CZ2013473A3 - Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií - Google Patents

Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií Download PDF

Info

Publication number
CZ2013473A3
CZ2013473A3 CZ2013-473A CZ2013473A CZ2013473A3 CZ 2013473 A3 CZ2013473 A3 CZ 2013473A3 CZ 2013473 A CZ2013473 A CZ 2013473A CZ 2013473 A3 CZ2013473 A3 CZ 2013473A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
beta
mass spectrometry
lactamases
proteins
bacteria
Prior art date
Application number
CZ2013-473A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ304833B6 (cs
Inventor
Jaroslav Hrabák
Konstantinos Papagiannitsis
Original Assignee
Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni filed Critical Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni
Priority to CZ2013-473A priority Critical patent/CZ2013473A3/cs
Priority to US14/398,705 priority patent/US9803229B2/en
Priority to EP14173225.5A priority patent/EP2816357B1/en
Priority to PCT/CZ2014/000069 priority patent/WO2014202034A1/en
Publication of CZ304833B6 publication Critical patent/CZ304833B6/cs
Publication of CZ2013473A3 publication Critical patent/CZ2013473A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G01N33/6851—Methods of protein analysis involving laser desorption ionisation mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9446—Antibacterials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešení poskytuje způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie. Z bakterií se nejprve vyextrahují proteiny vnější membrány buněčné stěny a periplasmového prostoru. V této směsi se beta-laktamázy stabilizují inhibitorem a/nebo substrátem beta-laktamáz. Proteiny se následně vysrážejí, rozpustí, nanesou na destičku pro MALDI-TOF hmotnostní spektrometrii, překryjí roztokem matrice a změří metodou MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie, načež se výsledná spektra srovnají s referenčními peaky beta-laktamáz. Detekce může být používána k rychlému vyhodnocení rezistence bakterií vůči beta-laktamovým antibiotikům, s minimem falešně pozitivních výsledků.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká způsobu identifikace beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií, konkrétněji pak způsobu identifikace beta-laktamáz a zjištění rezistence gramnegativních bakterií k beta-laktamovým antibiotikům.
Dosavadní stav techniky
Beta-laktamázy jsou enzymy produkované některými bakteriemi. Způsobují rezistenci k betalaktamovým antibiotikům (např. peniciliny, cefalosporiny, karbapenemy). Detekce beta- laktamáz je jedním z vhodných postupů zjištění rezistence bakterií. Je důležitá pro nasazení účinné antibiotické léčby a nastavení vhodných preventivních opatření pro zamezení jejich šíření.
Identifikace beta-laktamáz je prováděna fenotypovými metodami na základě senzitivity k různým inhibitorům. Precizní identifikace probíhá PCR amplifikací jejich genů s následnou sekvenací amplifikačních produktů. Několik laboratoří ve světě pracuje na vývoji metod identifikace beta-laktamáz pomocí hmotnostní spektrometrie (např. Schaumann R, Knoop N, Genzel GH, Losensky K, Rosenkranz C, Stingu CS, Schellenberger W, Rodloff AC, Eschrich K. 2012. A step towards the discrimination of beta-lactamase-producing clinical isolates of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa by MALDI-TOF mass spectrometry. Med. Sci. Monit. 18: MT71-MT77).
Metoda detekce proteinů (beta-laktamáz) pomocí MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie může poskytovat výsledky srovnatelné s molekulámě-genetickými testy (PCR, mikročipy), avšak umožní celý proces významně zrychlit a zlevnit. Dosud však nebyla publikována úspěšná metodika detekce těchto enzymů pomocí MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie. Jedinou publikovanou prací, kdy byla zobrazena beta-laktamáza pomocí MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie, je práce z roku 2007 (Camara JE, Hays FA. 2007. Discrimination between wild-type and ampicillin-resistant Escherichia coli by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. Anal. Bioanal, Chem. 389: 1633— -1638). Výsledky publikované těmito autory se však nepodařilo zopakovat. Zároveň nejsou k dispozici publikace, které by závěry výše citované práce potvrdily.
Známa je detekce karbapenemáz a cefalosporináz pomocí hmotnostní spektrometrie, kde jsou ovšem nejprve proteiny štěpeny na krátké peptidy a podle typického spektra těchto peptidů je
Dále je známa detekce rezistence u bakterií, kde jsou hmotnostní spektrometrií sledovány produkty působení enzymů způsobujících rezistenci, tedy kovalentně modifikovaná antibiotika nebo kovalentně modifikované modelové sloučeniny (US 2012/196309). Obdobně je známo stanovení přítomnosti beta-laktamáz, založené na detekci produktů působení betalaktamáz, tedy na detekci produktů hydrolytického štěpení amidové vazby beta-laktamového kruhu beta-laktamových antibiotik (WO 2011/154617).
Všechny dosud známé metody detekce enzymů bakteriální rezistence vyžadují buď degradaci enzymů na peptidy, nebo provedení enzymatické reakce a detekci produktů této reakce. Tím se do analyzované směsi zanášejí další složky a také se zvyšuje riziko falešně pozitivních výsledků.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie, jehož podstata spočívá v tom, že se z bakterií vyextrahují proteiny vnější membrány buněčné stěny a periplasmového prostoru a proteiny, které mají být detekovány, se stabilizují inhibitorem a/nebo substrátem daného proteinu, stabilizované proteiny se následně rozpustí, nanesou se na destičku pro MALDI-TOF hmotnostní spektrometrii, překryjí roztokem matrice a změří metodou MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight, ionizace laserem za přítomnosti matrice v kombinaci s detektorem doby letu) hmotnostní spektrometrie. Výsledná spektra se pak srovnají s referenčními peaky (vrcholy) pro danou beta-laktamázu. Referenční peaky beta- laktamáz se získají měřením standardů proteinů, jejichž identita je známa nebo ověřena známými metodami.
Extrakce se s výhodou provádí tak, že bakterie pomnožené v médiu určeném pro kultivaci gramnegativních bakterií, např. vybraném z bujónu Mueller-Hintonové (MH bujónu) nebo média BHI (brain-heart infusion, infuze mozkové a srdeční tkáně), se ochladí na 0 až 6 °C a následně centrifugujepro sedimentaci bakterií. Supematant se odstraní, peleta se resuspenduje ve vodném roztoku sacharózy o koncentraci alespoň 20 % (w/w), s výhodou 20 až 40% (w/w) « 4 vodném roztoku sacharózy, výhodněji ve 40% (w/w) roztoku sacharózy, a inkubuje minimálně 1 h^d| při 2 až 8 °C. Ke směsi se následně přidá pufr vhodný pro aktivitu lysozymu (například Tris-HCl pufr) a lysozym, směs se inkubuje při 35 až 37 °C po dobu nutnou pro rozrušení vnější membrány buněčné stěny a uvolnění proteinů periplasmového prostoru (obvykle minimálně 1 h^4). Kvalitu extrakce/rozrušení vnější membrány buněčné stěny lze ověřit mikroskopicky - dojde ke změně tyčko vitého tvaru bakterií na sférické útvary (sferocyty).
Ve výhodném provedení je inhibitorem či substrátem použitým pro stabilizaci například beta- laktamové antibiotikum nebo beta-laktamový inhibitor, např. meropenem, ampicilin, kyselina klavulanová, cefepim, kyselina fenylboritá.
S výhodou se vysrážení provede C1-C4 alkoholem, výhodněji ethanolem, nebo acetonem, do
- ''X, kterých lze s výhodou přidat kyselinu trifluoroctovou, výhodněji 0,1 objj % kyseliny trifluoroctové.
S výhodou se rozpuštění vysrážených stabilizovaných proteinů provede směsí acetonitrilu a vody s přídavkem kyseliny trifluoroctové, výhodněji se jedná o směs s 50 objJ % acetonitrilu a 2,5 obj.)% kyseliny trifluoroctové.
Referenční peaky beta-laktamáz se získají měřením standardů beta-laktamáz, jejichž identita je známa nebo ověřena známými metodami.
Dalším předmětem předkládaného vynálezu je kit pro detekci beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie, obsahující Tris-HCl pufr (pH 8,0), lysozym, inhibitor či substrát beta-laktamáz, C1-C4 alkohol nebo aceton, směs acetonitrilu a vody s přídavkem kyseliny trifluoroctové, matrici, rozpouštědlo pro matrici.
Přehled obrázků na výkrasadi
Obr. 1 znázorňuje příklady detekce beta-laktamáz typu CMY. Peaky odpovídající beta- laktamáze jsou vyznačeny šipkou. A - spektrum purifíkované beta-laktamázy CMY-2, B -spektrum vzorku Próteus mirabilis produkující beta-laktamázu CMY-15, C - spektrum vzorku Escherichia coli produkující beta-laktamázu CMY-2.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Kultivace bakterii a extrakce β-laktamáz:
Izolát bakterií z čeledi Enterobacteriaceae (testovány byly Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Próteus mirabilis, Citrobacter freundii) byl naočkován do 50 ml bujónu Mueller-Hintonové (MH bujón) nebo BHI (brain-heart infusion), s přídavkem 50 mg/1 ampicilinu; kultivace byla prováděna po dobu 12 až 18 h^dj při 35 až 37 °C.
Médium s narostlou kulturou bylo následně ochlazeno na cca 4 °C (inkubace na ledu cca 10 minut), centrifugace 20 minut. Supematant byl odstraněn. Peleta byla resuspendována v 90 μΐ vodného roztoku 40,% (w/w) sacharózy a inkubována 1 hM při 4 °C.
Ke směsi bylo následně přidáno 10 μΐ 1M Tris-HCl pufru (pH 8,0), 1 μΐ lysozymu (koncentrace 10 mg/ml); inkubace byla prováděna 90 minut při 35 až 37 °C. Kvalitu extrakce lze ověřit mikroskopicky - dojde ke změně tyčkovitého tvaru bakterií na sférické útvary (sferocyty).
Následovala centrifůgace při 14 000 g po dobu 5 minut. Supematant obsahující extrahované β-laktamázy byl použit dále.
• ' i ! ' t · >
' « * ’ » - · ; « · ? c
Příprava a stabilizace [Vlaktamáz ve směsi:
100 μΐ připraveného extraktu bylo smíseno s 25 μΐ lOOmM meropenemu (byly testovány i kyselina klavulanová, kyselina fenylboritá, s obdobnými výsledky) a inkubováno 10 minut při pokojové teplotě. Ke směsi byl přidán 1 ml ledově vychlazeného ethanolu s 0,1 obj. j% trifluoroctové kyseliny, vortexováno 30 sekund, následně centrifugováno 20 minut při 14 000 g při 4 °C. Poté byl opatrně odstraněn supematant, peleta usušena 10 minut při 35 až 37 °C. Peleta pak byla rozpuštěna v 50} μΐ roztoku acetonitrilu (500 μΐ acetonitrilu, 475 μΐ deionizované vody, 25 μΐ trifluoroctové kyseliny); vortexováno 1 minutu.
Vlastní měření:
μΐ roztoku byl nanesen na destičku pro MALDI-TOF MS (mass spectrometry, hmotnostní spektrometrie) měření, ponechán při pokojové teplotě uschnout. Vzorek byl převrstven 1 μΐ matrice (vodný 50% (obj.) roztok ethanolu nasycený kyselinou sinapovou) a ponechán zaschnout. Následně bylo provedeno MALDI-TOF MS měření.
Obr. 1 ukazuje, že postupem podle vynálezu lze získat spektra s oddělenými a dobře integrovatelnými peaky, a s výborným poměrem signál-šum.

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie, vyznačený tím, že se z bakterií vyextrahují proteiny vnější membrány buněčné stěny a periplasmového prostoru, v této směsi se proteiny stabilizují inhibitorem a/nebo substrátem beta-laktamáz, proteiny se následně vysrážejí, vysrážené proteiny se následně rozpustí, nanesou se na destičku pro MALDI-TOF hmotnostní spektrometrii, překryjí roztokem matrice určené pro ionizaci proteinů s relativní molekulovou hmotností >10 000 a změří metodou MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie, načež se výsledná spektra srovnají s referenčními peaky beta-laktamáz.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že extrakce se provede tak, že bakterie v médiu určeném pro kultivaci gramnegativních bakterií se ochladí na 0 až 6 °C a následně centrifugují alespoň 20 minut, peleta se resuspenduje ve vodném roztoku sacharózy o koncentraci alespoň 20 % (w/w) a inkubuje se po dobu alespoň 1 hodiny při 2 až 8 °C, ke směsi se následně přidá roztok lysozymu v pufru a směs se inkubuje při 35 až 37 °C po dobu alespoň 1 hodiny.
  3. 3. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že inhibitorem či substrátem je beta-laktamové antibiotikum nebo beta-laktamový inhibitor, s výhodou je inhibitor či substrát vybrán ze skupiny zahrnující meropenem, ampicilin, kyselinu klavulanovou, cefepim, kyselinu fenylboritou.
  4. 4. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se vysrážení provede C1-C4 alkoholem nebo acetonem, s výhodou s přídavkem kyseliny trifluoroctové.
  5. 5. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se rozpuštění vysrážených stabilizovaných proteinů provede směsí acetonitrilu a vody s přídavkem kyseliny trifluoroctové.
  6. 6. Kit pro detekci beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie, vyznačený tím, že obsahuje Tris-HCl pufr o pH 8,0, lysozym, inhibitor či substrát beta-
    -laktamáz, C1-C4 alkohol nebo aceton, případně s přídavkem kyseliny trifluoroctové, směs acetonitrilu a vody s přídavkem kyseliny trifluoroctové, matrici, rozpouštědlo pro matrici.
CZ2013-473A 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií CZ2013473A3 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií
US14/398,705 US9803229B2 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry
EP14173225.5A EP2816357B1 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of Gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry
PCT/CZ2014/000069 WO2014202034A1 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ304833B6 CZ304833B6 (cs) 2014-11-26
CZ2013473A3 true CZ2013473A3 (cs) 2014-11-26

Family

ID=51032943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9803229B2 (cs)
EP (1) EP2816357B1 (cs)
CZ (1) CZ2013473A3 (cs)
WO (1) WO2014202034A1 (cs)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR112775A1 (es) * 2017-08-17 2019-12-11 Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Tecn Conicet Detección directa de mecanismos de resistencia por espectrometría de masa maldi-tof
JP2019143975A (ja) * 2018-02-15 2019-08-29 株式会社島津製作所 分析方法およびβ−ラクタム系抗菌薬耐性評価方法
KR101999574B1 (ko) * 2018-08-03 2019-09-27 다이아텍코리아 주식회사 질량분석법을 이용한 베타락탐 항생제 가수분해 효소의 활성형 직접 검출법
KR20210015450A (ko) * 2019-08-02 2021-02-10 (재)씨젠의료재단 베타-락탐 항생제에 대한 내성을 가지는 병원성 균주의 직접 검출 방법

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006021493B4 (de) * 2006-05-09 2010-04-01 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Messung mikrobieller Resistenzen
DE102010023452B4 (de) 2010-06-11 2012-11-08 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Messung von β-Lactamase-Resistenzen
US20120196309A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Yale University Methods and Kits for Detection of Antibiotic Resistance
DE102011012060A1 (de) * 2011-02-23 2012-08-23 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Bestimmung der inhibitorischen Wirkung von Substanzen gegenüber beta-Lactamasen
CA3172865A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Biomerieux Inc. Method of detecting at least one mechanism of resistance to carbapenems by mass spectrometry
US9506932B2 (en) 2011-04-21 2016-11-29 Biomerieux, Inc. Method of detecting at least one mechanism of resistance to cephalosporins by mass spectrometry

Also Published As

Publication number Publication date
US9803229B2 (en) 2017-10-31
CZ304833B6 (cs) 2014-11-26
US20160138068A1 (en) 2016-05-19
EP2816357A1 (en) 2014-12-24
EP2816357B1 (en) 2019-04-17
WO2014202034A1 (en) 2014-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2622127T3 (es) Metodos de determinación de resistencia a antibioticos en microorganismos
JP6216711B2 (ja) カルバペネムに対する耐性の少なくとも１つの機構を質量分析により検出する方法
JP6087341B2 (ja) セファロスポリンに対する耐性の少なくとも１つの機構を質量分析により検出する方法
CZ2013473A3 (cs) Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií
Trepte et al. DULIP: a dual luminescence-based co-immunoprecipitation assay for interactome mapping in mammalian cells
Espinosa et al. Fast and easy detection of CMY-2 in Escherichia coli by direct MALDI-TOF mass spectrometry
JP6232115B2 (ja) 微生物が潜在的に抗菌剤化合物に対して耐性を有するか否かを決定するための方法
Foschi et al. Use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) to detect carbapenemase production in Enterobacteriaceae by a rapid meropenem degradation assay
McGee et al. Direct detection of intact Klebsiella pneumoniae carbapenemase variants from cell lysates: Identification, characterization and clinical implications
Shah et al. Determination of antimicrobial resistance using tandem mass spectrometry
RU2776822C2 (ru) Выявление продуцирующих карбапенемазу видов enterobacteriales, pseudomonas и acinetobacter с применением хромогена
KR102305012B1 (ko) 나노포어를 이용한 인플루엔자 바이러스 존부 확인방법
KR102640511B1 (ko) 그람 음성균 유래 원형 단백질의 분리 방법
CN111133114B (zh) 用色原体检测产碳青霉烯酶的肠杆菌目、假单胞菌属和不动杆菌属种
US9376705B2 (en) Method for detecting susceptibility of microorganisms to chemical agents
Stone Cell-Selective Chemoproteomics for Biological Discovery
Hennum Proteomic analysis of neonatal meningitis-causing Escherichia coli
Claudio et al. Use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) to detect carbapenemase production in Enterobacteriaceae by a rapid meropenem degradation assay
JP2016027822A (ja) 微生物における抗生物質耐性の特徴付けの方法