CZ281269B6 - Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy - Google Patents
Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ281269B6 CZ281269B6 CZ941314A CZ131494A CZ281269B6 CZ 281269 B6 CZ281269 B6 CZ 281269B6 CZ 941314 A CZ941314 A CZ 941314A CZ 131494 A CZ131494 A CZ 131494A CZ 281269 B6 CZ281269 B6 CZ 281269B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hydroxyethyl methacrylate
- biologically active
- keratinocytes
- active cover
- methacrylate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/60—Materials for use in artificial skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Podstata biologicky aktivního krytu rozsáhlých ranných ploch podle vynálezu spočívá v tom, že sestává z nosiče na bázi hydrofilních polymerů 2-hydroxyethylmethakrylátu vybraných ze skupiny zahrnující poly(2-hydroxyethylmethakrylát), kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem, kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem a kyselinou methakrylovou obsahujících do 1 % síťovadla s nakultivovanými keratinocyty. Použité polymery jsou obecně označovány jako hydrogely.
ŕ
Description
Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy
Oblast techniky
Vynález se týká biologicky aktivního krytu rozsáhlých ranných ploch a způsobu jeho přípravy.
Stav techniky
Pro krytí rozsáhlých kožních defektů, jako jsou popáleniny, bércové vředy a jiné, jsou využívány kultivované autologní keratinocyty. Tato metoda je založena na odběru malého kousku kůže (3 cm2), z něhož jsou izolovány kožní buňky (keratinocyty). Tyto buňky jsou v podmínkách tkáňových kultur pomnoženy, enzymaticky uvolněny ode dna kultivační nádobky, v podobě souvislého porostu uchyceny na mastný tyl a následně přeneseny na kožní defekty. Lze tedy z relativně malých odběrů pokrývat rozsáhlé plochy poškozené kůže (Green et al., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 76, 5665-5668, 1979). Problémem zůstává vlastní přenos, který je technicky náročný a může být zdrojem neúspěchu.
Nyní jsme zjistili, že je možné kultivovat keratinocyty na hydrogelovém nosiči a použit k následnému přenesení na kožní defekty jako dočasný biologicky aktivní kryt.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch, jehož podstata spočívá v tom, že sestává z nosiče na bázi hydrofilních polymerů 2-hydroxyethylmethakrylátu, vybraných ze skupiny, zahrnující póly(2-hydroxyethylmethakrylát), kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem, kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem a kyselinou methakrylovou, obsahujících do 1 % síťovadla s nakultivovanými keratinocyty.
Použité polymery jsou obecně označovány jako hydrogely.
Způsob přípravy biologicky aktivního krytu rozsáhlých ranných ploch podle vynálezu spočívá v tom, že se na preinkubovaném nosiči z hydrofilních polymerů přímo kultivují keratinocyty.
Při použití biologicky aktivního krytu podle vynálezu jsou keratinocyty, nakultivované na nosiči, přímo přeneseny na kožní defekt tak, že kryt je k povrchu defektu přiložen stranou, porostlou keratinocyty. Ty potom migrují z povrchu nosiče a kolonizuji povrch defektu. Odpadá tedy nutnost izolace buněk ze dna kultivační nádobky, jejich přenos na transplantační nosič, čímž se transplantace buněk velmi zjednoduší.
Při práci se postupuje tak, že se pacientovi odebere jemný dermo-epidermální štěp o tloušťce 0,2-0,3 mm, z něhož jsou keratinocyty uvolněny působením roztoku trypsinu. Na dno kultivační misky se položí hydrogelový nosič ve formě disku, preinkubovaný 24 až 48 hodin 10 až 25% bovinním sérem. Na dno misky, obsahující
-1CZ 281269 B6 nosič, se nasadí letálně ozářené (6000 rad) 3-T-3 myší fibroblasty, podporující adherenci a první fáze růstu keratinocytů (Green et al., 1979), v koncentraci 1,3 x 106 buněk na 50 cm2 . Po adherenci fibroblastů jsou nasazeny keratinocyty v hustotě 2 x 106 na 50 cm2. Buňky se kultivují při 37 ’C v atmosféře 3,3% CO2.
Používá se kultivační médium, obsahující obvykle 1) Eaglovo MEM s neesenciálními aminokyselinami a pyruvátem sodným (ÚMG, AV ČR, Praha), 2) 0,3 mg/ml Glutamin (ÚSOL, Praha), 3) 10% bovinní sérum (Bioveta, Opava), 4) Hydrocortison (0,5 μιη/ιηΐ) (Hydrocortison Spofa rozpustný), 5) Penicilín (200 jednotek/ml), Streptomycin (10_4g/ml), 6) Insulin (5 μg/ml) (Actrapid MC NOVO Dánsko), 7) Choleratoxin (10~10M) (Sigma), 8) 10 ng/ml epidermálního růstového faktoru (Sigma).
Dále je vynález objasněn na příkladu.
Příklad provedení vynálezu
Na dno kultivační misky byl položen nosič ve formě nabotnalého disku či sítě o průměru 25 mm z kopolymerů 2-hydroxyethylmethakrylátu (70 hm. %) s diethylglykolmethakrylátem (30 hm. %), síťovaný ethylenglykoldimethakrylátem (0,3 hm. %), obsahujícím 47 % vody. Nabotnalý disk byl 24 hodin preinkubován s 25 % (v/v) bovinnim sérem. Na dno misky, obsahující nosič, byly nasazeny letálné ozářené (6000 rad) 3-T-3 myší fibroblasty, podporující adherenci a první fáze růstu keratinocytů, v koncentraci 1,3 x 106 buněk na 50 cm2. Po adherenci fibroblastů byly nasazeny keratinocyty v hustotě 2 x 106 na 50 cm2. Buňky byly kultivovány při 37 °C v atmosféře 3,3% C02.
Keratinocyty pro kultivaci se získají tak, že pacientovi je odebrán jemný dermo-epidermálni štěp o tloušťce 0,2-0,3 mm, z něhož jsou keratinocyty uvolněny působením roztoku trypsinu.
Kultivační médium obsahovalo 1) Eaglovo MEM s neesenciálními aminokyselinami a pyruvátem sodným (ÚMG, AV ČR, Praha), 2) 0,3 mg/ml Glutamin (ÚSOL, Praha), 3) 10% bovinní sérum (Bioveta, Opava), 4) 0,5 μιη/ml Hydrocortison (Hydrocortison Spofa rozpustný), 5) Penicilín 200 jednotek/ml, Streptomycin 10‘4g/ml, 6) 5 μg/ml Insulin (Actrapid MC NOVO Dánsko), 7) 10-10M Choleratoxin (Sigma), 8) 10 ng/ml epidermálního růstového faktoru (Sigma).
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch, vyznačený tím, že sestává z nosiče na bázi hydrofilních polymerů 2-hydroxyethylmethakrylátu, vybraných ze skupiny, zahrnující poly(2-hydroxyethylmethakrylát), kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem, kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu s diethylglykolmethakrylátem a kyselinou methakrylovou, obsahujících do 1 % síťovadla s nakultivovanými keratinocyty.
- 2. Způsob přípravy biologicky aktivního krytu rozsáhlých ranných ploch podle nároku 1, vyznačený tím, že se na preinkubovaném nosiči z hydrofilních polymerů přímo kultivují keratinocyty.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ941314A CZ281269B6 (cs) | 1994-05-31 | 1994-05-31 | Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy |
| PCT/CZ1995/000011 WO1995032743A1 (en) | 1994-05-31 | 1995-05-30 | Temporary biologically active cover for extensive wound areas and method of preparing thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ941314A CZ281269B6 (cs) | 1994-05-31 | 1994-05-31 | Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ131494A3 CZ131494A3 (en) | 1996-04-17 |
| CZ281269B6 true CZ281269B6 (cs) | 1996-07-17 |
Family
ID=5463101
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ941314A CZ281269B6 (cs) | 1994-05-31 | 1994-05-31 | Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ281269B6 (cs) |
| WO (1) | WO1995032743A1 (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9516556D0 (en) * | 1995-08-12 | 1995-10-11 | Smith & Nephew | Cell culture laminate |
| AU4029399A (en) * | 1998-06-10 | 1999-12-30 | 1. Lekarska Fakulta Univerzity Karlovy | Polymer carrier for cultivation of keratinocytes |
| CZ295117B6 (cs) * | 2003-01-27 | 2005-05-18 | Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr | Polymerní nosiče s vázanými sacharidy pro imobilizaci biologických systémů |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02504221A (ja) * | 1987-04-22 | 1990-12-06 | ベイ ミカエル | 細胞培養法、培養物及び培養製品 |
| US5122470A (en) * | 1988-07-05 | 1992-06-16 | Banes Albert J | Floating cell culture device and method |
| JPH044868A (ja) * | 1990-04-20 | 1992-01-09 | Toray Ind Inc | 細胞培養基材およびそれを用いる細胞培養方法 |
-
1994
- 1994-05-31 CZ CZ941314A patent/CZ281269B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-30 WO PCT/CZ1995/000011 patent/WO1995032743A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1995032743A1 (en) | 1995-12-07 |
| CZ131494A3 (en) | 1996-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sorkio et al. | Human stem cell based corneal tissue mimicking structures using laser-assisted 3D bioprinting and functional bioinks | |
| US6043089A (en) | Skin culture and process for preparing the same | |
| Shin et al. | Attachment, proliferation, and migration of marrow stromal osteoblasts cultured on biomimetic hydrogels modified with an osteopontin-derived peptide | |
| AU614747B2 (en) | Cell culture of anchorage dependent cells, materials and products | |
| US9375514B2 (en) | Multicellular tissue and organ culture systems | |
| EP0243818B1 (en) | Bioadhesives for cell and tissue adhesion | |
| KR101319227B1 (ko) | 각막 내피세포 및 관련세포를 생체고분자 위에서성장시키고, 인공의 이식용 각막을 제조하는 방법 및조성물 | |
| JP5946046B2 (ja) | ヒト角膜内皮細胞シート | |
| US20040028657A1 (en) | Cultured epidermal cell sheet, laminated cultured skin sheet and process for producing the same | |
| JPS62246371A (ja) | 人工皮膚及びその製造方法 | |
| Haagdorens et al. | In vitro cultivation of limbal epithelial stem cells on surface-modified crosslinked collagen scaffolds | |
| WO1980001350A1 (en) | Skin-equivalent | |
| JP7058397B2 (ja) | 組織再生培養細胞シート、製造方法及びその利用方法 | |
| WO2005087285A1 (ja) | 角膜上皮シート及びその作製方法、並びに同シートを用いる移植方法 | |
| WO1992010217A1 (en) | Wound dressings and processes for manufacture thereof | |
| JPH1147258A (ja) | ゼラチンとコラーゲンとを含有する医用基材 | |
| Utheim et al. | The culture of limbal epithelial cells | |
| CZ281269B6 (cs) | Biologicky aktivní kryt rozsáhlých ranných ploch a způsob jeho přípravy | |
| Kobayashi et al. | Collagen‐immobilized hydrogel as material for lamellar keratoplasty | |
| Sipehia et al. | Towards an artificial cornea: surface modifications of optically clear, oxygen permeable soft contact lens materials by ammonia plasma modification technique for the enhanced attachment and growth of corneal epithelial cells | |
| WO2003030959A1 (en) | Corneal repair device | |
| US20180243476A1 (en) | Cultured cell sheet for tissue regeneration, production method thereof, and application method thereof | |
| EP1103601B1 (en) | Method for culturing cells | |
| JPH1043213A (ja) | 培養皮膚の製造法、該製造法に用いる支持体および容器、ならびに該製造法によりえられる培養皮膚用基材および培養皮膚 | |
| TWI842663B (zh) | 細胞片及其製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20070531 |