CZ292570B6 - Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů s lapači radikálů - Google Patents

Abstract

Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů na hydrofilních rozpustných nebo síťovaných polymerních podložkách, připravený radikálovou polymerací z polymerizační směsi, která obsahuje 1 až 95 % hmotn. radikálově polymerizovatelného monomeru, 0,0 až 20 % hmotn. síťovadla, 0,1 až 10 % hmotn. iniciátoru, 0,0 až 60 % hmotn. rozpouštědla a 0,1 až 60 % hmotn. monomeru ze skupiny polymerizovatelných derivátů stericky stíněných aminů.ŕ

Description

Vynález se týká polymemího nosiče pro kultivaci keratinocytů na biologicky aktivních polymerních podložkách.

Stav techniky

Keratinocyty jsou běžně využívány pro krytí rozsáhlých kožních defektů jako jsou popáleniny, bércové vředy a proleženiny. Pacientovi je odebrán malý kousek kůže (asi 3 cm²), z něhož jsou enzymaticky izolovány keratinocyty. Ty jsou pak kultivovány v podmínkách tkáňových kultur spolu s myšími 3-T-3 fíbroblasty (tzv. pomocné buňky), u nichž byla ozářením či chemicky zastavena proliferace. Bez těchto podpůrných buněk lidské keratinocyty nemohou adherovat ke kultivační nádobě. Po odumření podpůrných buněk a pomnožení keratinocytů jsou keratinocyty enzymaticky uvolněny ode dna kultivační nádoby, uchyceny na mastný tyl a přeneseny na kožní defekty (Green et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 76, 5665—5668, 1979). Při tomto postupuje možno z relativně malého odběru pokrýt rozsáhlé plochy poškozené kůže. Vlastní přenos buněk na mastný tyl je však techniky náročný a bývá příčinou neúspěchů. Byla proto připravena technologie vycházející zGreenovy metody, která umožňuje kultivovat keratinocyty přímo na polymemích nosičích a přímo s těmito nosiči je transplantovat na rannou plochu (Vacík et al., Patent CZ 281 269, 1996; Dvořáková et al., Folia Biol., Praha, 42, 83-86, 1996; Smetana et al., J. Mater. Sci. Mater. Med. 8, 587-590, 1997; Dvořáková et al., Biomaterials, 19,141-146,1998).

Polymemí nosiče se připravují radiálovou polymerizací za podmínek běžných pro tyto typy polymerizací. Připravené nosiče se dodatečně čistí dokonalým vypráním od zbytků nezreagovaných monomerů resp. použitého rozpouštědla. Dosud se používají hydrofilní polymemí nosiče například z materiálu poly(HEMA), připravené radikálovou polymerizací z 2-hydroxyethyl methakrylátu (HEMA). Před nasazením buněk je nutno nosiče preinkubovat 1 až 24 hod v médiu, které obsahuje 25 % bovinního séra. Kultivace keratinocytů pak probíhá za přítomnosti podpůrných buněk v podmínkách tkáňových kultur, tedy spolu s myšími 3-T-3 fíbroblasty, u nichž byla ozářením či chemicky zastavena proliferace. I tento postup však komplikuje celý proces transplantace, neboť je nadále spojen s nutnou preinkubací a přítomností podpůrných buněk. Významnou nevýhodou je i skutečnost, že přítomnost pomocných buněk v kultivačním systému potencionálně zatěžuje imunologický systém pacienta a že takto připravený nosič nemá vlastnosti, které by potlačovaly tvorbu volných radikálů respektive reaktivních kyslíkových derivátů, které ztěžují hojení postižené tkáně.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu, který odstraňuje výše uvedené nevýhody, je polymemí nosič pro přípravu keratinocytů připravený technikami radikálové polymerizace v oboru obvyklými za použití polymerizační směsi, která obsahuje 1 až 95 hmotn. % radikálově polymerizovatelného monomeru, 0,0 až 20 hmotn. % síťovadla, 0,1 až 10 hmotn. % iniciátoru, 0,0 až 60 hmotn. % rozpouštědla a sloučenin, jednotlivě nebo ve směsi, vybraných ze skupiny polymerizovatelných derivátů stericky stíněných aminů v množství 0,1 až 60 hmotn. % obecného vzorce:

kde W je -CH(X)- nebo -CH(X)CH₂ a X je radikálově polymerizovatelná skupina

R R r —0-COC=CH₂ — NH-COC=CH₂ —0-Co4cH^NH-COC=CH₂

R R —(-NHCOCH₂-^-Nl+CO€=CH₂ —nh-co-^ch₂-]^nhoqc=ch₂ r = h, ch₃

R —COO-CH₂CH_rO-CO-C=CH₂ n je 1 až 10, m je 1 nebo 2,

Rl je H nebo alkyl Cj až C₄, R² až R⁵ je alkyl Cj až C₄.

Předmět vynálezu je dále rozvinut poukazem na vhodné sloučeniny a jejich kombinace. Příprava a účinky jsou demonstrovány v příkladech provedení.

Stericky stíněné aminy podle předloženého vynálezu jsou vybrané ze skupiny látek

7V-(2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)akrylamid /V-(2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)methakrylamid

kde Rl je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

(l-Rl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)akrylát (1-R1-2,2,6,6-tetramethylpíperidin-4-yl)methakiy lát

-2CZ 292570 B6

kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

(l-R’-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl) (n+l)-akryloylaminoalkanoát (l-R’-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl) (n+l)-methakryloylaminoalkanoát obecného vzorce

kde R¹ je H nebo alkyl Cj až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

(2-akryloyloxyethyl) (l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karboxylát (2-methakryloyloxyethyl) (l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karboxylát

kde R¹ je H nebo alkyl Cj až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací; 15

A^r-(I-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)akrylamid

N-(l-R¹-2,2,6,6-tetraethylpiperidin-4-yl)methakrylamid

-3CZ 292570 B6

kde R¹ je H nebo alkyl C_s až C4, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací; AHm-Kl-RX^Aó-tetramethylpiperidin—t-yljkarbamoyljalkyljakrylamid A^L-{m-[(l-R^l-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karbamoyl]alkyl}methakrylamid obecného vzorce:

kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

77-(1-13.-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)akrylamid •V-(l-R'-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)methakrylamid

kde R¹ je H nebo alkyl C₍ až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

A-~{ n-[( l-R¹-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)karbamoyl]alkyl} akrylamid /V-{n-[(l-R¹-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)karbamoyl]alkyl}methakrylamid ř

nh-co-c=ch₂

NH-Cofc^

R = H,CH₃

R¹

-4CZ 292570 B6 kde R¹ je H nebo alkyl C] až C4, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací.

Monomer obsahuje jednotlivě nebo v kombinaci látky vybrané ze skupiny kyselina akrylová a methakrylová, alkylakryláty a methakryláty, hydroxyalkylakryláty a methakryláty, alkyloxyalkyl akryláty a methakryláty, acyloxyalkyl akryláty a methakryláty, akiyl- a methakrylamidy, substituované alkylakryl- a methakrylamidy, hydroxyalkylakryl- a methakrylamidy, 1-vinyllaktamy, diacetonakrylamid [yV-(l.l-dimethyI-3-oxobutvl)acrylamid].

Síťovadlo obsahuje jednotlivě nebo v kombinaci látky vy brané ze skupiny:

1,1 '-divinyl-3,3 '-(ethan-1, l-diyl)di(pyrolidin-2-on)

CH=CH2 ch=ch₂ i 1

ch₃ ethylenglykol diakrylát, ethylenglykol dimethakrylát:

H₂C-c-CO-O-CH₂CH_r-O-CO-C=CH₂ R = H, CH₃ a,to-poly(oxyethylen) diakrylát, α,ω-poly (oxyethylen) dimethakrylát

H₂C=C-CO-Xo-CH₂CH^-0-CO-C=CH₂ r = h, ch₃ kde m je 2 až 20.

Iniciátor obsahuje jednotlivě nebo v kombinaci sloučeniny vybrané ze skupiny látek, které podléhají tepelnému rozkladu jako jsou azonitrily, azoestery, azoamidy, azoamidiny, alkyl-, acylperoxidy, systémy schopné vyvolat polymerizaci po ozáření světlem jako jsou deriváty benzoinu, a- diketony (kafrchinon) ve směsi s terciárními aminy a systémy generující radikály na bázi redox reakcí, jako simatan sodný-persíran amonný.

Rozpouštědlo obsahuje jednotlivě nebo v kombinaci vodu, glykol propylenglykol, di- a polyethylenglykoly o molekulové hmotnosti až 50 000, glycerin, mono- a dietheiy glykolu a polyglykolů, mono- a diacetylethery glykolu, diglykolu a polyglykolů, l-methylpyrrolidin-2-on, dimethylformamid, dimethylacetamid, dimethylsulfoxid, polyethylenglykol (Macrogolum - obchodní značka glykolů pro lékařské účely).

-5CZ 292570 B6

Příklady

Příklad 1

100 g 2-hydroxyethyl methakrylátu, 0,4 g ethylenglykolu dimethakrylátu, 1,4 g 2-hydroxy-2methylpropiofenonu, 6 g 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl methakrylátu bylo polymerizováno na polypropylenové fólii 10 min řadou UV lamp 175 W ze vzdálenosti 18 cm. Vznikla fólie silná mm, která byla extrahována směsí ethanol- voda (1:1) po dobu 48 hod. Fólii lze nabotnat ve 10 vodě na obsah vody 36 %.

Příklad 2

Směs 80 g 2-hydroxyethyl methakrylátu, 5 g N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl) methakiylamidu, 0,6 g ethylenglykolu dimethakrylátu, 0,5 g 2,2'-azobis(2-methylpropionitrilu) se po probublání argonem (10 min) nadávkuje v inertní atmosféře do forem vhodných pro přípravu fólií (síla 1,3 mm), kde se polymerizuje při 70 °C po dobu 12 hod. Po nabotnání ve vodě obsahuje fólie 36 % vody.

Příklad 3

Směs 40 g l-vinylpyrrolidin-2-onu, 40 g2-acetyloxyethyl methakrylátu, 0,75 g 3-l,l'-divinyl25 3,3'-(ethan-l,l-diyl)di(pyrolidin-2-onu), 15 ml glycerinu, 2,5 g (1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl) methakrylátu a 0,50 g 2,2'-dimethyl azobis(2-methylpropionátu) byla probublána argonem (10 min) a naplněna do forem pro přípravu fólií (síla fólie 1,1 mm) a polymerizována 12 hod. při teplotě 71 °C. Fólie byly vyprány v 30% ethanolu a nakonec nabotnány v destilované vodě.

Příklad 4

Směs 60 g 2-hydroxyethyl methakrylátu, 20 g 2-(2-hydroxyethoxy)ethyl methakiylátu, 3 g 35 (2-methakryloyloxyethyl) 2,2,5,5-tetramethyl-2,5-dihydropyrrol-3-karboxylátu, 0,5 g ethylenglykol dimethakrylátu, 0,5 g 2,2'-azobis(propionitrilu), 20 ml polyethylen glykol 300 (Makrogolum 300) se po probublání argonem (12 min) nadávkuje v inertní atmosféře do forem pro přípravu fólií (síla 1,6 mm) a polymerizuje se při 72 °C po dobu 11 hod. Kopolymer byl extrahován při 25 °C směsí 30 % ethanolu 72 hod. Výsledné fólie byly nabotnány v destilované 40 vodě. Obsah vody 38 %.

Příklad 5

1 00 g 2-hydroxyethyl methakrylátu, 0,4 g ethylenglykol dimethakrylátu, 0,14 g dimethyl

2,2'-azobis(2-methylpropionátu) bylo polymerizováno v polymerizačních formách (síla fólie mm) při teplotě 68 °C po dobu 12 hod. Vzniklá fólie byla extrahována směsí ethanol- voda (1:1) po dobu 48 hodin. Fólii lze nabotnat ve vodě na obsah vody 36 %.

Analogicky byly připraveny fólie ze směsi HEMA a 2-(2-hydroxyethoxy)ethyl methakrylátu.

-6CZ 292570 B6

Příklad 6

Směs 40 g l-vinylpyrrolidin-2-onu, 40 g 2-acetoxyethyl methakiylátu, 0,75 g Ι,Γ-divinyl3,3'-(ethan-l,l-diyl)di(pyrolidin-2-onu), 2,2'-dimethyl azobis(2-methyl propionátu) byla probublána argonem (10 min) a naplněna do forem pro přípravu fólií (síla 1,5 mm) apolymerizována 12 hod. při teplotě 71 °C. Fólie byly vyprány v 30% ethanolu a nakonec nabotnány v destilované vodě.

Příklad 7

Hodnocení polymemích nosičů:

Byly provedeny orientační pokusy s pěstováním keratinocytů na různých polymemích nosičích, jejich složení je uvedeno v následující tabulce. Nosiče byly připraveny radikálovou polymerizací za použití tepelných resp. světelných iniciátorů.

Polymerizace za použití tepelného iniciátoru byla provedena po smíchání a probublání polymerizační směsi (argon, 10 min) mezi deskami z polypropylenu při teplotě 70 °C po dobu 12 hod. (Síla fólie 1,2 mm). Fólie byly extrahovány 3 dny v 30% ethanolu a 3 dny v destilované vodě.

Polymerizace provedená iniciací UV iniciátorem byla provedena tak, že po smíchání polymerizační směsi byl roztok nalit na polyesterovou podložku, kde byl ozařován UV lampami výkonu 175 W ze vzdálenosti 15 cm po dobu 12 min. Fólie byly vy prány v 30% ethanolu (2 dny) a v destilované vodě (3 dny).

Složení polymerizačních násad pro přípravu různých polymemích nosičů je uvedeno v následující tabulce.

a. Použité hydrofilní monomery - označení v tabulce:

1. 2-hydroxyethyl methakrylát

2. (2-hydroxyethoxy)ethyl methakrylát

3. l-vinylpyrrolidin-2-on

4. 2-acetoxyethyl methakrylát

5. kys. methakrylová

b. Síťovadla

11. ethylenglykol dimethakrylát

12. 1,1 '-divinyl-(ethan-l, 1 '-diyl)di(2-pyrrolidon)

c. Polymerizovatelné stericky stíněné aminy:

I. 4-methakryloylamino-2,2,6,6-tetramethyl piperidin

II. (1,2,2,6,6-pentamethyl piperidin-4—yl)methakrylát

III. N-(2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)methakrylamid

IV. (1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl) (6-methakryloylaminohexanoát)

d. Typ polymerizace - použitý iniciátor

- tepelná polymerizace: iniciátor 2,2'-dimethyl azobis(2-methylpropionát)

- UV polymerizace: iniciátor 2-hydroxy-2-methyl propiofenon

Rozpouštědlo: glycerin označeno G a množství v hmotn. % polyethylen glykol 300 (Macrogolum 300 označeno M) a množství v hmotn. %

v c.p	Monomer	síťovadlo.	amin	polymerizace
	1	2	3	4	5	11	12	I.	Π.	ΠΙ.	IV.	tep.	svět	rozp.
1	99,5					0,3						0,2
2				98,5			1,3						1,2
3	79,5	20				0,3						0,2
4	68,5	30			1	0,3						0,2
5	79,5		20			0,3						0,2
6	96,5					0,3			3			0,2
7	65,8	30				0,3		2,8					1,1
8			50	36,5			0,3			3		0,2		G10
9	96,5					0,3					3	0,2
10	83,5				1	0,3		2				0,2		M10
11	85,5					0,3		2				0,2		G10

Poznámka: uvedená čísla v tabulce jsou hmotnostní procenta uvedených polymerizačních směsí.

Hodnocení

Polymery připravené pod čísly pokusů 1 až 5 jsou standardní polymerní nosiče, které sloužily ío jako referenční polymerní podložky. Na těchto nosičích rostou lidské keratinocyty po preinkubaci s bovinním sérem za přítomnosti myších fibroblastů či po adsorpci bioaktivních sacharidů bez přítomnosti myších fibroblastů.

Adheze lidských keratinocytů na polymerní podložky pod čísly pokusů 6 až 11 je zřetelně lepší 15 ve srovnání s referenčními podložkami (1 až 5).

Výsledky kultivace lidských keratinocytů na polymemích podložkách číslo 6 až 11 jsou lepší než na podložkách 1 až 5. Keratinocyty adherují a úspěšně rostou bez předchozí preinkubace s bioaktivními polysacharidy. Paralelně provedené MTT testy [T.F. Slater et al: Biochim. Biophys. 20 Acta 77, 383, (1963)] ukazují větší množství aktivních buněk na podložkách pod čísly pokusů 6 až 11 ve srovnání s pokusy na podložkách 1 až 5.

Průmyslová využitelnost

Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů na hydrofilních podložkách lze využít především při krytí a současném léčení rozsáhlých kožních defektů jako jsou popáleniny, bércové vředy a proleženiny.

Claims (5)

1. Polymemí nosič pro kultivaci keratinocytů, vyznačeny tím. že je připravený radikálovou polymerizací z polymerizační směsi, která obsahuje 1 až 95 % hmotn. radikálově polymerizovatelného monomeru jednotlivě nebo ve směsi, 0,0 až 20 % hmotn. síťovadla, 0,1 až 10% hmotn. iniciátoru, 0,0 až 60% hmotn. rozpouštědla a 0,1 až 60% hmotn. sloučenin, jednotlivě nebo ve směsi, vybraných ze skupiny polymerizovatelných derivátů stericky stíněných aminů obecného vzorce:

kde W je -CH(X)- nebo -CH(X)CH₂ a X je radikálově polymerizovatelná skupina

R R R

O~ COC=CH_Z NH-CO-C—CH, —q—CO^_^CH^-NH‘COG⁼CH,

R R ~NHCOCH₂-|^-N1+CC>C=CH, — NHW^CH^NHOCX^CH, R = H, CH₃ n je 1 až 10, a m je 1 nebo 2

R

I —COO-CH₂CH_rO-CO-C=CH₂

RjeH, CH₃ kde R1 ie H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací, R² až R⁵ je alkyl Ci až C₄.

2. Polymemí nosič pro kultivaci keratinocytů podle nároku 1, vyznačený tím, že stericky stíněné aminy jsou vybrané ze skupiny látek:

7V-(2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)akrylamid

N-(2,2,5,5-tetramethylpynOlidin-3-yl)methakrylamid kde R1 je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

-9CZ 292570 B6 (l-Rl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)akrylát (l-Rl-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)methakrylát kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

(l-R^l-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl) (n+l)-akryloylaminoalkanoát (l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl) (n+l)-methakryloylaminoalkanoát obecného vzorce

R = H, CH₃ kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

(2-akiyloyloxyethyl) (l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karboxylát (2-methakiyloyloxyethyl) (l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin—4—yl)karboxylát kde R^l je H nebo alkyl C] až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

/V-(l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)akrylamid

A^L-(l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)methakrylamid

-10CZ 292570 B6 kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací; 7V-{m-[(l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karbamoyl]alkyl}akrylamid A^r-{m-[(l-R¹-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)karbamoyl]alkyl}methakrylamid obecného vzorce:

kde R¹ je H nebo alkyl Ci až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

N-( 1 -R¹-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)akrylamid

N-( 1 -R'-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)methakrylamid »-ooU

R = H, CH₃ kde R¹ je H nebo alkyl Cj až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací;

A^r-{n-[(l-R¹-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)karbamoyl]alkyl}akrylamid

2V-{n-[(l-R^I-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidin-3-yl)karbamoyl]alkyl}methakrylamid

NH-€O^CH₂^NH-COC=CH₂ n=l až 10, kde R¹ je H nebo alkyl Cj až C₄, OH nebo kyslíkový radikál vzniklý dodatečnou oxidací.

-11 CZ 292570 B6

3. Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů podle nároků 1 a 2, vyznačený tím, že polymerizační směs obsahuje monomery, jednotlivě nebo v kombinaci vybrané ze skupiny látek kyselina akrylová a methakrylová, alkyl akiyláty a methakryláty, hydroxyalkyl akiyláty 5 a methakryláty, alkyloxyalkyl akryláty a methakryláty, acyloxyalkyl akryláty a methakryláty, akryl- a methakrylamidy, substituované alkylakryl- a methakrylamidy, hydroxyalkylakryla methakiylamidy, 1-vinyllaktamy, diacetonakrylamid [7V-(l,l-dimethyl-3-oxobutyl)akrylamid].

to

4. Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů podle nároků 1 až 3, v y z n a č e n ý t í m , že jako síťovadlo obsahuje jednotlivě nebo v kombinaci látky vybrané ze skupiny:

1,1 '-divinyl-3,3 '-(ethan-1, l-diyl)di(pyrolidin-2-on)

CH=CH2 ch=ch₂ ch₃

15 ethylenglykol diakrylát, ethylenglykol dimethakrylát:

H₂C=C-CO-0-CH₂CH2-0-C0-C=CH₂ r = H, ch₃ а, o>-poly(oxyethylen) diakiylát; a,o-poly(oxyethylen) dimethakrylát

R R

Ir 1 · h₂c=c-co-[-o-ch₂ch₂^-o-co-c=ch₂ r = h, ch₃ kdemje2až20.

5. Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů podle nároků 1 až 4, vyznačený tím, že iniciace reakce je provedena polymerizačním iniciátorem, jednotlivě nebo v kombinaci, látkami vybranými ze skupiny látek, které podléhají tepelnému rozkladu jako jsou azonitrily, azoestery, azoamidy, azoamidiny, alkyl-, acylperoxidy a hydroperoxidy, nebo systémy schopné vyvolat 25 polymerizaci po ozáření světlem jako jsou deriváty benzionu, α-diketony (kafrchinon) ve směsi s terciárními aminy a systémy generující radikály na bázi redox reakcí, jako simatan sodnýpersíran amonný.

б. Polymerní nosič pro kultivaci keratinocytů podle nároků 1 až 5, vyznačený tím, že 30 v polymerizační směsi se může uplatnit rozpouštědlo v rozsahu 0,0 až 60 % hmotn., přičemž jako rozpouštědlo se použijí jednotlivě nebo v kombinaci voda, glykol di- a polyethylenglykoly o mol. hmotnosti až 50 000, glycerin, mono- a dietheiy glykolu a polyglykolů, mono- a diacyl ethery, diglykolu a polyglykolů, l-methylpyrrolidin-2-on, dimethylformamid, dimethylacetamid, dimethylsulfoxid.