CZ2014792A3 - Způsob přípravy, izolace a čištění farmaceuticky využitelných forem AHU-377 - Google Patents

Abstract

Způsob izolace a čištění substancí odvozených od AHU-377, chemicky ethylester (2R, 4S)-5-(bifenyl-4-yl)-4[(3-karboxy-propionyl)amino]-2-methylpenta nové kyseliny vzorce 1, vyznačující se převedením surové látky 1 na dobře krystalizující soli s aminy vzorce 9 v prostředí vhodného organického rozpouštědla, následné provedení rekrystalizací těchto solí za současného odstranění chemických nečistot a užití chemicky čistých solí AHU-377 s aminy k přímé přeměně na farmaceuticky využitelnou formu AHU-377 s alkalickými kovy vzorce 10 nebo s kovy alkalických zemin vzorce 11.

Description

t • · · ♦ ♦ · ··· · ·«· ♦·· «·* ·

Způsob přípravy, izolace a čištění farmaceuticky využitelných forem AHU-377

Oblast techniky ethylester kyseliny Terapeutické využití a disodné soli pentahemihydrátu

Substance AHU-377, chemicky (27?,45)-5-(bifenyl-4-yl)-4-[(3-karboxypropionyl)amino]-2-methylpentanové vzorce (1), je složkou léčiva pro léčbu hypertenze a srdečního selhání, má zejména krystalický supramolekulámí komplex sodné soli AHU-377 valsartanu vzorce (2) v poměru obou složek 1:1, který krystaluje ve formě (W02003/059345 a W02007/056546).

Vynález se týká nových pevných forem sloučeniny označované jako AHU-377, nového způsobu izolace a čištění těchto forem, včetně způsobu získání pevných forem AHU-377 využitelných pro výrobu léčiva pro léčbu hypertenze a srdečního selhání.

Dosavadní stav techniky

První řešení chemické syntézy AHU-377 (1) bylo popsáno v patentové přihlášce EP555175 a následně i v odborné literatuře (J. Med. Chem. 1995, 38, 1689-1700). Další možnosti chemické syntézy AHU-377 (1), zejména jeho pokročilých intermediátů, jsou popsány v následujících patentových přihláškách: W02008/031567, W02008/083967, W02009/090251, WO2011/088797, WO2012/025501, WO2012/025502 a WO2014/032627.

Finální krok chemické syntézy vedoucí k AHU-377 představuje reakce probíhající podle schématu 1, kdy reaguje amin (3) s anhydridem kyseliny jantarové (EP555175, J. Med. Chem. 1995, 38, 1689-1700). Výsledkem této reakce je surový AHU-377 ve formě volné karboxylové kyseliny. Nevýhodou tohoto postupuje skutečnost, že AHU-377 ve formě volné

• * karboxylové kyseliny nekrystaluje, a proto není tato forma vhodná ani pro izolaci ani pro chemické čištění před přípravou sodné soli AHU-377, která se v praxi používá jako farmaceuticky akceptovatelná forma (W02007/056546).

Schéma 1 Z důvodu nepříznivých izolačních vlastností volné karboxylové kyseliny AHU-377 je třeba použít složitých izolačních a čistících operací pro dosažení přijatelně kvalitní sodné soli AHU-377. Příkladem může být postup publikovaný v literatuře (J. Med. Chem. 1995, 38, 1689-1700). Tento postup popisuje schéma 2. Surová kyselina AHU-377 se podle tohoto postupu nejprve převede na příslušný fórř.butylester (4), poté se provede čištění substance pomocí chromatografie, následně se uvolní zpět chemicky čistá volná kyselina AHU-377, kterou je již možné převést na sodnou sůl vzorce (5) působením vhodné báze, například pomocí hydroxidu sodného. Přímou cestu od surové kyseliny k sodné soli nebylo možné vzhledem k vlastnostem volné kyseliny využít.

Schéma 2 2

Schéma 3

Vedle farmaceuticky akceptovatelné sodné soli AHU-377 byly popsány i tři další farmaceuticky akceptovatelné formy (W02008/031567, W02008/083967 a W02003/059345), jmenovitě to jsou: vápenatá sůl (6) viz schéma 3, soli s triethanolaminem (7) a tris(hydroxmethyl)aminomethanem (8), viz schéma 4. Data týkající se chemické čistoty těchto solí, jejich krystalové struktury a výtěžků jejich přípravy nebyla dosud publikována.

Schéma 4 3 ·· ι « · · · · ♦ ··· · • ♦ «·» · Předkládaný vynález představuje nový, vysoce efektivní a průmyslově využitelný způsob provedení izolace a čištění AHU-377 založený na krystalických solích AHU-377 s aminy.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je nalezení dobře krystalizujících forem AHU-377, které lze snadno izolovat a chemicky čistit, následně převést na farmaceuticky akceptovatelné pevné formy, zejména na sodnou a vápenatou sůl AHU-377. Přípravou se zde rozumí chemická přeměna, čištění a také izolace žádané látky. Pevné formy AHU-377, zejména pak ty krystalické, mohou mít mimořádný technický i ekonomický význam, neboť umožňují získat substanci použitelnou pro farmaceutické účely.

Chemická syntéza AHU-377 vede k surové volné karboxylové kyselině olejového charakteru (viz schéma 1), která se nesnadno izoluje v čisté formě, což je důsledek její neschopnosti krystalizovat. Vynález se týká nového a účinného způsobu provedení izolace a čištění AHU-377, kdy se nejprve působí na roztok karboxylové kyseliny AHU-377 vhodným aminem za zisku roztoku soli AHU-377 s aminy (9). Bylo zjištěno, že pouze některé vhodné soli AHU-377 překvapivě snadno krystalizují, zejména poté níže specifikované aminy, které tak lze s výhodou izolovat z roztoku v pevné a chemicky čisté formě.

Vynález se dále týká výhodného způsobu odstranění chemických nečistot opakovanými krystalizacemi solí AHU-377 s některými aminy a nového způsobu přípravy amorfní formy sodné soli, krystalické či semikrystalické vápenaté soli AHU-377 využívající přímé přeměny solí AHU-377 s aminy postupem podle schématu 5. Experimentálně bylo zjištěno, že dobrá krystalizační schopnost amoniových solí AHU-377 není obecnou vlastností těchto solí. Schopnost dobře krystalizovat a zvyšovat kvalitu izolované substance byla prokázána u solí AHU-377 s následujícími aminy: /er/.butylamin, Ao-propylamin, cyklohexylamin, n-propylamin a dicyklohexylamin. Dříve popsané soli s triethanolaminem (7) a tris(hydrojonethyl)aminomethanem (8), lze též získat v krystalickém stavu, ale tyto mají horší čistící schopnost, jak vyplývá z tabulky 1. V případě mnoha dalších aminů se krystalický produkt nepodařilo získat, týká se to zejména di-wo-propylaminu, di-n-propylaminu, di-MO-propylethylaminu, triethylaminu, nikotinamidu, L-argininu, diethylaminu, N, V'-dibenzylethylendiaminu a diethanolaminu. Nejlepších výsledků (výtěžek, chemická čistota) dosahoval nový proces isolace v případě solí AHU-377 s primárními aminy, které se 4 vyznačovaly rozvětveným alkylem, např. cyklohexylamin, wo-propylamin nebo /e/Y.butylamin.

Proces popsaný ve schématu 5 vede k solím AHU-377 s alkalickými kovy (10) nebo kovy alkalických zemin (11) ve čtyřech krocích. Alternativně je možné soli získat ze znovu uvolněné kyseliny (1), která se převede na sůl s alkalickými kovy (10) nebo kovy alkalickým zemin (11) s využitím alkoholátů alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, případně solí organických kyselin odvozených od výše uvedených kovů (schéma 6). Dále je provedení jednotlivých kroků popsáno podrobněji.

Schéma 5 5

Ri, R2, R3 nezávisle na sobě značí alkyl C1-C6 nebo vodík 'r

Schéma 6 ► Krok 1. - chemická syntéza AHU-377 kyseliny

První krok představuje chemickou syntézu AHU-377, zejména finální reakci aminu (3) sanhydridem kyseliny jantarové podle schématu 5. Výstupem tohoto stupně je surová kyselina AHU-377, která obsahuje i nežádoucí složky jako jsou zbytková rozpouštědla a zbytky reagujících složek, zejména deriváty kyseliny jantarové. Produkt prvního kroku, který 6 « · • · · • « · • · · · · • t c · · * i • « · • Μ·· · • · « · · · se nedařilo získat v pevné formě, obsahoval podle HPLC analýz obvykle 97,5 až 98,5 % požadované látky. ► Krok 2. - příprava a izolace krystalických solí AHU-377 s aminy

Druhý krok představuje izolaci AHU-377 ve formě pevných, dobře krystalizujících solí AHU-377 s aminy (9). Příprava těchto solí spočívá v rozpuštění AHU-377 kyseliny v nejméně jednom organickém rozpouštědle, přídavku vhodného aminu k roztoku, míchání směsi, filtraci vyloučené pevné formy a sušení izolované substance. Výstupem tohoto kroku je krystalická forma soli AHU-377 s aminem, která je charakterizována vyšší chemickou čistotu ve srovnání se vstupní kyselinou AHU-377.

Zejména krystalické soli AHU-377 s primárními aminy volenými z řady terf.butylamin, wo-propylamin a cyklohexylamin, se vyznačují výhodnými krystalizačními vlastnostmi, které jsou spojeny se strukturou krystalů těchto solí. Bylo zjištěno, že jmenované soli poskytují stabilní krystalové formy, které lze jednoznačně popsat pomocí práškové rentgenové difrakce (XRPD, viz analytické metody a přílohy). Přínosem nalezeného procesu čištění AHU-377 ve formě jeho solí s aminy je mimořádně dobrá schopnost těchto solí krystalovat z roztoků organických rozpouštědel což vede ke zvýšení chemické čistoty izolované substance.

Organická rozpouštědla použitelná pro izolaci solí AHU-377 s aminy mohou být volena z řady: estery organických kyselin C1-C5 s alkoholy C1-C6, alkoholy C1-C6, ketony C3-C6, ethery C4-C6, chlorované uhlovodíky C1-C6, kapalné aromatické uhlovodíky, alkany C1-C7, cykloalkany C1-C7. Zejména vhodná jsou následující rozpouštědla či jejich směsi: ethylacetát, wo-propylacetát, methanol, ethanol, Ao-propylalkohol, aceton, methylethylketon, diethylether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, tert. butylmethylether, dichlormethan, toluen, xyleny, hexan, heptan, cyklohexan. Nej lepších výsledků bylo dosahováno v případě ethylacetátu nebo zso-propylacetátu.

Zvláště výhodným je způsob izolace soli aminu s AHU-377, při kterém dojde ke spojení kroků 1 a 2, tj. způsob, který nevyžaduje izolaci kyseliny AHU-377. Tato modifikace se vyznačuje izolací soli AHU-377 s primárním aminem přímo z reakčního prostředí použitého pro provedení kroku 1. V tomto případě není třeba zahušťovat směs po úvodní reakci a poté rozpouštět surovou kyselinu AHU-377 v jiném rozpouštědle, viz příklad 4. 7 ► Krok 3. - rekrystalizace solí AHU-377 s aminy Třetí krok představuje krystalizaci soli AHU-377 s aminem (9) z nejméně jednoho organického rozpouštědla, přičemž dochází k dalšímu zvýšení chemické čistoty, kdy je získaná substance charakterizována HPLC čistotou vyšší než 99,5 % při obsahu individuálních nečistot méně než 0,1 %. V tomto kroku dochází k finálnímu odstranění chemických nečistot. Výstupem tohoto stupně je chemicky čistá krystalická sůl AHU-377 s aminem ve farmaceuticky akceptovatelné kvalitě.

Organická rozpouštědla použitelná pro krystalizaci solí AHU-377 s aminy mohou být volena z řady: estery organických kyselin C1-C5 s alkoholy C1-C6, alkoholy C1-C6, ketony C3-C6, ethery C4-C6, chlorované uhlovodíky C1-C6, kapalné aromatické uhlovodíky, alkany C1-C7, cykloalkany C1-C7. Zejména vhodná jsou následující rozpouštědla či jejich směsi: ethylacetát, wo-propylacetát, methanol, ethanol, /.vo-propylalkohol, aceton, methylethylketon, diethylether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, tert. butylmethylether, dichlormethan, toluen, xyleny, hexan, heptan, cyklohexan. Nej lepších výsledků bylo dosahováno v případě ethylacetátu nebo /.vo-propylacetátu. ► Krok 4. - převedení solí AHU-377 s aminy na soli AHU-377 s kovy

Poslední krok se týká procesu přeměny krystalických solí AHU-377 s aminy (9) na farmaceuticky akceptovatelnou sůl s kovem. V závislosti na podmínkách se může jednat o soli AHU-377 s alkalickými kovy z řady lithium, sodík nebo draslík (10, M = Li, Na, K), případně o soli AHU-377 s kovy alkalických zemin z řady vápník, hořčík nebo stroncium (11, M = Ca, Mg, Sr). Zdrojem kovu mohou být příslušné anorganické i organické soli, alkoholáty nebo hydroxidy těchto kovů. Farmaceuticky akceptovatelnou formou AHU-377 je sodná nebo vápenatá sůl. Výstupem tohoto krokuje aktivní farmaceutická substance (API) použitelná pro přípravu léčiva pro léčbu hypertenze a srdečního selhání. Výhodným aspektem provedení přípravy amorfní formy sodné soli AHU-377 je přímé převedení solí AHU-377 s aminy na tuto dosud nepopsanou formu. Nalezené řešení přípravy amorfní formy AHU-377 sodného je zejména výhodné užitím krystalických a chemicky čistých solí AHU-377 s primárními aminy, které se ve srovnám se sekundárními aminy vyznačují nižší bazicitou a dostatečnou těkavostí což při přípravě AHU-377 sodného umožňuje efektivní odstranění primárního aminu bez nežádoucí kontaminace produktu. Analogicky s přípravou sodné soli AHU-377 lze krystalické soli AHU-377 s primárními 8 aminy s výhodou využít k přípravě krystalické či semikrystalické formy vápenaté soli AHU-377. Předmětem vynálezu jsou zejména procesy týkající se provedení izolace a chemického čištění AHU-377, tj. kroky 2 a 3. Dále pak procesy přípravy amorfní formy sodné soli, krystalické a semikrystalické formy vápenaté soli AHU-377, které jsou založeny na využití solí AHU-377 s aminy, tj. krok 4. Nově nalezené krystalické formy AHU-377 s aminy a způsob přeměny těchto forem na soli AHU-377 s kovy je možné s výhodou aplikovat ve výrobním měřítku a efektivně získat farmaceutickou substanci splňující přísná kritéria na kvalitu.

Podle schématu 6 lze alternativně soli AHU-377 s alkalickými kovy (10) nebo kovy alkalických zemin (11) získat ze znovu uvolněné volné kyseliny AHU-377 (1), která se v organických rozpouštědlech převede působením vhodných činidel na soli (10) nebo (11). Vhodným zdrojem kovu mohou být příslušné alkoholáty, s výhodou methoxid sodný, methoxid draselný, ethoxid sodný, ethoxid draselný, Ao-propoxid sodný, Ao-propoxid draselný, tert. butoxid sodný nebo fórř.butoxid draselný. Místo alkoholátů je též možné použít soli organických kyselin, s výhodou soli organických kyselin rozpustných v organických rozpouštědlech. Jako sůl organické kyseliny lze například použít sodnou, draselnou nebo vápenatou sůl 2-ethylhexanové kyseliny. Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 XRPD záznam krystalické soli AHU-377 s aminy, tj. závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta. (a) sůl s fóA.butylaminem (b) sůl s Ao-propylaminem (c) sůl s cyklohexylaminem (d) sůl s /7-propylaminem (e) sůl s dicyklohexylaminem

Obr. 2 *H NMR spektra krystalických solí AHU-377 s aminy. (a) sůl s fórúbutylaminem (b) sůl s Ao-propylaminem (c) sůl s cyklohexylaminem (d) sůl s H-propylaminem (e) sůl s dicyklohexylaminem

Obr. 3 XRPD záznam krystalické vápenaté soli AHU-377 (11, M značí vápník). Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta. 9

Obr. 4 XRPD záznam semikrystalické vápenaté soli AHU-377 (11, M značí vápník). Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta.

Y

Obr. 5 XRPD záznam krystalické tris(hydro?Xnethyl)aminomethanové soli AHU-377 (8). Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta.

Obr. 6 XRPD záznam amorfní sodné soli AHU-377 (10, M značí sodík). Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta.

Obr. 7 Ή NMR spektrum sodné soli AHU-377 (10, M značí sodík) Příklady provedení vynálezu Předmět vynálezu blíže osvětlí následující příklady, které ovšem nemají žádný vliv na šíři vynalezu definovanou v nárocích. PŘÍKLAD 1 (syntéza AHU-377 kyseliny)

K 10 g hydrochloridu aminu (3) bylo přidáno 100 ml dichlormethanu a 12 ml triethylaminu. Směs byla míchána za laboratorní teploty přibližně 10 minut. Následoval přídavek 4,3 g sukcinanhydridu a míchání směsi za laboratorní teploty po dobu 4 hodin. Ke směsi bylo přidáno 100 ml 1M HC1, vrstvy byly odděleny, organická vrstva byla promyta vodou a sušena nad síranem sodným. Po filtraci sušidla bylo rozpouštědlo vakuově odpařeno (75 °C, 10 mbar) za zisku produktu ve formě transparentního medu. Produkt obsahoval podle HPLC analýz obvykle 97,5 až 98,5 % požadované látky. PŘÍKLAD 2 (obecný postup přípravy a izolace soli AHU-377 s aminy)

• · V organickém rozpouštědle byla rozpuštěna kyselina AHU-377 (1). K roztoku byl přidán amin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Izolované krystalické soli byly charakterizovány pomocí XRPD, struktura byla ověřena pomocí *H NMR a chemická čistota pomocí HPLC. Změřené chemické čistoty pro řadu aminů shrnuje tabulka 1, výsledky dalších analýz (*H NMR, XRPD) jsou součástí příloh. PŘÍKLAD 2a (postup přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s tert. butylaminem) V 10 ml ethylacetátu byl rozpuštěn 1 g kyseliny AHU-377 (1). K roztoku byl přidán tert.butylamin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek soli s tert. butylaminem Činil 81,5 %, chemická čistota dle HPLC 99,4 %. Výsledek XRPD je uveden v tabulce 2 a v příloze na Obr. 1 (a). 'H NMR (DMSO-D6): 1,06 (d, 3H), 1,13 (t, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,38 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,24 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 3,91 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 8,08 (d, 2H). PŘÍKLAD 2b (postup přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s Ao-propylaminem) V 10 ml ethylacetátu byl rozpuštěn 1 g kyseliny AHU-377 (1). K roztoku byl přidán wo-propylamin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek soli s Ao-propylaminem činil 79,6 %, chemická čistota dle HPLC 99,5 %. Výsledek XRPD je uveden v tabulce 3 a v příloze na Obr. 1 (b). 'H NMR (DMSO-D6): 1,06 (d, 3H), 1,10 (d, 6H), 1,13 (t, 3H), 1,38 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,24 (m, 1H), 2,68 (m, 2H), 3,14 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 8,03 (d, 2H). PŘÍKLAD 2c (postup přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s cyklohexylaminem) V 10 ml ethylacetátu byl rozpuštěn 1 g kyseliny AHU-377 (1). K roztoku byl přidán cyklohexylamin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek soli s cyklohexylaminem činil 84,5 %, chemická čistota dle HPLC 99,5 %. Výsledek XRPD je uveden v tabulce 4 a 11 v příloze na Obr. 1 (c). lH NMR (DMS0-D6): 1,06 (d, 3H), 1,09-1,25 (m, 3H), 1,13 (t, 3H), 1,38 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,68 (m, 2H), 1,76 (m, 1H), 1,82 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,23 (m, 1H), 2,63-2,74 (m, 3H), 3,91 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 8,04 (d, 2H). V f PŘIKLAD 2d (postup přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s n-propylaminem) V 10 ml ethylacetátu byl rozpuštěn 1 g kyseliny AHU-377 (1). K roztoku byl přidán n-propylamin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek soli s n-propylaminem činil 69,8 %, chemická čistota dle HPLC 99,5 %. Výsledek XRPD je uveden v tabulce 5 a v příloze na Obr. 1 (d). *H NMR (DMSO-D6): 0,88 (t, 3H), 1,06 (d, 3H), 1,13 (t, 3H), 1,38 (m, 1H), 1,49 (m, 2H), 1,76 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,24 (m, 1H), 2,63 (t, 2H), 2,68 (m, 2H), 3,91 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,99 (d, 2H). PŘÍKLAD 2e (postup přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s dicyklohexylaminem) V 10 ml ethylacetátu byl rozpuštěn 1 g kyseliny AHU-377 (1). K roztoku byl přidán dicyklohexylamin v množství odpovídajícím 1,1 ekvivalentu AHU-377. Směs byla míchána. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek soli s dicyklohexylaminem činil 53,6 %, chemická čistota dle HPLC 98,6 %. Výsledek XRPD je uveden v tabulce 6 a v příloze na Obr. 1 (e). *H NMR (DMSO-D6): 1,04-1,15 (m, 6H), 1,06 (d, 3H), 1,13 (t, 3H), 1,18-1,26 (m, 4H), 1,39 (m, 1H), 1,57 (m, 2H), 1,68 (m, 4H), 1,76 (m, 1H), 1,85 (m, 4H), 2,21-2,32 (m, 4H), 2,64-2,74 (m, 4H), 3,91 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,46 (t, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,92 (d, 2H). 12

PŘÍKLAD 3 (obecný postup rekrystalizace solí AHU-377 s aminy)

Ri, R2 R3 nezávisle na sobě značí alkyl C1-C6 nebo vodík

Surové soli krystalických aminů s AHU-377 byly za horka rozpuštěny v ethylacetátu nebo /.sO-propylacetátu. Roztok byl míchán za pozvolného chlazení. Vyloučená krystalická sůl aminu s AHU-377 (9) byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Chemická čistota byla ověřena pomocí HPLC, viz tabulka 1. Analogickým postupem byly krystalické soli s aminy rekrystalovány i v dalších organických rozpouštědlech nebo ve směsích více rozpouštědel.

Tabulka 1 - Příprava, izolace a rekrystalizace solí různých aminů s AHU-377

Amin Vyloučená forma HPLC (%) po izolaci (%) výtěžek krystalizace HPLC(%) krystalizace fórt.-butylamin pevný stav 99,4 90,3 99,9 wo-propylamin pevný stav 99,5 91,2 99,9 cyklohexylamin pevný stav 99,5 93,7 99,9 «-propylamin pevný stav 99,4 88,8 99,7 dicyklohexylamin pevný stav 98,6 72,4 99,6 di-wo-propylamin nevylučuje se di-fl-propylamin nevylučuje se di-wo-propylethylamin nevylučuje se triethylamin nevylučuje se triethanolamin pevný stav 98,5 tris(hydro}ťrnethyl)aminomethan pevný stav 98,1 nicotinamide nevylučuje se L-Arginin nevylučuje se diethylamin nevylučuje se VV-dibenzyl-ethylendiamine nevylučuje se diethanolamin nevylučuje se 13 PŘÍKLAD 4 (sůl AHU-377 s cyklohexylaminem)

K 10 g hydrochloridu aminu (3) bylo přidáno 100 ml ethylacetatu a 6 ml triethylaminu. Směs byla míchána za laboratorní teploty přibližně 10 minut. Následoval přídavek 4,3 g sukcinanhydridu a míchání směsi za laboratorní teploty po dobu 5 hodin. Pak bylo přidáno 6,5 ml cyklohexylaminu a míchání směsi za laboratorní teploty. Směs byla naočkována krystalickou solí AHU-377 s cyklohexylaminem připravenou postupem podle příkladu 2c. Vyloučená krystalická sůl cyklohexylaminu s AHU-377 byla izolována filtrací, promyta matečným louhem, použitým rozpouštědlem a sušena za vakua. Výtěžek produktu byl 83 %, chemická čistota podle HPLC 99,3 %. PŘÍKLAD 5 (amorfní forma sodné soli AHU-377)

R1f R2| R3 nezávisle na sobě značí alkyl C1-C6 nebo vodík

Ke krystalické soli AHU-377 s primárním aminem {lert.butylaminem, wo-propylaminem nebo cyklohexylaminem) byl přidán tetrahydrofuran, suspenze byla míchána a proveden přídavek 1 ekvivalentu tert. butoxidu sodného. Směs byla dále míchána při laboratorní teplotě do zisku mírně zakaleného roztoku. Pak byla provedena filtrace a k čirému filtrátu byl přidán heptan do zisku zakaleného roztoku. Následovalo vakuové zahuštění a přídavek směsi heptanu a dichlormethanu v poměru složek 3:1. Zakalený roztok byl vakuově zahuštěn a získaná suspenze byla míchána při laboratorní teplotě. Poté byla provedena filtrace a vakuové sušení. Izolovaná amorfní sodná sůl byla charakterizována pomocí XRPD (Obr. 6). Struktura produktu byla ověřena pomocí *H NMR (Obr. 7). 14 Η Ο

PŘÍKLAD 6 (vápenatá sůl AHU-377)

vody a Přidal se dihydrát

Tert.butylammoniová sůl AHU-377 (0,5 g) se rozmíchala v 5 fld V , . .

„ se míchala pn 50 C chloridu vápenatého rozpuštěný ve vodě (1 g v 5 ml vody)· ť J ,t byl odfiltrován a sušen 3 hodiny, poté se ochladila na 25 °C. Vyloučený krystalický produK (0,42 g, 91 %, 99,67 % HPLC). PŘÍKLAD 7 (vápenatá sůl AHU-377)

Tert. butylammoniová sůl AHU-377 (0,5 g) se rozmíchala v 5 ml v°dy a Přidal se octan vápenatý rozpuštěný ve vodě (0,85 g v 5 ml vody). Směs se míchala při 50 C 3 hodiny, poté se ochladila na 25 °C. Vyloučený produkt byl odfiltrován a sušen (0,42 g, 91 /o, 99,67 /o HPLC). PŘÍKLAD 8 (draselná sůl AHU-377)

15

Tert.butylammoniová sůl AHU-377 (0,5 g) se rozmíchala v 10 ml vody a 10 ml ethylacetátu, Po okyselení směsi kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 se oddělila organická fáze obsahující volnou kyselinu AHU-377 a směs se odpařila na vakuové odparce. Odparek se opětovně rozpustil v 10 ml methylethylketonu a přidala se draselná sůl 2-ethylhexanové kyseliny (0,35 g). Směs se míchala při 50 °C jednu hodinu, poté ochladila na 25 Ca vyloučená draselná sůl AHU-377 byla odfiltrována a sušena. Získalo se 0,40 g soli (87 %, 99,65 % HPLC). PŘÍKLAD 9 (sodná sůl AHU-377)

Tert.butylammoniová sůl AHU-377 (0,5 g) se rozmíchala v 10 ml vody a 10 ml ethylacetátu, Po okyselení směsi kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 se oddělila organická fáze obsahující kyselinu a směs se odpařila na vakuové odparce. Odparek se opětovně rozpustil v 10 ml methylethylketonu a přidala se sodná sůl 2-ethylhexanové kyseliny (0,31 g). Směs se míchala při 50 °C jednu hodinu, poté ochladila na 25 °C a vyloučená sodná sůl AHU-377 se odfiltrovala a sušila. Získalo se 0,39 g soli (87 %, 99,85 % HPLC, bod tání 159 °C -160 °C). PŘÍKLAD 10 (sodná sůl AHU-377)

Tert. butylammoniová sůl AHU-377 (0,5 g) se rozmíchala v 10 ml vody a 10 ml ethylacetátu, Po okyselení směsi kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 se oddělila organická fáze obsahující kyselinu a směs se odpařila na vakuové odparce. Odparek se opětovně rozpustil v 10 ml tetrahydrofuranu a přidal se methoxid sodný (0,2 g) v methanolu (1 ml). Směs se míchala při 50 °C 1 hodinu, poté ochladila na 25 °C a přidal se heptan (15 ml) vyloučená sodná sůl AHU-377 se odfiltrovala a sušila. Získalo se 0,39 g amorfní soli (87 %, 99,65 % HPLC). 16

τ_ , ,. , , .. 1ΤΤΤΤ~„„ . , , , ν.,, +/.inen a 1 ekvivalent octanu

Ke krystalické soli AHU-377 s iso-propylammem byl pndan ΐ°ιυ^ vápenatého. Směs byla dále míchána, ohřátá kvaru a provedeno oddestilování části rozpouštědla. K ještě teplé reakční směsi byl přidán heptan do zisku suspenze. Tato suspenze byla míchána při laboratorní teplotě. Nakonec byla provedena filtrace a vakuové sušení semikrystalické vápenaté soli (výtěžek 90 %, XRPD záznam na Obr. 4). PŘÍKLAD 12 (vápenatá sůl AHU-377)

Terl.butylammoniová sůl AHU-377 (0,1 g) se rozmíchala v 2 ml vody a 2 ml ethylacetátu. Po okyselení směsi kyselinou chlorovodíkovou na pH 1 se oddělila organická fáze obsahující kyselinu a směs se odpařila na vakuové odparce. Odparek se rozpustil v 2 ml acetonu a přidalo se 0,243 ml suspenze hydroxidu vápenatého, která byla připravena suspendací (0,074 g) ve vodě (1 ml). Směs byla homogenizována v ultrazvukové lázni a poté byla ponechána odpařit ve vakuové sušárně za pokojové teploty. Získalo se 0,113 g krystalické soli (96 %, 98 % HPLC). Krystalická vápenatá sůl byla charakterizována pomocí XRPD (Obr. 3). Ϊ PŘÍKLAD 13 (tris(hydrox$nethyI)aminomethanová sůl AHU-377)

17

V ethylacetátu (2 ml) bylo rozpuštěno 0,085 g kyseliny AHU-377 (1) a přidalo se 0,294 ml V roztoku tris(hydro>ďnethyl)aminomethanu (0,100 g v 1 ml vody). Směs byla homogenizována v ultrazvukové lázni a poté odpařena ve vakuové sušárně za pokojové teploty. Krystalická sůl (HPLC 98,1 %) byla charakterizována pomocí XRPD (Obr. 5). Analogickým postupem byla připravena sůl AHU-377 s triethanolaminem (HPLC 98,5 %). ANALYTICKÉ METODY A DATA (A, B, C): A Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) HPLC chromatogramy byly měřeny na přístroji UHPLC systém Agilent 1290 Infinity LC. K analýzám byla užita kolona ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl; 100 mm x 3,0 mm I. D.; 1,7 pm. Jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu (70 %) a HCIO4 (30 %, 1 ml HCIO4 na 11 vody). Měření byla provedena v gradientovém modu s průtokem mobilní fáze 0,5 ml/min při 40 °C na koloně. B RTG prášková difrakce (XRPD) XRPD difraktogramy krystalických solí AHU-377 s aminy, které byly připravených dle příkladu 3 byly změřeny pomocí difraktometru X'PERT PRO MPD PANalytical za následujících experimentálních podmínek: Záření: CuKa (λ = 1,54178 Á)

Excitační napětí: 45 kV Anodový proud: 40 mA Měřený rozsah: 2 - 40° 2Θ Velikost kroku: 0,01 20

Hodnoty zjištěných charakteristických úhlů difrakce 20, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů jsou uvedeny v tabulkách 2-6.

Tabulka 2 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 20, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické soli AHU-377 s tert.butylaminem

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 4,03 21,906 20,1 8,00 11,047 100,0 9,82 9,002 26,1 12,31 7,187 6,4 13,02 6,793 10,3 18

Pos. (°2Th.) Mezirovinná Rel. int. vzdálenost d (Á) (%) 15,11 5,858 18,0 15,64 5,661 9,9 16,12 5,495 24,5 16,71 5,302 11,3 17,77 4,986 84,0 18,99 4,671 16,3 19,56 4,534 25,4 20,20 4,393 57,8 21,59 4,114 15,9 23,03 3,859 19,4 24,50 3,631 8,4 26,18 3,402 7,5 27,36 3,257 9,8 28,61 3,117 5,6

Tabulka 3 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické soli AHU-377 s wo-propylaminem Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 3,14 28,109 100,0 6,28 14,067 55,8 9,46 9,346 89,7 11,79 7,498 38,1 12,62 7,007 99,1 13,90 6,367 H,4 14,93 5,930 6,0 16,29 5,437 11,3 16,56 5,349 11,0 18,03 4,916 52,5 18,55 4,780 61,9 19,55 4,537 13,8 21,14 4,199 17,7 22,34 3,976 27,1 23,59 3,768 26,3 24,57 3,621 60,1 25,56 3,483 10,6 27,33 3,261 8,0 29,02 3,075 6,9 30,16 2,961 5,1 19

Tabulka 4 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické soli AHU-377 s cyklohexylaminem Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 7,44 11,879 47,6 9,70 9,111 18,0 12,45 7,106 5,9 14,27 6,203 10,9 15,03 5,890 25,0 15,95 5,554 20,3 16,86 5,254 34,6 18,01 4,921 100,0 18,68 4,747 25,5 19,92 4,454 71,8 20,59 4,311 15,6 20,99 4,228 12,0 21,59 4,112 40,8 22,27 3,989 11,3 22,77 3,903 10,5 25,16 3,537 10,5 26,61 3,347 9,6 28,68 3,110 5,2 29,64 3,011 7,7

Tabulka 5 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické soli AHU-377 s «-propylaminem Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 4,76 18,557 100,0 6,68 13,218 4,4 10,67 8,287 9,6 11,91 7,423 3,5 12,67 6,984 2,5 13,08 6,763 12,4 14,96 5,917 1 5,7 17,08 5,188 3,6 17,89 4,955 5,3 18,43 4,811 3,4 19,23 4,613 5,0 20,05 4,424 11,4 20,68 4,291 13,4 21,47 4,136 3,3 20

• · « «·· ··· ·

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 22,63 3,926 4,9 23,26 3,821 2,7 24,15 3,683 4,6 26,38 3,376 2,4 27,53 3,237 3,2 30,68 2,912 1,2

Tabulka 6 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické soli AHU-377 s dicyklohexylaminem

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 6,70 13,177 27,1 7,30 12,106 27,4 8,40 10,517 19,3 9,77 9,048 63,0 13,11 6,749 24,8 14,60 6,064 46,6 15,65 5,659 55,9 16,80 5,275 23,8 17,21 5,148 47,5 17,98 4,930 22,3 18,83 4,709 30,3 19,55 4,538 100,0 20,09 4,417 59,0 20,98 4,230 45,2 22,54 3,941 39,0 23,93 3,715 12,5 25,13 3,541 17,2 26,02 3,421 15,4 26,53 3,357 13,5 27,41 3,252 8,3 28,36 3,145 6,7 30,57 2,922 5,9 33,86 2,645 5,6 34,83 2,574 7,6

Tabulka 7 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, meziro vinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické vápenaté soli AHU-377. 21

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 3,11 28,430 100,0 3,41 25,874 71,4 6,31 14,007 15,2 7,31 12,080 66,7 11,36 7,785 13,8 12,80 6,909 24,7 14,92 5,932 18,9 15,24 5,808 22,3 16,06 5,514 15,3 18,61 4,763 60,6 20,34 4,363 10,4 22,51 3,947 32,4 23,72 3,748 12,2 27,05 3,293 19,8 29,22 3,053 17,3 Tabulka 8 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 20, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech semikrystalické vápenaté soli AHU-377.

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 3,58 24,648 100,0 4,06 21,772 71,7 6,01 14,702 5,8 6,35 13,907 7,9 7,57 11,675 5,4 8,37 10,559 7,0 10,74 8,233 5,1 11,22 7,878 4,3 12,72 6,954 3,8 14,54 6,088 9,0 15,21 5,821 3,9 16,64 5,324 3,5 17,74 4,995 10,7 19,63 4,520 9,5 20,54 4,321 11,3 22,46 3,956 5,2 23,32 3,811 3,0 27,30 3,265 3,6 Tabulka 9 - Hodnoty charakteristických úhlů difrakce 2Θ, mezirovinných vzdáleností d a relativních intenzit signálů v XRPD záznamech krystalické tris(hydro»methyl)amino-methanové soli AHU-377 (8). 22

Pos. (°2Th.) Mezirovinná vzdálenost d (Á) Rel. int. (%) 2,91 30,331 100,0 5,90 14,961 7,7 8,89 9,938 6,6 10,63 8,318 3,8 11,89 7,440 29,1 13,03 6,787 4,2 14,89 5,945 14,5 15,27 5,798 6,0 17,91 4,950 32,8 18,46 4,803 7,2 18,99 4,670 15,0 19,66 4,513 4,8 20,91 4,246 31,0 21,45 4,139 7,5 22,08 4,023 17,9 23,95 3,713 24,6 26,22 3,397 4,1 26,95 3,306 3,8 33,20 2,697 4,7 C lH NMR *H NMR spektra byla změřena na spektrometru Bruker Avance 500 s měřící frekvencí 500,131 MHz. Spektra byla měřena pro roztoky v DMSO-D6, chemické posuny byly vztaženy na vnitřní standard TMS 8 = 0 ppm. 23

Claims (24)

1. P/ ŽO*/- ΉΙ * · * · · · • · · » · ·· ··· • · · · · · · ···*·· · · · φ φ • · · ψ φ • · · · « · · ··· | · f PATENTOVÉ NÁROKY 1. Způsob přípravy krystalický solí AHU-377 s aminy obecného vzorce 9, kde R1; R2, R3 nezávisle na sobě značí alkyl C1-C6 nebo vodík, vyznačující se tím, že se připraví reakcí kyseliny AHU-377 popsané vzorcem 1 s odpovídajícím aminem v alespoň jednom organickém rozpouštědle nebo v jejich směsi a následnou izolací krystalické soli aminu s AHU-377 vzorce 9.
2. 2. Způsob přípravy podle nároku 1, vyznačující se tím, že jsou s výhodou připraveny krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9, ve kterých je použitý amin vybraný z řady zahrnující tert.buty lamin, Ao-propylamin, cyklohexylamin, n-propylamin a dicyklohexylamin.
3. 3. Způsob přípravy podle nároku 1 a 2, vyznačující se tím, že příprava krystalických solí AHU-377 s aminy zahrnuje následující kroky: (a) reakci aminů s karboxylovou kyselinou AHU-377 vzorce 1 v roztoku alespoň jednoho organického rozpouštědla nebo jejich směsi, (b) následnou izolaci krystalických solí vzorce 9, ve kterých je obsažený amin vybraný z řady zahrnující Ar/.butylamin, Ao-propylamin, cyklohexylamin, n-propylamin a dicyklohexylamin, a (c) rekrystalizaci.
4. 4. Způsob přípravy podle nároku 1, 2 a 3, vyznačující se tím, že se použije alespoň jedno organické rozpouštědlo vybrané z řady zahrnující estery organických kyselin C1-C5 s alkoholy C1-C6, alkoholy C1-C6, ketony C3-C6, ethery C4-C6, chlorované uhlovodíky C1-C6, kapalné aromatické uhlovodíky, alkany C1-C7, cykloalkany C1-C7, nebo jejich směsi, s výhodou ethylacetát, Ao-propylacetát, methanol, ethanol, Ao-propylalkohol, aceton, methylethylketon, diethylether, tetrahydrofuran, 2-methyItetrahydrofuran, 24 tert. butylmethylether, dichlormethan, toluen, xyleny, hexan, heptan, cyklohexan nebo jejich směsi.
5. 5. Způsob rekrystalizace krystalických solí AHU-377 s aminy obecného vzorce 9 podle nároků 1, 2 a 3, vyznačující se tím, že se použije alespoň jedno organické rozpouštědlo vybrané z řady zahrnující estery organických kyselin C1-C5 s alkoholy C1-C6, alkoholy C1-C6, ketony C3-C6, ethery C4-C6, chlorované uhlovodíky C1-C6, kapalné aromatické uhlovodíky, alkany C1-C7, cykloalkany C1-C7, nebo jejich směsi, s výhodou ethylacetát, wo-propylacetát, methanol, ethanol, Ao-propylalkohol, aceton, methylethylketon, diethylether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, tert. butylmethylether, dichlormethan, toluen, xyleny, hexan, heptan, cyklohexan nebo jejich směsi.
6. 6. Krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9, kdy je součástí této soli primární amin vybraný z řady zahrnující cyklohexylamin, Ao-propylamin a tert.butylamin, w-propylamin a dicyklohexylamin.
7. 7. Krystalická sůl AHU-377 podle nároku 6 s cyklohexylaminem, charakterizovaná reflexemi v XRPD: 7,4,15,0,18,0,19,9,21,6 (° ± 0,2° 20).
8. 8. Krystalická sůl AHU-377 podle nároku 6 s wo-propylaminem, charakterizovaná reflexemi v XRPD: 3,1, 9,5,12,6,18,5,24,6 (° ± 0,2° 20).
9. 9. Krystalická sůl AHU-377 podle nároku 6 s tert.butylaminem, charakterizovaná reflexemi v XRPD: 8,0, 9,8,16,1,17,8,20,2 (° ± 0,2° 20).
10. 10. Způsob přípravy a izolace krystalické soli AHU-377 s aminy definované v nárocích 6,7, 8 a 9, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky: (a) rozpuštění AHU-377 kyseliny v organickém rozpouštědle, (b) přídavku aminu k roztoku dle bodu (a), (c) míchání roztoku dle bodu (b), (d) filtraci vyloučené pevné formy a (e) sušení krystalické soli. 25
11. 11. Způsob přípravy podle nároku 10, vyznačující se tím, že se použije alespoň jedno organické rozpouštědlo vybrané z řady zahrnující estery organických kyselin C1-C5 s alkoholy C1-C6, alkoholy C1-C6, ketony C3-C6, ethery C4-C6, chlorované uhlovodíky C1-C6, kapalné aromatické uhlovodíky, alkany C1-C7, cykloalkany C1-C7, nebo jejich směsi, s výhodou: ethylacetát, Ao-propylacetát, methanol, ethanol, Ao-propylalkohol, aceton, methylethylketon, diethylether, tetrahydrofiiran, 2-methyltetrahydrofuran, tert. butylmethylether, dichlormethan, toluen, xyleny, hexan, heptan, cyklohexan nebo jejich směsi.
12. 12. Způsob přípravy podle nároků 10 a 11, který zahrnuje následující kroky: (a) rozpuštění AHU-377 kyseliny v ethylacetátu nebo Ao-propylacetátu, (b) přídavku 0,9 až 1,2 ekvivalentu aminu, vybraného z řady zahrnující cyklohexylamin, Ao-propylamin nebo tert. butylamin k roztoku dle bodu (a), (c) míchání roztoku dle bodu (b), (d) filtraci vyloučené pevné formy a (e) sušení krystalické soli za vakua.
13. 13. Způsob odstranění chemických nečistot z krystalických solí AHU-377 s aminy získaných podle nároků 10, 11 a 12, který se vyznačuje rekrystalizací surových solí z organického rozpouštědla, s výhodou z ethylacetátu nebo Ao-propylacetátu.
14. 14. Způsob přípravy farmaceuticky akceptovatelných pevných forem substancí podle vzorce 10, kde M značí alkalický kov a 11, kde M značí kov alkalických zemin, odvozených od substance AHU-377 podle vzorce 1, vyznačující se tím, že se připraví reakcí solí AHU-377 s aminy, získaných podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, a odpovídající anorganické nebo organické soli, výhodně alkoholátu nebo hydroxidu kovu ze skupiny alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin.

    26
15. 15. Způsob přípravy nároku 14, vyznačující se tím, že farmaceuticky akceptovatelnou formou je sodná sůl AHU-377 podle vzorce 10, kde M značí sodík, nebo vápenatá sůl AHU-377 podle vzorce 11, kde M značí vápník.
16. 16. Způsob přípravy podle nároků 14 a 15, vyznačující se tím, že se chemickou přeměnou krystalických solí AHU-377 s aminy vybraných z řady íerr.butylamin, Ao-propylamin, cyklohexylamin na sodnou sůl vzorce 10, kde M značí sodík, nebo na vápenatou sůl vzorce 11, kde M značí vápník.
17. 17. Způsob přípravy amorfní sodné soli AHU-377 vzorce 10, kde M značí sodík podle nároků 14, 15 a 16, vyznačující se tím, že se působí činidlem vybraného z řady anorganické nebo organické sodné soli, s výhodou alkoholáty sodné nebo hydroxid sodný na krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9.
18. 18. Způsob přípravy podle nároků 14 až 17, vyznačující se tím, že se použije zdrojové sloučeniny sodíku, kterou je methanolát sodný, ethanolát sodný, Ao-propoxid sodný nebo AA.butylát sodný.
19. 19. Způsob přípravy krystalické nebo semikrystalické vápenaté soli AHU-377 vzorce 11, kde M značí vápník podle nároků 14 až 18, vyznačující se tím, že se působí činidlem vybraného z řady anorganické nebo organické vápenaté soli, s výhodou alkoholáty vápenaté nebo hydroxid vápenatý na krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9.
20. 20. Způsob přípravy podle nároku 14 až 19, vyznačující se tím, že se použije zdrojové sloučeniny vápníku, kterou je chlorid vápenatý, uhličitan vápenatý nebo octan vápenatý.
21. 21. Amorfní sodná sůl AHU-377 vzorce 10, kde M značí sodík.
22. 22. Krystalická nebo semikrystalická vápenatá sůl AHU-377 vzorce 11, kde M značí vápník.
23. 23. Krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9, amorfní soli AHU-377 s alkalickými kovy vzorce 10, krystalické nebo semikrystalické soli AHU-377 skovy alkalických zemin vzorce llpro použití pro léčbu hypertenze a srdečního selhání. 27
24. 24. Krystalické soli AHU-377 s aminy vzorce 9, amorfní soli AHU-377 s alkalickými kovy vzorce 10, krystalické nebo semikrystalické soli AHU-377 skovy alkalických zemin vzorce 11 v kombinaci sdisodnou solí valsartanu v poměru obou složek 1:1, který krystaluje ve formě pentahemihydrátu, pro použití pro léčbu hypertenze a srdečního selhání. 28