CZ235499A3 - Farmaceutický prostředek a použití 1 alfahydroxvprevitaminu D nebo aktivního vitaminu D - Google Patents

Abstract

Farmaceutický prostředek pro orální podávání pro inhibici hyperproliferativní aktivity buněk u rakovinynebo hyperplasie prostaty člověka, který obsahuje sloučeninu vitaminu D, - kterouje Ια-hydroxyprevitamin D, nebo aktivní vitamin D obsažený vmatrici, přičemž matrice umožňuje uvolnitelnou vazbu a kontrolované uvolňování aktivního vitaminuDv » průběhu prodlouženého časového období. 1 aHydroxyprevitamin D nebo aktivní vitamin D v prostředku, kterýje ve formě se zpomalenýmuvolňovánímnebo oddálenýmzpomalenýmuvolňovánímpro použití pro alevaci hyperproliferativní buněčné aktivity při rakovině nebo hypeplasii prostaty za účelem snížení nebo stabilizace buněčné aktivity při rakovině nebo hyperplasii prostaty při sníženém riziku hyperkalcemie.

Description

Farmaceutický prostředek a použití Ια-hydroxyprevitaminu D nebo aktivního vitaminu D

Oblast techniky

Předkládaný vynález se obecně týká způsobu léčby hyperproliferativních onemocnění prostaty, zejména použití orálních prostředků se zpomaleným a/nebo oddáleným uvolňováním, které obsahují aktivní sloučeninu vitaminu D, přesněji použití prostředků se zpomaleným a/nebo oddáleným uvolňováním obsahujících aktivovaný vitamin D nebo orální

1-a-hydroxyprevitamin D, pro inhibici hyperproliferativní aktivity buněk u těchto onemocnění a pro navození diferenciace buněk.

Dosavadní stav techniky

Prostata je přítomná výlučně u samců savců a probíhají v ní některá proliferativní onemocnění. Při proliferaci bazálních a stromálních buněk prostaty vzniká benigní hyperplasie prostaty, která je jedním z nejběžnějších onemocnění prostaty. Jiným častým onemocněním prostaty je rakovina prostaty, zejména adenokarcinom prostaty. Jak benigní hyperplasie, tak rakovina prostaty mají vysokou incidenci u mužské populace vyššího věku. Přibližně jeden ze čtyř mužů ve věku nad 55 let má jednu z forem onemocnění prostaty.

Rakovina prostaty je v současnosti druhou nejčastější příčinou úmrtí na nádorové onemocnění - po karcinomu plic - u mužů ve

Spojených Státech Amerických. Mortalita na karcinom prostaty logaritmicky stoupá s věkem a v USA je dvakrát vyšší pro negroidní rasu než pro rasu bílou. Mezinárodně je mortalita • · · · · · • · ·· ·· nejvyšší pro muže černé pleti v USA a ve východní Evropě a nejnižší je v Japonsku. Předpokládá se, že v roce 2000 bude pozorováno 90% zvýšení roční incidence a 37% zvýšení roční mortality. Ačkoliv může být rakovina prostaty relativně indolentním novotvarem ve vysokém věku, je celkové zkrácení života u pacientů s tímto onemocněním přibližně 10 let. Adenokarcinom prostaty je nejčastějším zhoubným nádorem prostaty a nej častěji obsahuje maligní transformaci epiteliálních buněk v periferním regionu prostaty.

Zlepšení léčby nádorů prostaty se zaměřilo na časnou detekci.

V posledních letech zvýšilo použití skríningových testů, které detekují některé proteiny nebo peptidy secernované prostatou, t.j. markéry (například prostatický specifický antigen (PSA), prostatická kyselá fosfatasa (PAP), prostatický inhibin (PIP)), účinnost diagnostiky tohoto onemocnění u asymptomatických pacientů.

Léčba karcinomu prostaty u mužů mladších 65 let spočívá zejména v radikálním chirurgickém zákroku, například prostatektomii, a/nebo radioterapii, ale vliv těchto agresivních postupů na celkové přežití je diskutabilní. Léčba mužů starších 65 let je více konzervativní a je založena na ablaci nebo kontrole produkce testosteronu. Této kontroly je obvykle dosaženo chirurgickou kastrací, podáním inhibitorů sekrece gonadotropinů v hypofýze jako jsou estrogeny nebo analogy spouštěcího hormonu pro luteinizační hormon (LHRH) nebo kombinací těchto postupů. Estrogeny, jako je diethylstilbestrol, jsou účinnými inhibitory uvolňování luteinizačního hormonu (LH) z hypofýzy, t.j. inhibují uvolňování gonadotropinů, který reguluje produkci testosteronu, a proto může podávání estrogenů způsobit snížení testosteronu na kastrační hladiny. Maximální snížení koncentrace plasmatického testosteronu je obvykle dosaženo dávkou 3 mg/den • · ···· ·· · · ·« 4 · ·· · ···· ···· • · ···· ···· • · · · · · ·· ······ • · ···· · « diethylstilbestrolu. Jiné estrogeny, jako jsou například konjugované estrogeny, jsou přibližně stejně účinné ve snížení plasmatické koncentrace testosteronu jako diethylstilbestrol. Nicméně, diethylstilbestrol má špatný kardiovaskulární profil a úmrtí na kardiovaskulární onemocnění není výjimkou u pacientů léčených vysokými dávkami diethylstilbestrolu. Proto, ačkoliv jsou dávky do 3 mg/den diethylstilbestrolu obvykle bezpečné, není tento léčebný režim indikován pro muže s preexistujícím kardiovaskulárním onemocněním.

Karcinom prostaty často metastazuje do pánve a bederních obratlů, což způsobuje ztrátu kostní hmoty a s ní spojenou bolest. Hormonální terapie může mít často významný paliativní účinek u metastazujícího karcinomu prostaty, se zlepšením kostních bolestí a jiných příznaků spojených s onemocněním. Androgenní ablace nebo kontrola je proto také hlavní pomocnou terapií u pokročilého metastatického karcinomu prostaty.

I přes počáteční zlepšení při hormonální terapii většina pacientů s lokálně pokročilým nebo metastatickým onemocněním progreduje a selže v odpovědi na další hormonální terapii. Radioterapie může často zlepšit příznaky bolestí kostí, ale není kurativní. Časem onemocnění progreduje do fatálního konce.

Jak bylo uvedeno výše, hyperplasie prostaty je jiným častým proliferativním onemocněním prostaty. Onemocnění postihuje muže ve věku nad 45 let a jeho frekvence se zvyšuje s věkem. Hyperplasie prostaty začíná v periurethrální oblasti jako lokalizovaná proliferace a progreduje tak, že stlačuje zbývající normální žlázu. Hyperplasie může komprimovat a uzavřít urethru. Léčba zahrnuje chirurgický zákrok a podání inhibitorů hypofyzárních gonadotropinů a/nebo inhiborů 5a-reduktasy.

• · · ··· ···

V jiné oblasti fyziologie a biochemie, v oblasti vitaminu D, určil důkladný výzkum probíhající v posledních dvou desetiletích významné biologické úlohy pro vitamin D, jiné než jeho klasické funkce v kostním a minerálovém metabolismu. Specifické jaderné receptory pro la,25-dihydroxyvitamin D₃, hormonálně aktivní formu vitaminu D, jsou přítomné v buňkách různých orgánů, které se neúčastní na homeostase vápníku. Například Miller et al., 52 Cancer Res. (1992) 515 - 520, popisuje biologicky aktivní specifické receptory pro la,25-dihydroxyvitamin D₃ v buněčné linii lidského karcinomu prostaty, LNCaP.

Bylo popsáno, že některé sloučeniny vitaminu D a jeho analogy jsou účinnými inhibitory proliferace maligních buněk a induktory/stimulátory buněčné diferenciace. Bylo prokázáno, že la,25-dihydroxyvitamin D₃ reguluje buněčný růst a navozuje diferenciaci mnoha maligních buněk. Například, U.S. patent č. 4391802, Suda et al., popisuje že sloučeniny la-hydroxyvitaminu D, zejména la,25-dihydroxyvitamin D₃ a Ια-hydroxyvitamin D₃, mají silnou antileukemickou aktivitu, která je způsobena indukcí diferenciace maligních buněk (zejména leukemických buněk) na nemaligní makrofágy (monocyty) a ža tyto sloučeniny jsou použitelné pro léčbu leukemie. Antiproliferativní a diferenciační působení la,25-dihydroxyvitaminu D₃ a jiných analogů vitaminu D₃ bylo popsáno i v souvislosti s buněčnými liniemi karcinomu prostaty. Nověji byla popsána asociace mezi genovým polymorfismem genu pro receptor pro vitamin D a rizikem vzniku karcinomu prostaty, což naznačuje, že receptory pro vitamin D mohou mít funkci ve vzniku - a možná léčbě - karcinomu prostaty.

Tyto předběžné studie se zaměřily výlučně na sloučeniny vitaminu D₃. I když mohou být tyto sloučeniny vysoce účinné v navození diferenciace maligních buněk v kultuře, jejich praktické využití v diferenciační terapii jako protinádorových činidel je ·· ···· ···· ·♦ ·· ·· 99

9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 99 9 9 9 9 • · 9 99 99 999 999

9 9 9 9 9 9 • 99 99 99 99 významně omezeno z důvodů jejich stejně vysoké účinnosti na metabolismus vápníku. V koncentracích nutných pro in vivo použití jako antileukemických činidel indukují tyto sloučeniny značně zvýšené a potenciálně nebezpečné koncentrace vápníku v krvi z důvodů jejich vlastní kalcemické aktivity. To znamená, že klinické použití la,25-dihydroxyvitaminu D_s a jiných analogů vitamínu D₃ jako protinádorových činidel je vyloučeno nebo výrazně limitováno z důvodů rizika hyperkalcemie. Toto ukazuje na potřebu terapie vitaminem D s vyšší specifickou aktivitou a selektivitou účinku, t.j. sloučenin vitaminu D a/nebo přípravků obsahujících vitamin D s antiproliferativními a diferenciačními účinky, ale s menší aktivitou pro vznik hyperkalcemie. Konkrétně existuje potřeba takové terapie vitaminem D, která může být podána orálně za dosažení takových koncentrací aktivního vitaminu D v krvi, které jsou dostatečné pro antiproliferativní a prodiferenciační účinky bez rizika hyperkalcemie. Potřeba takové terapie vitaminem D není v žádné oblasti vyšší, než při léčbě hyperplasie prostaty a nádorových onemocnění prostaty.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález obsahuje způsob pro léčbu onemocnění prostaty, jako jsou stavy charakterizované hyperproliferací buněk a/nebo abnormální diferenciací buněk, například karcinom prostaty a hyperplasie prostaty. Způsob obsahuje podání prostředku obsahujícího vitamin D s oddáleným a/nebo prodlouženým uvolňováním subjektu, který trpí takovým onemocněním, pro inhibici abnormálního růstu buněk a pro navození diferenciace buněk. Prostředky obsahující vitamin D s oddáleným a/nebo prodlouženým uvolňováním zahrnují sloučeniny

Ια-hydroxyprevitaminu D a/nebo sloučeniny aktivního vitaminu D v prostředku s oddáleným a/nebo prodlouženým uvolňováním.

·· fcfcfc· • · fcfc fcfc ·«·· • · fcfcfc··· ·«· ··· fc fc fcfcfc fc « ·

Uvedená výhoda a další výhody předkládaného vynálezu jsou realizovány v jednom jeho aspektu ve způsobu pro inhibici hyperproliferativní aktivity lidských nádorových buněk nebo hyperplastických buněk prostaty, který obsahuje léčbu účinným množstvím vitaminu D, který je obsažen v prostředku s opožděným a/nebo prodlouženým uvolňováním. Léčba zahrnuje inhibici proliferace a indukci a zesílení diferenciace takových prostatických buněk a výhodným způsobem podání je orální podání. Prostředky se zpomaleným uvolňováním obsahují

Ια-hydroxyprevitaminu D a/nebo sloučeniny aktivního vitaminu D v matrici se zpomaleným uvolňováním. Prostředky se zpomaleným uvolňováním dále obsahují enterální potah aktivních složek.

Výhodnými sloučeninami Ια-hydroxyprevitaminu D pro prostředky se zpomaleným nebo opožděným uvolňováním podle předkládaného vynálezu jsou la,25-dihydroxyprevitamin D₃, la,24-dihydroxyprevitamin D₃, la,25-dihydroxyprevitamin D₂, Ια-hydroxyprevitamin D₂, la,24-dihydroxyprevitamin D₄, a Ια-hydroxyprevitamin . Výhodnými sloučeninami aktivního vitaminu D jsou la,25-dihydroxyvitamin D₃, la, 24-dihydroxyvitamin D₃, la-hydroxyvitamin D₃, la,25-dihydroxyvitamin D₂, Ια-hydroxyvitamin D₂, la,24-dihydroxyvitamin D₄, a Ια-hydroxyvitamin D₄.

Účinné nebo terapeutické množství sloučenin Ια-hydroxyprevitaminu D, v jednotkové dávkové formě, je 0,01 gg/kg/den až 2,0 /zg/kg/den, a obdobně, množství aktivního vitaminu D v prostředku s oddáleným a/nebo zpomaleným uvolňování je 0,01 /xg/kg/den až 2,0 gg/kg/den.

Dalším aspektem vynálezu je způsob pro léčbu karcinomu prostaty u lidí, při kterém je muži s diagnostikovaným karcinomem prostaty podáno účinné množství sloučeniny vitaminu D, kde touto ·· 44 44

4 4 9 9 4 4 4

4444 4444 • · · · ·· · · ······ • · 4 4 4 4 4 4 ·· 4444 sloučeninou je sloučenina Ια-hydroxyprevitaminu D a/nebo sloučenina aktivního vitaminu D v prostředku s opožděným a/nebo prodlouženým uvolňováním, kdy u tohoto prostředku je významně nižší riziko hyperkalcemie než u Ια,25-dihydroxyvitaminu D_a, ať. podaného samostatně nebo v prostředcích známých v oboru, pro snížení nebo pro stabilizaci abnormální proliferativní aktivity buněk nádoru. Tak kromě zmírnění onemocnění prostaty překonávají prostředky podle předkládaného vynálezu nedostatky současných orálních prostředků obsahujících vitamin D tím, že poskytují orální prostředky obsahující vitamin D s oddáleným a/nebo prodlouženým uvolňováním.

V jednom provedení je orálním prostředkem vitamin D se zpomaleným uvolňováním (SR), který obsahuje sloučeninu la-hydroxyprevitaminu D nebo sloučeninu aktivního vitaminu D v matrici se zpomaleným uvolňováním (zde SR pre D a SR aktivní D, v příslušném pořadí). Ια-hydroxyprevitamin D je výhodně sloučenina vzorce (I) nebo (II), jak jsou definovány dále. Sloučeniny vzorce (I) a (II) zahrnují Ια-hydroxyprevitamin D, la,24-dihydroxyprevitamin D a la,25-dihydroxyprevitamin D.

V SR pre D prostředku podle předkládaného vynálezu, t.j. prostředku, který obsahuje Ια-hydroxyprevitamin D jako aktivní složku, působí Ια-hydroxyprevitamin D jako proléčivo pro aktivní vitamin D, který inhibuje abnormální proliferaci buněk a indukuje nebo zesiluje diferenciaci buněk u nemocí prostaty. Pomalé zvyšování koncentrací aktivního Ια-hydroxyvitaminu D nebo jeho metabolitu v krvi, které je způsobeno podáním

Ια-hydroxyprevitaminu D, je dosaženo s významně nižší hyperkalcemií, než je přítomna při orálním podání la, 25-dihydroxyvitaminu D₃.

SR pre D, Ια-hydroxyprevitamin D, je dodán ve formě, která je • ft ftft ft· ftft ftft · ftftft# ftftftft ft · ftftft· ftftftft ft ft ftft ftft ftft ftftft ftftft • ft ftftftft ftft ·· ftftftft relativně stabilní při teplotě okolí a která je prostá rozpouštědel, Ια-hydroxyprevitamin D je podán lidem nebo zvířatům v orálním prostředku. Jak je Ια-hydroxyprevitamin D uvolňován z orálního prostředku, je absorbován ze střeva.

Ια-hydroxyprevitamin D je inaktivní, t.j. neváže se na receptorový protein pro vitamin D a nestimuluje absorpci vápníku ve střevě. Jak se Ια-hydroxyprevitamin D ohřeje na tělesnou teplotu zvířete nebo člověka, tak se termálně přemění na odpovídající aktivovaný Ια-hydroxyvitamin D. Termální konverze na aktivní sloučeninu trvá dostatečně dlouhou dobu, takže většina této konverse probíhá po absorpci la-hydroxyprevitaminu D ze střeva zvířete nebo člověka. Proto je při podání SR pre D dosaženo vyšší dlouhodobé koncentrace odpovídajícího aktivovaného vitaminu D v krvi s významně nižší stimulací absorpce vápníku ve střevu, než je tomu při orálním podání odpovídajícího aktivovaného vitaminu D samotného.

V SR aktivní D prostředcích podle předkládaného vynálezu je aktivovaný vitamin D inkorporován do matrice pro zpomalené uvolňování, která je vhodná pro orální podání. To znamená, že aktivovaný vitamin D je připraven tak, že je navázán na matrici, která umožňuje zpomalené uvolňování při kontaktu se střevním obsahem.

Ve druhém provedení předkládaného vynálezu je orální prostředek podle předkládaného vynálezu vitamin D s opožděným nebo zpomaleným uvolňováním (DSR), například vitamin D se zpomaleným uvolňováním s enterálním potahem. Matrice obsahující Ια-hydroxyprevitaminu D nebo aktivovaný vitamin D je vhodným způsobem pokryta enterálním potahem, který je resistentní na desintegraci v žaludeční kapalině. Enterálně potažený prostředek se zpomaleným uvolňováním obsahující vitámin D, t.j. vitamin D s opožděným zpomaleným uvolňováním (zde označený jako DRS pre D a φφφφ φφ φφ φφ φφ * * φ «φφφ φφφφ • φ φφφφ φφφφ • · φ φ · · φφ φφφ φφφ • φ φφφφ φ « φφφφφ φφ «φ φφ φφ

DRS aktivovaný nebo aktivní D, v příslušném pořadí) je potom orálně podán zvířeti nebo člověku. Při průchodu DSR pre D nebo DSR aktivovaný D podle předkládaného vynálezu proximální částí tenkého střeva se enterální potah rozpouští. Matrice obsahující Ια-hydroxyprevitamin D nebo aktivní vitamin D je vystavena působení střevní kapaliny a Ια-hydroxyprevitamin D nebo aktivní vitamin D je postupně uvolňován v průběhu prodlouženého časového období a je absorbován ze střeva. Protože většina aktivovaného vitaminu D nebo odpovídajícího Ια-hydroxyvitaminu D z hydroxylováného previtaminu je absorbována za proximální částí tenkého střeva, dochází k redukované stimulace vstřebávání vápníku ze střeva. Toto redukuje riziko hyperkalcemie a hyperkalcurie, což zvětšuje terapeutický interval. Postupné uvolňování také umožňuje dosažení vyšších dlouhodobých koncentrací aktivovaného vitaminu D v séru a proto také lepšího účinku na chorobné tkáně prostaty.

Orální DSR prostředky podle předkládaného vynálezu mohou také výhodně obsahovat kombinaci aktivovaného previtaminu D a aktivovaného vitaminu D (zde jsou označeny jako DSR aktivovaný pre D a D) . Toto provedení vynálezu obsahuje jednu nebo více ze sloučenin vzorce (I), (II), (III) a/nebo (IV), které jsou obsaženy v enterálně potaženém prostředku se zpomaleným uvolňováním, který je vhodný pro orální podání.

Tak je při léčbě onemocnění prostaty, například karcinomu prostaty nebo hyperplasie prostaty, subjektu orálně podáno účinné množství SR vitaminu D, kterým je la-hydroxyprevitaminu D a/nebo aktivní vitamin D v matrici se zpomaleným uvolňováním, nebo účinné množství DSR aktivovaného vitaminu D nebo DSR aktivovaného pre D, nebo účinné množství DSR aktivovaného pre D a D, pro dosažení zvýšené koncentrace aktivovaného vitaminu D v krvi zvířete nebo člověka, pro inhibici proliferace buněk prostaty a pro indukci nebo zesílení diferenciace buněk.

·· ftftft·

• · ft · · ♦ · ftft ft··* ft ft· ft* ftft ftft • · ««ftft • ft · · ft · • ftft ftftft ftftft ftft ftft • ft ftft ftft

Pro léčbu onemocnění prostaty podle předkládaného vynálezu je SR vitamin D nebo DSR vitamin D výhodně podán samostatně jako aktivní složka {t.j. jako první protinádorové činidlo), nebo ve směsi obsahující druhé protinádorové činidlo, činidlo způsobující ablaci androgenů, inhibitor 5a-reduktasy nebo jejich kombinaci.

Jiným aspektem předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek, který obsahuje první protinádorové činidlo, kterým je SR vitamin D nebo DSR vitamin D a činidlo vybrané ze skupiny skládající se z (i) druhého protinádorového činidla, (ii) činidla ovlivňujícího kosti, (iii) činidla, které způsobuje androgenní ablaci a (iv) inhibitoru 5a-reduktasy a jejich kombinací, a fyziologicky přijatelný nosič. Sloučenina aktivního vitaminu D je přítomna v dávce od přibližně 0,01 ug/kg/den do přibližně 2,0 gg/kg/den; aktivní previtamin D je také přítomen v dávce od přibližně 0,01 ^g/kg/den do přibližně 2,0 ug/kg/den.

Další výhody a úplné pochopení určitých provedení, variant složení a fyzikálních vlastností bude zřejmé po prostudování následujícího podrobného popisu výhodných provedení a obrázků a připojených patentových nároků. Je třeba si uvědomit, že obrázky jsou uvedeny pro ilustraci a popis a nijak neomezují rozsah předkládaného vynálezu.

Popis obrázků na připojených výkresech

Příklady výhodných provedení předkládaného vynálezu jsou popsány spolu s připojenými výkresy, ve kterých jsou pro stejné prvky použita stejná označení a kde:

Obr. 1 je graf konverse určitých la-hydroxyprevitaminů na ·· ·· • · · · • · · · • · · · · • · · · • · · · vitaminy v závislosti na čase; a

Obr. 2 je graf zobrazující očekávané výsledky koncentrací aktivního vitaminu D v závislosti na čase po podání DSR aktivovaného D.

Předkládaný vynález obsahuje účinný způsob léčby neoplastických a hyperplastických onemocnění. Konkrétně se předkládaný vynález týká terapeutických způsobů pro inhibici, zmírnění nebo zmenšení hyperproliferativní aktivity buněk u onemocnění prostaty, například u rakoviny prostaty nebo u hyperplasie prostaty. Předkládaný vynález obsahuje nový způsob léčby pro pacienty s hyperproliferativním onemocněním jako je karcinom prostaty nebo hyperplasie prostaty, který obsahuje podání léku, kterým je la-hydroxyprevitamin D nebo DSR aktivní vitamin D nebo aktivní previtamin D. Lék je podán pacientovi bez toho, že by způsobil hyperkalcemii nebo hyperkalcurii, která by omezovala dávku, t.j. bez nefyziologicky vysokých a škodlivých koncentrací vápníku v séru a v moči, v příslušném pořadí. Tohoto je dosaženo pomocí určitých chemických a fyzikálních vlastností sloučenin podle předkládaného vynálezu.

Ve způsobu podle předkládaného vynálezu je při podání účinných množství SR vitaminu D nebo DSR vitaminu D pacientům s karcinomem prostaty nebo hyperplasií prostaty proliferační aktivita abnormálních prostatických buněk inhibována nebo snížena a je indukována nebo navozena diferenciace buněk, za vzniku významně nižší heparkalcemie a hyperkalcurie, než je pozorována po podání stejného množství aktivovaného vitaminu D v dříve známých prostředcích. Proto mají léky podle předkládaného vynálezu lepší terapeutický index. Účinná množství aktivních složek v SR a DSR • · · · · · ···· • · · φ · · ·· ······ prostředcích pro léčbu neoplastických a hyperplastických onemocnění prostaty je v rozmezí od přibližně 0,01 ug/kg/den do přibližně 2,0 ug/kg/den pro la-hydroxyprevitamin D a od přibližně

0,01 /zg/kg/den do přibližně 2,0 ^g/kg/den pro aktivní vitamin D.

Je známo, že vitamin D₃ musí být hydroxylován v Cl a C25 pozici před tím, než je aktivován, t.j. před tím, než vyvolá biologickou odpověď. Zdá se, že podobný metabolický děj je nutný pro aktivaci jiných forem vitaminu D, například vitaminu D₌ a vitaminu D₄. Proto zahrnuje termín aktivovaný vitamin D nebo aktivní vitamin D, jak je zde použit, sloučeniny vitaminu D nebo jeho analogy, které byly hydroxylovány v alespoň Cl pozici A kruhu molekuly a které se vážou nebo konvertují/metabolizuji na sloučeninu, která se váže na receptor pro vitamin D (VDR). Jinými slovy, ve druhém případě je la-hydroxyvitamin D dále hydroxylován na sloučeninu,která je potom schopna vazby na VDR. Podobně, termín aktivovaný previtamin D označuje sloučeninu previtaminu D, která byla hydroxylována v alespoň Cl pozici A kruhu molekuly a která je konvertována/metabolizována na sloučeninu, která se váže na receptor pro vitamin D (VDR).

Jak je zde použit, znamená termín nižší ve spojitosti s alkylem nebo acylem přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec mající 1 až 4 atomy uhlíku. Konkrétními příklady takových uhlovodíkových řetězců jsou methyl, ethyl, propyl, butyl, isobutyl, t-butyl, ethenyl, propenyl, butenyl, isobutenyl, isopropenyl, formyl, acetyl, propionyl nebo butyryl. Termín aromatický acyl označuje nesubstituovanou benzoylovou skupinu jako je nitrobenzoyl nebo dinitrobenzoyl. Termíny léčení nebo léčba označují zmírnění, zmenšení, vyléčení nebo prevenci onemocnění prostaty, stejně jako inhibici abnormální proliferace nebo hyperproliferace buněk a navození, indukci a/nebo zvýšení diferenciace buněk.

• ···· · · • · · · · • · · · • · · · · ·

• ·

Sloučeniny Ια-hydroxyprevitaminu D a sloučeniny aktivního vitaminu D v SR nebo DSR prostředcích podle předkládaného vynálezu jsou takové sloučeniny, které mají účinnou antiproliferační a diferenciační aktivitu (t.j. působí proti maligní transformaci), zejména na buňky chorobně změněné prostaty, například při karcinomu prostaty nebo při hyperplasii prostaty, ale zároveň mají nižší potenciál pro vyvolání nežádoucích účinků hyperkalcemie a hyperkalcurie, nebo je nevyvolávají vůbec. Jinými slovy, prostředky nebo léčiva podle předkládaného vynálezu působí na maligní nebo hyperproliterativní buňky jako antiproliferativní a diferenciační činidla bez toho, že by významným způsobem ovlivňovaly metabolismus vápníku. Opožděné nebo zpomalené uvolňování prostředků podle předkládaného vynálezu je činí vhodnými pro bezpečnou inhibici hyperproliferace a pro dosažení diferenciace maligních buněk. Prostředky podle předkládaného vynálezu tak překonávají nevýhody známých prostředků obsahujících aktivní vitamin D, které byly zmíněny výše a mohou být považovány za výhodná činidla pro kontrolu a pro léčbu maligních onemocnění jako je karcinom prostaty, stejně jako pro léčbu benigní hyperplasie prostaty.

Výhodná provedení prostředků nebo léků podle předkládaného vynálezu použitých v terapeutických způsobech pro zmírnění určitých onemocnění prostaty mohou být popsána následujícím způsobem.

Prvním provedením léku podle předkládaného vynálezu je SR prostředek, který obsahuje v podstatě čistý la-hydroxyprevitamin D nebo aktivní vitamin D v matrici pro zpomalené uvolňování. Bylo zjištěno, že při orálním podání v podstatě čistého la-hydroxyprevitaminu D je dosaženo vyšší dlouhodobé koncentrace aktivního vitaminu D v krvi a významně nižší hyperkalcemie a hyperkalcurie, než je tomu při orálním podání aktivovaného

• · · · · · • « vitaminu D v dříve známých prostředcích, Ια-hydroxyprevitamin D je proto použitelný pro léčbu onemocnění prostaty. Jak je zde použit, znamená termín v podstatě čistý nejméně z 85% čistý Ια-hydroxyprevitamin D. Termín douhodobá, jak je zde použit, znamená koncentraci v krvi, která zůstává relativně konstantní (t.j. ± 10 pg/ml nebo + 10% průměrné hodnoty) po dobu delší, než je definovaná doba, t.j. typicky delší než 4 hodiny.

Je známo, že vitamin D₃ je syntetizován endogenně v kůži zvířat a lidí ze 7-dehydrocholesterolu fotochemickou reakcí zprostředkovanou ultrafialovým zářením, kdy dochází k rozštěpení B kruhu 7-dehydrocholesterolu mezi uhlíkem 4 a uhlíkem 9 za vzniku previtaminu D₃. Trien previtaminu D₃ je nestabilní a časem se termálně přemění na vitamin D₃. Při normální tělesné teplotě existuje rovnováha mezi previtaminem D₃ a vitaminem D₃, jak je uvedena dále.

P re vitamin D,

Jak je vitamin D dále metabolizován rovnováha směrem k formě vitaminu D vitamin D₃ in Vivo, posouvá se Podobná konverse a rovnovážný stav existují pro Ια-hydroxyprevitamin D.

Ια-hydroxyprevitamin D podle předkládaného vynálezu má obecný vzorec (I):

·· ····

(I) kde R₄ je vedlejší řetězec mající alespoň 7 atomů uhlíku a může být rozvětvený nebo nerozvětvený, nasycený nebo nenasycený, heterosubstituovaný nebo non-heterosubstituovaný, cyklický nebo necyklický, a kde termální izomer Ια-hydroxyprevitaminu D obecného vzorce (I) je aktivní vitamin D a zvyšuje koncentraci sérového vápníku u vitamin D-deficientních krys, jak je to určeno standardními metodami používanými biochemiky v oblasti vitaminu D.

Výhodnými la-hydroxyprevitaminy D podle tohoto provedení

kde B a C jsou buď vodíková vazba nebo vazba uhlík-uhlík tvořící dvojnou vazbu mezi C22 a C23; R¹ a R² jsou každý nezávisle vodík, hydroxylová skupina, fluor, nižší alkyl, nižší fluoralkyl,

O-nižší alkyl, nižší alkenyl, nižší fluoralkenyl, O-nižší alkenyl, O-nižší acyl, O-aromatický acyl, nižší cykloalkyl, nebo tvoří dohromady s uhlíkem, na který jsou navázány, C₃-C_s uhlíkový kruh; R³ je vodík, fluor, nižší alkyl, nižší alkenyl, nižší

fluoralkyl, nižší fluoralkenyl, O-nižší alkyl, O-nižší alkenyl,

O-nižší acyl, O-aromatický acyl nebo nižší cykloalkyl; X¹ je vodík nebo hydroxylová skupina; a X₂ je vodík, hydroxyl nebo tvoří spolu s R^x nebo R² dvojnou vazbu. Výhodné takové sloučeniny vzorce (II), t.j. výhodné Ια-hydroxyprevitaminy D, jsou:

la,25-dihydroxyprevitamin D₃ [la,25-(OH)₂preD₃];

la,24,25-trihydroxyprevitamin D₃ [la,24,25-(OH)₃preD₃];

la-hydroxyprevitamin D₃ [la-(OH)preD₃];

la, 24-dihydroxyprevitamin D₃ [la,24-(OH)₂preD₃);

la,24-dihydroxy-25-fluor-previtamin D₃ [la,24-(OH)₂-25-FpreD₃] la,25-dihydroxyprevitamin D₂ [la,25-(OH)₂preD₂];

la,24,25-trihydroxyprevitamin D₂ [la,24,25-(OH)₃preD₂];

la-hydroxyprevitamin D₂ [la-(OH)preD₂];

la, 24-dihydroxyprevitamin D₂ [la,24-(OH)₂preD₂];

la,24-dihydroxy-25-fluor-previtamin D₂ [la,24-(OH)₂-25-FpreD₂] la,25-dihydroxyprevitamin D₄ [la,25-(OH)₂preD₄];

la,24,25-trihydroxyprevitamin D₄ [la, 24,25-(OH)₃preD₄];

la-hydroxyprevitamin D₄ [la-(OH)preD₄];

la,24-dihydroxyprevitamin D₄ [la,24-(OH)₂preD₄];

la,24-dihydroxy-25-fluor-previtamin D₄ [la,24-(OH)₂-25-FpreD₄]

U těch sloučenin vzorce (II), které mají centrum chirality ve vedlejším řetězci, například v C24, patří jak oba epimery (například R a S), tak racemické směsi do rozsahu předkládaného vynálezu.

Ve výhodném provedení jsou sloučeniny vzorce (I) nebo (II) dodány ve v podstatě čisté, krystalické formě neobsahující rozpouštědla. V takové formě je la-hydroxyprevitamin D dosti stabilní při pokojové teplotě s minimální přeměnou na Ια-hydroxyvitamin D. Sloučeniny vzorce (I) nebo (II), t.j. la-hydroxyprevitamin D, mohou být snadno vyrobeny v krystalické • ft ftft ftft ·· ftft · ···· ftftft· • · ftft ftft ···· ft · ······ ··· «·· „ _ ···*·· ftft ···· · ·· ♦· ·· ·· • ft ft··· formě postupem, který popsal Vandewalle et al., v U.S. patentu 4539153.

Sloučeniny Ια-hydroxyprevitaminu D v tomto provedení mohou být zpracovány za použití běžných farmaceutických metod pro výrobu léčiv pro podání pacientům, například savcům, včetně lidí. Například, dávkové formy sloučenin vzorců (I) nebo (II) s běžnými přísadami zahrnují směsi vhodné pro orální podání. Dávkové formy Ια-hydroxyprevitaminu D mohou být kombinovány s jakýmkoliv netoxickým, farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je kukuřičný škrob, laktosa nebo sacharosa, který nereaguje nežádoucím způsobem s aktivními sloučeninami. Prostředek může být ve formě tablet, kapslí, prášků, pastilek a zdravotních bonbonů. Při každém způsobu výroby prostředku je třeba vyvarovat se expozici rozpouštědlům a teplu, protože za takových podmínek je tendence k přeměně části Ια-hydroxyprevitaminu D na formu lce-hydroxyvitaminu D. Protože je třeba se vyhnout použití tepla a rozpouštědel, je výhodným způsobem výroby tablet metoda známá jako granulace za sucha, t.j., la-hydroxyprevitamin D je bez přítomnosti rozpouštědel a je termostabilní při teplotě okolí.

la-hydroxyprevitamin D je podán zvířeti nebo člověku v prostředku pro orální podání. Jak je Ια-hydroxyprevitamin D uvolňován z orálního prostředku, je vstřebáván ze střeva, la-hydroxyprevitamin D neinteraguje s receptorovym proteinem pro vitamin D na enterocytech a proto nestimuluje absorpci vápníku ve střevu.

Je také známo, že vazba aktivovaného vitaminu D na proteinový receptor pro vitamin D enterocytů aktivuje uvolnění enzymů, které degradují významnou část nenavázaného aktivovaného vitaminu D ve střevu. Tato degradace snižuje množství aktivovaného vitaminu D, které je dostupné pro absorpci do krevního oběhu. Protože se ···· • 9 9

99 • 9 9

9 9

99 ·· 9

9 9 9

999 999 • 9 la-hydroxyprevitamin D neváže na proteinový receptor pro vitamin

D, nevyvolává indukci takových enzymů. Proto probíhá menší degradace ve střevu a proto je dostupné vyšší množství pro absorpci do krevního oběhu, než je tomu v případě odpovídajícího aktivovaného vitaminu D.

Po ohřátí Ια-hydroxyprevitaminu D na tělesnou teplotu zvířete nebo člověka je termálně přeměněn na odpovídající aktivovaný vitamin D. Reakční doba pro termální konversi na aktivní formu je dostatečně dlouhá, takže většina konverse probíhá po absorpci Ια-hydroxyprevitaminu D. Proto způsobuje podání orálních prostředků obsahujících la-hydroxyprevitamin D vyšší dlouhodobé koncentrace odpovídajícího aktivovaného vitaminu D v krvi, za významně nižší stimulace absorpce vápníku ve střevu, než je tomu u srovnatelné orální dávky aktivovaného vitaminu D samotného.

Tak je při orálním podání la-hydroxyprevitatiiinu D dosaženo vyšších dlouhodobých koncentrací aktivního vitaminu D pro léčbu neoplastických a hyperplastických onemocnění prostaty bez významné kalcemické aktivity, oproti srovnatelné orální dávce aktivního vitaminu D samotného.

Aktivní vitamin D v SR prostředku podle předkládaného vynálezu je výhodně 1a-hydroxyvitamin D mající obecný vzorec (III):

din • · ·« ·· ·· ·· • · · · 9 9 9

999 9 99 9

99 999 999

9 9 9 9

99 99 99 kde R_a je vedlejší řetězec mající alespoň 7 atomů uhlíku a může být rozvětvený nebo nerozvětvený, nasycený nebo nenasycený, heterosubstituovaný nebo non-heterosubstituovaný, cyklický nebo necyklický, nebo jakákoliv sloučenina vitaminu D nebo homolog vitaminu D, který se váže na proteinový receptor pro vitamin D.

Výhodnými la;-hydroxy vit aminy D podle tohoto provedení předkládaného vynálezu jsou sloučeniny vzorce (IV):

kde B a C jsou buď vodíková vazba nebo vazba uhlík-uhlík tvořící dvojnou vazbu mezi C22 a C23; R¹ a R² jsou každý nezávisle vodík, hydroxylová skupina, fluor, nižší alkyl, nižší fluoralkyl,

O-nižší alkyl, nižší alkenyl, nižší fluoralkenyl, O-nižší alkenyl, O-nižší acyl, O-aromatický acyl, nižší cykloalkyl, nebo tvoří dohromady s uhlíkem, na který jsou navázány, C₃-C_s uhlíkový kruh; R³ je vodík, fluor, nižší alkyl, nižší alkenyl, nižší fluoralkyl, nižší fluoralkenyl, O-nižší alkyl, O-nižší alkenyl, O-nižší acyl, O-aromatický acyl nebo nižší cykloalkyl; X^x je vodík nebo hydroxylová skupina; a X₂ je vodík, hydroxyl nebo tvoří spolu s R¹ nebo R² dvojnou vazbu. Výhodné sloučeniny vzorce (IV), t.j. výhodné la-hydroxyvitaminy D, jsou:

• · • · ftft • ft ···· ft · ft ftftftft • ft ·· • · · • · « ftftft ··· la,25-dihydroxyvitamin D₃ [la,25-(0H)₂D₃];

la, 24,25-trihydroxyvitamin D [la,24,25-(OH) Dl;

la-hydroxyvitamin D_a [la-(OH)D₃];

la-hydroxy-25-fluor-vitamin D₃ [la,24-(OH)-25-FD₃];

la,24-dihydroxyvitamin D₃ [la,24-(OH)₂D₃];

la, 24-dihydroxy-25-fluor-vitamin D₃ [la,24-(OH)₂-25-FD₃];

la,25-dihydroxyvitamin D₂ [la,25-(OH)₂D₂];

la,24,25-trihydroxyvitamin D₂ [la,24,25-(0H)₃D₂J;

la-hydroxyvitamin D₂ [la-(0H)D₂];

la-hydroxy-25-fluor-vitamin D₂ [la,24-(OH)-25-FD₂];

la,24-dihydroxyvitamin D₂ [la,24-(OH)₂D₂l;

la,24-dihydroxy-25-fluor-vitamin D₂ [la,24-(OH)₂-25-FD₂];

la,25-dihydroxyvitamin D₄ [la,25-(OH)_D₄];

la,24,25-trihydroxyvitamin D₄ [la,24,25-(OH)₃D₄];

la-hydroxyvitamin D [la-(OH)D ];

la-hydroxy-25-fluor-vitamin D₄ [la,24-(OH)-25-FD₄];

la,24-dihydroxyvitamin D₄ [la,24-(OH)₂D₄];

la,24-dihydroxy-25-fluor-vitamin D₄ [la,24-(OH)₂-25-FD₄].

U těch sloučenin aktivního vitaminu D, které mají centrum chirality ve vedlejším řetězci, například u la, 24-dihydroxyvitaminu D₂, patří oba epimery (například R a S) i racemické směsi do rozsahu předkládaného vynálezu.

Sloučeniny vzorce (III) a (IV) v tomto provedení mohou být zpracovány za použití běžných farmaceutických metod pro výrobu prostředků se zpomaleným uvolňováním pro podání pacientům, například savcům, včetně lidí. Například, dávkové formy sloučenin vzorců (III) nebo (IV) s běžnými přísadami zahrnuj i směsi vhodné pro orální podání. Dávkové formy Ια-hydroxyvitaminu D mohou být kombinovány s jakýmkoliv netoxickým, farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je kukuřičný škrob, laktosa nebo sacharosa, který nereaguje nežádoucím způsobem s aktivními sloučeninami.

Prostředek může být ve formě ftft ftft > ftft 4 » · ··

Velmi výhodným prostředkem vynálezu je matrice, na ktero spolu s přijatelnou farmaceup pomalé, relativně stabilní u' během 8 hodin.

tablet nebo kapslí.

v tomto provedení předkládaného iu se váže la,25-dihydroxyvitamin D_r ickou přísadou, která umožňuje .volňování la,25-dihydroxyvitaminu zpomaleného (t.j. kontrolovaného) tou být vybrány z jakýchkoliv systémů ivních složek v čase čtyř a více ovou matricí a systému Eudragit RS/RL adt, Germany).

Prostředky pro dosažení uvolňování aktivní složky mo pro rovnoměrné uvolňováníakt hodin, včetně systémů s vosk (Rohm Pharma, GbMH, Weiterst

V systémech s voskovou ma ve vosku, který se pomalu ro postupně uvolňuje aktivní sl tricí je aktivní složka dispergována zpouští v tělesných kapalinách a ožku.

Výhodných systémem s kont podání je Eudragit RL/RS sys rolovaným uvolňováním pro orální tém, ve kterém je aktivní složka, aktivovaný vitamin D, kombiriována s matricí pro kontrolované uvolňování a je sprejem nanesena na granule rozměru 25/30 mesh. Granule jsou potom rovnoměrně potaženy tenkým polymerickým lakem, který je nerozpustný ve vodě, ale který je pomalu propustný pro vodu. Potažené: granule mohou být smíseny s dalšími pomocnými činidly, jako jsou antioxidační činidla, stabilizační činidla, pojivá, kluzná činidla, činidla pro usnadnění zpracování a podobně. Směs může být stlačena do tablety, která se před použitím zpevní a suší, nebo může být vložena do kapsle. Po polknutí tablety nebo kapsle a kontaktu s vodnou střevní kapalinou začně tenká vrstvei bobtnat a umožní pomalý průnik střevní kapaliny. S průnikem střevní kapaliny lakovým potahem se pomalu uvolňují aktivní složky. Během doby, po kterou prochází

4· «·»* « « · » ·· » · · · • · 91 »· ·· 191111

1 1111 1 i

19111 91 91 ·* ·· tableta střevem, což je přibližně 8 hodin, se aktivní složky pomalu, ale zcela uvolní. Tak způsobí podaná tableta pomalé uvolňování aktivovaného vitaminu D, stejně jako jiných aktivních složek.

Eudragit systém je složen z vysoce permeabilních vrstev (RL) a z nízce permeabilních vrstev (RS). Permeabilita potahu a tak časový průběh uvolňování léku může být titrován změnami v poměru RS ku RL v potahovém materiálu.

Další podrobnosti o systému Eudragit RL/RS je možno nalézt v technických publikacích od Rohm Tech., Inc. 195 Canal Street, Maiden, Massachusetts, 02146. Viz též K. Lehmann, D. Dreher Coating of tablet and smáli particles with acrylic resins by fluid bed technology, Int. J. Pharm. Tech. and Prod. Mfr. 2(r)

- 43 (1981).

Ve druhém provedení léků nebo prostředků podle předkládaného vynálezu je jedna nebo více sloučenin aktivovaného vitaminu D nebo jeden nebo více v podstatě čistých lu-hydroxyprevitaminů D nebo jejich kombinace obsažena v enterálně potaženém prostředku se zpomaleným uvolňováním. Jinými slovy, enterálně potažený prostředek se zpomaleným uvolňováním je prostředek s opožděným, zpomaleným (DSR) uvolňováním, který obsahuje sloučeniny vzorce (I) a (II), nebo (III) a (IV), nebo jejich kombinaci.

Překvapivě bylo zjištěno, že DSR aktivovaný D prostředky podle předkládaného vynálezu významně zvyšuj i terapeutický index sloučenin aktivovaného vitaminu D. To znamená, že riziko hyperkalcemie a hyperkalcurie je významně sníženo a terapeutická účinnost je významně zvýšena pro aktivovaný vitamin D, pokud je podán orálně v DSR aktivovaný D prostředku ve srovnání s orálním podáním stejného množství aktivovaného vitaminu D ve známých

4 0

0 0

000 •

·

000 ·· orálních prostředcích obsahujících tyto sloučeniny. Dále, DSR aktivovaný D prostředky umožňují dosažení vyšších dlouhodobých koncentrací aktivovaného vitaminu D v krvi ve srovnání se známými orálními prostředky obsahujícími sloučeniny aktivovaného vitaminu

D.

·« ··*« • · * · • · ··** · • · · 0 * · ·· • ♦ 0 0 • 9 · · «· ··

Při přípravě DSR prostředků podle tohoto provedení předkládaného vynálezu jsou potažené granule obsahující sloučeninu vzorce (I), (II), (III) nebo (IV), jak jsou popsány výše, stlačeny do tablety nebo vloženy do kapsle a tableta nebo kapsle je potažena enterálním potahem, který se rozpouští při pH 6,0 až 7,0. Takovým enterálním potahovým materiálem, který je závislý na pH, je Eudragit L/S, který se rozpouští ve střevní kapalině, ale ne v žaludeční šúávě. Jiným enterálním potahem, který může být použit, je celulozaacetatftalat (CAP), který je resistentní na rozpouštění v žaludeční kapalině, ale snadno se rozpadá hydrolytickým působením střevních esteras.

Konkrétní volba enterálního potahu není zásadní, pokud je dosaženo zpomaleného nebo kontrolovaného uvolňování po dobu 4 až 8 hodin a pokud je uvolňování aktivní složky opožděno do té doby, dokud DSR prostředk nedosáhne střeva. Ačkoliv to pro předkládaný vynález není zásadní, je výhodné, aby bylo uvolňování oddáleno do té doby, dokud DSR prostředek neprojde proximální částí tenkého střeva.

Odborníkům v oboru bude jasné, že prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být také vloženy do kaplsí tvořených jinými systémy pro načasované uvolňování, jako jsou liposomové systémy, polysacharidy s pomalým mechanismem uvolňování, salistické nebo jiné polymerové implantáty nebo mikrosféry.

V takových systémech s načasovaným uvolňování je aktivní sloučenina vhodně chráněna různými degradovatelnými potahy, • · · · · · například pomocí mikroenkapsulace, pomocí mnohonásobných potahů atd., a takové prostředky umožní kontinuální uvolňování sloučeniny, kterou obsahují.

Ačkoliv byla výše popsána výhodná provedení, jediným omezením týkajícím se typu sloučeniny aktivního vitaminu D použité v předkládaném vynálezu je, že sloučenina vitaminu D samotná nebo její in vivo metabolit se váže na proteinový receptor pro vitamin D. Jediným omezením týkajícím se Ια-hydroxyprevitaminu D je, že je termálně konvertován na aktivní vitamin D, který se sám o sobě váže na VDR nebo jehož in vivo metabolit se váže na VDR.

Sloučeniny Ια-hydroxyprevitaminu D a aktivního vitaminu D, výhodně sloučeniny vzorců (I), (II), (III) a (IV), jsou použitelné jako aktivní sloučeniny ve farmaceutických prostředcích ve výše uvedených provedeních předkládaného vynálezu. Takové prostředky mohou výhodně obsahovat fyziologicky přijatelné přísady nebo vehikula. Tyto farmaceutické prostředky tvoří další aspekt předkládaného vynálezu. Dávkové formy mohou také obsahovat pomocná činidla, jako jsou konzervační činidla nebo stabilizační činidla.

Jak bylo uvedeno výše, farmakologicky aktivní sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být zpracovány za použití běžných farmaceutických metod za vzniku léků vhodných pro podání pacientům, například savcům včetně lidí. Například, sloučeniny vzorce (I) nebo (II) mohou být použity ve směsích s běžnými přísadami, například s farmaceuticky přijatelnými nosiči vhodnými pro enterální (například orální) nebo parenterální podání, které nereaguj i nežádoucím způsobem s aktivními sloučeninami.

Vhodné farmaceuticky přijatelné nosiče pro sloučeniny vzorce (III) a (IV) zahrnují, ale nejsou omezeny na, vodu, roztoky solí, ·· » <

» « • · <

akloholy, arabskou klovatinu, rostlinné oleje (například kukuřičný olej, bavlníkový olej, podzemnicový olej, olivový olej, kokosový olej), oleje z rybích jater, olejové estery jako je Polysorbate 80, polyethylenglykoly, želatinu, uhlovodany (například laktosu, amylosy nebo škrob), stearan hořečnatý, talek, kyselinu křemičitou, viskosní parafin, monoglyceridy a diglyceridy mastných kyselin, estery mastných kyselin s pentaerythritolem, hydroxymethylcelulosu, polyvinylpyrrolidon atd. Sloučeniny vzorce (I) a (II) by měly být, na druhou stranu, připraveny jako v podstatě prosté rozpouštědel.

Pro orální aplikaci jsou zejména vhodné tablety, dražé, pastilky, prášky nebo kapsle, jak byly popsány výše. Mohou být použita sladidla, pokud je žádoucí použití sladkého vehikula. Obecně jsou při léčbě hyperproliferativních onemocnění prostaty prostředky podle předkládaného vynálezu rozděleny do dávek obsahujících přibližně 0,1 ^g/kg/den až přibližně 2,0 ^g/kg/den la-hydroxyprevitaminu D a přibližně 0,1 ^g/kg/den až přibližně 2,0 ptg/kg/den aktivního vitaminu D s farmaceuticky přijatelným nosičem ve vhodné matrici a/nebo s enterálním potahem, jak je uvedeno v popisu provedení předkládaného vynálezu.

Je třeba si uvědomit, že konkrétní dávka aktivní sloučeniny v určitém případu se bude velmi lišit podle konkrétní použité sloučeniny, konkrétního prostředku, způsobu aplikace a konkrétního místa a organismu, který je léčen. Například, konkrétní dávka pro určitého pacienta závisí na věku, tělesné hmotnosti, celkovém zdravotním stavu, dietních zvyklostech, době a způsobu podání, rychlosti vylučování, na lécích použitých v kombinaci a na závažnosti onemocnění, které je léčeno. Dávky pro daného pacienta mohou být určeny běžným způsobem, například srovnáním různých aktivit konkrétní sloučeniny a známých činidel, například za použití vhodného běžného farmakologického protokolu.

• · • · • · · · · · ···· • · ·· · · · · ··· ··· • · · φ · · φ φ

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat také další terapeuticky hodnotné substance nebo mohou obsahovat více než jednu sloučeninu uvedenou v popisu a připojených nárocích ve směsi. Výhodně mohou být sloučeniny vzorců (I), (II), (III) a (IV) nebo jejich kombinace spolu s jinými terapeutickými činidly podány orálně podle výše uvedených provedení v dávce přibližně 0, 1 ^g/den až přibližně 2,0 ^g/den pro la-hydroxyprevitamin D a přibližně 0,1 ^g/den až přibližně 2,0 /zg/den pro aktivní vitamin D.

Do rozsahu předkládaného vynálezu patří současné podání účinných dávek anti-hyperproliferativních sloučenin podle předkládaného vynálezu v SR nebo DSR formě a známých činidel způsobujících ablaci androgenů nebo kontrolu jejich produkce nebo činidel snižujících koncentraci androgenů, jako jsou například estrogeny (například diethylstilbestrol), LHRH analogy, nebo inhibitorů 5a-reduktasy, jako je finasterid, antiestrogenů (jako je například Tamoxifen™), a antiandrogenů (jako je například flutamid). (Viz např. U.S. patent 5372996, který je zde uveden jako odkaz). Předpokládá se, že při použití těchto kombinací je dosaženo symbiotického účinku a lepšího terapeutického účinku. Také existuje potenciál pro terapii, při které jsou vedlejší nežádoucí účinky některého z těchto činidel, například škodlivé kardiovaskulární účinky estrogenů, významně redukovány oproti situaci, kdy jsou tato činidla použita samostatně ve vyšších dávkách. Pravděpodobné dávky těchto současně podaných činidel pro kontrolu androgenů nebo činidel snižujících koncentraci testosteronu jsou 0,002 až 0,20 ^g/kg/den.

Do rozsahu předkládaného vynálezu patří také současné podání účinných dávek Ια-hydroxyprevitaminu D nebo aktivního vitaminu D v SR nebo DSR prostředcích podle předkládaného vynálezu jako prvního protinádorového činidla v kombinaci s druhým • · · · · · ···· φ · φφ · φ · · ······ • · · · · · · · • · · · · · · · · ·· ·· protinádorovým činidlem, například cytotoxickým činidlem, zejména při léčbě metastatického karcinomu prostaty, kde došlo k relapsu při hormonální terapii. Mezi taková činidla patří estramustinfosfat, prednimustin, cisplatina, 5-fluorouracil, melfalan, hydroxyurea, mitomycin, idarubicin, methotrexat, adriamycin a daunomycin. Předpokládá se, že aktivní vitamin D vzorce (III) nebo (IV) nebo Ια-hydroxyprevitamin D vzorce (I) nebo (II) použitý v kombinaci s různými protinádorovymi léky bude mít významně vyšší cytotoxický účinek na nádorové buňky, což způsobí lepší terapeutický účinek. Konkrétně, jelikož se při použití výše popsaných kombinací využívajících nižších koncentrací protinádorových léčiv než jsou koncentrace používané při samostaném podání těchto léčiv dosáhne významně vyššího inhibičního účinku na růst buněk, je zde potenciální možnost terapie, při které jsou vedlejší nežádoucí účinky spojené s protinádorovymi léky významně redukovány oproti situaci, kdy jsou tato protinádorová činidla použita samostatně ve vyšších dávkách. Pravděpodobné dávky těchto současně podaných druhých protinádorových činidel jsou 0,1 až 1 gg/kg/den.

Do rozsahu předkládaného vynálezu také patří současné podání účinných dávek sloučenin vzorců (I), (II), (III) nebo (IV) a jiných hormonů nebo činidel, o kterých je známo, že zlepšují onemocnění nebo poruchy kostí. Jak bylo uvedeno výše, karcinom prostaty často metastasuje do kostí a způsobuje ztrátu kosti a s ní spojenou bolest. Mezi taková činidla patří konjugované estrogeny nebo jejich ekvivalenty, kalcitoríin, bisfosfonaty, vápníkové doplňky, kobalamin, tokin pertussin a bor.

Možné dávky takových současně podaných činidel jsou uvedeny v tabulce 1.

• 4 · · · · 4 4 4 4 • 4 4 4 · 4 4 · 444444 • · 4··· 4 4

4444 44 44 44 44

Tabulka 1: Možné rozmezí orálních dávek pro různá činidla podaná současně s ΐα-hydroxyvitaminem D vzorce (I)

Činidlo	Dávkové rozmezí
	široké	výhodné	nejvýhodněj š í
Konjugované estrogeny	0,3-5,0	0,4-2,4	0,6-1,2
nebo ekvivalenty (mg/den)
Fluorid sodný (mg/den)	5-150	30-75	40-60
Kalcitonin (IU/den)	5-800	25-500	50-200
Bisfosfonaty (mg/den)	0,50-20	1-15	5-10
Vápníkové doplňky (mg/den)	250-2500	500-1500	750-1000
Kobalamin (^g/den)	5-200	20-100	30-50
Toxin pertussin (mg/den)	0,1-2000	10-1500	100-1000
Bor (mg/den)	0,1-3000	1-250	2-100

Antiestrogeny jako je Tamoxifen™ jsou také známé jako činidla ovlivňující kost a mohou být použity současně se sloučeninami nebo prostředky podle předkládaného vynálezu.

Provedení předkládaného vynálezu jsou dále popsána v následujících příkladech, které neomezují rozsah předkládaného vynálezu. V následujících příkladech byla vysoceúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) provedena na Waters chromatografu, za použití Zorbax Sil ODS kolony.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Časový průběh konverse Ια-hydroxyprevitaminu D na Ια-hydroxyvitamin D • · • · · · • · · ·· · · ·· · · la-OH-D₂, Ια,24-(OH)₂preD₂ a la,25-(OH)₂D₃ • · · »· fefe·

Provede se serie pokusů, které se týkají in vitro konverse previtaminu na vitamin pro tři Ια-hydroxyprevitaminy D: Ια-hydroxyprevitamin D₂, la,24-dihydroxyprevitamin D₂ a Ια-hydroxyprevitamin D₃. Každý ΐα-hydroxyprevitamin D se rozpustí v ethanolu, inkubuje se při 37 °C ve vodní lázni a vzorky se odebírají ve dvouhodinových intervalech. Pro každý vzorek se provede analytická HPLC separace pro kvantifikaci termální konverse previtaminu na vitamin. Získaná data se normalizují pro započtení přítomnosti jakéhokoliv vitaminu v počátečním prostředku (s 10%). Výsledky jsou uvedeny na obr. 1, který je grafem % previtaminu/čas v hodinách. Pro každý previtamin se stanoví lineární regresní křivky. Z těchto křivek se určí poločas termální konverse, t.j. doba, za kterou se 50% previtaminu přemění na vitamin:

Ια-hydroxyprevitamin D₂ la,24-dihydroxyprevitamin D₂ la,25-dihydroxyprevitamin D₃

12,9 h 12,2 h 17,7 h

Tato data ukazují, že při normální tělesné teplotě trvá konverse 50% la-hydroxylováného previtaminu D na la-hydroxylováný vitamin in vitro více než 12 hodin. In vivo se očekává podobná rychlost konverse. Tak mají - oproti dřívějším předpokladům Ια-hydroxylované previtaminy rychlost konverse, která je vhodná pro orální prostředky.

Příklad 2: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky Ια-hydroxyprevitaminu D la,24-(OH)₂preD₂ • · · · · · ·* ·· ftft ·· • · · · · · ft ftftftft • · ftftftft ftftftft • · ftft ftft ftft ftftft ftftft • ft ftftftft ftft • ftftftft ftft ftft ftft ftft

Provede se pokus, ve kterém se hodnotí orální biologická dostupnost la,24-dihydroxyprevitaminu D₂ (la,24-(OH)₂preD₂).

V tomto pokusu jsou normální krysy krmené normální potravou rozděleny do léčebné a kontrolní skupiny. Krysám je orálně podána jediná dávka la,24-(OH)₂preD₂ ve frakcionovaném kokosovém oleji (FCO) (1,5 gg, což je přibližně 7,5 gg/kg). Kontrolní skupině se podá pouze vehikulum. Od obou skupin se krev odebere 6 hodin po podání dávky a analyzuje se na koncentrace vitaminu, la, 24-dihydroxyvitaminu D₂, v séru. Získaná data jsou uvedena v tabulce 2.

Tabulka 2: Sérové koncentrace la,24-dihydroxyvitaminu D₂ (la,24-(OH)₂D₂) u krys 6 hodin po podání jediné orální dávky la,24-dihydroxyprevitaminu D₂ (la,24-(OH)₂preD₂)

Testovaná sloučenina	Dávka (gg)	n	Sérová koncentrace la,24-(OH)2D2 (pg/ml)*
Vehikulum	0,000	5	13,8 ± 4,2
la,24-(OH)2preD2	1,5	5	65,5 ± 10.1

* hodnoty jsou průměr + SD

Tato data ukazují, že orálně podaný la,24-(OH)₂preD₂ je biologicky dostupný, jak je dokázáno zvýšením cirkulujícího la,24-(OH)₂D₂. Tyto výsledky jsou překvapivé a neočekávané.

Příklad 3: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky la,25-(OH)₂preD₃

Odstavení samci krys jsou krmeni dietou deficientní v obsahu vitaminu D a s normálním obsahem vápníku (0,47%). Po 4 týdnech se krysy rozdělí do dvou skupin a podá se jim orálně buď la,25-(OH)_zpreD₃ (0,25 ug/kg) ve vehikulu jako je laktosa nebo vehikulum samotné (kontrola). Čtyři hodiny po podání se krysy usmrtí a standardními technikami se měří koncentrace la,

25-(OH)₂D₃ v krvi.

Tímto pokusem se prokáže, že koncentrace la,25-(OH)₂D₃ v krvi u krys, který byl podán la,25-(OH)₂preD₃, jsou významně vyšší, než koncentrace v krvi kontrolních zvířat.

• 4 ···· • 4 · · · · · 4 4 4 4 • 4 4 4 44 4 4 4 4

4 44 44 4φ 444444

4 4444 4 4

44·44 44 44 44 44

Příklad 4: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky la,25-(OH)₂preD₃

Odstavení samci krys jsou krmeni dietou deficientní v obsahu vitaminu D a s normálním obsahem vápníku (0,47%) a P (0,3%) . Po 4 týdnech na této dietě se krysy rozdělí do 17 skupin a orálně se jim podá buď la,25-(OH)₂preD₃ nebo la,25-(OH)₂preD₃ ve vehikulu jako je laktosa nebo vehikulum samotné (kontrolní skupina). Jedna skupina se usmrtí 8 hodin po podání vehikula. 8 skupinám se orálně podá jediná dávka la,25-(OH)₂preD₃ nebo la,25-(OH)₂D₃ a usmrtí se 2, 4, 6, 9, 12, 18, 24 a 48 hodin po podání dávky. Odebraná krev se analyzuje na koncentraci la,25-(OH) D .

Výsledky ukazují, že podání dávky la,25-(OH)₂preD₃ vede ke zvýšení sérové koncentrace la,25-(OH)₂D₃. Výsledky dále ukazují, že zvýšení sérové koncentrace la,25-(OH)₂D₃ je postupnější a dlouhodobější než je farmakokinetika la,25-(OH)₂D₃ pozorovaná po podání la,25-(OH)₂D₃.

Příklad 5: Srovnání biologické dostupnosti la,25-(OH)₂preD₃ s la,25-(OH)₂D₃

9« 4444 ♦ 4 4 · 4 * · 9 4 4 4

9 99 4· 9999

4 94 49 94 94· 499

4 4444 4 9

49494 44 49 94 ··

Tři týdny staré krysy se krmí dietou s deficitem vitaminu D, která obsahuje normální množství vápníku a fosforu po dobu 3-6 týdnů, dokud není pozorována jasná hypokalcemie. Potom se krysy náhodně rozdělí do skupin a podá se jim jediná dávka la,25-(OH)₂preD₃ ve frakcionovaném kokosovém oleji (FCO) (0,255 μ<3, což je přibližně 1,5 Mg/kg) . Kontrolní skupině se podá pouze vehikulum. Pro všechny skupiny se odebere krev 12 hodin po podání dávky a analyzuje se na sérové koncentrace vitaminu.

Data jsou shrnuta v tabulce 3, dále.

Tabulka 3: Sérové koncentrace la,25-dihydroxyvitaminu D₃ (la, 25-(0H)₂D₃) u rachitických krys 12 hodin po podání jediné orální dávky la,25-dihydroxyprevitaminu D₃ (la,2 -(OH)₂preD₃)

Testovaná sloučenina	Dávka (Mg)	n	Sérová koncentrace la,24-(OH)2D2 (pg/ml)*
Vehikulum	0,000	8	14,7 ± 5,1
la,25-(OH)2preD3	0,255	6	615,4 ± 298,11**
la,25-(OH)2D3	0,255	6	326,8 ± 192,0
** p < 0,01 vzhledem	k la,25-(OH)2D	3
Tato data ukazují,	že orální la,	25-	(OH)2preD3 způsobuje

významně vyšší koncentrace sérového la,25-(OH)₂D₃ než orální la,25-(OH)₂D₃. Tato data potvrzují, že orálně podaný la,25-(OH)₂preD₃ je biologicky dostupný, jak je to potvrzeno zvýšením cirkulujícího la,25-(OH)₂D₃. Také ukazují, že la,25-(OH)₂preD₃ má vyšší biologickou dostupnost než aktivní forma vitaminu, la,25-(OH)₂D₃.

•φ φφφφ • φ · φφφφ φφφφ • φ φφφφ φφφφ φ φ φφ φφ φφ φφφφφφ • · φφφφ φ φ

ΦΦΦΦΦ φφ φφ · · · ·

Příklad β: Analýzy vazby na VDR

Ια, 25-(OH)₂preD₃

Vazebná afinita VDR pro la,25-(OH)₂preD₃ se srovnává s vazebnou afinitou pro la,25-(OH)₂D₃, jeho aktivní formou.

la,25-(OH)₂preD₃ nebo la,25-(OH)₂D₃ se inkubují s proteinovým receptorem pro vitamin D a stopovým množstvím ³H-la,25-(OH)₂D₃ za standardních podmínek pro test kompetitivní vazby. Množství la,25-(OH)₂preD₃ a la,25-(OH)₂D₃ kompetitoru je mezi 7,8 a 1000 pg nebo 1,0 a 25 pg, v příslušném pořadí.

Současně s inkubací pro vazbu se inkubuje zkumavka obsahující la,25-(OH)₂preD₃ při stejné teplotě a po stejnou dobu pro stanovení množství la,25-(OH)₂preD₃, které se přeměnilo na formu vitaminu. Pomocí HPLC analýzy se stanoví, že na konci inkubace se přibližně 2% la,25-(OH)₂preD₃ přemění na formu vitaminu. Úroveň vazby la,25-(OH)₂preD₃ se opraví pro množství formy vitaminu, který se vytvořil během testu. Výsledky vazebných analýz jsou uvedeny v tabulce 4.

• fc «fcfcfc fcfc fcfc fcfc fcfc • · · · · · · fc · · fc · fcfcfcfc fcfcfcfc • fcfc fcfc fcfc ··· fcfcfc • fcfcfcfc · fc • · fcfc fcfc fcfc fcfc

Tabulka 4: Vazba la,25-dihydroxyprevitaminu D₃ na receptor pro vitamin D in vitro

Množství l,25-preD3	Celková detekovatelná	Korigovaná vazba
(pg/zkumavku)	vazba (pg/zkumavku)	(pg/zkumavku)
7,8	ND	ND
15,6	ND	ND
31,3	ND	ND
62,5	1,88	0,6
125	3,02	0,5
250	6,32	1,3
500	12,0	2,0
1000	20,5	0,5

Data uvedená v tabulce 4 ukazují, že la,25-(OH)₂preD₃ má nízkou nebo žádnou afinitu k VDR, t.j. má afinitu pro receptor nižší než 0,01 afinity la,25-(OH)₂D₃ a proto že musí být la, 25-(OH)₂preD₃ přeměněn na la,25-(OH)₂D₃ před tím, než se stane biologicky aktivním.

Příklad 7: Analýzy vazby na VDR la,24-(OH)₂preD₂

Srovnání vazebných afinit k VDR pro la,24-(OH)₂preD₂ a jeho formu vitaminu, la,24-(OH)₂D₂, se provede způsobem popsaným pro příklad 6. Výsledky ukazují, že la,24-(OH)₂preD₂ má významně nižší afinitu pro receptor než jeho forma vitaminu, la,24-(OH)₂D₂.

9 • 9 9 •9 ····

9

9 9 9

9 9

99

9 9 9 9

9 9 9

9 999 999

9 9

99

Příklad 8: Analýzy vazby na VDR la,24-(OH)₂preD₄

Srovnání vazebných afinit k VDR pro la,24-(OH)₂preD₄ a jeho formu vitaminu, la,24-(OH)₂D₄, se provede způsobem popsaným pro příklad 6. Výsledky ukazují, že la,24-(OH)₂preD^ má významně nižší afinitu pro receptor než jeho forma vitaminu, la,24-(OH)₂D₄.

Příklad 9: Testování akutní hyperkalcemie při podání 1-hydroxyprevitaminu D la,25-(OH)₂preD₃

Tři týdny staré krysy se krmí dietou s deficitem vitaminu D, která obsahuje normální množství vápníku (0,47%) a fosforu (0,3%). Po přibližně 3-6 týdnech na této dietě se krysy rozdělí do pěti skupin a orálně se jim podává bud' la,25-dihydroxyvitamin D₃ (0,06 nebo 12 gg/kg/den) nebo la,25-dihydroxyprevitamin D₃ (0, 06 nebo 12 gg/kg/den) ve vehikulu jako je laktosa, nebo se jim podává vehikulum samotné (kontrola) po dobu 3 dnů. Všem zvířatům se odebere krev 24 hodin po podání poslední dávky a analyzuje se na sérovou koncentraci vápníku a fosforu. Výsledky ukazují, že podání la,25-dihydroxyvitaminu D₃ způsobuje větší vzestup koncentrace sérového vápníku a fosforu, než podání stejné dávky la,25-dihydroxyprevitaminu D₃.

Příklad 10: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky formy aktivního vitaminu D s oddáleným, zpomaleným uvolňováním (DSR aktivní vitamin D)

Prostředek obsahující stejné díly Eudragit.L100 a S100 a jeho

9999

99 99 ·· · 9999 9 9 9 ·

9 999« 9999 • 9 9· 9 9 99 999999 • 9 9999 9 9

9999 9 99 99 99 99 testování .

Vhodné množství aktivovaného vitaminu D se rozpustí v ethanolu a smísí se se složkami matrice, jak jsou uvedeny v tabulce 5 a nanese se na 850 g cukernaté korálky, 25/30 mesh. Po sušení se korálky potáhnou enterálním potahem, který je rovněž uveden v tabulce 5.

Tabulka 5

Složka	Přísada	Množství (g)
Matrice	Eudragit RS100	50
	Methanol Ethanol s lékem	50
	Destilovaná voda	5
	Aceton	qs 500
Enterální	ATEC (acetyltriethylcitrat,	54
potah	změkčovací činidlo)
	Methanol	600
	Destilovaná voda	30
	Eudragit L100	153
	Eudragit S100	153
	Talek	40
	Aceton	qs 4000

Po výrobě se korálky (500 mg/kapsli) vloží do #0 želatinových kapslí pro podání psům.

Psům (Beagle, psi a feny, 13 kg a 9 kg, v příslušném pořadí) se podá 5 kapslí/den prostředku (DSR-008). Krev se odebere při ·· ··#· ·♦ ♦♦ ·· ·· • · · · · · · ···· ♦ · ···· · · · · • · · · « ♦ · » ····«· ♦ · ♦ * · · · · ····· · · ·· ·· · * zahájení pokusu a 24 hodin po podání dávky, ale před podáním další dávky a stanoví se koncentrace vápníku v séru. Podávání se ukončí po 2 dnech s koncentrací sérového vápníku významně zvýšenou nad normu.

kapslí/den výše uvedeného prostředku (DSR-008) se podává fenám po dobu 7 dnů. Normální sérová koncentrace vápníku je u fen v rozmezí od 10,0 do 12,4 mg/dl, s průměrem 11,2 mg/dl. Základní hodnota koncentrace sérového vápníku v tomto pokusu je 11,7 mg/dl; další hodnoty v další dny jsou následující: 12,1, 12,3, 12,7, 13,1, 13,5 a 15,1 mg/dl.

Tyto výsledky ukazují, že biologická aktivita aktivního vitaminu D v tomto DSR prostředku je prokazována po prodloužené časové období.

Příklad 11: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky formy aktivního vitaminu D s oddáleným, zpomaleným uvolňováním (DSR aktivní vitamin D)

Prostředek obsahující různá množství Eudragit L100 a S90 a jeho testování.

Vhodné množství aktivovaného vitaminu D se rozpustí v ethanolu a smísí se se složkami matrice, jak jsou uvedeny v tabulce 6 a nanese se na 850 g cukernaté korálky, 25/30 mesh. Po sušení se korálky potáhnou enterálním potahem, který je rovněž uveden v tabulce 6.

• •«fl • fl ·· flfl flfl • v fl β · · · ··»* • · flfl flfl flflflfl • · flfl flfl flfl flflflflflfl fl · flflflfl fl * • flflflfl flfl flfl flfl flfl

Tabulka 6

Složka	Přísada	Množství (g)
Matrice	Eudragit RS100	10
	Methanol	10
	Ethanol s lékem
	Destilovaná voda	1
	Aceton	qs 100
Enterální	ATEC (acetyltriethylcitrat,	68
potah	změkčovací činidlo)
	Methanol	750
	Destilovaná voda	35
	Eudragit L100	338
	Eudragit S90	49
	Talek	50
	Aceton	qs 5000

Po výrobě se korálky (500 mg/kapsli) vloží do #0 želatinových kapslí pro podání psům.

Psům (stejným jako v příkladu 10) se podá 5 kapslí/den prostředku (DSR-010). Krev se odebere při zahájení pokusu a 24 hodin po podání dávky, ale před podáním další dávky a stanoví se koncentrace vápníku v séru. Podávání se ukončí po 2 dnech s koncentrací sérového vápníku významně zvýšenou nad normu.

kapslí/den výše uvedeného prostředku (DSR-010) se podává fenám po dobu 2 dnů. Normální sérová koncentrace vápníku je u fen v rozmezí od 10,0 do 12,4 mg/dl, s průměrem 11,2 mg/dl. Základní hodnota koncentrace sérového vápníku v tomto pokusu je 10,9 φφ φφφφ • Φ φ* φφ ·« φφ » φφφφ φφφφ φ φ φ φ ·Φ φφφφ • φ φφ φφ φφ φ«φφφφ φ φ φφφφ φ « • ΦΦ φ · ·Φ «φ ·· φφ mg/dl; další hodnoty v další dny jsou následující: 13,8 a 16,1 mg/dl.

Tyto výsledky ukazují, že aktivní vitamin D v tomto DSR prostředku je snadno biologicky dostupný.

Příklad 12: Testování biologické dostupnosti a farmakokinetiky formy aktivního vitaminu D s oddáleným, zpomaleným uvolňováním (DSR aktivní vitamin D)

Prostředek obsahující matrici tvořenou kyselinou stearovou a jeho testování.

Vhodné množství aktivovaného vitaminu D se rozpustí v ethanolu a smísí se se složkami matrice, jak jsou uvedeny v tabulce 7 a nanese se na 850 g cukernaté korálky, 25/30 mesh. Po sušení se korálky potáhnou enterálním potahem, který je rovněž uveden v tabulce 7.

Tabulka 7

Složka	Přísada		Množství (g)
Matrice	Kyselina stearová Ethanol s lékem		10
	Aceton	qs	90
Enterální	ATEC (acetyltriethylcitrat,		68
potah	změkčovací činidlo)
	Methanol		750
	Destilovaná voda		35
	Eudragit L100		338
	Eudragit S90		49
	Talek		50
	Aceton	qs	5000

Po výrobě se korálky (500 mg/kapsli) vloží do #0 želatinových kapslí pro podání psům.

Psům (stejným jako v příkladu 10) se podá 5 kapslí/den prostředku (DSR-012). Krev se odebere při zahájení pokusu a 24 hodin po podání dávky, ale před podáním další dávky a stanoví se koncentrace vápníku v séru. Podávání se ukončí po 2 dnech s koncentrací sérového vápníku významně zvýšenou nad normu.

kapslí/den výše uvedeného prostředku (DSR-012) se podává psům po dobu 2 dnů. Normální sérová koncentrace vápníku je u těchto psů v rozmezí od 10,6 do 12,0 mg/dl, s průměrem 11,3 mg/dl. Základní hodnota koncentrace sérového vápníku v tomto pokusu je 11,4 mg/dl; další hodnoty v další dny jsou následující 14,2 a 15,5 mg/dl.

• ·· ·

Tyto výsledky ukazují, že aktivní vitamin D v tomto DSR prostředku je snadno biologicky dostupný.

Příklad 13: DSR la,25-(OH)₂D₃

Psům se podá kapsle obsahující la,25-dihydroxyvitamin D₃ vyrobená způsobem podle předkládaného vynálezu. Jiném psu se podá stejné množství la,25-dihydroxyvitaminu D₃ ve frakcionovaném kokosovém oleji (FCO). Krev se odebere 0, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4,

6, 9, 15, 24, 36 a 72 hodin po podání dávky. U zvířat, kterým je podán lék v kapsli, je pozorován pomalejší vzestup koncentrace aktivního vitaminu D v krvi, nižší maximální koncentrace vitaminu D v krvi a prodloužené zvýšení koncentrace aktivního vitaminu D v krvi než u zvířat, který je podáno léčivo ve frakcionovaném kokosovém olej i.

Graf na obr. 2 znázorňuje koncentrace aktivního vitaminu D v krvi z obou výše uvedených příkladů.

Tyto postupy prokazují, že podání prostředku podle předkládaného vynálezu zvířatům vede k pomalejšímu vzestupu a dloudobější elevaci koncentrace la,25-dihydroxyvitaminu D₃ v séru ve sroovnání s farmakokinetikou la,25-dihydroxyvitaminu D₃ po podání la,25-dihydroxyvitaminu D₃ ve frakcionovaném kokosovém olej i.

Příklad 14: Oddálené a prodloužené koncentrace aktivního vitaminu D v séru

Pacientům se podají 2 pig la, 25-(OH) ₂D₃ v prostředku podle předkládaného vynálezu. Vzorky krve se odeberou 0, 2, 6, 8 a 12 hodin po podání dávky a analyzuj í se na koncentrace la,25-(OH)₂D₃. Výsledky naznačují, že koncentrace la,25-(OH)₂D₃

ve 2, 6 a 8 hodině vzhledem k hodině 0, ale jsou nižší než koncentrace, o kterých se soudí, že způsobují hyperkalcemii. Tyto výsledky ukazují na oddálené a prodloužené uvolňování la,25-(OH) D .

Příklad 15: Testování akutní hyperkalcemie

Pacientům se podávají 2 pg kalcitriolu v prostředku podle předkládaného vynálezu jednou denně po dobu 7 dnů. Po poslední dávce se sbírá moč přes noc a odebere se krev a oba vzorky se analyzují na obsah vápníku. Není pozorována hyperkalcemie ani hyperkalcurie, což ukazuje na nízkou toxicitu.

Příklad 16: Vazba aktivního vitaminu D na VDR buněk prostaty la,24-(OH)₂D₂

Vazba sloučenin vitaminu D na VDR buněk prostaty je demonstrována za použití techniky, kterou popsal Skowronski et al., 136 Endocrinology (1995) 20 - 26, kde tento článek je zde uveden jako odkaz. Buněčné linie odvozené od prostaty se kultivují do dosažení konfluence, promyjí se a odeberou se seškrábnutím. Buňky se promyjí centrifugaci a buněčná peleta se resuspenduje v pufrovaném solném roztoku obsahujícím inhibitor proteasy. Buňky jsou rozrušeny sonikací při chlazení na ledu. Supernatant získaný při centrifugaci rozrušených buněk při 207000 x g po dobu 35 minut při 4 °C se testuje na vazbu. 200 μΐ solubilního extraktu (1-2 mg proteinu/ml supernatantu) se inkubuje s 1 nM ³H-la,25-(OH)₂D₃ a postupně rostoucími koncentracemi la,24-(OH)₂D₂ (0,01 - 100 nM) po dobu 16-20 hodin při 4 °C. Navázané a volné hormony se separují s hydroxyapatitem za použití běžných technik. Specifická vazba se vypočítá po odečtení nespecifické vazby získané za přítomnosti 250-násobného ·· · • · • · • ’ · · · • · ··.

• · · · • · · ♦ ·· ·♦

- 26, kde tyto články jsou zde uvedeny jako odkazy. Buněčné linie, LNCaP a PC-3, které jsou odvozené od lidského adenokarcinomu prostaty, se umístí do šesti-jamkových tkáňových kultivačních ploten v hustotě přibližně 50000 buněk/plotnu. Po uchycení a stabilizaci buněk, ke které dojde po 2-3 dnech, se medium nahradí mediem obsahujícím vehikulum nebo analog aktivního vitaminu D, la,24-(OH)₂D₂, v koncentraci od 10^-11 do 10⁷ M. Medium obsahující testovaný analog nebo vehikulum se mění každé tři dny. Po 6-7 dnech se medium odstraní a buňky se vypláchnou, sráží se chladnou 5% kyselinou trichloroctovou a promyjí se chladným ethanolum. Buňky se solubilizují pomocí 0,2 N hydroxidu sodného a množství DNA se stanoví za použití standardních technik. Výsledky ukazují, že kultury inkubované s la,24-(OH)_zD_z podle předkládaného vynálezu obsahují významně méně buněk než kontrolní kultury.

Příklad 20: Inhibice proliferace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,24-(OH)₂D₄

Opakuje se postup příkladu 19 za použití analogu aktivního vitaminu D, la,24-dihydroxyvitaminu D₄ a určí se počet buněk. Výsledky ukazují, že kultury inkubované s la,24-(OH)₂D₄ obsahují významně méně buněk než kontrolní kultury.

Příklad 21: Inhibice proliferace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,25-(OH)₂D₄

Opakuje se postup příkladu 19 za použití analogu aktivního ·· «··· nadbytku neradioaktivního Ια,25-(OH)₂D₂ od celkové změřené vazby

Výsledky ukazují, že la,24-(OH)₂D₂ má silnou afinitu pro prostatický VDR, což naznačuje, že la,24-(OH)₂D₂ má silnou biologickou aktivitu pro buňky prostaty.

Příklad 17: Vazba aktivního vitaminu D na VDR buněk prostaty la,24-(OH)₂D₄

Opakuje se postup příkladu 16 za použití analogu aktivního vitaminu D, la,24-dihydroxyvitamínu D^ a určí se specifická vazba. Výsledky ukazují, že la,24-(OH)₂D₄ má silnou afinitu pro prostatický VDR, což naznačuje, že la,24-(OH)₂D^ má silnou biologickou aktivitu pro buňky prostaty.

Příklad 18: Vazba aktivního vitaminu D na VDR buněk prostaty la,25-(OH)₂D₄

Opakuje se postup příkladu 16 za použití analogu aktivního vitaminu D, la,25-dihydroxyvitaminu D₄ a určí se specifická vazba. Výsledky ukazují, že la,25-(OH)₂D₄ má silnou afinitu pro prostatický VDR, což naznačuje, že la,25-(OH)₂D^ má silnou biologickou aktivitu pro buňky prostaty.

Příklad 19: Inhibice proliferace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,24-(OH)₂D₂

Inhibice proliferace buněk prostaty je demonstrována za použití techniky, kterou popsal Skowronski et al., 132

Endocrinology (1993) 1952 - 1960 a 136 Endocrinology (1995) 20 • · · · · · vitaminu D, Ια,25-dihydroxyvitaminu a určí se počet buněk. Výsledky ukazují, že kultury inkubované s la,25-(OH)₂D₄ obsahují významně méně buněk než kontrolní kultury.

Příklad 22: Stimulace diferenciace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,24-<OH)₂D₂

Za použití techniky, kterou popsal Skowronski et al., 132 Endocrinology (1993) 1952 - 1960 a 136 Endocrinology (1995) 20 - 26, kde tyto články jsou zde uvedeny jako odkazy, je buněčná linie, LNCaP, která je odvozena od lidského metastatického adenokarcinomu prostaty a o které je známo, že exprivuje PSA, umístěna do šesti-jamkových tkáňových kultivačních ploten v hustotě přibližně 50000 buněk/plotnu. Po uchycení a stabilizaci buněk, ke které dojde po 2-3 dnech, se medium nahradí mediem obsahujícím vehikulum nebo analog aktivního vitaminu D, la, 24-(0H)₂D₂, v koncentraci od 10“^1χ do 10^-7 M. Po 6 - 7 dnech je medium odstraněno a je uskladněno při -20 °C pro analýzu na prostatický specifický antigen (PSA).

Buňky se vypláchnou, sráží se a množství DNA se stanoví za použití standardních technik. Buňky se resuspendují a určí se počet buněk. PSA se měří pomocí standardních technik. Kultury inkubované s la,24-(OH)₂D₂ obsahují významně více PSA než kontrolní kultury, při vyjádření výsledků v množství PSA/buňku.

Příklad 23: Stimulace diferenciace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,24-(OH)₂D₄

Opakuje se postup příkladu 22 s tou výjimkou, že analogem aktivního vitaminu D je la,24-(OH) D . Stanoví se PSA, kdy kultury inkubované s la,24-(OH)₂D₄ obsahuj i významně více PSA než kontrolní kultury, při vyjádření výsledků v množství PSA/buňku.

Příklad 24: Stimulace diferenciace buněk prostaty aktivním vitaminem D la,25-(OH) D

Opakuje se postup příkladu 22 s tou výjimkou, že analogem aktivního vitaminu D je la,25-(OH)₂D₄. Stanoví se PSA, kdy kultury inkubované s la,25-(OH)₂D₄ obsahují významně více PSA než kontrolní kultury, při vyjádření výsledků v množství PSA/buňku.

Příklad 25: Klinické studie la,24-(OH)₂preD₂

Pacienti s pokročilým androgene independentním karcinomem prostaty se účastní na otevřené, značené studii s la,24-(OH)₂preD₂. Zařazení pacienti jsou ve věku nejméně 40 let, mají histologicky ověřený adenokarcinom prostaty a mají progresivní onemocnění, které odpovídalo na hormonální terapii. Při vstupu do studie zahájí pacienti léčbu orálním la,24-(OH)₂preD₂, která trvá 26 týdnů, a vynechají jakoukoliv předchozí terapii vápníkovými doplňky, preparáty obsahující vitamin D a substituční terapii vitaminem D. Během léčby je u pacientů v pravidelných intervalech sledováno: (1) hyperkalcemie, hyperfosfatemie, hyperkalciurie, hyperfosfaturie a jiné příznaky toxicity; (2) změny v progresi metastatického onemocnění; a (3) complience při předepsané dávce testovaného léčiva.

• φφ ··♦

4Ί

Φ · φφφφ ·

Studie se provede ve dvou fázích. Během první fáze je určena maximální tolerovaná dávka (MTD) denního orálního la,24-(OH)₂preD₂ tak, že skupinám pacientů je podána progresivně se zvyšující dávka. Všechny dávky jsou podány ráno před snídaní. První skupina pacientů je léčena 25 μg la,24-(OH)₂preD₂. Další skupiny pacientů jsou léčeny 50, 75 a 100 /zg/den. Podávání léku pokračuje bez přerušení do té doby, dokud koncentrace vápníku v séru nepřesáhne 11,6 mg/dl nebo dokud není pozorována jiná toxicita stupně 3 nebo 4, a tom případě dávkování nepokračuje do té doby, dokud neustoupí pozorované toxické účinky a potom dávkování pokračuje dávkou sníženou o 10,0 /zg.

Výsledky první fáze studie ukázaly, že MTD pro la,24-(OH)₂preD₂ je vyšší než 20,0 μg/den, což je 10-krát až 40-krát vyšší než pro la,25-(OH)₂D₃. Analýzy vzorků krve odebíraných v pravidelných intervalech od pacientů ve studii ukázaly, že koncentrace cirkulujícího la,24-(OH)₂D₂ se přímo úměrně zvyšují s podanou dávkou, s dosažením maximálních koncentrací vyšších než 100 pg/ml při nejvyšších dávkách, a že koncentrace cirkulujícího la,25-(OH)₂D₃ jsou sníženy, často na nedetekovatelnou hladinu. Koncentrace vápníku v séru a moči se zvyšují v závislosti na dávce. Pacienti léčení MTD la,24-(OH)₂preD₂ po dobu alespoň 6 měsíců popisovali, že bolest ve skeletu spojená s metastatickým postižením je významně snížena.

Během druhé fáze jsou pacienti léčení la,24-(OH)₂preD₂ po dobu 24 měsíců v dávkách 0,5 a 1 MTD. Po 2 letech CAT skeny, RTG snímky a kostní skeny, které byly použité pro hodnocení progrese metastatického onemocnění, ukázaly stabilizované postižení nebo částečnou remisi při nižších dávkách a částečnou nebo úplnou remisi při vyšších dávkách.

► flfl ♦ •flfl fl·· • fl ··»·

Příklad 26: Klinické studie

DSR la,25-(OH)₂D₂

Studie popsaná v příkladu 25 je opakována pro sloučeninu aktivního vitaminu D, la,25-(OH)₂D₂ v DSR formě. Výsledky fáze jedna studie ukázaly, že pacienti léčení MTD DSR la,25-(OH)₂D₂ po dobu alespoň 6 měsíců popisovali významné snížení bolesti ve skeletu spojené s metastatickým postižením. Výsledky fáze dvě ukázaly, že po dvou letech CAT skeny, RTG snímky a kostní skeny, které byly použité pro hodnocení progrese metastatického onemocnění, ukázaly stabilizované postižení nebo částečnou remisi při nižších dávkách a částečnou nebo úplnou remisi při vyšších dávkách.

Závěrem je možno uvést, že předkládaný vynález poskytuje způsob pro léčbu onemocnění prostaty, jako je karcinom prostaty a hyperplasie prostaty, který obsahuje podání SR nebo DSR prostředku obsahujícího Ια-hydroxyprevitamin D nebo aktivovaný vitamin D nebo jejich kombinaci. Prostředky podle předkládaného vynálezu významně snižují riziko hyperkalcemie a hyperkalcurie spojené s dosud známými prostředky obsahujícími aktivovaný vitamin D. Kromě toho, prostředky podle předkládaného vynálezu umožňují získání vyšších koncentrací aktivovaného vitaminu D po delší dobu při podání jedné dávky, než dosud známé orální prostředky obsahující aktivovaný vitamin D, což vede ke zlepšení koncentrací aktivního vitaminu D v krvi, který působí na buňky prostaty.

Je třeba si uvědomit, že ačkoliv byl vynález popsán a doložen na některých konkrétních příkladech, existují různé modifikace.

Takové modifikace patří do rozsahu vynálezu, který je omezen pouze připojenými patentovými nároky.

φ φ φφ· φ φ φ ·· • · · » φ » φ • ···· φ φφ φ • φ φφφ φφ · φ φ φ φφφφ φφ φφφ φφ φφ z/ yw -

Claims (18)

1. PATENTOVÉ κ Υ

   1. Farmaceutický prostředek pro orální podávání pro inhibici hyperproliferativní aktivity buněk u rakoviny nebo hyperplasie prostaty člověka, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu vitaminu D, kterou je la-hydroxyprevitamin D, nebo aktivní vitamin D obsažený v matrici, přičemž matrice umožňuje uvolnitelnou vazbu a kontrolované uvolňování aktivního vitaminu D v průběhu prodlouženého časového období.
2. 2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 , vyznačující se tím, že dále obsahuje enterální potah, který brání uvolňování sloučeniny vitaminu D, přičemž tento potah je resistentní vůči rozpuštění v žaludku, ale je předurčen pro rozpuštění ve střevu, takže brání uvolnění sloučeniny vitaminu D až do doby, kdy prostředek dosáhne střeva.
3. 3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2 , vyznačující se tím, že enterální potah je také resistentní vůči rozpuštění v proximální části střeva, ale je předurčen pro rozpuštění ve střední a distální části střeva, takže brání uvolnění sloučeniny vitaminu D až do doby, kdy prostředek dosáhne střední části střeva.
4. 4. Farmaceutický prostředek podle nároku 2 , vyznačující se tím, že enterální potah je resistentní vůči rozpuštění v prostředí, které má pH nižší než 6,0.
5. 5. Farmaceutický prostředek podle nároku 3 , vyznačující se tím, že enterální potah je • · • fcfc fcfcfcfc fc· fcfc fc fcfcfc fc··· • fcfc fcfcfc fc fcfc ♦ fcfc·· ·«···· • fcfc · fcfcfcfc • fc fcfcfcfc· fcfc fc· resistentní vůči rozpuštění v prostředí, které má pH nižší než 6,0.
6. 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 , vy značující se tím, že Ια-hydroxyprevitaminem D je la,25-dihydroxyprevitamin D₃, la,24-dihydroxyprevitamin D₃, Ια-hydroxyprevitamin D₃, la,25-dihydroxyprevitamin D₂, la,24-dihydroxyprevitamin D₂, Ια-hydroxyprevitamin D₂, la,24-dihydroxyprevitamin D₄, la,25-dihydroxyprevitamin D₄ nebo Ια-hydroxyprevitamin D₄.
7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 , vy značující se tím, že aktivním vitaminem D je la,25-dihydroxyvitamin D₃, la,24-dihydroxyvitamin D₃, Ια-hydroxyvitamin D₃, la,25-dihydroxyvitamin D₂, la,24-dihydroxyvitamin D₂, Ια-hydroxyyitamin D₂, la,24-dihydroxyvitamin D₄, la,25-dihydroxyvitamin D₄ nebo Ια-hydroxyvitamin D₄.
8. 8. Farmaceutický prostředek pro orální podávání pro léčení chorob prostaty, pro něž je charakteristická abnormální diferenciace nebo proliferace buněk, vyznačuj ící se t í m , že obsahuje sloučeninu Ια-hydroxyprevitaminu D nebo sloučeninu vitaminu D obsaženou v matrici, přičemž sloučeninou vitaminu D je aktivní vitamin D nebo la-hydroxyprevitamin D, přičemž matrice umožňuje uvolnitelnou vazbu a kontrolované uvolňování sloučeniny vitaminu D v průběhu prodlouženého časového období.
9. 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 , vy značující se tím, že aktivním vitaminem D obsa ženým v matrici je forma s oddáleným zpomaleným uvolňováním.

   • · ·»·»·« ·· · * ·· ·· · · · · · · · • · · · 999 9 9 9 9

   9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

   9 9 9 9 9 9 9 9 9

   999 999 99 999 99 99
10. 10. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že dále obsahuje druhé protinádorové činidlo vybrané ze skupiny sestávající z estramustinfosfatu, prednimustinu, cisplatiny, 5-fluorouracilu, melfalanu, hydroxymočoviny, mitomycinu, idarubicinu, methotrexatu adriamycinu a daunomycinu.
11. 11. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m , že obsahuje:

    (a) první protinádorové činidlo, kterým je sloučenina vitaminu D vybraná ze skupiny sestávající z Ια-hydroxyprevitaminu D, aktivního vitaminu D ve formě se zpomaleným uvolňováním, aktivního vitaminu D ve formě s oddáleným zpomaleným uvolňováním a jejich kombinace; a (b) činidlo vybrané ze skupiny sestávající z (i) druhého protinádorového činidla, (ii) činidla ovlivňujícího kosti, (iii) činidla kontrolujícího androgeny, a (iv) inhibitoru

    5a-reduktasy, nebo jejich kombinací.
12. 12. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že sloučenina aktivního vitaminu D je vybraná ze skupiny sestávající z la,25-dihydroxyvitaminu D₃, la,24-dihydroxyvitaminu D₃, Ια-hydroxyvitaminu D₃,

    Ια,25-dihydroxyvitaminu D₂, Ια,24-dihydroxyvitaminu D₂,

    Ια-hydroxyvitaminu D₂, la,24-dihydroxyvitaminu D₄, la,25-dihydroxyvitaminu D₄ a Ια-hydroxyvitaminu D₄.
13. 13. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že sloučenina la-hydroxyprevitaminu D je vybraná ze skupiny sestávající z la,25-dihydroxyprevitaminu D₃, la,24-dihydroxyprevitaminu D₃, la-hydroxyprevitami52

    4· •

    444

    44 4 ·· 4 44 4 ·· 4 4 • 4 · « · 4 · • 4 444 4 · · · • · ······ • · 4 4 4 4 4

    44 444 44 44 nu D₃, Ια,25-dihydroxyprevitaminu D₂, la,24-dihydroxyprevitaminu D₂, la-hydroxyprevitaminu D₂, la,24-dihydroxyprevitaminu D₄, la,25-dihydroxyprevitaminu D₄ a Ια-hydroxyprevitaminu D₄.
14. 14. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že druhé protinádorové činidlo je vybrané ze skupiny sestávající z estramustinfosfatu, prednimustinu, cisplatiny, 5-fluorouracilu, melfalanu, hydroxymočoviny, mitomycinu, idarubicinu, methotrexatu, adriamycinu a daunomycinu.
15. 15. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že činidlo kontrolující androgeny je vybráno ze skupiny sestávající z estrogenu, LHRH analogu, antiestrogenu a antiandrogenu.
16. 16. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že inhibitorem enzymu 5a-reduktasy je finasterid.
17. 17. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že činidlo ovlivňující kosti je vybrané ze skupiny sestávající z konjugovaného estrogenu, antiestrogenu, kalcitoninu, fluoridu sodného, bisfosfonatu, přísady dodávající vápník, kobalaminu, pertussis toxinu a boru.
18. 18. Ια-Hydroxyprevitamin D nebo aktivní vitamin

    D v prostředku, který je ve formě se zpomaleným uvolňováním nebo oddáleným zpomaleným uvolňováním pro použití pro alevaci hyperproliferativní buněčné aktivity při rakovině nebo hyperplasii prostaty za účelem snížení nebo stabilizace buněčné aktivity při rakovině nebo hyperplasii prostaty při sníženém riziku hyperkalcemie.