvičce, načež sc získaná směs dále zředí na požadovanou infusi. l akto se lze vyhnout tvorbě gelu.

Lahviček s doeetaxelem a lahviček k rozpouštědlem se neprodleně použije pro zkoušky terapeutické účinnosti. V případě potřeby se lahvičky až do upotřebení skladují při 5 °C. aby nedošlo k problémům se stabilitou.

Příklad 3

Příprava kitu obsahujícího lahvičku s docetaxelovým koncentrátem a lahvičku s rozpouštědlem pro infuzní roztoky obsahujícím a-linolenovou kyselinu to Výchozí látky:

Ethanol: obsah vody <0,1 %

Směrovací sloučenina: kyselina α-linolenová. čistota >99 %

TAXOTERE 20 mg koncentrát a rozpouštědlo pro infuzní roztoky

2? Poznámka: Lahvička TAXOTERE 20 mg koncentrát obsahuje 0.5 ml roztoku 20 mg doeetaxelu (bezvodého) v Tween 80. Lahvička s rozpouštědlem pro infuzní roztoky obsahuje 1,5 ml 13 % (hmotn.) roztoku ethanolu ve vodě pro injekce.

Postup:

5d 100 ing kyseliny a-linolenové (0.359 mmol) se rozpustí v 100 μΐ ethanolu. 10 μΐ vzniklého roztoku (0,0359 mmol kyseliny α-linolenové) se přes septum vstríkne do lahvičky s rozpouštědlem.

Lahviček s doeetaxelem a lahviček s ethanoliekým rozpouštědlem obsahujícím a-linolenovou kyselinu se neprodleně použije ke zkoušení terapeutické účinnosti. V případě potřeby se lahvičky is až do upotřebení skladují při 5 °C, aby nedošlo k problémům se stabilitou.

Příklad 4

Terapeutické zkoušky paklitaxelové kompozice připravené podle příkladu 1

Zkoušené injekce:

Placebo kompozice, generická kompozice TAXOL a paklitaxelová kompozice podle přikladu i.

Použitá koncentrace:

Tři díly kompozice se zředí 2 až 3 díly fyziologického roztoku chloridu sodného.

Zkušební zvíře:

Imbrední myši DBA2, 8 myší rta jednu zkoušenou kompozici

Způsob podání kompozice zvířeti:

Intravcnosně (ocas), bolus maximálně 12.5 mg/kg, doba aplikace asi 5 minut

- 5 CZ. 300305 B6

Zkušební nádorová linie:

Myší leukemíe L 1210

Způsob podání nádorové linie zvířeti:

Subkutánně. 2 x 10 buněk

Zahájení zkoušení kompozice:

Až nádor dosáhne objemu přibližně 0.2 až 0,3 cm'

Metodologie zkoušení:

hodnocení objemu nádoru v čase (křivka růstu nádoru), až 30 dní

- hodnocení inhibice růstu nádoru (TGI) v % ve srovnání s placebem. až. asi 21 dni (do úhynu myší)

- hodnocení průměrné doby přežití myší se zkoušenými kompozicemi, až asi 40 dní.

Claims (10)

1. Farmaceutická kombinace, vyznačující sc tím, že obsahuje směs (a) alespoň jednoho derivátu taxami a (b) alespoň jedné ω-3 polynenasycenc mastné kyseliny nebo jejího derivátu, přičemž molární poměr (b) k (a) není vyšší než 2.

2. Kapalná farmaceutická kompozice, vyznačující se tím. žc obsahuje směs (a) účinného množství alespoň jednoho derivátu taxanu a (b) účinného množství alespoň jedné ω-3 polynenasycené mastné kyseliny nebo jejího derivátu, přičemž molární poměr (b) k (a) není vyšší než 2, a (c) alespoň jednoho farmaceuticky vhodného nosiče.

3. Farmaceutická kombinace nebo farmaceutická kompozice podle nároku 1 nebo 2, vyznačující s c t í m , že derivát taxami ve složce (a) je zvolen z paklitaxelu. docetaxelu, ortataxelu nebo protaxclu.

4. Farmaceutická kombinace nebo farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků I až

3. vyznačující s c tím, že o>-3 polynenasycenou kyselinou ve složce (b) je a- linolenová kyselina.

5. Farmaceutická kombinace nebo farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až

4, v y z n a č u j í c í se t í in , že molární poměr (b) k (a) je v rozmezí od I do 2,

6. farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 2 až 5, vyznačující se tím. že farmaceuticky vhodným nosičem ve složce (c) je neiontové povrchově aktivní činidlo nebo korozpouštědlový systém, který obsahuje neiontové povrchově aktivní činidlo v kombinaci s vhodným polárním rozpouštědlem nebo směsí polárních rozpouštědel.

7. Způsob přípravy farmaceutické kompozice podle kteréhokoliv z nároků 2 až 6, vyznačující se tím. že se smísí složky (a), (b) a (e) a popřípadě se pro přípravu infuzntho roztoku dalším zředěním upraví koncentrace kompozice.

8. Farmaceutická kombinace nebo farmaceutická kompozice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití k léčení maligních nádorových chorob.

-6CZ 300305 B6

9. Farmaceutická kombinace nebo farmaceutická kompozice podle nároku 8. kde maligní nádorová choroba je zvolena z rakoviny prsu, rakoviny vajeěníků, neinalobuněčné rakoviny plic. rakoviny prostaty a jiných typů rakoviny s tuhými nádory.

10. Kit k přípravě infuzního roztoku, vyznačující se tím, že obsahuje (a) účinné množství alespoň jednoho derivátu taxanu. (b) účinné množství alespoň jedné <n-3 polynenasycenč mastné kyseliny nebo jejího derivátu přičemž molární poměr (b) k (a) není vy šší než 2 a (e) alespoň jeden farmaceuticky vhodný nosič, přičemž složky (a), (b) a (c) jsou rozděleny mezi alespoň dva kontejnery, z. nichž jeden obsahuje složku (a), která je popřípadě smisena s částí složky (e) za vzniku koncentrátu, a druhý obsahuje složku (b). která je popřípadě smisena se složkou (c), zatímco případný další kontejner obsahuje pouze složku (c).

Konec dokumentu